人参的处理方法
专利名称：人参的处理方法
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种人参的处理方法。
背景技术：
人参含有皂苷类、多糖类、挥发油等多种活性成分，具有补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神的功效，是典型的药食两用性植物。但是，目前的人参加工产品，如红参、白参、活性参、人参茶、人参碳酸饮料等，大多是将人参浸泡或研磨后与其他食品添加剂或可药用载体加工而成，仅含有人参的有效成分。
灵芝不仅味道鲜美，还含有多糖、氨基酸、维生素和无机盐等生物活性物质，具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、降血脂、预防心血管疾病等多种功效，具有较高的保健及药用价值。
中国菌物学会庄毅教授于1998年提出了药用真菌在药性基质上进行固体发酵的理论与方法(抗癌新药槐耳冲剂的研究.中国药学杂志.1998，33(5)。P273～275)。真菌与药材双向固体发酵时，药材为真菌提供生长所需要的营养，真菌的酶也会对药材产生影响导致药材的成分的改变。现有技术已经公开了多种药用真菌与多种药材进行双向固体发酵，如申请号为200510041362.6的中国专利文献公开了将药用真菌与雷公藤进行双向固体发酵，以解雷公藤的毒的方法；申请号为200810023423.X的中国专利文献公开了一种将药用真菌与马钱子进行双向固体发酵的方法，实现了对马钱子的降毒存效。
本发明人考虑，将人参与灵芝进行双向固体发酵，得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分，又含有灵芝的有效成分，具有良好的保健及药用功效。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种人参的处理方法，提高人参的保健功效。
本发明提供了一种人参的处理方法，包括 将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质； 将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种； 将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
优选的，加水润湿时，水的重量为人参干重的50％～150％。
优选的，加水润湿时，水的重量为人参干重的100％～150％。
优选的，所述双向固体发酵的温度为26℃～28℃。
优选的，所述双向固体发酵的时间为10天～15天。
优选的，所述扩大培养的方法为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
优选的，所述液体培养液包括 2wt％的葡萄糖； 0.5wt％的蛋白胨； 0.1wt％的酵母粉； 0.1 5wt％的KH2PO4； 0.1 wt％MgSO4； 余量为水。
优选的，所述人参为生晒人参或鲜人参。
与现有技术相比，本发明利用人参与灵芝双向固体发酵技术对人参进行处理，即将灵芝菌种活化并扩大培养后，接种于人参固体发酵基质上进行发酵。在发酵过程中，人参为灵芝提供其生长必需的营养物质，同时灵芝中的酶与人参中的化学成分发生反应，通过产生新的化学成分或改变原有成分的含量使人参获得新的性味功能。灵芝经固体发酵后的产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分，具有比人参或灵芝或两者简单相加更好的保健和药用功效，具有镇静、安神、补气的功效，可以用于治疗失眠、调节免疫力、抗肿瘤的药物中，也可以作为保健品，增强亚健康人群的体质。同时，灵芝与人参双向固体发酵后得到的灵芝人参药性菌质具有灵芝特有的香味，能够覆盖人参的苦味，提高灵芝人参药性菌质的口感，使产品更易被大众所接受。
具体实施例方式 本发明所称双向固体发酵技术是指真菌(灵芝)在中药材(人参)组成的固体发酵基质上进行发酵的技术，在发酵过程中，真菌与中药材的作用是双向的，即一方面中药材作为发酵基质为真菌提供菌体生长所需的C、N等营养物质，另一方面真菌中的酶与中药材中的化学成分发生反应，使中药材具有新的性味功效。
本发明所称灵芝人参药性菌质是指灵芝在人参组成的固体发酵基质上生长发酵而获得的菌质。灵芝经固体发酵后的产物包括菌体即次生代谢物质，这些产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中；同时，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此发酵后得到的物质统称为灵芝人参药性菌质。
本发明所称的发酵基质指能提供真菌生长所必需成分的物质，主要是人参，也可以为由人参和农副产品组成的基质。
本发明提供了一种人参的处理方法，包括 将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质； 将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种； 将所述发酵菌种接种于发酵基质上，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
本发明以人参为灵芝的发酵基质，使人参和灵芝进行双向固体发酵。本发明优选使用生晒人参或鲜人参，优选为无虫蛀、无霉变的人参。
将鲜人参切片或将生晒人参磨粉或将人参用其他方式粉碎后，加水润湿。加水的目的是为灵芝发酵提供必需的自由水，同时由于是固体发酵，加水量不能过多。本发明中，加水的重量优选为人参干重的50％～150％，更优选为100％～150％。为了使水分充分渗透到人参内部，润湿时间优选为6h～12h。
将润湿后的人参灭菌，即可作为发酵基质备用。本发明中，进行灭菌时的压力优选为0.1MPa～0.14MPa，灭菌温度优选为121℃～126℃，灭菌时间优选为30min～60min。
本发明使用灵芝进行发酵，本发明对所述灵芝菌种的来源没有特殊限制，本发明所用菌种为长春中医药大学药用真菌研究所保存的灵芝菌种。
本发明首先将灵芝菌种进行活化并扩大培养后，得到发酵菌种，然后将发酵菌种接种于发酵基质中进行发酵。对灵芝菌种进行扩大培养的具体步骤包括将灵芝菌种接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基(PDA斜面培养基)上24℃～28℃培养5天～10天，得到菌丝体，然后将菌丝体进行扩大培养。
对得到的菌丝体进行扩大培养的方法可以为液体培养液摇瓶培养，也可以为固体培养基培养，本发明优选进行液体培养液摇瓶培养，优选包括以下步骤 配置含2wt％的葡萄糖、0.5wt％的蛋白胨、0.1wt％的酵母粉、0.1 5wt％的KH2PO4和0.1wt％MgSO4的培养液，灭菌后备用； 切取活化后的菌丝体接入培养液中，在24℃～28℃、120r/min～170rmin的条件下振荡培养5天～7天，得到发酵菌种。
为了避免产生污染，菌丝体接入培养液的操作优选在无菌条件下进行。
将发酵菌种接入人参发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。进行双向固体发酵时，发酵温度优选为26℃～28℃，发酵时间优选为10天～12天。
在发酵过程中，人参为灵芝提供其生长必需的营养物质，同时灵芝中的酶与人参中的化学成分发生反应，通过产生新的化学成分或改变原有成分的含量使人参获得新的性味功能。灵芝经固体发酵后的产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分。
将灵芝人参药性菌质烘干粉碎后，在显微镜下观察，灵芝人参药性菌质粉末同时具有人参和灵芝的特征 草酸钙簇晶直径20μm～68μm，棱角尖锐； 树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物； 木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲； 导管多网纹或梯纹； 菌丝体近无色、细长、相互盘缠交织，直径为2μm～5μm，具有横隔。
根据中国药典提供的方法对所述灵芝人参药性菌质进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，可见，所述灵芝人参药性菌质中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
用紫外可见分光光度计对所述灵芝人参药性菌质进行分析检测，测得所述灵芝人参药性菌质中总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为20wt％、3.7wt％和5.5wt％，总皂苷的含量与传统人参中总皂苷的含量无明显差别，但总多糖和总蛋白的含量均高于传统人参中相应成分的含量。
将所述灵芝人参药性菌质配置成受试药物溶液，对小白鼠进行毒性实验，未能测出灵芝人参药性菌质的半数致死剂量，实验证明所述灵芝人参药性菌质不仅对小白鼠无毒性，而且能促进小白鼠的生长。
将所述灵芝人参药性菌质与吐温80调和后配置成溶液，对小白鼠进行功效实验，实验结果证明本发明制备的灵芝人参药性菌质能够增加小鼠的睡眠时间、提高睡眠发生率、缩短睡眠潜伏时间，且效果均好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
由此可见，所述灵芝药性菌质含有人参和灵芝的有效成分，具有良好的功效。同时，本发明提供的灵芝药性菌质毒性极低，能够安神、镇静，治疗失眠。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的人参的处理方法进行详细描述。
实施例1 将长春中医药大学药用真菌研究所保存的灵芝菌株接种在PDA斜面培养基上、27℃±1℃时进行培养，培养7天得到菌丝体备用； 制作含2wt％葡萄糖、0.5wt％蛋白胨、0.1wt％酵母粉、0.15wt％KH2PO4、和0.1wt％MgSO4的菌种培养液。取100mL菌种培养液装入250mL三角瓶中，0.1MPa、121℃灭菌30min。在无菌室内切取4块0.5cm×0.5cm的菌丝体接入三角瓶的菌种培养液中，28℃、150r/min的条件下振荡培养5天后，得到含有菌丝球的种子液； 取50g无虫蛀、无霉变的生晒人参粉碎过60目筛，加50g水润湿12h后，将得到的人参装入500mL三角瓶中，0.1MPa灭菌60min后，接入50mL种子液，28℃时黑暗培养10天，得到灵芝人参药性菌质。
将灵芝人参药性菌质烘干、磨粉，得到具有灵芝香气的黄白色粉末； 将所述粉末在显微镜下进行鉴别，可见粉末具有如下特征菌丝体近无色、细长、直径2μm～5μm、可见横隔、相互盘缠交织；草酸钙簇晶直径20μm～68μm，棱角尖锐；树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物；木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲；导管多网纹或梯纹。
按照中国药典中提供的方法对所述粉末进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相 比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，说明所述粉末中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
利用北京普析通用仪器有限责任公司的TU1810紫外可见分光光度计对所述粉末进行分析，测得粉末中的总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为20wt％、3.8wt％和5.5wt％。
实施例2 人参药性菌质毒性实验 2.1实验动物及分组 长春高新医学动物实验研究中心提供的40只昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18g～22g。
2.2实验仪器与试剂 电子称、小鼠笼和1mL灌胃器； 取100g实施例1制备的灵芝人参药性菌质粉末，与0.2g吐温80调和后，加400g蒸馏水配置成质量浓度为25％的受试药物溶液； 将0.2g吐温80与400g蒸馏水配置成对照溶液。
2.3预实验 取20只小白鼠，雌雄各半，禁食不禁水16h，分为样品组和对照组； 每日给样品组的小白鼠灌胃给7.5g/kg体重的受试药物溶液，连续灌7天，发现小白鼠的生命状况良好，无死亡现象，由此可知最大耐受量为7.5g/kg。
2.4急性毒性实验 取20只样品组小白鼠，雌雄各半，禁食不禁水16h，分为样品组和对照组；每天早、中、晚三次对样品组小白鼠灌胃以40mL/kg的受试药物溶液；每天早、中、晚三次对对照组小白鼠灌胃以40mL/kg的对照溶液；连续灌胃14天，灌胃期间正常饮食； 每次灌胃给药后，立即观察毒性反应，连续观察14天，发现给药后样品组小白鼠活动减少，24h后恢复正常；而小白鼠的外观、精神状态、食欲、大小便次数及其颜色、被毛、肤色、呼吸、分泌物等和对照组无明显区别，未见与药物有关的中毒反应，无死亡发生。
在灌胃前分别记录样品组和对照组小白鼠的体重，分别记录灌胃第3天、第7天、第11天和第15天时样品组和对照组小白鼠的体重，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表1，表1为本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠体重的变化。
表1本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠体重的变化
由表1可知，本发明提供的灵芝人参药性菌质对小鼠的体重增长有促进作用。
灌胃第15天时将小白鼠用颈椎脱臼致死法处死，将小白鼠解剖，肉眼观察小白鼠肝脏、肾脏等脏器，未发现异常改变；比较各组小白鼠肝脏与体重的比值和肾脏与体重的比值，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表2，表2为本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠肝脏与体重的比值(肝体比值)和肾脏与体重的比值(肾体比值)。
表2本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠肝体比值和肾体比值
由表2可知，被灌胃灵芝人参药性菌质的小白鼠的肝体比值和肾体比值与对照组小白鼠无明显差异，可见，灵芝人参药性菌质对小白鼠的脏器无明显毒性反应。
由上述毒性实验可知，灵芝人参药性菌质不仅毒性极低，还能够促进小白鼠的生长发育。
实施例3 人参药性菌质具有改善睡眠的功效实验 3.1实验动物 雄性ICR小鼠，体重1 8g～26g，吉林大学实验动物中心提供。
3.2试剂 取实施例1制备的灵芝人参药性菌质粉末，加蒸馏水配成质量浓度为25％的受试药物溶液； 将吉林省金宇医药开发有限公司提供的灵芝磨粉，加蒸馏水配成质量浓度为25％的灵芝溶液； 将吉林省金宇医药开发有限公司提供的人参磨粉，将蒸馏水配成质量浓度为25％的人参溶液； 将灵芝和人参共同磨粉，加蒸馏水配成质量浓度为25％的灵芝人参混合液； 戊巴比妥钠(AR)，中国医药(集团)上海化学试剂公司生产。
3.3直接睡眠实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g／kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天后，观察各组小鼠的睡眠发生率，发现各组小鼠均无睡眠现象发生。观察时，睡眠仪翻正反射消失为判断标准，当小鼠置于背卧位时，1分钟内不能翻正，即认为翻正反射消失，进入睡眠；翻正反射恢复即为动物觉醒；翻正反射消失至恢复期间为动物睡眠时间。
3.4延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后15min后，各组小鼠腹腔注射50mg/kg体重的戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察睡眠时间并记录入睡时间和觉醒时间，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表3，表3为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠时间。
表3本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠时间
由表3可知，灵芝人参药性菌质能够增加小鼠的睡眠时间，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
3.5戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后15min后，各组小鼠腹腔注射25mg／kg体重的戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，观察并记录30min内入睡小鼠数，翻正反射消失1min以上为入睡，结果见表4，表4为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠发生率。
表4本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠发生率
由表4可知，灵芝人参药性菌质能够提高小鼠的睡眠发生率，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
3.6缩短戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后20min后，各组小鼠腹腔注射230mg/kg体重的戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察并记录小鼠的睡眠潜伏时间，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表5，表5为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠潜伏时间。
表5本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠潜伏时间
由表5可知，灵芝人参药性菌质能够缩短小鼠的睡眠潜伏时间，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
由上述结果可知，灵芝人参药性菌质可增加小鼠的睡眠时间、提高睡眠发生率、缩短睡眠潜伏时间，且效果均好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
比较例1 将从长春市宏检药材公司购得的生晒人参磨粉，得到黄白色粉末； 将所述粉末在显微镜下进行鉴别，可见粉末具有如下特征草酸钙簇晶直径20～68微米，棱角尖锐；树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物；木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲；导管多网纹或梯纹。
按照中国药典中提供的方法对所述粉末进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，说明所述粉末中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
利用北京普析通用仪器有限责任公司的TU1810紫外可见分光光度计对所述粉末进行分析，测得粉末中的总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为12wt％、3.8wt％和4.5wt％。
将传统人参与本发明实施例1制备的灵芝人参药性菌质相比，结果参见表6，表6为本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质和比较例提供的传统人参的比较。
表6本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质和比较例提供的传统人参的比较
由表6可知，本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质中含有菌丝体，其化学成分中，总皂苷与传统人参含量无明显差别，但总多糖和总蛋白的含量均有所增加。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
权利要求
1.一种人参的处理方法，其特征在于，包括
将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质；
将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种；
将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，加水润湿时，水的重量为人参干重的50％～150％。
3.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，加水润湿时，水的重量为人参干重的100％～150％。
4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述双向固体发酵的温度为26℃～28℃。
5.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述双向固体发酵的时间为10天～15天。
6.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述扩大培养的方法为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
7.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述液体培养液包括
2wt％的葡萄糖；
0.5wt％的蛋白胨；
0.1wt％的酵母粉；
0.15wt％的KH2PO4；
0.1wt％MgSO4；
余量为水。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的处理方法，其特征在于，所述人参为生晒人参或鲜人参。
全文摘要
本发明提供了一种人参的处理方法，包括将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质；将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种；将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。通过本发明提供的处理方法得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分，具有比人参或灵芝或两者简单相加更好的保健和药用功效，具有镇静、安神、补气的功效，可以用于治疗失眠、调节免疫力、抗肿瘤的药物中，也可以作为保健品，增强亚健康人群的体质。
文档编号A61P37/04GK101816689SQ20101017611
公开日2010年9月1日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者陈心智, 邱智东, 翁丽丽, 陈雪松 申请人:陈心智, 邱智东, 翁丽丽, 陈雪松
技术领域：
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种人参的处理方法。
背景技术：
人参含有皂苷类、多糖类、挥发油等多种活性成分，具有补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津安神的功效，是典型的药食两用性植物。但是，目前的人参加工产品，如红参、白参、活性参、人参茶、人参碳酸饮料等，大多是将人参浸泡或研磨后与其他食品添加剂或可药用载体加工而成，仅含有人参的有效成分。
灵芝不仅味道鲜美，还含有多糖、氨基酸、维生素和无机盐等生物活性物质，具有增强机体免疫力、抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、降血脂、预防心血管疾病等多种功效，具有较高的保健及药用价值。
中国菌物学会庄毅教授于1998年提出了药用真菌在药性基质上进行固体发酵的理论与方法(抗癌新药槐耳冲剂的研究.中国药学杂志.1998，33(5)。P273～275)。真菌与药材双向固体发酵时，药材为真菌提供生长所需要的营养，真菌的酶也会对药材产生影响导致药材的成分的改变。现有技术已经公开了多种药用真菌与多种药材进行双向固体发酵，如申请号为200510041362.6的中国专利文献公开了将药用真菌与雷公藤进行双向固体发酵，以解雷公藤的毒的方法；申请号为200810023423.X的中国专利文献公开了一种将药用真菌与马钱子进行双向固体发酵的方法，实现了对马钱子的降毒存效。
本发明人考虑，将人参与灵芝进行双向固体发酵，得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分，又含有灵芝的有效成分，具有良好的保健及药用功效。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种人参的处理方法，提高人参的保健功效。
本发明提供了一种人参的处理方法，包括 将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质； 将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种； 将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
优选的，加水润湿时，水的重量为人参干重的50％～150％。
优选的，加水润湿时，水的重量为人参干重的100％～150％。
优选的，所述双向固体发酵的温度为26℃～28℃。
优选的，所述双向固体发酵的时间为10天～15天。
优选的，所述扩大培养的方法为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
优选的，所述液体培养液包括 2wt％的葡萄糖； 0.5wt％的蛋白胨； 0.1wt％的酵母粉； 0.1 5wt％的KH2PO4； 0.1 wt％MgSO4； 余量为水。
优选的，所述人参为生晒人参或鲜人参。
与现有技术相比，本发明利用人参与灵芝双向固体发酵技术对人参进行处理，即将灵芝菌种活化并扩大培养后，接种于人参固体发酵基质上进行发酵。在发酵过程中，人参为灵芝提供其生长必需的营养物质，同时灵芝中的酶与人参中的化学成分发生反应，通过产生新的化学成分或改变原有成分的含量使人参获得新的性味功能。灵芝经固体发酵后的产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分，具有比人参或灵芝或两者简单相加更好的保健和药用功效，具有镇静、安神、补气的功效，可以用于治疗失眠、调节免疫力、抗肿瘤的药物中，也可以作为保健品，增强亚健康人群的体质。同时，灵芝与人参双向固体发酵后得到的灵芝人参药性菌质具有灵芝特有的香味，能够覆盖人参的苦味，提高灵芝人参药性菌质的口感，使产品更易被大众所接受。
具体实施例方式 本发明所称双向固体发酵技术是指真菌(灵芝)在中药材(人参)组成的固体发酵基质上进行发酵的技术，在发酵过程中，真菌与中药材的作用是双向的，即一方面中药材作为发酵基质为真菌提供菌体生长所需的C、N等营养物质，另一方面真菌中的酶与中药材中的化学成分发生反应，使中药材具有新的性味功效。
本发明所称灵芝人参药性菌质是指灵芝在人参组成的固体发酵基质上生长发酵而获得的菌质。灵芝经固体发酵后的产物包括菌体即次生代谢物质，这些产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中；同时，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此发酵后得到的物质统称为灵芝人参药性菌质。
本发明所称的发酵基质指能提供真菌生长所必需成分的物质，主要是人参，也可以为由人参和农副产品组成的基质。
本发明提供了一种人参的处理方法，包括 将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质； 将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种； 将所述发酵菌种接种于发酵基质上，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
本发明以人参为灵芝的发酵基质，使人参和灵芝进行双向固体发酵。本发明优选使用生晒人参或鲜人参，优选为无虫蛀、无霉变的人参。
将鲜人参切片或将生晒人参磨粉或将人参用其他方式粉碎后，加水润湿。加水的目的是为灵芝发酵提供必需的自由水，同时由于是固体发酵，加水量不能过多。本发明中，加水的重量优选为人参干重的50％～150％，更优选为100％～150％。为了使水分充分渗透到人参内部，润湿时间优选为6h～12h。
将润湿后的人参灭菌，即可作为发酵基质备用。本发明中，进行灭菌时的压力优选为0.1MPa～0.14MPa，灭菌温度优选为121℃～126℃，灭菌时间优选为30min～60min。
本发明使用灵芝进行发酵，本发明对所述灵芝菌种的来源没有特殊限制，本发明所用菌种为长春中医药大学药用真菌研究所保存的灵芝菌种。
本发明首先将灵芝菌种进行活化并扩大培养后，得到发酵菌种，然后将发酵菌种接种于发酵基质中进行发酵。对灵芝菌种进行扩大培养的具体步骤包括将灵芝菌种接种到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基(PDA斜面培养基)上24℃～28℃培养5天～10天，得到菌丝体，然后将菌丝体进行扩大培养。
对得到的菌丝体进行扩大培养的方法可以为液体培养液摇瓶培养，也可以为固体培养基培养，本发明优选进行液体培养液摇瓶培养，优选包括以下步骤 配置含2wt％的葡萄糖、0.5wt％的蛋白胨、0.1wt％的酵母粉、0.1 5wt％的KH2PO4和0.1wt％MgSO4的培养液，灭菌后备用； 切取活化后的菌丝体接入培养液中，在24℃～28℃、120r/min～170rmin的条件下振荡培养5天～7天，得到发酵菌种。
为了避免产生污染，菌丝体接入培养液的操作优选在无菌条件下进行。
将发酵菌种接入人参发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。进行双向固体发酵时，发酵温度优选为26℃～28℃，发酵时间优选为10天～12天。
在发酵过程中，人参为灵芝提供其生长必需的营养物质，同时灵芝中的酶与人参中的化学成分发生反应，通过产生新的化学成分或改变原有成分的含量使人参获得新的性味功能。灵芝经固体发酵后的产物可能存在于菌体细胞内，也可能分泌到细胞外进入发酵基质人参中，由于灵芝生长的大量菌丝体与发酵后的人参无法分离，因此得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分。
将灵芝人参药性菌质烘干粉碎后，在显微镜下观察，灵芝人参药性菌质粉末同时具有人参和灵芝的特征 草酸钙簇晶直径20μm～68μm，棱角尖锐； 树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物； 木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲； 导管多网纹或梯纹； 菌丝体近无色、细长、相互盘缠交织，直径为2μm～5μm，具有横隔。
根据中国药典提供的方法对所述灵芝人参药性菌质进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，可见，所述灵芝人参药性菌质中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
用紫外可见分光光度计对所述灵芝人参药性菌质进行分析检测，测得所述灵芝人参药性菌质中总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为20wt％、3.7wt％和5.5wt％，总皂苷的含量与传统人参中总皂苷的含量无明显差别，但总多糖和总蛋白的含量均高于传统人参中相应成分的含量。
将所述灵芝人参药性菌质配置成受试药物溶液，对小白鼠进行毒性实验，未能测出灵芝人参药性菌质的半数致死剂量，实验证明所述灵芝人参药性菌质不仅对小白鼠无毒性，而且能促进小白鼠的生长。
将所述灵芝人参药性菌质与吐温80调和后配置成溶液，对小白鼠进行功效实验，实验结果证明本发明制备的灵芝人参药性菌质能够增加小鼠的睡眠时间、提高睡眠发生率、缩短睡眠潜伏时间，且效果均好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
由此可见，所述灵芝药性菌质含有人参和灵芝的有效成分，具有良好的功效。同时，本发明提供的灵芝药性菌质毒性极低，能够安神、镇静，治疗失眠。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的人参的处理方法进行详细描述。
实施例1 将长春中医药大学药用真菌研究所保存的灵芝菌株接种在PDA斜面培养基上、27℃±1℃时进行培养，培养7天得到菌丝体备用； 制作含2wt％葡萄糖、0.5wt％蛋白胨、0.1wt％酵母粉、0.15wt％KH2PO4、和0.1wt％MgSO4的菌种培养液。取100mL菌种培养液装入250mL三角瓶中，0.1MPa、121℃灭菌30min。在无菌室内切取4块0.5cm×0.5cm的菌丝体接入三角瓶的菌种培养液中，28℃、150r/min的条件下振荡培养5天后，得到含有菌丝球的种子液； 取50g无虫蛀、无霉变的生晒人参粉碎过60目筛，加50g水润湿12h后，将得到的人参装入500mL三角瓶中，0.1MPa灭菌60min后，接入50mL种子液，28℃时黑暗培养10天，得到灵芝人参药性菌质。
将灵芝人参药性菌质烘干、磨粉，得到具有灵芝香气的黄白色粉末； 将所述粉末在显微镜下进行鉴别，可见粉末具有如下特征菌丝体近无色、细长、直径2μm～5μm、可见横隔、相互盘缠交织；草酸钙簇晶直径20μm～68μm，棱角尖锐；树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物；木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲；导管多网纹或梯纹。
按照中国药典中提供的方法对所述粉末进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相 比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，说明所述粉末中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
利用北京普析通用仪器有限责任公司的TU1810紫外可见分光光度计对所述粉末进行分析，测得粉末中的总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为20wt％、3.8wt％和5.5wt％。
实施例2 人参药性菌质毒性实验 2.1实验动物及分组 长春高新医学动物实验研究中心提供的40只昆明种小白鼠，雌雄各半，体重18g～22g。
2.2实验仪器与试剂 电子称、小鼠笼和1mL灌胃器； 取100g实施例1制备的灵芝人参药性菌质粉末，与0.2g吐温80调和后，加400g蒸馏水配置成质量浓度为25％的受试药物溶液； 将0.2g吐温80与400g蒸馏水配置成对照溶液。
2.3预实验 取20只小白鼠，雌雄各半，禁食不禁水16h，分为样品组和对照组； 每日给样品组的小白鼠灌胃给7.5g/kg体重的受试药物溶液，连续灌7天，发现小白鼠的生命状况良好，无死亡现象，由此可知最大耐受量为7.5g/kg。
2.4急性毒性实验 取20只样品组小白鼠，雌雄各半，禁食不禁水16h，分为样品组和对照组；每天早、中、晚三次对样品组小白鼠灌胃以40mL/kg的受试药物溶液；每天早、中、晚三次对对照组小白鼠灌胃以40mL/kg的对照溶液；连续灌胃14天，灌胃期间正常饮食； 每次灌胃给药后，立即观察毒性反应，连续观察14天，发现给药后样品组小白鼠活动减少，24h后恢复正常；而小白鼠的外观、精神状态、食欲、大小便次数及其颜色、被毛、肤色、呼吸、分泌物等和对照组无明显区别，未见与药物有关的中毒反应，无死亡发生。
在灌胃前分别记录样品组和对照组小白鼠的体重，分别记录灌胃第3天、第7天、第11天和第15天时样品组和对照组小白鼠的体重，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表1，表1为本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠体重的变化。
表1本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠体重的变化
由表1可知，本发明提供的灵芝人参药性菌质对小鼠的体重增长有促进作用。
灌胃第15天时将小白鼠用颈椎脱臼致死法处死，将小白鼠解剖，肉眼观察小白鼠肝脏、肾脏等脏器，未发现异常改变；比较各组小白鼠肝脏与体重的比值和肾脏与体重的比值，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表2，表2为本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠肝脏与体重的比值(肝体比值)和肾脏与体重的比值(肾体比值)。
表2本发明实施例提供的毒性实验中各组小白鼠肝体比值和肾体比值
由表2可知，被灌胃灵芝人参药性菌质的小白鼠的肝体比值和肾体比值与对照组小白鼠无明显差异，可见，灵芝人参药性菌质对小白鼠的脏器无明显毒性反应。
由上述毒性实验可知，灵芝人参药性菌质不仅毒性极低，还能够促进小白鼠的生长发育。
实施例3 人参药性菌质具有改善睡眠的功效实验 3.1实验动物 雄性ICR小鼠，体重1 8g～26g，吉林大学实验动物中心提供。
3.2试剂 取实施例1制备的灵芝人参药性菌质粉末，加蒸馏水配成质量浓度为25％的受试药物溶液； 将吉林省金宇医药开发有限公司提供的灵芝磨粉，加蒸馏水配成质量浓度为25％的灵芝溶液； 将吉林省金宇医药开发有限公司提供的人参磨粉，将蒸馏水配成质量浓度为25％的人参溶液； 将灵芝和人参共同磨粉，加蒸馏水配成质量浓度为25％的灵芝人参混合液； 戊巴比妥钠(AR)，中国医药(集团)上海化学试剂公司生产。
3.3直接睡眠实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g／kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天后，观察各组小鼠的睡眠发生率，发现各组小鼠均无睡眠现象发生。观察时，睡眠仪翻正反射消失为判断标准，当小鼠置于背卧位时，1分钟内不能翻正，即认为翻正反射消失，进入睡眠；翻正反射恢复即为动物觉醒；翻正反射消失至恢复期间为动物睡眠时间。
3.4延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后15min后，各组小鼠腹腔注射50mg/kg体重的戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察睡眠时间并记录入睡时间和觉醒时间，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表3，表3为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠时间。
表3本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠时间
由表3可知，灵芝人参药性菌质能够增加小鼠的睡眠时间，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
3.5戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后15min后，各组小鼠腹腔注射25mg／kg体重的戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，观察并记录30min内入睡小鼠数，翻正反射消失1min以上为入睡，结果见表4，表4为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠发生率。
表4本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠发生率
由表4可知，灵芝人参药性菌质能够提高小鼠的睡眠发生率，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
3.6缩短戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验 选取50只小鼠，随机分成5组，分别为人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组； 按1.0g/kg体重的剂量分别将人参溶液、灵芝溶液、人参灵芝混合液、受试药物溶液和蒸馏水灌胃给人参实验组、灵芝实验组、人参和灵芝混合实验组、灵芝人参药性菌质实验组和对照组内各小鼠，灌胃30天。最后一次灌胃后20min后，各组小鼠腹腔注射230mg/kg体重的戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察并记录小鼠的睡眠潜伏时间，采用DAS2.0统计学软件对各数据进行处理分析，采用t检验，检验水准α＝0.05，结果见表5，表5为本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠潜伏时间。
表5本发明实施例提供的功效实验中各组小鼠的睡眠潜伏时间
由表5可知，灵芝人参药性菌质能够缩短小鼠的睡眠潜伏时间，且效果好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
由上述结果可知，灵芝人参药性菌质可增加小鼠的睡眠时间、提高睡眠发生率、缩短睡眠潜伏时间，且效果均好于人参、灵芝、人参和灵芝的混合物。
比较例1 将从长春市宏检药材公司购得的生晒人参磨粉，得到黄白色粉末； 将所述粉末在显微镜下进行鉴别，可见粉末具有如下特征草酸钙簇晶直径20～68微米，棱角尖锐；树脂道碎片呈管状，含块状黄色分泌物；木栓细胞类方形，壁薄、波状弯曲；导管多网纹或梯纹。
按照中国药典中提供的方法对所述粉末进行薄层色谱分析，将得到的色谱与人参对照药材色谱相比，在人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的相应位置上显示相同颜色的点，说明所述粉末中含有人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1。
利用北京普析通用仪器有限责任公司的TU1810紫外可见分光光度计对所述粉末进行分析，测得粉末中的总多糖、总皂苷和总蛋白的含量分别为12wt％、3.8wt％和4.5wt％。
将传统人参与本发明实施例1制备的灵芝人参药性菌质相比，结果参见表6，表6为本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质和比较例提供的传统人参的比较。
表6本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质和比较例提供的传统人参的比较
由表6可知，本发明实施例提供的灵芝人参药性菌质中含有菌丝体，其化学成分中，总皂苷与传统人参含量无明显差别，但总多糖和总蛋白的含量均有所增加。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
权利要求
1.一种人参的处理方法，其特征在于，包括
将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质；
将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种；
将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。
2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，加水润湿时，水的重量为人参干重的50％～150％。
3.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，加水润湿时，水的重量为人参干重的100％～150％。
4.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述双向固体发酵的温度为26℃～28℃。
5.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述双向固体发酵的时间为10天～15天。
6.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述扩大培养的方法为液体培养液摇瓶培养或固体培养基培养。
7.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，所述液体培养液包括
2wt％的葡萄糖；
0.5wt％的蛋白胨；
0.1wt％的酵母粉；
0.15wt％的KH2PO4；
0.1wt％MgSO4；
余量为水。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的处理方法，其特征在于，所述人参为生晒人参或鲜人参。
全文摘要
本发明提供了一种人参的处理方法，包括将人参粉碎后加水润湿，灭菌后得到发酵基质；将灵芝菌种活化后进行扩大培养，得到发酵菌种；将所述发酵菌种接种于发酵基质中，在24℃～28℃、避光的条件下进行双向固体发酵10天～20天，得到灵芝人参药性菌质。通过本发明提供的处理方法得到的灵芝人参药性菌质既含有人参的有效成分也含有灵芝的有效成分，具有比人参或灵芝或两者简单相加更好的保健和药用功效，具有镇静、安神、补气的功效，可以用于治疗失眠、调节免疫力、抗肿瘤的药物中，也可以作为保健品，增强亚健康人群的体质。
文档编号A61P37/04GK101816689SQ20101017611
公开日2010年9月1日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者陈心智, 邱智东, 翁丽丽, 陈雪松 申请人:陈心智, 邱智东, 翁丽丽, 陈雪松
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