专利名称:一种草菇母种保藏方法
技术领域:
本发明涉及食用菌生产
技术领域:
,特别涉及一种草菇母种保藏方法。
技术背景草菇又名包脚菇、秆菇、麻菇、兰花菇,其肉质脆嫩,味道鲜美,具有和鸡精和味精的特殊鲜味口感,是人们喜爱的夏令食用菌之一,炒菜做汤,堪称佳品。我国是草菇栽培的发源地,早在明代初年在广东韶光和湖南浏阳已有栽种草菇记载,目前世界上已有20多个国家和地区进行人工栽培。
草菇是属于高温菇,原产于高温多雨的热带和亚热带地区,如我国的广东、福建、 台湾、海南、广西、湖南、湖北等地,草菇对低温反应很敏感,菌丝体在低于5°C以下低温菌丝死亡,低于20°C子实体不能形成,忽冷忽热的气候,小菇蕾都会枯萎死亡。
草菇菌种保藏是草菇生产中一道难题,常用的继代保藏方法,草菇的保藏期不到半年,由于草菇属于高温型担子菌,菌丝不耐低温,在10°c以下低温条件下保藏,草菇菌丝将会发生自溶而导致死亡。因此我们研究出一种草菇菌种葡萄糖液保藏的新方法,该方法保藏期长、保藏效果好、操作简便实用,易于推广。
草菇菌种继代保藏法草菇菌种接到PDA试管斜面,在30°C下培养,菌丝长满培养基后,在20°C左右温度下存放,最低不要低于15°C ;为减少保藏过程中基内水分的散失,通常将菌种放在塑料袋中,亦可用橡胶塞封紧管口,并每隔2 3个月转管1次。该技术保藏时间短,转接培养频繁,容易引起退化和杂菌感染,发生变异的几率高,费时又麻烦,菌种质量更得不到保证,来年还须经过复壮才能扩管使用;而且草菇菌种保藏环境需长期保持在 15 20°C,条件要求高,投资大。
草菇菌种液氮超低温保藏法培养基常用马铃薯汁1000毫,磷酸二氢钾2克,硫酸镁0.5克,琼脂20克,PH值5. 6;冷冻保护剂可用10% (V V)的甘油蒸馏水或10% (V V)的二甲亚砜蒸馏水;安瓿瓶的大小为75X 10毫米,能容1.2毫升保护剂;每瓶装入 0. 8毫升的保护剂,加上棉塞,经0. 096兆帕(0. 984千克/厘米2)压力灭菌15分钟;按无菌操作法将菌丝片装入安瓿瓶内,经火焰熔封瓶口后,用浸水法检查是否漏气;将封口的安瓿瓶放在慢速冷冻器内,以每分钟下降rc的速度缓慢降温,使样品冻结到-35°c,达-35°c 以下后,将安瓿瓶置于_196°C液态氮超低温冰箱中保藏;使用时,取出安瓿瓶,立即置38 40°C的水浴中,使瓶内的冰块迅速融化;然后打开安瓿瓶,取出接种物,移至适宜的培养基上培养;同时应有防护措施,如套戴皮或棉手套等,防止液态氮气溅而冻伤皮肤。该技术需购置超低温液氮设备,且液氮消耗较多,费用高。
一种草菇菌种的低温保藏方法(专利号CN200610035311. 7,公开号 CN1865429),本发明在草菇菌种接种的试管斜面中加入质量分数为10 40%的海藻糖溶液,使加入的海藻糖溶液完全覆盖住试管斜面中的培养基,然后将试管斜面放在4 6°C冷库中保存,保藏时间达8个月。该技术海藻糖原料来源窄、成本高。
发明内容本发明所要解决的技术问题是针对草菇菌种保藏期短,保护费用高、方法繁琐等问题,发明一种长效、简便、实用、保藏效果好的新方法。
解决其技术问题所采用的技术方案是
一种草菇母种保藏方法,包括母种培养基制作、接种、活化母种培养、活化母种保护等方法,其特征在于活化母种保护方法为
首先配制草菇菌种专用保护剂称取一定量的葡萄糖,加入蒸馏水中,使其完全溶解,配成10-30 %的溶液,过滤,取其清液,在100-15(TC条件下灭菌10-60分钟;然后将离心管和移液枪枪头在100-15(TC条件下灭菌10-60分钟;最后用接种钩切取一定数量、一定大小、带少量琼脂培养基的活化母种块,放入离心管,用移液枪加入一定量的草菇菌种专用保护剂完全覆盖住活化母种块,盖上离心管盖子,将离心管放入盒中,置于1 4°C冰箱中保存;
草菇菌种专用保护剂中所使用的葡萄糖可替换成蔗糖、甘油、二甲基亚砜、葡萄糖中的一种或几种的混合物。
所述母种培养基制作方法为(1)称取一定量的去皮、切片的土豆,置于锅中,加水,土豆煮至熟而不烂;( 用纱布过滤,取其滤液;C3)向滤液中加一定量的琼脂,继续煮至琼脂融化,加一定量的葡萄糖,补一定量的水;(4)趁热把煮好的培养基装至试管长度的 1/5处,盖上硅胶塞;(5)在100-150°C条件下灭菌10-60分钟,灭菌后待试管温度低于70°C 后倾斜放置,培养基前段蔓延至试管的1/2处。
所述接种方法为在无菌条件下,用接种针钩取一定大小的母种培养基,移入斜面培养基的中部,将试管口用酒精灯火焰灭菌后盖上塞子。
所述活化母种培养方法为接种后的草菇母种置于25-40°C的恒温箱中培养3-10 天,菌丝长满培养基,即可以使用。
本发明的有益效果是本发明与现有技术相比优点是(1)实现了草菇菌种长期低温保藏目前草菇菌种都只能在15°C以上保藏,每3 6个月转管一次,菌种容易污染和退化;采用本发明可以将草菇菌种放在1 4°C条件下保藏1年时间以上;(2)本发明方法操作简单,对技术和设备要求较低,易于推广;(3)以葡萄糖作为草菇菌种保护剂,安全可靠,而且不须反复传代,成本低廉,容易获得,保藏效果好;(4)以离心管代替试管保藏菌种,保藏需要的体积小,每次只需取一只离心管就能满足转管的需求;(5)以母种块作为保藏种块,种块体积小,保护剂可以充分把种块包裹,保护剂通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型,保护菌丝不受低温伤害。
具体实施方式根据生产的实际需要,通过调整发明方法的具体参数,可以获得所需要的保藏效果,下面通过
具体实施方式对本发明作进一步说明,但并不意味着对本发明保护范围的限定。
实施例1
草菇母种保藏方法具体实施步骤如下
母种培养基制作(1)称取200克的去皮、切片的土豆,置于锅中,加IOOOml水,土豆煮至熟而不烂;( 用纱布过滤,取其滤液;C3)向滤液中加入20克琼脂,继续煮至琼脂融化,然后加入18克葡萄糖,补水至IOOOml ; (4)趁热把煮好的培养基装至试管长度的1/5 处,盖上硅胶塞;( 在121°C条件下灭菌30分钟,灭菌后待试管温度低于70°C后倾斜放置,培养基前段蔓延至试管的1/2处。
接种在无菌条件下,用接种针钩取一定大小的母种培养基,移入斜面培养基的中部,将试管口用酒精灯火焰灭菌后盖上塞子。
活化母种培养接种后的草菇母种置于35°C左右的恒温箱中培养4天,菌丝长满培养基,即可以使用。
活化母种保护首先配制草菇菌种专用保护剂称取一定量的葡萄糖,加入蒸馏水中,使其完全溶解,配成20 %的溶液,过滤,取其清液,在121°C条件下灭菌30分钟; 然后将5ml离心管和移液枪枪头在121°C条件下灭菌30分钟;最后用接种钩切取5块、
0.5X0. 5cm、带少量琼脂培养基的活化母种块,放入5ml离心管,用移液枪加入2ml的草菇菌种专用保护剂完全覆盖住活化母种块,盖上离心管盖子,放入100孔离心管盒中,置于1 4°C冰箱中保存。
实施例2
草菇母种保藏方法具体实施步骤如下
母种培养基制作(1)称取300克的去皮、切片的土豆,置于锅中,加1200ml水,土豆煮至熟而不烂;( 用纱布过滤,取其滤液;C3)向滤液中加入15克琼脂,继续煮至琼脂融化,然后加入20克葡萄糖,补水至1200ml ; (4)趁热把煮好的培养基装至试管长度的1/5 处,盖上硅胶塞;( 在115°C条件下灭菌50分钟,灭菌后待试管温度低于70°C后倾斜放置,培养基前段蔓延至试管的1/2处。
接种在无菌条件下,用接种针钩取一定大小的母种培养基,移入斜面培养基的中部,将试管口用酒精灯火焰灭菌后盖上塞子。
活化母种培养接种后的草菇母种置于30°C左右的恒温箱中培养6天,菌丝长满培养基,即可以使用。
活化母种保护首先配制草菇菌种专用保护剂称取一定量的葡萄糖,加入蒸馏水中,使其完全溶解,配成10%的溶液,过滤,取其清液,在115°C条件下灭菌50分钟;然后将IOml离心管和移液枪枪头在115°C条件下灭菌50分钟;最后用接种钩切取7块、
1.5X1. 5cm、带少量琼脂培养基的活化母种块,放入IOml离心管,用移液枪加入3. 5ml的草菇菌种专用保护剂完全覆盖住活化母种块,盖上离心管盖子,放入100孔离心管盒中,置于 1 4°C冰箱中保存。
实施例3
草菇母种保藏方法具体实施步骤如下
母种培养基制作(1)称取150克的去皮、切片的土豆,置于锅中,加700ml水,土豆煮至熟而不烂;( 用纱布过滤,取其滤液;C3)向滤液中加入10克琼脂,继续煮至琼脂融化,然后加入12克葡萄糖,补水至700ml ; (4)趁热把煮好的培养基装至试管长度的1/5 处,盖上硅胶塞;( 在127°C条件下灭菌25分钟,灭菌后待试管温度低于70°C后倾斜放置,培养基前段蔓延至试管的1/2处。
接种在无菌条件下,用接种针钩取一定大小的母种培养基,移入斜面培养基的中部,将试管口用酒精灯火焰灭菌后盖上塞子。
活化母种培养接种后的草菇母种置于38°C左右的恒温箱中培养3天,菌丝长满培养基,即可以使用。
活化母种保护首先配制草菇菌种专用保护剂称取一定量的葡萄糖,加入蒸馏水中,使其完全溶解,配成30%的溶液,过滤,取其清液,在127 °C条件下灭菌25分钟;然后将15ml离心管和移液枪枪头在127°C条件下灭菌25分钟;最后用接种钩切取10块、 0. 5X0. 5cm、带少量琼脂培养基的活化母种块,放入15ml离心管,用移液枪加入5ml的草菇菌种专用保护剂完全覆盖住活化母种块,盖上离心管盖子,放入100孔离心管盒中,置于 1 4°C冰箱中保存。
权利要求1.一种草菇母种保藏方法,包括母种培养基制作、接种、活化母种培养、活化母种保护等方法,其特征在于活化母种保护方法为首先配制草菇菌种专用保护剂称取一定量的葡萄糖,加入蒸馏水中,使其完全溶解, 配成10-30%的溶液,过滤,取其清液,在100-15(TC条件下灭菌10-60分钟;然后将离心管和移液枪枪头在100-15(TC条件下灭菌10-60分钟;最后用接种钩切取一定数量、一定大小、带少量琼脂培养基的活化母种块,放入离心管,用移液枪加入一定量的草菇菌种专用保护剂完全覆盖住活化母种块,盖上离心管盖子,将离心管放入盒中,置于1 4°C冰箱中保存。
2.根据
权利要求1所述的一种草菇母种保藏方法,其特征在于所述母种培养基制作方法为(1)称取一定量的去皮、切片的土豆,置于锅中,加水,土豆煮至熟而不烂;(2)用纱布过滤,取其滤液;C3)向滤液中加一定量的琼脂,继续煮至琼脂融化,加一定量的葡萄糖,补一定量的水;(4)趁热把煮好的培养基装至试管长度的1/5处,盖上硅胶塞;(5)在 100-150°C条件下灭菌10-60分钟,灭菌后待试管温度低于70°C后倾斜放置,培养基前段蔓延至试管的1/2处。
3.根据
权利要求1所述的一种草菇母种保藏方法,其特征在于所述接种方法为在无菌条件下,用接种针钩取一定大小的母种培养基,移入斜面培养基的中部,将试管口用酒精灯火焰灭菌后盖上塞子。
4.根据
权利要求1所述的一种草菇母种保藏方法,其特征在于所述活化母种培养方法为接种后的草菇母种置于25-40°C的恒温箱中培养3-10天,菌丝长满培养基,即可以使用。
专利摘要本发明公开了一种草菇母种保藏方法,包括母种培养基制作、接种、活化母种培养、活化母种保护等方法;采用本发明可以将草菇菌种放在1~4℃条件下保藏1年时间以上;本发明方法操作简单,对技术和设备要求较低,易于推广;保藏效果好;以离心管代替试管保藏菌种,体积小,每次只需取一只离心管就能满足转管的需求;以母种块作为保藏种块,种块体积小,保护剂可以充分把种块包裹,保护剂通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型,保护菌丝不受低温伤害;是现有草菇母种保藏方法的有效替代技术。
文档编号C12N1/04GKCN102492622SQ201110440046
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月26日
发明者姜性坚, 彭运祥, 李新菊, 王小艳, 王春晖, 胡汝晓 申请人:湖南省春华生物科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan