患有轻度认知障碍需要治疗的患者的鉴定方法以及这种患者的治疗的制作方法
专利名称：患有轻度认知障碍需要治疗的患者的鉴定方法以及这种患者的治疗的制作方法
患有轻度认知障碍需要治疗的患者的鉴定方法以及这种患
者的治疗本发明涉及患有轻度认知障碍的患者的新的体外风险度分层方法，目的在于当患 者处于其最初的轻度认知障碍恶化和发生有临床表现的阿茨海默氏痴呆型神经变性疾病 的风险增加时，鉴定需要治疗的患者，以及目的在于给这种需要治疗的患者提供某些药物， 这些药物对于与此相关的治疗目的的适合性所组成的知识，形成了本发明的基本部分。本发明还涉及在生物标志物测量基础上鉴定到的患有轻度认知障碍的某些风险 患者的预防性治疗方法，所述治疗方法使用心血管药剂以预防或延迟有临床表现的阿茨海 默氏痴呆型神经变性疾病的发生，或在这种方法中心血管药剂的活性物质的应用和ANP受 体拮抗剂的应用，以及用于所述预防或延迟有临床表现的阿茨海默氏痴呆型神经变性疾病 的发生的药物的生产方法。在本申请的框架内，对于被诊断患有“轻度认知障碍”(缩写为MCD)的患者来 说，对他们后来发生被证实的有临床表现的神经变性疾病的初始风险进行了回顾性评估， 此外从他们的既往病史(病历)确定了经回顾证明能改善预后的因素。在英语文献中， 用于证实“轻度认知障碍”的标准最近已被置于术语“轻度认知损害”(缩写为MCI)下处 理。关于这一点，可以参考例如Serge Gauthier等在Lancet 2006，367 1262-1270中 的“轻度认知损害”(Mild cognitive impairmen)，以及 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 1999，56 303-308中的“轻度认知损害，临床特征和结果” (Mild Cognitive Impairment, CIinicalCharacterization and Outcome),或 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 2001 ；58 :1985_1992 中的“轻度认知损害的当前概念” (Current Conceptsin Mild Cognitive Impairment)。有关确定患者的MCD或MCI状态所使用的一种测试方法，检查 了被评估的人的被称为“简易智力状态”(Mini Mental State, MMS)的参数，参见Marshal F. Folstein等在J. Psychiat. Res.，1975，189-198中的“简易智力状态——临床医生对 患者的认知状态进行分级的实用方法”(MINI-MENTAL STATE-apractical method for grading the cognitive state of patients for theclinician)。在那些在某个时间点，在自我观察或对他们的环境观察的基础上，已经确定了 “轻 度认知障碍”(MCD)的患者中，或在满足“轻度认知损害”(MCI)的标准的患者中，已知只有 某些患者将被观察到其状况的进行性恶化。只有某些患者逐渐发生神经变性疾病、例如阿 茨海默氏痴呆(AD)型的全部临床症状。在其他患者中，发生了不同类型的痴呆，例如血管 性痴呆。还有的其他MCD或MCI患者没有发生任何可注意到的恶化，有时最初的症状甚至 消失。发生了神经变性疾病的第一组，也被称为“向阿茨海默氏病转变者”(转变者)组，而 后面的组是“非转变者”组。根据所述的初始状况，在被诊断患有“轻度认知障碍”的患者组中，能够在诊断时 评估个体是否可能属于“向阿茨海默氏病转变者”组的风险将是理想的，以便如果测定到高 风险，能够启动早期预防或治疗性措施(如果这种措施存在的话)，而当仅仅测定到这种转 变的低风险时，能够避免不必要的措施，并解除患者相当大的心理负担。为向阿茨海默氏病转变的风险增加的患者提供保证在避免或延迟转变的意义上有长期功效的治疗，也将是理想的。本发明的目的是提供一种方法，所述方法允许以高的统计概率鉴定向阿茨海默氏 病转变者组，并且也为决定是否向鉴定到的转变者提供有效的预防性治疗，产生了基础。这些目的通过本技术领域的专业人员可以从权利要求书中收集到方法及其优选 实施方案来实现。本发明的一个方面体现了体外分析方法，在临床发现的基础上被诊断患有“轻度 认知障碍”的患者组中，所述方法允许在诊断时鉴定具有后续向阿茨海默氏病转变的高风 险的患者，也允许对这些患者进行具体的治疗推荐。在本发明的框架内，作为第一阶段，使用体外分析方法测定患者样品(血浆、血 清)中循环相关的肽生物标志物的浓度，并且在发现测定浓度与相应的参比浓度相比升高 的情况下，推荐对所述患者用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂进行治疗，或使用 ANP受体拮抗剂进行治疗，正如下面描述的评估所显示的，使用抗高血压药剂或使用ANP受 体拮抗剂进行的治疗降低了鉴定到的轻度认知障碍恶化成明显的阿茨海默氏痴呆(AD)型 神经变性疾病的风险。因此，本发明的主题是患有轻度认知障碍需要治疗的患者的体外鉴定方法，在所 述方法中 在来自被诊断患有轻度认知障碍的患者的循环的生物学流体样品中测定至少 一种循环相关的肽生物标志物，并且 所述至少一种循环相关的肽生物标志物的浓度超过所述标志物通常在轻度认 知障碍病例中浓度的浓度值范围中设置的生物标志物特异性阈值(截止值)，则被指定为 发生有临床表现的神经变性疾病的风险增加。对于具有测定到的较高风险的患者，可以推荐使用下面的药物进行治疗。根据本发明的体外方法，样品优选为血清或血浆样品。优选循环相关的肽生物标志物选自利尿钠肽ANP和/或BNP和/或肾上腺髓质素 (ADM)，或选自它们的相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段。优选本发明方法的特征还在于推荐使用抗高血压药剂类的心血管药剂进行治疗， 所述抗高血压药剂选自用于降血压的“血管紧张素转换酶”的抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧 张素II受体拮抗剂(“沙坦(sartans) ”)、0 -阻断剂或利尿剂。或者，可以推荐使用ANP 受体拮抗剂或腺苷受体拮抗剂进行治疗。在优选实施方案中，测定使用免疫诊断测定方法进行。相对于实际的循环相关肽 来说生理效应降低或测不到的循环相关肽，测定其激素原前体片段，也是优选的。在特别优选的实施方案中，方法的特征在于测定了含有pro-ANP的中间部分 的pro-ANP片段(MR-pro-ANP)和/或含有前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸的中段 pro-ADM 片段(MR-proADM)的浓度。在本发明的情况下，优选的阈值对于MR-ProANP来说是50-1 OOpmo 1 /1，优选为 60-90pmol/l，对于 MR-ProADM 来说是 0. 4-0. 8nmol/l，优选为 0. 5-0. 7nmol/l。本发明的另一个主题是使用循环相关肽生物标志物、特别是利尿钠肽ANP、BNP和 /或肾上腺髓质素(ADM)或其片段或其相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段， 对患有轻度认知障碍、转变成有临床表现的神经变性疾病的风险增加的患者进行分层或鉴
5定。另一方面，本发明涉及对患有轻度认知障碍的患者进行预防性治疗的方法，在所 述患者中测定到了其状况恶化成有临床表现的阿茨海默氏型神经变性疾病的显著风险(AD 风险患者)，所述治疗方法使用了含有心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂的一种或多 种活性物质的药物，以及含有一种或多种ANP受体拮抗剂的药物。另一方面，本发明涉及心血管药剂的一种或多种活性物质以及一种或多种ANP受 体拮抗剂、更具体来说是抗高血压药剂在预防性治疗AD风险患者或生产预防性治疗AD风 险患者的药物中的应用。本发明的主题是药物，所述药物包含心血管药剂的一种或多种活性物质，所述心 血管药剂选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、3 -阻断剂和抗高血压利尿剂及其 组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变 性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。此外，本发明的主题是含有心房利尿钠肽受体(ANP受体)拮抗剂的药物，用于治 疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。因此，本发明的主题是含有心房利尿钠肽受体拮抗剂的药物在生产药物来治疗患 有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生或者改善或维 持轻度认知障碍的状态中的应用。本发明的主题还是用于治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治 疗有效量的ANP受体拮抗剂，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。此外，本发明的主题是含有腺苷受体拮抗剂的药物，所述药物用于治疗患有轻度 认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻 度认知障碍的状态。因此，本发明的主题是含有腺苷受体拮抗剂的药物在生产药物来治疗患有轻度认 知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生或者改善或维持轻度认 知障碍的状态中的应用。因此，本发明的主题还是药物，所述药物包含心血管药剂的一种或多种活性物质， 所述心血管药剂选自ANP受体拮抗剂、腺苷受体拮抗剂、ACE抑制剂、血管紧张素II受体 拮抗剂、0 -阻断剂和抗高血压利尿剂及其组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患 者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的 状态。本发明的主题还是用于治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治 疗活性量的腺苷受体拮抗剂，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。腺苷受体是一类嘌呤能的G-蛋白偶联受体(GPCR)，其内源配体是腺苷。可以区分 出四种类型A1、A2A、A2B和A3，其在体内的分布和功能有部分交叠和部分不同。腺苷受体 亚型彼此之间在生物化学效应和信号途径方面也有差别。这些亚型每一种的激动剂和拮抗 剂都是已知的，其中某些激动剂和拮抗剂是非特异性的，对所有腺苷受体显示出效应。
本发明的主题还是治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治疗活 性量的心血管药剂的一种或多种活性物质，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的 发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。这样的心血管药剂具体选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、0 -阻断剂 和抗高血压利尿剂及其组合。本发明的ANP受体拮抗剂是可治疗性施用的物质，它与ANP受体结合，从而阻止或 减少了天然配体ANP的结合，并且不引起鸟苷酸环化酶的活化，导致cGMP不增加或少增加， 从而降低了内源性ANP的排钠利尿效应。本发明的腺苷受体拮抗剂是可治疗性施用的物质，它与腺苷受体结合，从而阻止 或减少了天然配体腺苷的结合，并且不引起鸟苷酸环化酶的活化，导致cGMP不增加或少增 加，从而降低了内源性腺苷的效应。在上述本发明的特别优选实施方案中，ANP受体拮抗剂是葡萄糖己酸聚合物(葡 萄糖己酸，更具体是用己酸酯化的0 1 — 6葡聚糖)。ANP受体拮抗剂的特别重要的代表是 HS-142-1 (US 5，132，112)。在US 5，132，112中提到的所有拮抗剂构成了本说明书的一部 分，都是本发明的ANP受体拮抗剂。在US 5，132，112中，HS-142-1化合物被表征如下这些化合物包含用己酸酯化的直链0 1 — 6葡聚糖，其中D-葡萄糖残基的数量是 28，己酸残基的数量是11。这些化合物基本上具有下列物理化学性质1)外观白色粉末2)熔点:175-185°C3)分子式C234H39201524)质谱(负FAB质谱)发现值M/Z5536. 5 (M-H)“计算值:M/Z5637. 35)比旋[a ]24D = -29. 4° (c 0. 24，水性溶液)6)红外吸收光谱(KBr片方法)cm—1 =3420,2930,1730，1635，1455，1380，1250，1170，10457)紫外吸收光谱(水性溶液)只有末端吸收可见。8)屯-匪1 波谱(500MHz，在020 中)如 US 5，132，112 的图 1 中所示。9)颜色反应与茴香醛、硫酸和碘化物反应阳性。与茚三酮、二硝基苯胼、氯化铁、溴甲酚绿和Dragendorffs试剂反应阴性。此外，在W0 89/00428中提到了 ANP受体拮抗剂，也作为本说明书的一部分。也已 知道，某些ANP衍生物能够表现出拮抗性质(JP-A-225399/88)，这些拮抗剂也作为本说明 书的一部分。脂质寡糖例如HS-142-1已知是ANP受体的拮抗剂，这些拮抗剂及其生产描述在Yi Qiu 等，Biosci. Biotech, Biochem, 60 (8) 1308-1316，1996 中，在此以其生产的范畴引为参 考。具体来说，这包括龙胆己糖基(gentiohexaosyl)衍生物作为ANP受体拮抗剂。这样的 衍生物的实例是HS-142-1，0-(3-0-己酰-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃 葡萄糖⑴，0-(3-0_己基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃葡萄糖⑷和 0-(3-0-己酰 _2，4，6_ 三-0-甲基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)]2-2，3，4_ 三-0-甲 基-D-吡喃葡萄糖⑵。HS-142-1是ANP拮抗剂，是用己酰基团(数量为5_15)部分乙酰化的0 _1 — 6寡 聚葡萄糖苷(DP:10-30)的混合物。在上述发明的特别优选实施方案中，腺苷受体拮抗剂是1，3- 二丙基-8- (3-降金 刚烷基)黄嘌呤。ANP受体拮抗剂施用的浓度能够以下述方式增加利尿钠肽、更具体为ANP的效应。 通过增加配体在ANP受体上的结合(没有相应的激活)，阻断了受体与其天然配体的结 合。如果用有限浓度的拮抗剂进行治疗(最多95%、优选最多90%的受体被结合，最优选 80%)，由被占据的受体诱导的新的受体合成导致游离受体的总数高于治疗前。然后受体的 增加由于游离配体与结合配体的平衡移向有利于产生生物学效应的结合配体，导致内源性 激素的排钠利尿效应上调。如果至少50%、优选70%、最优选80%但是不超过95%的受体被拮抗剂占据，将 发生这种效应。在HS-142-1的情况下，这通常相当于O.Olmg到0. lmg HS 142_l/kg体重、 优选为0. 05mg/kg的剂量。本技术领域的专业人员知道，拮抗剂、包括ANP受体拮抗剂的浓度范围取决于拮 抗剂的亲和性。在测定到的受体占有率和受体亲和性的基础上，本技术领域的专业人员能 够确定相关拮抗剂的相关剂量。(这种确定也能通过pro-ANP的血浆浓度来指导，例如在 > 74pmol/l (血浆浓度)下，可以确定lx Pro-ANP-100x Pro-ANP的范围，即在4升血浆和 100pmol/l的Pro-ANP值下，每次施用在400pmol-40nmol拮抗剂的范围内。)当至少50%、优选70%、最优选80%但是不超过95%的受体被拮抗剂占据时，将 发生腺苷受体拮抗剂的所需效应。一般来说，在优选的1，3_ 二丙基-8-(3-降金刚烷基) 黄嘌呤的情况下，这相当于0. 025到lmg/kg体重、优选0. 5mg/kg的剂量。如果有临床表现的神经变性疾病是阿茨海默氏痴呆类型，上述药物将特别有用。因此，在优选实施方案中，活性物质是ANP受体拮抗剂，并以至少50%、优选70%、 最优选80 %但是不超过95 %的ANP受体被占据的剂量施用。在另一个优选实施方案中，活性物质是腺苷受体拮抗剂，并以至少50%、优选 70 %、最优选80 %但是不超过95 %的腺苷受体被占据的剂量施用。在优选实施方案中，这些药物被用于治疗特定的患者组，其中所选择的患者组，在 其循环中测量到的循环相关肽生物标志物升高的基础上，可以被鉴定为发生临床明显形式 的阿茨海默氏痴呆的风险增加的患者。在下面还描述了一种体外方法，用于筛选被具体鉴 定为发生有临床表现的阿茨海默氏痴呆的风险增加的患者的患者组。在这些患者中，特别 推荐使用本发明的上述ANP拮抗剂进行治疗。在本发明的优选实施方案中，治疗是预防性治疗。通过筛选方法能够鉴定其他的ANP受体拮抗剂，它们也形成了本发明的主题。因 此，本发明的主题是用于鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂的筛选方法，方法包括下列阶段〇进行竞争性受体分析以鉴定潜在的拮抗剂，〇测试潜在拮抗剂阻断ANP诱导的cGMP形成的能力，以及〇鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂。潜在的ANP受体拮抗剂候选物可以在例如放射受体分析法或放射免疫分析法的 基础上发现，在这些分析法中鉴定了抑制放射活性标记的ANP的候选物。这些分析法对于 本技术领域的专业人员来说是已知的，并描述在例如Capper等，(1990)Clin. Chem. 36/4， 656的文献中。然后测试潜在候选物阻断ANP诱导的cGMP形成的能力。适合的分析对于本技术 领域的专业人员来说是已知的，可以从例如CisBiointernational公司获得(http://www. htrf. com/products/gpcr/cgmp/)。对于本发明来说，ANP受体拮抗剂是在下面描述的放射受体分析法中具有低于 lOnmol/1、优选低于lOpmol/1的IC5(1值，并在ANP诱导的cGMP阻断分析法中具有低于 lOnmol/1、优选低于lOpmol/1的IC5(1值的化合物。IC50值是观察到从ANP受体上置换配体(ANP)的最大值的一半或阻断ANP诱导的 cGMP形成的最大值的一半时(潜在)拮抗剂(抑制剂)的浓度。放射受体分析法是基于放射活性标记的ANP衍生物被(潜在)拮抗剂从ANP受体 的结合位点上的置换，在本发明中如下进行1.将来自于具有天然或重组ANP受体(鸟苷酸环化酶A或B)的动物或人类组织 (优选为肾细胞制备物)或适合的细胞系的重构膜结合ANP受体，以100-100，000个细胞/ 分析的细胞计数提供在PH 7. 5的50mM PBS缓冲溶液中。2.加入lfM到100nM的(潜在)拮抗剂2000-100，OOOcpm放射活性标记的ANP 1-28，所述ANP 1-28在Tyr 28上以约2200Ci/mmol用放射性碘标记(放射性碘标记利用 本技术领域的专业人员已知的氯胺T方法进行)，使得ANP/ANP受体的比例在100 1到 1 100之间。3.在室温温育90分钟。4.离心(30分钟，4°C，2000g)以分离受体和上清液5.通过使用Y计数器检测放射活性来测定游离(上清液)和受体结合的(沉淀) 放射活性标记的ANP肽的浓度。6.从受体结合的放射活性标记的ANP肽浓度作为添加的拮抗剂浓度的函数，确定 IC5o 值。HTRF (均相时间分辨荧光)cGMP 阻断分析(CisBio international, Bagnols-sur-CSze，法国)是基于(潜在)拮抗剂对ANP诱导的cGMP形成的抑制。利用了 膜结合的鸟苷酸环化酶(1型)被ANP激活这一事实。在cGMP阻断分析中，在存在各种不 同浓度的(潜在)拮抗剂的情况下，测定了通过存在的ANP受体形成的cGMP。在竞争性免 疫分析中，将每种情况下形成的cGMP的量与已知浓度的荧光标记的cGMP进行比较，则也通 过荧光标记的抗cGMP抗体进行测定。在本发明中，HTRF cGMP分析如下进行1.将来自于具有天然或重组ANP受体(鸟苷酸环化酶)的动物或人类组织(优选
9为肾细胞制备物)或适合的细胞系的膜结合ANP受体，以100-100，000个细胞/分析的细 胞计数提供在PH 7. 2的50mM PBS，0. 2% BSA中。2.加入lfM到100nM的(潜在)拮抗剂和5-100，OOOpM的人类ANP 1-28。3 在37°C温育30分钟。4.通过在裂解缓冲液中加入cGMP_d2和在竞争性免疫分析中加入抗cGMP穴合物 (抗cGMP抗体在裂解缓冲液中)，测定了形成的cGMP的浓度。cGMP浓度与665/620nm处荧 光强度的比率成正比。从形成的cGMP对相关拮抗剂浓度的依赖性，确定了 IC5(I值。通过测定例如相关患者的血清或血浆样品中的循环相关(血管活性)肽而诊 断(以该术语的广义定义)神经变性疾病的方法，描述在本申请人较早的申请中，更具 体来说是DE 102006023175A1和W02007/131775A1中，其中证实了神经变性疾病的严 重性与患者样品中可测量到的利尿钠肽浓度之间的统计学相关的关联性，以及描述在 DE102006027818A1和W0 2007/144194A1中，其中描述了如果同时考虑一种以上血管活性 肽，更具体来说采取一方面是患者样品中血管舒张肽、另一方面是血管收缩肽的浓度的组 合的形式，可以获得甚至更好的、统计学上更相关的关联性。在所述较早申请中描述的测量，使用已经被诊断为患有“高级神经变性疾病”的患 者、或至少怀疑患有这种疾病的早期形式的患者的样品(更具体为血浆样品)来进行。测量没有进行预后目的的评估，因为对其样品被测量的个体患者的进一步医学发 展没有进行较长期的跟踪，并且没有与以前测量到的生物标志物浓度相关联。但是，所述较早的申请包含了不同类型的神经变性疾病的已接受的临床定义和它 们的正确诊断问题的详细讨论。因为本申请至少部分基于这两个被引用申请中的检查发 现，因此本技术领域的有兴趣的专业人员，除了下面的陈述之外，可以特别参考这两份较早 申请的全部内容。正如已经陈述的，神经变性疾病(痴呆病)一般倾向于是缓慢发展的非感染性病 源慢性疾病。做出可靠诊断所需的长观察期，不仅在其诊断和预后上，而且对于研究所述疾 病和开发有效的预防和治疗策略方面，都构成了相当大的难题。通常被称为痴呆病(痴呆)的病症，其共同特点是作为脑损伤的结果丧失了获得 性智力能力，尤其是记忆和正常的人格水平。如果痴呆症状不是发生在老年而是在中年，则 被称为早老性痴呆。在典型症状和死后确定的病理性脑部异常的基础上，痴呆症由各种不同的疾病或 疾病群构成其中，阿茨海默氏痴呆(阿茨海默氏病)是最常见的神经变性痴呆病。它占所有 痴呆症病例的2/3，在实践中是本发明的最重要的应用领域。AD的特点在于有三个重要特 征，但是只能通过验尸确定来确定淀粉样斑块和神经原纤维束的形成以及神经细胞的丧 失(也参见上述较早申请的说明书的介绍)。其他在本发明的框架中重要性较低因此没有在本文中详细讨论的痴呆病是所谓 的血管性痴呆(VAD)，其中痴呆通过脑中的血液供应障碍而发生。有不同类型的VAD，其中 多发性梗死性痴呆(MID)和皮层下VAD(也称为Binswanger' s病)是最常见的形式。此 外，为了完整起见，应该提到路易体痴呆(DBL)和也称为Pick’ s病的额颞痴呆(FTD)。各种不同痴呆病典型的脑部变化当然不能在活着的患者中直接确定，使用例如x-射线或磁共振成像进行脑功能的技术检查又是繁琐而昂贵的。因此，即使到今天，痴呆病 也是诊断不足或诊断不准确的，预后和治疗可能性也相应差。因此，本申请人的工作旨在通 过开发使用相对简单的测量方法，提高神经变性疾病的诊断和预后可能性、特别是AD的诊 断，作为所述测量方法的一部分，在来自患者的血液循环的样品中，鉴定了可容易地测量的 生物标志物。本发明的有希望的生物标志物包括各种循环相关肽生物标志物，作为本发明的方 法的一部分，从中确定了具有血管舒张剂作用的肽形式的生物标志物，更具体来说是利尿 钠肽例如ANP、BNP和/或CNP和/或肽肾上腺髓质素(ADM)。例如，通过测定ANP的浓度显示了利尿钠肽浓度的测定。ANP在本申请人的鉴定 proANP中段(MR-proANP)的分析法的帮助下，优选被测定为pro-ANP片段的浓度。这种类 型的分析法描述在EP 1562984B1和Nils G. Morgenthaler等，“用于在人类血浆中测定心 房利尿钠肽原中段的免疫发光分析法”(Immunoluminometric Assay for theMidregion of Pro-Atrial Natriuretic Peptide in Human Plasma), ClinicalChemistry 50:1,2004, 234-236 中。肾上腺髓质素(ADM)的浓度优选被测定为中段proADM片段(MR-proADM)的浓度， 该片段包含前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸。适合的分析法描述在EP 1488209B1和 W0 2004/090546以及Nils G. Morgenthaler等，“使用免疫发光分析法测量血浆中的中段 肾上腺髓质素原” (Measurement of Midregional Proadrenomedul 1 in in Plasmawith an Immunoluminometric Assay), Clinical Chemistry 51 :10,2005,1823-1829 中。如果在本申请中使用了例如“肽生物标志物的浓度”这样的术语或类似术语，这不 仅仅意味着限制性均衡意义上生物样品中可测量的实际血管活性肽的静态浓度。在本发明的文本中讨论的最重要的病理生理释放的实际血管活性肽，仅以可自由 或不受限制地测量的形式少量存在于生物流体中。相当大部分病理生理释放的实际血管活 性肽，通过与受体和其他膜或血管结构结合，从生物流体中快速移除和/或降解。从同样的前体肽原形成的无活性共肽(co-p印tide)的测量，在本发明的情况中 优选使用申请人的所述分析法进行，与生物流体中可测量到的瞬时浓度相反，反映出的是 血管活性肽在“活性浓度”意义上在较长时期内的释放，并允许也间接地同时记录最初释放 的血管活性肽的结合的或快速降解的部分。连同这类共肽的更高的稳定性，这产生了在生 物流体例如血清或血浆中目标分析物的更高的可测量的绝对浓度值。在疾病倾向于具有慢性过程而没有患者状况的突然恶化或改善的情况下，正如痴 呆症的通常情况下，有相当大的可能性是，对于各种不同的疾病相关分析物来说，将产生仅 仅轻微的变化、仅仅缓慢改变的静态整体状况。因此，在患者的生物流体中可静态测量的肽 生物标志物类型的活性分析物、在本情况下是血管活性肽的浓度，可能与相同分析物在较 长时期内的病理生理释放量基本上成正比，正如可以测量生理无活性的共肽形式。这意味 着与在本发明的无活性共肽的优选测定中测定的健康人的对照值的偏差，以及这些偏差的 疾病典型过程，也反映在活性肽的一般较低的静态浓度中，使得对测量到的“分析物浓度” 的具体选择，将不对诊断评估具有决定性的定性影响。作为本发明的一部分，为了测量目的，可以使用患者血浆样品的集合，它们包括在 被诊断患有“轻度认知障碍”时(t = 0) ( “MCD患者”)获得的患者血浆样品。然后在为期6年中记录个体患者健康状态的后续发展。已经发现，在MCD患者血浆中检测的生物标志物的浓度，与没有认知障碍的对照 者相比平均升高了，并且在发现的浓度范围内可以确定截止浓度值，该值允许将以后转变 成AD的风险低的MCD患者，与以后转变成AD的风险相当高的MCD患者区分开。通过同时 考虑两种生物标志物，进一步增加了患者组之间的差异。正如将在实验部分中显示的，当发明人也根据记录的病史检查结果，以观察在发 展出有临床表现的神经变性疾病(阿茨海默氏痴呆)的意义上没有发生或明显延迟发生 的后续转变的患者，是否出于其他原因已经经历了使用某些药物或药物类型的治疗时，他 能够显示，显然使用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂的治疗，对于预后具有正面影 响，其形式为避免或延迟了 “向AD的转变”。这显示出，对于患有轻度认知障碍的患者来说，不仅可能在诊断时进行风险度分 层，而且能够向测定到向AD转变的风险增高的患者推荐合理的新疗法，这种疗法目前还没 有构成重要专家的疗法总汇中的一部分，即使用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂 的疗法，或使用ANP受体拮抗剂或腺苷受体拮抗剂的疗法。上述的心血管药剂和抗高血压药剂是已知的经历了广泛临床试验的药剂。目前常 规治疗性使用和/或作为预防的抗高血压药剂基本上表现为四种不同类型的药物，即血管 紧张素转换酶抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧张素II受体拮抗剂(“沙坦”)、0 -阻断剂和 用于降低血压的利尿剂类型的药剂。关于目前使用的这些药剂类型以及广泛处方的所述活性物质类别代表的进一步 详细情况，可以在涉及降低高血压患者血压的非常广泛的专业文献中发现。仅作为例子列出的ACE抑制剂是药物卡托普利、依那普利、赖诺普利和雷米普利， 作为血管紧张素II受体亚型1拮抗剂(ATI拮抗剂；沙坦)的代表是药物氯沙坦、缬沙坦、 坎地沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、依普罗沙坦和奥美沙坦，作为利尿剂、特别是所谓的噻嗪利 尿剂的是例如氢氯噻嗪和噻嗪类似物例如Clorthalidon、氯帕胺(Clopramid)、吲达帕胺、 美托拉腙、希帕胺和美夫西特。下面的表1简要概括了关于各种不同类型药剂及其作用机制的基本信息表1:
1权利要求
一种药物，其包含一种或多种心血管药剂活性物质，所述一种或多种心血管药剂活性物质选自ANP受体拮抗剂、腺苷受体拮抗剂、ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、β 阻断剂和抗高血压利尿剂及其组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。
2.权利要求1的药物，其中ANP受体拮抗剂是葡萄糖_己酸聚合物。
3.权利要求1的药物，其中腺苷受体拮抗剂是1，3_二丙基-8-(3-降金刚烷基)黄嘌呤。
4.权利要求1或2任一项的药物，其中活性物质是ANP受体拮抗剂，并且所述拮抗剂以 至少50 %的ANP受体被占据的剂量施用。
5.权利要求1或3任一项的药物，其中活性物质是腺苷受体拮抗剂，并且所述拮抗剂以 至少50%的腺苷受体被占据的剂量施用。
6.权利要求1到5任一项的药物，其中有临床表现的神经变性疾病是阿茨海默氏痴呆型。
7.权利要求1到6任一项的药物，其中用于治疗，选择一组患者，所述患者基于在其循 环系统中能测量到的循环相关肽生物标志物的升高，可以被鉴定为发生有临床表现的阿茨 海默氏痴呆形式的风险增加的患者。
8.一种鉴定患有轻度认知障碍需要治疗的患者的体外方法，所述方法包括_在来自被诊断患有轻度认知障碍的患者的循环系统的生物流体样品中，测定至少一 种循环相关肽生物标志物，和-发生有临床表现的神经变性疾病的风险增加被指定为至少一种循环相关的肽生物 标志物的浓度超过在所述标志物通常浓度值范围内设置的生物标志物特异性阈值(截止 值)。
9.权利要求8的体外方法，其中对于具有被确定的较高风险的患者，推荐使用权利要 求1到6的药物进行治疗。
10.权利要求8或9的方法，其特征在于样品是血清或血浆样品。
11.权利要求8到10任一项的方法，其特征在于循环相关肽生物标志物选自利尿钠肽 ANP和/或BNP和/或肾上腺髓质素(ADM)，或选自其相关的激素原pro_ANP、pro-BNP或 pro-ADM的片段。
12.权利要求8到11任一项的方法，其特征在于推荐使用抗高血压药剂类的心血管药 剂进行治疗，所述抗高血压药剂选自用于降血压的“血管紧张素转换酶”的抑制剂(ACE抑 制剂)、血管紧张素II受体拮抗剂(“沙坦”)、β -阻断剂和利尿剂。
13.权利要求11的方法，其特征在于测定使用免疫诊断测定方法进行，并且测定相对 于实际的循环相关肽来说具有减弱的或不能检测的生理效应的循环相关肽的激素原前体 片段。
14.权利要求13的方法，其特征在于测定含有pro-ANP的中间部分的pro-ΑΝΡ片 段(MR-pro-ANP)和/或含有前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸的中段pro-ADM片段 (MR-proADM)的浓度。
15.一种鉴定心房利尿钠肽受体拮抗剂的筛选方法，所述方法包括下列阶段〇进行竞争性受体分析以确定潜在的拮抗剂，〇测试潜在拮抗剂阻断ANP诱导的cGMP形成的能力，以及 〇鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂。
16.循环相关肽生物标志物、更具体是利尿钠肽ANP、BNP和/或肾上腺髓质素(ADM)或 其片段或其相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段在对患有轻度认知障碍表现出 向有临床表现的神经变性疾病转变的风险增加的患者进行分层或鉴定中的应用。
17.—种ANP受体拮抗剂，其用作药物。
18.权利要求17的ANP受体拮抗剂，其中ANP受体拮抗剂是葡萄糖-己酸聚合物。
全文摘要
一种用于鉴定需要治疗的患者的方法，以及对这种患有轻微认知障碍的患者进行预防性治疗的方法，其中在先期风险度分层过程中，作为可以在所述患者的循环中测量到的循环相关肽生物标志物增加的结果，可以确定所述患者发生有临床表现的阿茨海默氏病的风险增加，所述治疗使用含有心血管药剂的一种或多种活性成分的药物，所述心血管药剂选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、β-阻断剂和降血压利尿剂及其组合，或使用含有一种或多种ANP受体拮抗剂或者一种或多种腺苷受体拮抗剂的药物。
文档编号A61K31/00GK101977594SQ200980110223
公开日2011年2月16日 申请日期2009年1月29日 优先权日2008年2月1日
发明者安德烈亚斯·贝格曼 申请人:B.R.A.H.M.S有限公司
患有轻度认知障碍需要治疗的患者的鉴定方法以及这种患
者的治疗本发明涉及患有轻度认知障碍的患者的新的体外风险度分层方法，目的在于当患 者处于其最初的轻度认知障碍恶化和发生有临床表现的阿茨海默氏痴呆型神经变性疾病 的风险增加时，鉴定需要治疗的患者，以及目的在于给这种需要治疗的患者提供某些药物， 这些药物对于与此相关的治疗目的的适合性所组成的知识，形成了本发明的基本部分。本发明还涉及在生物标志物测量基础上鉴定到的患有轻度认知障碍的某些风险 患者的预防性治疗方法，所述治疗方法使用心血管药剂以预防或延迟有临床表现的阿茨海 默氏痴呆型神经变性疾病的发生，或在这种方法中心血管药剂的活性物质的应用和ANP受 体拮抗剂的应用，以及用于所述预防或延迟有临床表现的阿茨海默氏痴呆型神经变性疾病 的发生的药物的生产方法。在本申请的框架内，对于被诊断患有“轻度认知障碍”(缩写为MCD)的患者来 说，对他们后来发生被证实的有临床表现的神经变性疾病的初始风险进行了回顾性评估， 此外从他们的既往病史(病历)确定了经回顾证明能改善预后的因素。在英语文献中， 用于证实“轻度认知障碍”的标准最近已被置于术语“轻度认知损害”(缩写为MCI)下处 理。关于这一点，可以参考例如Serge Gauthier等在Lancet 2006，367 1262-1270中 的“轻度认知损害”(Mild cognitive impairmen)，以及 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 1999，56 303-308中的“轻度认知损害，临床特征和结果” (Mild Cognitive Impairment, CIinicalCharacterization and Outcome),或 Ronald C. Petersen 等在 Arch Neurol. 2001 ；58 :1985_1992 中的“轻度认知损害的当前概念” (Current Conceptsin Mild Cognitive Impairment)。有关确定患者的MCD或MCI状态所使用的一种测试方法，检查 了被评估的人的被称为“简易智力状态”(Mini Mental State, MMS)的参数，参见Marshal F. Folstein等在J. Psychiat. Res.，1975，189-198中的“简易智力状态——临床医生对 患者的认知状态进行分级的实用方法”(MINI-MENTAL STATE-apractical method for grading the cognitive state of patients for theclinician)。在那些在某个时间点，在自我观察或对他们的环境观察的基础上，已经确定了 “轻 度认知障碍”(MCD)的患者中，或在满足“轻度认知损害”(MCI)的标准的患者中，已知只有 某些患者将被观察到其状况的进行性恶化。只有某些患者逐渐发生神经变性疾病、例如阿 茨海默氏痴呆(AD)型的全部临床症状。在其他患者中，发生了不同类型的痴呆，例如血管 性痴呆。还有的其他MCD或MCI患者没有发生任何可注意到的恶化，有时最初的症状甚至 消失。发生了神经变性疾病的第一组，也被称为“向阿茨海默氏病转变者”(转变者)组，而 后面的组是“非转变者”组。根据所述的初始状况，在被诊断患有“轻度认知障碍”的患者组中，能够在诊断时 评估个体是否可能属于“向阿茨海默氏病转变者”组的风险将是理想的，以便如果测定到高 风险，能够启动早期预防或治疗性措施(如果这种措施存在的话)，而当仅仅测定到这种转 变的低风险时，能够避免不必要的措施，并解除患者相当大的心理负担。为向阿茨海默氏病转变的风险增加的患者提供保证在避免或延迟转变的意义上有长期功效的治疗，也将是理想的。本发明的目的是提供一种方法，所述方法允许以高的统计概率鉴定向阿茨海默氏 病转变者组，并且也为决定是否向鉴定到的转变者提供有效的预防性治疗，产生了基础。这些目的通过本技术领域的专业人员可以从权利要求书中收集到方法及其优选 实施方案来实现。本发明的一个方面体现了体外分析方法，在临床发现的基础上被诊断患有“轻度 认知障碍”的患者组中，所述方法允许在诊断时鉴定具有后续向阿茨海默氏病转变的高风 险的患者，也允许对这些患者进行具体的治疗推荐。在本发明的框架内，作为第一阶段，使用体外分析方法测定患者样品(血浆、血 清)中循环相关的肽生物标志物的浓度，并且在发现测定浓度与相应的参比浓度相比升高 的情况下，推荐对所述患者用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂进行治疗，或使用 ANP受体拮抗剂进行治疗，正如下面描述的评估所显示的，使用抗高血压药剂或使用ANP受 体拮抗剂进行的治疗降低了鉴定到的轻度认知障碍恶化成明显的阿茨海默氏痴呆(AD)型 神经变性疾病的风险。因此，本发明的主题是患有轻度认知障碍需要治疗的患者的体外鉴定方法，在所 述方法中 在来自被诊断患有轻度认知障碍的患者的循环的生物学流体样品中测定至少 一种循环相关的肽生物标志物，并且 所述至少一种循环相关的肽生物标志物的浓度超过所述标志物通常在轻度认 知障碍病例中浓度的浓度值范围中设置的生物标志物特异性阈值(截止值)，则被指定为 发生有临床表现的神经变性疾病的风险增加。对于具有测定到的较高风险的患者，可以推荐使用下面的药物进行治疗。根据本发明的体外方法，样品优选为血清或血浆样品。优选循环相关的肽生物标志物选自利尿钠肽ANP和/或BNP和/或肾上腺髓质素 (ADM)，或选自它们的相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段。优选本发明方法的特征还在于推荐使用抗高血压药剂类的心血管药剂进行治疗， 所述抗高血压药剂选自用于降血压的“血管紧张素转换酶”的抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧 张素II受体拮抗剂(“沙坦(sartans) ”)、0 -阻断剂或利尿剂。或者，可以推荐使用ANP 受体拮抗剂或腺苷受体拮抗剂进行治疗。在优选实施方案中，测定使用免疫诊断测定方法进行。相对于实际的循环相关肽 来说生理效应降低或测不到的循环相关肽，测定其激素原前体片段，也是优选的。在特别优选的实施方案中，方法的特征在于测定了含有pro-ANP的中间部分 的pro-ANP片段(MR-pro-ANP)和/或含有前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸的中段 pro-ADM 片段(MR-proADM)的浓度。在本发明的情况下，优选的阈值对于MR-ProANP来说是50-1 OOpmo 1 /1，优选为 60-90pmol/l，对于 MR-ProADM 来说是 0. 4-0. 8nmol/l，优选为 0. 5-0. 7nmol/l。本发明的另一个主题是使用循环相关肽生物标志物、特别是利尿钠肽ANP、BNP和 /或肾上腺髓质素(ADM)或其片段或其相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段， 对患有轻度认知障碍、转变成有临床表现的神经变性疾病的风险增加的患者进行分层或鉴
5定。另一方面，本发明涉及对患有轻度认知障碍的患者进行预防性治疗的方法，在所 述患者中测定到了其状况恶化成有临床表现的阿茨海默氏型神经变性疾病的显著风险(AD 风险患者)，所述治疗方法使用了含有心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂的一种或多 种活性物质的药物，以及含有一种或多种ANP受体拮抗剂的药物。另一方面，本发明涉及心血管药剂的一种或多种活性物质以及一种或多种ANP受 体拮抗剂、更具体来说是抗高血压药剂在预防性治疗AD风险患者或生产预防性治疗AD风 险患者的药物中的应用。本发明的主题是药物，所述药物包含心血管药剂的一种或多种活性物质，所述心 血管药剂选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、3 -阻断剂和抗高血压利尿剂及其 组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变 性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。此外，本发明的主题是含有心房利尿钠肽受体(ANP受体)拮抗剂的药物，用于治 疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。因此，本发明的主题是含有心房利尿钠肽受体拮抗剂的药物在生产药物来治疗患 有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生或者改善或维 持轻度认知障碍的状态中的应用。本发明的主题还是用于治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治 疗有效量的ANP受体拮抗剂，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。此外，本发明的主题是含有腺苷受体拮抗剂的药物，所述药物用于治疗患有轻度 认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻 度认知障碍的状态。因此，本发明的主题是含有腺苷受体拮抗剂的药物在生产药物来治疗患有轻度认 知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生或者改善或维持轻度认 知障碍的状态中的应用。因此，本发明的主题还是药物，所述药物包含心血管药剂的一种或多种活性物质， 所述心血管药剂选自ANP受体拮抗剂、腺苷受体拮抗剂、ACE抑制剂、血管紧张素II受体 拮抗剂、0 -阻断剂和抗高血压利尿剂及其组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患 者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的 状态。本发明的主题还是用于治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治 疗活性量的腺苷受体拮抗剂，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改 善或维持轻度认知障碍的状态。腺苷受体是一类嘌呤能的G-蛋白偶联受体(GPCR)，其内源配体是腺苷。可以区分 出四种类型A1、A2A、A2B和A3，其在体内的分布和功能有部分交叠和部分不同。腺苷受体 亚型彼此之间在生物化学效应和信号途径方面也有差别。这些亚型每一种的激动剂和拮抗 剂都是已知的，其中某些激动剂和拮抗剂是非特异性的，对所有腺苷受体显示出效应。
本发明的主题还是治疗患有轻度认知障碍的患者的治疗性方法，其中施用治疗活 性量的心血管药剂的一种或多种活性物质，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的 发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。这样的心血管药剂具体选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、0 -阻断剂 和抗高血压利尿剂及其组合。本发明的ANP受体拮抗剂是可治疗性施用的物质，它与ANP受体结合，从而阻止或 减少了天然配体ANP的结合，并且不引起鸟苷酸环化酶的活化，导致cGMP不增加或少增加， 从而降低了内源性ANP的排钠利尿效应。本发明的腺苷受体拮抗剂是可治疗性施用的物质，它与腺苷受体结合，从而阻止 或减少了天然配体腺苷的结合，并且不引起鸟苷酸环化酶的活化，导致cGMP不增加或少增 加，从而降低了内源性腺苷的效应。在上述本发明的特别优选实施方案中，ANP受体拮抗剂是葡萄糖己酸聚合物(葡 萄糖己酸，更具体是用己酸酯化的0 1 — 6葡聚糖)。ANP受体拮抗剂的特别重要的代表是 HS-142-1 (US 5，132，112)。在US 5，132，112中提到的所有拮抗剂构成了本说明书的一部 分，都是本发明的ANP受体拮抗剂。在US 5，132，112中，HS-142-1化合物被表征如下这些化合物包含用己酸酯化的直链0 1 — 6葡聚糖，其中D-葡萄糖残基的数量是 28，己酸残基的数量是11。这些化合物基本上具有下列物理化学性质1)外观白色粉末2)熔点:175-185°C3)分子式C234H39201524)质谱(负FAB质谱)发现值M/Z5536. 5 (M-H)“计算值:M/Z5637. 35)比旋[a ]24D = -29. 4° (c 0. 24，水性溶液)6)红外吸收光谱(KBr片方法)cm—1 =3420,2930,1730，1635，1455，1380，1250，1170，10457)紫外吸收光谱(水性溶液)只有末端吸收可见。8)屯-匪1 波谱(500MHz，在020 中)如 US 5，132，112 的图 1 中所示。9)颜色反应与茴香醛、硫酸和碘化物反应阳性。与茚三酮、二硝基苯胼、氯化铁、溴甲酚绿和Dragendorffs试剂反应阴性。此外，在W0 89/00428中提到了 ANP受体拮抗剂，也作为本说明书的一部分。也已 知道，某些ANP衍生物能够表现出拮抗性质(JP-A-225399/88)，这些拮抗剂也作为本说明 书的一部分。脂质寡糖例如HS-142-1已知是ANP受体的拮抗剂，这些拮抗剂及其生产描述在Yi Qiu 等，Biosci. Biotech, Biochem, 60 (8) 1308-1316，1996 中，在此以其生产的范畴引为参 考。具体来说，这包括龙胆己糖基(gentiohexaosyl)衍生物作为ANP受体拮抗剂。这样的 衍生物的实例是HS-142-1，0-(3-0-己酰-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃 葡萄糖⑴，0-(3-0_己基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)-
2-D-吡喃葡萄糖⑷和 0-(3-0-己酰 _2，4，6_ 三-0-甲基-3-D-吡喃葡萄糖基)_(1 — 6)]2-2，3，4_ 三-0-甲 基-D-吡喃葡萄糖⑵。HS-142-1是ANP拮抗剂，是用己酰基团(数量为5_15)部分乙酰化的0 _1 — 6寡 聚葡萄糖苷(DP:10-30)的混合物。在上述发明的特别优选实施方案中，腺苷受体拮抗剂是1，3- 二丙基-8- (3-降金 刚烷基)黄嘌呤。ANP受体拮抗剂施用的浓度能够以下述方式增加利尿钠肽、更具体为ANP的效应。 通过增加配体在ANP受体上的结合(没有相应的激活)，阻断了受体与其天然配体的结 合。如果用有限浓度的拮抗剂进行治疗(最多95%、优选最多90%的受体被结合，最优选 80%)，由被占据的受体诱导的新的受体合成导致游离受体的总数高于治疗前。然后受体的 增加由于游离配体与结合配体的平衡移向有利于产生生物学效应的结合配体，导致内源性 激素的排钠利尿效应上调。如果至少50%、优选70%、最优选80%但是不超过95%的受体被拮抗剂占据，将 发生这种效应。在HS-142-1的情况下，这通常相当于O.Olmg到0. lmg HS 142_l/kg体重、 优选为0. 05mg/kg的剂量。本技术领域的专业人员知道，拮抗剂、包括ANP受体拮抗剂的浓度范围取决于拮 抗剂的亲和性。在测定到的受体占有率和受体亲和性的基础上，本技术领域的专业人员能 够确定相关拮抗剂的相关剂量。(这种确定也能通过pro-ANP的血浆浓度来指导，例如在 > 74pmol/l (血浆浓度)下，可以确定lx Pro-ANP-100x Pro-ANP的范围，即在4升血浆和 100pmol/l的Pro-ANP值下，每次施用在400pmol-40nmol拮抗剂的范围内。)当至少50%、优选70%、最优选80%但是不超过95%的受体被拮抗剂占据时，将 发生腺苷受体拮抗剂的所需效应。一般来说，在优选的1，3_ 二丙基-8-(3-降金刚烷基) 黄嘌呤的情况下，这相当于0. 025到lmg/kg体重、优选0. 5mg/kg的剂量。如果有临床表现的神经变性疾病是阿茨海默氏痴呆类型，上述药物将特别有用。因此，在优选实施方案中，活性物质是ANP受体拮抗剂，并以至少50%、优选70%、 最优选80 %但是不超过95 %的ANP受体被占据的剂量施用。在另一个优选实施方案中，活性物质是腺苷受体拮抗剂，并以至少50%、优选 70 %、最优选80 %但是不超过95 %的腺苷受体被占据的剂量施用。在优选实施方案中，这些药物被用于治疗特定的患者组，其中所选择的患者组，在 其循环中测量到的循环相关肽生物标志物升高的基础上，可以被鉴定为发生临床明显形式 的阿茨海默氏痴呆的风险增加的患者。在下面还描述了一种体外方法，用于筛选被具体鉴 定为发生有临床表现的阿茨海默氏痴呆的风险增加的患者的患者组。在这些患者中，特别 推荐使用本发明的上述ANP拮抗剂进行治疗。在本发明的优选实施方案中，治疗是预防性治疗。通过筛选方法能够鉴定其他的ANP受体拮抗剂，它们也形成了本发明的主题。因 此，本发明的主题是用于鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂的筛选方法，方法包括下列阶段〇进行竞争性受体分析以鉴定潜在的拮抗剂，〇测试潜在拮抗剂阻断ANP诱导的cGMP形成的能力，以及〇鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂。潜在的ANP受体拮抗剂候选物可以在例如放射受体分析法或放射免疫分析法的 基础上发现，在这些分析法中鉴定了抑制放射活性标记的ANP的候选物。这些分析法对于 本技术领域的专业人员来说是已知的，并描述在例如Capper等，(1990)Clin. Chem. 36/4， 656的文献中。然后测试潜在候选物阻断ANP诱导的cGMP形成的能力。适合的分析对于本技术 领域的专业人员来说是已知的，可以从例如CisBiointernational公司获得(http://www. htrf. com/products/gpcr/cgmp/)。对于本发明来说，ANP受体拮抗剂是在下面描述的放射受体分析法中具有低于 lOnmol/1、优选低于lOpmol/1的IC5(1值，并在ANP诱导的cGMP阻断分析法中具有低于 lOnmol/1、优选低于lOpmol/1的IC5(1值的化合物。IC50值是观察到从ANP受体上置换配体(ANP)的最大值的一半或阻断ANP诱导的 cGMP形成的最大值的一半时(潜在)拮抗剂(抑制剂)的浓度。放射受体分析法是基于放射活性标记的ANP衍生物被(潜在)拮抗剂从ANP受体 的结合位点上的置换，在本发明中如下进行1.将来自于具有天然或重组ANP受体(鸟苷酸环化酶A或B)的动物或人类组织 (优选为肾细胞制备物)或适合的细胞系的重构膜结合ANP受体，以100-100，000个细胞/ 分析的细胞计数提供在PH 7. 5的50mM PBS缓冲溶液中。2.加入lfM到100nM的(潜在)拮抗剂2000-100，OOOcpm放射活性标记的ANP 1-28，所述ANP 1-28在Tyr 28上以约2200Ci/mmol用放射性碘标记(放射性碘标记利用 本技术领域的专业人员已知的氯胺T方法进行)，使得ANP/ANP受体的比例在100 1到 1 100之间。3.在室温温育90分钟。4.离心(30分钟，4°C，2000g)以分离受体和上清液5.通过使用Y计数器检测放射活性来测定游离(上清液)和受体结合的(沉淀) 放射活性标记的ANP肽的浓度。6.从受体结合的放射活性标记的ANP肽浓度作为添加的拮抗剂浓度的函数，确定 IC5o 值。HTRF (均相时间分辨荧光)cGMP 阻断分析(CisBio international, Bagnols-sur-CSze，法国)是基于(潜在)拮抗剂对ANP诱导的cGMP形成的抑制。利用了 膜结合的鸟苷酸环化酶(1型)被ANP激活这一事实。在cGMP阻断分析中，在存在各种不 同浓度的(潜在)拮抗剂的情况下，测定了通过存在的ANP受体形成的cGMP。在竞争性免 疫分析中，将每种情况下形成的cGMP的量与已知浓度的荧光标记的cGMP进行比较，则也通 过荧光标记的抗cGMP抗体进行测定。在本发明中，HTRF cGMP分析如下进行1.将来自于具有天然或重组ANP受体(鸟苷酸环化酶)的动物或人类组织(优选
9为肾细胞制备物)或适合的细胞系的膜结合ANP受体，以100-100，000个细胞/分析的细 胞计数提供在PH 7. 2的50mM PBS，0. 2% BSA中。2.加入lfM到100nM的(潜在)拮抗剂和5-100，OOOpM的人类ANP 1-28。3 在37°C温育30分钟。4.通过在裂解缓冲液中加入cGMP_d2和在竞争性免疫分析中加入抗cGMP穴合物 (抗cGMP抗体在裂解缓冲液中)，测定了形成的cGMP的浓度。cGMP浓度与665/620nm处荧 光强度的比率成正比。从形成的cGMP对相关拮抗剂浓度的依赖性，确定了 IC5(I值。通过测定例如相关患者的血清或血浆样品中的循环相关(血管活性)肽而诊 断(以该术语的广义定义)神经变性疾病的方法，描述在本申请人较早的申请中，更具 体来说是DE 102006023175A1和W02007/131775A1中，其中证实了神经变性疾病的严 重性与患者样品中可测量到的利尿钠肽浓度之间的统计学相关的关联性，以及描述在 DE102006027818A1和W0 2007/144194A1中，其中描述了如果同时考虑一种以上血管活性 肽，更具体来说采取一方面是患者样品中血管舒张肽、另一方面是血管收缩肽的浓度的组 合的形式，可以获得甚至更好的、统计学上更相关的关联性。在所述较早申请中描述的测量，使用已经被诊断为患有“高级神经变性疾病”的患 者、或至少怀疑患有这种疾病的早期形式的患者的样品(更具体为血浆样品)来进行。测量没有进行预后目的的评估，因为对其样品被测量的个体患者的进一步医学发 展没有进行较长期的跟踪，并且没有与以前测量到的生物标志物浓度相关联。但是，所述较早的申请包含了不同类型的神经变性疾病的已接受的临床定义和它 们的正确诊断问题的详细讨论。因为本申请至少部分基于这两个被引用申请中的检查发 现，因此本技术领域的有兴趣的专业人员，除了下面的陈述之外，可以特别参考这两份较早 申请的全部内容。正如已经陈述的，神经变性疾病(痴呆病)一般倾向于是缓慢发展的非感染性病 源慢性疾病。做出可靠诊断所需的长观察期，不仅在其诊断和预后上，而且对于研究所述疾 病和开发有效的预防和治疗策略方面，都构成了相当大的难题。通常被称为痴呆病(痴呆)的病症，其共同特点是作为脑损伤的结果丧失了获得 性智力能力，尤其是记忆和正常的人格水平。如果痴呆症状不是发生在老年而是在中年，则 被称为早老性痴呆。在典型症状和死后确定的病理性脑部异常的基础上，痴呆症由各种不同的疾病或 疾病群构成其中，阿茨海默氏痴呆(阿茨海默氏病)是最常见的神经变性痴呆病。它占所有 痴呆症病例的2/3，在实践中是本发明的最重要的应用领域。AD的特点在于有三个重要特 征，但是只能通过验尸确定来确定淀粉样斑块和神经原纤维束的形成以及神经细胞的丧 失(也参见上述较早申请的说明书的介绍)。其他在本发明的框架中重要性较低因此没有在本文中详细讨论的痴呆病是所谓 的血管性痴呆(VAD)，其中痴呆通过脑中的血液供应障碍而发生。有不同类型的VAD，其中 多发性梗死性痴呆(MID)和皮层下VAD(也称为Binswanger' s病)是最常见的形式。此 外，为了完整起见，应该提到路易体痴呆(DBL)和也称为Pick’ s病的额颞痴呆(FTD)。各种不同痴呆病典型的脑部变化当然不能在活着的患者中直接确定，使用例如x-射线或磁共振成像进行脑功能的技术检查又是繁琐而昂贵的。因此，即使到今天，痴呆病 也是诊断不足或诊断不准确的，预后和治疗可能性也相应差。因此，本申请人的工作旨在通 过开发使用相对简单的测量方法，提高神经变性疾病的诊断和预后可能性、特别是AD的诊 断，作为所述测量方法的一部分，在来自患者的血液循环的样品中，鉴定了可容易地测量的 生物标志物。本发明的有希望的生物标志物包括各种循环相关肽生物标志物，作为本发明的方 法的一部分，从中确定了具有血管舒张剂作用的肽形式的生物标志物，更具体来说是利尿 钠肽例如ANP、BNP和/或CNP和/或肽肾上腺髓质素(ADM)。例如，通过测定ANP的浓度显示了利尿钠肽浓度的测定。ANP在本申请人的鉴定 proANP中段(MR-proANP)的分析法的帮助下，优选被测定为pro-ANP片段的浓度。这种类 型的分析法描述在EP 1562984B1和Nils G. Morgenthaler等，“用于在人类血浆中测定心 房利尿钠肽原中段的免疫发光分析法”(Immunoluminometric Assay for theMidregion of Pro-Atrial Natriuretic Peptide in Human Plasma), ClinicalChemistry 50:1,2004, 234-236 中。肾上腺髓质素(ADM)的浓度优选被测定为中段proADM片段(MR-proADM)的浓度， 该片段包含前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸。适合的分析法描述在EP 1488209B1和 W0 2004/090546以及Nils G. Morgenthaler等，“使用免疫发光分析法测量血浆中的中段 肾上腺髓质素原” (Measurement of Midregional Proadrenomedul 1 in in Plasmawith an Immunoluminometric Assay), Clinical Chemistry 51 :10,2005,1823-1829 中。如果在本申请中使用了例如“肽生物标志物的浓度”这样的术语或类似术语，这不 仅仅意味着限制性均衡意义上生物样品中可测量的实际血管活性肽的静态浓度。在本发明的文本中讨论的最重要的病理生理释放的实际血管活性肽，仅以可自由 或不受限制地测量的形式少量存在于生物流体中。相当大部分病理生理释放的实际血管活 性肽，通过与受体和其他膜或血管结构结合，从生物流体中快速移除和/或降解。从同样的前体肽原形成的无活性共肽(co-p印tide)的测量，在本发明的情况中 优选使用申请人的所述分析法进行，与生物流体中可测量到的瞬时浓度相反，反映出的是 血管活性肽在“活性浓度”意义上在较长时期内的释放，并允许也间接地同时记录最初释放 的血管活性肽的结合的或快速降解的部分。连同这类共肽的更高的稳定性，这产生了在生 物流体例如血清或血浆中目标分析物的更高的可测量的绝对浓度值。在疾病倾向于具有慢性过程而没有患者状况的突然恶化或改善的情况下，正如痴 呆症的通常情况下，有相当大的可能性是，对于各种不同的疾病相关分析物来说，将产生仅 仅轻微的变化、仅仅缓慢改变的静态整体状况。因此，在患者的生物流体中可静态测量的肽 生物标志物类型的活性分析物、在本情况下是血管活性肽的浓度，可能与相同分析物在较 长时期内的病理生理释放量基本上成正比，正如可以测量生理无活性的共肽形式。这意味 着与在本发明的无活性共肽的优选测定中测定的健康人的对照值的偏差，以及这些偏差的 疾病典型过程，也反映在活性肽的一般较低的静态浓度中，使得对测量到的“分析物浓度” 的具体选择，将不对诊断评估具有决定性的定性影响。作为本发明的一部分，为了测量目的，可以使用患者血浆样品的集合，它们包括在 被诊断患有“轻度认知障碍”时(t = 0) ( “MCD患者”)获得的患者血浆样品。然后在为期6年中记录个体患者健康状态的后续发展。已经发现，在MCD患者血浆中检测的生物标志物的浓度，与没有认知障碍的对照 者相比平均升高了，并且在发现的浓度范围内可以确定截止浓度值，该值允许将以后转变 成AD的风险低的MCD患者，与以后转变成AD的风险相当高的MCD患者区分开。通过同时 考虑两种生物标志物，进一步增加了患者组之间的差异。正如将在实验部分中显示的，当发明人也根据记录的病史检查结果，以观察在发 展出有临床表现的神经变性疾病(阿茨海默氏痴呆)的意义上没有发生或明显延迟发生 的后续转变的患者，是否出于其他原因已经经历了使用某些药物或药物类型的治疗时，他 能够显示，显然使用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂的治疗，对于预后具有正面影 响，其形式为避免或延迟了 “向AD的转变”。这显示出，对于患有轻度认知障碍的患者来说，不仅可能在诊断时进行风险度分 层，而且能够向测定到向AD转变的风险增高的患者推荐合理的新疗法，这种疗法目前还没 有构成重要专家的疗法总汇中的一部分，即使用心血管药剂、更具体来说是抗高血压药剂 的疗法，或使用ANP受体拮抗剂或腺苷受体拮抗剂的疗法。上述的心血管药剂和抗高血压药剂是已知的经历了广泛临床试验的药剂。目前常 规治疗性使用和/或作为预防的抗高血压药剂基本上表现为四种不同类型的药物，即血管 紧张素转换酶抑制剂(ACE抑制剂)、血管紧张素II受体拮抗剂(“沙坦”)、0 -阻断剂和 用于降低血压的利尿剂类型的药剂。关于目前使用的这些药剂类型以及广泛处方的所述活性物质类别代表的进一步 详细情况，可以在涉及降低高血压患者血压的非常广泛的专业文献中发现。仅作为例子列出的ACE抑制剂是药物卡托普利、依那普利、赖诺普利和雷米普利， 作为血管紧张素II受体亚型1拮抗剂(ATI拮抗剂；沙坦)的代表是药物氯沙坦、缬沙坦、 坎地沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、依普罗沙坦和奥美沙坦，作为利尿剂、特别是所谓的噻嗪利 尿剂的是例如氢氯噻嗪和噻嗪类似物例如Clorthalidon、氯帕胺(Clopramid)、吲达帕胺、 美托拉腙、希帕胺和美夫西特。下面的表1简要概括了关于各种不同类型药剂及其作用机制的基本信息表1:
1权利要求
一种药物，其包含一种或多种心血管药剂活性物质，所述一种或多种心血管药剂活性物质选自ANP受体拮抗剂、腺苷受体拮抗剂、ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、β 阻断剂和抗高血压利尿剂及其组合，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的患者，以便延迟或预防有临床表现的神经变性疾病的发生，或者改善或维持轻度认知障碍的状态。
2.权利要求1的药物，其中ANP受体拮抗剂是葡萄糖_己酸聚合物。
3.权利要求1的药物，其中腺苷受体拮抗剂是1，3_二丙基-8-(3-降金刚烷基)黄嘌呤。
4.权利要求1或2任一项的药物，其中活性物质是ANP受体拮抗剂，并且所述拮抗剂以 至少50 %的ANP受体被占据的剂量施用。
5.权利要求1或3任一项的药物，其中活性物质是腺苷受体拮抗剂，并且所述拮抗剂以 至少50%的腺苷受体被占据的剂量施用。
6.权利要求1到5任一项的药物，其中有临床表现的神经变性疾病是阿茨海默氏痴呆型。
7.权利要求1到6任一项的药物，其中用于治疗，选择一组患者，所述患者基于在其循 环系统中能测量到的循环相关肽生物标志物的升高，可以被鉴定为发生有临床表现的阿茨 海默氏痴呆形式的风险增加的患者。
8.一种鉴定患有轻度认知障碍需要治疗的患者的体外方法，所述方法包括_在来自被诊断患有轻度认知障碍的患者的循环系统的生物流体样品中，测定至少一 种循环相关肽生物标志物，和-发生有临床表现的神经变性疾病的风险增加被指定为至少一种循环相关的肽生物 标志物的浓度超过在所述标志物通常浓度值范围内设置的生物标志物特异性阈值(截止 值)。
9.权利要求8的体外方法，其中对于具有被确定的较高风险的患者，推荐使用权利要 求1到6的药物进行治疗。
10.权利要求8或9的方法，其特征在于样品是血清或血浆样品。
11.权利要求8到10任一项的方法，其特征在于循环相关肽生物标志物选自利尿钠肽 ANP和/或BNP和/或肾上腺髓质素(ADM)，或选自其相关的激素原pro_ANP、pro-BNP或 pro-ADM的片段。
12.权利要求8到11任一项的方法，其特征在于推荐使用抗高血压药剂类的心血管药 剂进行治疗，所述抗高血压药剂选自用于降血压的“血管紧张素转换酶”的抑制剂(ACE抑 制剂)、血管紧张素II受体拮抗剂(“沙坦”)、β -阻断剂和利尿剂。
13.权利要求11的方法，其特征在于测定使用免疫诊断测定方法进行，并且测定相对 于实际的循环相关肽来说具有减弱的或不能检测的生理效应的循环相关肽的激素原前体 片段。
14.权利要求13的方法，其特征在于测定含有pro-ANP的中间部分的pro-ΑΝΡ片 段(MR-pro-ANP)和/或含有前肾上腺髓质素原的45-92位氨基酸的中段pro-ADM片段 (MR-proADM)的浓度。
15.一种鉴定心房利尿钠肽受体拮抗剂的筛选方法，所述方法包括下列阶段〇进行竞争性受体分析以确定潜在的拮抗剂，〇测试潜在拮抗剂阻断ANP诱导的cGMP形成的能力，以及 〇鉴定心房利尿钠肽受体的拮抗剂。
16.循环相关肽生物标志物、更具体是利尿钠肽ANP、BNP和/或肾上腺髓质素(ADM)或 其片段或其相关激素原pro-ANP、pro-BNP或pro-ADM的片段在对患有轻度认知障碍表现出 向有临床表现的神经变性疾病转变的风险增加的患者进行分层或鉴定中的应用。
17.—种ANP受体拮抗剂，其用作药物。
18.权利要求17的ANP受体拮抗剂，其中ANP受体拮抗剂是葡萄糖-己酸聚合物。
全文摘要
一种用于鉴定需要治疗的患者的方法，以及对这种患有轻微认知障碍的患者进行预防性治疗的方法，其中在先期风险度分层过程中，作为可以在所述患者的循环中测量到的循环相关肽生物标志物增加的结果，可以确定所述患者发生有临床表现的阿茨海默氏病的风险增加，所述治疗使用含有心血管药剂的一种或多种活性成分的药物，所述心血管药剂选自ACE抑制剂、血管紧张素II受体拮抗剂、β-阻断剂和降血压利尿剂及其组合，或使用含有一种或多种ANP受体拮抗剂或者一种或多种腺苷受体拮抗剂的药物。
文档编号A61K31/00GK101977594SQ200980110223
公开日2011年2月16日 申请日期2009年1月29日 优先权日2008年2月1日
发明者安德烈亚斯·贝格曼 申请人:B.R.A.H.M.S有限公司
最新回复(0)