一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物的制作方法
专利名称：一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，更具体是由头孢美唑钠和β-内酰胺酶抑制剂组成的药物组合物。
背景技术：
头孢美唑是日本三共公司开发的第2代头霉素类抗菌药。对阴性杆菌产生的广谱β-内酰胺酶有较好的稳定性，大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌、奇异变形杆菌、志贺菌属、沙门菌属等阴性杆菌对本品有较好的敏感性，金葡菌、A组溶血性链球菌、卡他布拉汉菌对本品高度敏感，对脆弱拟杆菌有较好的抗菌活性。临床上用于敏感菌引起的呼吸系统感染、胆道感染、泌尿系感染、妇产科细菌感染、皮肤软组织感染及手术后预防感染等。
头孢美唑通过抑制增殖期细菌的细胞壁合成而发挥杀菌作用，头孢美唑具有对人体细胞几乎无毒性(各年龄段均可选用)，对β-内酰胺酶包括超广谱酶高度稳定，对耐药性强的产酶菌同样具有极强的抗菌力，可有效突破血脑屏障(进入炎症脑脊液中杀菌)，头孢美唑在代谢中92％以具有抗菌活性的原形随尿排泄(对复杂性尿路感染适用)等特点。长期的临床应用不仅验证了头孢美唑的安全性，而且证明了头孢美唑独特的抗菌优势，特别是在厌氧菌感染、耐药性强的产酶菌感染，院内感染的治疗中，显示了卓越的疗效。由于本化合物在7-a位上有甲氧基，故对各种β-内酰胺酶包括脆弱类杆菌所产生都有很强的耐受性和稳定性，β-内酰胺酶不能明显水解本品，因此头孢美唑被认为是对β-内酰胺酶最稳定的头霉素。这使本药物在临床中有较好的应用前景，可适用于其他抗生素无效的严重感染病例中。在国内外所进行的大型临床研究中，均未发现与本药物治疗相关的严重不良反应。在中国和日本进行的临床研究中，不良反应发生率均为2.1％，而在美国的研究中，不良反应发生率也仅为8.78％。
但头孢美唑的缺点是肠杆菌属、假单胞菌属、耐甲氧西林金葡菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌对本品不敏感或耐药。近年的研究发现头孢美唑对ESBLS高度稳定，但对AmpC酶稳定性差，产AmpC酶菌株对其多呈现耐药(朱德妹等.头孢美唑对产ESBLS肠杆菌科细菌的体外抗菌作用研究.中国感染与化疗杂志.2009，9(1)1-9)。
AmpCβ-内酰胺酶(简称AmpC酶)是由肠杆菌科细菌或和绿脓假单胞菌的染色体或质粒介导产生的一类β-内酰胺酶，属β-内酰胺酶Ambler分子结构分类法中的C类和Bush Jacoby Medeiros功能分类法中第一群，即作用于头孢菌素、且不被克拉维酸所抑制的β-内酰胺酶。故AmpC酶又称作为头孢菌素酶。AmpC酶按其产生的方式分为3类诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶。近年来，随着β-内酰胺类抗生素，尤其是头孢菌素的广泛应用，产AmpC酶的革兰阴性杆菌越来越多见，尤其是出现了(去阻遏)持续高产AmpC酶和质粒介导的AmpC酶，导致耐药菌株广泛传播和临床对该类细菌感染的治疗困难，已引起临床的高度重视。
发明内容
我们在研究中意外发现头孢美唑钠中加入特定的β-内酰胺酶抑制剂后，其治疗抗菌谱及活性能得到较大提高，对一些原说明书中列出的对头孢美唑钠制剂具有抗性的菌株也有了很好的抗菌活性，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种，而单独应用时头孢美唑钠并没有该作用。
基于上述发现，因此本发明的目的是提供一种以头孢美唑和特定β-内酰胺酶抑制剂为活性成分的药物组合物；组合物协同作用，对AmpC酶具有很好的稳定性，组合后使头孢美唑药物抗菌谱更广，更有利于临床治疗。
本发明使用的头孢美唑具体为头孢美唑钠。
本发明的另一目的是提供配制一种以头孢美唑钠和特定β-内酰胺酶抑制剂为活性成分的药物组合物的方法，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的 一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物是由头孢美唑钠1-8重量份和1重量份选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种组成。
所述的药物组合物的药物剂型是注射制剂，包括粉针剂及冻干粉针剂。
本发明药物组合物的粉针剂及冻干粉针剂可以采用制剂的常规方法制备得到。
一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物的制备方法，其中冻干制剂包括以下步骤 (1)按配方量取头孢美唑钠1-8重量份和1重量份选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠； (2)无菌条件下将药物、冻干剂溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
粉针剂的制备方法为在无菌条件下将药物混合，分装，即得。
组合物对产AmpC酶菌株的敏感性和稳定性试验 1.材料与方法 1.1实验菌株收集临床标本中分离的阴沟肠杆菌100株，排除同一患者同一部位重复分离的菌株。其中来源于痰标本50株，尿标本28株，脓液15株，其他7株。
1.2药物头孢噻啶、头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)为抗菌药物。
1.3AmpC酶制备及检测用三维试验法检测AmpC酶。将收集的80株阴沟肠杆菌，接种于普通血平皿上过夜培养；次日制成0.5麦氏单位菌液；取50μl菌液加入12ml蛋白胨水中，35℃200r/min孵育5h，离心20min，将沉淀反复冻融，加入1.5ml0.01M PBS液中混匀，14000r/min离心20min，弃沉淀，取上清液经常规细菌培养阴性后，即为酶提取液，放置于-40℃冰箱中保存备用。将E.coli ATCC25922接种于M2H琼脂平皿上，取一30μg头孢西丁纸片贴于平皿中心，使用消毒的手术刀片在距纸片边缘5mm处放射性地切出3～4条狭缝，取40μl粗提酶液由里向外加入狭缝内，将培养基35℃孵育过夜观察结果。若观察到狭缝与抑菌圈交接处出现扩大的长菌区域，则为AmpC酶阳性株。
1.4ESBLs的检测按照NCCLS 1999年推荐的纸片扩散确证法进行检测。将AmpC阳性的菌株制成0.5麦氏单位的菌液，接种于M2H琼脂平板上，将头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸，头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸两组纸片贴于平板上，35℃孵育过夜，当任何一组药物的抑菌环直径差≥5mm时，判定为ESBLs阳性株。其中用肺炎克雷伯菌ATCC700603作为阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922作为质控菌。
1.5接合试验根据Bonnet方法进行。供体菌为仅产AmpC酶菌株；受体菌为大肠埃希菌NK544，培养基为BHI肉汤和含有抗生素的中国蓝平皿。
1.6药物敏感试验采用Kirby2Bauer琼脂扩散法对产AmpC酶菌株和接合子进行常药敏试验，结果按照NCCLS1999年标准判读。用大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853标准菌株做质控。
1.7相对水解率的测定以头孢噻啶的水解率为100％，计算其他11种抗菌药物或组合的相对水解率。头孢噻啶、头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)为酶作用底物。底物终浓度为4mg/L，在3ml底物中加入20μl酶提取液，置于37℃孵箱中孵育18h测定抑菌环直径，采用标准曲线法计算残余抗生素的量。
2.结果 2.1产AmpC和ESBLs100株阴沟肠杆菌中。34株(34％)产AmpC酶，18株(18％)产ESBLs，13株(13％)同时产AmpC和ESBLs。34株AmpC阳性株中，接合成功者6株。即有6株菌的耐药性成功地转入受体菌。
2.2药敏试验结果以AmpC阳性株头孢噻啶(样品1号)的敏感率为0；头孢美唑钠(样品2号)、舒巴坦钠(样品3号)、他唑巴坦钠(样品4号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)(样品5号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)(样品6号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)(样品7号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)(样品8号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)(样品9号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)(样品10号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)(样品11号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)(样品12号)的敏感率依次为18.6％、43.5％、45.2％、86.8％、92.6％、95.7％、97.2％、87.1％、93.1％、96.0％、97.8％。头孢美唑钠(2号)、舒巴坦钠(3号)、他唑巴坦钠(4号)单独使用时对接合子的敏感性明显下降，而头孢美唑钠和舒巴坦钠组合物组对接合子依然有很好的敏感性。见表1。
表1产AmpC菌株及接合子对抗菌药物的敏感性(％)
2.3相对水解率结果头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠单独存在的相对水解率均为100％的菌株数分别为18、15、17株，而组合物组除4株菌的相对水解率在10％-20％外，其余菌株相对水解率均＜10％，显示了组合物组对AmpC酶的稳定性。
3.实验结果分析 在肠杆菌科细菌引起的医院感染中，阴沟肠杆菌仅次于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。但由于高产AmpC酶导致对多种抗生素耐药，治疗阴沟肠杆菌引起的感染是临床面临的巨大压力，其耐药性的迅速产生使原本有效的抗生素无效。
阴沟肠杆菌以高产AmpC酶为主，其次为ESBLs和同时产AmpC及ESBLs者。药敏试验中6株接合子对单独使用的抗菌药物的耐药性明显增加。而本发明组合物对AmpC菌株及接合子的敏感性和水解稳定性均很好，上述实验结果表明本发明组合物具有比较好的协同作用，对产AmpC酶细菌的敏感性及稳定性与单用头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠比较有了预料之外的显著提高。本申请的组合物可以有效解决目前上述头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠单独使用中耐药性问题，提高临床应用效果。
制备实施例 实施例1冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠50g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例2冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠25g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例3冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠12.5g，葡萄糖120g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、葡萄糖溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例4冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠100g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例5冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠50g，右旋糖酐80g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、右旋糖酐溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例6冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠25g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例7冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠12.5g，山梨醇110g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、右旋糖酐溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例8无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠100g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例9无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠50g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例10无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠25g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例11无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠20g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例12无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠12.5g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例13无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠20g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例14无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠100g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例15无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠50g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例16无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠25g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
权利要求
1.一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物，其特征在于活性成分由头孢美唑钠和β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦钠或他唑巴坦钠的一种组成。
2.根据权利要求1的药物组合物，其特征在于活性成分组成为头孢美唑钠1-8重量份、舒巴坦钠或他唑巴坦钠1重量份。
3.根据权利要求1或2的组合物，其特征在于制备成注射制剂。
4.根据权利要求3的组合物，其中所述注射制剂为冻干制剂或粉针剂。
5.根据权利要求4的组合物的制备方法，其特征在于采用冻干制剂的常规方法制备而成。
6.根据权利要求4的组合物的制备方法，其特征在于采用粉针制剂的常规方法制备而成。
全文摘要
本发明的一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物属医药技术领域，更具体是由头孢美唑钠1-8重量份和特定β-内酰胺酶抑制剂1重量份组成的药物组合物，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种。本发明的药物组合物能扩大药物头孢美唑钠的抗菌谱，降低细菌的耐药性。
文档编号A61P31/04GK101816791SQ201010103219
公开日2010年9月1日 申请日期2010年2月1日 优先权日2010年2月1日
发明者郑飞雄 申请人:郑飞雄
技术领域：
本发明属医药技术领域，更具体是由头孢美唑钠和β-内酰胺酶抑制剂组成的药物组合物。
背景技术：
头孢美唑是日本三共公司开发的第2代头霉素类抗菌药。对阴性杆菌产生的广谱β-内酰胺酶有较好的稳定性，大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌、奇异变形杆菌、志贺菌属、沙门菌属等阴性杆菌对本品有较好的敏感性，金葡菌、A组溶血性链球菌、卡他布拉汉菌对本品高度敏感，对脆弱拟杆菌有较好的抗菌活性。临床上用于敏感菌引起的呼吸系统感染、胆道感染、泌尿系感染、妇产科细菌感染、皮肤软组织感染及手术后预防感染等。
头孢美唑通过抑制增殖期细菌的细胞壁合成而发挥杀菌作用，头孢美唑具有对人体细胞几乎无毒性(各年龄段均可选用)，对β-内酰胺酶包括超广谱酶高度稳定，对耐药性强的产酶菌同样具有极强的抗菌力，可有效突破血脑屏障(进入炎症脑脊液中杀菌)，头孢美唑在代谢中92％以具有抗菌活性的原形随尿排泄(对复杂性尿路感染适用)等特点。长期的临床应用不仅验证了头孢美唑的安全性，而且证明了头孢美唑独特的抗菌优势，特别是在厌氧菌感染、耐药性强的产酶菌感染，院内感染的治疗中，显示了卓越的疗效。由于本化合物在7-a位上有甲氧基，故对各种β-内酰胺酶包括脆弱类杆菌所产生都有很强的耐受性和稳定性，β-内酰胺酶不能明显水解本品，因此头孢美唑被认为是对β-内酰胺酶最稳定的头霉素。这使本药物在临床中有较好的应用前景，可适用于其他抗生素无效的严重感染病例中。在国内外所进行的大型临床研究中，均未发现与本药物治疗相关的严重不良反应。在中国和日本进行的临床研究中，不良反应发生率均为2.1％，而在美国的研究中，不良反应发生率也仅为8.78％。
但头孢美唑的缺点是肠杆菌属、假单胞菌属、耐甲氧西林金葡菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌对本品不敏感或耐药。近年的研究发现头孢美唑对ESBLS高度稳定，但对AmpC酶稳定性差，产AmpC酶菌株对其多呈现耐药(朱德妹等.头孢美唑对产ESBLS肠杆菌科细菌的体外抗菌作用研究.中国感染与化疗杂志.2009，9(1)1-9)。
AmpCβ-内酰胺酶(简称AmpC酶)是由肠杆菌科细菌或和绿脓假单胞菌的染色体或质粒介导产生的一类β-内酰胺酶，属β-内酰胺酶Ambler分子结构分类法中的C类和Bush Jacoby Medeiros功能分类法中第一群，即作用于头孢菌素、且不被克拉维酸所抑制的β-内酰胺酶。故AmpC酶又称作为头孢菌素酶。AmpC酶按其产生的方式分为3类诱导高产酶、持续高产酶和持续低产酶。近年来，随着β-内酰胺类抗生素，尤其是头孢菌素的广泛应用，产AmpC酶的革兰阴性杆菌越来越多见，尤其是出现了(去阻遏)持续高产AmpC酶和质粒介导的AmpC酶，导致耐药菌株广泛传播和临床对该类细菌感染的治疗困难，已引起临床的高度重视。
发明内容
我们在研究中意外发现头孢美唑钠中加入特定的β-内酰胺酶抑制剂后，其治疗抗菌谱及活性能得到较大提高，对一些原说明书中列出的对头孢美唑钠制剂具有抗性的菌株也有了很好的抗菌活性，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种，而单独应用时头孢美唑钠并没有该作用。
基于上述发现，因此本发明的目的是提供一种以头孢美唑和特定β-内酰胺酶抑制剂为活性成分的药物组合物；组合物协同作用，对AmpC酶具有很好的稳定性，组合后使头孢美唑药物抗菌谱更广，更有利于临床治疗。
本发明使用的头孢美唑具体为头孢美唑钠。
本发明的另一目的是提供配制一种以头孢美唑钠和特定β-内酰胺酶抑制剂为活性成分的药物组合物的方法，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的 一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物是由头孢美唑钠1-8重量份和1重量份选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种组成。
所述的药物组合物的药物剂型是注射制剂，包括粉针剂及冻干粉针剂。
本发明药物组合物的粉针剂及冻干粉针剂可以采用制剂的常规方法制备得到。
一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物的制备方法，其中冻干制剂包括以下步骤 (1)按配方量取头孢美唑钠1-8重量份和1重量份选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠； (2)无菌条件下将药物、冻干剂溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
粉针剂的制备方法为在无菌条件下将药物混合，分装，即得。
组合物对产AmpC酶菌株的敏感性和稳定性试验 1.材料与方法 1.1实验菌株收集临床标本中分离的阴沟肠杆菌100株，排除同一患者同一部位重复分离的菌株。其中来源于痰标本50株，尿标本28株，脓液15株，其他7株。
1.2药物头孢噻啶、头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)为抗菌药物。
1.3AmpC酶制备及检测用三维试验法检测AmpC酶。将收集的80株阴沟肠杆菌，接种于普通血平皿上过夜培养；次日制成0.5麦氏单位菌液；取50μl菌液加入12ml蛋白胨水中，35℃200r/min孵育5h，离心20min，将沉淀反复冻融，加入1.5ml0.01M PBS液中混匀，14000r/min离心20min，弃沉淀，取上清液经常规细菌培养阴性后，即为酶提取液，放置于-40℃冰箱中保存备用。将E.coli ATCC25922接种于M2H琼脂平皿上，取一30μg头孢西丁纸片贴于平皿中心，使用消毒的手术刀片在距纸片边缘5mm处放射性地切出3～4条狭缝，取40μl粗提酶液由里向外加入狭缝内，将培养基35℃孵育过夜观察结果。若观察到狭缝与抑菌圈交接处出现扩大的长菌区域，则为AmpC酶阳性株。
1.4ESBLs的检测按照NCCLS 1999年推荐的纸片扩散确证法进行检测。将AmpC阳性的菌株制成0.5麦氏单位的菌液，接种于M2H琼脂平板上，将头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸，头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸两组纸片贴于平板上，35℃孵育过夜，当任何一组药物的抑菌环直径差≥5mm时，判定为ESBLs阳性株。其中用肺炎克雷伯菌ATCC700603作为阳性对照，大肠埃希菌ATCC25922作为质控菌。
1.5接合试验根据Bonnet方法进行。供体菌为仅产AmpC酶菌株；受体菌为大肠埃希菌NK544，培养基为BHI肉汤和含有抗生素的中国蓝平皿。
1.6药物敏感试验采用Kirby2Bauer琼脂扩散法对产AmpC酶菌株和接合子进行常药敏试验，结果按照NCCLS1999年标准判读。用大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853标准菌株做质控。
1.7相对水解率的测定以头孢噻啶的水解率为100％，计算其他11种抗菌药物或组合的相对水解率。头孢噻啶、头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)为酶作用底物。底物终浓度为4mg/L，在3ml底物中加入20μl酶提取液，置于37℃孵箱中孵育18h测定抑菌环直径，采用标准曲线法计算残余抗生素的量。
2.结果 2.1产AmpC和ESBLs100株阴沟肠杆菌中。34株(34％)产AmpC酶，18株(18％)产ESBLs，13株(13％)同时产AmpC和ESBLs。34株AmpC阳性株中，接合成功者6株。即有6株菌的耐药性成功地转入受体菌。
2.2药敏试验结果以AmpC阳性株头孢噻啶(样品1号)的敏感率为0；头孢美唑钠(样品2号)、舒巴坦钠(样品3号)、他唑巴坦钠(样品4号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(8∶1)(样品5号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(4∶1)(样品6号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(2∶1)(样品7号)、头孢美唑钠和舒巴坦钠(1∶1)(样品8号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(8∶1)(样品9号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(4∶1)(样品10号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(2∶1)(样品11号)、头孢美唑钠和他唑巴坦钠(1∶1)(样品12号)的敏感率依次为18.6％、43.5％、45.2％、86.8％、92.6％、95.7％、97.2％、87.1％、93.1％、96.0％、97.8％。头孢美唑钠(2号)、舒巴坦钠(3号)、他唑巴坦钠(4号)单独使用时对接合子的敏感性明显下降，而头孢美唑钠和舒巴坦钠组合物组对接合子依然有很好的敏感性。见表1。
表1产AmpC菌株及接合子对抗菌药物的敏感性(％)
2.3相对水解率结果头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠单独存在的相对水解率均为100％的菌株数分别为18、15、17株，而组合物组除4株菌的相对水解率在10％-20％外，其余菌株相对水解率均＜10％，显示了组合物组对AmpC酶的稳定性。
3.实验结果分析 在肠杆菌科细菌引起的医院感染中，阴沟肠杆菌仅次于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。但由于高产AmpC酶导致对多种抗生素耐药，治疗阴沟肠杆菌引起的感染是临床面临的巨大压力，其耐药性的迅速产生使原本有效的抗生素无效。
阴沟肠杆菌以高产AmpC酶为主，其次为ESBLs和同时产AmpC及ESBLs者。药敏试验中6株接合子对单独使用的抗菌药物的耐药性明显增加。而本发明组合物对AmpC菌株及接合子的敏感性和水解稳定性均很好，上述实验结果表明本发明组合物具有比较好的协同作用，对产AmpC酶细菌的敏感性及稳定性与单用头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠比较有了预料之外的显著提高。本申请的组合物可以有效解决目前上述头孢美唑钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠单独使用中耐药性问题，提高临床应用效果。
制备实施例 实施例1冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠50g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例2冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠25g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例3冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠12.5g，葡萄糖120g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、葡萄糖溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例4冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠100g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和舒巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例5冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠50g，右旋糖酐80g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、右旋糖酐溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例6冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠25g，甘露醇100g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、甘露醇溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例7冻干粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠12.5g，山梨醇110g，pH调节剂适量，注射用水加至2000ml。
制备方法 1)、按配方量取头孢美唑钠和他唑巴坦钠； 2)、将药物、右旋糖酐溶于80％处方用水量的注射用水中，溶液经0.22μm滤膜无菌过滤后，补足处方量注射用水，调节pH，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
实施例8无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠100g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例9无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠50g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例10无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠25g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例11无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠20g， 制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例12无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠12.5g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例13无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠20g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例14无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠100g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例15无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，他唑巴坦钠50g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
实施例16无菌粉针剂 组成头孢美唑钠100g，舒巴坦钠25g。
制备方法将上述药物在无菌条件下混合均匀，分装，即得。
权利要求
1.一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物，其特征在于活性成分由头孢美唑钠和β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦钠或他唑巴坦钠的一种组成。
2.根据权利要求1的药物组合物，其特征在于活性成分组成为头孢美唑钠1-8重量份、舒巴坦钠或他唑巴坦钠1重量份。
3.根据权利要求1或2的组合物，其特征在于制备成注射制剂。
4.根据权利要求3的组合物，其中所述注射制剂为冻干制剂或粉针剂。
5.根据权利要求4的组合物的制备方法，其特征在于采用冻干制剂的常规方法制备而成。
6.根据权利要求4的组合物的制备方法，其特征在于采用粉针制剂的常规方法制备而成。
全文摘要
本发明的一种含头孢美唑和β-内酰胺酶抑制剂的药物组合物属医药技术领域，更具体是由头孢美唑钠1-8重量份和特定β-内酰胺酶抑制剂1重量份组成的药物组合物，所述β-内酰胺酶抑制剂选自舒巴坦钠、他唑巴坦钠中的一种。本发明的药物组合物能扩大药物头孢美唑钠的抗菌谱，降低细菌的耐药性。
文档编号A61P31/04GK101816791SQ201010103219
公开日2010年9月1日 申请日期2010年2月1日 优先权日2010年2月1日
发明者郑飞雄 申请人:郑飞雄
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