鼠李糖乳酪杆菌GS066及细菌素、冻干粉、后生元及其抑制幽门螺杆菌的应用的制作方法

本发明属于微生物，尤其涉及鼠李糖乳酪杆菌gs066及细菌素、冻干粉、后生元及其抑制幽门螺杆菌的应用。

背景技术：

1、幽门螺杆菌（ helicobacter pylori,hp），常寄生在胃黏膜组织中，感染后引起慢性胃炎和消化性溃疡等疾病，与胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等疾病密切相关，被世界卫生组织（who）列为第一类生物致癌因子。幽门螺杆菌感染主要包括与感染者的长期密切接触、使用感染者用过的不洁饮食器具等。幽门螺杆菌所致的胃炎细菌自发清除比较少见。通过规范的药物治疗，幽门螺杆菌感染可以治愈，但如不注意卫生和生活习惯，仍可再次感染。因此对日常用具进行合理的除菌清洁，并采取疗效确切的药物治疗幽门螺杆菌感染，对于幽门螺杆菌预防和治疗具有积极意义。

2、益生菌对治疗幽门螺杆菌有一定的的辅助治疗作用。益生菌可改善肠道菌群、提高身体免疫力、调节胃肠道功能等。幽门螺杆菌感染通过服用益生菌后，能够一定程度上抑制身体内的炎症反应，促进胃肠道粘膜的恢复。细菌素是细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌活性的多肽或前体多肽，是存在于细菌生活的天然环境中的一类抗菌物质。因此，筛选具有抑制幽门螺杆菌功能的益生菌，并提取其细菌素用于抑制幽门螺杆菌，有助于实现幽门螺杆菌预防和治疗。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供鼠李糖乳酪杆菌gs066，能够有效的抑制幽门螺杆菌。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、鼠李糖乳酪杆菌（ lacticaseibacillus rhamnosus）gs066，所述鼠李糖乳酪杆菌gs066，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称cgmcc），保藏编号为cgmcc no. 29393，保藏日期：2023年12月25日。

4、本发明的另一目的在于提供一种提取细菌素的方法，包括如下步骤：所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵22-30h后，发酵液离心，收集上清液，于上清液中加入硫酸铵进行沉淀，离心收集沉淀，得细菌素。

5、优选的，所述鼠李糖乳酪杆菌gs066发酵12-18h时，于发酵体系中添加0.3-1.0g/l的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸继续发酵。

6、本发明的另一目的在于提供一种制剂，所述制剂含有所述鼠李糖乳酪杆菌gs066和/或所述方法提取的细菌素。

7、本发明的另一目的在于一种冻干粉的制备方法，包括如下步骤：所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵至发酵液中葡萄糖含量≤0.1g/l，发酵液离心，收集菌体与冻干保护剂混合形成乳化液，将乳化液进行冷冻干燥。

8、优选的，按质量百分比计，所述冻干粉的保护剂包括：脱脂乳粉8-12%，海藻糖7-9%，甘露糖醇1-3%，吐温-80 0.08-0.12%，谷氨酸钠0.8-1.2%，维生素c 0.04-0.06%，余量为水。

9、本发明的另一目的在于提供所述冻干粉的制备方法制备的冻干粉。

10、本发明的另一目的在于提供一种后生元的制备方法，包括如下步骤：所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵12-18h时，于发酵体系中添加0.3-1.0g/l的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸继续发酵，发酵结束后发酵液浓缩，干燥后即得后生元。

11、本发明的另一目的在于提供所述后生元制备方法制备的后生元。

12、本发明的另一目的在于提供所述鼠李糖乳酪杆菌gs066、所述方法提取的细菌素、所述制剂、所述冻干粉或所述后生元在制备抑制革兰氏阴性菌产品中的应用，所述革兰氏阴性菌包括幽门螺杆菌和大肠杆菌。

13、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

14、本发明提供了鼠李糖乳酪杆菌gs066，相较于市售的同属菌株鼠李糖乳酪杆菌lgg、鼠李糖乳酪杆菌hn001，该菌株代谢产生的细菌素对幽门螺杆菌抑制性好，利用鼠李糖乳酪杆菌gs066以及从该菌株发酵液中提取获得细菌素可有效的抑制革兰氏阴性菌。

15、生物保藏说明

16、本发明所述的鼠李糖乳酪杆菌gs066，分类命名为鼠李糖乳酪杆菌（ lacticaseibacillus rhamnosus），保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称cgmcc），保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：cgmccno. 29393，保藏日期：2023年12月25日。

技术特征：

1.鼠李糖乳酪杆菌（lacticaseibacillus rhamnosus）gs066，其特征在于，所述鼠李糖乳酪杆菌gs066，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no. 29393。

2.一种提取细菌素的方法，其特征在于，包括如下步骤：权利要求1所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵22-30h后，发酵液离心，收集上清液，于上清液中加入硫酸铵进行沉淀，离心收集沉淀，得细菌素。

3.根据权利要求2所述的提取细菌素的方法，其特征在于，所述鼠李糖乳酪杆菌gs066发酵12-18h时，于发酵体系中添加0.3-1.0g/l的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸继续发酵。

4.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有权利要求1所述鼠李糖乳酪杆菌gs066和/或权利要求2或3所述方法提取的细菌素。

5.一种冻干粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：权利要求1所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵至发酵液中葡萄糖含量≤0.1g/l，发酵液离心，收集菌体与冻干保护剂混合形成乳化液，将乳化液进行冷冻干燥。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，按质量百分比计，所述冻干粉的保护剂包括：脱脂乳粉8-12%，海藻糖7-9%，甘露糖醇1-3%，吐温-80 0.08-0.12%，谷氨酸钠0.8-1.2%，维生素c 0.04-0.06%，余量为水。

7.权利要求5或6所述制备方法制备的冻干粉。

8.一种后生元的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：权利要求1所述鼠李糖乳酪杆菌gs066接种于液体培养基中，发酵12-18h时，于发酵体系中添加0.3-1.0g/l的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸继续发酵，发酵结束后发酵液浓缩，干燥后即得后生元。

9.权利要求8所述制备方法制备的后生元。

10.权利要求1所述鼠李糖乳酪杆菌gs066、权利要求2或3所述方法提取的细菌素、权利要求4所述制剂、权利要求7所述冻干粉或权利要求9所述后生元在制备抑制革兰氏阴性菌产品中的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌包括幽门螺杆菌和大肠杆菌。

技术总结
本发明提供了鼠李糖乳酪杆菌GS066及细菌素、冻干粉、后生元及其抑制幽门螺杆菌的应用，属于微生物技术领域。本发明所述鼠李糖乳酪杆菌GS066，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.29393。本发明所述鼠李糖乳酪杆菌GS066产生的细菌素含量高，利用鼠李糖乳酪杆菌GS066以及从该菌株发酵液中提取获得细菌素可有效的抑制革兰氏阴性菌。

技术研发人员：刘金昉,袁文焕,刘瑞峰,韩清波,王震,李华文,李云旭,刘飒,马乐辉
受保护的技术使用者：天津芯源生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23