*酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用的制作方法
专利名称：*酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明及_酮类化合物在制备药物中的运用，更具体的说涉及_酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用。
背景技术：
正常生理情况下，胆汁的形成有赖于肝细胞血窦面基底膜上的Na+-牛磺酸 共转运多月太[sodium-taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP/Ntcp (按国 际统一标准NTCP为人类种属转运蛋白，Ntcp为啮齿类动物种属转运蛋白，下同)]， 有机阴离子转运蛋白(organicanion transportingprotein, 0ATP/0atp)，多耐药才目 关蛋白 3(muhidrugresistance. associated protein3, MRm/Mrp3),多耐药才目关蛋 白 4(multidrug resistance-associated protein4, MRP4/Mrp4)禾口 小胆管侧月干细 胞毛细胆管膜上分布的胆盐输出泵(canalicularbiIe salt-export pump, BSEP/ Bsep),多耐药才目关蛋白 2 (muhidrugresistance-associated protein, MRP2/Mrp2), 多耐药糖蛋白 1 (muhidrug resistance-lP-glycoprotein, MDRl/Mdrl)，多耐药糖蛋 白 2(muhidrug resistance-2P-glycoprotein, MDR2/Mdr2), ^ H S S 3(muhidrug resistance-3P-slycoprotein, MDR3/Mdr3)等多禾中转运体来完成。内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道 梗阻、肝移植、肝叶切除等内外科疾病常并发胆汁淤积的病理改变。转录、转录后调控失常 引发的上述转运蛋白在胞膜上表达、定位的异常在胆汁淤积的发生中起了关键作用。对肝 细胞膜转运蛋白转录、转录后调控的深人研究以揭示上述疾病中胆汁淤积发生的分子学机 制是近年来的研究热点。胆汁酸是胆汁的主要成分，具有重要的生理功能，也是胆汁淤积状态下致机体损 失的主要因素。机体内胆汁酸在正常状态下处于稳定状态。而这种稳态的维持主要依靠 肝细胞膜上的胆酸相关转运蛋白。胆汁淤积发生时，肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性 改变，如与胆酸摄入相关的小管面膜转运蛋白NTCP表达下降，与胆酸排泌相关的基地侧膜 MRP3、MRP4表达上调。其中，MRP3、MRP4的适应性表达上调，能够促进肝细胞内胆汁酸、胆 红素等从基地侧膜排泌至体循环血液，最后经由尿液排除体外，被认为是胆汁淤积状态下 机体自我防御的主要机制。大量证据表明，若干肝细胞膜转运体的表达是受转录后调控的， 肝细胞池内转运蛋白多种归巢信号刺激其由胞内向胞膜上定位及功能性表达。
发明内容
本发明的目的就在于提供_酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用。所述的_酮类化合物为8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1 -6) - β -D-批喃葡萄糖]-1， 7- 二羟基-3-甲氧基丨酮、1，7，8-三羟3-甲氧基□山酮、1，8- 二羟基_3，5- 二甲氧基P山酮、 1-羟基_2，3，4，8四甲氧基Π山酮、1-基_2，3，8三甲氧基_酮、1-基_2，3，4，5四甲氧基□山酮 和1-羟基_2，3，5三甲氧_酮中的一种或一种以上的组合；
其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]_1，7_ 二羟基_3_甲氧基 口山酮的化学结构式为 7,8-三羟基-3-甲氧基_酮的化学结构式为 1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，8四甲氧基Π山酮的化学结构式为 1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，5三甲氧基P山酮的化学结构式为
本发明的有益技术效果是通过体外实验显示_酮类化学成分对于肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性改变具有活性，可用于治疗内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆 汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道梗阻等病症。
具体实施例方式将藏茵陈药材粉粹成粗粉，用不同浓度乙醇梯度渗漉，回收溶剂至稠膏状，稠膏加 水混悬，分别用三氯甲烷、正丁醇萃取，各部分分别回收溶剂。再通过萃取、结晶、柱层析等 方法进行分离纯化。得到8-0-[ β -D-吡喃木糖_(1-6)-β -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羟 基-3-甲氧基Π山酮、1，7，8-三羟基-3-甲氧基口山酮、1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮、 1-基_2，3，4，8四甲氧基口山1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮、羟基_2，3，4，5四甲氧基口山 酮和1-羟基_2，3，5三甲氧基_酮等几种_酮类化学成分。实验目的本实验目的就是检测下述相关各样品对H印G2细胞基地侧膜MRP3、MRP4表达变化 的影响，筛选出对MRP3、MRP4表达上调最明显的药物。实验方法实验分组为药物处理组、UDCA阳性对照组、阴性对照组(DMS0、乙醇对照组)。 !fepG2细胞以1X10/L的密度接种于96孔板中.同时每孔加药物。药物处理组采用 8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基_酮、1，7，8-三 羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，8四基_酮、1-羟 基-2，3，8三甲_酮、1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5三甲氧基_酮分别 配置浓度为50mg/ml的水溶液，每种药物平行6孔，对照组加入等体积培养液；同时处理三 批!fepG2细胞72h时后，将相同药物处理组的细胞收集在一起，然后提取总RNA、总膜蛋白， 进行RT-PCR以及Western-blot，检测上述各样品对H印G2基地侧膜膜胆酸相关转运蛋白 MRP3、MRP4表达变化的影响。筛选对MRP3、MRP4作用最为明显的药物。实验结果在mRNA水平检测了各样品对H印G2细胞基地侧膜MRP3、MRP4的表达变化。1) MRP4mRNA水平的表达变化情况8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基口山 酮、1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮能够上调IfepG2细 胞基地侧膜MRP4mRNA的表达。其中，1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8-二羟基-3， 5- 二甲氧基_酮刺激H印G2细胞基地侧膜MRP4mRNA表达增高约3倍；8_0_[ β -D-吡喃 木糖-(1-6) -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羟基-3-甲氧基OlJj酮刺激IfepG2细胞基地侧膜 MRP4mRNA表达增高约2倍。
1-羟基_2，3，4，8四甲氧_酮、1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5 三甲氧基_酮能够上调H印G2细胞基地侧膜MRP4mRNA的表达，而1-羟基-2，3，4，5四甲氧 基_酮对MRP4mRNA表达无明显变化。其中，1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、刺激!fepG2细 胞基地侧膜MRPmRNA表达增高约3倍；1_羟基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5三 甲氧基_酮刺激HepG2细胞基地侧膜MRP4mRNA表达增高约2倍。UDCA对MRP4mRNA表达无明显变化。
阴性对照组M4mRNA表达无变化。2) MRP3mRNA水平的表达变化情况8-0- [ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡萄萄糖]_1，7_ 二羟基_3_甲氧基_酮、1， 7,8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮对MRP3mRNA表达无明显变 化。1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3，8三甲氧基O山酮和1_羟基_2，3，4， 5四甲氧基_酮能够上调H印G2细胞基地侧膜MRP3mRNA的表达，而1_羟基_2，3，5三甲氧 基_酮对MRP3mRNA表达无明显变化。其中，1_羟基_2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3， 8三甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮和刺激H印G2细胞基地侧膜MRP3mRNA表 达增高约1.5倍。UDCA对MRP3mRNA表达无明显变化。阴性对照组MRP3mRNA表达无变化。传统藏医学中藏茵陈药材为全草入药，即药材中的所有化学成分都被人体吸收； 所以从藏茵陈药材所取得药理性质相近的_酮化学成分一种以上的任意组合均具有生物 活性。
权利要求
酮类化合物在制备治疗胆汁淤积药物中的应用。FSA00000123857200011.tif
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的_酮类化合物为8-0-[i3-D-吡喃 木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基_酮、`1,7,8-三羟基-3-甲氧基 口山酮、1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3，8三 甲氧基_酮、1-羟基_2，3，4，5四甲氧基_酮和1-羟基_2，3，5三甲氧基Π山酮中的一种或 一种以上的组合；其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基P山酮 的化学结构式 为 `1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮的化学结构式为 `1,8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，8三甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，5三甲氧基_酮的化学结构式为
全文摘要
本发明公开了酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用，通过体外实验显示酮类化学成分对于肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性改变具有活性，可用于治疗内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道梗阻等病症。
文档编号A61K31/7048GK101843628SQ20101017612
公开日2010年9月29日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者冯婷婷, 周华容, 柴进, 罗维早, 舒抒, 钟国跃, 阳勇, 陈文生, 黄思行 申请人:重庆市中药研究院
技术领域：
本发明及_酮类化合物在制备药物中的运用，更具体的说涉及_酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用。
背景技术：
正常生理情况下，胆汁的形成有赖于肝细胞血窦面基底膜上的Na+-牛磺酸 共转运多月太[sodium-taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP/Ntcp (按国 际统一标准NTCP为人类种属转运蛋白，Ntcp为啮齿类动物种属转运蛋白，下同)]， 有机阴离子转运蛋白(organicanion transportingprotein, 0ATP/0atp)，多耐药才目 关蛋白 3(muhidrugresistance. associated protein3, MRm/Mrp3),多耐药才目关蛋 白 4(multidrug resistance-associated protein4, MRP4/Mrp4)禾口 小胆管侧月干细 胞毛细胆管膜上分布的胆盐输出泵(canalicularbiIe salt-export pump, BSEP/ Bsep),多耐药才目关蛋白 2 (muhidrugresistance-associated protein, MRP2/Mrp2), 多耐药糖蛋白 1 (muhidrug resistance-lP-glycoprotein, MDRl/Mdrl)，多耐药糖蛋 白 2(muhidrug resistance-2P-glycoprotein, MDR2/Mdr2), ^ H S S 3(muhidrug resistance-3P-slycoprotein, MDR3/Mdr3)等多禾中转运体来完成。内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道 梗阻、肝移植、肝叶切除等内外科疾病常并发胆汁淤积的病理改变。转录、转录后调控失常 引发的上述转运蛋白在胞膜上表达、定位的异常在胆汁淤积的发生中起了关键作用。对肝 细胞膜转运蛋白转录、转录后调控的深人研究以揭示上述疾病中胆汁淤积发生的分子学机 制是近年来的研究热点。胆汁酸是胆汁的主要成分，具有重要的生理功能，也是胆汁淤积状态下致机体损 失的主要因素。机体内胆汁酸在正常状态下处于稳定状态。而这种稳态的维持主要依靠 肝细胞膜上的胆酸相关转运蛋白。胆汁淤积发生时，肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性 改变，如与胆酸摄入相关的小管面膜转运蛋白NTCP表达下降，与胆酸排泌相关的基地侧膜 MRP3、MRP4表达上调。其中，MRP3、MRP4的适应性表达上调，能够促进肝细胞内胆汁酸、胆 红素等从基地侧膜排泌至体循环血液，最后经由尿液排除体外，被认为是胆汁淤积状态下 机体自我防御的主要机制。大量证据表明，若干肝细胞膜转运体的表达是受转录后调控的， 肝细胞池内转运蛋白多种归巢信号刺激其由胞内向胞膜上定位及功能性表达。
发明内容
本发明的目的就在于提供_酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用。所述的_酮类化合物为8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1 -6) - β -D-批喃葡萄糖]-1， 7- 二羟基-3-甲氧基丨酮、1，7，8-三羟3-甲氧基□山酮、1，8- 二羟基_3，5- 二甲氧基P山酮、 1-羟基_2，3，4，8四甲氧基Π山酮、1-基_2，3，8三甲氧基_酮、1-基_2，3，4，5四甲氧基□山酮 和1-羟基_2，3，5三甲氧_酮中的一种或一种以上的组合；
其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]_1，7_ 二羟基_3_甲氧基 口山酮的化学结构式为 7,8-三羟基-3-甲氧基_酮的化学结构式为 1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，8四甲氧基Π山酮的化学结构式为 1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，5三甲氧基P山酮的化学结构式为
本发明的有益技术效果是通过体外实验显示_酮类化学成分对于肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性改变具有活性，可用于治疗内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆 汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道梗阻等病症。
具体实施例方式将藏茵陈药材粉粹成粗粉，用不同浓度乙醇梯度渗漉，回收溶剂至稠膏状，稠膏加 水混悬，分别用三氯甲烷、正丁醇萃取，各部分分别回收溶剂。再通过萃取、结晶、柱层析等 方法进行分离纯化。得到8-0-[ β -D-吡喃木糖_(1-6)-β -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羟 基-3-甲氧基Π山酮、1，7，8-三羟基-3-甲氧基口山酮、1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮、 1-基_2，3，4，8四甲氧基口山1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮、羟基_2，3，4，5四甲氧基口山 酮和1-羟基_2，3，5三甲氧基_酮等几种_酮类化学成分。实验目的本实验目的就是检测下述相关各样品对H印G2细胞基地侧膜MRP3、MRP4表达变化 的影响，筛选出对MRP3、MRP4表达上调最明显的药物。实验方法实验分组为药物处理组、UDCA阳性对照组、阴性对照组(DMS0、乙醇对照组)。 !fepG2细胞以1X10/L的密度接种于96孔板中.同时每孔加药物。药物处理组采用 8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基_酮、1，7，8-三 羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，8四基_酮、1-羟 基-2，3，8三甲_酮、1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5三甲氧基_酮分别 配置浓度为50mg/ml的水溶液，每种药物平行6孔，对照组加入等体积培养液；同时处理三 批!fepG2细胞72h时后，将相同药物处理组的细胞收集在一起，然后提取总RNA、总膜蛋白， 进行RT-PCR以及Western-blot，检测上述各样品对H印G2基地侧膜膜胆酸相关转运蛋白 MRP3、MRP4表达变化的影响。筛选对MRP3、MRP4作用最为明显的药物。实验结果在mRNA水平检测了各样品对H印G2细胞基地侧膜MRP3、MRP4的表达变化。1) MRP4mRNA水平的表达变化情况8-0- [ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基口山 酮、1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮能够上调IfepG2细 胞基地侧膜MRP4mRNA的表达。其中，1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8-二羟基-3， 5- 二甲氧基_酮刺激H印G2细胞基地侧膜MRP4mRNA表达增高约3倍；8_0_[ β -D-吡喃 木糖-(1-6) -D-吡喃葡萄糖]-1，7_ 二羟基-3-甲氧基OlJj酮刺激IfepG2细胞基地侧膜 MRP4mRNA表达增高约2倍。
1-羟基_2，3，4，8四甲氧_酮、1-羟基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5 三甲氧基_酮能够上调H印G2细胞基地侧膜MRP4mRNA的表达，而1-羟基-2，3，4，5四甲氧 基_酮对MRP4mRNA表达无明显变化。其中，1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、刺激!fepG2细 胞基地侧膜MRPmRNA表达增高约3倍；1_羟基_2，3，8三甲氧基_酮和1_羟基_2，3，5三 甲氧基_酮刺激HepG2细胞基地侧膜MRP4mRNA表达增高约2倍。UDCA对MRP4mRNA表达无明显变化。
阴性对照组M4mRNA表达无变化。2) MRP3mRNA水平的表达变化情况8-0- [ β -D-吡喃木糖_ (1-6) - β -D-吡萄萄糖]_1，7_ 二羟基_3_甲氧基_酮、1， 7,8-三羟基-3-甲氧基_酮、1，8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮对MRP3mRNA表达无明显变 化。1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3，8三甲氧基O山酮和1_羟基_2，3，4， 5四甲氧基_酮能够上调H印G2细胞基地侧膜MRP3mRNA的表达，而1_羟基_2，3，5三甲氧 基_酮对MRP3mRNA表达无明显变化。其中，1_羟基_2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3， 8三甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮和刺激H印G2细胞基地侧膜MRP3mRNA表 达增高约1.5倍。UDCA对MRP3mRNA表达无明显变化。阴性对照组MRP3mRNA表达无变化。传统藏医学中藏茵陈药材为全草入药，即药材中的所有化学成分都被人体吸收； 所以从藏茵陈药材所取得药理性质相近的_酮化学成分一种以上的任意组合均具有生物 活性。
权利要求
酮类化合物在制备治疗胆汁淤积药物中的应用。FSA00000123857200011.tif
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的_酮类化合物为8-0-[i3-D-吡喃 木糖_ (1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基_酮、`1,7,8-三羟基-3-甲氧基 口山酮、1，8-二羟基-3，5-二甲氧基_酮、1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮、1-羟基-2，3，8三 甲氧基_酮、1-羟基_2，3，4，5四甲氧基_酮和1-羟基_2，3，5三甲氧基Π山酮中的一种或 一种以上的组合；其中，8-0-[ β -D-吡喃木糖-(1-6) - β -D-吡喃葡萄糖]-1，7- 二羟基-3-甲氧基P山酮 的化学结构式 为 `1，7，8-三羟基-3-甲氧基_酮的化学结构式为 `1,8- 二羟基-3，5- 二甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，8四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，8三甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，4，5四甲氧基_酮的化学结构式为 1-羟基-2，3，5三甲氧基_酮的化学结构式为
全文摘要
本发明公开了酮类化合物在制备治疗胆汁淤积的药物中的应用，通过体外实验显示酮类化学成分对于肝细胞膜胆酸转运蛋白会发生适应性改变具有活性，可用于治疗内毒素血症、药物性肝脏损害、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、胆道梗阻等病症。
文档编号A61K31/7048GK101843628SQ20101017612
公开日2010年9月29日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者冯婷婷, 周华容, 柴进, 罗维早, 舒抒, 钟国跃, 阳勇, 陈文生, 黄思行 申请人:重庆市中药研究院
最新回复(0)