用于基于数字亲和力的检测测定的系统和方法

背景技术：

1、对诸如胞外囊泡等小颗粒进行的基于流动的分析可能存在若干挑战。典型的基于流动的颗粒分析包括使分散在流体悬浮液中的多个颗粒流过通道。随着颗粒尺寸的减小，颗粒往往比更大颗粒扩散得更快。附加地，因为在层流条件下流过通道的流体的速度根据其与通道壁的距离而径向变化，所以流过通道的颗粒的速度根据其与壁的距离而对应地变化。因此，由于颗粒速度取决于其径向位置，而径向位置又受到其相对较高的扩散率的强烈影响，因此更加难以区分流过通道的各种较小颗粒。当颗粒或分子流过时检测灵敏度的问题在基于数字亲和力的检测测定中尤其相关，在基于数字亲和力的检测测定中，即使是单个分子的存在也应当在其流过检测区域或激光探针体积时被可靠地检测和计数。

2、因此，目前需要用于对小颗粒进行基于流动的分析的设备、系统和方法，这些设备、系统和方法要考虑到在鉴定和表征此类小颗粒时基于扩散的挑战。

技术实现思路

1、
技术实现要素：
以简化的形式介绍一些概念，这些概念将在下面的具体实施方式中进一步描述。本发明内容不旨在标识所要求保护的主题的关键特征，也不旨在用于帮助确定所要求保护的主题的范围。

2、在一个方面，本公开提供了一种用于基于数字亲和力的检测测定的方法。在实施方案中，该方法是一种基于数字亲和力的分析物测定方法。在实施方案中，该方法是一种基于数字亲和力的单分子分析物测定方法。在实施方案中，该方法是一种基于数字亲和力的单分子分析物测定方法，其不需要和/或不包括执行扩增步骤。在实施方案中，该方法包括：将样本中的分析物与可检测剂缔合；使包括与可检测剂缔合的分析物的样本流过流动通道；通过流动通道的一部分通过探询窗口输出激发光；以及基于通过探询窗口从流动通道的一部分接收的发射光，利用光电检测器生成发射信号。

3、在另一方面，本公开提供了一种用于分析单分子分析物的系统。在实施方案中，该用于分析单分子分析物的系统不包括用于执行扩增步骤，诸如分析物扩增步骤的试剂或结构。在实施方案中，该系统包括：流动通道，该流动通道被配置为使单分子分析物流过流动通道的管腔，该流动通道限定探询窗口，该探询窗口被配置为允许光进入和离开管腔；光引擎，该光引擎被配置为通过探询窗口将激发光输出到流动通道中；检测器系统，该检测器系统被定位成接收从流动通道发射的发射光，并且被配置为基于所接收的发射光生成信号；光收集系统，该光收集系统被定位成收集来自流动通道的发射光并且将所收集的发射光引导到检测器系统上；和控制器，该控制器操作地耦接到光引擎和检测器系统，该控制器包括逻辑，该逻辑在由控制器执行时使得系统执行操作，该操作包括：利用光引擎将激发光通过探询窗口输出到流动通道的一部分上；以及利用检测器生成发射信号。

技术特征：

1.一种用于基于数字亲和力的单分子检测测定的方法，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括将所述分析物与捕获剂缔合，所述捕获剂被配置为当所述分析物与所述捕获剂缔合并且当所述捕获剂经受分离程序时将所述分析物与所述样本的一部分分离。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂包括珠粒。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述珠粒是磁性的。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述珠粒是荧光珠粒，所述荧光珠粒被配置为在被所述激发光激发时发射珠粒荧光。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述珠粒包括多个不同的发色团，其中所述多个不同的发色团中的每个发色团包括预定的一组可调光学编码参数，从而定义所述捕获剂的光学可检测代码。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述光学可检测代码包括所述捕获剂的预定发射光谱、所述捕获剂的预定吸收光谱或它们的组合。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述荧光珠粒是荧光光谱-强度条形码珠粒。

9.根据权利要求3所述的方法，其中所述珠粒具有小于1微米的直径。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述珠粒具有小于300nm的直径。

11.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂与所述可检测剂的比率在10∶1至1∶10的范围内。

12.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂不包括珠粒。

13.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括：

14.根据权利要求13所述的方法，其中使与所述可检测剂缔合的所述分析物流过所述流动通道包括使包括与所述捕获剂和所述可检测剂缔合的所述分析物的复合物流动。

15.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂包括磁珠，并且其中将与所述捕获剂缔合的所述分析物与所述样本分离包括将所述磁珠与磁体缔合；以及从与所述捕获剂缔合的所述分析物中去除所述样本的未与所述磁体缔合的部分，以提供所述纯化样本。

16.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂包括珠粒，并且其中将与所述捕获剂缔合的所述分析物与所述样本分离包括对包括与所述分析物缔合的所述捕获剂的所述样本进行离心，以提供上清液和包括与所述捕获剂缔合的所述分析物的沉淀物；以及倾析所述上清液以提供所述纯化样本。

17.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂包括珠粒，并且其中将偶联至所述捕获剂的所述分析物与所述样本分离包括使包括与所述捕获剂缔合的所述分析物的所述样本通过尺寸排阻色谱柱，以提供包括与所述捕获剂缔合的所述分析物的所述纯化样本。

18.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂偶联至表面。

19.根据权利要求18所述的方法，所述方法还包括去除所述样本的未与偶联至所述表面的所述捕获剂缔合的部分。

20.根据权利要求19所述的方法，所述方法还包括使所述表面与洗脱缓冲液接触，以从所述表面洗脱与所述捕获剂缔合的分析物。

21.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂被配置为在激发时发射捕获剂发射光。

22.根据权利要求21所述的方法，所述方法还包括基于所述捕获剂发射光生成捕获剂发射信号。

23.根据权利要求22所述的方法，其中生成所述捕获剂发射信号包括利用所述激发光照射所述捕获剂，以及利用所述光电检测器检测所述捕获剂发射光。

24.根据权利要求22所述的方法，所述方法还包括：

25.根据权利要求1所述的方法，其中通过所述流动通道的所述部分通过所述探询窗口输出所述激发光包括跨所述流动通道的管腔的横截面输出所述激发。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述探询窗口内的所述流动通道的所述管腔限定相对于所述流动通道的相邻部分的收缩部。

27.根据权利要求2所述的方法，其中所述捕获剂包括多个不同的发色团，其中所述多个不同的发色团中的每个发色团包括预定的一组可调光学编码参数，从而定义所述捕获剂的光学可检测代码。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述光学可检测代码包括所述捕获剂的预定发射光谱、所述捕获剂的预定吸收光谱或它们的组合。

29.根据权利要求2所述的方法，其中所述分析物与所述可检测剂之间以及所述分析物与所述捕获剂之间的缔合是基于特异性分子识别。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述缔合是选自由以下各项组成的组的缔合：抗体-抗原缔合、适体-抗原缔合、肽-抗原缔合和核酸杂交缔合。

31.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂是第一可检测剂，所述第一可检测剂被配置为在所述第一可检测剂激发时发射第一波长范围内的第一发射光，其中所述方法还包括将第二可检测剂与所述分析物缔合，所述第二可检测剂被配置为在所述第二可检测剂激发时发射第二波长范围内的第二发射光，并且其中所述第一发射波长范围不同于所述第二波长范围。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述第一可检测剂与所述分析物的第一部分缔合，并且其中所述第二可检测剂与所述分析物的不同于所述第一部分的第二部分缔合。

33.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括将多种可检测剂与所述分析物的多个部分缔合。

34.根据权利要求1所述的方法，其中仅存在一种与所述分析物缔合的可检测剂。

35.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括将所述分析物与缔合剂缔合，所述缔合剂被配置为与所述分析物特异性缔合，其中将所述分析物与所述可检测剂缔合包括将所述可检测剂与和所述分析物缔合的所述缔合剂缔合。

36.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括在将所述样本中的所述分析物与所述可检测剂缔合之后，使所述样本与去除珠粒接触，所述去除珠粒被配置为与未与所述分析物缔合的任何可检测剂选择性地缔合；以及从所述样本中去除与未与所述分析物缔合的所述可检测剂缔合的所述去除珠粒。

37.根据权利要求36所述的方法，其中所述去除珠粒是磁性的。

38.根据权利要求2所述的方法，其中所述方法包括使所述样本的多种分析物流过所述流动通道，所述多种分析物包括与可检测剂和捕获剂缔合的所述分析物，其中使与可检测剂和捕获剂缔合的所述分析物流过所述流动通道包括在分析物逐个与捕获剂和可检测剂缔合的基础上使与可检测剂和捕获剂缔合的所述分析物流过所述流动通道的收缩部。

39.根据权利要求38所述的方法，所述方法还包括：

40.根据权利要求39所述的方法，所述方法还包括：

41.根据权利要求39所述的方法，所述方法还包括：

42.根据权利要求41所述的方法，其中确定与所述发射信号相关联的所述分析物的所述浓度还基于与可检测剂发射信号和捕获剂发射信号两者相关联的分析物的数量与捕获剂发射信号而没有可检测剂发射信号的所述数量或仅可检测剂发射信号而没有捕获剂发射信号的所述数量或它们的组合的比率。

43.根据权利要求38所述的方法，其中对分析物的所述数量进行定量包括单分子灵敏度或检测效率。

44.根据权利要求43所述的方法，其中单分子灵敏度或检测效率包括检测流过所述流动通道的所述分子的超过99％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％或50％。

45.根据权利要求43所述的方法，其中单分子检测效率包括检测流过所述流动通道的所述单分子的超过90％。

46.根据权利要求38所述的方法，所述方法还包括基于来自所述探询窗口的所述发射光的存在或不存在来对所述流动通道中的所述分析物进行排序。

47.根据权利要求46所述的方法，其中所述排序对应于基于所述第一发射光和所述第二发射光中的一者或多者测量的所述分析物缔合的捕获剂和可检测剂的发射光谱。

48.根据权利要求46所述的方法，其中所述排序对应于所述珠粒的测量的光散射光。

49.根据权利要求1所述的方法，其中所述流动通道设置在微流体设备的一部分中。

50.根据权利要求49所述的方法，其中所述微流体设备限定平面部分。

51.根据权利要求1所述的方法，其中所述探询窗口内的所述流动通道限定相对于所述流动通道的相邻部分的收缩部。

52.根据权利要求1所述的方法，其中使所述样本流过所述流动通道不包括鞘流聚焦、声流聚焦或它们的组合。

53.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂选自由以下各项组成的组：荧光抗体、荧光抗体片段、荧光适体、荧光核酸分子、荧光dna分子、荧光肽和荧光结合剂。

54.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物是肽。

55.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物是蛋白质。

56.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物包括核酸序列。

57.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物不是荧光的或发光的。

58.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂是荧光核酸探针。

59.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂是荧光抗体。

60.根据权利要求1所述的方法，其中所述荧光核酸探针包括与荧光发射体缔合的探针核酸链。

61.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂是第一可检测剂，所述第一可检测剂被配置为在所述第一可检测剂激发时发射第一波长范围内的第一发射光，其中所述方法还包括将第二可检测剂与所述核酸缔合，所述第二可检测剂被配置为在所述第二可检测剂激发时发射第二波长范围内的第二发射光，并且其中所述第一发射波长范围不同于所述第二波长范围，其中所述第一可检测剂与所述核酸的第一部分缔合，并且其中所述第二可检测剂与所述核酸的不同于所述第一部分的第二部分缔合。

62.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂与所述分析物的部分缔合，并且其中所述部分是核酸序列。

63.根据权利要求1所述的方法，其中所述可检测剂与所述分析物的部分缔合，并且其中所述部分是对应于抗体结合或适体结合的表位。

64.根据权利要求61所述的方法，其中所述方法还包括将第三可检测剂与所述分析物缔合，其中所述第三可检测剂是嵌入染料。

65.根据权利要求61所述的方法，其中所述第一可检测剂包括与所述核酸的一部分互补的核酸探针和偶联至所述核酸探针的荧光部分，并且其中所述第二可检测剂是嵌入染料。

66.根据权利要求61所述的方法，其中所述第一可检测剂包括与所述核酸的第一部分互补的第一核酸探针和偶联至所述核酸探针的荧光部分，并且其中所述第二可检测剂是与所述核酸的第二部分互补的第二核酸探针和偶联至所述核酸探针的第二荧光部分。

67.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括在将所述样本中的所述核酸与所述可检测剂缔合之后，使所述样本与去除珠粒接触，所述去除珠粒被配置为与未与所述核酸缔合的任何可检测剂选择性地缔合；以及从所述样本中去除与未与所述核酸缔合的所述可检测剂缔合的所述去除珠粒。

68.根据权利要求67所述的方法，其中所述去除珠粒是磁性的。

69.根据权利要求1所述的方法，其中所述数字亲和力测定是一种数字夹心免疫测定。

70.根据权利要求69所述的方法，其中所述分析物是蛋白质。

71.根据权利要求1所述的方法，其中所述数字亲和力测定是一种数字核酸测定。

72.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物包括核酸序列。

73.根据权利要求1所述的方法，其中所述数字亲和力测定包括对所述单分子分析物的一个亲和力结合事件。

74.根据权利要求1所述的方法，其中所述数字亲和力测定包括对所述单分子分析物的两个亲和力结合事件。

75.根据权利要求1所述的方法，其中所述数字亲和力测定包括对所述单分子分析物的多于两个亲和力结合事件。

76.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括利用光收集系统收集来自所述探询窗口的所述发射光；以及将所收集的发射光引导到所述检测器上，其中所述光收集系统包括空气物镜，所述空气物镜具有在大于0.91并且小于0.99的范围内的数值孔径。

77.根据权利要求76所述的方法，其中所述空气物镜具有约0.95的数值孔径。

78.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法不包括扩增靶分析物或扩增与所述靶分析物的存在相关的分子的扩增步骤。

79.根据权利要求78所述的方法，其中所述方法不包括选自聚合酶链式反应、酶扩增、基于等温核酸的扩增、滚环扩增以及它们的组合的扩增步骤。

80.一种用于分析单分子分析物的系统，所述系统包括：

81.根据权利要求80所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

82.根据权利要求81所述的系统，其中所述分析物不是荧光的或发光的。

83.根据权利要求81所述的系统，所述系统还包括纯化子系统，所述纯化子系统包括纯化子系统控制器并且被配置为将所述分析物与捕获剂缔合，所述捕获剂被配置为当所述分析物与所述捕获剂缔合并且当所述捕获剂经受分离程序时将所述分析物与所述样本的一部分分离。

84.根据权利要求83所述的系统，其中所述纯化子系统被配置为将与所述捕获剂缔合的所述分析物与所述样本的一部分分离以提供纯化样本；并且

85.根据权利要求83所述的系统，其中使与所述可检测剂缔合的所述分析物流过所述流动通道包括使包括与所述捕获剂和所述可检测剂缔合的所述分析物的复合物流动。

86.根据权利要求85所述的系统，其中所述捕获剂与所述可检测剂的比率在10∶1至1∶10的范围内。

87.根据权利要求83所述的系统，其中所述捕获剂包括磁珠，并且其中纯化子系统包括磁体，其中所述纯化子系统控制器包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

88.根据权利要求83所述的系统，其中所述捕获剂包括珠粒，其中所述纯化子系统包括离心机，其中所述纯化子系统控制器包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

89.根据权利要求83所述的系统，其中所述捕获剂包括珠粒，其中所述纯化子系统包括尺寸排阻色谱柱，并且其中所述纯化子系统控制器包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

90.根据权利要求83所述的系统，其中所述纯化子系统包括表面，其中所述捕获剂偶联至表面。

91.根据权利要求90所述的系统，其中所述纯化子系统控制器包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：去除所述样本的未与偶联至所述表面的所述捕获剂缔合的部分。

92.根据权利要求91所述的系统，其中所述纯化子系统控制器包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：使所述表面与洗脱缓冲液接触，以从所述表面洗脱与所述捕获剂缔合的分析物。

93.根据权利要求83所述的系统，其中所述捕获剂被配置为在激发时发射捕获剂发射光。

94.根据权利要求93所述的系统，其中所述捕获剂包括多个不同的发色团，其中所述多个不同的发色团中的每个发色团包括预定的一组可调光学编码参数，从而定义所述捕获剂的光学可检测代码。

95.根据权利要求94所述的系统，其中所述光学可检测代码包括所述捕获剂的预定发射光谱、所述捕获剂的预定吸收光谱或它们的组合。

96.根据权利要求93所述的系统，其中所述捕获剂包括光谱-强度条形码荧光珠粒。

97.根据权利要求93所述的系统，其中所述捕获剂包括光谱-强度条形码荧光磁珠。

98.根据权利要求80所述的系统，其中所述捕获剂包括直径小于1微米的珠粒。

99.根据权利要求98所述的系统，其中所述捕获剂包括直径小于300nm的珠粒。

100.根据权利要求93所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：基于所述捕获剂发射光生成捕获剂发射信号。

101.根据权利要求100所述的系统，其中生成所述捕获剂发射信号包括利用所述激发光照射所述捕获剂，以及利用所述光电检测器检测所述捕获剂发射光。

102.根据权利要求83所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

103.根据权利要求80所述的系统，其中通过所述流动通道的所述部分通过所述探询窗口输出所述激发光包括跨所述流动通道的所述管腔的横截面输出所述激发光。

104.根据权利要求80所述的系统，其中所述探询窗口内的所述流动通道的所述管腔限定相对于所述流动通道的相邻部分的收缩部。

105.根据权利要求83所述的系统，其中所述捕获剂不包括珠粒。

106.根据权利要求80所述的系统，其中所述可检测剂是第一可检测剂，所述第一可检测剂被配置为在所述第一可检测剂激发时发射第一波长范围内的第一发射光，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：将第二可检测剂与所述分析物缔合，所述第二可检测剂被配置为在所述第二可检测剂激发时发射第二波长范围内的第二发射光，并且其中所述第一发射波长范围不同于所述第二波长范围。

107.根据权利要求106所述的系统，其中所述第一可检测剂与所述分析物的第一部分缔合，并且其中所述第二可检测剂与所述分析物的不同于所述第一部分的第二部分缔合。

108.根据权利要求83所述的系统，其中所述纯化子系统控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：将所述分析物与缔合剂缔合，所述缔合剂被配置为与所述分析物特异性缔合，并且其中将所述分析物与所述可检测剂缔合包括将所述可检测剂与和所述分析物缔合的所述缔合剂缔合。

109.根据权利要求108所述的系统，其中所述纯化子系统控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述纯化子系统控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：在将所述样本中的所述分析物与所述可检测剂缔合之后，使所述样本与去除珠粒接触，所述去除珠粒被配置为与未与所述分析物缔合的任何可检测剂选择性地缔合；以及从所述样本中去除与未与所述分析物缔合的所述可检测剂缔合的所述去除珠粒。

110.根据权利要求109所述的系统，其中所述去除珠粒是磁性的。

111.根据权利要求80所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：使所述样本的多种分析物流过所述流动通道，所述多种分析物包括与可检测剂和捕获剂缔合的所述分析物。

112.根据权利要求111所述的系统，其中使所述多种分析物流过所述流动通道包括在分析物逐个与捕获剂和可检测剂缔合的基础上使所述多种与捕获剂和可检测剂缔合的分析物流过所述流动通道的收缩部。

113.根据权利要求111所述的系统，其中所述捕获剂被配置为在激发时发射捕获剂发射光，并且其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

114.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

115.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

116.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

117.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

118.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

119.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

120.根据权利要求113所述的系统，其中对分析物的所述数量进行定量包括单分子灵敏度或检测效率。

121.根据权利要求120所述的系统，其中对分析物的所述数量进行定量包括单分子灵敏度或检测效率而不扩增所述分析物。

122.根据权利要求120或121所述的系统，其中单分子灵敏度或检测效率包括检测流过所述流动通道的所述分子的超过99％、95％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％或50％。

123.根据权利要求120或121所述的系统，其中单分子检测效率包括检测流过所述流动通道的所述单分子的超过50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。

124.根据权利要求113所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：基于来自所述探询窗口的所述可检测剂发射光的存在或不存在来对所述流动通道中的所述分析物进行排序。

125.根据权利要求124所述的系统，其中所述排序对应于所述可检测剂发射信号和/或所述捕获剂发射信号。

126.根据权利要求125所述的系统，其中所述排序对应于所述捕获剂或所述可检测剂的测量的光散射光。

127.根据权利要求80所述的系统，其中

128.根据权利要求127所述的系统，其中所述检测器包括

129.根据权利要求128所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

130.根据权利要求80所述的系统，其中

131.根据权利要求130所述的系统，其中所述检测器包括

132.根据权利要求131所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

133.根据权利要求80所述的系统，所述系统还包括：

134.根据权利要求133所述的系统，其中

135.根据权利要求134所述的系统，其中所述控制器还包括逻辑，所述逻辑在由所述控制器执行时使得所述系统执行操作，所述操作包括：

136.根据权利要求134所述的系统，其中所述第一激发光具有在第一波长范围内的波长，并且其中所述第二激发光具有在不同于所述第一波长范围的第二波长范围内的波长。

137.根据权利要求134所述的系统，其中所述第一激发光具有在第一波长范围内的波长，并且其中所述第二激发光具有在与所述第一波长范围共同的第二波长范围内的波长。

138.根据权利要求134所述的系统，所述系统还包括：

139.根据权利要求133所述的系统，其中所述第一发射光纤的所述远侧端部被配置为将所述第一发射光发射到至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个或更多个光电检测器上。

140.根据权利要求138所述的系统，所述系统还包括带通滤波器，所述带通滤波器设置在所述分色镜与所述第三光电检测器之间，并且被配置为对第一发射光的所述部分进行滤波。

141.根据权利要求134所述的系统，其中所述第一光电检测器被配置为基于所述第一发射光的第一发射波长范围生成第一发射信号，并且其中所述第三光电检测器被配置为基于所述第一发射光的不同于所述第一发射波长范围的第三发射波长范围生成第三发射信号。

142.根据权利要求80所述的系统，其中所述流动通道设置在微流体设备的一部分中。

143.根据权利要求142所述的系统，其中所述微流体设备限定平面部分。

144.根据权利要求143所述的系统，其中所述探询窗口内的所述流动通道限定相对于所述流动通道的相邻部分的收缩部。

145.根据权利要求81所述的系统，其中使所述样本流过所述流动通道不包括鞘流聚焦、声流聚焦或它们的组合。

146.根据权利要求80所述的系统，所述系统还包括光收集系统，所述光收集系统被定位成收集通过所述探询窗口从所述流动通道的所述管腔接收的所述发射光，并将所收集的发射光引导到所述检测器系统上，所述光收集系统包括空气物镜，所述空气物镜具有在大于0.91并且小于0.99的范围内的数值孔径。

147.根据权利要求146所述的系统，其中所述空气物镜具有约0.95的数值孔径。

技术总结
描述了用于基于数字亲和力的检测测定的系统和方法。在实施方案中，该方法包括：将样本中的分析物，诸如单分子分析物，与可检测剂缔合；使包括与该可检测剂缔合的该分析物的该样本流过流动通道；通过该流动通道的一部分通过探询窗口输出激发光；以及基于从该流动通道的该部分接收的发射光，利用光电检测器生成发射信号。

技术研发人员：D·T·邱,赵孟夏,成元华
受保护的技术使用者：华盛顿大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23