一种单方中药制剂及其制备方法和应用的制作方法
专利名称：一种单方中药制剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种预防及治疗慢性肾衰竭及其他慢性肾病的单方中药制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
慢性肾功能衰竭(CRF)是慢性肾脏疾病及累及肾脏系统性疾病所引起的慢性肾功能减退，以及由此而产生的各种临床症状及代谢紊乱所组成的综合症。CRF是一种严重危害患者身体健康，甚至威胁生命的疑难病症。大量临床及实验研究证实，不同病因的慢性肾病在肾脏遭受一定程度的破坏之后，尽管其基础病变已经停止，但肾功能仍会持续减退。因此，如何对CRF进行早期防治，并延缓CRF的病情进展，降低尿毒症的发病率就显得尤为重要。近年来研究发现，天然药用虫生真菌蝉花具有减少细胞外基质的合成，延缓肾小球硬化，改善肾功能的作用，但天然蝉花面临着资源稀缺，价格昂贵，生产周期长，产量低的问题。研究人员发现，蝉花的人工培育物不仅与天然蝉花具有相似的成分和功效，尤其是在治疗慢性肾衰竭上，同样具有降低血清肌酐和尿素氮水平，改善肾功能，抑制系膜细胞增生和基质增多，延缓肾小球的硬化进展，同时也可以解决天然蝉花的资源稀缺，产量低，质量不稳定等问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种单方中药制剂。该中药制剂对慢性肾衰竭及其他慢性肾病的发生与发展具有明显的治疗和预防作用，能降低血清黄嘌呤氧化酶活性。为实现上述目的，本发明采取如下技术方案一种单方中药制剂，该单方中药制剂中含有蝉花人工培养产物。较佳的，所述蝉花人工培养产物由如下方法制得1)菌种制备包括斜面种制备和一级种制备过程；其中，斜面种制备包括如下步骤将单胞分离后的蝉拟青霉菌株移植到PSA培养基斜面试管中，在22°C 25°C下培养5 7天，挑选长势好的种保存备用；一级种制备包括如下步骤将斜面种接入马铃薯蔗糖培养液中，在22°C 25°C， 振荡频率为130 150r/min的条件下培养3 7天，至锥形瓶内出现大量菌丝球后作为一级种备用；2)接种将步骤1)中制得的一级种接入到固体培养基中；3)发酵接种后的培养盒移至培养室内，在20°C 25°C，相对湿度60% 80%的条件下培养30天 50天；4)孢梗束的采收当培养物的孢梗束高度达9cm左右、表面有少量分生孢子出现时即可采收。
优选的，步骤1)中，所述PSA培养基中含有如下组分(每IOOOml培养基中含有)马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g，其制备方法为将去皮马铃薯切丁置于容器内加水1000ml，煮沸20min 30min，过滤，加入蔗糖与琼脂，补足水至1000ml，加热溶解，然后分装至试管内，装量为试管长的1/5 1/4，塞上棉塞，置于灭菌锅内0. 15MI^压力下灭菌 30min，趁热将试管摆放在斜面板上冷却。优选的，步骤1)中，所述马铃薯蔗糖培养液中含有如下组分(每IOOOml培养液中含有)马铃薯200g、蔗糖20g ；其制备方法为将去皮马铃薯切丁置于容器内加水1000ml， 煮沸15min 30min，过滤，加入蔗糖，补足水至IOOOml，加热溶解，然后分装至锥形瓶内，装量为锥形瓶容量的20 % 30 %，塞上棉塞，再用牛皮纸包裹，置于灭菌锅内0. 15MPa压力下灭菌30min，取出冷却至20°C以下。较佳的，步骤2)中，所述接种的步骤为当培养盒中的固体培养基的温度冷却至 20°C以下后，在无菌条件下接种，按照3 5%的接种量将一级种接入培养盒中。较佳的，步骤2、中，所述固体培养基的原料组分包括基质 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；贝壳粉 0. 1 0. 5重量份；蚕蛹粉 2 5重量份；硝酸钾 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基质选自如下组合中的一种玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物；小麦 ’大麦；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。优选的，所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物的总重量计，玉米粉、麸皮和蔗糖的重量百分比分别为玉米粉43% 55%、麸皮44% 55%、蔗糖 2%。优选的，所述粟和蔗糖的混合物中，以所述粟和蔗糖的混合物的总重量计，粟和蔗糖的重量百分比分别为粟98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述大米和蔗糖的混合物中，以所述大米和蔗糖的混合物的总重量计，大米和蔗糖的重量百分比分别为大米98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述高粱和蔗糖的混合物中，以所述高粱和蔗糖的混合物的总重量计，高粱和蔗糖的重量百分比分别为高粱98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述固体培养基的制备方法为先将玉米粉、麸皮或小麦、大麦、粟、大米、 高粱煮熟，将蔗糖、硝酸钾在水中溶解，再与甘蔗渣、贝壳粉，蚕蛹粉按照比例混合均勻。优选的，所述固体培养基中还含有蛋白胨(鱼粉)，且所述蛋白胨(鱼粉)的重量份为0. 5重量份。优选的，步骤2)中，所述固体培养基的碳氮比为80 98。优选的，步骤幻中，在固体发酵后期孢梗束生长阶段要求采光，温度较菌丝体生长温度略低2°C，培养过程中需保持空气流通。优选的，步骤4)中，所述采收的具体步骤为去掉透气封口膜，用工具将培养物取出分离孢梗束，烘干分级，干燥后用薄膜袋真空包装，菌质置于-20°C贮存。
本发明中所述的蝉花人工培养产物由孢梗束、分生孢子、菌丝体与培养基剩余物质的混合物。进一步优选的，所述蝉花人工培养产物是指采用蝉拟青霉菌株CGMCC No. 3453 [Paecilomyces cicadae]经上述固体培养后得到的人工培养产物，该菌株已于2009年11 月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为 CGMCC No. ；3453。本发明还提供了所述单方中药制剂的制备方法，所述制备方法选自如下三种中的一种1)粉碎将蝉花人工培养产物干燥后直接粉碎，过120目筛制得；2)溶剂提取；3)将所述蝉花人工培育物加水煎煮(所用水量为蝉花人工培育物重量的3-6 倍)，过滤，浓缩至适量，干燥即得干燥粉。较佳的，所述溶剂提取为采用有机溶剂提取，或为水提，或为有机溶剂和水的混合溶液提取，进一步优选为水提。优选的，所述有机溶剂选自乙醇、丙酮和石油醚中的一种或多种的混合物；所述有机溶剂和水的混合溶液为乙醇水溶液的提取物。较佳地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述煎煮次数为2 3次， 每次煎煮时间为0.5 1小时。优选地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述煎煮后得到的煎液先过80目筛，抽滤除杂。优选地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述浓缩为减压薄膜浓缩， 所述干燥为喷雾干燥。本发明的第三个方面，提供了一种中药组合物，该中药组合物含有安全有效量的上述单方中药及药学上可接受的载体，所述单方中药的重量百分含量为50% -99%，优选为 62% -80%。药学上可接受的载体为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于) 糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素)，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油， 多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化剂(如Tween)， 润湿剂(如月桂基硫酸钠)，着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水， 等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等；这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。本发明的单方中药制剂可以按照药剂学上的通用方法制成任何常规的制剂形式， 包括口服制剂。优选的是片剂、粉剂剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、糖浆剂，最优选为粉剂。本发明的单方中药制剂粉剂，较佳的服用剂量为2_15g/天，最优的剂量为5-10g/ 天。本发明的第四个方面，提供了上述单方中药制剂的用途，即该单方中药用于制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物。所述其他慢性肾病是指以肾小管-间质损害为主的肾病，包括尿酸性肾病、慢性肾盂肾炎、药物性肾损害等。本发明的第五个方面，提供了上述单方中药制剂的用途，即该单方中药用于制备治疗及预防能降低血清肌酐和尿素氮的药物。术语说明本发明中所述的蝉花人工培育物即蝉拟青霉，拉丁名为 PaeciIomycescicadae ο动物实验表明，本发明提供的单方中药能够改善肾功能、提高血红蛋白、减少ECM 的沉积、减少系膜细胞增生、减轻肾组织损伤、延缓肾间质纤维化；其药效活性与天然蝉花作用相比相似或更好，安全无明显毒副作用。本发明中，所述的单方中药制剂由所述原料制成，是指由所述原料直接粉碎或提取制成
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例1单方中药制剂的人工培育挑取蝉拟青霉菌种接入PSA培养液中，220C -25°C，140rpm的条件下培养3_5天后备用；将种子按照3-5%比例接入固体培养基中，20°C -25°C，空气相对湿度60% -80%下培养30d-50d即可，后期孢梗束生长阶段要求采光，温度较菌丝体生长阶段略低2°C，每天需适时开窗通气，保持培养室内空气新鲜。本实施方式采用的PSA培养基配比为每IOOOml培养基马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂 20g。本实施方式所述的固体培养基配比为基质46重量份，甘蔗渣5重量份，贝壳粉0.4 重量份，蚕蛹粉2. 5重量份，硝酸钾0. 1重量份，水为44重量份；其中基质为小麦。其制备方法为先将小麦煮熟，将蔗糖、硝酸钾在水中溶解，再与甘蔗渣、贝壳粉，蚕蛹粉按照比例混合均勻。实施例2单方中药制剂的制备方法之一将采收的新鲜蝉花人工培育物，70°C干燥10h，通过粉碎机粉碎，过120目筛网，即
得干燥粉。实施例3单方中药制剂的制备方法之二将所述蝉花人工培育物加水共煎煮2次，每次0. 5小时，煎液采用真空抽滤，除去杂质，得滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥即得干燥粉。实施例4实施例2的单方中药制剂对5/6肾切除大鼠模型的肾功能影响本实施例数据引自朱戎、陈以平、邓跃毅、王琳.固体培养蝉花菌丝延缓肾小球硬化作用及其机制的实验研究，中国中西医结合肾病杂志，2005,6(2) :70-74受试物实施例2的单方中药制剂。阳性对照药科素亚，杭州默沙东制药有限公司生产；天然蝉花，产地为浙江。实验动物SPF级雄性SD大鼠70只，2月龄，体重200士 10g，由上海中医药大学实验动物中心提供。分组与造模SD大鼠适应性喂养1周后，随机分成2组空白组(假手术组)8只和实验组(手术组)62只。采用5/6肾大部分切除方法建立实验大鼠模型第1次手术，手术组大鼠左肾总切除肾皮质重量占左肾重量的2/3 ；7d后进行第2次手术，右肾全切。两次手术供切除两肾总重量的5/6。假手术组SD大鼠采用同样步骤暴露肾脏，分离肾包膜，但不予肾切除。手术组动物存活M只，假手术组全部存活8只。于第2次手术后2周，所有动物行目内眦动静脉丛采血，进行血肌酐(kr)检测。并将M只手术组大鼠，根据Scr分层随机分成5组模型对照组(模型组)12只，科素亚组10只，天然蝉花组11只，人工蝉花大剂量组(A组)10 只，人工蝉花小剂量组(B组)11只。科素亚组，天然蝉花组，人工蝉花大剂量组(A组)，人工蝉花小剂量组(B组)大鼠在第2次手术后4周开始喂药，治疗时间为42d。实验结束时大鼠存活44只，假手术组、人工蝉花大剂量组(A组)各8只，模型组、科素亚组、天然蝉花组、人工蝉花小剂量组(B组)各7只。给药剂量天然蝉花组、人工蝉花大剂量组(A组)大鼠按4g · kg"1 · Cf1用量，人工蝉花小剂量组(B组)按2g · kg—1 · Cf1用量，加入饲料中给药，并每日用生理盐水灌胃1次；科素亚组大鼠采用灌胃法，按30mg · kg"1 · Cf1用量，溶于生理盐水中，每日灌胃1次。所有大鼠分组分笼饲养，每笼4-5只大鼠，实验期间全部大鼠自由饮水，进食市售块状颗粒普通饲料。测试仪器及方法实验结束时检测所有大鼠的kr、尿素氮(BUN)、白蛋白(Alb)；收集24h尿液，测定尿蛋白定量。以上指标采用日立7170型自动生化分析仪测定。以HE染色和PAS染色肾组织病理片检查肾小球硬化，其中，肾小球硬化定义为毛细血管腔塌陷和/或玻璃样变。采用Rajj等的半定量方法只评估肾小球硬化程度。在光镜(X200)视野下，每张切片至少观察40个肾小球，根据肾小球硬化灶所占肾小球比例分为0-++++，0表示肾小球无硬化，+表示1个肾小球的25%受损，++表示-50%受损， +++表示51% -75%受损，++++表示76% -100%受损。然后计算肾小球硬化指数(GSI)。采用SPSS Version 11. 0 for Windows进行数据统计，以均数士标准差(^土s) 表示，组间比较采用One-Way ANOVA分析，统计显著性水平为P < 0. 05。试验结果结果发现，大鼠的kr、BUN值，各治疗组较模型组显著降低(P < 0. 05)，人工蝉花各组(大剂量组、小剂量组)与天然蝉花相比无统计学差异(P >0.05)，大鼠的血白蛋白值，假手术组、科素亚组、天然蝉花组、人工蝉花大剂量组(A组)显著升高(P <0.05)，而人工蝉花大剂量组(A组)与天然蝉花组及假手术组相比无统计学差异(P>0.(^)；大鼠的24h尿蛋白量，各组与假手术组相比，均明显增加(P < 0. 05)，但科素亚组、天然蝉花组、 人工蝉花大剂量组(A组)与模型组相比较，则有明显减少(P<0.05)。见表1。表1模型大鼠血液学及尿液检测结果比较(无±50
权利要求
1.一种单方中药制剂，该单方中药制剂中含有蝉花人工培养产物。
2.如权利要求1中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述蝉花人工培养产物由如下方法制得1)菌种制备包括斜面种制备和一级种制备过程；2)接种将步骤1)中制得的一级种接入到固体培养基中；3)发酵接种后的培养盒移至培养室内，在20°C 25°C，相对湿度60% 80%的条件下培养30天 50天；4)采收。
3.如权利要求2中所述的单方中药制剂，其特征在于，步骤2)中，所述固体培养基的原料组分包括基质 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；贝壳粉 0.1 0.5重量份；蚕蛹粉 2 5重量份；硝酸钾 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基质选自如下组合中的一种玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物；小麦；大麦；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。
4.如权利要求3中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物的总重量计，玉米粉、麸皮和蔗糖的重量百分比分别为玉米粉43% 55%、麸皮44% 55%、蔗糖 2%。
5.如权利要求3中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述固体培养基中还含有蛋白胨，且所述蛋白胨的重量份为0. 5重量份。
6.如权利要求1-5中任一权利要求中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述蝉花人工培养产物是指采用蝉拟青霉菌株CGMCC No. 3453经上述固体培养后得到的人工培养产物。
7.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂的制备方法，所述制备方法选自如下三种中的一种1)粉碎将蝉花人工培养产物干燥后直接粉碎，过120目筛制得；2)溶剂提取；3)将所述蝉花人工培育物加水煎煮，过滤，浓缩至适量，干燥即得干燥粉。
8.—种中药组合物，所述中药组合物含有安全有效量的权利要求1-6中任一权利要求所述的单方中药及药学上可接受的载体，其中，所述单方中药的重量百分含量为 50% -99%。
9.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂在制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物方面的用途。
10.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂在制备治疗及预防降低血清肌酐和尿素氮的药物方面的用途。
全文摘要
本发明提供了一种单方中药制剂及其制备方法和应用，其特征在于，该中药单方以人工培育的蝉花有效成分为主要原料制备而成。本发明提供的中药单方对慢性肾功能衰竭的发生及发展具有明显的治疗和预防作用。动物实验表明，本发明提供的中药单方能够改善肾功能、降低血清肌酐和尿素氮水平、提高血红蛋白、减少ECM的沉积、减轻肾小管-间质损伤、延缓肾间质纤维化；该单方安全有效、无明显毒副作用。
文档编号A61P13/12GK102240301SQ201010175790
公开日2011年11月16日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者孙长胜, 朱戎, 李成, 柏乃庆, 盖悦, 赵伟, 陈以平, 陈祝安 申请人:浙江泛亚生物医药股份有限公司
技术领域：
本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种预防及治疗慢性肾衰竭及其他慢性肾病的单方中药制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
慢性肾功能衰竭(CRF)是慢性肾脏疾病及累及肾脏系统性疾病所引起的慢性肾功能减退，以及由此而产生的各种临床症状及代谢紊乱所组成的综合症。CRF是一种严重危害患者身体健康，甚至威胁生命的疑难病症。大量临床及实验研究证实，不同病因的慢性肾病在肾脏遭受一定程度的破坏之后，尽管其基础病变已经停止，但肾功能仍会持续减退。因此，如何对CRF进行早期防治，并延缓CRF的病情进展，降低尿毒症的发病率就显得尤为重要。近年来研究发现，天然药用虫生真菌蝉花具有减少细胞外基质的合成，延缓肾小球硬化，改善肾功能的作用，但天然蝉花面临着资源稀缺，价格昂贵，生产周期长，产量低的问题。研究人员发现，蝉花的人工培育物不仅与天然蝉花具有相似的成分和功效，尤其是在治疗慢性肾衰竭上，同样具有降低血清肌酐和尿素氮水平，改善肾功能，抑制系膜细胞增生和基质增多，延缓肾小球的硬化进展，同时也可以解决天然蝉花的资源稀缺，产量低，质量不稳定等问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种单方中药制剂。该中药制剂对慢性肾衰竭及其他慢性肾病的发生与发展具有明显的治疗和预防作用，能降低血清黄嘌呤氧化酶活性。为实现上述目的，本发明采取如下技术方案一种单方中药制剂，该单方中药制剂中含有蝉花人工培养产物。较佳的，所述蝉花人工培养产物由如下方法制得1)菌种制备包括斜面种制备和一级种制备过程；其中，斜面种制备包括如下步骤将单胞分离后的蝉拟青霉菌株移植到PSA培养基斜面试管中，在22°C 25°C下培养5 7天，挑选长势好的种保存备用；一级种制备包括如下步骤将斜面种接入马铃薯蔗糖培养液中，在22°C 25°C， 振荡频率为130 150r/min的条件下培养3 7天，至锥形瓶内出现大量菌丝球后作为一级种备用；2)接种将步骤1)中制得的一级种接入到固体培养基中；3)发酵接种后的培养盒移至培养室内，在20°C 25°C，相对湿度60% 80%的条件下培养30天 50天；4)孢梗束的采收当培养物的孢梗束高度达9cm左右、表面有少量分生孢子出现时即可采收。
优选的，步骤1)中，所述PSA培养基中含有如下组分(每IOOOml培养基中含有)马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂20g，其制备方法为将去皮马铃薯切丁置于容器内加水1000ml，煮沸20min 30min，过滤，加入蔗糖与琼脂，补足水至1000ml，加热溶解，然后分装至试管内，装量为试管长的1/5 1/4，塞上棉塞，置于灭菌锅内0. 15MI^压力下灭菌 30min，趁热将试管摆放在斜面板上冷却。优选的，步骤1)中，所述马铃薯蔗糖培养液中含有如下组分(每IOOOml培养液中含有)马铃薯200g、蔗糖20g ；其制备方法为将去皮马铃薯切丁置于容器内加水1000ml， 煮沸15min 30min，过滤，加入蔗糖，补足水至IOOOml，加热溶解，然后分装至锥形瓶内，装量为锥形瓶容量的20 % 30 %，塞上棉塞，再用牛皮纸包裹，置于灭菌锅内0. 15MPa压力下灭菌30min，取出冷却至20°C以下。较佳的，步骤2)中，所述接种的步骤为当培养盒中的固体培养基的温度冷却至 20°C以下后，在无菌条件下接种，按照3 5%的接种量将一级种接入培养盒中。较佳的，步骤2、中，所述固体培养基的原料组分包括基质 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；贝壳粉 0. 1 0. 5重量份；蚕蛹粉 2 5重量份；硝酸钾 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基质选自如下组合中的一种玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物；小麦 ’大麦；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。优选的，所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物的总重量计，玉米粉、麸皮和蔗糖的重量百分比分别为玉米粉43% 55%、麸皮44% 55%、蔗糖 2%。优选的，所述粟和蔗糖的混合物中，以所述粟和蔗糖的混合物的总重量计，粟和蔗糖的重量百分比分别为粟98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述大米和蔗糖的混合物中，以所述大米和蔗糖的混合物的总重量计，大米和蔗糖的重量百分比分别为大米98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述高粱和蔗糖的混合物中，以所述高粱和蔗糖的混合物的总重量计，高粱和蔗糖的重量百分比分别为高粱98% 99%、蔗糖1% 2%。优选的，所述固体培养基的制备方法为先将玉米粉、麸皮或小麦、大麦、粟、大米、 高粱煮熟，将蔗糖、硝酸钾在水中溶解，再与甘蔗渣、贝壳粉，蚕蛹粉按照比例混合均勻。优选的，所述固体培养基中还含有蛋白胨(鱼粉)，且所述蛋白胨(鱼粉)的重量份为0. 5重量份。优选的，步骤2)中，所述固体培养基的碳氮比为80 98。优选的，步骤幻中，在固体发酵后期孢梗束生长阶段要求采光，温度较菌丝体生长温度略低2°C，培养过程中需保持空气流通。优选的，步骤4)中，所述采收的具体步骤为去掉透气封口膜，用工具将培养物取出分离孢梗束，烘干分级，干燥后用薄膜袋真空包装，菌质置于-20°C贮存。
本发明中所述的蝉花人工培养产物由孢梗束、分生孢子、菌丝体与培养基剩余物质的混合物。进一步优选的，所述蝉花人工培养产物是指采用蝉拟青霉菌株CGMCC No. 3453 [Paecilomyces cicadae]经上述固体培养后得到的人工培养产物，该菌株已于2009年11 月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为 CGMCC No. ；3453。本发明还提供了所述单方中药制剂的制备方法，所述制备方法选自如下三种中的一种1)粉碎将蝉花人工培养产物干燥后直接粉碎，过120目筛制得；2)溶剂提取；3)将所述蝉花人工培育物加水煎煮(所用水量为蝉花人工培育物重量的3-6 倍)，过滤，浓缩至适量，干燥即得干燥粉。较佳的，所述溶剂提取为采用有机溶剂提取，或为水提，或为有机溶剂和水的混合溶液提取，进一步优选为水提。优选的，所述有机溶剂选自乙醇、丙酮和石油醚中的一种或多种的混合物；所述有机溶剂和水的混合溶液为乙醇水溶液的提取物。较佳地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述煎煮次数为2 3次， 每次煎煮时间为0.5 1小时。优选地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述煎煮后得到的煎液先过80目筛，抽滤除杂。优选地，所述蝉花人工培育物加水煎煮的制备方法中，所述浓缩为减压薄膜浓缩， 所述干燥为喷雾干燥。本发明的第三个方面，提供了一种中药组合物，该中药组合物含有安全有效量的上述单方中药及药学上可接受的载体，所述单方中药的重量百分含量为50% -99%，优选为 62% -80%。药学上可接受的载体为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括(但不限于) 糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素)，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油， 多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化剂(如Tween)， 润湿剂(如月桂基硫酸钠)，着色剂，调味剂，压片剂、稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水， 等渗盐溶液和磷酸盐缓冲液等；这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。本发明的单方中药制剂可以按照药剂学上的通用方法制成任何常规的制剂形式， 包括口服制剂。优选的是片剂、粉剂剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、糖浆剂，最优选为粉剂。本发明的单方中药制剂粉剂，较佳的服用剂量为2_15g/天，最优的剂量为5-10g/ 天。本发明的第四个方面，提供了上述单方中药制剂的用途，即该单方中药用于制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物。所述其他慢性肾病是指以肾小管-间质损害为主的肾病，包括尿酸性肾病、慢性肾盂肾炎、药物性肾损害等。本发明的第五个方面，提供了上述单方中药制剂的用途，即该单方中药用于制备治疗及预防能降低血清肌酐和尿素氮的药物。术语说明本发明中所述的蝉花人工培育物即蝉拟青霉，拉丁名为 PaeciIomycescicadae ο动物实验表明，本发明提供的单方中药能够改善肾功能、提高血红蛋白、减少ECM 的沉积、减少系膜细胞增生、减轻肾组织损伤、延缓肾间质纤维化；其药效活性与天然蝉花作用相比相似或更好，安全无明显毒副作用。本发明中，所述的单方中药制剂由所述原料制成，是指由所述原料直接粉碎或提取制成
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例1单方中药制剂的人工培育挑取蝉拟青霉菌种接入PSA培养液中，220C -25°C，140rpm的条件下培养3_5天后备用；将种子按照3-5%比例接入固体培养基中，20°C -25°C，空气相对湿度60% -80%下培养30d-50d即可，后期孢梗束生长阶段要求采光，温度较菌丝体生长阶段略低2°C，每天需适时开窗通气，保持培养室内空气新鲜。本实施方式采用的PSA培养基配比为每IOOOml培养基马铃薯200g、蔗糖20g、琼脂 20g。本实施方式所述的固体培养基配比为基质46重量份，甘蔗渣5重量份，贝壳粉0.4 重量份，蚕蛹粉2. 5重量份，硝酸钾0. 1重量份，水为44重量份；其中基质为小麦。其制备方法为先将小麦煮熟，将蔗糖、硝酸钾在水中溶解，再与甘蔗渣、贝壳粉，蚕蛹粉按照比例混合均勻。实施例2单方中药制剂的制备方法之一将采收的新鲜蝉花人工培育物，70°C干燥10h，通过粉碎机粉碎，过120目筛网，即
得干燥粉。实施例3单方中药制剂的制备方法之二将所述蝉花人工培育物加水共煎煮2次，每次0. 5小时，煎液采用真空抽滤，除去杂质，得滤液，减压薄膜浓缩至适量，喷雾干燥即得干燥粉。实施例4实施例2的单方中药制剂对5/6肾切除大鼠模型的肾功能影响本实施例数据引自朱戎、陈以平、邓跃毅、王琳.固体培养蝉花菌丝延缓肾小球硬化作用及其机制的实验研究，中国中西医结合肾病杂志，2005,6(2) :70-74受试物实施例2的单方中药制剂。阳性对照药科素亚，杭州默沙东制药有限公司生产；天然蝉花，产地为浙江。实验动物SPF级雄性SD大鼠70只，2月龄，体重200士 10g，由上海中医药大学实验动物中心提供。分组与造模SD大鼠适应性喂养1周后，随机分成2组空白组(假手术组)8只和实验组(手术组)62只。采用5/6肾大部分切除方法建立实验大鼠模型第1次手术，手术组大鼠左肾总切除肾皮质重量占左肾重量的2/3 ；7d后进行第2次手术，右肾全切。两次手术供切除两肾总重量的5/6。假手术组SD大鼠采用同样步骤暴露肾脏，分离肾包膜，但不予肾切除。手术组动物存活M只，假手术组全部存活8只。于第2次手术后2周，所有动物行目内眦动静脉丛采血，进行血肌酐(kr)检测。并将M只手术组大鼠，根据Scr分层随机分成5组模型对照组(模型组)12只，科素亚组10只，天然蝉花组11只，人工蝉花大剂量组(A组)10 只，人工蝉花小剂量组(B组)11只。科素亚组，天然蝉花组，人工蝉花大剂量组(A组)，人工蝉花小剂量组(B组)大鼠在第2次手术后4周开始喂药，治疗时间为42d。实验结束时大鼠存活44只，假手术组、人工蝉花大剂量组(A组)各8只，模型组、科素亚组、天然蝉花组、人工蝉花小剂量组(B组)各7只。给药剂量天然蝉花组、人工蝉花大剂量组(A组)大鼠按4g · kg"1 · Cf1用量，人工蝉花小剂量组(B组)按2g · kg—1 · Cf1用量，加入饲料中给药，并每日用生理盐水灌胃1次；科素亚组大鼠采用灌胃法，按30mg · kg"1 · Cf1用量，溶于生理盐水中，每日灌胃1次。所有大鼠分组分笼饲养，每笼4-5只大鼠，实验期间全部大鼠自由饮水，进食市售块状颗粒普通饲料。测试仪器及方法实验结束时检测所有大鼠的kr、尿素氮(BUN)、白蛋白(Alb)；收集24h尿液，测定尿蛋白定量。以上指标采用日立7170型自动生化分析仪测定。以HE染色和PAS染色肾组织病理片检查肾小球硬化，其中，肾小球硬化定义为毛细血管腔塌陷和/或玻璃样变。采用Rajj等的半定量方法只评估肾小球硬化程度。在光镜(X200)视野下，每张切片至少观察40个肾小球，根据肾小球硬化灶所占肾小球比例分为0-++++，0表示肾小球无硬化，+表示1个肾小球的25%受损，++表示-50%受损， +++表示51% -75%受损，++++表示76% -100%受损。然后计算肾小球硬化指数(GSI)。采用SPSS Version 11. 0 for Windows进行数据统计，以均数士标准差(^土s) 表示，组间比较采用One-Way ANOVA分析，统计显著性水平为P < 0. 05。试验结果结果发现，大鼠的kr、BUN值，各治疗组较模型组显著降低(P < 0. 05)，人工蝉花各组(大剂量组、小剂量组)与天然蝉花相比无统计学差异(P >0.05)，大鼠的血白蛋白值，假手术组、科素亚组、天然蝉花组、人工蝉花大剂量组(A组)显著升高(P <0.05)，而人工蝉花大剂量组(A组)与天然蝉花组及假手术组相比无统计学差异(P>0.(^)；大鼠的24h尿蛋白量，各组与假手术组相比，均明显增加(P < 0. 05)，但科素亚组、天然蝉花组、 人工蝉花大剂量组(A组)与模型组相比较，则有明显减少(P<0.05)。见表1。表1模型大鼠血液学及尿液检测结果比较(无±50
权利要求
1.一种单方中药制剂，该单方中药制剂中含有蝉花人工培养产物。
2.如权利要求1中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述蝉花人工培养产物由如下方法制得1)菌种制备包括斜面种制备和一级种制备过程；2)接种将步骤1)中制得的一级种接入到固体培养基中；3)发酵接种后的培养盒移至培养室内，在20°C 25°C，相对湿度60% 80%的条件下培养30天 50天；4)采收。
3.如权利要求2中所述的单方中药制剂，其特征在于，步骤2)中，所述固体培养基的原料组分包括基质 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；贝壳粉 0.1 0.5重量份；蚕蛹粉 2 5重量份；硝酸钾 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基质选自如下组合中的一种玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物；小麦；大麦；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。
4.如权利要求3中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麸皮和蔗糖的混合物的总重量计，玉米粉、麸皮和蔗糖的重量百分比分别为玉米粉43% 55%、麸皮44% 55%、蔗糖 2%。
5.如权利要求3中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述固体培养基中还含有蛋白胨，且所述蛋白胨的重量份为0. 5重量份。
6.如权利要求1-5中任一权利要求中所述的单方中药制剂，其特征在于，所述蝉花人工培养产物是指采用蝉拟青霉菌株CGMCC No. 3453经上述固体培养后得到的人工培养产物。
7.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂的制备方法，所述制备方法选自如下三种中的一种1)粉碎将蝉花人工培养产物干燥后直接粉碎，过120目筛制得；2)溶剂提取；3)将所述蝉花人工培育物加水煎煮，过滤，浓缩至适量，干燥即得干燥粉。
8.—种中药组合物，所述中药组合物含有安全有效量的权利要求1-6中任一权利要求所述的单方中药及药学上可接受的载体，其中，所述单方中药的重量百分含量为 50% -99%。
9.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂在制备治疗及预防慢性肾衰竭及其他慢性肾病的药物方面的用途。
10.权利要求1-6中任一权利要求所述单方中药制剂在制备治疗及预防降低血清肌酐和尿素氮的药物方面的用途。
全文摘要
本发明提供了一种单方中药制剂及其制备方法和应用，其特征在于，该中药单方以人工培育的蝉花有效成分为主要原料制备而成。本发明提供的中药单方对慢性肾功能衰竭的发生及发展具有明显的治疗和预防作用。动物实验表明，本发明提供的中药单方能够改善肾功能、降低血清肌酐和尿素氮水平、提高血红蛋白、减少ECM的沉积、减轻肾小管-间质损伤、延缓肾间质纤维化；该单方安全有效、无明显毒副作用。
文档编号A61P13/12GK102240301SQ201010175790
公开日2011年11月16日 申请日期2010年5月14日 优先权日2010年5月14日
发明者孙长胜, 朱戎, 李成, 柏乃庆, 盖悦, 赵伟, 陈以平, 陈祝安 申请人:浙江泛亚生物医药股份有限公司
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