一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法
专利名称:一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法
技术领域：
本发明涉及一种提取纯化精多糖的方法。
技术背景
紫苏，别名荏、赤苏、白苏、香苏等，学名Perillafrutescens L.，为唇形科一年生草本植物。紫苏具有抗氧化、防衰老、降血脂、降血糖、抗过敏、抗微生物、提高记忆力和改善视觉功能等保健功能，是一种具有很高利用价值的药、食两用植物。具有特异的芳香，原产中国.如今主要分布于印度、缅甸、中国、日本、朝鲜、韩国、印度尼西亚和俄罗斯等国家。我国华北、华中、华南、西南地区均有野生种和栽培种。据医学临床研究，其茎、叶及种子可人药；茎叶有镇痛、镇静、解热作用，可治疗感冒、解鱼蟹中毒呕吐腹痛等种子(果实)有镇咳、祛痰、平喘及发散精神沉闷之效。紫苏具有抗氧化、防衰老、降血脂、降血糖、抗过敏、抗微生物、提高记忆力和改善视觉功能等保健功能，是一种具有很高利用价值的药、食两用植物，日益成为国内外医疗保健、食品、化工领域的研究热点，经济价值很高。近些年来，紫苏因其特有的活性物质及营养成分，成为一种备受世界关注的多用途植物，经济价值很高。俄罗斯、日本、韩国、美国、加拿大等国对紫苏属植物进行了大量的商业性栽种，开发出了食用油、药品、淹渍品、化妆品等几十种紫苏产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法。
从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现
一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；
其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
本发明采用超声波和酶法相结合提取，和超声波法相比提取率提高了 45%，和酶法相比提取率提高了 150%。而且，本发明首次从紫苏籽中提取多糖成分，填补了国内从紫苏籽中提取多糖的空白，为紫苏多糖药用功能的开发提供了重要的理论基础。
具体实施方式
具体实施方式
一本实施方式从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现[0009]一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；
其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
采用紫外分光光度法和冻融法对所获得紫苏精多糖的纯度进行鉴定将DEAE柱层析
分离的各管洗脱液在190 650nm区域进行紫外扫描，合并多糖质量浓度高的部分，然后再将多糖溶液冷冻过夜，室温融化，IOOOOrpm,离心20min，观察离心管底部无沉淀
产生，表明该多糖纯度较高。
采用粘度法测定所获得紫苏精多糖的粘均分子量，得到紫苏多糖的粘均分子量为 1. 07X 105。 具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤二中超声波破碎时间为42min，破碎功率为500w。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤三采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白向粗多糖溶液中加入1/5体积的sevag试剂(氯仿正丁醇 =4 1)，振荡30min后离心，重复操作振荡和离心至氯仿与水的界面无乳白色沉淀为止。 其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤三中蒸馏水透析采用流水透析。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤四中采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化紫苏精多糖提取液冷冻干燥后，溶于PH值8. 0的 Tris-HCl缓冲溶液中，加入DEAE纤维素柱，用NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液，检测各洗脱液中的多糖质量浓度。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
4
权利要求
1.一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入 2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
2.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤二中超声波破碎时间为42min，破碎功率为500w。
3.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤三采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白向粗多糖溶液中加入1/5体积的sevag试剂，振荡30min后离心，重复操作振荡和离心至氯仿与水的界面无乳白色沉淀为止。
4.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤三中蒸馏水透析采用流水透析。
5.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤四中采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化紫苏精多糖提取液冷冻干燥后， 溶于pH值8. 0的Tris-HCl缓冲溶液中，加入DEAE纤维素柱，用NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液，检测各洗脱液中的多糖质量浓度。
专利摘要
一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，它涉及一种提取纯化精多糖的方法。方法1.取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入脱脂液，静置，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；2.水系沉淀物加入蒸馏水，超声波破碎后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；3.去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后脱色，再透析，获得紫苏多糖提取液；4.分级纯化后即完成。本发明采用超声波和酶法相结合提取，和超声波法相比提取率提高了45％，和酶法相比提取率提高了150％。而且，本发明首次从紫苏籽中提取多糖成分，填补了国内从紫苏籽中提取多糖的空白，为紫苏多糖药用功能的开发提供了重要的理论基础。
文档编号C12S3/02GKCN102311510SQ201110323645
公开日2012年1月11日 申请日期2011年10月21日
发明者孟利, 宋永 , 李冲伟, 李宏涛, 雷虹 申请人:黑龙江大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
技术领域：
本发明涉及一种提取纯化精多糖的方法。
技术背景
紫苏，别名荏、赤苏、白苏、香苏等，学名Perillafrutescens L.，为唇形科一年生草本植物。紫苏具有抗氧化、防衰老、降血脂、降血糖、抗过敏、抗微生物、提高记忆力和改善视觉功能等保健功能，是一种具有很高利用价值的药、食两用植物。具有特异的芳香，原产中国.如今主要分布于印度、缅甸、中国、日本、朝鲜、韩国、印度尼西亚和俄罗斯等国家。我国华北、华中、华南、西南地区均有野生种和栽培种。据医学临床研究，其茎、叶及种子可人药；茎叶有镇痛、镇静、解热作用，可治疗感冒、解鱼蟹中毒呕吐腹痛等种子(果实)有镇咳、祛痰、平喘及发散精神沉闷之效。紫苏具有抗氧化、防衰老、降血脂、降血糖、抗过敏、抗微生物、提高记忆力和改善视觉功能等保健功能，是一种具有很高利用价值的药、食两用植物，日益成为国内外医疗保健、食品、化工领域的研究热点，经济价值很高。近些年来，紫苏因其特有的活性物质及营养成分，成为一种备受世界关注的多用途植物，经济价值很高。俄罗斯、日本、韩国、美国、加拿大等国对紫苏属植物进行了大量的商业性栽种，开发出了食用油、药品、淹渍品、化妆品等几十种紫苏产品。
发明内容
本发明的目的是提供一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法。
从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现
一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；
其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
本发明采用超声波和酶法相结合提取，和超声波法相比提取率提高了 45%，和酶法相比提取率提高了 150%。而且，本发明首次从紫苏籽中提取多糖成分，填补了国内从紫苏籽中提取多糖的空白，为紫苏多糖药用功能的开发提供了重要的理论基础。
具体实施方式
具体实施方式
一本实施方式从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现[0009]一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；
其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
采用紫外分光光度法和冻融法对所获得紫苏精多糖的纯度进行鉴定将DEAE柱层析
分离的各管洗脱液在190 650nm区域进行紫外扫描，合并多糖质量浓度高的部分，然后再将多糖溶液冷冻过夜，室温融化，IOOOOrpm,离心20min，观察离心管底部无沉淀
产生，表明该多糖纯度较高。
采用粘度法测定所获得紫苏精多糖的粘均分子量，得到紫苏多糖的粘均分子量为 1. 07X 105。 具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤二中超声波破碎时间为42min，破碎功率为500w。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤三采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白向粗多糖溶液中加入1/5体积的sevag试剂(氯仿正丁醇 =4 1)，振荡30min后离心，重复操作振荡和离心至氯仿与水的界面无乳白色沉淀为止。 其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤三中蒸馏水透析采用流水透析。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。 具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一不同是步骤四中采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化紫苏精多糖提取液冷冻干燥后，溶于PH值8. 0的 Tris-HCl缓冲溶液中，加入DEAE纤维素柱，用NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液，检测各洗脱液中的多糖质量浓度。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
4
权利要求
1.一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法按以下步骤实现一、取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入3倍体积的脱脂液，静置4h，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；二、水系沉淀物加入25倍体积蒸馏水，先超声波破碎，然后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；三、采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后加入氨水，调PH值至8 9，再滴加质量浓度为15%的过氧化氢，在常温下脱色2d，然后置于透析袋中，用蒸馏水透析48h，重复操作透析2次，获得紫苏多糖提取液；四、采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化，即完成从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖；其中步骤一中脱脂液由氯仿、甲醇和水按照体积比1 2 1组成；步骤二中超声波破碎时间为30 45min，破碎功率为450 550w ；步骤二中加入木瓜蛋白酶辅助提取，是加入 2% (m/v)的木瓜蛋白酶在pH值5. 5、温度50°C的条件下水解20 30min。
2.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤二中超声波破碎时间为42min，破碎功率为500w。
3.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤三采用sevag法去除粗多糖溶液的游离杂蛋白向粗多糖溶液中加入1/5体积的sevag试剂，振荡30min后离心，重复操作振荡和离心至氯仿与水的界面无乳白色沉淀为止。
4.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤三中蒸馏水透析采用流水透析。
5.根据权利要求
1所述的一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，其特征在于步骤四中采用DEAE柱层析法进行紫苏多糖提取液的分级纯化紫苏精多糖提取液冷冻干燥后， 溶于pH值8. 0的Tris-HCl缓冲溶液中，加入DEAE纤维素柱，用NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液，检测各洗脱液中的多糖质量浓度。
专利摘要
一种从紫苏籽中提取纯化紫苏多糖的方法，它涉及一种提取纯化精多糖的方法。方法1.取烘干至恒重的紫苏籽粉末，加入脱脂液，静置，分液漏斗分离有机相和水系沉淀物；2.水系沉淀物加入蒸馏水，超声波破碎后加入木瓜蛋白酶辅助提取，获得粗多糖溶液；3.去除粗多糖溶液的游离杂蛋白，然后脱色，再透析，获得紫苏多糖提取液；4.分级纯化后即完成。本发明采用超声波和酶法相结合提取，和超声波法相比提取率提高了45％，和酶法相比提取率提高了150％。而且，本发明首次从紫苏籽中提取多糖成分，填补了国内从紫苏籽中提取多糖的空白，为紫苏多糖药用功能的开发提供了重要的理论基础。
文档编号C12S3/02GKCN102311510SQ201110323645
公开日2012年1月11日 申请日期2011年10月21日
发明者孟利, 宋永 , 李冲伟, 李宏涛, 雷虹 申请人:黑龙江大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
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