一种泊马度胺类饲料添加剂及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于饲料添加剂的合成技术领域，具体涉及一种泊马度胺类饲料添加剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.免疫调节剂能够增加t淋巴细胞il-2的产生，减少促炎性细胞因子的产生，这些作用在肿瘤治疗方面有重要的应用。泊马度胺，化学名称为(rs)-4-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮，为口服小分子衍生物，是新上市的第三代免疫调节剂，由美国celgene公司研发制成，是在第一代imid沙利度胺化学结构基础上修饰合成的药物，可增强t细胞和自然杀伤细胞介导的免疫反应、抑制单核细胞促炎性细胞因子的生成、诱导肿瘤细胞凋亡，在各类恶性肿瘤、免疫性疾病的治疗中受到广泛关注。是沙利度胺衍生物中应用非常广泛的一个。与沙利度按相比，泊马度胺苯环上连接的氨基使得自身化学性质更加稳定，且比沙利度胺具有更强的免疫调节作用。并且在临床应用方面，泊马度胺比沙利度胺的安全性更高，不良反应更少，它几乎没有致畸性和神经毒性，对多种血液病和实体恶性肿瘤都有作用。
3.1,2,3-三氮唑结构是一类非常重要的含氮杂环化合物，由3个氮原子和2个碳原子构建的五元杂环，分子式为c2n3h3。1,2,3-三氮唑具有特殊的平面刚性结构，使其拥有较强的嵌入dna的能力，同时具有大偶极矩，能够与不同生物靶点形成疏水、氢键、范德华力和偶极-偶极键等多种非共价相互作用力，另外，1,2,3-三氮唑的结构特征允许其作为酰胺，酯，羧酸，烯烃刚性类似物等的电子等价取代物，因此具有广谱的生物活性，常作为重要的分子砌块用于活性化合物的合成，如制备抗菌、抗疟、抗真菌、抗病毒、抗结核和抗癌活性化合物等。多种临床药物和活性分子经1,2,3-三氮唑修饰改造后增强的原有的生物活性或获得新的生物活性，例如在hiv整合酶抑制剂药物度鲁特韦母核结构上引入端基炔，与2-三氟甲基苯基叠氮反应得到化合物dthp，对多种肺癌细胞有良好的抑制活性，特别是针对h1975细胞，能够引起该细胞发生凋亡和增强ros水平，小鼠体内实验抑制肿瘤效果也非常显著；利用egfr抑制剂埃克替尼具有端基炔的结构特性，与3-氯苯基叠氮反应得到化合物a7，该化合物可以同时对突变型肺癌细胞(pc-9)和野生型肺癌细胞(h460和a549)都有良好的抑制效果，优于埃克替尼；有课题组在萘醌类化合物结构上引入1,2,3-三氮唑得到化合物7a，通过对拓扑异构酶i和iiα进行阻断，进而对caco-2细胞具有抑制效果(ic
50
＝23.92μm)，并表现出一定的选择性；有课题组设计了含有1,2,3-三氮唑的吲哚2-酮衍生物，其中化合物13b对vegfr-2激酶具有良好的抑制效果(ic50＝26.38nm)，并对多种肿瘤细胞也具有抑制作用。
[0004][0005]
鉴于在药物分子基团上引入苯基-1,2,3-三氮唑后有如此显著的效果，为寻找更加新型高效的抗肿瘤药物，我们对泊马度胺进行修饰改造，在其结构上引入苯基-1,2,3-三氮唑基团，希望能够提高和扩展泊马度胺的应用。


技术实现要素：

[0006]
本发明解决的技术问题是提供了一种结构新颖泊马度胺衍生物的制备方法。
[0007]
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种泊马度胺衍生物的制备方法，其特征在于具体步骤为：
[0008]
1、将一定量的2-硝基苯甲酸加入二氯亚砜里面，在氮气保护下搅拌一段时间后真空浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷溶解，然后在搅拌状态下缓慢滴加溶有2-氨基-1,5-戊二酸二甲酯盐酸盐的二氯甲烷溶液，滴加完全后继续搅拌反应一段时间后浓缩反应体系，加入n,n-二甲基甲酰中，完全溶解后在氮气保护下加入一定量的叔丁基锂，氢氧化钡，碳酸铯和乙酸钯，保持氮气氛围，转移至高压反应釜中，高压釜内全程氮气保护，然后室温搅拌一段时间用二氧化碳置换釜内气体，然后通入二氧化碳，使釜内压力达到一定数值，缓慢加热至一定温度，反应一段时间后真空排除二氧化碳，同时降温至一定温度，然后通入氨气，使釜内压力达到一定数值，保持温度和压力搅拌反应一段时间，降至室温，把反应体系然后加入水和二氯甲烷，搅拌后过滤反应液，分出有机相，水相用二氯甲烷洗涤多次，然后分出有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮。
[0009]
2、将一定量的2-硝基苯甲酸甲酯和碳酸钙加入二氯乙烷溶液中，搅拌后再缓慢滴加溶有一定量氯化碘的二氯乙烷溶液，滴加完后在室温条件下搅拌一段时间后冷却过滤反应液，再加入无水硫酸镁，搅拌一段时间过滤，滤液再加入一定量的3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐和三乙胺和dcc，在室温条件下搅拌反应一段时间，浓缩后用乙醚洗涤浓缩物多次，然后加入甲苯中，再加入一定量的三苯基膦和碘单质，搅拌均匀后再加入醋酸钯和三乙胺，氮气保护下搅拌一段时间后加入无水甲酸，保持氮气氛围，加热至70℃，反应结束后，过滤反应液，加入水搅拌后用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮。
[0010]
3、将一定量的2-硝基苯甲酸加入二氯亚砜里面，在氮气保护下搅拌一段时间后真空浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷溶解，然后在搅拌状态下缓慢滴加溶有2-氨基戊二酸
二甲酯盐酸盐的二氯甲烷溶液，滴加完全后继续搅拌反应一段时间，向反应体系中加入饱和的氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，加入高压反应釜中，在向反应釜内加入一定量的edci和1-羟基苯并三唑和三乙胺，通过真空排除反应釜内的空气，向反应釜内通入氨气，使釜内的压力达到0.5mpa，加热至50℃，反应结束后过滤反应液，然后用醋酸调节反应体系为中性，加入水，搅拌后分出有机相，浓缩后得到n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺。
[0011]
4、在高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到压力1，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后降温至40℃，再次用真空排除反应体系中的气体，向反应釜内通入氢气，使反应釜内的压力达到压力2，保持温度搅拌反应，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，干燥后经浓缩再经硅胶柱层析分离得到泊马度胺。
[0012]
5、在高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，浓缩后加入甲醇中，再加入一定量含量为10％的钯碳，在氮气保护条件下，缓慢滴加水合肼，滴加过程中保持反应温度为室温，滴加完毕后继续反应7.5h，抽滤反应液除去催化剂钯碳，浓缩后经硅胶柱层析分离得到泊马度胺。
[0013]
5、在带有搅拌的高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，浓缩后加入到乙醇和水的混合液中，再加入还原铁粉，滴加醋酸后加热至一定温度，反应结束后过滤反应液，滤液经减压蒸馏蒸出乙醇和水，向残余物中加入丙酮和苯进行重结晶，抽滤固体，滤饼烘干后得到泊马度胺。
[0014]
6、把一定量的泊马度胺加入盐酸，搅拌后加入一定量的亚硝酸钠，保持0℃条件，加入溶有叠氮化钠的水溶液，继续搅拌一段时间向反应体系中加入二氯甲烷，搅拌后分出有机相，水相再用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后得到泊马度胺-叠氮化合物。
[0015]
7、将一定量的泊马度胺-叠氮化合物和胺基炔化合物加入到蒸馏水、四氢呋喃和叔丁醇的混合溶剂，再加入无水硫酸铜，试剂级抗坏血酸钠，氮气保护，加热至80℃，回流反应至原料反应完全，然后向反应体系中缓慢滴加溶有苯甲酰氯化合物的二氯甲烷溶液，滴加完后搅拌一段时间加入饱和的氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，有机相浓缩后得到产品。
附图说明
[0016]
图1是实施例1制备得到的目标化合物的核磁氢谱图。
[0017]
图2是实施例9制备得到的目标化合物的核磁氢谱图。
[0018]
图3是实施例10制备得到的目标化合物的核磁氢谱图。
具体实施方式
[0019]
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
[0020]
实施例1
[0021][0022]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将2-硝基苯甲酸1.7g加入二氯亚砜50ml里面，在氮气保护下搅拌1h，然后真空浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷100ml溶解，然后在0℃条件下缓慢滴加溶有2-氨基-1,5-戊二酸二甲酯盐酸盐2.3g的二氯甲烷溶液50ml，滴加完后升至室温搅拌2.5h，真空浓缩反应体系，浓缩物加入n,n-二甲基甲酰胺200ml中搅拌，完全溶解后在氮气保护下加入叔丁基锂1.28g，氢氧化钡3.4g，碳酸铯6.5g和乙酸钯0.45g，保持氮气氛围，转移至高压反应釜中，高压釜内全程氮气保护，然后室温搅拌30min，用二氧化碳置换釜内气体，然后通入二氧化碳，使釜内压力达到0.2mpa，缓慢加热至120℃，反应15h后真空排除二氧化碳，同时降温至70℃，然后通入氨气，使釜内压力达到0.15mpa，保持温度和压力搅拌反应7h，降至室温，把反应体系然后加入水200ml和二氯甲烷100ml，搅拌后过滤反应液，分出有机相，水相用二氯甲烷50ml洗涤多次，然后分出有机相，经无水硫酸钠干燥后，真空浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮2.57g，1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),8.32(d,j＝8.0hz,1h),8.20(d,j＝4.0hz,1h),8.08(t,j1＝8.0hz,j2＝4.0hz,1h),5.16(dd,j1＝4.0hz,j2＝4.0hz,1h),2.89-2.81(m,1h),2.60-2.48(m,2h),2.06-2.01(m,1h)。
[0023]
实施例2
[0024][0025]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将2-硝基苯甲酸甲酯1.8g和碳酸钙3g加入二氯乙烷100ml溶液中，搅拌后再缓慢滴加溶有氯化碘1.7g的二氯乙烷溶液70ml，滴加完后在室温条件下搅拌4.0h，然后冷却过滤反应液，再加入无水硫酸镁10g，搅拌30min过滤，滤液再加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐1.7g和三乙胺1g和dcc试剂2g和二氯乙烷50ml，在室温条件下搅拌反应12.5h，真空浓缩后用乙醚50ml洗涤浓缩物多次，然后浓缩物中加入甲苯120ml搅拌溶解，再加入三苯基膦2.6g和碘单质3g，搅拌均匀后再加入醋酸钯0.23g和三乙胺1g，氮气保护下搅拌30min，然后加入无水甲酸1.5g和甲苯20ml，保持氮气氛围，加热至70℃，反应5h，停止反应，过滤反应液，滤液加入水200ml，搅拌后用二氯甲烷80ml萃取5次，合并有机相，有机相经真空浓缩后得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮
2.79g，1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.15(s,1h),8.32(d,j＝8.0hz,1h),8.20(d,j＝4.0hz,1h),8.08(t,j1＝8.0hz,j2＝4.0hz,1h),5.16(dd,j1＝4.0hz,j2＝4.0hz,1h),2.89-2.81(m,1h),2.60-2.48(m,2h),2.06-2.01(m,1h)。
[0026]
实施例3
[0027][0028]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将2-硝基苯甲酸17g加入二氯亚砜200ml里面，在氮气保护下搅拌1h，然后真空加热浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷300ml搅拌溶解，然后在搅拌状态下缓慢滴加溶有2-氨基-1,5-戊二酸二甲酯盐酸盐23g的二氯甲烷溶液450ml，滴加完全后继续搅拌反应2.5h，向反应体系中加入饱和的氯化钠溶液300ml，搅拌后分出有机相，再加入无水硫酸镁20g，搅拌30min后过滤，滤液加入高压反应釜中，在向反应釜内加入edci 19g和1-羟基苯并三唑13.5g和三乙胺20g，再加入n,n-二甲基甲酰胺100ml，通过真空排除反应釜内的空气，向反应釜内通入氨气，使釜内的压力达到0.5mpa，加热至50℃，反应5h，停止反应，过滤反应液，然后用醋酸调节反应体系为中性，加入水300ml，搅拌后分出有机相，有机相经真空浓缩后得到n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺23.6g，ms(esi
+
)m/z：278[m+h]
+
。
[0029]
实施例4
[0030][0031]
在带有搅拌的高压反应釜中，把n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺2.8g和碳酸铯4g和醋酸钯0.23g加入到n,n-二甲基甲酰胺150ml中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠1.2g的n,n-二甲基甲酰胺溶液50ml，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应7h，然后降温至40℃，再次用真空排除反应体系中的气体，向反应釜内通入氢气，使反应釜内的压力达到2mpa，保持温度搅拌反应10h，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水1000ml中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6～7，然后用二氯甲烷300ml萃取反应体系多次，合并有机相，干燥后经浓缩再经硅胶柱层析分离得到泊马度胺2.52g。
[0032]
实施例5
[0033][0034]
在带有搅拌的高压反应釜中，把n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺2.8g和碳酸铯4g和醋酸钯0.23g加入到n,n-二甲基甲酰胺150ml中，氮气保护反应体系，搅拌后快速
加入溶有叔丁醇钠1.2g的n,n-二甲基甲酰胺溶液50ml，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应7h，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水300ml中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6～7，然后用二氯甲烷100ml萃取反应体系多次，合并有机相，真空浓缩后加入甲醇150ml中，再加入含量为10％的钯碳0.28g，在氮气保护条件下，缓慢滴加水合肼5g，滴加过程中保持反应温度在室温，滴加完毕后继续反应7.5h，抽滤反应液除去催化剂钯碳，真空浓缩体系后将浓缩物经硅胶柱层析分离得到泊马度胺2.19g。
[0035]
实施例6
[0036][0037]
在带有搅拌的高压反应釜中，把n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺2.8g和碳酸铯4g和醋酸钯0.23g加入到n,n-二甲基甲酰胺150ml中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠1.2g的n,n-二甲基甲酰胺溶液50ml，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应7h，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水300ml中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6～7，然后用二氯甲烷100ml萃取反应体系多次，合并有机相，浓缩后加入到乙醇100ml和水50ml的混合液中，再加入还原铁粉0.6g，滴加醋酸5ml后加热至100℃，反应结束后过滤反应液，滤液经真空减压蒸馏蒸出乙醇和水，向残余物中加入丙酮50ml和苯30ml进行加热搅拌冷却重结晶，抽滤固体，滤饼烘干后得到泊马度胺2.31g。
[0038]
实施例7
[0039][0040]
在带有搅拌的反应瓶中，把泊马度胺3g加入盐酸100ml，搅拌后加入亚硝酸钠0.9g，搅拌30min，保持0℃条件，加入溶有叠氮化钠0.8g的水溶液50ml，继续搅拌4h，向反应体系中加入二氯甲烷100ml，搅拌后分出有机相，水相再用二氯甲烷50ml萃取多次，合并有机相，浓缩后得到泊马度胺-叠氮化合物2.87g。
[0041]
实施例8
[0042][0043]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将泊马度胺-叠氮化合物3g和厄洛替尼4.7g加入到蒸馏水、四氢呋喃和叔丁醇的混合溶剂150ml中(三者体积比为1：1：1)，再加入碘化亚铜0.19g，氮气保护，加热至80℃，回流反应15h，tlc监控原料反应完全，过滤反应体系，然用二氯甲烷50ml萃取反应体系多次，合并有机相后弄无水硫酸镁干燥，最后有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到产品5.91g，ms(esi
+
)m/z：693[m+h]
+
。
[0044]
实施例9
[0045][0046]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将泊马度胺-叠氮化合物3g和n-丁炔基-对甲氧基苯甲酰胺2.23g加入到蒸馏水、四氢呋喃和叔丁醇的混合溶剂100ml中(三者体积比为1：1：1)，再加入碘化亚铜0.19g，氮气保护，加热至80℃，回流反应11h，tlc监控原料反应完全，用二氯甲烷50ml萃取反应体系多次，合并有机相后弄无水硫酸镁干燥，最后有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到产品4.07g，1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.13(s,1h),8.59(s,1h),8.48(t,j1＝4.0hz,j2＝8.0hz,1h),8.18(t,j1＝4.0hz,j2＝4.0hz,1h),8.09(d,j＝4.0hz,2h),7.83(d,j＝8.0hz,2h),6.98(d,j＝8.0hz,2h),5.17(dd,j1＝4.0hz,j2＝8.0hz,1h),3.81(s,3h),3.60(dd,j1＝8.0hz,j2＝8.0hz,2h),3.03(t,j1＝8.0hz,j2＝4.0hz,2h),2.93-2.84(m,1h),2.64-2.59(m,1h),2.59(s,2h)。
[0047]
实施例10
[0048][0049]
在带有搅拌装置的反应瓶中，将泊马度胺-叠氮化合物3g和n-丙炔基-对甲氧基苯甲酰胺2.1g加入到蒸馏水、四氢呋喃和叔丁醇的混合溶剂100ml中(三者体积比为1：1：1)，再加入碘化亚铜0.19g，氮气保护，加热至80℃，回流反应8.5h，tlc监控原料反应完全，用二氯甲烷50ml萃取反应体系多次，合并有机相后弄无水硫酸镁干燥，最后有机相浓缩后经硅胶柱层析分离得到产品4.42g，1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.12(s,1h),8.99(t,j＝5.6hz,1h),8.65(s,1h),8.25
–
8.14(m,1h),8.08(d,j＝4.9hz,2h),7.88(d,j＝8.8hz,2h),7.00(d,j＝8.8hz,2h),5.17(dd,j＝12.8,5.4hz,1h),4.64(d,j＝5.7hz,2h),3.81(s,3h),2.89(d,j＝36.3hz,1h),2.61(d,j＝17.7hz,1h),2.07(d,j＝17.7hz,1h),1.29(d,j＝35.5hz,1h)。
[0050]
实施例11
[0051]
我们对所得到的3个目标化合物进行体外脲酶抑制实验：选择12个月左右的黄牛，经过饲喂1h后，用特制瘤胃液采集器经人工瘤胃瘘管采集瘤胃液400ml，通过4层纱布过滤后备用。每个培养管按下表中的量加入相应的试剂后，滴加4滴液体石蜡，置(39.0
±
0.5)℃恒温水浴振荡器上轻摇。分别培养8h，从各组取出部分培养管，立即加入4滴饱和氯化汞溶液并摇匀，以终止反应。用凯氏半微量-饱和氧化镁蒸馏法测定各管氨态氮含量。我们可以发现所设计的得到的3种化合物随着时间的延长对脲酶的抑制活性越来越显著，具有非常显著的抑制作用；并且通过cck8实验，对人肾上皮细胞系293t细胞ic
50
值分别为40.19μm，》100μm，》100μm。
[0052][0053][0054]
抑制率(％)＝(对照组氨含量-试验组氨含量)
÷
对照组氨含量
×
100％
[0055]
编号时间(h)对照组抑制率试验1组抑制率试验2组抑制率
实施例8产物80％36.03％57.16％实施例9产物80％34.14％53.88％实施例10产物80％28.99％49.01％
[0056]
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。

技术特征：
1.一种泊马度胺类饲料添加剂及其制备方法和应用，其特征在于该泊马度胺类饲料添加剂的结构为：其中n为1或者2；r为烷基或卤素或甲氧基或2.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂，其特征在于其制备方法的具体过程为：将一定量的2-硝基苯甲酸加入二氯亚砜里面，在氮气保护下搅拌一段时间后真空浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷溶解，然后在搅拌状态下缓慢滴加溶有2-氨基戊二酸二甲酯盐酸盐的二氯甲烷溶液，滴加完全后继续搅拌反应一段时间后浓缩反应体系，加入n,n-二甲基甲酰中，完全溶解后在氮气保护下加入一定量的叔丁基锂，氢氧化钡，碳酸铯和乙酸钯，保持氮气氛围，转移至高压反应釜中，高压釜内全程氮气保护，然后室温搅拌一段时间用二氧化碳置换釜内气体，然后通入二氧化碳，使釜内压力达到一定数值，缓慢加热至一定温度，反应一段时间后真空排除二氧化碳，同时降温至一定温度，然后通入氨气，使釜内压力达到一定数值，保持温度和压力搅拌反应一段时间，降至室温，把反应体系然后加入水和二氯甲烷，搅拌后过滤反应液，分出有机相，水相用二氯甲烷洗涤多次，然后分出有机相，浓缩后经硅胶柱层析分离提纯得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮；所述的2-硝基苯甲酸与2-氨基戊二酸二甲酯盐酸盐的投料量摩尔比为1：1～1.1；所述的2-硝基苯甲酸与叔丁基锂与氢氧化钡与碳酸铯与乙酸钯的投料量摩尔比为1：2：2：2：0.2；所述的二氧化碳反应体系压力为0.15～0.2mpa；所述的二氧化碳反应体系温度为100～120℃；所述的氨气反应体系压力为0.1～0.15mpa；所述的氨气反应体系温度为60～70℃。3.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂，其特征在于其制备方法的具体过程为：将一定量的2-硝基苯甲酸甲酯和碳酸钙加入二氯乙烷溶液中，搅拌后再缓慢滴加溶有一定量氯化碘的二氯乙烷溶液，滴加完后在室温条件下搅拌一段时间后冷却过滤反应液，再加入无水硫酸镁，搅拌一段时间过滤，滤液再加入一定量的3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐和三乙胺和dcc，在室温条件下搅拌反应一段时间，浓缩后用乙醚洗涤浓缩物多次，然后加入甲苯中，再加入一定量的三苯基膦和碘单质，搅拌均匀后再加入醋酸钯和三乙胺，氮
气保护下搅拌一段时间后加入无水甲酸，保持氮气氛围，加热至70℃，反应结束后，过滤反应液，加入水搅拌后用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮；所述的2-硝基苯甲酸甲酯与碳酸钙与氯化碘的投料量摩尔比为1：3：1；所述的2-硝基苯甲酸甲酯与3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐与三乙胺与dcc的投料量摩尔比为1：1：1；所述的2-硝基苯甲酸甲酯与三苯基膦与碘单质与醋酸钯与三乙胺的的投料量摩尔比为1：1.2：1.2：0.1：1；所述的2-硝基苯甲酸甲酯与三苯基膦与无水甲酸的投料量摩尔比为1：3。4.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂，其特征在于其制备方法的具体过程为：将一定量的2-硝基苯甲酸加入二氯亚砜里面，在氮气保护下搅拌一段时间后真空浓缩反应体系，浓缩物用二氯甲烷溶解，然后在搅拌状态下缓慢滴加溶有2-氨基戊二酸二甲酯盐酸盐的二氯甲烷溶液，滴加完全后继续搅拌反应一段时间，向反应体系中加入饱和的氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，加入高压反应釜中，在向反应釜内加入一定量的edci和1-羟基苯并三唑和三乙胺，通过真空排除反应釜内的空气，向反应釜内通入氨气，使釜内的压力达到0.5mpa，加热至50℃，反应结束后过滤反应液，然后用醋酸调节反应体系为中性，加入水，搅拌后分出有机相，浓缩后得到n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺；所述的2-硝基苯甲酸与2-氨基戊二酸二甲酯盐酸盐的投料量摩尔比为1：1～1.1；所述的2-硝基苯甲酸与edci和1-羟基苯并三唑和三乙胺的投料量摩尔比为1：1：1：2。5.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂的制备方法，其特征在于其制备方法的具体过程为：在高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到压力1，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后降温至40℃，再次用真空排除反应体系中的气体，向反应釜内通入氢气，使反应釜内的压力达到压力2，保持温度搅拌反应，反应结束后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，干燥后经浓缩再经硅胶柱层析分离得到泊马度胺；所述的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺与碳酸铯与醋酸钯的投料量摩尔比为1：1.2：0.1；所述的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺与叔丁醇钠的投料量摩尔比为1：1～1.1；所述的反应体系压力1为1.0～1.5mpa；所述的反应体系压力2为1.0～2.0mpa。6.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂的制备方法，其特征在于其制备方法的具体过程为：在高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，浓缩后加入甲醇中，再加入一定量含量为10％的钯碳，在氮气保护条件下，缓慢滴加水合肼，滴加过程中保持反应温度为室温，滴加完毕后继续反应一段时间抽滤反应液除去催化剂钯碳，浓缩后经硅胶柱层析分离得到泊马度胺；所述的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺与10％的钯碳的投料量质量比为10：1；所述的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺与水合肼的投料量摩尔比为1：5～10。
7.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂的制备方法，其特征在于其制备方法的具体过程为：在带有搅拌的高压反应釜中，把一定量的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺和碳酸铯和醋酸钯加入到n,n-二甲基甲酰胺中，氮气保护反应体系，搅拌后快速加入溶有叔丁醇钠的n,n-二甲基甲酰胺溶液，然后真空排除反应釜内气体，通入二氧化碳，使反应釜内的压力达到1.5mpa，缓慢加热至110℃，保持温度反应一段时间后过滤反应液，滤液倒入水中，搅拌下用稀盐酸调节ph为6，然后用二氯甲烷萃取反应体系多次，合并有机相，浓缩后加入到乙醇和水的混合液中，再加入还原铁粉，滴加醋酸后加热至一定温度，反应结束后过滤反应液，滤液经减压蒸馏蒸出乙醇和水，向残余物中加入丙酮和苯进行重结晶，抽滤固体，滤饼烘干后得到泊马度胺；所述的乙醇和水的体积比为5：2；所述的n-3-(2-硝基苯)甲酰胺-环戊二甲酰胺与还原铁粉的投料量质量比为1：0.1～0.2；所述的反应温度为80～100℃。8.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂的制备方法，其特征在于其制备方法的具体过程为：把一定量的泊马度胺加入盐酸，搅拌后加入一定量的亚硝酸钠，保持0℃条件，加入溶有叠氮化钠的水溶液，继续搅拌一段时间向反应体系中加入二氯甲烷，搅拌后分出有机相，水相再用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，浓缩后得到泊马度胺-叠氮化合物；所述的泊马度胺与亚硝酸钠与叠氮化钠的投料量摩尔比为1：1.2：1.2。9.根据权利要求1所述的一种泊马度胺类饲料添加剂的制备方法，其特征在于其制备方法的具体过程为：将一定量的泊马度胺-叠氮化合物和胺基炔化合物加入到蒸馏水、四氢呋喃和叔丁醇的混合溶剂，再加入无水硫酸铜，试剂级抗坏血酸钠，氮气保护，加热至80℃，回流反应至原料反应完全，然后向反应体系中缓慢滴加溶有苯甲酰氯化合物的二氯甲烷溶液，滴加完后搅拌一段时间加入饱和的氯化钠溶液，搅拌后分出有机相，有机相浓缩后得到目标化合物；所述的叠氮化合物与胺基炔与苯甲酰氯化合物的投料量摩尔比为1：1：1。10.如权利要求1所述的泊马度胺类饲料添加剂在抑制脲酶活性方面的作用。

技术总结
本发明公开了一种泊马度胺类饲料添加剂及其制备方法和应用，属于功能饲料添加剂合成技术领域。本发明的技术方案要点为：该泊马度胺类饲料添加剂分子具有结构其中n为1或者2；R为烷基或卤素或甲氧基或本发明以2-硝基苯甲酸为起始原料，先反应得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-硝基异吲哚啉-1,3-二酮，再反应得到泊马度胺，再引入叠氮基团，最后经点击反应得到结构新型的目标分子，对脲酶具有一定抑制作用，可作为潜在的饲料添加剂。可作为潜在的饲料添加剂。可作为潜在的饲料添加剂。


技术研发人员：ꢀ(74)专利代理机构
受保护的技术使用者：河南湾流生物科技有限公司
技术研发日：2022.10.24
技术公布日：2023/1/6