一种抗移植免疫排斥反应的新型j2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途的制作方法
专利名称：一种抗移植免疫排斥反应的新型j2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及抗移植免疫的免疫抑制剂，特别是抗移植免疫排斥反应的化合物免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球缓释制剂，本发明还涉及该缓释制剂的制备方法和用途。
背景技术：
免疫抑制的历史发展虽然不长，却在器官移植领域获得了显著成就。免疫移植剂在器官移植中用于防治排斥反应，即，干扰受体对外来抗原的识别和对非自身细胞的清除。 免疫移植剂在器官移植中的应用大大提高了移植患者的存活率，目前，肝移植、肾移植、角膜移植、皮肤移植、心脏移植、肺脏移植等器官移植已达到相当成功的水平，其中肝、肾、皮肤移植和角膜移植临床应用最多。这些成绩的取得与外科手术日臻成熟密不可分，但更为重要的是免疫抑制剂在器官移植中的应用。20世纪60年代可以应用疫抑制剂十分有限，只有皮质激素及硫唑嘌呤；70年代有抗淋巴细胞球蛋白B多克隆抗体C ；80年代初有环孢素，近年来多个用于控制器官移植排斥反应的新型免疫抑制剂进入临床，如西罗莫司， 咪唑立宾，FTY720,⑶3单抗，⑶25单抗，CTLA-4免疫球蛋白等。由于免疫抑制剂的作用是非特异的，选择性差，有明显的毒副作用。因此近年来免疫抑制剂的研究主要集中在提高免疫抑制剂的安全性使用，在降低肝、肾毒性，神经毒性和胃肠道毒性等方面有了很大改善， 对于器官移植的患者来说，目前的免疫抑制剂虽然使抑制物的存活时间大大延长，但还未达到理想的境地，在实际应用中表现特异性较差，对正常免疫反应的抑制作用也较强，所以服用这些免疫抑制剂的患者冒着巨大的危险。因此，寻找和发现毒性小，选择性和特异性好的免疫抑制剂仍是免疫学家和药物学家的重要课题。计算机辅助药物设计技术(Computer-as-sisted drug disgn CADD)在抗原的识别，淋巴细胞的活化增殖过程中，细胞表面与细胞识别相关的蛋白分子接触是受严格限制的。因此，人们想到如果能有一种药物可以和这些蛋白质分子的某些结构相结合，就可以阻断信号的传递，达到控制免疫过程的目的。Connolly首先提出了靶标分子几何空间构象的 DOCK概念，DOCK是目标靶分子的三维结构中与其配体结合发挥其生物学效应的部位。基于此人们通过CADD设计出药物。它的基本过程是通过实验得到目标靶分子的三维结构，运用计算机技术将已知空间构象的化合物进行筛选，得到与目标靶分子DOCK结构相匹配的药物，通过体内、外实验验证该药物的有效性。Song Li基于⑶4分子的domainl的D0CK3. 5 结构，通过CADD技术从约150，000小分子非肽类有机化合物中筛选出J2，在体外实验中具有良好的抑制CD4分子与MHC II分子结合形成复合体的作用，通过动物实验证明具有良好的抗排斥作用。小分子非肽类免疫抑制剂与传统免疫抑制剂相比具有特异性高，副作用少的特点。没有抗体类药物的抗原性问题，为抗角膜排斥反应提供了一个新的思路，其在角膜移植中有很好的应用价值。J2的合成方法为直接将1-氯-2，4_ 二硝基苯与甲胺乙醇溶液反应，得(2， 4-二硝基苯基)甲胺(I )；再经氢化和三乙胺溶液反应得到关键中间体(II )，即N-甲
5基-4-硝基苯-1，2-胺；再经乙腈溶解，将(E)-3-吲哚丙烯酸溶于无水四呋喃中，用DCC 缩合法加入化合物(II )反应得到黄色固体(III)，即E-3-(吲哚-3-基)-N- -甲胺基-5-硝基-苯基)丙烯酰胺(J2)，其为以吲哚丙烯酰胺为核心结构的CD4抑制剂。
权利要求
1.一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述缓释免疫抑制剂包括含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
2.根据权利要求1所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述微球是以海藻酸钠为载体，交联免疫抑制剂J2并将其吸附和包裹在其中形成的。
3.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述微球的制备包括下述步骤的方法(1)将免疫抑制剂J2称重，用无水乙醇或二甲基亚砜溶解，得到0.1 8.8%质量体积百分比的免疫抑制剂J2溶液；(2)将海藻酸钠称重，用注射用水或生理盐水溶解，得到1 6%质量体积百分比的海藻酸钠溶液；(3)将二价金属阳离子钙盐称重，所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡，配制成1 15%质量体积百分比固化液；在所得固化液中加入无水乙醇，固化液和无水乙醇的体积比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合，得混合液；(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置，喷雾微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得到含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
4.根据权利要求3所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置包括高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置，所述高压静电发生装置上有正负两极，所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连，所述正极与喷射头相连，所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接，所述不锈钢钢丝与无菌容器相连，所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
5.根据权利要求4所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220 260伏，频率为10 100HZ，脉宽为10 199PS，所述推进泵的泵速为10 350毫升/小时，喷射头为4 20号。
6.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于所述缓释制剂还包括固化液，所述固化液为乳酸钙、氯化钙或氯化钡的1 15%重量溶液，储存在固化剂溶液中的微球的粒径 20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
7.根据权利要求6所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于微球储存在固化溶液中，微球与固化液的重量比为0. 15 3. 5 1 80。
8.根据权利要求1或2所述的缓释制剂，其特征在于所述缓释制剂中的微球是粉末状颗粒，其粒径范围为 10 50μπι、50 100μπι、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、 300 500 μ m、500 700 μ m、750 950 μ m。
9.根据权利要求3所述的缓释制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 完成之后，将上层溶液倾析，将微球用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球。
10.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其中还包括选自他克莫司、西罗莫司、霉酚酸脂、咪唑立宾、强的松、甲泼尼龙、环孢素A、赛尼哌或FTY720的活性成分。
11.一种制备权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂的方法，其特征在于包括下列步骤(1)将免疫抑制剂J2称重，用无水乙醇或二甲基亚砜溶解，得到0.1 8.8%重量的免疫抑制剂J2溶液；(2)将海藻酸钠称重，用注射用水或生理盐水溶解，得到1 6%重量的海藻酸钠溶液；(3)将二价金属阳离子钙盐称重，所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡，配制成1 15%重量固化液；在所得固化液中加入无水乙醇，固化液和无水乙醇的体积比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合，得混合液；(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置，喷雾微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
12.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于在步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置包括高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置，所述高压静电发生装置上有正负两极，所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连，所述正极与喷射头相连，所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接，所述不锈钢钢丝与无菌容器相连，所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
13.根据权利要求12所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于其制备过程的步骤 (5)使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220 260伏，频率为10 100HZ，脉宽为 10 199PS，所述推进泵的泵速为10 350毫升/小时，喷射头为4 20号需要指明口径数值范围。
14.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 得到的微球储存在固化剂溶液中，微球的粒径20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
15.根据权利要求11或14所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 得到微球储存在固化溶液中，微球与固化液的重量比为0. 15 3. 5 1 80。
16.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 完成之后， 将微球干燥，得到粉末颗粒。
17.根据权利要求16所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 完成之后， 微球用冷冻干燥或烘箱干燥法干燥，得到粉末颗粒，即，干球。
18.根据权利要求16或17所述的制备方法，其特征在于粉末状颗粒形式的微球粒径范围为 10 50 μ m、50 100 μ m、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、 500 700 μ m 或 750 950 μ m。
19.一种根据权利要求1-10任一项所述的抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、角膜、皮肤移植后排斥反应的预防和治疗。
20.根据权利要求19所述的制备药物的用途，其特征在于所述药物用于角膜移植后排斥反应的预防和治疗。
全文摘要
一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途。所述缓释制剂以其基质材料天然，微球植入方便。该制剂以海藻酸钠为药物载体，交联J2免疫活性成份，通过微球液滴发生装置，在钙离子的作用下，将免疫抑制剂包裹或吸附在微球里。所述制剂具有对特定组织器官的靶向性，能延长药物局部作用时间，提高药物的生物利用度，降低全身毒副作用，其可应用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、皮肤、角膜和移植的免疫抑制。
文档编号A61K45/00GK102258477SQ20101018598
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者李新建, 洪宏 申请人:北京宏医耀科技发展有限公司
技术领域：
本发明涉及抗移植免疫的免疫抑制剂，特别是抗移植免疫排斥反应的化合物免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球缓释制剂，本发明还涉及该缓释制剂的制备方法和用途。
背景技术：
免疫抑制的历史发展虽然不长，却在器官移植领域获得了显著成就。免疫移植剂在器官移植中用于防治排斥反应，即，干扰受体对外来抗原的识别和对非自身细胞的清除。 免疫移植剂在器官移植中的应用大大提高了移植患者的存活率，目前，肝移植、肾移植、角膜移植、皮肤移植、心脏移植、肺脏移植等器官移植已达到相当成功的水平，其中肝、肾、皮肤移植和角膜移植临床应用最多。这些成绩的取得与外科手术日臻成熟密不可分，但更为重要的是免疫抑制剂在器官移植中的应用。20世纪60年代可以应用疫抑制剂十分有限，只有皮质激素及硫唑嘌呤；70年代有抗淋巴细胞球蛋白B多克隆抗体C ；80年代初有环孢素，近年来多个用于控制器官移植排斥反应的新型免疫抑制剂进入临床，如西罗莫司， 咪唑立宾，FTY720,⑶3单抗，⑶25单抗，CTLA-4免疫球蛋白等。由于免疫抑制剂的作用是非特异的，选择性差，有明显的毒副作用。因此近年来免疫抑制剂的研究主要集中在提高免疫抑制剂的安全性使用，在降低肝、肾毒性，神经毒性和胃肠道毒性等方面有了很大改善， 对于器官移植的患者来说，目前的免疫抑制剂虽然使抑制物的存活时间大大延长，但还未达到理想的境地，在实际应用中表现特异性较差，对正常免疫反应的抑制作用也较强，所以服用这些免疫抑制剂的患者冒着巨大的危险。因此，寻找和发现毒性小，选择性和特异性好的免疫抑制剂仍是免疫学家和药物学家的重要课题。计算机辅助药物设计技术(Computer-as-sisted drug disgn CADD)在抗原的识别，淋巴细胞的活化增殖过程中，细胞表面与细胞识别相关的蛋白分子接触是受严格限制的。因此，人们想到如果能有一种药物可以和这些蛋白质分子的某些结构相结合，就可以阻断信号的传递，达到控制免疫过程的目的。Connolly首先提出了靶标分子几何空间构象的 DOCK概念，DOCK是目标靶分子的三维结构中与其配体结合发挥其生物学效应的部位。基于此人们通过CADD设计出药物。它的基本过程是通过实验得到目标靶分子的三维结构，运用计算机技术将已知空间构象的化合物进行筛选，得到与目标靶分子DOCK结构相匹配的药物，通过体内、外实验验证该药物的有效性。Song Li基于⑶4分子的domainl的D0CK3. 5 结构，通过CADD技术从约150，000小分子非肽类有机化合物中筛选出J2，在体外实验中具有良好的抑制CD4分子与MHC II分子结合形成复合体的作用，通过动物实验证明具有良好的抗排斥作用。小分子非肽类免疫抑制剂与传统免疫抑制剂相比具有特异性高，副作用少的特点。没有抗体类药物的抗原性问题，为抗角膜排斥反应提供了一个新的思路，其在角膜移植中有很好的应用价值。J2的合成方法为直接将1-氯-2，4_ 二硝基苯与甲胺乙醇溶液反应，得(2， 4-二硝基苯基)甲胺(I )；再经氢化和三乙胺溶液反应得到关键中间体(II )，即N-甲
5基-4-硝基苯-1，2-胺；再经乙腈溶解，将(E)-3-吲哚丙烯酸溶于无水四呋喃中，用DCC 缩合法加入化合物(II )反应得到黄色固体(III)，即E-3-(吲哚-3-基)-N- -甲胺基-5-硝基-苯基)丙烯酰胺(J2)，其为以吲哚丙烯酰胺为核心结构的CD4抑制剂。
权利要求
1.一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述缓释免疫抑制剂包括含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
2.根据权利要求1所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述微球是以海藻酸钠为载体，交联免疫抑制剂J2并将其吸附和包裹在其中形成的。
3.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于，所述微球的制备包括下述步骤的方法(1)将免疫抑制剂J2称重，用无水乙醇或二甲基亚砜溶解，得到0.1 8.8%质量体积百分比的免疫抑制剂J2溶液；(2)将海藻酸钠称重，用注射用水或生理盐水溶解，得到1 6%质量体积百分比的海藻酸钠溶液；(3)将二价金属阳离子钙盐称重，所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡，配制成1 15%质量体积百分比固化液；在所得固化液中加入无水乙醇，固化液和无水乙醇的体积比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合，得混合液；(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置，喷雾微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得到含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
4.根据权利要求3所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置包括高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置，所述高压静电发生装置上有正负两极，所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连，所述正极与喷射头相连，所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接，所述不锈钢钢丝与无菌容器相连，所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
5.根据权利要求4所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220 260伏，频率为10 100HZ，脉宽为10 199PS，所述推进泵的泵速为10 350毫升/小时，喷射头为4 20号。
6.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于所述缓释制剂还包括固化液，所述固化液为乳酸钙、氯化钙或氯化钡的1 15%重量溶液，储存在固化剂溶液中的微球的粒径 20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
7.根据权利要求6所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于微球储存在固化溶液中，微球与固化液的重量比为0. 15 3. 5 1 80。
8.根据权利要求1或2所述的缓释制剂，其特征在于所述缓释制剂中的微球是粉末状颗粒，其粒径范围为 10 50μπι、50 100μπι、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、 300 500 μ m、500 700 μ m、750 950 μ m。
9.根据权利要求3所述的缓释制剂，其特征在于其制备过程的步骤( 完成之后，将上层溶液倾析，将微球用冷冻干燥或烘箱干燥法制得干球。
10.根据权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂，其特征在于其中还包括选自他克莫司、西罗莫司、霉酚酸脂、咪唑立宾、强的松、甲泼尼龙、环孢素A、赛尼哌或FTY720的活性成分。
11.一种制备权利要求1或2所述的缓释免疫抑制剂的方法，其特征在于包括下列步骤(1)将免疫抑制剂J2称重，用无水乙醇或二甲基亚砜溶解，得到0.1 8.8%重量的免疫抑制剂J2溶液；(2)将海藻酸钠称重，用注射用水或生理盐水溶解，得到1 6%重量的海藻酸钠溶液；(3)将二价金属阳离子钙盐称重，所述阳离子钙盐选自乳酸钙、氯化钙或氯化钡，配制成1 15%重量固化液；在所得固化液中加入无水乙醇，固化液和无水乙醇的体积比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)将免疫抑制剂J2溶液和海藻酸钠溶液混合，得混合液；(5)将上述步骤(4)的混合液通过高压静电微球液滴发生装置，喷雾微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得含免疫抑制剂J2的海藻酸钠微球。
12.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于在步骤( 使用的高压静电微球液滴发生装置包括高压静电发生装置、推进泵、喷射头、无菌容器、正负电极、无菌注射器、升降装置，所述高压静电发生装置上有正负两极，所述推进泵与无菌注射器和喷射头相连，所述正极与喷射头相连，所述负极与浸在所述固化液中的不锈钢钢丝相连接，所述不锈钢钢丝与无菌容器相连，所述不锈钢钢丝与无菌容器下方有调节距离的升降装置。
13.根据权利要求12所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于其制备过程的步骤 (5)使用的高压静电微球液滴发生装置的电压为220 260伏，频率为10 100HZ，脉宽为 10 199PS，所述推进泵的泵速为10 350毫升/小时，喷射头为4 20号需要指明口径数值范围。
14.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 得到的微球储存在固化剂溶液中，微球的粒径20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
15.根据权利要求11或14所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 得到微球储存在固化溶液中，微球与固化液的重量比为0. 15 3. 5 1 80。
16.根据权利要求11所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 完成之后， 将微球干燥，得到粉末颗粒。
17.根据权利要求16所述的缓释免疫抑制剂制备方法，其特征在于步骤( 完成之后， 微球用冷冻干燥或烘箱干燥法干燥，得到粉末颗粒，即，干球。
18.根据权利要求16或17所述的制备方法，其特征在于粉末状颗粒形式的微球粒径范围为 10 50 μ m、50 100 μ m、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、 500 700 μ m 或 750 950 μ m。
19.一种根据权利要求1-10任一项所述的抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、角膜、皮肤移植后排斥反应的预防和治疗。
20.根据权利要求19所述的制备药物的用途，其特征在于所述药物用于角膜移植后排斥反应的预防和治疗。
全文摘要
一种抗移植免疫排斥反应的新型J2-海藻酸钠微球缓释免疫抑制剂、制备方法和用途。所述缓释制剂以其基质材料天然，微球植入方便。该制剂以海藻酸钠为药物载体，交联J2免疫活性成份，通过微球液滴发生装置，在钙离子的作用下，将免疫抑制剂包裹或吸附在微球里。所述制剂具有对特定组织器官的靶向性，能延长药物局部作用时间，提高药物的生物利用度，降低全身毒副作用，其可应用于心脏、肝脏、肾脏、肺脏、皮肤、角膜和移植的免疫抑制。
文档编号A61K45/00GK102258477SQ20101018598
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者李新建, 洪宏 申请人:北京宏医耀科技发展有限公司
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