大规模黄病毒疫苗生产和制造的制作方法

本发明提供了大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法。本文提供的方法专门考虑用于大规模生产和制造活的减毒黄病毒疫苗，诸如活的减毒登革病毒疫苗。此外，本文提供的方法涉及活的、减毒的、单价、二价、三价或四价的病毒疫苗产品的配制。

背景技术：

1、扩大疫苗制造能力对于阻止疾病的全球传播以及阻止病毒新变种的出现至关重要。疫苗生产和制造的最大挑战之一是经济地利用资源来满足向全球数十亿人日益增加的递送挑战。

2、黄病毒是持续对公众健康构成日益扩大的威胁的一类病毒。这些是媒介传播的rna病毒，这些病毒可能意外地出现在人类群体中并导致一系列潜在的严重疾病，包括肝炎、血管休克综合征、脑炎、急性弛缓性麻痹、先天性异常和胎儿死亡。这种流行病学模式已经在过去70年中出现过多次，包括登革病毒(dengue virus)和西尼罗河病毒(west nilevirus)的流行，以及最近在美洲爆发的寨卡病毒(zika virus)疫情。黄病毒现在遍布全球，和每年感染人数多达4亿。值得关注的问题，世界不同地区的人类和动物中已报告了其他特征不太明确的黄病毒的爆发。这些病毒在人类间持续流行传播的可能性知之甚少。因此，迫切需要更经济、更高效且更稳健的大规模生产和制造黄病毒的方法，所述方法可以可靠地提升制造能力并满足高需求。

3、在所有疫苗制造步骤中都观察到供给压力的早期迹象，例如用于感染第一生产培养物的工作毒种，或扩增病毒的生物反应器，或纯化病毒的色谱和过滤步骤，或包含疫苗组分的过滤器和小瓶。这些单独的挑战可能具有复合效应：单一输入的缺乏会扰乱整个制造过程。因此，迫切需要重新发明在每个步骤提供与日益增长的疫苗需求同步的经济定制过程的大规模疫苗生产和制造。

技术实现思路

1、本发明提供了一种大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法，其包括以下依序步骤：(i)收获，包括收集被黄病毒感染的细胞的上清液以获得收获物，(ii)加工步骤(i)中获得的所述收获物，(iii)对步骤(ii)所加工的收获物进行多于一个纯化步骤以获得原料药，其中在步骤(ii)添加缓冲赋形剂组合物，并且在步骤(ii)和(iii)中不再添加缓冲液或赋形剂。

2、本发明提供了一种大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法，其依序包括以下步骤：(i)收获，包括收集被黄病毒感染的细胞的所述上清液以获得收获物，(ii)加工步骤(i)中获得的所述收获物，包括以下步骤：(ii-a)澄清所述收获物以获得澄清的收获物，(ii-b)稳定所述收获物以获得稳定的收获物，(iii)对步骤(ii-b)的所述稳定的收获物进行多于一个纯化步骤以获得原料药，包括以下依序步骤：(iii-a)对步骤(ii-b)的所述稳定的收获物进行至少一个色谱步骤以获得纯化的收获物，(iii-b)直接对步骤(iii-a)的所述纯化的收获物进行至少一个超滤步骤以获得原料药，其中在步骤(ii)添加缓冲赋形剂组合物，并且在步骤(ii)和(iii)中不再添加缓冲液或赋形剂。

3、本发明提供了一种大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法，其依序包括以下步骤：(i)收获，包括收集被黄病毒感染的细胞的所述上清液以获得收获物，(ii)加工步骤(i)中获得的所述收获物，包括以下步骤：(ii-a)澄清所述收获物以获得澄清的收获物，(ii-b)稳定所述收获物以获得稳定的收获物，(iii)对步骤(ii-b)的所述稳定的收获物进行多于一个纯化步骤以获得原料药，包括以下依序步骤：(iii-a)对步骤(ii-b)的所述稳定的收获物进行至少一个色谱步骤以获得纯化的收获物，(iii-b)直接对步骤(iii-a)的所述纯化的收获物进行至少一个超滤步骤以获得原料药，其中在步骤(ii)添加缓冲赋形剂组合物，并且在步骤(ii)和(iii)中不再添加缓冲液或赋形剂并且其中所述缓冲赋形剂组合物是稳定缓冲液并且其中所述稳定缓冲液包含在磷酸盐缓冲盐水(pbs)中的糖、蛋白质和非离子表面活性剂。

4、本发明提供了一种大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法，其包括以下依序步骤：(i)收获，包括收集被黄病毒感染的细胞的上清液以获得收获物，(ii)加工步骤(i)中获得的所述收获物，(iii)对步骤(ii)所加工的收获物进行多于一个纯化步骤以获得原料药，其中步骤(i)至(iii)中的ph保持在7.6至8.1的范围，并且其中(a)在步骤(i)至(iii)中任何时间点出现的最大ph与(b)在步骤(i)至(iii)中任何时间点出现的最小ph之间的差不大于0.4或0.3个单位。

5、根据本发明，优选地，生产培养的总表面积在量级上可达到35,000 cm2或更大，例如50,000 cm2至1,000,000 cm2、100,000 cm2至1,000,000 cm2、50,000 cm2至450,000 cm2、100,000 cm2至450,000 cm2。

6、根据本发明，优选地黄病毒为登革病毒，优选地，登革病毒选自由活的、减毒登革-2病毒血清型、登革2/1嵌合体、登革2/3嵌合体和登革2/4嵌合体组成的组。

7、本发明还提供了一种大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法，其包括配制药品。所述药品优选包含四价登革病毒疫苗，所述四价登革病毒疫苗包含活的减毒登革-2病毒血清型、登革2/1嵌合体、登革2/3嵌合体和登革2/4嵌合体。

技术特征：

1.一种大规模黄病毒疫苗生产和制造方法，其包括以下依序步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其包括以下依序步骤：

3.如权利要求1或2所述的方法，其中在步骤(ii)添加的所述缓冲赋形剂组合物是稳定缓冲液。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中步骤(ii-b)包括将步骤(i)或(ii-a)中获得的所述收获物与所述稳定缓冲液混合以获得稳定的收获物。

5.如权利要求2至4中任一项所述的方法，其中步骤(iii-a)包括将步骤(ii-b)的所述稳定的收获物作为原料引入所述至少一个色谱步骤中以获得纯化的收获物。

6.如权利要求2至5中任一项所述的方法，其中步骤(iii-b)包括将步骤(iii-a)的所述纯化的收获物作为原料引入所述至少一个超滤步骤中以获得渗余物或所述原料药。

7.如权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述稳定的收获物、所述纯化的收获物和所述原料药包含所述稳定缓冲液。

8.如权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述至少一个色谱步骤是离子交换色谱法，优选阴离子交换色谱法。

9.如权利要求2至8中任一项所述的方法，其中所述至少一个超滤步骤是膜过滤步骤，优选切向流过滤。

10.如权利要求2至9中任一项所述的方法，其中在步骤(iii-a)之后获得流穿液。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述流穿液包含50 ng/ml或更少的宿主细胞dna。

12.如权利要求3至11中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液包含糖、表面活性剂和蛋白质，优选处于磷酸盐缓冲盐水(pbs)中。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述稳定缓冲液中糖的浓度为20%至60% (w/v)、25%至55% (w/v)、35%至50% (w/v)。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述稳定缓冲液中糖的浓度为35%至50% (w/v)。

15.如权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂的浓度为0.25%至5.0%。

16.如权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液中蛋白质的浓度为0.1%至0.5% (w/v)、0.2%至0.4% (w/v)、0.15%至0.3% (w/v)。

17.如权利要求16所述的方法，其中蛋白质的浓度为0.2%至0.4% (w/v)。

18.如权利要求12至17中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液包含35%至50% (w/v)的糖、0.25%至5.0%的所述表面活性剂和0.15%至0.3% (w/v)的蛋白质。

19.如权利要求12至18中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液中的所述糖选自由蔗糖、海藻糖和海藻糖二水合物组成的组，优选海藻糖二水合物。

20.如权利要求12至19中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液中的所述表面活性剂是选自由f127、f68、p123或p85组成的组，优选f127的非离子表面活性剂。

21.如权利要求12至20中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液中的所述蛋白质选自由白蛋白、胶原蛋白、水解胶原蛋白、明胶和水解明胶组成的组，优选白蛋白。

22.如权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述稳定缓冲液包含35%至50% (w/v)的海藻糖二水合物、0.25%至5%的f127和0.15%至0.3% (w/v)的人血清白蛋白。

23.如权利要求2至22中任一项所述的方法，其中所述稳定的收获物包含1.4%至4% (w/v)、1.8%至3.9% (w/v)、2.5%至3.6% (w/v)或3% (w/v)的糖。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述稳定的收获物包含0.01%至0.4%的表面活性剂。

25.如权利要求23至24所述的方法，其中所述稳定的收获物包含0.007%至0.04% (w/v)、0.01%至0.03% (w/v)或0.01%至0.075% (w/v)的人血清白蛋白。

26.如权利要求23至25中任一项所述的方法，其中所述稳定的收获物包含1.4%至4%(w/v)的糖、0.01%至0.4%的表面活性剂和0.007%至0.04%的人血清白蛋白。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述稳定的收获物和所述纯化的收获物包含1.4%至4% (w/v)的糖、0.01%至0.4%的表面活性剂和0.007%至0.04%的人血清白蛋白。

28.如权利要求23、26-27中任一项所述的方法，其中所述糖是选自由蔗糖、海藻糖和海藻糖二水合物组成的组，优选海藻糖二水合物的非还原糖。

29.如权利要求24至27中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是选自由f127、f68、p123或p85组成的组，优选f127的非离子表面活性剂。

30.如权利要求2至29中任一项所述的方法，其中所述原料药是在步骤(iii-b)之后获得的所述渗余物。

31.如权利要求3至30中任一项所述的方法，其中所述原料药包含所述稳定缓冲液。

32.如权利要求2至31中任一项所述的方法，其还包括加工所述原料药的步骤(iv)，优选包括：

33.如权利要求32所述的方法，其中所述包含缓冲液冲洗液和原料药的组合物是散装原料药。

34.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(i)至(iv)在同一天进行以获得所述散装原料药。

35.如权利要求32至34中任一项所述的方法，其中所述散装原料药包含所述稳定缓冲液。

36.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中所述原料药和所述散装原料药包含10%至25% (w/v)的糖、0.5%至5.0%的表面活性剂和0.045%至0.15% (w/v)的人血清白蛋白。

37.如权利要求36所述的方法，其中所述糖是选自由蔗糖、海藻糖和海藻糖二水合物组成的组，优选海藻糖二水合物的非还原糖。

38.如权利要求36-37中任一项所述的方法，其中所述表面活性剂是选自由f127、f68、p123和p85组成的组，优选f127的非离子表面活性剂。

39.如权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述散装原料药是引入所述超滤步骤中的所述原料的1/2至1/10 (以体积计)。

40.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与在步骤(ii)和(iii)期间添加多于一种缓冲液或多于一种缓冲赋形剂组合物的方法相比，黄病毒滴度提高。

41.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中收获包括第一收获步骤和任选地至少一个进一步收获步骤。

42.如权利要求41所述的方法，其中收集所述上清液后紧接着添加新鲜培养基。

43.如权利要求41至42中任一项所述的方法，其中在所述第一收获步骤前12-30小时，进行培养基更换。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述培养基更换包括丢弃所述上清液并添加新鲜培养基。

45.如权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述第一收获步骤在感染后第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天或第10天进行。

46.如权利要求41-45中任一项所述的方法，其中所述至少一个进一步收获步骤包括多达九个，优选五个进一步收获步骤。

47.如权利要求46所述的方法，其中每个收获步骤之间的间隔为至少20至30小时。

48.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞是贴壁细胞。

49.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞包含丰富的黄病毒受体。

50.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞包含丰富的登革病毒受体。

51.如权利要求48所述的方法，其中所述细胞选自由madin-darby犬肾细胞、猴细胞系pmk、vero细胞及人细胞系hek 293、mrc 5、per.c6、pmk和wi-38组成的组。

52.如权利要求51所述的方法，其中所述细胞为vero细胞。

53.如权利要求1至52中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：登革血清型1 (denv-1)诸如登革2/1嵌合体、登革血清型2 (denv-2)、登革血清型3 (denv-3)诸如登革2/3嵌合体和登革血清型4 (denv-4)诸如登革2/4嵌合体。

54.如权利要求1至53中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：由seq id no: 1和/或2表示的tdv-1、由seq id no: 3和/或4表示的tdv-2、由seq id no: 5和/或6表示的tdv-3和由seq id no: 7和/或8表示的tdv-4。

55.如权利要求32至52中任一项所述的方法，其还包括步骤(v)加工所述散装原料药，包括：

56.如权利要求55所述的方法，其包括储存从步骤(v-b)获得的所述冷冻散装原料药的步骤(vi)，优选其中步骤(vi)与步骤(v-a)和(v-b)在同一天进行。

57.如权利要求55或56所述的方法，其中所述方法涉及至少一种进一步收获物并且其中，对于每种收获物重复步骤(i)至(v-b)以获得多于一种的冷冻散装原料药，优选多达十种冷冻散装原料药，更优选六种冷冻散装原料药。

58.如权利要求55至57中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：登革血清型3 (denv-3)诸如登革2/3嵌合体和登革血清型4 (denv-4)诸如登革2/4嵌合体。

59.如权利要求55至58中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：由seq id no: 5和/或6表示的tdv-3和由seq id no: 7和/或8表示的tdv-4。

60.如权利要求32至59中任一项所述的方法，其还包括步骤(v)加工所述散装原料药，包括：

61.如权利要求60所述的方法，其包括储存从步骤(v-e)获得的所述冷冻散装原料药的步骤(vi)，优选其中步骤(vi)与步骤(v-a)至(v-e)在同一天进行。

62.如权利要求60至61所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：登革血清型1 (denv-1)诸如登革2/1嵌合体和登革血清型2 (denv-2)。

63.如权利要求60至62中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：由seq id no: 1和/或2表示的tdv-1、由seq id no: 3和/或4表示的tdv-2。

64.如前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括步骤(vii)，包括配制药品。

65.如权利要求64所述的方法，其中包括配制药品的步骤(vii)包括以下依序步骤：

66.如权利要求65所述的方法，其中所述配制缓冲液包含第一赋形剂缓冲液(feb)和第二赋形剂缓冲液(seb)。

67.如权利要求66所述的方法，其中所述feb和所述seb各自包含四种盐、糖、非离子表面活性剂和蛋白质。

68.如权利要求65-67中任一项所述的方法，其中步骤(vii-a)包括解冻两份、三份或四份散装原料药，所述散装原料药各自包含选自由活的减毒登革病毒组成的组的不同登革血清型，所述活的减毒登革病毒选自由以下组成的组：登革血清型1 (denv-1)诸如登革2/1嵌合体、登革血清型2 (denv-2)、登革血清型3 (denv-3)诸如登革2/3嵌合体、登革血清型4(denv-4)诸如登革2/4嵌合体。

69.如权利要求65至68中任一项所述的方法，其中步骤(vii-a)包括解冻两份、三份或四份散装原料药，所述散装原料药各自包含选自由以下组成的组的不同登革血清型：由seqid no: 1和/或2表示的tdv-1、由seq id no: 3和/或4表示的tdv-2、由seq id no: 5和/或6表示的tdv-3和由seq id no: 7和/或8表示的tdv-4。

70.如权利要求69所述的方法，其中所述黄病毒疫苗为二价、三价或四价，优选其中所述黄病毒疫苗为四价登革疫苗tak-003。

71.如权利要求53至70中任一项所述的方法，其中所述活的减毒登革-2病毒血清型是denv-2 16681来源的den-2 pdk-53变体形式，所述den-2 pdk-53变体形式在ns1-53、5’ncr-57和ns3-250处具有三重突变，使得ns3蛋白的氨酸酸位置250含有缬氨酸残基，并且其中所述嵌合体具有作为病毒骨架的所述den-2 pdk-53基因组且所述den-2 pdk-53基因组的编码衣壳、前膜/膜或包膜的一个或多个结构蛋白基因或其组合被来自den-1、den-3或den-4的一个或多个相应结构蛋白基因置换。

72.如权利要求53至71中任一项所述的方法，其中所述登革2/1嵌合体具有两个另外的突变，使得ns2a蛋白的氨基酸位置116含有亮氨酸残基并且ns2b蛋白的氨基酸位置92含有天冬氨酸残基，其中所述活的减毒登革-2病毒血清型具有两个另外的突变，使得prm蛋白的氨基酸位置52含有谷氨酸残基并且ns5蛋白的氨基酸位置412含有缬氨酸残基，其中所述登革-2/3嵌合体具有作为病毒骨架的所述den-2 pdk-53基因组并且所述den-2 pdk-53基因组的prm-e基因(核苷酸457至2373)被来自野生型den-3 16562的相应prm-e基因置换，并且其中所述登革-2/3嵌合体在来自野生型den-3 16562的所述相应prm-e基因处具有一个另外的突变，使得e蛋白的氨基酸位置223含有丝氨酸残基，并且其中所述登革-2/4嵌合体具有两个另外的突变，使得所述ns2a蛋白的氨基酸位置66含有甘氨酸残基并且所述ns4a蛋白的氨基酸位置21含有缬氨酸残基，并且其中所述登革-2/4嵌合体就所述ns2a蛋白的氨基酸位置99含有精氨酸或赖氨酸残基而言为混合基因型。

73.如权利要求53至472中任一项所述的方法，其中所述登革-2/1嵌合体具有作为病毒骨架的所述den-2 pdk-53基因组并且所述den-2 pdk-53基因组的prm-e基因(核苷酸457至2379)被来自野生型den-1 16007的相应prm-e基因置换，其中所述登革-2/3嵌合体具有作为病毒骨架的所述den-2 pdk-53基因组并且所述den-2 pdk-53基因组的prm-e基因(核苷酸457至2373)被来自野生型den-3 16562的相应prm-e基因置换，并且其中所述登革-2/4嵌合体具有作为病毒骨架的所述den-2 pdk-53基因组并且所述den-2 pdk-53的prm-e基因(核苷酸457至2379)被来自野生型den-4 1036的相应prm-e基因置换。

74.如权利要求53至73中任一项所述的方法，其中所述活的减毒登革-2病毒血清型由seq id no: 3的多核苷酸或seq id no: 4的多肽表示；所述登革2/1嵌合体具有来自修饰的活的减毒登革-2病毒血清型的非结构蛋白和由seq id no: 1的多核苷酸或seq id no:2的多肽表示的登革-1病毒血清型的结构蛋白；所述登革2/1嵌合体具有来自修饰的活的减毒登革-2病毒血清型的非结构蛋白和由seq id no: 5的多核苷酸或seq id no: 6的多肽表示的登革-3病毒血清型的结构蛋白；并且所述登革2/4嵌合体具有来自修饰的活的减毒登革-2病毒血清型的非结构蛋白和由seq id no: 7的多核苷酸或seq id no: 8的多肽表示的登革-4病毒血清型的结构蛋白。

75.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法提供高病毒滴度。

76.如权利要求75所述的方法，其中所述高病毒滴度是大于7.0 log10 pfu/ml，优选大于7.5log10 pfu/ml的滴度。

77.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中大规模包括表面积为35,000 cm2或更大的生产培养物。

78.如权利要求77所述的方法，其中大规模包括表面积为50,000 cm2或更大的生产培养物。

79.如权利要求77或78所述的方法，其中大规模包括表面积为100,000 cm2或更大的生产培养物。

80.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(i)至(iii)中的ph保持在7.6至8.1的范围，并且其中

81.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(i)至(iv)中的ph保持在7.6至8.1的范围，并且其中

82.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(i)至(v)中的ph保持在7.6至8.1的范围，并且其中

83.一种大规模黄病毒疫苗生产和制造方法，其包括以下依序步骤：

84.如权利要求80所述的方法，其中权利要求80 (a)与80(b)之间的差不大于0.3个单位。

85.如权利要求81所述的方法，其中权利要求81 (a)与81(b)之间的差不大于0.3个单位。

86.如权利要求82所述的方法，其中权利要求82 (a)与82(b)之间的差不大于0.3个单位。

87.如权利要求83所述的方法，其中权利要求83(a)与83(b)之间的差不大于0.3个单位。

88.如权利要求80所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求80(a)与权利要求80 (b)之间的差大于0.4个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

89.如权利要求81所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求81(a)与权利要求81 (b)之间的差大于0.4个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

90.如权利要求82所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求82(a)与权利要求82 (b)之间的差大于0.4个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

91.如权利要求83所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求83(a)与权利要求83(b)之间的差大于0.4个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

92.如权利要求84中任一项所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求84 (a)与权利要求84 (b)之间的差大于0.3个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

93.如权利要求85所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求85(a)与权利要求85 (b)之间的差大于0.3个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

94.如权利要求86所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求86(a)与权利要求86 (b)之间的差大于0.3个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

95.如权利要求87所述的方法，其中所述方法与具有相同工艺步骤但允许权利要求87(a)与权利要求87(b)之间的差大于0.3个单位的相同方法相比，产生更高的病毒产量。

96.如权利要求88至95中任一项所述的方法，其中病毒产量的增加为至少约1 mg/cm2，诸如1.5 mg/cm2。

97.如权利要求1至82中任一项所述的方法，其中所述方法与包括相同工艺步骤但其中在步骤(ii)和(iii)期间添加多于一种缓冲液或多于一种缓冲赋形剂组合物的相同方法相比，提供更高的病毒滴度。

98.如权利要求83至97中任一项所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：登革血清型1 (denv-1)诸如登革2/1嵌合体、登革血清型2 (denv-2)、登革血清型3 (denv-3)诸如登革2/3嵌合体和登革血清型4 (denv-4)诸如登革2/4嵌合体。

99.如权利要求53、68或98所述的方法，其中所述黄病毒是选自由以下组成的组的活的减毒登革病毒：登革2/1嵌合体、登革血清型2、登革2/3嵌合体和登革2/4嵌合体。

100.通过根据前述权利要求中任一项所述的方法获得的病毒组合物。

101.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述黄病毒疫苗是活的减毒四价登革疫苗，优选tak-003。

102.一种药物包装，其包含通过根据前述权利要求中任一项所述的方法获得的病毒疫苗。

技术总结
本发明提供了大规模黄病毒疫苗生产和制造的方法。本文提供的方法专门考虑用于大规模生产和制造活的减毒黄病毒疫苗，诸如活的减毒登革病毒疫苗。此外，本文提供的方法涉及活的、减毒的、单价、二价、三价或四价的病毒疫苗产品的配制。

技术研发人员：G·邱,J·V·洛,J·A·利文戈德,J·D·桑坦格洛,K·L·西亚,W·罗,Y·李
受保护的技术使用者：武田疫苗股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23