一种水产养殖益生菌及其菌剂制备与应用的制作方法
本发明涉及水产养殖领域，具体涉及一种水产养殖益生菌及其菌剂制备与应用。
背景技术：
1、益生菌能够净化水质，对动物具有促生长,增强动物的免疫力和抗病能力等作用。益生菌的应用不会引起动物体内药物残留，是其在水产养殖业中代替抗生素的重要理由，水产动物益生菌一般具有以下特点:对动物和人无毒害、对消化道内的酸和胆汁有较强的耐受力、发酵中能产生抑菌物质、容易培养增殖；
2、水产养殖益生菌菌剂是用于水产养殖的有益微生物制剂，它可以通过调节养殖水体的微生态平衡，促进水产动物的生长和健康，降低病害发生率，并提高养殖效益。
3、现有的水产养殖益生菌菌类功能单一，菌种之间缺乏交互，例如当养殖鱼饲料利用率上升时，排出的粪便有机物增加，水质变差，导致水中含氧量下降，鱼类死亡率受直接影响，影响水产养殖。
技术实现思路
1、(一)发明目的
2、为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提出一种水产养殖益生菌及其菌剂制备与应用，具有多菌种共生，协同进行鱼类生长和水质改善的特点。
3、(二)技术方案
4、为解决上述技术问题，本发明提供了一种水产养殖益生菌，包括干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌；
5、干酪乳杆菌的保藏编号为cgmcc 1.8727，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(cgmcc)；
6、沼泽红假单胞菌的保藏编号为cgmcc1.8929，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(cgmcc)；
7、丁酸梭菌的保藏编号为cgmcc1.5205，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(cgmcc)。
8、本发明还提供一种水产养殖益生菌剂，包括水产养殖益生菌所述的干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌。
9、优选的，所述益生菌剂包括干酪乳杆菌粉、沼泽红假单胞菌粉、丁酸梭菌粉和基液，其中，所述干酪乳杆菌粉、所述沼泽红假单胞菌粉和所述丁酸梭菌粉的组分比为10～20∶15～30∶5～15。
10、本发明还提供一种水产养殖益生菌剂制备方法，包括以下步骤：
11、步骤一、菌种培养：将干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌在对应的培养基内培养，温度25～60℃、ph值5.5～8.5、培养时间8～36h；
12、步骤二、菌种扩繁：对培养的干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌进行活性检测，挑选活性强的进行转移扩繁，扩繁的各培养基添加抗生素组进行共生，扩繁后的干酪乳杆菌落、沼泽红假单胞菌落和丁酸梭菌落中活菌数至少为3cfu3/ml；
13、步骤三、菌粉制备：对干酪乳杆菌落、沼泽红假单胞菌落和丁酸梭菌落进行提纯，获取的干酪乳杆菌液、沼泽红假单胞菌液和丁酸梭菌液通过冷冻干燥处理，获取固态的干酪乳杆菌粉、沼泽红假单胞菌粉和丁酸梭菌粉，按组分比10～20∶15～30∶5～15配置混合菌粉；
14、步骤四、菌剂制备：将组分为无菌水60、酪蛋白20、明胶10、赖氨酸0.6、磷酸二氢钙2、海藻酸钠2和纤维素4配置为基液，将混合菌粉与基液混匀后制备养殖益生菌菌剂。
15、优选的，干酪乳杆菌的培养基组分为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，硫酸镁0.2g乙酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸锰0.04g，蒸馏水1.0l，ph 5.7±0.2，培养温度：60℃，培养时间8h，15min灭菌。
16、优选的，沼泽红假单胞菌的培养基组分为：胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂13.0g，蒸馏水1.0l，ph7.3±0.2，培养温度：30℃，培养时间16h，15min灭菌。
17、优选的，丁酸梭菌的培养基组分为：葡萄糖10g，豆粕15g，玉米粉7g，硫酸镁0.2g，硫酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙0.3g，蒸馏水1l，培养温度：30℃，培养时间24h，15min灭菌。
18、优选的，对培养的干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌进行活性检测，培养后,选取菌落数在30个～300个之间的平板计数，若平板中有较大片状菌落生长时，则不宜采用；
19、若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数，全皿菌落数较高的为高活性菌落，用于扩繁。
20、优选的，将混合菌粉与基液混匀后制备养殖益生菌菌剂，与基液混匀后需要在35°发酵罐内发酵至少32h，发酵后的干酪乳杆菌落、沼泽红假单胞菌落和丁酸梭菌落中活菌数≥3cfu3/ml。
21、本发明还提供一种水产养殖益生菌剂应用，包括所述的水产养殖益生菌剂，将水产养殖益生菌剂与饲料混匀后，投放至水产养殖塘内。
22、本发明的上述技术方案具有如下有益的技术效果：
23、1、丁酸梭菌黏附于水产动物肠道细胞而不损伤细胞，用于干酪乳杆菌和养殖鱼类肠道菌群共生，干酪乳杆菌能够通过调节肠道微生物平衡，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖，从而维护肠道健康，提高饲料利用率；
24、2、沼泽红假单胞菌是光合细菌，能够耐受高浓度的有机废水和分解转化能力，当水中含氧量增加时，鱼类更加活跃，它增强了鱼类的食欲，增强鱼类对营养物质的消化与合成功能，提高了饲料报酬率,排出粪便增加，但可通过沼泽红假单胞菌进行有机物分解，保证水塘水质不变，有利于水产养殖。
25、3、干酪乳杆菌和丁酸梭菌具有常见抗生素的抗性，可以与抗生素共生，在进行灭杀病菌时，防止抗生素灭杀正常的益生菌。
技术特征：
1.一种水产养殖益生菌，其特征在于，包括干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌。
2.一种水产养殖益生菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌。
3.根据权利要求2所述的一种水产养殖益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂包括干酪乳杆菌粉、沼泽红假单胞菌粉、丁酸梭菌粉和基液，其中，所述干酪乳杆菌粉、所述沼泽红假单胞菌粉和所述丁酸梭菌粉的组分比为10～20∶15～30∶5～15。
4.根据权利要求3所述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，步骤一中，干酪乳杆菌的培养基组分为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，硫酸镁0.2g乙酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸锰0.04g，蒸馏水1.0l，ph 5.7±0.2，培养温度：60℃，培养时间8h，15min灭菌。
6.根据权利要求4述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，步骤一中，沼泽红假单胞菌的培养基组分为：胰蛋白胨15.0g，大豆胨5.0g，氯化钠5.0g，琼脂13.0g，蒸馏水1.0l，ph7.3±0.2，培养温度：30℃，培养时间16h，15min灭菌。
7.根据权利要求4述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，步骤一中，丁酸梭菌的培养基组分为：葡萄糖10g，豆粕15g，玉米粉7g，硫酸镁0.2g，硫酸铵0.2g，磷酸氢二钾0.5g，碳酸钙0.3g，蒸馏水1l，培养温度：30℃，培养时间24h，15min灭菌。
8.根据权利要求4述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，步骤二中，对培养的干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌进行活性检测，培养后,选取菌落数在30个～300个之间的平板计数，若平板中有较大片状菌落生长时，则不宜采用；
9.根据权利要求4述的一种水产养殖益生菌剂制备方法，其特征在于，步骤四中，将混合菌粉与基液混匀后制备养殖益生菌菌剂，与基液混匀后需要在35°发酵罐内发酵至少32h，发酵后的干酪乳杆菌落、沼泽红假单胞菌落和丁酸梭菌落中活菌数≥3cfu3/ml。
10.一种水产养殖益生菌剂应用，其特征在于，包括权利要求2所述的水产养殖益生菌剂，将水产养殖益生菌剂与饲料混匀后，投放至水产养殖塘内。
技术总结
本发明属于水产养殖领域，具体涉及一种水产养殖益生菌及其菌剂制备与应用，包括干酪乳杆菌、沼泽红假单胞菌和丁酸梭菌；丁酸梭菌黏附于水产动物肠道细胞而不损伤细胞，用于干酪乳杆菌和养殖鱼类肠道菌群共生，干酪乳杆菌能够通过调节肠道微生物平衡，促进有益菌的生长，抑制有害菌的繁殖，从而维护肠道健康，提高饲料利用率；沼泽红假单胞菌是光合细菌，能够耐受高浓度的有机废水和分解转化能力，当水中含氧量增加时，鱼类更加活跃，它增强了鱼类的食欲，增强鱼类对营养物质的消化与合成功能，提高了饲料报酬率；排出粪便增加，但可通过沼泽红假单胞菌进行有机物分解，保证水塘水质不变，有利于水产养殖。
技术研发人员：曾德洪
受保护的技术使用者：海南养星生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23