一种含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法

本发明涉及生物技术，特别涉及一种含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法。

背景技术：

1、2020版《中华人民共和国药典(四部)》规定，制剂进行微生物限度检查时，对可能具有抑菌作用的产品，必须首先采用合适的方法消除其抑菌作用，再进行对应供试品的检查。因此，微生物检测方法必须经过方法的适用性试验验证，才可确保微生物检查方法的可靠性和检查结果的准确性。

2、丙咪氯苯乳膏主要成分为丙酸氯倍他索、硝酸咪康唑、盐酸苯海拉明、氯霉素，具有消炎、抗菌、止痒的作用，主要用于硝酸咪康唑及氯霉素敏感菌引起的湿疹等皮肤病。本品经皮肤科长期临床使用表明，疗效确切。该制剂中主要成分丙酸氯倍他索、硝酸咪康唑、盐酸苯海拉明和氯霉素均对微生物有较强的抑制和杀灭作用，常规法进行微生物限度检测，不能真实反应样品中的微生物情况，需采用适当的方法，例如薄膜过滤法、中和剂、培养基稀释法等，去除其抑菌作用，并对方法进行验证来确定所采用的微生物限度检查方法的可行性和有效性。本制剂质量标准【检查】项下微生物限度的检测方法一直以来未经验证，现有研究亦未见对强效抑菌制剂的微生物限度检查方法进行方法适用性试验。

技术实现思路

1、发明目的：本发明目的是提供一种准确、可靠的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法。

2、技术方案：本发明所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，包括计数方法、控制菌检查法，

3、(1)计数方法采用1∶20的供试品2ml，加入50ml 45℃含0.5％聚山梨酯80的ph7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液中薄膜过滤；

4、(2)控制菌检查法采用1∶20的供试品20ml，接种至1000ml含0.3％卵磷脂+3％聚山梨酯80的胰酪大豆胨液体培养基。

5、进一步地，所述强效抑菌成分制剂成分包括：丙酸氯倍他索、硝酸咪康唑、氯霉素、盐酸苯海拉明、轻质液状石蜡、白凡士林、甘油、单硬脂酸甘油酯、十八醇、聚氧乙烯烷基醚-o(平平加)、聚山梨酯80(吐温-80)、油酸山梨坦(司盘-80)、水。

6、进一步地，步骤(1)中，进行需氧菌总数计数时加入金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉，置于胰酪大豆胨琼脂培养基，在30～35℃下培养3～5天。

7、进一步地，所述胰酪大豆胨琼脂培养基配方为：商购胰酪大豆胨琼脂培养基固体40.0g，加1l纯化水，加热搅拌至溶解，煮沸1分钟，121℃高压灭菌15min。

8、进一步地，步骤(1)中，进行霉菌和酵母菌总数计数时加入白色念珠菌、黑曲霉，置于沙氏葡萄糖琼脂培养基，20～25℃培养5天。

9、进一步地，所述沙氏葡萄糖琼脂培养基配方为：商购沙氏葡萄糖琼脂培养基65.1g，加1l纯化水，加热煮沸使其完全溶解，121℃高压灭菌15min。

10、进一步地，步骤(1)中，薄膜冲洗量300ml/膜。

11、进一步地，步骤(2)中，控制菌检查法的试验菌为铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。

12、进一步地，在30～35℃下，培养18小时。

13、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

14、1、按本发明方法适用性试验，以铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌为试验菌，可以在相应控制菌的培养基规定温度的最短时间下培养，便于更高效地建立强效抑菌类制剂微生物限度检查的计数方法与控制菌检查方法。

15、2、本发明可以提高制剂质量标准，对含强效抑菌成分制剂进行了方法适用性试验，为确定该类微生物检查方法提供理论依据。

16、3、丙咪氯苯乳膏为强效激素类乳膏，对细菌和真菌有较强的抑制作用，本方法通过薄膜过滤法、培养基稀释法和添加中和剂可以消除其抑菌性。

技术特征：

1.一种含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，包括计数方法、控制菌检查法，

2.根据权利要求1所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，所述强效抑菌成分制剂成分包括：丙酸氯倍他索、硝酸咪康唑、氯霉素、盐酸苯海拉明、轻质液状石蜡、白凡士林、甘油、单硬脂酸甘油酯、十八醇、聚氧乙烯烷基醚-o(平平加)、聚山梨酯80(吐温-80)、油酸山梨坦(司盘-80)、水。

3.根据权利要求1所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，步骤(1)中，进行需氧菌总数计数时加入金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉，置于胰酪大豆胨琼脂培养基，在30～35℃下培养3～5天。

4.根据权利要求3所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，所述胰酪大豆胨琼脂培养基配方为：商购胰酪大豆胨琼脂培养基固体40.0g，加1l纯化水，加热搅拌至溶解，煮沸1分钟，121℃高压灭菌15min。

5.根据权利要求1所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，步骤(1)中，进行霉菌和酵母菌总数计数时加入白色念珠菌、黑曲霉，置于沙氏葡萄糖琼脂培养基，20～25℃培养5天。

6.根据权利要求5所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，所述沙氏葡萄糖琼脂培养基配方为：商购沙氏葡萄糖琼脂培养基65.1g，加1l纯化水，加热煮沸使其完全溶解，121℃高压灭菌15min。

7.根据权利要求1所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，步骤(1)中，薄膜冲洗量300ml/膜。

8.根据权利要求1所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，步骤(2)中，控制菌检查法的试验菌为铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌。

9.根据权利要求8所述的含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，其特征在于，在30～35℃下，培养18小时。

技术总结
本发明公开了一种含强效抑菌成分制剂的微生物限度检查方法，包括计数方法、控制菌检查法，其中，计数方法采用1∶20的供试品2ml，加入50ml 45℃含0.5％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠‑蛋白胨缓冲溶液中薄膜过滤；控制菌检查法采用1∶20的供试品20ml，接种至1000ml含0.3％卵磷脂+3％聚山梨酯80的胰酪大豆胨液体培养基。该方法准确、可靠，以铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌为试验菌，可以在相应控制菌的培养基规定温度的最短时间下培养，便于更高效地建立强效抑菌类制剂微生物限度检查的计数方法与控制菌检查方法。

技术研发人员：赵柳娅,翁静艳,张平
受保护的技术使用者：复旦大学附属中山医院
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23