一种中药组合物、中药制剂及制备方法和用途的制作方法
专利名称：一种中药组合物、中药制剂及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种中药组合物、中药制剂及制备方法 和用途。
背景技术：
糖尿病(DM)是重要的现代疾病，可引起多个系统器官的慢性并发症，导致功能障 碍和衰竭，成为致残、病死的主要原因。过去认为1型糖尿病是由于遗传和环境导致的自身 免疫性疾病，在机制上以细胞免疫为主，炎症反应因子，通过氧化自由基诱导凋亡。2型糖尿 病是由于遗传和环境导致的胰岛素抵抗、胰岛β细胞变性、衰竭的疾病。1、2型糖尿病可 能的共同机制为氧化应激诱导胰岛细胞的功能障碍和细胞凋亡。随着对细胞凋亡及其基因 调控与疾病关系的深入研究，发现细胞凋亡密切参与了糖尿病的发生机制。Bcl-2蛋白家 族是位于线粒体外膜的一类蛋白，分为存活蛋白和凋亡蛋白两类。抗凋亡蛋白包括Bcl-2 和Bcl-xL，凋亡蛋白包括BaX、Bad和Bid。细胞中凋亡蛋白、凋亡蛋白酶和抗凋亡蛋白相互 拮抗，相互平衡，当凋亡作用占优势时，天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)被激活，阻 断DNA修复酶修复DNA损伤的通路，导致细胞不可逆的凋亡。β细胞凋亡导致的胰岛功能 受损在发病过程中所起的作用已受到越来越多的重视。近期的一项研究表明，无论是肥胖 还是非肥胖的2型糖尿病患者，与其体重指数相当的非糖尿病人群相比，其胰岛β细胞数 目明显减少，胰岛细胞凋亡发生率也明显高于正常人群，而两组人群间胰岛再生和分化过 程并无明显区别。胰岛β细胞功能正常与否是2型糖尿病是否发生的决定因素；如果胰岛 β细胞能保持其代偿能力，2型糖尿病并不会发生，一旦其代偿能力下降，则2型糖尿病逐 渐发生。根据英国前瞻性糖尿病研究显示，患者在被诊断为糖尿病时，β细胞功能只剩下 正常人的50%，其后胰岛β细胞功能每年以4% 5%的速度下降。以此推算，在糖尿病诊 断前10 15年，β细胞功能已开始逐渐下降。糖尿病已成为世界范围的严重危害人们健 康的疾病，随着对糖尿病基础研究的不断深入，β细胞凋亡在糖尿病的发病中所起的重要 作用被逐渐发现。采用抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复的手段，对 糖尿病的防治有着巨大意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的中药组合物，以及由该中药组合物制备的中药制 剂，对胰岛β细胞凋亡和胰岛β细胞功能恢复进行干预而治疗糖尿病。本发明的技术方案如下一种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪250-375份，醋制延胡 索500-750份，三七200-300份，赤芍300-450份，丹参250-375份，川芎250-375份，红花 250-375份，苏木200-300份，鸡血藤250-375份。其中所述粗制胡延索是指按照《中国药 典一部》(2010年版)第130页以及附录20、21页记载内容进行制备的。一种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪281-343份，醋制延胡
3索562-687份，三七225-275份，赤芍337-412份，丹参281-343份，川芎281-343份，红花 281-343份，苏木225-275份，鸡血藤281-343份。—种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪312份，醋制延胡索625 份，三七250份，赤芍375份，丹参312份，川芎312份，红花312份，苏木250份，鸡血藤312 份。上述技术方案中所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复药物中的用途。一种中药制剂，包括活性成分和药学上可接受的载体，所述活性成分为上述的中 药组合物。上述技术方案中所述的中药制剂，其中所述药学上可接受的载体为1-500份。作为对上述技术方案中所述的中药制剂的改进，其中所述药学上可接受的载体为 选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。本发明的中药制剂中的药学上可接受的载体的重量份为1 500份，载体加入的 多少和种类不影响中药颗粒剂中的活性成分抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细 胞功能恢复的作用。上述技术方案中所述的中药制剂的制备方法，包括以下步骤(1)、称取所述重量份的各原料药，将三七粉碎成细粉；(2)、醋制延胡索加60% -80%乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第 二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓 缩至在60°C时相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(3)、取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60°C相对密 度为1.30 1.35的稠膏，药渣加40% -60%乙醇6倍量，回流1.5小时，滤过，药渣加水8 倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35 的稠膏；(4)、将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍 量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并 滤液，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(5)、将步骤⑵、(3)和(4)制备的稠膏与步骤⑴制备的三七粉混勻，低温干燥， 粉碎成细粉，加入适量药学上可接受的载体，混勻后制粒，干燥，即得。可以制成多种剂型的 制剂。上述技术方案中所述的中药制剂的制备方法，其中所述药学上可接受的载体为选 自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。上述任一技术方案中所述的中药制剂在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进 胰岛β细胞功能恢复药物中的用途。本发明的中药组合物及其制剂能够有效的抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复。说明书附图
图1为正常对照组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图2为模型组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；
图3为甘精胰岛素组HE染色后光镜下胰岛结构；图4为低剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图5为中剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图6为高剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图7为模型组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图8为木丹颗粒中剂量组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图9为木丹颗粒低剂量组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图10为甘精胰岛素组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图11为模型组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图12为木丹颗粒中剂量组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图13为木丹颗粒低剂量组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图14为甘精胰岛素组大鼠胞核内Bcl-2表达图。
具体实施例方式为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施方式
对本发明作进一步的说 明。实施例1 黄芪312g，醋制延胡索625g，三七250g,赤芍375g，丹参312g，川芎312g，红花 312g，苏木250g，鸡血藤312g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加70%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加50%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量lOOOg，混勻后用85%乙 醇制粒，干燥，即得。实施例2 黄芪250g,醋制延胡索500g,三七200g,赤芍300g,丹参250g,川芎250g，红花 250g，苏木200g，鸡血藤250g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加60%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加40%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35(60°C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量800g，混勻后用75%乙醇制粒，干燥，压片，即得。实施例3 黄芪343g，醋制延胡索687g，三七275g，赤芍412g，丹参343g，川芎343g，红花 343g，苏木275g，鸡血藤343g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加80%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加60%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量llOOg，混勻后用90%乙 醇制粒，干燥，装入胶囊，即得。以下通过具体的试验例来进一步阐述本发明所述中药制剂(以下简称木丹颗 粒)用于制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复药物时所具有的有 益效果将清洁级SD大鼠屏障环境饲养，环境温度为20_25°C，湿度40% 60%，12h光照 /天，在实验室适应性喂养1周后，大鼠禁食24小时后，将STZ (链脲佐菌素)用0. 1 % mmol/ L枸橼酸缓冲液(pH4. 2，4°C )配成1 %浓度，按53mg/kg体重剂量左下腹腔单次注射，72小 时后尾静脉取血，用血糖仪测定血糖，凡血糖> 16. 7mmol/L纳入实验。血糖稳定3d后，取 成模大鼠根据随机数字表将DM大鼠随机分为模型组、木丹颗粒高剂量组、木丹颗粒中剂 量组、木丹颗粒低剂量组、甘精胰岛素组，每组10只。并以体重、鼠龄别相匹配的正常大鼠 10只设为正常组。造模成功后3天给药。正常组及模型组生理盐水10ml/kg灌胃，每日一 次。木丹颗粒大剂量治疗组，按人鼠剂量换算给予人的等效剂量，予4. 6g/kg. d木丹颗粒剂 灌胃；中剂量治疗组予2. 3g/kg.d、低剂量组予1. 15g/kg.d木丹颗粒剂每日一次灌胃；甘精 胰岛素组按人鼠剂量换算给予人的等效剂量，予甘精胰岛素lU/100g腹腔注射，每日一次。 灌胃4周后动物禁食12小时然后进行腹腔注射20%乌拉坦(0. 5ml/100g)麻醉后取其胰腺 头部部分后经10%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片后HE染色观察胰岛形态学改变和免疫组 织化学染色观察细胞凋亡情况。(1)光镜下大鼠细胞的变化(HE X 400)HE染色如图1显示，正常对照组大鼠胰岛镜下见胰岛结构完整，胰岛细胞饱满呈 圆形，胞体丰满，排列紧密；如图2显示，DM组(模型组)大鼠胰岛镜下见大鼠胰岛，形状不 规则，体积变小，胰岛β细胞减少；如图4显示，木丹颗粒低剂量组也有类似的表现，大鼠胰 岛细胞减少，细胞排列密集，胰岛β较少，形状不规则，体积变小；如图3、图5显示，甘精胰 岛素组和木丹颗粒中剂量组较DM组有明显改善，细胞呈圆形，排列整齐，胰岛β细胞较模 型组与低剂量组增多；如图6显示，高剂量组较DM组改善与中剂量组相近，细胞排列较整 齐，胰岛β细胞清晰可见。(2)木丹颗粒对Bax及Bc 1-2的影响4周后，如图7显示，模型组大鼠胞浆，及胞核内Bax大量表达，呈深棕色；如图8显
6示，木丹颗粒中剂量组呈浅棕色；如图9显示，木丹颗粒低剂量组深棕色颗粒仍较多，但较 DM组改善；如图10显示，甘精胰岛素组呈浅棕色。Bcl-2则相反，4周后，如图11显示，模型组大鼠胞核内Bcl-2呈浅棕色；如图12 显示，木丹颗粒中剂量组呈深棕色，表达较模型组有增多；如图13显示，木丹低剂量组少量 棕色颗粒，但较DM组有改善；如图14显示，甘精胰岛素组呈深棕色，表达广泛。细胞凋亡在多种疾病，包括糖尿病及其并发症发生过程中起着重要的作用。大量 实验已经证明了 Bcl-2基因家族参与了胰岛β细胞凋亡的发生。树駒经注射STZ后DM成 模者胰岛中抗凋亡相关蛋白分子Bcl-2表达明显低于空白组，而且，Bcl-2表达水平与血清 胰岛素水平和胰岛中胰岛素表达水平呈正相关，提示Bcl-2表达上调可能对β细胞起保护 作用。有研究发现，糖尿病大鼠主动脉HE染色见内膜增厚、平滑肌增生等早期大血管并发 症的组织学改变；而Bcl-2蛋白在内皮细胞及平滑肌细胞的表达下降，而Bax蛋白表达明显 增加。提示高血糖可能改变了凋亡调控基因的表达，引起Bcl-2/Bax比例的下降，从而促进 了主动脉内皮细胞及平滑肌细胞凋亡，最终可能导致糖尿病主动脉病变的发生。在对糖尿病的治疗中，一些实验证明了中成药对糖尿病的治疗可通过调节Bcl-2/ Bax的比值来控制。如南瓜多糖可以降低胰岛细胞Bax基因的表达、增加大鼠胰岛细胞 Bcl-2表达，保护受损的胰岛β细胞，促进胰岛素的分泌。本研究中糖尿病大鼠糖尿病4周 时胰腺组织中Bcl-2表达下调，而同时Bax大量表达，胰腺组织中大量细胞出现凋亡，这与 我们的凋亡形态学研究结果一致，说明Bcl-2表达下调以及Bax表达上调是糖尿病细胞凋 亡机制中的重要环节，Bcl-2家族参与了糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的调节过程。木丹颗粒其成分多元，作用广泛，益气活血能带动血液运行、改善血液粘稠度，祛 瘀能抑制胰岛细胞凋亡，通络能止痛。现代医学研究表明，部分糖尿病患者的胰腺血管存在 有闭塞不通的征象。EnghoferL发现经STZ注射后的糖尿病大鼠胰岛内血液循环障碍也是 导致β细胞损伤的原因。木丹颗粒可以益气活血祛瘀，改善血流，促进微循环，使胰腺管通 畅。木丹颗粒能改善Na+-K+-ATP酶活性，显著对抗坐骨神经、肝、肾、胰腺、视网膜病变；木丹 颗粒还具有降低糖尿病大鼠血清果糖胺含量的作用，抑制AGE的形成，减少AGE在周围神经 的蓄积。木丹颗粒能去瘀生新、活血通络，上调Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，具有显著的 抑制胰岛β细胞凋亡，恢复胰岛β细胞功能的作用。以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限 制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技 术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依 据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本 发明的技术方案的范围内。
权利要求
一种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪250 375份，醋制延胡索500 750份，三七200 300份，赤芍300 450份，丹参250 375份，川芎250 375份，红花250 375份，苏木200 300份，鸡血藤250 375份。
2.—种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪281-343份， 醋制延胡索562-687份，三七225-275份，赤芍337-412份，丹参281-343份，川芎281-343 份，红花281-343份，苏木225-275份，鸡血藤281-343份。
3.—种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪312份，醋制 延胡索625份，三七250份，赤芍375份，丹参312份，川芎312份，红花312份，苏木250份， 鸡血藤312份。
4.权利要求1或2或3所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复药物中的用途。
5.一种中药制剂，包括活性成分和药学上可接受的载体，其特征在于所述活性成分 为权利要求1或2或3所述的中药组合物。
6.根据权利要求5所述的中药制剂，其特征在于所述药学上可接受的载体为1-500份。
7.根据权利要求5或6所述的中药制剂，其特征在于所述药学上可接受的载体为选 自糊精、淀粉、纤维素及其衍生物中的一种或几种的组合。
8.权利要求1-7所述的中药制剂的制备方法，包括以下步骤(1)、称取所述重量份的各原料药，将三七粉碎成细粉；(2)、醋制延胡索加60%-80%乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第二次 加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至 在60°C时相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(3)、取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60°C相对密度 为1. 30 1. 35的稠膏，药渣加40% -60%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍 量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的 稠膏；(4)、将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍量水 煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液， 浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(5)、将步骤(2)、(3)和(4)制备的稠膏与步骤(1)制备的三七粉混勻，低温干燥，粉 碎成细粉，加入适量药学上可接受的载体，混勻后制粒，干燥，即得。可以制成多种剂型的制 剂。
9.根据权利要求8所述的中药制剂的制备方法，其特征在于所述药学上可接受的载 体为选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。
10.权利要求5-7中任一权利要求所述的中药制剂在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋 亡、促进胰岛β细胞功能恢复药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种中药组合物、中药制剂及制备方法和用途，属于中药制剂技术领域。所述中药组合物由原料药黄芪、醋制延胡索、三七、赤芍、丹参、川芎、红花、苏木和鸡血藤制成；所述中药制剂包括活性成分和药学上可接受的载体。本发明的中药组合物和中药制剂具有能够抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复的作用。
文档编号A61P3/10GK101972316SQ20101029618
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月29日 优先权日2010年9月29日
发明者于世家, 冯会生, 吕锐, 李尧军, 潘英宏, 潘霖, 田桂芳, 赵长会, 郭振海 申请人:辽宁奥达制药有限公司
技术领域：
本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种中药组合物、中药制剂及制备方法 和用途。
背景技术：
糖尿病(DM)是重要的现代疾病，可引起多个系统器官的慢性并发症，导致功能障 碍和衰竭，成为致残、病死的主要原因。过去认为1型糖尿病是由于遗传和环境导致的自身 免疫性疾病，在机制上以细胞免疫为主，炎症反应因子，通过氧化自由基诱导凋亡。2型糖尿 病是由于遗传和环境导致的胰岛素抵抗、胰岛β细胞变性、衰竭的疾病。1、2型糖尿病可 能的共同机制为氧化应激诱导胰岛细胞的功能障碍和细胞凋亡。随着对细胞凋亡及其基因 调控与疾病关系的深入研究，发现细胞凋亡密切参与了糖尿病的发生机制。Bcl-2蛋白家 族是位于线粒体外膜的一类蛋白，分为存活蛋白和凋亡蛋白两类。抗凋亡蛋白包括Bcl-2 和Bcl-xL，凋亡蛋白包括BaX、Bad和Bid。细胞中凋亡蛋白、凋亡蛋白酶和抗凋亡蛋白相互 拮抗，相互平衡，当凋亡作用占优势时，天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)被激活，阻 断DNA修复酶修复DNA损伤的通路，导致细胞不可逆的凋亡。β细胞凋亡导致的胰岛功能 受损在发病过程中所起的作用已受到越来越多的重视。近期的一项研究表明，无论是肥胖 还是非肥胖的2型糖尿病患者，与其体重指数相当的非糖尿病人群相比，其胰岛β细胞数 目明显减少，胰岛细胞凋亡发生率也明显高于正常人群，而两组人群间胰岛再生和分化过 程并无明显区别。胰岛β细胞功能正常与否是2型糖尿病是否发生的决定因素；如果胰岛 β细胞能保持其代偿能力，2型糖尿病并不会发生，一旦其代偿能力下降，则2型糖尿病逐 渐发生。根据英国前瞻性糖尿病研究显示，患者在被诊断为糖尿病时，β细胞功能只剩下 正常人的50%，其后胰岛β细胞功能每年以4% 5%的速度下降。以此推算，在糖尿病诊 断前10 15年，β细胞功能已开始逐渐下降。糖尿病已成为世界范围的严重危害人们健 康的疾病，随着对糖尿病基础研究的不断深入，β细胞凋亡在糖尿病的发病中所起的重要 作用被逐渐发现。采用抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复的手段，对 糖尿病的防治有着巨大意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的中药组合物，以及由该中药组合物制备的中药制 剂，对胰岛β细胞凋亡和胰岛β细胞功能恢复进行干预而治疗糖尿病。本发明的技术方案如下一种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪250-375份，醋制延胡 索500-750份，三七200-300份，赤芍300-450份，丹参250-375份，川芎250-375份，红花 250-375份，苏木200-300份，鸡血藤250-375份。其中所述粗制胡延索是指按照《中国药 典一部》(2010年版)第130页以及附录20、21页记载内容进行制备的。一种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪281-343份，醋制延胡
3索562-687份，三七225-275份，赤芍337-412份，丹参281-343份，川芎281-343份，红花 281-343份，苏木225-275份，鸡血藤281-343份。—种中药组合物，它是由下述重量比例的原料制成黄芪312份，醋制延胡索625 份，三七250份，赤芍375份，丹参312份，川芎312份，红花312份，苏木250份，鸡血藤312 份。上述技术方案中所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复药物中的用途。一种中药制剂，包括活性成分和药学上可接受的载体，所述活性成分为上述的中 药组合物。上述技术方案中所述的中药制剂，其中所述药学上可接受的载体为1-500份。作为对上述技术方案中所述的中药制剂的改进，其中所述药学上可接受的载体为 选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。本发明的中药制剂中的药学上可接受的载体的重量份为1 500份，载体加入的 多少和种类不影响中药颗粒剂中的活性成分抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细 胞功能恢复的作用。上述技术方案中所述的中药制剂的制备方法，包括以下步骤(1)、称取所述重量份的各原料药，将三七粉碎成细粉；(2)、醋制延胡索加60% -80%乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第 二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓 缩至在60°C时相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(3)、取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60°C相对密 度为1.30 1.35的稠膏，药渣加40% -60%乙醇6倍量，回流1.5小时，滤过，药渣加水8 倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35 的稠膏；(4)、将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍 量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并 滤液，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(5)、将步骤⑵、(3)和(4)制备的稠膏与步骤⑴制备的三七粉混勻，低温干燥， 粉碎成细粉，加入适量药学上可接受的载体，混勻后制粒，干燥，即得。可以制成多种剂型的 制剂。上述技术方案中所述的中药制剂的制备方法，其中所述药学上可接受的载体为选 自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。上述任一技术方案中所述的中药制剂在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进 胰岛β细胞功能恢复药物中的用途。本发明的中药组合物及其制剂能够有效的抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复。说明书附图
图1为正常对照组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图2为模型组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；
图3为甘精胰岛素组HE染色后光镜下胰岛结构；图4为低剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图5为中剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图6为高剂量组大鼠胰岛HE染色后光镜下胰岛结构；图7为模型组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图8为木丹颗粒中剂量组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图9为木丹颗粒低剂量组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图10为甘精胰岛素组大鼠胞浆及胞核内Bax表达显示图；图11为模型组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图12为木丹颗粒中剂量组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图13为木丹颗粒低剂量组大鼠胞核内Bcl-2表达图；图14为甘精胰岛素组大鼠胞核内Bcl-2表达图。
具体实施例方式为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体实施方式
对本发明作进一步的说 明。实施例1 黄芪312g，醋制延胡索625g，三七250g,赤芍375g，丹参312g，川芎312g，红花 312g，苏木250g，鸡血藤312g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加70%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加50%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量lOOOg，混勻后用85%乙 醇制粒，干燥，即得。实施例2 黄芪250g,醋制延胡索500g,三七200g,赤芍300g,丹参250g,川芎250g，红花 250g，苏木200g，鸡血藤250g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加60%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加40%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35(60°C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量800g，混勻后用75%乙醇制粒，干燥，压片，即得。实施例3 黄芪343g，醋制延胡索687g，三七275g，赤芍412g，丹参343g，川芎343g，红花 343g，苏木275g，鸡血藤343g。以上九味，三七粉碎成细粉；延胡索加80%乙醇回流提取三 次，第一次加4倍量回流3小时，第二次加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时， 滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；取丹参加 乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠 膏，药渣加60%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍量，煎煮2小时，滤过，合并 滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏；其余黄芪等六味药加 水煎煮三次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍 量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1. 30 1. 35 (600C )的稠膏。合并上 述稠膏与三七粉混勻，低温干燥，粉碎成细粉，加入糊精至总重量llOOg，混勻后用90%乙 醇制粒，干燥，装入胶囊，即得。以下通过具体的试验例来进一步阐述本发明所述中药制剂(以下简称木丹颗 粒)用于制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复药物时所具有的有 益效果将清洁级SD大鼠屏障环境饲养，环境温度为20_25°C，湿度40% 60%，12h光照 /天，在实验室适应性喂养1周后，大鼠禁食24小时后，将STZ (链脲佐菌素)用0. 1 % mmol/ L枸橼酸缓冲液(pH4. 2，4°C )配成1 %浓度，按53mg/kg体重剂量左下腹腔单次注射，72小 时后尾静脉取血，用血糖仪测定血糖，凡血糖> 16. 7mmol/L纳入实验。血糖稳定3d后，取 成模大鼠根据随机数字表将DM大鼠随机分为模型组、木丹颗粒高剂量组、木丹颗粒中剂 量组、木丹颗粒低剂量组、甘精胰岛素组，每组10只。并以体重、鼠龄别相匹配的正常大鼠 10只设为正常组。造模成功后3天给药。正常组及模型组生理盐水10ml/kg灌胃，每日一 次。木丹颗粒大剂量治疗组，按人鼠剂量换算给予人的等效剂量，予4. 6g/kg. d木丹颗粒剂 灌胃；中剂量治疗组予2. 3g/kg.d、低剂量组予1. 15g/kg.d木丹颗粒剂每日一次灌胃；甘精 胰岛素组按人鼠剂量换算给予人的等效剂量，予甘精胰岛素lU/100g腹腔注射，每日一次。 灌胃4周后动物禁食12小时然后进行腹腔注射20%乌拉坦(0. 5ml/100g)麻醉后取其胰腺 头部部分后经10%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片后HE染色观察胰岛形态学改变和免疫组 织化学染色观察细胞凋亡情况。(1)光镜下大鼠细胞的变化(HE X 400)HE染色如图1显示，正常对照组大鼠胰岛镜下见胰岛结构完整，胰岛细胞饱满呈 圆形，胞体丰满，排列紧密；如图2显示，DM组(模型组)大鼠胰岛镜下见大鼠胰岛，形状不 规则，体积变小，胰岛β细胞减少；如图4显示，木丹颗粒低剂量组也有类似的表现，大鼠胰 岛细胞减少，细胞排列密集，胰岛β较少，形状不规则，体积变小；如图3、图5显示，甘精胰 岛素组和木丹颗粒中剂量组较DM组有明显改善，细胞呈圆形，排列整齐，胰岛β细胞较模 型组与低剂量组增多；如图6显示，高剂量组较DM组改善与中剂量组相近，细胞排列较整 齐，胰岛β细胞清晰可见。(2)木丹颗粒对Bax及Bc 1-2的影响4周后，如图7显示，模型组大鼠胞浆，及胞核内Bax大量表达，呈深棕色；如图8显
6示，木丹颗粒中剂量组呈浅棕色；如图9显示，木丹颗粒低剂量组深棕色颗粒仍较多，但较 DM组改善；如图10显示，甘精胰岛素组呈浅棕色。Bcl-2则相反，4周后，如图11显示，模型组大鼠胞核内Bcl-2呈浅棕色；如图12 显示，木丹颗粒中剂量组呈深棕色，表达较模型组有增多；如图13显示，木丹低剂量组少量 棕色颗粒，但较DM组有改善；如图14显示，甘精胰岛素组呈深棕色，表达广泛。细胞凋亡在多种疾病，包括糖尿病及其并发症发生过程中起着重要的作用。大量 实验已经证明了 Bcl-2基因家族参与了胰岛β细胞凋亡的发生。树駒经注射STZ后DM成 模者胰岛中抗凋亡相关蛋白分子Bcl-2表达明显低于空白组，而且，Bcl-2表达水平与血清 胰岛素水平和胰岛中胰岛素表达水平呈正相关，提示Bcl-2表达上调可能对β细胞起保护 作用。有研究发现，糖尿病大鼠主动脉HE染色见内膜增厚、平滑肌增生等早期大血管并发 症的组织学改变；而Bcl-2蛋白在内皮细胞及平滑肌细胞的表达下降，而Bax蛋白表达明显 增加。提示高血糖可能改变了凋亡调控基因的表达，引起Bcl-2/Bax比例的下降，从而促进 了主动脉内皮细胞及平滑肌细胞凋亡，最终可能导致糖尿病主动脉病变的发生。在对糖尿病的治疗中，一些实验证明了中成药对糖尿病的治疗可通过调节Bcl-2/ Bax的比值来控制。如南瓜多糖可以降低胰岛细胞Bax基因的表达、增加大鼠胰岛细胞 Bcl-2表达，保护受损的胰岛β细胞，促进胰岛素的分泌。本研究中糖尿病大鼠糖尿病4周 时胰腺组织中Bcl-2表达下调，而同时Bax大量表达，胰腺组织中大量细胞出现凋亡，这与 我们的凋亡形态学研究结果一致，说明Bcl-2表达下调以及Bax表达上调是糖尿病细胞凋 亡机制中的重要环节，Bcl-2家族参与了糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的调节过程。木丹颗粒其成分多元，作用广泛，益气活血能带动血液运行、改善血液粘稠度，祛 瘀能抑制胰岛细胞凋亡，通络能止痛。现代医学研究表明，部分糖尿病患者的胰腺血管存在 有闭塞不通的征象。EnghoferL发现经STZ注射后的糖尿病大鼠胰岛内血液循环障碍也是 导致β细胞损伤的原因。木丹颗粒可以益气活血祛瘀，改善血流，促进微循环，使胰腺管通 畅。木丹颗粒能改善Na+-K+-ATP酶活性，显著对抗坐骨神经、肝、肾、胰腺、视网膜病变；木丹 颗粒还具有降低糖尿病大鼠血清果糖胺含量的作用，抑制AGE的形成，减少AGE在周围神经 的蓄积。木丹颗粒能去瘀生新、活血通络，上调Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，具有显著的 抑制胰岛β细胞凋亡，恢复胰岛β细胞功能的作用。以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限 制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技 术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依 据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本 发明的技术方案的范围内。
权利要求
一种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪250 375份，醋制延胡索500 750份，三七200 300份，赤芍300 450份，丹参250 375份，川芎250 375份，红花250 375份，苏木200 300份，鸡血藤250 375份。
2.—种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪281-343份， 醋制延胡索562-687份，三七225-275份，赤芍337-412份，丹参281-343份，川芎281-343 份，红花281-343份，苏木225-275份，鸡血藤281-343份。
3.—种中药组合物，其特征在于它是由下述重量比例的原料制成黄芪312份，醋制 延胡索625份，三七250份，赤芍375份，丹参312份，川芎312份，红花312份，苏木250份， 鸡血藤312份。
4.权利要求1或2或3所述的中药组合物在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰 岛β细胞功能恢复药物中的用途。
5.一种中药制剂，包括活性成分和药学上可接受的载体，其特征在于所述活性成分 为权利要求1或2或3所述的中药组合物。
6.根据权利要求5所述的中药制剂，其特征在于所述药学上可接受的载体为1-500份。
7.根据权利要求5或6所述的中药制剂，其特征在于所述药学上可接受的载体为选 自糊精、淀粉、纤维素及其衍生物中的一种或几种的组合。
8.权利要求1-7所述的中药制剂的制备方法，包括以下步骤(1)、称取所述重量份的各原料药，将三七粉碎成细粉；(2)、醋制延胡索加60%-80%乙醇回流提取三次，第一次加4倍量回流3小时，第二次 加4倍量回流2小时，第三次加2倍量回流1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩至 在60°C时相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(3)、取丹参加乙醇6倍量，回流2小时，滤过，回收乙醇，减压浓缩至在60°C相对密度 为1. 30 1. 35的稠膏，药渣加40% -60%乙醇6倍量，回流1. 5小时，滤过，药渣加水8倍 量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的 稠膏；(4)、将黄芪、赤芍、川芎、红花、苏木和鸡血藤混合，加水煎煮三次，第一次加8倍量水 煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加4倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液， 浓缩至在60°C相对密度为1. 30 1. 35的稠膏；(5)、将步骤(2)、(3)和(4)制备的稠膏与步骤(1)制备的三七粉混勻，低温干燥，粉 碎成细粉，加入适量药学上可接受的载体，混勻后制粒，干燥，即得。可以制成多种剂型的制 剂。
9.根据权利要求8所述的中药制剂的制备方法，其特征在于所述药学上可接受的载 体为选自糊精、淀粉、纤维素、淀粉或纤维素的衍生物等的一种或几种的组合。
10.权利要求5-7中任一权利要求所述的中药制剂在制备抑制或延缓胰岛β细胞凋 亡、促进胰岛β细胞功能恢复药物中的用途。
全文摘要
本发明涉及一种中药组合物、中药制剂及制备方法和用途，属于中药制剂技术领域。所述中药组合物由原料药黄芪、醋制延胡索、三七、赤芍、丹参、川芎、红花、苏木和鸡血藤制成；所述中药制剂包括活性成分和药学上可接受的载体。本发明的中药组合物和中药制剂具有能够抑制或延缓胰岛β细胞凋亡、促进胰岛β细胞功能恢复的作用。
文档编号A61P3/10GK101972316SQ20101029618
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月29日 优先权日2010年9月29日
发明者于世家, 冯会生, 吕锐, 李尧军, 潘英宏, 潘霖, 田桂芳, 赵长会, 郭振海 申请人:辽宁奥达制药有限公司
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