复合菌制剂及其在幼禽畜增重及防治下痢中的应用的制作方法
专利名称：复合菌制剂及其在幼禽畜增重及防治下痢中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及复合菌制剂及其在幼禽畜增重及防治下痢中 的应用。
背景技术：
滥用抗生素引起的药物残留，使得人类在食用有药物残留的食品后，经常出现过 敏、致畸、致残、致癌、中毒等急性或慢性疾病。随着人们生活水平的提高及对绿色健康食品 需求的增加，使用抗生素引起的药物残留问题越来越受到重视。无药残、无污染且能提高经 济效益的饲用微生态制剂成为国内外研究的热点。饲用微生态制剂是一类专用于添加在动 物饲料内，以提高畜禽产品的生产性能和经济效益，同时又能代替传统抗生素添加剂，兼有 抗病、无药残、无污染特性的一类制剂，是实现绿色养殖和生产绿色动物产品的有效、可靠 途径。蜡样芽孢杆菌(学名bacillus cereus)，又称仙人掌杆菌，为芽孢杆菌属，是一 种地方性，土壤生活的，革兰氏阳性的杆状细菌，(1)蜡样芽孢杆菌在生长过程中产生多种 活性物质对致病菌或条件致病菌有明显的抑制任用；同时蜡样芽孢杆菌能迅速消耗消化道 内环境中的游离氧，形成肠道低氧环境，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降 低肠道PH值，间接抑制其他致病菌的生长；(2)蜡样芽孢杆菌能刺激动物免疫器官的生长 发育，激活淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群 体免疫力.(3)蜡样芽孢杆菌能分泌各种蛋白酶.淀粉酶.脂肪酶.纤维酶等，在消化道 中与内源酶共同发挥作用，提高饲料消化率，同时蜡样芽孢杆菌能合成多种维生素，提高动 物体内干扰素和巨噬细胞的活性.该菌能调节动物肠道菌群平衡，改善肠道微生物生态环 境，有效维持动物机体健康状况，提高动物对饲料的消化利用率并能提高机体免疫力，抗应 激能力；净化牲畜生长环境，减少发病诱因，有效减少有害气体的排放，极大地降低因有害 气体引起的呼吸道疾病发生率；是天然的绿色饲料添加剂产品。粪链球菌(E. faecalis)和屎链球菌(E. feacium)均属肠球菌属(Enterococcus)， 为人和动物肠道正常菌群，我国批准可作为饲料添加剂。这两株菌可用于防治幼畜苗禽因 肠道菌群失调引起的下痢，具有调节肠道正常菌群失调和促进生长的作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是防治幼畜禽下痢，可通过提供复合菌剂完成，所述复 合菌剂含有芽孢杆菌属菌及肠球菌属菌。在本发明一个优选的方面，所述芽孢杆菌属菌选自蜡状芽孢杆菌种的一个菌株或 不同菌株的组合物。所述蜡样芽孢杆菌种可购自海南山城医药贸易有限公司，石家庄诺亚威生物技 术有限公司，也可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，其保藏号为1. 1626,1. 126， 1. 1483，1. 984，1. 932，1. 895，1. 447，1. 352，1. 348，1. 260，1. 230，1. 229，1. 2238，1. 2224，1. 2223，1. 196，1. 195，1. 189，1. 173，1. 1846，1. 1689，1. 1688，1. 1687 或 1. 1686。再更优选地，所述芽孢杆菌属菌为保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保 藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌菌种。该保藏号为1. 1626的菌种记载于欧洲生物化学杂志(Eur. J. Biochem. ) 1980年 112 卷 273-281 页。在本发明一个优选的方面，所述肠球菌属菌为粪肠球菌种的一个菌株或不同菌株 的组合物。所述粪肠球菌可购自湖北绿天地生物科技有限公司，山东宝来利来生物工程股份 有限公司，山东信宜生物工程有限公司，广州市微盾生物科技有限公司，北京百林康源生 物技术有限责任公司，也可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，其保藏号为1. 131， 1. 130，1. 125，1. 101，1. 100，1. 595，1. 2135 或 1. 2024。再更优选地，所述肠球菌属菌为保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏 号为1. 100或1. 125的粪链球菌菌株的组合物。在本发明的一个更优选的方面，所述复合菌制剂中含有保藏于中国普通微生物菌 种保藏管理中心，保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌菌种，保藏号为1. 100或1. 125的粪链 球菌。所述粪链球菌1. 100株可购自位于汉川市经济开发区北桥科技工业园的湖北绿 天地生物科技有限公司。所述粪链球菌1. 125株可购自位于山东省泰安市泰山区的山东宝来利来生物工 程股份有限公司，所述蜡样芽孢杆菌1. 1626株可购自位于海南省海口市的海南山城医药贸易有限 公司。可选地，该复合菌制剂还包括赋形剂，所述赋形剂可选自普通的石粉、碳酸钙粉、 麸皮、糠的组，或其组合物。所述石粉优选为碳酸钙粉。本发明还提供所述菌株的培养方法肠球菌属菌以乳酸菌培养基，芽孢杆菌属菌以普通肉汤，按通常方法进行培养。每克培养得到的肠球菌属菌单一菌培养物中粪链球菌菌数为IOki IO12Cfu,芽孢 杆菌属菌单一菌培养物中菌数为3 X IO8 IX IO11Cft所述菌株均采用平板法计数。本发明还提供制备所述复合菌制剂的方法，包括以下步骤1)将菌株培养物与赋形剂制成干粉，其中菌株培养基与赋形剂的质量比为1 30 1，优选为 10 1。2)将肠球菌属菌剂干粉与芽孢杆菌属菌剂干粉按质量比1 0. 5 2的比例混 合制成复合菌制剂。再优选为肠球菌属菌为粪链球菌的保藏号为1. 125的菌株及粪链球菌 的保藏号为1. 100的菌株的组合物，芽孢杆菌属菌为保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌。粪 链球菌的保藏号为1. 125的菌株干粉，粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及保藏号为 1.1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比1 0.8 1.2 1. 8 2. 2的比例制成复合菌制 齐IJ，优选为1 1 2。本发明还提供所述复合菌制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病菌的应用，包括鸡白痢 沙门氏菌和仔猪黄、白痢大肠杆菌，白痢致病性大肠杆菌。
本发明还提供所述复合菌制剂用于防治幼禽畜疾病的应用，包括仔鸡白痢、仔猪 黄、白痢。本发明还提供所述复合菌制剂用于动物增重方面的用途，主要用于仔猪、仔鸡。本发明涉及的复合菌制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病 菌或防治幼禽畜疾病及 动物增重方面的用途时，可以饲料添加剂的形式使用，饲料添加剂的用量为饲料重量的 0. 5% 1%。本发明涉及的菌株及其组成的复合菌制剂具有以下的优点1)通过在饲料中添加本发明涉及的复合菌制剂，可以有效地防治幼禽畜下痢疾 病，提高幼禽畜成活率，节约幼禽畜疫病治疗防控成本，提高养殖效益。2)在禽畜养殖过程中，通过使用本发明涉及的复合菌制剂，可以避免使用抗生素 类药物，可以有效降低出栏成体禽畜及其制品中的抗生素含量，是实现绿色养殖和生产绿 色动物产品的有效、可靠途径。3)本发明涉及的复合菌制剂无毒副作用，有助于避免由于使用抗生素带来的潜在 副作用风险。4)在禽畜养殖过程中，通过使用本发明涉及的复合菌制剂，可以促进禽畜增重，节 约养殖饲料，提高养殖效益。5)本发明可以有效控制仔猪下痢，比单一使用乳酸菌等制剂效果好且更为稳定。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。实施例1、菌剂的制备制备了含有粪链球菌1. 100株及粪链球菌1. 125、蜡样芽孢杆菌1. 1626株的复合 菌制剂.所述粪链球菌1. 100株可购自位于汉川市经济开发区北桥科技工业园的湖北绿 天地生物科技有限公司。所述粪链球菌1. 125株可购自位于山东省泰安市泰山区的山东宝来利来生物工 程股份有限公司，所述蜡样芽孢杆菌1. 1626株可购自位于海南省海口市的海南山城医药贸易有限 公司。其制备方法为1，将三种菌株培养基与碳酸钙粉制成干粉，其中菌株培养基与碳酸钙粉的质量比 为 10 1 ；2，将粪链球菌1. 100株干粉，粪链球菌1. 125干粉与蜡样芽孢杆菌1. 1626株干粉 按质量比1 1 2的比例混合，制成复合菌制剂。实施例2、对仔猪增重的影响增重方面，根据哺乳仔猪从20日龄开始补食，45日龄断乳的情况，我们在这一时 期用含有本发明涉及的复合菌制剂的饲料进行饲喂试验。本实施例中，采用了三元杂交猪，二花脸猪，姜曲海猪及新淮猪，均购于江苏省句容市湾山农场，其中三元杂交猪是由苏南本地二花脸母猪与约克夏公猪生出的杂交一代母 猪再与巴克夏公猪杂交所产下的杂交二代。对以上品种的猪幼仔进行了 6次试验，结果见表2。试验组平均比对照组多增重 27. 87%，远高于国外用益生菌作为饲料添加剂仔猪增重的报道(平均在10%左右)。(见 表2)本实施例中使用的瘤胃粗酶制剂与乙酸钠可购自南京农业大学生理教研组。需 氧蜡样芽胞杆菌菌剂，可以购自四川农业大学。表1、6次实验情况
①括号内数字为仔猪窝数，如52(5)即52头仔猪分属5窝，下同。②饲料中加入质量分数的瘤胃粗酶和2%的乙酸钠。③饲料中加入质量分数需氧蜡样芽胞杆菌菌剂。表2、6次实验增重情况 实施例3、防治仔猪下痢在防治仔猪下痢方面，试验表明(见表3)，使用本发明可以控制仔猪下痢，并且比 单一使用乳酸菌等制剂效果好，更为稳定。表3、复合菌制剂防治仔猪下痢效果 *括号外数为仔猪白痢，括号内数字为仔猪黄痢。实施例4、防治仔鸡下痢和对仔鸡增重的影响仔鸡选用红波罗和星波罗，可购自南京农业大学动物医学院附属试验牧场。每次 试验所使用的仔鸡数量及品种如表4所示。每次试验所使用的菌剂如表5所示。所使用的 复合菌制剂为实施例1中所制备的复合菌制剂。1、用复合菌制剂饲喂1-30日龄仔鸡(见表6)，比对照组提高增重15. 66%，高于 本试验中其他二种制剂，也高于国外用益生素提高仔鸡增重的报道(平均在10%左右)。2、用复合菌制剂提高仔鸡的成活率，在7次试验中(见表7)的效果较为明显，平 均达94. 47%，明显高于对照组的平均81. 88%，这可能与复合菌制剂增强机体抵抗力有关。3、多次试验表明(见表7)，复合菌制剂防治仔鸡白痢有明显效果，用其作为饲料 添加剂可控制仔鸡白痢，对防治仔鸡球虫病亦有明显效果。由此可见，经长期大量实验和使用证明，本发明对仔鸡白痢、仔猪黄、白痢等的防 治有显著效果，并有增重效果。表4、试验鸡分组情况 表5、试验菌剂使用情况 *指菌剂占饲料的质量百分比表6、仔鸡七次试验增重情况^ um^m.rm'Mmmmf
权利要求
一种复合菌制剂，包含芽孢杆菌属菌及肠球菌属菌。
2.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述芽孢杆菌属菌为蜡状芽孢杆菌种菌的一 个菌株或不同菌株的组合物。
3.如权利要求1或2所述的复合菌制剂，其中所述芽孢杆菌属菌为保藏地点为中国普 通微生物菌种保管理中心，保藏号1. 1626的蜡样芽孢杆菌。
4.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述肠球菌属菌为粪肠球菌种菌的一个菌株 或不同菌株的组合物。
5.如权利要求1或4所述的复合菌制剂，其中所述肠球菌属菌为保藏地点为中国普通 微生物菌种保管理中心，保藏号为1. 100和1. 125的两种粪链球菌。
6.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述复合菌制剂中含有保藏于中国普通微生 物菌种保藏管理中心，保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌，及保藏号为1. 100和1. 125的两 种粪链球菌。
7.如权利要求1所述的制剂，其中复合菌制剂使用菌数为每克10"1 1012cfu的肠球 菌属菌单一菌培养物及菌数为每克3X 108 1 X 10ncfu的芽孢杆菌属菌培养物制备。
8.如权利要求1所述的制剂，其中还包括赋形剂。
9.如权利要求8所述的制剂，其中赋形剂可选自石粉，麸皮，糠或其组合物。
10.如权利要求9所述的制剂，其中石粉优选为碳酸钙粉。
11.制备权利要求8所述的制剂的方法，其中包括以下步骤1)将肠球菌属菌与芽孢杆菌属菌的菌株培养物分别与赋形剂制成干粉。2)将菌株培养物制成的干粉混合制成复合菌制剂。
12.如权利要求11的方法，其中菌株培养物与赋形剂的质量比为1 30 1。
13.如权利要求11的方法，其中菌株培养物与赋形剂的质量比为10 1。
14.如权利要求11所述的方法，其中步骤2)中，肠球菌属菌剂干粉与芽孢杆菌属菌剂 干粉按质量比1 0.5 2的比例混合制成复合菌制剂。
15.如权利要求11所述的方法，其中肠球菌属菌为粪链球菌的保藏号为1.125的菌株 及粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株的组合物，芽孢杆菌属菌为保藏号为1. 1626的蜡样芽 孢杆菌，粪链球菌的保藏号为1. 125的菌株干粉，粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及 保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比1 0.8 1.2 1.8 2. 2的比例制 成复合菌制剂。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述粪链球菌的保藏号为1.125的菌株干粉，粪 链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比 1:1:2比例制成复合菌制剂。
17.权利要求1所述的制剂用于防治幼禽畜疾病的应用，其中所述幼禽畜疾病包括仔 鸡白痢、仔猪黄痢、仔猪白痢。
18.权利要求1所述的制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病菌的应用，其中所述幼禽畜疾 病相关病菌包括白痢致病性大肠杆菌。
19.如权利要求18所述的应用，其中所述幼禽畜可选自仔猪，仔鸡。
20.权利要求1所述的制剂用于动物增重方面的用途，其中所述的动物可选自仔猪，仔鸡。
21.如权利要求17-20任一所述的应用，其中所述制剂以饲料添加剂形式使用，其用量 为饲料重量的0.5% 1%。
全文摘要
本发明涉及复合菌制剂，及其在幼禽畜增重及防治下痢中的应用。通过在饲料中添加本发明涉及的复合菌制剂，可以有效地防治幼禽畜下痢疾病，提高幼禽畜成活率，节约幼禽畜疫病治疗防控成本，提高养殖效益。可以有效降低出栏成体禽畜及其制品中的抗生素含量，是实现绿色养殖和生产绿色动物产品的有效、可靠途径。
文档编号A61P1/12GK101874812SQ201010175469
公开日2010年11月3日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者方银兵, 薛恒平 申请人:宁波市特圣生物饲料有限公司
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及复合菌制剂及其在幼禽畜增重及防治下痢中 的应用。
背景技术：
滥用抗生素引起的药物残留，使得人类在食用有药物残留的食品后，经常出现过 敏、致畸、致残、致癌、中毒等急性或慢性疾病。随着人们生活水平的提高及对绿色健康食品 需求的增加，使用抗生素引起的药物残留问题越来越受到重视。无药残、无污染且能提高经 济效益的饲用微生态制剂成为国内外研究的热点。饲用微生态制剂是一类专用于添加在动 物饲料内，以提高畜禽产品的生产性能和经济效益，同时又能代替传统抗生素添加剂，兼有 抗病、无药残、无污染特性的一类制剂，是实现绿色养殖和生产绿色动物产品的有效、可靠 途径。蜡样芽孢杆菌(学名bacillus cereus)，又称仙人掌杆菌，为芽孢杆菌属，是一 种地方性，土壤生活的，革兰氏阳性的杆状细菌，(1)蜡样芽孢杆菌在生长过程中产生多种 活性物质对致病菌或条件致病菌有明显的抑制任用；同时蜡样芽孢杆菌能迅速消耗消化道 内环境中的游离氧，形成肠道低氧环境，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降 低肠道PH值，间接抑制其他致病菌的生长；(2)蜡样芽孢杆菌能刺激动物免疫器官的生长 发育，激活淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群 体免疫力.(3)蜡样芽孢杆菌能分泌各种蛋白酶.淀粉酶.脂肪酶.纤维酶等，在消化道 中与内源酶共同发挥作用，提高饲料消化率，同时蜡样芽孢杆菌能合成多种维生素，提高动 物体内干扰素和巨噬细胞的活性.该菌能调节动物肠道菌群平衡，改善肠道微生物生态环 境，有效维持动物机体健康状况，提高动物对饲料的消化利用率并能提高机体免疫力，抗应 激能力；净化牲畜生长环境，减少发病诱因，有效减少有害气体的排放，极大地降低因有害 气体引起的呼吸道疾病发生率；是天然的绿色饲料添加剂产品。粪链球菌(E. faecalis)和屎链球菌(E. feacium)均属肠球菌属(Enterococcus)， 为人和动物肠道正常菌群，我国批准可作为饲料添加剂。这两株菌可用于防治幼畜苗禽因 肠道菌群失调引起的下痢，具有调节肠道正常菌群失调和促进生长的作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是防治幼畜禽下痢，可通过提供复合菌剂完成，所述复 合菌剂含有芽孢杆菌属菌及肠球菌属菌。在本发明一个优选的方面，所述芽孢杆菌属菌选自蜡状芽孢杆菌种的一个菌株或 不同菌株的组合物。所述蜡样芽孢杆菌种可购自海南山城医药贸易有限公司，石家庄诺亚威生物技 术有限公司，也可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，其保藏号为1. 1626,1. 126， 1. 1483，1. 984，1. 932，1. 895，1. 447，1. 352，1. 348，1. 260，1. 230，1. 229，1. 2238，1. 2224，1. 2223，1. 196，1. 195，1. 189，1. 173，1. 1846，1. 1689，1. 1688，1. 1687 或 1. 1686。再更优选地，所述芽孢杆菌属菌为保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保 藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌菌种。该保藏号为1. 1626的菌种记载于欧洲生物化学杂志(Eur. J. Biochem. ) 1980年 112 卷 273-281 页。在本发明一个优选的方面，所述肠球菌属菌为粪肠球菌种的一个菌株或不同菌株 的组合物。所述粪肠球菌可购自湖北绿天地生物科技有限公司，山东宝来利来生物工程股份 有限公司，山东信宜生物工程有限公司，广州市微盾生物科技有限公司，北京百林康源生 物技术有限责任公司，也可从中国普通微生物菌种保藏管理中心获得，其保藏号为1. 131， 1. 130，1. 125，1. 101，1. 100，1. 595，1. 2135 或 1. 2024。再更优选地，所述肠球菌属菌为保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏 号为1. 100或1. 125的粪链球菌菌株的组合物。在本发明的一个更优选的方面，所述复合菌制剂中含有保藏于中国普通微生物菌 种保藏管理中心，保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌菌种，保藏号为1. 100或1. 125的粪链 球菌。所述粪链球菌1. 100株可购自位于汉川市经济开发区北桥科技工业园的湖北绿 天地生物科技有限公司。所述粪链球菌1. 125株可购自位于山东省泰安市泰山区的山东宝来利来生物工 程股份有限公司，所述蜡样芽孢杆菌1. 1626株可购自位于海南省海口市的海南山城医药贸易有限 公司。可选地，该复合菌制剂还包括赋形剂，所述赋形剂可选自普通的石粉、碳酸钙粉、 麸皮、糠的组，或其组合物。所述石粉优选为碳酸钙粉。本发明还提供所述菌株的培养方法肠球菌属菌以乳酸菌培养基，芽孢杆菌属菌以普通肉汤，按通常方法进行培养。每克培养得到的肠球菌属菌单一菌培养物中粪链球菌菌数为IOki IO12Cfu,芽孢 杆菌属菌单一菌培养物中菌数为3 X IO8 IX IO11Cft所述菌株均采用平板法计数。本发明还提供制备所述复合菌制剂的方法，包括以下步骤1)将菌株培养物与赋形剂制成干粉，其中菌株培养基与赋形剂的质量比为1 30 1，优选为 10 1。2)将肠球菌属菌剂干粉与芽孢杆菌属菌剂干粉按质量比1 0. 5 2的比例混 合制成复合菌制剂。再优选为肠球菌属菌为粪链球菌的保藏号为1. 125的菌株及粪链球菌 的保藏号为1. 100的菌株的组合物，芽孢杆菌属菌为保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌。粪 链球菌的保藏号为1. 125的菌株干粉，粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及保藏号为 1.1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比1 0.8 1.2 1. 8 2. 2的比例制成复合菌制 齐IJ，优选为1 1 2。本发明还提供所述复合菌制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病菌的应用，包括鸡白痢 沙门氏菌和仔猪黄、白痢大肠杆菌，白痢致病性大肠杆菌。
本发明还提供所述复合菌制剂用于防治幼禽畜疾病的应用，包括仔鸡白痢、仔猪 黄、白痢。本发明还提供所述复合菌制剂用于动物增重方面的用途，主要用于仔猪、仔鸡。本发明涉及的复合菌制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病 菌或防治幼禽畜疾病及 动物增重方面的用途时，可以饲料添加剂的形式使用，饲料添加剂的用量为饲料重量的 0. 5% 1%。本发明涉及的菌株及其组成的复合菌制剂具有以下的优点1)通过在饲料中添加本发明涉及的复合菌制剂，可以有效地防治幼禽畜下痢疾 病，提高幼禽畜成活率，节约幼禽畜疫病治疗防控成本，提高养殖效益。2)在禽畜养殖过程中，通过使用本发明涉及的复合菌制剂，可以避免使用抗生素 类药物，可以有效降低出栏成体禽畜及其制品中的抗生素含量，是实现绿色养殖和生产绿 色动物产品的有效、可靠途径。3)本发明涉及的复合菌制剂无毒副作用，有助于避免由于使用抗生素带来的潜在 副作用风险。4)在禽畜养殖过程中，通过使用本发明涉及的复合菌制剂，可以促进禽畜增重，节 约养殖饲料，提高养殖效益。5)本发明可以有效控制仔猪下痢，比单一使用乳酸菌等制剂效果好且更为稳定。
具体实施例方式以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅 用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。实施例1、菌剂的制备制备了含有粪链球菌1. 100株及粪链球菌1. 125、蜡样芽孢杆菌1. 1626株的复合 菌制剂.所述粪链球菌1. 100株可购自位于汉川市经济开发区北桥科技工业园的湖北绿 天地生物科技有限公司。所述粪链球菌1. 125株可购自位于山东省泰安市泰山区的山东宝来利来生物工 程股份有限公司，所述蜡样芽孢杆菌1. 1626株可购自位于海南省海口市的海南山城医药贸易有限 公司。其制备方法为1，将三种菌株培养基与碳酸钙粉制成干粉，其中菌株培养基与碳酸钙粉的质量比 为 10 1 ；2，将粪链球菌1. 100株干粉，粪链球菌1. 125干粉与蜡样芽孢杆菌1. 1626株干粉 按质量比1 1 2的比例混合，制成复合菌制剂。实施例2、对仔猪增重的影响增重方面，根据哺乳仔猪从20日龄开始补食，45日龄断乳的情况，我们在这一时 期用含有本发明涉及的复合菌制剂的饲料进行饲喂试验。本实施例中，采用了三元杂交猪，二花脸猪，姜曲海猪及新淮猪，均购于江苏省句容市湾山农场，其中三元杂交猪是由苏南本地二花脸母猪与约克夏公猪生出的杂交一代母 猪再与巴克夏公猪杂交所产下的杂交二代。对以上品种的猪幼仔进行了 6次试验，结果见表2。试验组平均比对照组多增重 27. 87%，远高于国外用益生菌作为饲料添加剂仔猪增重的报道(平均在10%左右)。(见 表2)本实施例中使用的瘤胃粗酶制剂与乙酸钠可购自南京农业大学生理教研组。需 氧蜡样芽胞杆菌菌剂，可以购自四川农业大学。表1、6次实验情况
①括号内数字为仔猪窝数，如52(5)即52头仔猪分属5窝，下同。②饲料中加入质量分数的瘤胃粗酶和2%的乙酸钠。③饲料中加入质量分数需氧蜡样芽胞杆菌菌剂。表2、6次实验增重情况 实施例3、防治仔猪下痢在防治仔猪下痢方面，试验表明(见表3)，使用本发明可以控制仔猪下痢，并且比 单一使用乳酸菌等制剂效果好，更为稳定。表3、复合菌制剂防治仔猪下痢效果 *括号外数为仔猪白痢，括号内数字为仔猪黄痢。实施例4、防治仔鸡下痢和对仔鸡增重的影响仔鸡选用红波罗和星波罗，可购自南京农业大学动物医学院附属试验牧场。每次 试验所使用的仔鸡数量及品种如表4所示。每次试验所使用的菌剂如表5所示。所使用的 复合菌制剂为实施例1中所制备的复合菌制剂。1、用复合菌制剂饲喂1-30日龄仔鸡(见表6)，比对照组提高增重15. 66%，高于 本试验中其他二种制剂，也高于国外用益生素提高仔鸡增重的报道(平均在10%左右)。2、用复合菌制剂提高仔鸡的成活率，在7次试验中(见表7)的效果较为明显，平 均达94. 47%，明显高于对照组的平均81. 88%，这可能与复合菌制剂增强机体抵抗力有关。3、多次试验表明(见表7)，复合菌制剂防治仔鸡白痢有明显效果，用其作为饲料 添加剂可控制仔鸡白痢，对防治仔鸡球虫病亦有明显效果。由此可见，经长期大量实验和使用证明，本发明对仔鸡白痢、仔猪黄、白痢等的防 治有显著效果，并有增重效果。表4、试验鸡分组情况 表5、试验菌剂使用情况 *指菌剂占饲料的质量百分比表6、仔鸡七次试验增重情况^ um^m.rm'Mmmmf
权利要求
一种复合菌制剂，包含芽孢杆菌属菌及肠球菌属菌。
2.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述芽孢杆菌属菌为蜡状芽孢杆菌种菌的一 个菌株或不同菌株的组合物。
3.如权利要求1或2所述的复合菌制剂，其中所述芽孢杆菌属菌为保藏地点为中国普 通微生物菌种保管理中心，保藏号1. 1626的蜡样芽孢杆菌。
4.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述肠球菌属菌为粪肠球菌种菌的一个菌株 或不同菌株的组合物。
5.如权利要求1或4所述的复合菌制剂，其中所述肠球菌属菌为保藏地点为中国普通 微生物菌种保管理中心，保藏号为1. 100和1. 125的两种粪链球菌。
6.如权利要求1所述的复合菌制剂，其中所述复合菌制剂中含有保藏于中国普通微生 物菌种保藏管理中心，保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌，及保藏号为1. 100和1. 125的两 种粪链球菌。
7.如权利要求1所述的制剂，其中复合菌制剂使用菌数为每克10"1 1012cfu的肠球 菌属菌单一菌培养物及菌数为每克3X 108 1 X 10ncfu的芽孢杆菌属菌培养物制备。
8.如权利要求1所述的制剂，其中还包括赋形剂。
9.如权利要求8所述的制剂，其中赋形剂可选自石粉，麸皮，糠或其组合物。
10.如权利要求9所述的制剂，其中石粉优选为碳酸钙粉。
11.制备权利要求8所述的制剂的方法，其中包括以下步骤1)将肠球菌属菌与芽孢杆菌属菌的菌株培养物分别与赋形剂制成干粉。2)将菌株培养物制成的干粉混合制成复合菌制剂。
12.如权利要求11的方法，其中菌株培养物与赋形剂的质量比为1 30 1。
13.如权利要求11的方法，其中菌株培养物与赋形剂的质量比为10 1。
14.如权利要求11所述的方法，其中步骤2)中，肠球菌属菌剂干粉与芽孢杆菌属菌剂 干粉按质量比1 0.5 2的比例混合制成复合菌制剂。
15.如权利要求11所述的方法，其中肠球菌属菌为粪链球菌的保藏号为1.125的菌株 及粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株的组合物，芽孢杆菌属菌为保藏号为1. 1626的蜡样芽 孢杆菌，粪链球菌的保藏号为1. 125的菌株干粉，粪链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及 保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比1 0.8 1.2 1.8 2. 2的比例制 成复合菌制剂。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述粪链球菌的保藏号为1.125的菌株干粉，粪 链球菌的保藏号为1. 100的菌株干粉及保藏号为1. 1626的蜡样芽孢杆菌剂干粉按质量比 1:1:2比例制成复合菌制剂。
17.权利要求1所述的制剂用于防治幼禽畜疾病的应用，其中所述幼禽畜疾病包括仔 鸡白痢、仔猪黄痢、仔猪白痢。
18.权利要求1所述的制剂用于抵御幼禽畜疾病相关病菌的应用，其中所述幼禽畜疾 病相关病菌包括白痢致病性大肠杆菌。
19.如权利要求18所述的应用，其中所述幼禽畜可选自仔猪，仔鸡。
20.权利要求1所述的制剂用于动物增重方面的用途，其中所述的动物可选自仔猪，仔鸡。
21.如权利要求17-20任一所述的应用，其中所述制剂以饲料添加剂形式使用，其用量 为饲料重量的0.5% 1%。
全文摘要
本发明涉及复合菌制剂，及其在幼禽畜增重及防治下痢中的应用。通过在饲料中添加本发明涉及的复合菌制剂，可以有效地防治幼禽畜下痢疾病，提高幼禽畜成活率，节约幼禽畜疫病治疗防控成本，提高养殖效益。可以有效降低出栏成体禽畜及其制品中的抗生素含量，是实现绿色养殖和生产绿色动物产品的有效、可靠途径。
文档编号A61P1/12GK101874812SQ201010175469
公开日2010年11月3日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者方银兵, 薛恒平 申请人:宁波市特圣生物饲料有限公司
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