一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体及其制备和应用

本发明涉及单克隆抗体领域，具体涉及一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体及其制备和应用。

背景技术：

1、近二十多年来，由于艾滋病、肿瘤放化疗、器官移植等原因，使免疫缺陷患者持续增多，侵袭真菌感染(ifis)发病率显著上升，在全世界范围内其致死率超过50％。每年全球有约10亿人被真菌感染，其中约375万人死于真菌感染，其中白念珠菌为最主要的致病真菌。

2、烯醇化酶(eno1)，也称为2磷酸甘油酸水解酶，是一种金属酶，催化2磷酸甘油酸在糖酵解途径中转化为烯醇式丙酮酸，对生物体的生长和代谢十分重要。烯醇化酶在不同物种中可能被多个基因所编码。例如，人的基因组中至少有4个编码enolase的基因(eno1，eno2，eno3和eno4)。白念珠菌eno1是一种多功能蛋白，在白念珠菌细胞内和细胞表面均有分布，被认为是主要的细胞表面抗原和毒力因子，参与了白念珠菌侵袭性感染形成，宿主感染后会因刺激而可以产生保护性抗体。因此，eno1具有作为开发治疗侵袭性真菌感染药物靶点的潜在价值。

3、单克隆抗体是由单一克隆的杂交瘤细胞产生，仅识别单一抗原表位的特异性抗体，具有高特异性、治疗效果显著、产生的交叉反应或副作用少、易于修饰改造、体内存在周期较长等特点。

4、现用的抗真菌药物主要有氮唑类、多烯类、棘白菌素类等，存在品种少、真菌耐药性增加和毒副作用大等问题，给临床抗真菌治疗的药物选择带来很大困扰，迫切需要研制新型抗真菌药物。在多数侵袭性真菌感染患者的免疫功能低下、真菌易对小分子药物产生耐药性、小分子药物抗侵袭性真菌感染的有效性和安全性亟待提高的情况下，研究抗真菌治疗的新策略具有极其重要的意义。单克隆抗体具有精准靶向的抗真菌作用，兼有调节机体免疫反应的功能，是治疗真菌感染的一种可行且具有独特优势的方法。

5、对于目前临床上对于侵袭真菌感染的诊断的方法，主要通过平板培养法，g实验等，存在着时间长，灵敏度低等问题。但是感染患者的诊断时间的早晚对患者的预后有着很大的影响，以及抗菌药的不当使用会导致治疗无效和耐药的问题。

6、综上，亟需研发一种能够用来靶向真菌烯醇化酶1(eno1)的单克隆抗体。

技术实现思路

1、本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体及其制备和应用。

2、本发明提供了一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，具有这样的特征，包括：单克隆抗体12g10和/或单克隆抗体5c4，其中，单克隆抗体12g10包含重链可变区和轻链可变区，单克隆抗体12g10的重链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为：重链cdr1氨基酸：gftfssya，重链cdr2氨基酸：issggsyt，重链cdr3氨基酸：arisydlfdy，

3、单克隆抗体12g10的轻链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为：轻链cdr1氨基酸：ssvsy，轻链cdr2氨基酸：sts，轻链cdr3氨基酸：hqwsiyrt，

4、单克隆抗体5c4包含重链可变区和轻链可变区，单克隆抗体5c4的重链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为：重链cdr1氨基酸：gfsltsya，重链cdr2氨基酸：iwgdgst，重链cdr3氨基酸：akadyydyfdy，

5、单克隆抗体5c4的轻链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为：轻链cdr1氨基酸：qdinry，轻链cdr2氨基酸：ran，轻链cdr3氨基酸：lqydefplt。

6、在本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体中，还可以具有这样的特征：其中，单克隆抗体12g10的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：1所示，单克隆抗体12g10的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：2所示。

7、在本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体中，还可以具有这样的特征：其中，单克隆抗体12g10的重链可变区的基因序列如seq id no：3所示，单克隆抗体12g10的轻链可变区的基因序列如seq id no：4所示。

8、在本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体中，还可以具有这样的特征：其中，单克隆抗体5c4的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：5所示，单克隆抗体5c的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：6所示。

9、在本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体中，还可以具有这样的特征：其中，单克隆抗体5c4的重链可变区的基因序列如seq id no：7所示，单克隆抗体5c4的轻链可变区的基因序列如seq id no：8所示。

10、本发明还提供了靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体的制备方法，具有这样的特征，包括以下步骤：步骤sl，构建白念珠菌eno1蛋白重组表达质粒，然后进行eno1蛋白诱导表达及纯化，得到重组念珠菌enol蛋白；步骤s2，以重组念珠菌enol蛋白为抗原，对balb/c雌性小鼠进行免疫，得到免疫小鼠并取免疫小鼠的脾脏细胞，采用杂交瘤方法制备杂交瘤细胞株，再分别通过一次、二次亚克隆筛选，获得靶向真菌烯醇化酶1的enol单克隆抗体及其enol单克隆抗体细胞株。

11、本发明还提供了靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体在制备抗真菌感染药物以及抗真菌感染药物增效剂中的应用。

12、在本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体在制备抗真菌感染药物以及抗真菌感染药物增效剂中的应用中，还可以具有这样的特征：应用所针对的真菌包括白念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、耳念珠菌、近平滑念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉菌。

13、发明的作用与效果

14、根据本发明所涉及的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体及其制备应用，该靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体包括单克隆抗体12g10和/或单克隆抗体5c4，单克隆抗体12g10的重链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为cdr1：gftfssya，cdr2：issggsyt，cdr3：arisydlfdy，轻链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为cdr1：ssvsy，cdr2：sts，cdr3：hqwsiyrt；单克隆抗体5c4的重链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为cdr1：gfsltsya，cdr2：iwgdgst，cdr3：akadyydyfdy，轻链可变区的3个互补决定区(cdr)序列分别为cdr1：qdinry，cdr2：ran，cdr3：lqydefplt。单克隆抗体12g10和单克隆抗体5c4均不仅能与真菌eno1蛋白高亲和力结合，还能与真菌细胞结合，从而抑制真菌对宿主细胞的侵袭感染。单克隆抗体12g10和单克隆抗体5c4均与人的烯醇化酶不结合，并均具有高度地选择性。本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体在治疗侵袭性真菌感染上效果显著。

15、因此，本发明提供的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体具有选择性高、特异性强和药效好的特点，在侵袭性真菌感染的诊断和治疗中具有巨大的应用价值。

技术特征：

1.一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体，其特征在于：

6.一种如权利要求1-5中任意一项所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.一种如权利要求1-5中任意一项所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体在制备抗真菌感染药物以及抗真菌感染药物增效剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体在制备抗真菌感染药物以及抗真菌感染药物增效剂中的应用，其特征在于：所述应用所针对的真菌包括白念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、耳念珠菌、近平滑念珠菌、新生隐球菌和烟曲霉菌。

技术总结
本发明提供了一种靶向真菌烯醇化酶1的单克隆抗体及其制备和应用，属于单克隆抗体领域，包括：抗体12G10和/或抗体5C4，抗体12G10的重链可变区的3个CDR序列分别为：CDR1：GFTFSSYA，CDR2：ISSGGSYT，CDR3：ARISYDLFDY，轻链可变区的3个CDR序列分别为：CDR1：SSVSY，CDR2：STS，CDR3：HQWSIYRT；单克隆抗体5C4的重链可变区的3个CDR序列分别为：CDR1：GFSLTSYA，CDR2：IWGDGST，CDR3：AKADYYDYFDY，3个CDR序列分别为：CDR1：QDINRY，CDR2：RAN，CDR3：LQYDEFPLT。

技术研发人员：李立平,伍浩,姜远英
受保护的技术使用者：同济大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23