一种富含溶菌酶的新型生物增效剂的制作方法
专利名称：一种富含溶菌酶的新型生物增效剂的制作方法
技术领域：
一种高含溶菌酶的新型生物增效剂，本发明涉及兽药增效剂、饲料添加剂、食品安 全及酶制剂领域，具体说是一种新型绿色兽药增效剂，具有杀菌、提高生产性能等特性，可 以增效或替代抗生素，降低动物产品药物残留。
背景技术：
抗生素作为兽药和饲料添加剂在养殖业的应用已经有60多年的历史，对预防动 物疾病，提高养殖业的产量和质量起到了积极的作用。但是随着抗生素在动物生产中的广 泛使用，其弊端日益凸现，如导致动物胃肠道菌群失调，产生耐药性和药物残留等，引发了 一系列公共安全、环境保护和畜禽产品质量方面的问题。一些发达国家已把抗生素在动物 产品中的残留作为产品进出口贸易壁垒。在这种情况下，寻找能够克服上述弊端的抗生素 替代物，研发和使用新型、绿色兽药增效剂和饲料添加剂，已成为国内外学者关注和研究的执占。酶广泛存在于生物体内，参与新陈代谢等多种生理功能，其中对微生物细胞壁具 有水解功能的抗菌酶，如溶菌酶能够溶解微生物细胞壁而使微生物死亡，而且溶菌酶在人 和动物的唾液、眼泪、乳汁以及机体组织中大量存在，是人和动物自身重要的非特异性免疫 因子，与人和动物的健康息息相关。溶菌酶的溶菌(杀菌)作用与传统的抗生素药物相比，具有对某一病原菌所有血 清型都有效的优点，克服了一种抗生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足，更 不存在药物残留和耐药性的问题。溶菌酶不但能溶解(杀死)细菌，增强动物的免疫能力， 而且还能和病毒结合使病毒失活，在增效/替代抗生素、控制耐药菌、生产绿色肉蛋奶食品 方面是很好的选择。1、溶菌酶在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物组织、微生物细胞中均发现 了溶菌酶的存在，是人和动物自身的重要的非特异性免疫因子，具有杀菌消炎、抗病毒、增 强免疫力和促进有益菌繁殖等作用。2、β-1，3-葡聚糖酶主要来源于藤黄节杆菌、木霉、梨孢霉等，它的主要作用是 溶解酵母细胞壁和霉菌细胞壁。3、其它半纤维素酶包括木聚糖酶、甘露聚糖酶和聚半乳糖酶等，主要作用是将植 物细胞中的半纤维素水解为多种五碳糖，且降低半纤维素溶于水后的粘度。谷物饲料含有较 多的非淀粉多糖NSP，可溶性β -葡聚糖和阿拉伯木聚糖一般占NSP的30 %，是NSP抗营养作 用的主要物质基础。在饲料中添加半纤维素酶可明显降低谷物饲料中抗营养碳水化合物的粘 稠度，改善大部分营养物质的消化率和吸收率，进而改善饲料的能量值和适口性，提高饲料营 养价值。NSP酶在一定程度上能改善笼养鸡的卫生条件，也可减少呼吸道疾病的发生。
发明内容
本发明的目的是提供一种绿色新型生物增效剂，用于动物保健及预防治疗动物疾病，具有一种广谱、无残留、无污染、促生长的特点。本发明的技术方案一种新型酶组合饲料添加剂，以添加剂中酶活含量计算，按溶 菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、 β -葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g配比为饲料添加剂。所述酶组合饲料添加剂的制备方法1)本增效剂中溶菌酶为动物基因工程酶，通过基因克隆至工程菌，发酵和生物提 取制的。2)组合酶的配制根据所用酶的酶活含量换算成质量，按组合酶的配比称取相应 质量的溶菌酶、纤维素、木聚糖酶等然后混合均勻为组合酶。本增效剂的应用，用于兽药中；以粉末形式直接添加到兽药里，添加量见下列表 格表一溶菌酶增效剂在兽药中的添加量
兽药粉剂散剂粉针剂口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽) 本发明的有益效果1、抗菌促长本增效剂能水解细菌细胞壁，阻碍致病细菌的活性繁殖，并杀死致病 菌。在细菌形态学观察中表现出很强的溶菌现象，在溶菌的同时还具有杀菌作用。并对各 种动物具有较好的促生长效果。2、抗病毒本增效剂可以阻止流感和腺病毒繁殖，同带负电荷的病毒蛋白直接作 用，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。3、增强免疫力本增效剂作用为机体非特异性免疫因子之一，参与机体多种免疫 反应，在机体正常防御功能和非特异免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用。溶菌酶本 身具有T细胞表位，有诱导2型(th2)T辅助细胞反应；口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性 的thl和th2免疫反应，增强免疫功能，因此口服溶菌酶具有控制上呼吸道感染的功能并能 治疗痢疾。4、抗球虫本增效剂作为家禽体内非常重要的免疫因子，在肠道内和肠道有益菌 群及其他免疫细胞联合作用，参与肠粘膜的修复，具有抗球虫的重要作用。它还具有激活血 小板的功能，可以改善局部组织血液循环障碍，分解浓液，促进机体损伤组织的修复。它还 可以作为一种宿主抵抗因子，对组织局部起保护作用。。5、与抗生素配伍的增效作用溶菌酵素能增加抗菌药物效果的主要原因是它本身 能抗菌抗病毒，直接作用于病原菌细胞壁，而不像抗生素仅仅作用于细菌代谢途径，所以病 原菌不易对其产生耐药性。与抗生素配伍，双管齐下杀灭病菌，消除抗生素带来的免疫抑制 作用。
具体实施例方式下面结合实施案例详细阐述本发明。实施案例1溶菌酶新型生物增效剂的配制以添加剂中酶活含量计，将溶菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖 酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β -葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g组合，制 备成为生物增效剂。其制备方法为1)复合酶的配制根据酶的酶活含量，将酶活换算成所需的质量，称取相应质量 的溶菌酶、纤维素酶、木聚糖酶等。2)混合包装将称取好的复合酶混合均勻，并密封包装。实施案例2富含溶菌酶生物增效剂对大肠杆菌的抑制作用采用药敏纸片法进行检测(1)药敏纸片的制作取质量较好的定性滤纸，用普通打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50 片放入清洁于燥的小瓶，以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置于37°C温 箱中数天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0. Olml计，在上述含有50片纸片的小瓶 内加入药液0. 5ml，不时翻动，使滤纸片将药液均勻吸净，浸泡30分钟后，于37°C温箱过夜。 干燥后即密封，置阴暗干燥处保存。(2)药液的制备将本饲料添加剂按300g/吨用量的十倍溶解稀释，浸泡药敏纸片。(3)试验操作方法在超净工作台中，用无菌棉拭子蘸取大肠杆菌菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。 用棉拭子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证 涂均勻。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接 触。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中央贴一片，外周等距离贴5-6片。贴完纸 片的平皿15分钟后再置于37°C温箱中培养16-24小时，观察记录结果。药敏试验结果判定标准抑菌圈直径(毫米)敏感性> 20极敏感 15-20高敏感 10-14中敏感 < 10低敏感 0不敏感(4)试验结果见表二表二 大肠杆菌药敏试验结果
权利要求
1.一种富含溶菌酶的新型生物增效剂，其特征在于以制剂中酶活含量计，溶菌酶 5000000IU/g、纤维素 CMC 酶 5000IU/g、木聚糖酶 140000IU/g、酸性蛋白酶 5000IU/g、β -葡 聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g配比为饲料添加剂。
2.—种权利要求1所述溶菌酶是利用DNA重组技术，将健康动物体内的溶菌酶基因调 出，进行基因修饰后，克隆至工程菌中，通过发酵、生物提取而制取的一种天然酶，安全、绿 色、无抗药性。
3.权利要求1的富含溶菌酶生物增效剂的应用，其特征是应用于兽药中；以粉末形式 直接添加，添加量兽药粉剂散剂粉针剂口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽)
全文摘要
本发明旨在提供一种富含溶菌酶的新型生物增效剂，包含物质如下溶菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β-葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g。该种增效剂具有杀菌、绿色环保，增强畜禽免疫力，降低药物残留，提高生产性能等功效。
文档编号A61P31/12GK102139098SQ20101010406
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月2日 优先权日2010年2月2日
发明者李龙 申请人:李龙, 杭州易泰生物工程有限公司, 田相迪
技术领域：
一种高含溶菌酶的新型生物增效剂，本发明涉及兽药增效剂、饲料添加剂、食品安 全及酶制剂领域，具体说是一种新型绿色兽药增效剂，具有杀菌、提高生产性能等特性，可 以增效或替代抗生素，降低动物产品药物残留。
背景技术：
抗生素作为兽药和饲料添加剂在养殖业的应用已经有60多年的历史，对预防动 物疾病，提高养殖业的产量和质量起到了积极的作用。但是随着抗生素在动物生产中的广 泛使用，其弊端日益凸现，如导致动物胃肠道菌群失调，产生耐药性和药物残留等，引发了 一系列公共安全、环境保护和畜禽产品质量方面的问题。一些发达国家已把抗生素在动物 产品中的残留作为产品进出口贸易壁垒。在这种情况下，寻找能够克服上述弊端的抗生素 替代物，研发和使用新型、绿色兽药增效剂和饲料添加剂，已成为国内外学者关注和研究的执占。酶广泛存在于生物体内，参与新陈代谢等多种生理功能，其中对微生物细胞壁具 有水解功能的抗菌酶，如溶菌酶能够溶解微生物细胞壁而使微生物死亡，而且溶菌酶在人 和动物的唾液、眼泪、乳汁以及机体组织中大量存在，是人和动物自身重要的非特异性免疫 因子，与人和动物的健康息息相关。溶菌酶的溶菌(杀菌)作用与传统的抗生素药物相比，具有对某一病原菌所有血 清型都有效的优点，克服了一种抗生素只能预防一种或其中一种血清型病原菌的不足，更 不存在药物残留和耐药性的问题。溶菌酶不但能溶解(杀死)细菌，增强动物的免疫能力， 而且还能和病毒结合使病毒失活，在增效/替代抗生素、控制耐药菌、生产绿色肉蛋奶食品 方面是很好的选择。1、溶菌酶在人和动物的多种组织、分泌液及某些植物组织、微生物细胞中均发现 了溶菌酶的存在，是人和动物自身的重要的非特异性免疫因子，具有杀菌消炎、抗病毒、增 强免疫力和促进有益菌繁殖等作用。2、β-1，3-葡聚糖酶主要来源于藤黄节杆菌、木霉、梨孢霉等，它的主要作用是 溶解酵母细胞壁和霉菌细胞壁。3、其它半纤维素酶包括木聚糖酶、甘露聚糖酶和聚半乳糖酶等，主要作用是将植 物细胞中的半纤维素水解为多种五碳糖，且降低半纤维素溶于水后的粘度。谷物饲料含有较 多的非淀粉多糖NSP，可溶性β -葡聚糖和阿拉伯木聚糖一般占NSP的30 %，是NSP抗营养作 用的主要物质基础。在饲料中添加半纤维素酶可明显降低谷物饲料中抗营养碳水化合物的粘 稠度，改善大部分营养物质的消化率和吸收率，进而改善饲料的能量值和适口性，提高饲料营 养价值。NSP酶在一定程度上能改善笼养鸡的卫生条件，也可减少呼吸道疾病的发生。
发明内容
本发明的目的是提供一种绿色新型生物增效剂，用于动物保健及预防治疗动物疾病，具有一种广谱、无残留、无污染、促生长的特点。本发明的技术方案一种新型酶组合饲料添加剂，以添加剂中酶活含量计算，按溶 菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、 β -葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g配比为饲料添加剂。所述酶组合饲料添加剂的制备方法1)本增效剂中溶菌酶为动物基因工程酶，通过基因克隆至工程菌，发酵和生物提 取制的。2)组合酶的配制根据所用酶的酶活含量换算成质量，按组合酶的配比称取相应 质量的溶菌酶、纤维素、木聚糖酶等然后混合均勻为组合酶。本增效剂的应用，用于兽药中；以粉末形式直接添加到兽药里，添加量见下列表 格表一溶菌酶增效剂在兽药中的添加量
兽药粉剂散剂粉针剂口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽) 本发明的有益效果1、抗菌促长本增效剂能水解细菌细胞壁，阻碍致病细菌的活性繁殖，并杀死致病 菌。在细菌形态学观察中表现出很强的溶菌现象，在溶菌的同时还具有杀菌作用。并对各 种动物具有较好的促生长效果。2、抗病毒本增效剂可以阻止流感和腺病毒繁殖，同带负电荷的病毒蛋白直接作 用，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。3、增强免疫力本增效剂作用为机体非特异性免疫因子之一，参与机体多种免疫 反应，在机体正常防御功能和非特异免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用。溶菌酶本 身具有T细胞表位，有诱导2型(th2)T辅助细胞反应；口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性 的thl和th2免疫反应，增强免疫功能，因此口服溶菌酶具有控制上呼吸道感染的功能并能 治疗痢疾。4、抗球虫本增效剂作为家禽体内非常重要的免疫因子，在肠道内和肠道有益菌 群及其他免疫细胞联合作用，参与肠粘膜的修复，具有抗球虫的重要作用。它还具有激活血 小板的功能，可以改善局部组织血液循环障碍，分解浓液，促进机体损伤组织的修复。它还 可以作为一种宿主抵抗因子，对组织局部起保护作用。。5、与抗生素配伍的增效作用溶菌酵素能增加抗菌药物效果的主要原因是它本身 能抗菌抗病毒，直接作用于病原菌细胞壁，而不像抗生素仅仅作用于细菌代谢途径，所以病 原菌不易对其产生耐药性。与抗生素配伍，双管齐下杀灭病菌，消除抗生素带来的免疫抑制 作用。
具体实施例方式下面结合实施案例详细阐述本发明。实施案例1溶菌酶新型生物增效剂的配制以添加剂中酶活含量计，将溶菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖 酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β -葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g组合，制 备成为生物增效剂。其制备方法为1)复合酶的配制根据酶的酶活含量，将酶活换算成所需的质量，称取相应质量 的溶菌酶、纤维素酶、木聚糖酶等。2)混合包装将称取好的复合酶混合均勻，并密封包装。实施案例2富含溶菌酶生物增效剂对大肠杆菌的抑制作用采用药敏纸片法进行检测(1)药敏纸片的制作取质量较好的定性滤纸，用普通打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50 片放入清洁于燥的小瓶，以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置于37°C温 箱中数天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0. Olml计，在上述含有50片纸片的小瓶 内加入药液0. 5ml，不时翻动，使滤纸片将药液均勻吸净，浸泡30分钟后，于37°C温箱过夜。 干燥后即密封，置阴暗干燥处保存。(2)药液的制备将本饲料添加剂按300g/吨用量的十倍溶解稀释，浸泡药敏纸片。(3)试验操作方法在超净工作台中，用无菌棉拭子蘸取大肠杆菌菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。 用棉拭子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证 涂均勻。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接 触。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中央贴一片，外周等距离贴5-6片。贴完纸 片的平皿15分钟后再置于37°C温箱中培养16-24小时，观察记录结果。药敏试验结果判定标准抑菌圈直径(毫米)敏感性> 20极敏感 15-20高敏感 10-14中敏感 < 10低敏感 0不敏感(4)试验结果见表二表二 大肠杆菌药敏试验结果
权利要求
1.一种富含溶菌酶的新型生物增效剂，其特征在于以制剂中酶活含量计，溶菌酶 5000000IU/g、纤维素 CMC 酶 5000IU/g、木聚糖酶 140000IU/g、酸性蛋白酶 5000IU/g、β -葡 聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g配比为饲料添加剂。
2.—种权利要求1所述溶菌酶是利用DNA重组技术，将健康动物体内的溶菌酶基因调 出，进行基因修饰后，克隆至工程菌中，通过发酵、生物提取而制取的一种天然酶，安全、绿 色、无抗药性。
3.权利要求1的富含溶菌酶生物增效剂的应用，其特征是应用于兽药中；以粉末形式 直接添加，添加量兽药粉剂散剂粉针剂口服液添加量1-1. 5%0. 3-0. 5%lg/100L (深部肌肉注射)3g/1000 羽 (主要用于家禽)
全文摘要
本发明旨在提供一种富含溶菌酶的新型生物增效剂，包含物质如下溶菌酶5000000IU/g、纤维素CMC酶5000IU/g、木聚糖酶140000IU/g、酸性蛋白酶5000IU/g、β-葡聚糖酶20000IU/g、果胶酶5000IU/g。该种增效剂具有杀菌、绿色环保，增强畜禽免疫力，降低药物残留，提高生产性能等功效。
文档编号A61P31/12GK102139098SQ20101010406
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月2日 优先权日2010年2月2日
发明者李龙 申请人:李龙, 杭州易泰生物工程有限公司, 田相迪
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