一种开放式植物组织培养方法
专利名称:一种开放式植物组织培养方法
一种开放式植物组织培养方法技术领域：
本发明涉及一种农林领域的植物组织培养育苗技术。
背景技术：
[0002]植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项现代农业技术。经过近一个世纪的发展。利用植物组织培养技术进行无性繁殖的方法已取得了很大的进展。与传统的植物繁育方法相比，这方法具有快速高效，不受季节限制，有时还结合“脱毒”技术取得防止带毒退化、增强生活力及较好地保持种性的效果，在当前倡导高效现代化农业发展模式的形势下，通过植物组织培养技术生产高质量的种苗具有十分广阔的市场前景。虽然它的理论研究已相当精深，但由于技术环节还存在不少问题，组培成本太高，无法满足市场对高质量组培苗低价位的需求，因此，如何降低组培成本是决定组培效益的关键所在，也是组培技术得以健康发展的首要条件。传统组培过程中的污染是组培技术的主要难点之一，主要表现为培养基的污染，培养基高压灭菌具有资金投入大、能耗高，培养基成分遭受破坏等缺点，近年引起兴趣的植物开放式组织培养，是在抗菌剂的作用下，培养基不需高压灭菌，利用塑料杯代替组培瓶，简化组培环节，降低组培成本。[0003]将培养基改造成既可保证植物组织正常生长，又具有抗菌功能的培养基，关键是要找到一种或几种能够添加到培养基的高效广谱性抗菌剂。植物组织培养制作培养基，将热熔的琼脂营养液分装进培养瓶，培养基体积一般占培养瓶容积的五分之一左右，留有较大的瓶内空间，从已经公开的资料来看，现有的开放式组织培养中，培养基加入抑菌剂只对固体培养基部分抑菌，对瓶内空间的微生物无能为力，这就可能导致植物材料接种到培养基表面后，瓶内微生物沉降附着在培养物表面并繁殖，培养物遭受污染几率较高。[0004]从已经公开的资料来看，培养基所添加抑菌剂的量较大，可能将提高培养基渗透压，对培养物生长产生不利的影响。
发明内容
[0005]本发明的主要目的在于提供一种开放式组织培养方法，本发明采用挥发性抑菌剂加入培养基，在对培养基本身消毒的同时，由于抑菌剂自身具有挥发能力，能挥发到瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长，降低培养物污染概率。[0006]本发明提供的技术方案如下[0007]一种开放式植物组织培养方法，其在培养基中添加挥发性植物精油抑菌剂，免去高压消毒程序，在室内开放环境条件下接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。[0008]所述的植物精油抑菌剂的使用量为2 μ l-2ml/L培养基。[0009]所述的植物精油抑菌剂包括以下成分的至少一种[0010](I)肉桂油。包括桂皮油和桂叶油，分别蒸锻自肉桂(Cinnamomum cassia)的干燥枝、叶，主要成分桂皮醛，反式茴香脑、可巴烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0011](2)桉叶油(尤加利油)。从蓝桉、桉叶树等桉树属(Eucalyptus)植物的叶、枝中提取。主要组成1，8_桉叶素、莰烯、水芹烯、松油醇、乙酸香叶醇等。其在培养基添加量是 2u1-2ml/Lo[0012](3)茶树油。自白千层属(Melaleuca)植物的新鲜枝叶提取。主要组成对孟烯-1-醇，1，8_桉叶油素、松油烯、异松油烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0013](4)百里香油。由百里香(Thymus vulgaris 及 Τ· zygis var gracilis)进入花期的地上部分提取。主要成分百里香酚、香芹酚。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0014](5) 丁香油。提取自丁香(Eugenia caryophyllata)干燥花蕾,主要成分丁香酹。 其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0015](6)薰衣草油。由薰衣草(Lavandula officinalis 或 L. angustifolia)的花序提取。主要成分为乙酸芳樟酯、芳樟醇、薰衣草醇、乙酸薰衣草酯、对-1-孟烯-4-醇等。其在培养基添加量是2 μ1-2ml/L。[0016](7)柠檬油。由柠檬属(Lemon)的新鲜果皮经压榨而得。主要 成分是苎稀(对孟-1，8-二烯)和柠檬醛。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0017](8)山苍子油由山苍子(Litsea cubeba)果实提取。主要成分是括柠檬醛、甲基庚烯酮、香茅醛、香茅醇、菔烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0018](9)香茅油(香草油)。香茅(Cymbopogon nardus)全草提取。主要成分香茅醒、 香茅醇。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0019](10)牛至油。自牛至(Origanum vulgare)全草提取,主要成分香疗酹、欧百里香酚、麝香草酚等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0020](11)广藿香油。自广藿香(Pogostemon cablin或P. patchouli pelletiver var. snavis或P. heyneanus)叶子、枝杆及根部提取,主要成分为广藿香烯、广藿香醇、广藿香酮。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0021](12)紫苏油。提取自紫苏(Perilla frutescens)莖叶,主要成分为朽1檬烯、紫苏烯，α -亚麻酸等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0022](13)迷迭香油。提取自迷迭香(Rosmarinus officinalis)莖叶，主要成分为 ct-薇稀、茨稀、β _薇稀、1，8_按叶素、棒脑、龙脑。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0023](14)大蒜油。从大蒜(Allium sativum)鳞莖提取,主要成分丙基二硫化丙烯、 二硫化二丙烯、三硫化二丙烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0024](15)没药油。地丁树或哈地丁树(Commiphora)的树脂油，主要成分为桂醛、没药酸、肉桂醛、小茴香醛，丁香酚。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0025](16) 土荆芥油。自土荆芥(Chenopodium ambrosioides)果实和叶提取,主要成分驱蛔素、对聚伞花素、土荆芥酮。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0026](17) 丁香罗勒油。提取自丁香罗勒(Ocimum gratissimum)的全草,主要成分丁香酚、芳樟醇、松油醇罗勒烯。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0027](18)薄荷油。提取自薄荷(Mentha arvensis)莖叶。主要成分左旋薄荷醇、左旋薄荷酮、异薄荷酮、胡薄荷酮、乙酸癸酯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0028](19)花椒油。从花椒属(Zanthoxylum)果实提取,主要成分为朽1檬烯、枯醇、香叶醇等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0029](20)佛手柑油。从佛手柑(Citrus medica var sarcodactylis)果皮提取，中国的佛手柑主要含有橙花醇、柠檬脑、柠檬醛等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0030](21)连翅油。提取自连翅(Forsythia suspens)的果实,主要成分α-菔烯、β-菔烯、松油醇-4-醇、水芹烯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0031](22)苍术油。从南苍术(Atractylodes Iancea)或北苍术(A. chinensis)等的干燥根茎提取。主要成分苍术醇、苍术酮、苍术烯等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0032](23)岩兰草油(香根油)。提取自岩兰草(Andropogon muricatus)根,主要成分安息香酸、岩兰草醇、岩兰草酮、岩兰草烯等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/Lo[0033](24)藿香油。提取自藿香(Agastache rugosus)全草,主要成分甲基黑椒酹(对烯丙基苯甲醚)、丁香酚甲醚等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0034](25)雪松油。提取自雪松(Juniperus virginiana)根莖枝,主要成分α -雪松烯、Y-依兰油烯、雪松醇等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0035](26)艾叶油。提取自蒿属(Artemisia)的干叶或鲜叶，主要成分为蒲品烯醇_4与 α _職品稀醇等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0036](27)鼠尾草油。提取自鼠尾草(Salvia officinalis)叶与花,主要成分有龙脑、 侧柏酮、樟脑、桉叶油。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0037](28)快乐鼠尾草油。提取自快乐鼠尾草(Salvia sclarea)花苞和花，主要成分洋苏草醇、洋苏 草酮、桉油醇、沉香醇。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0038](29)欧薄荷油。提取自欧薄荷(Mentba piperita)叶子,主要成分薄荷脑、胡薄荷醇、薄荷酮等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0039](30)生姜油。提取自姜(Zingiber officinale)的根莖。主要成分姜烯、姜醇、姜酮等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0040](31)细辛精油。提取自辽细辛(Asarum heterotropoide)根。主要成分甲基丁香酚、黄樟醚、优香芹酮等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0041](32)芫荽油。芫荽(Coriandrum sativum)的果实经水蒸气蒸懼而得。主要成分为芳樟醇、聚伞花酚、松油烃、香叶醇等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0042](33)月桂油。提取自月桂树(Laurus nobilis)的叶。主要成分是丁子香酹、桉树脑和菔烯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0043](34)松节油。由松属(Pinus)的树脂蒸馏取得。主要成分为菔烯、β_菔烯、 芋烯、莰烯、蒈烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0044](35)茴香油。提取自大茴香(Illicium verum)或小茴香(Foeniculum vulgare) 的果实。主成分桉油醇、甲基黑椒酚、反式茴脑、大茴香醛。其在培养基添加量是 2u1-2ml/Lo[0045](36)天竺葵油。由天竺葵(Pelargonium graveolens)花叶提取。主成分香茅醇、甲酸香茅酯和乙酸香茅醇。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0046](37)柏木油。产自侧柏(Thuja occidentalis)和扁柏(Cupressus funebris)木， 枝，叶，主成分为柏木脑、α -和β -寸白木烯、罗汉柏烯等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/ L。[0047](38)芥茉油(黑芥末油和白芥末油)。由黑芥(Brassica nigra)和白芥(B.hirta)种子提取。主成分为异硫氰酸烯丙酯。其在培养基添加量是2μ1-2πι1/1。[0048](39)橙花油。从橙(Citrus sinensis)花提取,主要成分L-芳樟醇、乙酸芳樟醇、 橙花醇、乙酸橙花酯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0049](40)罗勒油。由甜罗勒(Ocimum basilicum)或圣罗勒(O. sanctum)全草提取,主要化学成分为沉香醇、樟脑、松萜或菔烯、莰烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0050](41)葡萄柚油。由葡萄柚(Citrus paradisi)果皮提取,主要成分松職、菔烯、桧烯、月桂烯、柠檬油精、香叶醇。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0051](42)樟脑油。由樟(Cinnamomum camphora)的树干、枝叶提取,主要成分为樟脑、 桉叶素、黄樟素、芳樟醇等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0052]所述的植物精油抑菌剂还包括吐温-20，单方或复合精油总体积与吐温-20体积比为1. 8-2. 5 I。其中，添加乳化剂吐温-20可使精油均匀地分散在培养基中。[0053]组培的微生物污染是限制组培产业化的重要原因之一，传统组培中培养基需经高温高压灭菌。在培养基添加抑菌剂，可免去高压灭菌程序，又能保证植物组织正常生长，具有省去高压灭菌器的资金投入，节省能源，缩短培养基制作时间，许多不耐高压灭菌的培养基添加剂可直接投放到培养基，减少琼脂用量，培养基营养物质和激素损失较少，不耐高温的培养容器也适宜用作培养容器等优点。[0054]与现有技术的实施方案比较[0055]1、专利公开号CN101455180A以大蒜、黄连、忍冬叶、甘草根、桂花、石蒜提取物减压浓缩制作抑菌剂，发 明开放式组织培养育苗方法。公开号CN101946809以聚赖氨酸、异噻唑啉酮、中药水提物等发明适合于组织培养的抑菌剂组合，省去培养基高压灭菌程序。专利号ZL 200610172193. 4发明了含蜂胶抑菌剂植物培养基。从以上已经公开的资料来看，以上加入的抑菌剂不具挥发性，它们只能对固体培养基部分抑菌。本发明的挥发性抑菌剂在对培养基本身消毒的同时，也能对瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长， 降低培养物污染概率；[0056]2、相对已经公开的类似专利，本发明采用高效抑菌剂，在培养基添加量小(总使用量为2 μ l-2ml/L培养基)，对培养基渗透压没有影响；[0057]3、本发明成分为植物天然成分，广泛应用于空气清新、食品调香、皮肤擦拭等，对人体无毒，添加量少，无不适刺激味。
具体实施方式
[0058]抑菌培养基制备方法[0059]1、容器选择玻璃培养瓶一定要干净，消毒剂(液)浸泡后，倒扣凉干不留水迹，可直接分装培养基。若用一次性无色透明塑料口杯，直接分装培养基，PE保鲜膜封口，抗老化皮筋扎口。均不经高压灭菌。[0060]2、制备培养基[0061]培养基制备室需干净，配培养基按常规方法，琼脂条用量为常规用量的70%。左右，琼脂完全溶解停止加热，定容。加入本抑菌剂(单方或复方使用抑菌剂，在培养基总添加量是2μ l-2ml/L)，调PH，分装到培养瓶，5min内完成加盖封口。[0062]3.培养基冷却后常规方法接种和培养。接种间紫外线消毒20分钟，75%酒精喷雾降尘，75%酒精擦拭台面，接种在开放的台面上进行，无需超净工作台。[0063]实施例一、单方抑菌培养基在蝴蝶兰类原球茎增殖上的应用[0064]1/2大量元素MS培养基，每升加激素6-BA 3mg，蔗糖30g、琼脂7g，加热完全熔化， 断开热源，定容，培养基分别添加表I各种抑菌剂，调pH至5. 8，不经高压灭菌，直接分装到玻璃培养瓶，5分钟内加盖封口，在室内开放环境接种蝴蝶兰类原球茎，对照培养基不添加抑菌剂，分装到玻璃培养瓶，常规高压灭菌，冷却后常规方法接种类原球茎，每种处理15 瓶，常规培养，一个月后观察培养瓶污染情况、类原球茎重量增加情况，见表I。[0065]表I蝴蝶兰类原球茎在抑菌培养基上的增殖情况[0066]名称浓度 μ 1/L污染瓶数类原球茎鲜重增长率/%对照O18. 8荼树油2O17. 7丁香罗勒油2I18. 6土荆芥油2I19. 4 广藿香油2O19. 3紫苏油2O18. 4迷迭香油30I18. 7月桂油30O19. 3橙花油30O18. 3葡萄柚油。30O18. 9茴香油500O17. 4芥茉油500O17. 8丁香油500I18. 8薰衣草油500O18. 4柠檬油500O19. O[0067]实施例二、单方抑菌培养基在胡萝卜种子发芽长苗上的应用[0068]MS培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L,加热完全熔化，断开热源，定容，培养基分别添加下表各种抑菌剂，调pH至5. 8，不经高压灭菌，直接分装到玻璃培养瓶，5分钟内加盖封口。对照培养基不添加抑菌剂，分装到玻璃培养瓶，常规高压灭菌，每种处理10瓶。[0069]去刺胡萝卜种子常规75%酒精瞬间消毒，O. 1%氯化汞浸泡10分钟，在室内开放环境接种，每瓶30粒，常规培养，一个月后观察培养基污染瓶数、种子发芽率、芽苗高度范围，见表2[0070]表2胡萝卜种子接种在抑菌培养基的生长情况[0071]
权利要求
1.一种开放式植物组织培养方法，其特征在于在培养基中添加挥发性植物精油抑菌齐U，免去高压消毒程序，在室内开放环境接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。
2.如权利要求
1所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂的使用量为2 μ l-2ml/L培养基。
3.如权利要求
1所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂包括以下成分的至少一种 (1)肉桂油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (2)桉叶油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (3)茶树油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (4)百里香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (5)丁香油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (6)薰衣草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (7)柠檬油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (8)山苍子油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ; (9)香茅油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (10)牛至油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (11)广藿香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (12)紫苏油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (13)迷迭香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (14)大蒜油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (15)没药油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (16)土荆芥油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (17)丁香罗勒油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (18)薄荷油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (19)花椒油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (20)佛手柑油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (21)连翘油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (22)苍术油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (23)岩兰草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (24)藿香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (25)雪松油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (26)艾叶油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (27)鼠尾草油，其在培养基添加量是2μ1-2πι1/1; (28)快乐鼠尾草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (29)欧薄荷油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (30)生姜油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (31)细辛精油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (32)芫荽油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(33)月桂油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(34)松节油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L。(35)茴香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(36)天竺葵油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(37)柏木油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(38)芥茉油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(39)橙花油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(40)罗勒油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(41)葡萄柚油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(42)樟脑油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L。
4.如权利要求
2或3所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂还包括吐温-20，单方或复合精油总体积与吐温-20体积比为1. 8-2. 5:1。
专利摘要
本发明公开了一种开放式植物组织培养方法，其在培养基中添加挥发性植物精油抑菌剂，免去高压消毒程序，在室内开放环境接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。本发明的挥发性抑菌剂在对培养基本身消毒的同时，也能对瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长，降低培养物污染概率；本发明采用的抑菌剂在培养基添加量小(总使用量为2μl-2ml/L培养基)，对培养基渗透压没有影响；本发明成分对人体无毒；添加量少，无不适刺激味。
文档编号A01H4/00GKCN102986526SQ201110343100
公开日2013年3月27日 申请日期2011年11月2日
发明者刘福平 申请人:福建省亚热带植物研究所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
一种开放式植物组织培养方法技术领域：
本发明涉及一种农林领域的植物组织培养育苗技术。
背景技术：
[0002]植物组织培养是本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项现代农业技术。经过近一个世纪的发展。利用植物组织培养技术进行无性繁殖的方法已取得了很大的进展。与传统的植物繁育方法相比，这方法具有快速高效，不受季节限制，有时还结合“脱毒”技术取得防止带毒退化、增强生活力及较好地保持种性的效果，在当前倡导高效现代化农业发展模式的形势下，通过植物组织培养技术生产高质量的种苗具有十分广阔的市场前景。虽然它的理论研究已相当精深，但由于技术环节还存在不少问题，组培成本太高，无法满足市场对高质量组培苗低价位的需求，因此，如何降低组培成本是决定组培效益的关键所在，也是组培技术得以健康发展的首要条件。传统组培过程中的污染是组培技术的主要难点之一，主要表现为培养基的污染，培养基高压灭菌具有资金投入大、能耗高，培养基成分遭受破坏等缺点，近年引起兴趣的植物开放式组织培养，是在抗菌剂的作用下，培养基不需高压灭菌，利用塑料杯代替组培瓶，简化组培环节，降低组培成本。[0003]将培养基改造成既可保证植物组织正常生长，又具有抗菌功能的培养基，关键是要找到一种或几种能够添加到培养基的高效广谱性抗菌剂。植物组织培养制作培养基，将热熔的琼脂营养液分装进培养瓶，培养基体积一般占培养瓶容积的五分之一左右，留有较大的瓶内空间，从已经公开的资料来看，现有的开放式组织培养中，培养基加入抑菌剂只对固体培养基部分抑菌，对瓶内空间的微生物无能为力，这就可能导致植物材料接种到培养基表面后，瓶内微生物沉降附着在培养物表面并繁殖，培养物遭受污染几率较高。[0004]从已经公开的资料来看，培养基所添加抑菌剂的量较大，可能将提高培养基渗透压，对培养物生长产生不利的影响。
发明内容
[0005]本发明的主要目的在于提供一种开放式组织培养方法，本发明采用挥发性抑菌剂加入培养基，在对培养基本身消毒的同时，由于抑菌剂自身具有挥发能力，能挥发到瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长，降低培养物污染概率。[0006]本发明提供的技术方案如下[0007]一种开放式植物组织培养方法，其在培养基中添加挥发性植物精油抑菌剂，免去高压消毒程序，在室内开放环境条件下接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。[0008]所述的植物精油抑菌剂的使用量为2 μ l-2ml/L培养基。[0009]所述的植物精油抑菌剂包括以下成分的至少一种[0010](I)肉桂油。包括桂皮油和桂叶油，分别蒸锻自肉桂(Cinnamomum cassia)的干燥枝、叶，主要成分桂皮醛，反式茴香脑、可巴烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0011](2)桉叶油(尤加利油)。从蓝桉、桉叶树等桉树属(Eucalyptus)植物的叶、枝中提取。主要组成1，8_桉叶素、莰烯、水芹烯、松油醇、乙酸香叶醇等。其在培养基添加量是 2u1-2ml/Lo[0012](3)茶树油。自白千层属(Melaleuca)植物的新鲜枝叶提取。主要组成对孟烯-1-醇，1，8_桉叶油素、松油烯、异松油烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0013](4)百里香油。由百里香(Thymus vulgaris 及 Τ· zygis var gracilis)进入花期的地上部分提取。主要成分百里香酚、香芹酚。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0014](5) 丁香油。提取自丁香(Eugenia caryophyllata)干燥花蕾,主要成分丁香酹。 其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0015](6)薰衣草油。由薰衣草(Lavandula officinalis 或 L. angustifolia)的花序提取。主要成分为乙酸芳樟酯、芳樟醇、薰衣草醇、乙酸薰衣草酯、对-1-孟烯-4-醇等。其在培养基添加量是2 μ1-2ml/L。[0016](7)柠檬油。由柠檬属(Lemon)的新鲜果皮经压榨而得。主要 成分是苎稀(对孟-1，8-二烯)和柠檬醛。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0017](8)山苍子油由山苍子(Litsea cubeba)果实提取。主要成分是括柠檬醛、甲基庚烯酮、香茅醛、香茅醇、菔烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0018](9)香茅油(香草油)。香茅(Cymbopogon nardus)全草提取。主要成分香茅醒、 香茅醇。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0019](10)牛至油。自牛至(Origanum vulgare)全草提取,主要成分香疗酹、欧百里香酚、麝香草酚等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0020](11)广藿香油。自广藿香(Pogostemon cablin或P. patchouli pelletiver var. snavis或P. heyneanus)叶子、枝杆及根部提取,主要成分为广藿香烯、广藿香醇、广藿香酮。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0021](12)紫苏油。提取自紫苏(Perilla frutescens)莖叶,主要成分为朽1檬烯、紫苏烯，α -亚麻酸等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0022](13)迷迭香油。提取自迷迭香(Rosmarinus officinalis)莖叶，主要成分为 ct-薇稀、茨稀、β _薇稀、1，8_按叶素、棒脑、龙脑。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0023](14)大蒜油。从大蒜(Allium sativum)鳞莖提取,主要成分丙基二硫化丙烯、 二硫化二丙烯、三硫化二丙烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0024](15)没药油。地丁树或哈地丁树(Commiphora)的树脂油，主要成分为桂醛、没药酸、肉桂醛、小茴香醛，丁香酚。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0025](16) 土荆芥油。自土荆芥(Chenopodium ambrosioides)果实和叶提取,主要成分驱蛔素、对聚伞花素、土荆芥酮。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0026](17) 丁香罗勒油。提取自丁香罗勒(Ocimum gratissimum)的全草,主要成分丁香酚、芳樟醇、松油醇罗勒烯。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0027](18)薄荷油。提取自薄荷(Mentha arvensis)莖叶。主要成分左旋薄荷醇、左旋薄荷酮、异薄荷酮、胡薄荷酮、乙酸癸酯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0028](19)花椒油。从花椒属(Zanthoxylum)果实提取,主要成分为朽1檬烯、枯醇、香叶醇等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0029](20)佛手柑油。从佛手柑(Citrus medica var sarcodactylis)果皮提取，中国的佛手柑主要含有橙花醇、柠檬脑、柠檬醛等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0030](21)连翅油。提取自连翅(Forsythia suspens)的果实,主要成分α-菔烯、β-菔烯、松油醇-4-醇、水芹烯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0031](22)苍术油。从南苍术(Atractylodes Iancea)或北苍术(A. chinensis)等的干燥根茎提取。主要成分苍术醇、苍术酮、苍术烯等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0032](23)岩兰草油(香根油)。提取自岩兰草(Andropogon muricatus)根,主要成分安息香酸、岩兰草醇、岩兰草酮、岩兰草烯等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/Lo[0033](24)藿香油。提取自藿香(Agastache rugosus)全草,主要成分甲基黑椒酹(对烯丙基苯甲醚)、丁香酚甲醚等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0034](25)雪松油。提取自雪松(Juniperus virginiana)根莖枝,主要成分α -雪松烯、Y-依兰油烯、雪松醇等。其在培养基添加量是2yl-2ml/L。[0035](26)艾叶油。提取自蒿属(Artemisia)的干叶或鲜叶，主要成分为蒲品烯醇_4与 α _職品稀醇等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/L。[0036](27)鼠尾草油。提取自鼠尾草(Salvia officinalis)叶与花,主要成分有龙脑、 侧柏酮、樟脑、桉叶油。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0037](28)快乐鼠尾草油。提取自快乐鼠尾草(Salvia sclarea)花苞和花，主要成分洋苏草醇、洋苏 草酮、桉油醇、沉香醇。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0038](29)欧薄荷油。提取自欧薄荷(Mentba piperita)叶子,主要成分薄荷脑、胡薄荷醇、薄荷酮等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0039](30)生姜油。提取自姜(Zingiber officinale)的根莖。主要成分姜烯、姜醇、姜酮等。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0040](31)细辛精油。提取自辽细辛(Asarum heterotropoide)根。主要成分甲基丁香酚、黄樟醚、优香芹酮等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0041](32)芫荽油。芫荽(Coriandrum sativum)的果实经水蒸气蒸懼而得。主要成分为芳樟醇、聚伞花酚、松油烃、香叶醇等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0042](33)月桂油。提取自月桂树(Laurus nobilis)的叶。主要成分是丁子香酹、桉树脑和菔烯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0043](34)松节油。由松属(Pinus)的树脂蒸馏取得。主要成分为菔烯、β_菔烯、 芋烯、莰烯、蒈烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0044](35)茴香油。提取自大茴香(Illicium verum)或小茴香(Foeniculum vulgare) 的果实。主成分桉油醇、甲基黑椒酚、反式茴脑、大茴香醛。其在培养基添加量是 2u1-2ml/Lo[0045](36)天竺葵油。由天竺葵(Pelargonium graveolens)花叶提取。主成分香茅醇、甲酸香茅酯和乙酸香茅醇。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0046](37)柏木油。产自侧柏(Thuja occidentalis)和扁柏(Cupressus funebris)木， 枝，叶，主成分为柏木脑、α -和β -寸白木烯、罗汉柏烯等。其在培养基添加量是2 μ l_2ml/ L。[0047](38)芥茉油(黑芥末油和白芥末油)。由黑芥(Brassica nigra)和白芥(B.hirta)种子提取。主成分为异硫氰酸烯丙酯。其在培养基添加量是2μ1-2πι1/1。[0048](39)橙花油。从橙(Citrus sinensis)花提取,主要成分L-芳樟醇、乙酸芳樟醇、 橙花醇、乙酸橙花酯。其在培养基添加量是2 μ l-2ml/L。[0049](40)罗勒油。由甜罗勒(Ocimum basilicum)或圣罗勒(O. sanctum)全草提取,主要化学成分为沉香醇、樟脑、松萜或菔烯、莰烯等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0050](41)葡萄柚油。由葡萄柚(Citrus paradisi)果皮提取,主要成分松職、菔烯、桧烯、月桂烯、柠檬油精、香叶醇。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0051](42)樟脑油。由樟(Cinnamomum camphora)的树干、枝叶提取,主要成分为樟脑、 桉叶素、黄樟素、芳樟醇等。其在培养基添加量是2μ l-2ml/L。[0052]所述的植物精油抑菌剂还包括吐温-20，单方或复合精油总体积与吐温-20体积比为1. 8-2. 5 I。其中，添加乳化剂吐温-20可使精油均匀地分散在培养基中。[0053]组培的微生物污染是限制组培产业化的重要原因之一，传统组培中培养基需经高温高压灭菌。在培养基添加抑菌剂，可免去高压灭菌程序，又能保证植物组织正常生长，具有省去高压灭菌器的资金投入，节省能源，缩短培养基制作时间，许多不耐高压灭菌的培养基添加剂可直接投放到培养基，减少琼脂用量，培养基营养物质和激素损失较少，不耐高温的培养容器也适宜用作培养容器等优点。[0054]与现有技术的实施方案比较[0055]1、专利公开号CN101455180A以大蒜、黄连、忍冬叶、甘草根、桂花、石蒜提取物减压浓缩制作抑菌剂，发 明开放式组织培养育苗方法。公开号CN101946809以聚赖氨酸、异噻唑啉酮、中药水提物等发明适合于组织培养的抑菌剂组合，省去培养基高压灭菌程序。专利号ZL 200610172193. 4发明了含蜂胶抑菌剂植物培养基。从以上已经公开的资料来看，以上加入的抑菌剂不具挥发性，它们只能对固体培养基部分抑菌。本发明的挥发性抑菌剂在对培养基本身消毒的同时，也能对瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长， 降低培养物污染概率；[0056]2、相对已经公开的类似专利，本发明采用高效抑菌剂，在培养基添加量小(总使用量为2 μ l-2ml/L培养基)，对培养基渗透压没有影响；[0057]3、本发明成分为植物天然成分，广泛应用于空气清新、食品调香、皮肤擦拭等，对人体无毒，添加量少，无不适刺激味。
具体实施方式
[0058]抑菌培养基制备方法[0059]1、容器选择玻璃培养瓶一定要干净，消毒剂(液)浸泡后，倒扣凉干不留水迹，可直接分装培养基。若用一次性无色透明塑料口杯，直接分装培养基，PE保鲜膜封口，抗老化皮筋扎口。均不经高压灭菌。[0060]2、制备培养基[0061]培养基制备室需干净，配培养基按常规方法，琼脂条用量为常规用量的70%。左右，琼脂完全溶解停止加热，定容。加入本抑菌剂(单方或复方使用抑菌剂，在培养基总添加量是2μ l-2ml/L)，调PH，分装到培养瓶，5min内完成加盖封口。[0062]3.培养基冷却后常规方法接种和培养。接种间紫外线消毒20分钟，75%酒精喷雾降尘，75%酒精擦拭台面，接种在开放的台面上进行，无需超净工作台。[0063]实施例一、单方抑菌培养基在蝴蝶兰类原球茎增殖上的应用[0064]1/2大量元素MS培养基，每升加激素6-BA 3mg，蔗糖30g、琼脂7g，加热完全熔化， 断开热源，定容，培养基分别添加表I各种抑菌剂，调pH至5. 8，不经高压灭菌，直接分装到玻璃培养瓶，5分钟内加盖封口，在室内开放环境接种蝴蝶兰类原球茎，对照培养基不添加抑菌剂，分装到玻璃培养瓶，常规高压灭菌，冷却后常规方法接种类原球茎，每种处理15 瓶，常规培养，一个月后观察培养瓶污染情况、类原球茎重量增加情况，见表I。[0065]表I蝴蝶兰类原球茎在抑菌培养基上的增殖情况[0066]名称浓度 μ 1/L污染瓶数类原球茎鲜重增长率/%对照O18. 8荼树油2O17. 7丁香罗勒油2I18. 6土荆芥油2I19. 4 广藿香油2O19. 3紫苏油2O18. 4迷迭香油30I18. 7月桂油30O19. 3橙花油30O18. 3葡萄柚油。30O18. 9茴香油500O17. 4芥茉油500O17. 8丁香油500I18. 8薰衣草油500O18. 4柠檬油500O19. O[0067]实施例二、单方抑菌培养基在胡萝卜种子发芽长苗上的应用[0068]MS培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L,加热完全熔化，断开热源，定容，培养基分别添加下表各种抑菌剂，调pH至5. 8，不经高压灭菌，直接分装到玻璃培养瓶，5分钟内加盖封口。对照培养基不添加抑菌剂，分装到玻璃培养瓶，常规高压灭菌，每种处理10瓶。[0069]去刺胡萝卜种子常规75%酒精瞬间消毒，O. 1%氯化汞浸泡10分钟，在室内开放环境接种，每瓶30粒，常规培养，一个月后观察培养基污染瓶数、种子发芽率、芽苗高度范围，见表2[0070]表2胡萝卜种子接种在抑菌培养基的生长情况[0071]
权利要求
1.一种开放式植物组织培养方法，其特征在于在培养基中添加挥发性植物精油抑菌齐U，免去高压消毒程序，在室内开放环境接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。
2.如权利要求
1所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂的使用量为2 μ l-2ml/L培养基。
3.如权利要求
1所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂包括以下成分的至少一种 (1)肉桂油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (2)桉叶油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (3)茶树油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (4)百里香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (5)丁香油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (6)薰衣草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (7)柠檬油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (8)山苍子油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ; (9)香茅油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (10)牛至油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (11)广藿香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (12)紫苏油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (13)迷迭香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (14)大蒜油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (15)没药油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (16)土荆芥油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (17)丁香罗勒油，其在培养基添加量是2μ l-2ml/L ； (18)薄荷油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (19)花椒油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (20)佛手柑油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (21)连翘油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (22)苍术油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (23)岩兰草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (24)藿香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (25)雪松油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (26)艾叶油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (27)鼠尾草油，其在培养基添加量是2μ1-2πι1/1; (28)快乐鼠尾草油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (29)欧薄荷油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (30)生姜油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (31)细辛精油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ； (32)芫荽油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(33)月桂油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(34)松节油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L。(35)茴香油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(36)天竺葵油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(37)柏木油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(38)芥茉油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(39)橙花油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(40)罗勒油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(41)葡萄柚油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L ；(42)樟脑油，其在培养基添加量是2μl-2ml/L。
4.如权利要求
2或3所述的一种开放式植物组织培养方法，其特征在于所述的植物精油抑菌剂还包括吐温-20，单方或复合精油总体积与吐温-20体积比为1. 8-2. 5:1。
专利摘要
本发明公开了一种开放式植物组织培养方法，其在培养基中添加挥发性植物精油抑菌剂，免去高压消毒程序，在室内开放环境接种；将培养材料置于满足植物组织培养的温度、光照条件的环境条件下进行培养。本发明的挥发性抑菌剂在对培养基本身消毒的同时，也能对瓶内空间进行消毒，使培养物处在较为无菌的环境生长，降低培养物污染概率；本发明采用的抑菌剂在培养基添加量小(总使用量为2μl-2ml/L培养基)，对培养基渗透压没有影响；本发明成分对人体无毒；添加量少，无不适刺激味。
文档编号A01H4/00GKCN102986526SQ201110343100
公开日2013年3月27日 申请日期2011年11月2日
发明者刘福平 申请人:福建省亚热带植物研究所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
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