薄叶山橙素甲,其药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
专利名称：薄叶山橙素甲,其药物组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地，涉及新颖骨架的单萜吲哚生物碱类 化合物薄叶山橙素甲(melotenineA)及其有机和无机酸盐，以其为药物有效成分的药物组 合物，其制备方法以及它们在制备治疗或预防癌症药物中的应用。
背景技术：
肿瘤是世界难题。在中国每年新增160万肿瘤病患者，每年有130万肿 瘤病患者死亡。目前临床上使用的化疗药物虽然有一定疗效，但因其毒性大而给病人带来 巨大的肉体痛苦和精神压力，新的疗效确切且毒副作用相对较小的抗肿瘤药物的发现迫在 眉睫。薄叶山橙素甲(melotenine A)是源于天然植物中的新化合物。此前没有关于此化 合物的结构以及药用活性报道。
发明内容
本发明的目的在于提供单萜吲哚生物碱类化合物薄叶山橙素甲 (melotenine A)及其类似物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸 (盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐；其制备方法；其作为有效成分与可药用载体或赋形剂组成 的药物组合物；以及化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物及其药用盐在制备预防 或治疗肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的药物中的用途。
本发明的上述目的是通过如下的技术方案得以实现的 式(I)所示的单鹏喷哚类化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物或其药用<formula>formula see original document page 4</formula> 其中 R1选自C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基，优选的R1为C卜6烷基，更优选的R1为甲 基； R2选自氢或C00R3，其中R3选自C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基，优选的R2为 C00CH3; Y代表任选被1-5个R4取代的C2—1Q亚烷基、(V1Q次烷基、(V1Q亚烯基丄2—1Q次烯基、 C2—1Q亚炔基或C2—1Q次炔基；优选的Y代表任选被C卜6烷基取代的C2—6亚烷基、C2—6次烷基、 C2—6亚烯基或C2—6次烯基，更优选的Y代表任选被C卜6烷基取代的C2—4亚烷基、C2—4次烷基、 C2—4亚烯基或C2—4次烯基，最优选的Y代表
<formula>formula see original document page 4</formula>
R4选自氢、C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基。 最优选的式(I)单萜吲哚类化合物是薄叶山橙素甲
16
COOCH3 所述的药用盐是指药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸，或无机酸形成的 盐。所述的有机酸包括但不限于酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，无机酸包括但不限于盐 本发明的另一方面提供如式(I)所示的单萜吲哚类化合物的制备方法，包括以下 步骤 (1)式(II)化合物与PhSeCH2CHO反应得到式(III)化合物
SePh
SePh
p i—— 一y v 、N-
Ri R2 Ri r2 」 — R2
II III
其中R、R2的含义与权利要求1相同；
(2)式(III)化合物与式(IV)化合物反应得到式(V)化合物
SePh
+
,入
Br
IV
III
其中L为离去基团，Y与权利要求1的含义相同； (3)式(V)化合物环合得到式(I)化合物
SePh
SePh
'1ST
V
在此方法中，式(IV)化合物的结构优选为
5
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、R4或L 其中X代表任选被1-5个R4取代的C卜4亚烷基、C2—4亚烯基或C2—4亚炔基，L为离 去基团，R4与权利要求1的含义相同； 在优选的方法中，式(III)化合物与式(IV-1)或式(IV-2)反应得到式(V-l)或
式(V-2)，再环合得到式(1-1)或式(1-2)化合物
R1 R2 R1 R:
V隱2 |誦2 本发明的最优选化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)还可按如下步骤制备取 植物薄叶山橙，用水或有机溶剂提取，所得提取物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用 硅胶柱层析分离得到式(I)所示的单萜吲哚生物碱薄叶山橙素甲(melotenine A)。所述 的提取是在回流的温度下进行的，所述的有机溶剂选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚 类溶剂，其中所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，所述的酮类 溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁基酮，所述的酯类溶剂选自乙酸乙酯。所述的酸碱处理可以 是向提取物中加入酸例如盐酸或硫酸调节pH值至1.0-3.0，用有机溶剂例如乙酸乙酯萃 取1-4次，水层用碱例如氨水或氢氧化钠或碳酸钠等调节pH值至8. 0-10. O，再用乙酸乙酯 萃取1-4次，合并浓縮乙酸乙酯萃取物。 具体的方法为取植物薄叶山橙全株，经干燥、粉碎后，用醇提取l-4次，每次l-4 小时，得醇浸膏，然后通过酸碱处理，除去非生物碱类物质，在碱性条件下用有机溶剂萃取， 浓縮有机溶剂提取层，浸膏利用硅胶柱层析，用石油醚/丙酮做为洗脱系统分离得到式(I) 所示的化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)。 更具体的方法为取风干后的薄叶山橙植物全株，用90%乙醇7(TC加热，回流提 取3次，回收溶剂，浓縮到小体积，加入5% HC1调节pH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，水层 用10X氨水调节pH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓縮乙酸乙酯层，乙酸乙酯部分用硅胶 拌样后，进行200-300目硅胶柱层析，划分为7段Frs 1_7，用石油醚/丙酮梯度洗脱分段，
分配比例为氯仿/甲醇i : o，i5 : i，io : i，6 : i，3 : i，i : i，o : 1，Fri用石油醚/
丙酮=12/1为洗脱剂，硅胶100g柱层析分离得薄叶山橙素甲(melotenineA)。
本发明的薄叶山橙提取物含有式(I)所示的薄叶山橙素甲(melotenine A)或其 药用盐10-95% (重量)可按如下步骤制备取植物薄叶山橙，用有机溶剂提取，所得提取 物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用硅胶柱层析进一步分离纯化。所述的提取是在 回流的温度下进行的，有机溶剂选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚类溶剂，其中醇类 溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，酮类溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁 基酮，酯类溶剂选自乙酸乙酯。酸碱处理是指向提取物中加入酸例如盐酸或硫酸调节PH 值至1. 0-3. O，用有机溶剂例如乙酸乙酯萃取1-4次，水层用碱例如氨水或氢氧化钠或碳酸 钠等调节PH值至8. 0-10. 0，再用乙酸乙酯萃取1-4次，合并浓縮乙酸乙酯萃取物。
药物组合物，其中含有权利要求l的式(I)化合物或其药用盐作为有效成分，并含 有常规药用载体。 式(I)化合物或其药用盐在治疗或预防癌症药物中的应用。 式(I)化合物或其药用盐在制备治疗肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的药物 中的应用。 本发明的化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物或其盐可经口或不经过口
给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天l-1000mg比较合适。 本说明书中，术语"烷基"是指饱和的直链或支链的脂族烃基，优选具有HO个碳
原子，更优选具有l-6个碳原子，更优选具有l-4个碳。代表性的例子包括甲基、乙基、丙基、
异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。 术语"烯基"是指具有至少一个碳碳双键，直链或支链的脂族烃基，优选具有2-10 个碳原子，更优选具有2-6个碳原子，更优选具有2-4个碳。代表性的例子包括乙烯基、丙 烯基、烯丙基、丁烯基、戊二烯基等。 术语"炔基"是指具有至少一个碳碳三键，直链或支链的脂族烃基，优选具有2-10 个碳原子，更优选具有2-6个碳原子，更优选具有2-4个碳。代表性的例子包括乙炔基、丙 炔基、丁炔基等。 本说明书中，亚基是指相应的基团与其它结构通过两个单键连接的方式相连，例 如亚乙基为_(^2(^2-，亚乙烯基为-CH = CH-;次基是指相应的基团与其它结构通过一个单 键和一个双键连接的方式相连，例如次甲基为-CH =。 经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑 剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等 形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用 常规的制剂技术。
具体实施例方式
下面的试验实施例、实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形
式限制本发明。
试验实施例1 : 本发明化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)具有明显的抗肿瘤活性，实验方法和 结果如下 —、材料与方法
1.样品及制备 样品呈无色，二甲基亚砜(DMS0)溶解配制为10mg/ml浓度的贮存液避光保存备 用。
2.细胞株
SK-BR-3，人乳腺癌细胞株
S匪C7721，人肝癌细胞株
HL-60，人白血病细胞株
PANC-1 ，人胰腺癌细胞株
A549，人肺癌细胞株
3.实验方法 (1)接种细胞用含10%胎牛血清的培养液(DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞 悬液，以每孔10000-20000个细胞接种到96孔板，每孔体积100ul，贴壁细胞提前12小时接 种培养。 (2)加入待测化合物溶液(化合物单体固定浓度40uM初筛，粗提物100ug/ml初 筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50%附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终 体积200ul，每种处理均设3个复孔。 (3)显色37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20ul。继续孵育4小时，终 止培养，小心吸弃孔内培养上清液100ul以避免细胞丢失，每孔加20X的SDS100ul，过夜孵 育(温度37°C )，使结晶物充分融解。 (4)比色选择595nm波长，酶联免疫检测仪(Bio-Rad 680)读取各孔光吸收值， 记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and Muench法)计算化合物的IC50值。
(5)阳性对照顺钼
二、结果 表1.薄叶山橙素甲(melotenine A)对人肿瘤细胞株生长的半数抑制浓度(IC5。， iiM)
IC50 (〃M)
cellsmelotenine A化合物D化合物Gcisplatin
SK-BR-32.811.717.221.7
SMMC-77215.218.812.318.1
HL-600.95.41.72.6
PANC-13.630.516.824.8
A-54910.725.921.915.8 三、结论 在本实验条件下，化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)对以上包括人乳腺癌细 胞株(SK-BR-3)，人肝癌细胞株(S匪C7721)，人白血病细胞株(HL-60)，人胰腺癌细胞株 (PANC-1)，人肺癌细胞株(A549)生长的半数抑制浓度(IC50)在0. 9_10. 7 y M之间，化合物 D、G对以上肿瘤株的生长的半数抑制浓度(IC50)在1.7-25. 9 iiM之间，依据中国医药工业
8杂志1993,24 :455-457，周建军等提出的评价抗肿瘤物质活性的改良MTT法得出结论上述 数据显示了明显的抑制癌症的作用。
实施例1 : 风干后的14kg植物全株薄叶山橙(Melodi皿s henryi Craib)用90%乙醇加热 (70°C )回流提取3次，回收溶剂，浓縮到小体积，加入5% HC1调节pH值至2，用乙酸乙酯 萃取3次，水层用10%氨水调节pH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓縮乙酸乙酯层后称重 得17g。乙酸乙酯部分用适量硅胶拌样后，进行硅胶柱层析(400g，200-300目，青岛海洋化 工厂)划分为7段(Frs l-6)，用石油醚/丙酮梯度洗脱分段(分配比例1 : 0，15 : 1，
io : 1，6 : 1，3 : i，i : i，o : i)。 Fri(i.8g)用石油醚/丙酮=12/1为洗脱剂，硅胶
100g柱层析分离得薄叶山橙素甲(melotenine A)。 薄叶山橙素甲(melotenine A)的化学结构式为
COOCH3 薄叶山橙素甲(melotenine A)
(II) 分子量334，分子式C21H22N202。旋光[a ]25D = -136. 5° (c 0. 20， CHC13)。无色 晶体。易溶于氯仿，丙酮，甲醇等有机溶剂。 薄叶山橙素甲(melotenine A)的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核 磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。 紫外光谱数据UVA (max) (MeOH) :328 (3. 92) ， 298 (3. 82) ， 265 (4. 21) ， 221 (4. 64) nm 红外光谱数据:IR v(max) (KBr) :3440,2948， 1680， 1610， 1436， 1244
质谱数据HR-ESI-MS(m/z) :335. 1772 [M+H] +
力NMR禾P 13C NMR数据见表2。 以上数据结合2D NMR分析证实了薄叶山橙素甲(melotenine A)的化学结构为式 (II)所示。 表2.薄叶山橙素甲(melotenine A)的^ NMR禾口 13C NMR数据(CDC13)
实施例2 按实施例1的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的硫酸乙醇溶 液々H二4，过滤，干燥，制成硫酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
实施例3: 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的盐酸酸溶液， 一H二4，过滤，干燥，制成盐酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例4 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的磷酸酸溶液， P'H二4，过滤，干燥，制成磷酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例5 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A))，加入4%的酒石酸溶液， P'H二4，过滤，干燥，制成薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例6 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的柠檬酸溶液， PH二4，过滤，干燥，制成柠檬酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
实施例7 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4 %的甲酸溶液， pH二4，过滤，干燥，制成甲酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例8: 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4 %的乙二酸溶液， —卩1=4，过滤，干燥，制成乙二酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
10
entry A _ S
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3. 74 (1H， s) 3. 79 (3H, s)
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53 51111111192 111615
HHHH HH HHH
1739 88 807
30017 99 7000
7 7
1 ^I-
d，d，
11211C
2.5equivof Bu3SnH, A旧N, benzene, 85 C, 2 h
实施例10
薄叶山橙素甲类似物的制备
11 实施例9 薄叶山橙素甲类似物的制备
<formula>formula see original document page 11</formula>allyl bromide, THF, 3 days
3equivof Bu3SnH, A旧N, benzene, 85 C, 9 h 制剂实施例1 : 按实施例1-10的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
制剂实施例2: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后
无菌熔封得粉针剂。
制剂实施例3: 将所分离得到薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9 : 1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
制剂实施例4: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒
12
NH
CH2(SePH)CHO, toluene, reflux, 9 h
COOCH3
一NH
rSePh
COOCH3
N—H石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重
量比为i : 5-1 : io的比例加入赋形剂，制粒压片。 制剂实施例5: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒
石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规口服液制
法制成口服液。 制剂实施例6: 按实施例1的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为5 : 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
制剂实施例7: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为3 : 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
1权利要求
式(I)所示的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中R1选自C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；R2选自氢或COOR3，其中R3选自C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；Y代表任选被1-5个R4取代的C2-10亚烷基、C2-10次烷基、C2-10亚烯基、C2-10次烯基、C2-10亚炔基或C2-10次炔基；R4选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基。FSA00000009194200011.tif
2. 如权利要求1所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表C2—4亚烷基丄2 基、C2—4亚烯基或C2—4次烯基，R4选自氢或C卜4烷基。
3. 如权利要求2所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表C4亚烯基或C4次烯 基，W选自氢或甲基。
4. 如权利要求3所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表次烷
5.如权利要求4所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其是薄叶山橙素甲16COOCH3
6. 如权利要求l-5所述的药用盐，是指药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸如 酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。
7. 如权利要求l式(I)所示的单萜吲哚类化合物(melotenineA)的制备方法，包括以 下步骤(1)式(II)化合物与PhSeCH2CH0反应得到式(III)化合物SePhII其中R1、 R2的含义与权利要求1相同；(2)式(III)化合物与式(IV)化合物反应得到式(V)化合物,SePh<formula>formula see original document page 3</formula>其中L为离去基团，Y与权利要求1的含义相同 (3)式(V)化合物环合得到式(I)化合物<formula>formula see original document page 3</formula>
8.如权利要求7的制备方法，其中式(IV)化合物的结构为<formula>formula see original document page 3</formula>其中X代表任选被1-5个R4取代的C卜4亚烷基、C2—4亚烯基或C2—4亚炔基，L为离去基 团，W与权利要求1的含义相同；
9. 一种制备薄叶山橙素甲的方法，包括以下步骤取植物薄叶山橙，用水或有机溶剂 提取，所得提取物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用硅胶柱层析分离得到式(I)所 示的单萜吲哚生物碱薄叶山橙素甲。
10. 如权利要求9的制备方法，所述的提取是在回流的温度下进行的，所述的有机溶剂 选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚类溶剂，其中所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙 醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，所述的酮类溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁基酮，所述的酯类溶 剂选自乙酸乙酯。
11. 药物组合物，其中含有权利要求1-6的式(I)化合物或其药用盐作为有效成分，并 含有至少一种可药用载体。
12. 权利要求1-6的式(I)化合物或其药用盐在制备治疗或预防癌症药物中的应用。
13. 权利要求l-6的式(I)化合物或其药用盐在制备治疗或预防肝癌、白血病、胰腺癌、 乳腺癌及肺癌的药物中的应用。
全文摘要
提供由式(I)所示的抗肿瘤活性成分薄叶山橙素甲(melotenineA)类似物，其制备方法及医药用途。
文档编号A61K31/407GK101775019SQ20101010401
公开日2010年7月14日 申请日期2010年1月28日 优先权日2010年1月28日
发明者冯涛, 李艳, 王媛媛, 罗晓东, 蔡祥海 申请人:中国科学院昆明植物研究所
技术领域：
本发明属于药物技术领域，具体地，涉及新颖骨架的单萜吲哚生物碱类 化合物薄叶山橙素甲(melotenineA)及其有机和无机酸盐，以其为药物有效成分的药物组 合物，其制备方法以及它们在制备治疗或预防癌症药物中的应用。
背景技术：
肿瘤是世界难题。在中国每年新增160万肿瘤病患者，每年有130万肿 瘤病患者死亡。目前临床上使用的化疗药物虽然有一定疗效，但因其毒性大而给病人带来 巨大的肉体痛苦和精神压力，新的疗效确切且毒副作用相对较小的抗肿瘤药物的发现迫在 眉睫。薄叶山橙素甲(melotenine A)是源于天然植物中的新化合物。此前没有关于此化 合物的结构以及药用活性报道。
发明内容
本发明的目的在于提供单萜吲哚生物碱类化合物薄叶山橙素甲 (melotenine A)及其类似物，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸 (盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐；其制备方法；其作为有效成分与可药用载体或赋形剂组成 的药物组合物；以及化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物及其药用盐在制备预防 或治疗肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的药物中的用途。
本发明的上述目的是通过如下的技术方案得以实现的 式(I)所示的单鹏喷哚类化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物或其药用<formula>formula see original document page 4</formula> 其中 R1选自C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基，优选的R1为C卜6烷基，更优选的R1为甲 基； R2选自氢或C00R3，其中R3选自C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基，优选的R2为 C00CH3; Y代表任选被1-5个R4取代的C2—1Q亚烷基、(V1Q次烷基、(V1Q亚烯基丄2—1Q次烯基、 C2—1Q亚炔基或C2—1Q次炔基；优选的Y代表任选被C卜6烷基取代的C2—6亚烷基、C2—6次烷基、 C2—6亚烯基或C2—6次烯基，更优选的Y代表任选被C卜6烷基取代的C2—4亚烷基、C2—4次烷基、 C2—4亚烯基或C2—4次烯基，最优选的Y代表
<formula>formula see original document page 4</formula>
R4选自氢、C卜1Q烷基、C2—1Q烯基或C2—1Q炔基。 最优选的式(I)单萜吲哚类化合物是薄叶山橙素甲
16
COOCH3 所述的药用盐是指药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸，或无机酸形成的 盐。所述的有机酸包括但不限于酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，无机酸包括但不限于盐 本发明的另一方面提供如式(I)所示的单萜吲哚类化合物的制备方法，包括以下 步骤 (1)式(II)化合物与PhSeCH2CHO反应得到式(III)化合物
SePh
SePh
p i—— 一y v 、N-
Ri R2 Ri r2 」 — R2
II III
其中R、R2的含义与权利要求1相同；
(2)式(III)化合物与式(IV)化合物反应得到式(V)化合物
SePh
+
,入
Br
IV
III
其中L为离去基团，Y与权利要求1的含义相同； (3)式(V)化合物环合得到式(I)化合物
SePh
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'1ST
V
在此方法中，式(IV)化合物的结构优选为
5
<formula>formula see original document page 6</formula>
、R4或L 其中X代表任选被1-5个R4取代的C卜4亚烷基、C2—4亚烯基或C2—4亚炔基，L为离 去基团，R4与权利要求1的含义相同； 在优选的方法中，式(III)化合物与式(IV-1)或式(IV-2)反应得到式(V-l)或
式(V-2)，再环合得到式(1-1)或式(1-2)化合物
R1 R2 R1 R:
V隱2 |誦2 本发明的最优选化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)还可按如下步骤制备取 植物薄叶山橙，用水或有机溶剂提取，所得提取物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用 硅胶柱层析分离得到式(I)所示的单萜吲哚生物碱薄叶山橙素甲(melotenine A)。所述 的提取是在回流的温度下进行的，所述的有机溶剂选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚 类溶剂，其中所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，所述的酮类 溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁基酮，所述的酯类溶剂选自乙酸乙酯。所述的酸碱处理可以 是向提取物中加入酸例如盐酸或硫酸调节pH值至1.0-3.0，用有机溶剂例如乙酸乙酯萃 取1-4次，水层用碱例如氨水或氢氧化钠或碳酸钠等调节pH值至8. 0-10. O，再用乙酸乙酯 萃取1-4次，合并浓縮乙酸乙酯萃取物。 具体的方法为取植物薄叶山橙全株，经干燥、粉碎后，用醇提取l-4次，每次l-4 小时，得醇浸膏，然后通过酸碱处理，除去非生物碱类物质，在碱性条件下用有机溶剂萃取， 浓縮有机溶剂提取层，浸膏利用硅胶柱层析，用石油醚/丙酮做为洗脱系统分离得到式(I) 所示的化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)。 更具体的方法为取风干后的薄叶山橙植物全株，用90%乙醇7(TC加热，回流提 取3次，回收溶剂，浓縮到小体积，加入5% HC1调节pH值至2，用乙酸乙酯萃取3次，水层 用10X氨水调节pH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓縮乙酸乙酯层，乙酸乙酯部分用硅胶 拌样后，进行200-300目硅胶柱层析，划分为7段Frs 1_7，用石油醚/丙酮梯度洗脱分段，
分配比例为氯仿/甲醇i : o，i5 : i，io : i，6 : i，3 : i，i : i，o : 1，Fri用石油醚/
丙酮=12/1为洗脱剂，硅胶100g柱层析分离得薄叶山橙素甲(melotenineA)。
本发明的薄叶山橙提取物含有式(I)所示的薄叶山橙素甲(melotenine A)或其 药用盐10-95% (重量)可按如下步骤制备取植物薄叶山橙，用有机溶剂提取，所得提取 物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用硅胶柱层析进一步分离纯化。所述的提取是在 回流的温度下进行的，有机溶剂选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚类溶剂，其中醇类 溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，酮类溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁 基酮，酯类溶剂选自乙酸乙酯。酸碱处理是指向提取物中加入酸例如盐酸或硫酸调节PH 值至1. 0-3. O，用有机溶剂例如乙酸乙酯萃取1-4次，水层用碱例如氨水或氢氧化钠或碳酸 钠等调节PH值至8. 0-10. 0，再用乙酸乙酯萃取1-4次，合并浓縮乙酸乙酯萃取物。
药物组合物，其中含有权利要求l的式(I)化合物或其药用盐作为有效成分，并含 有常规药用载体。 式(I)化合物或其药用盐在治疗或预防癌症药物中的应用。 式(I)化合物或其药用盐在制备治疗肝癌、白血病、胰腺癌、乳腺癌及肺癌的药物 中的应用。 本发明的化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)类似物或其盐可经口或不经过口
给药，给药量因药物不同而各有不同，对成人来说，每天l-1000mg比较合适。 本说明书中，术语"烷基"是指饱和的直链或支链的脂族烃基，优选具有HO个碳
原子，更优选具有l-6个碳原子，更优选具有l-4个碳。代表性的例子包括甲基、乙基、丙基、
异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。 术语"烯基"是指具有至少一个碳碳双键，直链或支链的脂族烃基，优选具有2-10 个碳原子，更优选具有2-6个碳原子，更优选具有2-4个碳。代表性的例子包括乙烯基、丙 烯基、烯丙基、丁烯基、戊二烯基等。 术语"炔基"是指具有至少一个碳碳三键，直链或支链的脂族烃基，优选具有2-10 个碳原子，更优选具有2-6个碳原子，更优选具有2-4个碳。代表性的例子包括乙炔基、丙 炔基、丁炔基等。 本说明书中，亚基是指相应的基团与其它结构通过两个单键连接的方式相连，例 如亚乙基为_(^2(^2-，亚乙烯基为-CH = CH-;次基是指相应的基团与其它结构通过一个单 键和一个双键连接的方式相连，例如次甲基为-CH =。 经口服给药时，首先使化合物与常规的药用辅剂如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑 剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等 形式给药；非经口给药时可以注射液、输液剂或栓剂等形式给药。制备上述制剂时，可使用 常规的制剂技术。
具体实施例方式
下面的试验实施例、实施例和制剂实施例可更详细地说明本发明，但不以任何形
式限制本发明。
试验实施例1 : 本发明化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)具有明显的抗肿瘤活性，实验方法和 结果如下 —、材料与方法
1.样品及制备 样品呈无色，二甲基亚砜(DMS0)溶解配制为10mg/ml浓度的贮存液避光保存备 用。
2.细胞株
SK-BR-3，人乳腺癌细胞株
S匪C7721，人肝癌细胞株
HL-60，人白血病细胞株
PANC-1 ，人胰腺癌细胞株
A549，人肺癌细胞株
3.实验方法 (1)接种细胞用含10%胎牛血清的培养液(DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞 悬液，以每孔10000-20000个细胞接种到96孔板，每孔体积100ul，贴壁细胞提前12小时接 种培养。 (2)加入待测化合物溶液(化合物单体固定浓度40uM初筛，粗提物100ug/ml初 筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50%附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终 体积200ul，每种处理均设3个复孔。 (3)显色37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20ul。继续孵育4小时，终 止培养，小心吸弃孔内培养上清液100ul以避免细胞丢失，每孔加20X的SDS100ul，过夜孵 育(温度37°C )，使结晶物充分融解。 (4)比色选择595nm波长，酶联免疫检测仪(Bio-Rad 680)读取各孔光吸收值， 记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and Muench法)计算化合物的IC50值。
(5)阳性对照顺钼
二、结果 表1.薄叶山橙素甲(melotenine A)对人肿瘤细胞株生长的半数抑制浓度(IC5。， iiM)
IC50 (〃M)
cellsmelotenine A化合物D化合物Gcisplatin
SK-BR-32.811.717.221.7
SMMC-77215.218.812.318.1
HL-600.95.41.72.6
PANC-13.630.516.824.8
A-54910.725.921.915.8 三、结论 在本实验条件下，化合物薄叶山橙素甲(melotenine A)对以上包括人乳腺癌细 胞株(SK-BR-3)，人肝癌细胞株(S匪C7721)，人白血病细胞株(HL-60)，人胰腺癌细胞株 (PANC-1)，人肺癌细胞株(A549)生长的半数抑制浓度(IC50)在0. 9_10. 7 y M之间，化合物 D、G对以上肿瘤株的生长的半数抑制浓度(IC50)在1.7-25. 9 iiM之间，依据中国医药工业
8杂志1993,24 :455-457，周建军等提出的评价抗肿瘤物质活性的改良MTT法得出结论上述 数据显示了明显的抑制癌症的作用。
实施例1 : 风干后的14kg植物全株薄叶山橙(Melodi皿s henryi Craib)用90%乙醇加热 (70°C )回流提取3次，回收溶剂，浓縮到小体积，加入5% HC1调节pH值至2，用乙酸乙酯 萃取3次，水层用10%氨水调节pH值至9，再用乙酸乙酯萃取3次，浓縮乙酸乙酯层后称重 得17g。乙酸乙酯部分用适量硅胶拌样后，进行硅胶柱层析(400g，200-300目，青岛海洋化 工厂)划分为7段(Frs l-6)，用石油醚/丙酮梯度洗脱分段(分配比例1 : 0，15 : 1，
io : 1，6 : 1，3 : i，i : i，o : i)。 Fri(i.8g)用石油醚/丙酮=12/1为洗脱剂，硅胶
100g柱层析分离得薄叶山橙素甲(melotenine A)。 薄叶山橙素甲(melotenine A)的化学结构式为
COOCH3 薄叶山橙素甲(melotenine A)
(II) 分子量334，分子式C21H22N202。旋光[a ]25D = -136. 5° (c 0. 20， CHC13)。无色 晶体。易溶于氯仿，丙酮，甲醇等有机溶剂。 薄叶山橙素甲(melotenine A)的结构是基于它的紫外光谱、红外光谱、质谱和核 磁共振谱特别是二维核磁共振谱而确定。 紫外光谱数据UVA (max) (MeOH) :328 (3. 92) ， 298 (3. 82) ， 265 (4. 21) ， 221 (4. 64) nm 红外光谱数据:IR v(max) (KBr) :3440,2948， 1680， 1610， 1436， 1244
质谱数据HR-ESI-MS(m/z) :335. 1772 [M+H] +
力NMR禾P 13C NMR数据见表2。 以上数据结合2D NMR分析证实了薄叶山橙素甲(melotenine A)的化学结构为式 (II)所示。 表2.薄叶山橙素甲(melotenine A)的^ NMR禾口 13C NMR数据(CDC13)
实施例2 按实施例1的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的硫酸乙醇溶 液々H二4，过滤，干燥，制成硫酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
实施例3: 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的盐酸酸溶液， 一H二4，过滤，干燥，制成盐酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例4 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的磷酸酸溶液， P'H二4，过滤，干燥，制成磷酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例5 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A))，加入4%的酒石酸溶液， P'H二4，过滤，干燥，制成薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例6 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4%的柠檬酸溶液， PH二4，过滤，干燥，制成柠檬酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
实施例7 : 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4 %的甲酸溶液， pH二4，过滤，干燥，制成甲酸薄叶山橙素甲(melotenineA)。
实施例8: 按实施例1的方法制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，加入4 %的乙二酸溶液， —卩1=4，过滤，干燥，制成乙二酸薄叶山橙素甲(melotenine A)。
10
entry A _ S
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3. 74 (1H， s) 3. 79 (3H, s)
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HHHH HH HHH
1739 88 807
30017 99 7000
7 7
1 ^I-
d，d，
11211C
2.5equivof Bu3SnH, A旧N, benzene, 85 C, 2 h
实施例10
薄叶山橙素甲类似物的制备
11 实施例9 薄叶山橙素甲类似物的制备
<formula>formula see original document page 11</formula>allyl bromide, THF, 3 days
3equivof Bu3SnH, A旧N, benzene, 85 C, 9 h 制剂实施例1 : 按实施例1-10的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
制剂实施例2: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，将其溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于2安瓿中，低温冷冻干燥后
无菌熔封得粉针剂。
制剂实施例3: 将所分离得到薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，与赋形剂重量比为9 : 1的比例加入赋形剂，制成粉剂。
制剂实施例4: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒
12
NH
CH2(SePH)CHO, toluene, reflux, 9 h
COOCH3
一NH
rSePh
COOCH3
N—H石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重
量比为i : 5-1 : io的比例加入赋形剂，制粒压片。 制剂实施例5: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒
石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按常规口服液制
法制成口服液。 制剂实施例6: 按实施例1的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为5 : 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
制剂实施例7: 按实施例l二边的方法先制得薄叶山橙素甲(melotenine A)，以及利用有机酸(酒石酸，柠檬酸，甲酸，乙二酸等)或无机酸(盐酸，硫酸，磷酸等)制成的盐，按其与赋形剂重量比为3 : 1的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂或冲剂。
1权利要求
式(I)所示的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中R1选自C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；R2选自氢或COOR3，其中R3选自C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基；Y代表任选被1-5个R4取代的C2-10亚烷基、C2-10次烷基、C2-10亚烯基、C2-10次烯基、C2-10亚炔基或C2-10次炔基；R4选自氢、C1-10烷基、C2-10烯基或C2-10炔基。FSA00000009194200011.tif
2. 如权利要求1所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表C2—4亚烷基丄2 基、C2—4亚烯基或C2—4次烯基，R4选自氢或C卜4烷基。
3. 如权利要求2所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表C4亚烯基或C4次烯 基，W选自氢或甲基。
4. 如权利要求3所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其中Y代表次烷
5.如权利要求4所述的单萜吲哚生物碱或其药用盐，其是薄叶山橙素甲16COOCH3
6. 如权利要求l-5所述的药用盐，是指药学上可接受的盐，包括但不限于与有机酸如 酒石酸或柠檬酸或甲酸或乙二酸，或是与无机酸如盐酸或硫酸或磷酸形成的盐。
7. 如权利要求l式(I)所示的单萜吲哚类化合物(melotenineA)的制备方法，包括以 下步骤(1)式(II)化合物与PhSeCH2CH0反应得到式(III)化合物SePhII其中R1、 R2的含义与权利要求1相同；(2)式(III)化合物与式(IV)化合物反应得到式(V)化合物,SePh<formula>formula see original document page 3</formula>其中L为离去基团，Y与权利要求1的含义相同 (3)式(V)化合物环合得到式(I)化合物<formula>formula see original document page 3</formula>
8.如权利要求7的制备方法，其中式(IV)化合物的结构为<formula>formula see original document page 3</formula>其中X代表任选被1-5个R4取代的C卜4亚烷基、C2—4亚烯基或C2—4亚炔基，L为离去基 团，W与权利要求1的含义相同；
9. 一种制备薄叶山橙素甲的方法，包括以下步骤取植物薄叶山橙，用水或有机溶剂 提取，所得提取物通过酸碱处理除去非生物碱类物质，利用硅胶柱层析分离得到式(I)所 示的单萜吲哚生物碱薄叶山橙素甲。
10. 如权利要求9的制备方法，所述的提取是在回流的温度下进行的，所述的有机溶剂 选自醇类溶剂、酮类溶剂、酯类溶剂或醚类溶剂，其中所述的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丙 醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇，所述的酮类溶剂选自丙酮、丁酮、甲基异丁基酮，所述的酯类溶 剂选自乙酸乙酯。
11. 药物组合物，其中含有权利要求1-6的式(I)化合物或其药用盐作为有效成分，并 含有至少一种可药用载体。
12. 权利要求1-6的式(I)化合物或其药用盐在制备治疗或预防癌症药物中的应用。
13. 权利要求l-6的式(I)化合物或其药用盐在制备治疗或预防肝癌、白血病、胰腺癌、 乳腺癌及肺癌的药物中的应用。
全文摘要
提供由式(I)所示的抗肿瘤活性成分薄叶山橙素甲(melotenineA)类似物，其制备方法及医药用途。
文档编号A61K31/407GK101775019SQ20101010401
公开日2010年7月14日 申请日期2010年1月28日 优先权日2010年1月28日
发明者冯涛, 李艳, 王媛媛, 罗晓东, 蔡祥海 申请人:中国科学院昆明植物研究所
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