一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法
专利名称：一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物，尤其是一种以中药超微粉为原料的中药组合物，属中药领域。同时还涉及该中药组合物的制备方法和质量控制方法。
背景技术：
超微粉碎技术是近年来国际上发展起来的一项先进的粉碎技术。在粉碎过程中，药材受到强烈的正向挤压力和切向剪切力的作用，运用高速、高能量进行粉碎，细胞被挤压、剪切，细胞壁被撕裂、断开，细胞被破碎成碎片或被压破，所得到的粉末粒径一般达300目以上、中心粒径达15～35μm，细胞破壁率达95％以上，“破壁”的药粉其所含化学成分直接暴露出来，与现行中药的药粉(化学成分存在于完整的细胞壁内)相比，产生了“质”的变化，初步的药理实验已证实细胞级超细微粉能明显提高药效，在中药现代化方面有广泛应用。其原理目前初步认为细胞破壁后的超微粉末可以全成分保留其中的各种成分，这些成分之间形成油/水型或水/油型固态乳化物，细胞级超细微粉易被小肠吸着、停留时间长，利于吸收，同时直接暴露的化学成分及乳化态的全成分易于透膜吸收，大大提高了其生物利用度。
中药超微粉碎给中药剂型改革和中药现代化带来了一场革命，提高了细胞破壁率、比表面积、有效成分溶出度、生物利用度，能增强药理作用、减少用药量、节省药材和保护药材资源，同时还可改善气味、口感，提高药品质量。虽然目前该领域的研究比较多，但都停留在理论水平，该新技术在中药领域中的应用尤其是中药复方中的应用研究较少，能付诸实践者更少。
《中华人民共和国卫生部部颁标准》收载的中成药品种——伤科接骨片，由红花、土鳖虫、马钱子粉、没药(炙)、三七、海星(炙)、鸡骨(炙)、冰片、自然铜(煅)、乳香(炙)、甜瓜子十二味药组成(其中的没药(炙)即为炙没药、海星(炙)即为炙海星、鸡骨(炙)即为炙鸡骨、乳香(炙)即为炙乳香)，活血化瘀，消肿止痛，舒筋壮骨。用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症，已广泛应用于临床，有着较为理想的效果。但还存在如下不足
1、药物含量不精确，波动较大；2、药物技术含量低，药材服用量大，且方中药材价格较贵，给本品的普及应用带来困难。
3、朱砂为毒性药物，方中用量较大，易引起蓄积中毒，因此在遵循原方治则的基础上应考虑重组减量或不用。
如采用超微粉碎，可减少用药量，节省药材，对降低用药成本有重要意义。该研究是中药现代化的有益尝试，开辟了中成药制剂研究的新领域；因“伤科接骨片”方中乳香(制)、没药(制)为树脂类药材，三七、马钱子粉、红花、甜瓜子为植物药，土鳖虫、海星、鸡骨为动物药，冰片为脂溶性药物，朱砂、自然铜为矿物药，能较全面的反映中药的性质，因此选择该处方对研究超微粉碎在中药复方中的应用具有较好的借鉴价值和理论指导意义。
发明内容
结合已有的研究结果，本发明所要解决的技术问题是运用超微技术，设计一套新的工艺过程，使老药方产生新效果，以达到提高技术含量、减少服用量、节省药材、方便患者服用的目的。
根据基础研究的结果可以看出，由于超微粉达到了细胞破壁的程度，组织细胞中的各种化学物质的全部释放，必然带来了药用物质基础的改变；因而，与药材普通粉碎相比，超微粉应属于有质的变化的新的药用物质。这一点在发明人随后的动物实验中也得到证实。
此时，本发明的原料药为红花超微粉4～7份、土鳖虫超微粉17～23份、马钱子粉超微粉8～12份、炙没药超微粉1～3份、三七超微粉35～45份、炙海星超微粉8～12份、炙鸡骨超微粉17～23份、冰片超微粉1～2份、煅自然铜超微粉8～12份、炙乳香超微粉1～3份、甜瓜子超微粉1～3份。
优选后红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份。
需要再次指出的是，由于超微粉带来的药效的提高，使原处方中朱砂的作用在这里已无足轻重了，所以为了避免朱砂的毒副作用，发明人的上述处方中不含有朱砂。当然，我们也可以仍将朱砂粉列入到原料药中，但朱砂不能与其他药味一起超微粉碎，只能单独水飞处理，并以包衣的形式加以利用，此时的原料药为红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份、朱砂粉5份。
接下来发明人的思路是超微粉碎是细胞级的粉碎过程，化学成分间直接接触，易发生化学反应，因而要根据各药味的药性特点来分组粉碎；然后根据需要将超微粉加入适宜的辅料，制成所需剂型。
依据以上思路，发明人进行了分析研究，最终制定了如下技术方案将红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子一起粉碎，朱砂单独粉碎，两种超微粉以合适的方式相结合，制成所需剂型。
具体地讲可分为如下二种情况。
1)如果不含朱砂，则分二步a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的产品。
2)如果含有朱砂，则需以下几步a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.取朱砂水飞成极细粉，粒径小于50μm，制成包衣剂；c.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的半成品；再用步骤b制得的包衣剂包衣后，制成最终产品。
在以上二种情况中，步骤a中的粉碎方法又可以分为两种，即干法和湿法干法粉碎取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉再用气流粉碎、球磨粉碎、振动磨粉碎或超声粉碎法中的任一或几种方法的组合，制得中心粒径小于30μm的超微粉。
湿法粉碎取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉加0.5～3倍量适宜的基质分散均匀，再用振动磨粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉。
湿法粉碎中所说的基质可以是大豆油、麻油、花生油、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油、1，2-丙二醇、磷脂中的任一种或几种的混合物。
以上粉碎过程是达到本发明目的的关键所在，通过超微化粉碎，提高了药材的利用率，提高药效的同时也减小了药材用量，方便了患者。
粉碎完成后，就可以像做普通制剂一样，将超微粉加入适宜的辅料制成所需剂型了，如将超微粉中拌入淀粉，以90％的乙醇制粒后，装成胶囊。但有朱砂时的情况不同，研究发现，如果将朱砂粉与超微粉直接混合，易产生不良反应，但如果将朱砂粉制成包衣剂或用包结体包结起来，再与超微粉混合使用，就安全可靠了，所以此时的制剂形式是将超微粉加适量润湿剂、黏合剂制成丸剂，干燥后用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后压片，素片再用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后用朱砂粉包衣，包衣后的颗粒充填胶囊。
在研究本发明的制备方法过程中，为了控制生产过程和产品质量，发明人还制定了一套质量控制方法，该方法包含如下内容a、超微粉的显微研究取超微粉混匀，称取40mg，置50ml容量瓶中，加甘油醋酸试液至刻度，振摇使完全分散、混匀，取一滴置载玻片上，盖上盖玻片，装置观察。将显微镜视野放大到400倍，随机观察5个视野。每个视野下粒子个数不超过30个，5个视野中，大于75μm者，总计不超过30个，并不得有2个超过100μm。平行制作两个装置进行观察。
b、薄层色谱法对三七进行检查取本品制剂8～12g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c、薄层色谱法对乳香进行检查取本品制剂8～12g，研细，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
d、高效液相色谱法对马钱子中士的宁的含量进行检查色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。10∶90的乙腈-1％冰醋酸为流动相，检测波长254nm，柱温40℃。流速为1.0ml/min。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加流动相制成每1ml含45μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品制剂，研细，取2～4g，精密称定，置锥形瓶中，加氨水5ml，精密加氯仿50ml，称定重量，水浴回流提取60分钟，放冷，称重，用氯仿补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣用流动相定量转移至25ml量瓶中，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
e、滴定法对朱砂中硫化汞的含量进行测定取本品粉末约10g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硫酸50ml与硝酸钾5g，加热使溶解，放冷，加水50ml，并加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示剂2ml，用0.1mol/L的硫氰酸铵滴定液滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。
本发明药物制剂具有活血化瘀，消肿止痛，舒筋壮骨的功效。用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症。由于活血化瘀作用的存在，说明本发明药物制剂还具有治疗股骨头坏死的作用。为了证明本发明药物制剂在节约药材、提高药效方面的贡献，发明人根据其功能主治，与原伤科接骨片进行了对比药效学实验。
一、基本资料1、受试药物超微粉1号(不含朱砂粉)、超微粉2号(含朱砂粉)、伤科接骨http://www.eph连美罗中药厂有限公司生产)。
2、试验动物昆明种小鼠18～22g，雌雄兼用，Wistar大鼠，雌雄兼用，200～250g；均由山东医科大学实验动物中心提供。
3、试验仪器电子天平，北京赛多利斯仪器有限公司；热板仪，山东省医学科学院实验仪器研究所。
二、试验内容试验1小鼠的热板法试验调节恒温水浴热板温度为55±0.5℃，预热10min。取经筛选合格的小鼠随机分为6组，每组10只。分别为伤科接骨组、超微粉组和空白对照组，灌胃给药。将上述小鼠放入热板仪，测定不同时间段(30min、60min、90min、120min)的痛阈值。结果见下表表1 对小鼠痛阈值的影响
与空白对照组比较**P＜0.01，***P＜0.001。
试验结果表明，与空白对照组相比，伤科接骨组与超微粉组均能显著提高小鼠的痛阈值，且超微粉1/2剂量与伤科接骨组效果相当，起到减量应用的功效。
试验2对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响取试验小鼠，随机分组，分别为伤科接骨组、超微粉组和空白对照组，每组10只，用2％巴豆油按5mg/kg体重于左耳致炎，致炎后1小时，外敷给药。用药后3小时取左右相同部位耳片用电子天平称重，以两侧重量差表示肿胀程度。结果见下表
表2 对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响
与空白对照组比较*P＜0.05。
试验结果表明，超微粉1/2剂量组与伤科接骨片对巴豆油所致的耳肿胀有明显的抑制作用。
试验3止血试验取试验小鼠，随机分组，分别为伤科接骨组、本品制剂和空白对照组，每组12只。灌胃给药，连续给药3d。末次用药后2小时，距离尾尖2mm处断尾，观察出血时间。结果见下表试验结果表明，超微粉1/2剂量组与伤科接骨均有明显的止血效果。
试验4活血化瘀试验取试验小鼠，随机分组，用0.2％戊巴比妥钠ip30mg/kg麻醉，保持试验环境及所给药物恒温(30±0.5℃)，将麻醉小鼠放于观察台上，耳廓去毛，并垫耳托，使其平展以便于观察，在耳廓与耳托间滴加液体石蜡，将观察板置于多部位微循环观察系统显微镜下进行观察，并用计算机进行数据处理和显示，记录给药前小鼠耳中动脉第三分支微动脉、微静脉的血管直径及血流速度，作为正常指标，分别在耳廓涂以不同药物；10min后用棉试子轻擦去所涂药物，观察上述各项指标的变化情况。用药后血管直径及血液流速增加百分率计算公式为血管直径增加％＝(用药后血管直径-用药前血管直径)/用药前血液直径×100％；血管流速增加％＝(用药后血管流速-用药前血管流速)/用药前血液流速×100％。
结果见下表试验结果表明，超微粉组与伤科接骨对小鼠耳廓微动脉、微静脉均有明显的扩张作用，并使血管内血流速度明显增加，尤其以动脉扩张、动脉血流速增加显著，提示本品有较好的改善微循环的作用。即提示可以改善股骨头坏死区域的血循环，从而起到治疗的作用。试验中，超微粉1/2剂量组与伤科接骨组效果相当，证明了超微粉的明显的药理效果。
试验5小鼠急性毒性试验一日内给小鼠灌胃本品制剂85g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的145倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
试验6大鼠长期毒性试验取Wistar大鼠，试验前稳定7天，观察一般状况体重、进食、粪便、活动等情况均无异常，按体重随机分为四组，空白组与超微粉高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组30只，每笼5只，然后开始给药，按1ml/100g鼠重每天定时灌胃给药。每7天测一次体重并按体重变化调整给药量，连续给药45天，给药期间注意观察动物活动、毛色粪便、进食、体重变化等情况。每周称量一次体重，每周定食、定水，24小时后称剩余量，加入量与剩余量之差即为日食量、日饮水量。给药21天后，禁食不禁水12h，进行血液学、血生化学检验，每组各取20只动物处死进行病理解剖及病理组织学检查。其余大鼠做10天恢复期观察，复测上述指标。
连续给药21天，对大鼠的活动、行为、进食、饮水、毛色、粪尿等一般状况未见显著影响，且无一死亡，大鼠的血液学、血液生化学和重要脏器病理组织指指标均无显著改变，给药结束后经过10天恢复观察，未观察到其它的后遗和继发的毒性作用。提示超微粉制剂的安全、低毒。
由以上药效学试验结果，除证明其治疗作用外，还进一步说明其只需1/2处方量，即可达到甚至超过原处方的效果，说明该药用物质已发生了质的变化，是一种新的药用物质。
具体实施例方式以下通过具体的实施例进一步说明本发明的工艺过程实施例一处方红花 7g 土鳖虫 23g 马钱子粉12g没药(炙) 3g 三七45g 海星(炙)12g鸡骨(炙) 23g 冰片2g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 2g 甜瓜子 3g 朱砂7g
制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将朱砂粉与超微粉混合均匀，即得超微散剂。
实施例二处方红花 4g 土鳖虫 17g 马钱子粉8g没药(炙) 1g 三七35g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 17g 冰片1g 自然铜(煅) 8g乳香(炙) 1g 甜瓜子 1g 朱砂4g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过20目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加羧甲淀粉钠15g，并加淀粉适量，混匀，加水适量作润湿剂，混合均匀，合坨5分钟，制丸条、分粒与搓圆，干燥，取朱砂粉包衣、打光，分装，即得超微丸剂。
实施例三处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g 朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，取干颗粒用朱砂粉包衣，干燥，分装，即得超微颗粒剂。
实施例四处方红花 4g 土鳖虫 23g 马钱子粉11g没药(炙) 3g 三七42g 海星(炙)8g
鸡骨(炙) 18g 冰片1g自然铜(煅) 12g乳香(炙) 1g 甜瓜子 3g朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，压片，素片用朱砂粉包衣，干燥，分装，即得超微片剂。
实施例五处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g 朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，取干颗粒用朱砂粉包衣，干燥，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，充填胶囊，即得超微胶囊剂。
实施例六处方红花 7g 土鳖虫 23g 马钱子粉12g没药(炙) 3g 三七45g 海星(炙)12g鸡骨(炙) 23g 冰片2g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 2g 甜瓜子 3g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过100目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉，加0.5％的硬脂酸镁，混合均匀，分装，即得超微散剂。
实施例七处方红花 4g 土鳖虫 17g 马钱子粉8g没药(炙) 1g 三七35g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 17g 冰片1g 自然铜(煅) 8g乳香(炙) 1g 甜瓜子 1g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加羧甲淀粉钠15g，并加淀粉适量，混匀，加水适量作润湿剂，混合均匀，合坨5分钟，制丸条、分粒与搓圆，干燥，打光，分装，即得超微丸剂。
实施例八处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，干燥，分装，即得超微颗粒剂。
实施例九处方红花 4g 土鳖虫 23g 马钱子粉11g没药(炙) 3g 三七42g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 18g 冰片1g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 1g 甜瓜子 3g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，微晶纤维素40g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，压片，分装，即得超微片剂。
实施例十处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过100目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，充填胶囊，即得超微胶囊剂。
实施例十一处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，粗粉加1.5倍量的含10％1，2-丙二醇的聚乙二醇400溶液，用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉流膏；将超微粉流膏在40℃下充填软胶囊，即得超微软胶囊。
实施例十二处方红花 6g土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g甜瓜子 2g
制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，粗粉加入到熔融的1.5倍量的含40％聚乙二醇4000的聚乙二醇6000溶液中，并用基质调整总量，密闭下搅拌均匀，于60℃下用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉流膏，保持温度80℃，滴入液体石蜡中(1～5℃)，制成滴丸，即得超微滴丸。
实施例十三处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；另按聚丙烯酸钠∶明胶∶高岭土∶甘油＝4∶3∶6∶20比例取聚丙烯酸钠、明胶、高岭土、甘油，将明胶加适量水溶胀，于60℃水浴中加热溶解后，缓慢加入聚丙烯酸钠、高岭土、甘油进行搅拌，分散至均匀，恒温45℃，加入上述所得超微粉，搅拌1小时，然后均匀涂布于无纺布上，厚度约为1.5mm，面积4cm×5cm，并覆盖聚乙烯塑料膜，即得超微贴敷剂。
权利要求
1.一种中药组合物，其特征在于该中药组合物是由如下重量份的原料药制成的红花超微粉4～7份、土鳖虫超微粉17～23份、马钱子粉超微粉8～12份、炙没药超微粉1～3份、三七超微粉35～45份、炙海星超微粉8～12份、炙鸡骨超微粉17～23份、冰片超微粉1～2份、煅自然铜超微粉8～12份、炙乳香超微粉1～3份、甜瓜子超微粉1～3份。
2.如权利要求1所述中药组合物，其特征在于各原料药的优选配比为红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于原料药中还可以有朱砂水飞极细粉4～7份。
4.如权利要求3所述中药组合物，其特征在于该药物组合物可以制成如下剂型中的任一种丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、软胶囊剂和外用贴敷剂。
5.如权利要求4所述的中药组合物的制备方法，其特征在于1)不含朱砂粉时的工艺过程为a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的产品。2)含有朱砂粉时的工艺过程为a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.取朱砂水飞成极细粉，粒径小于50μm，制成包衣剂；c.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的半成品；再用步骤b制得的包衣剂包衣后，制成最终产品。
6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于步骤a中的具体的粉碎方法为取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉再用气流粉碎、球磨粉碎、振动磨粉碎或超声粉碎法中的任一种或几种方法的组合，制得中心粒径小于30μm的超微粉。
7.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于步骤a中的具体粉碎方法是取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉加0.5～3倍量适宜的基质分散均匀，再用振动磨粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉。
8.如权利要求7所述的中药组合物的制备方法，其特征在于超微粉时所用分散基质可以是如下的一种或几种的组合大豆油、麻油、花生油、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油、1，2-丙二醇、磷脂。
9.如权利要求4所述中药组合物的质量监控方法，其特征在于该方法包含如下内容中任一种或几种的组合a、超微粉的显微研究取超微粉混匀，称取40mg，置50ml容量瓶中，加甘油醋酸试液至刻度，振摇使完全分散、混匀，取一滴置载玻片上，盖上盖玻片，装置观察；将显微镜视野放大到400倍，随机观察5个视野；每个视野下粒子个数不超过30个，5个视野中，大于75μm者，总计不超过30个，并不得有2个超过100μm；平行制作两个装置进行观察；b、薄层色谱法对三七进行检查取本品制剂8～12g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；c、薄层色谱法对乳香进行检查取本品制剂8～12g，研细，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；d、高效液相色谱法对马钱子中士的宁的含量进行检查色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10∶90的乙腈-1％冰醋酸为流动相，检测波长254nm，柱温40℃；流速为1.0ml/min；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加流动相制成每1ml含45μg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取本品制剂，研细，取2～4g，精密称定，置锥形瓶中，加氨水5ml，精密加氯仿50ml，称定重量，水浴回流提取60分钟，放冷，称重，用氯仿补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣用流动相定量转移至25ml量瓶中，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；e、滴定法对朱砂中硫化汞的含量进行测定取本品粉末约10g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硫酸50ml与硝酸钾5g，加热使溶解，放冷，加水50ml，并加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示剂2ml，用0.1mol/L的硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。
10.如权利要求3所述的中药组合物在制备用于治疗跌打损伤、闪腰岔气、伤筋动骨，瘀血肿痛、损伤红肿等症和/或股骨头坏死的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物，该组合物是由红花、土鳖虫、马钱子、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子等药的超微粉为原料药，经常规工艺制成的制剂。该制剂比用原药材直接投料节省了药材量，且提高了疗效。本发明药物组合物对跌打损伤、闪腰岔气、伤筋动骨，淤血肿痛、损伤红肿等症及股骨头坏死都有明显的疗效。本发明同时还公开了该药物组合物的制备方法和质量控制方法。
文档编号A61K9/14GK1935192SQ20051020055
公开日2007年3月28日 申请日期2005年9月22日 优先权日2005年9月22日
发明者高淑英 申请人:北京凯瑞创新医药科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物，尤其是一种以中药超微粉为原料的中药组合物，属中药领域。同时还涉及该中药组合物的制备方法和质量控制方法。
背景技术：
超微粉碎技术是近年来国际上发展起来的一项先进的粉碎技术。在粉碎过程中，药材受到强烈的正向挤压力和切向剪切力的作用，运用高速、高能量进行粉碎，细胞被挤压、剪切，细胞壁被撕裂、断开，细胞被破碎成碎片或被压破，所得到的粉末粒径一般达300目以上、中心粒径达15～35μm，细胞破壁率达95％以上，“破壁”的药粉其所含化学成分直接暴露出来，与现行中药的药粉(化学成分存在于完整的细胞壁内)相比，产生了“质”的变化，初步的药理实验已证实细胞级超细微粉能明显提高药效，在中药现代化方面有广泛应用。其原理目前初步认为细胞破壁后的超微粉末可以全成分保留其中的各种成分，这些成分之间形成油/水型或水/油型固态乳化物，细胞级超细微粉易被小肠吸着、停留时间长，利于吸收，同时直接暴露的化学成分及乳化态的全成分易于透膜吸收，大大提高了其生物利用度。
中药超微粉碎给中药剂型改革和中药现代化带来了一场革命，提高了细胞破壁率、比表面积、有效成分溶出度、生物利用度，能增强药理作用、减少用药量、节省药材和保护药材资源，同时还可改善气味、口感，提高药品质量。虽然目前该领域的研究比较多，但都停留在理论水平，该新技术在中药领域中的应用尤其是中药复方中的应用研究较少，能付诸实践者更少。
《中华人民共和国卫生部部颁标准》收载的中成药品种——伤科接骨片，由红花、土鳖虫、马钱子粉、没药(炙)、三七、海星(炙)、鸡骨(炙)、冰片、自然铜(煅)、乳香(炙)、甜瓜子十二味药组成(其中的没药(炙)即为炙没药、海星(炙)即为炙海星、鸡骨(炙)即为炙鸡骨、乳香(炙)即为炙乳香)，活血化瘀，消肿止痛，舒筋壮骨。用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症，已广泛应用于临床，有着较为理想的效果。但还存在如下不足
1、药物含量不精确，波动较大；2、药物技术含量低，药材服用量大，且方中药材价格较贵，给本品的普及应用带来困难。
3、朱砂为毒性药物，方中用量较大，易引起蓄积中毒，因此在遵循原方治则的基础上应考虑重组减量或不用。
如采用超微粉碎，可减少用药量，节省药材，对降低用药成本有重要意义。该研究是中药现代化的有益尝试，开辟了中成药制剂研究的新领域；因“伤科接骨片”方中乳香(制)、没药(制)为树脂类药材，三七、马钱子粉、红花、甜瓜子为植物药，土鳖虫、海星、鸡骨为动物药，冰片为脂溶性药物，朱砂、自然铜为矿物药，能较全面的反映中药的性质，因此选择该处方对研究超微粉碎在中药复方中的应用具有较好的借鉴价值和理论指导意义。
发明内容
结合已有的研究结果，本发明所要解决的技术问题是运用超微技术，设计一套新的工艺过程，使老药方产生新效果，以达到提高技术含量、减少服用量、节省药材、方便患者服用的目的。
根据基础研究的结果可以看出，由于超微粉达到了细胞破壁的程度，组织细胞中的各种化学物质的全部释放，必然带来了药用物质基础的改变；因而，与药材普通粉碎相比，超微粉应属于有质的变化的新的药用物质。这一点在发明人随后的动物实验中也得到证实。
此时，本发明的原料药为红花超微粉4～7份、土鳖虫超微粉17～23份、马钱子粉超微粉8～12份、炙没药超微粉1～3份、三七超微粉35～45份、炙海星超微粉8～12份、炙鸡骨超微粉17～23份、冰片超微粉1～2份、煅自然铜超微粉8～12份、炙乳香超微粉1～3份、甜瓜子超微粉1～3份。
优选后红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份。
需要再次指出的是，由于超微粉带来的药效的提高，使原处方中朱砂的作用在这里已无足轻重了，所以为了避免朱砂的毒副作用，发明人的上述处方中不含有朱砂。当然，我们也可以仍将朱砂粉列入到原料药中，但朱砂不能与其他药味一起超微粉碎，只能单独水飞处理，并以包衣的形式加以利用，此时的原料药为红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份、朱砂粉5份。
接下来发明人的思路是超微粉碎是细胞级的粉碎过程，化学成分间直接接触，易发生化学反应，因而要根据各药味的药性特点来分组粉碎；然后根据需要将超微粉加入适宜的辅料，制成所需剂型。
依据以上思路，发明人进行了分析研究，最终制定了如下技术方案将红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子一起粉碎，朱砂单独粉碎，两种超微粉以合适的方式相结合，制成所需剂型。
具体地讲可分为如下二种情况。
1)如果不含朱砂，则分二步a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的产品。
2)如果含有朱砂，则需以下几步a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.取朱砂水飞成极细粉，粒径小于50μm，制成包衣剂；c.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的半成品；再用步骤b制得的包衣剂包衣后，制成最终产品。
在以上二种情况中，步骤a中的粉碎方法又可以分为两种，即干法和湿法干法粉碎取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉再用气流粉碎、球磨粉碎、振动磨粉碎或超声粉碎法中的任一或几种方法的组合，制得中心粒径小于30μm的超微粉。
湿法粉碎取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉加0.5～3倍量适宜的基质分散均匀，再用振动磨粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉。
湿法粉碎中所说的基质可以是大豆油、麻油、花生油、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油、1，2-丙二醇、磷脂中的任一种或几种的混合物。
以上粉碎过程是达到本发明目的的关键所在，通过超微化粉碎，提高了药材的利用率，提高药效的同时也减小了药材用量，方便了患者。
粉碎完成后，就可以像做普通制剂一样，将超微粉加入适宜的辅料制成所需剂型了，如将超微粉中拌入淀粉，以90％的乙醇制粒后，装成胶囊。但有朱砂时的情况不同，研究发现，如果将朱砂粉与超微粉直接混合，易产生不良反应，但如果将朱砂粉制成包衣剂或用包结体包结起来，再与超微粉混合使用，就安全可靠了，所以此时的制剂形式是将超微粉加适量润湿剂、黏合剂制成丸剂，干燥后用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后压片，素片再用朱砂粉包衣；或将超微粉加适量润湿剂制成颗粒，干燥后用朱砂粉包衣，包衣后的颗粒充填胶囊。
在研究本发明的制备方法过程中，为了控制生产过程和产品质量，发明人还制定了一套质量控制方法，该方法包含如下内容a、超微粉的显微研究取超微粉混匀，称取40mg，置50ml容量瓶中，加甘油醋酸试液至刻度，振摇使完全分散、混匀，取一滴置载玻片上，盖上盖玻片，装置观察。将显微镜视野放大到400倍，随机观察5个视野。每个视野下粒子个数不超过30个，5个视野中，大于75μm者，总计不超过30个，并不得有2个超过100μm。平行制作两个装置进行观察。
b、薄层色谱法对三七进行检查取本品制剂8～12g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c、薄层色谱法对乳香进行检查取本品制剂8～12g，研细，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
d、高效液相色谱法对马钱子中士的宁的含量进行检查色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。10∶90的乙腈-1％冰醋酸为流动相，检测波长254nm，柱温40℃。流速为1.0ml/min。理论板数按士的宁峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加流动相制成每1ml含45μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品制剂，研细，取2～4g，精密称定，置锥形瓶中，加氨水5ml，精密加氯仿50ml，称定重量，水浴回流提取60分钟，放冷，称重，用氯仿补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣用流动相定量转移至25ml量瓶中，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
e、滴定法对朱砂中硫化汞的含量进行测定取本品粉末约10g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硫酸50ml与硝酸钾5g，加热使溶解，放冷，加水50ml，并加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示剂2ml，用0.1mol/L的硫氰酸铵滴定液滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。
本发明药物制剂具有活血化瘀，消肿止痛，舒筋壮骨的功效。用于跌打损伤，闪腰岔气，伤筋动骨，瘀血肿痛，损伤红肿等症。由于活血化瘀作用的存在，说明本发明药物制剂还具有治疗股骨头坏死的作用。为了证明本发明药物制剂在节约药材、提高药效方面的贡献，发明人根据其功能主治，与原伤科接骨片进行了对比药效学实验。
一、基本资料1、受试药物超微粉1号(不含朱砂粉)、超微粉2号(含朱砂粉)、伤科接骨http://www.eph连美罗中药厂有限公司生产)。
2、试验动物昆明种小鼠18～22g，雌雄兼用，Wistar大鼠，雌雄兼用，200～250g；均由山东医科大学实验动物中心提供。
3、试验仪器电子天平，北京赛多利斯仪器有限公司；热板仪，山东省医学科学院实验仪器研究所。
二、试验内容试验1小鼠的热板法试验调节恒温水浴热板温度为55±0.5℃，预热10min。取经筛选合格的小鼠随机分为6组，每组10只。分别为伤科接骨组、超微粉组和空白对照组，灌胃给药。将上述小鼠放入热板仪，测定不同时间段(30min、60min、90min、120min)的痛阈值。结果见下表表1 对小鼠痛阈值的影响
与空白对照组比较**P＜0.01，***P＜0.001。
试验结果表明，与空白对照组相比，伤科接骨组与超微粉组均能显著提高小鼠的痛阈值，且超微粉1/2剂量与伤科接骨组效果相当，起到减量应用的功效。
试验2对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响取试验小鼠，随机分组，分别为伤科接骨组、超微粉组和空白对照组，每组10只，用2％巴豆油按5mg/kg体重于左耳致炎，致炎后1小时，外敷给药。用药后3小时取左右相同部位耳片用电子天平称重，以两侧重量差表示肿胀程度。结果见下表
表2 对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响
与空白对照组比较*P＜0.05。
试验结果表明，超微粉1/2剂量组与伤科接骨片对巴豆油所致的耳肿胀有明显的抑制作用。
试验3止血试验取试验小鼠，随机分组，分别为伤科接骨组、本品制剂和空白对照组，每组12只。灌胃给药，连续给药3d。末次用药后2小时，距离尾尖2mm处断尾，观察出血时间。结果见下表试验结果表明，超微粉1/2剂量组与伤科接骨均有明显的止血效果。
试验4活血化瘀试验取试验小鼠，随机分组，用0.2％戊巴比妥钠ip30mg/kg麻醉，保持试验环境及所给药物恒温(30±0.5℃)，将麻醉小鼠放于观察台上，耳廓去毛，并垫耳托，使其平展以便于观察，在耳廓与耳托间滴加液体石蜡，将观察板置于多部位微循环观察系统显微镜下进行观察，并用计算机进行数据处理和显示，记录给药前小鼠耳中动脉第三分支微动脉、微静脉的血管直径及血流速度，作为正常指标，分别在耳廓涂以不同药物；10min后用棉试子轻擦去所涂药物，观察上述各项指标的变化情况。用药后血管直径及血液流速增加百分率计算公式为血管直径增加％＝(用药后血管直径-用药前血管直径)/用药前血液直径×100％；血管流速增加％＝(用药后血管流速-用药前血管流速)/用药前血液流速×100％。
结果见下表试验结果表明，超微粉组与伤科接骨对小鼠耳廓微动脉、微静脉均有明显的扩张作用，并使血管内血流速度明显增加，尤其以动脉扩张、动脉血流速增加显著，提示本品有较好的改善微循环的作用。即提示可以改善股骨头坏死区域的血循环，从而起到治疗的作用。试验中，超微粉1/2剂量组与伤科接骨组效果相当，证明了超微粉的明显的药理效果。
试验5小鼠急性毒性试验一日内给小鼠灌胃本品制剂85g/kg，相当于临床70kg人每公斤体重日用量的145倍以上，连续观察七天，小鼠一般状况良好，无一死亡，说明本品低毒、安全。
试验6大鼠长期毒性试验取Wistar大鼠，试验前稳定7天，观察一般状况体重、进食、粪便、活动等情况均无异常，按体重随机分为四组，空白组与超微粉高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组30只，每笼5只，然后开始给药，按1ml/100g鼠重每天定时灌胃给药。每7天测一次体重并按体重变化调整给药量，连续给药45天，给药期间注意观察动物活动、毛色粪便、进食、体重变化等情况。每周称量一次体重，每周定食、定水，24小时后称剩余量，加入量与剩余量之差即为日食量、日饮水量。给药21天后，禁食不禁水12h，进行血液学、血生化学检验，每组各取20只动物处死进行病理解剖及病理组织学检查。其余大鼠做10天恢复期观察，复测上述指标。
连续给药21天，对大鼠的活动、行为、进食、饮水、毛色、粪尿等一般状况未见显著影响，且无一死亡，大鼠的血液学、血液生化学和重要脏器病理组织指指标均无显著改变，给药结束后经过10天恢复观察，未观察到其它的后遗和继发的毒性作用。提示超微粉制剂的安全、低毒。
由以上药效学试验结果，除证明其治疗作用外，还进一步说明其只需1/2处方量，即可达到甚至超过原处方的效果，说明该药用物质已发生了质的变化，是一种新的药用物质。
具体实施例方式以下通过具体的实施例进一步说明本发明的工艺过程实施例一处方红花 7g 土鳖虫 23g 马钱子粉12g没药(炙) 3g 三七45g 海星(炙)12g鸡骨(炙) 23g 冰片2g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 2g 甜瓜子 3g 朱砂7g
制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将朱砂粉与超微粉混合均匀，即得超微散剂。
实施例二处方红花 4g 土鳖虫 17g 马钱子粉8g没药(炙) 1g 三七35g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 17g 冰片1g 自然铜(煅) 8g乳香(炙) 1g 甜瓜子 1g 朱砂4g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过20目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加羧甲淀粉钠15g，并加淀粉适量，混匀，加水适量作润湿剂，混合均匀，合坨5分钟，制丸条、分粒与搓圆，干燥，取朱砂粉包衣、打光，分装，即得超微丸剂。
实施例三处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g 朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，取干颗粒用朱砂粉包衣，干燥，分装，即得超微颗粒剂。
实施例四处方红花 4g 土鳖虫 23g 马钱子粉11g没药(炙) 3g 三七42g 海星(炙)8g
鸡骨(炙) 18g 冰片1g自然铜(煅) 12g乳香(炙) 1g 甜瓜子 3g朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，压片，素片用朱砂粉包衣，干燥，分装，即得超微片剂。
实施例五处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g 朱砂5g制法取朱砂鉴定，水飞成极细粉，粒径小于50μm，备用；取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，取干颗粒用朱砂粉包衣，干燥，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，充填胶囊，即得超微胶囊剂。
实施例六处方红花 7g 土鳖虫 23g 马钱子粉12g没药(炙) 3g 三七45g 海星(炙)12g鸡骨(炙) 23g 冰片2g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 2g 甜瓜子 3g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过100目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉，加0.5％的硬脂酸镁，混合均匀，分装，即得超微散剂。
实施例七处方红花 4g 土鳖虫 17g 马钱子粉8g没药(炙) 1g 三七35g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 17g 冰片1g 自然铜(煅) 8g乳香(炙) 1g 甜瓜子 1g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过60目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加羧甲淀粉钠15g，并加淀粉适量，混匀，加水适量作润湿剂，混合均匀，合坨5分钟，制丸条、分粒与搓圆，干燥，打光，分装，即得超微丸剂。
实施例八处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，干燥，分装，即得超微颗粒剂。
实施例九处方红花 4g 土鳖虫 23g 马钱子粉11g没药(炙) 3g 三七42g 海星(炙)8g鸡骨(炙) 18g 冰片1g 自然铜(煅) 12g乳香(炙) 1g 甜瓜子 3g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，微晶纤维素40g，加水适量制粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，压片，分装，即得超微片剂。
实施例十处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过100目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；将超微粉加入羧甲淀粉钠10g，加水适量制粒，60℃以下干燥，加入硬脂酸镁2g，整粒，加淀粉适量调节总量，充填胶囊，即得超微胶囊剂。
实施例十一处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过40目筛，粗粉加1.5倍量的含10％1，2-丙二醇的聚乙二醇400溶液，用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉流膏；将超微粉流膏在40℃下充填软胶囊，即得超微软胶囊。
实施例十二处方红花 6g土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g甜瓜子 2g
制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过80目筛，粗粉加入到熔融的1.5倍量的含40％聚乙二醇4000的聚乙二醇6000溶液中，并用基质调整总量，密闭下搅拌均匀，于60℃下用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉流膏，保持温度80℃，滴入液体石蜡中(1～5℃)，制成滴丸，即得超微滴丸。
实施例十三处方红花 6g 土鳖虫 20g 马钱子粉10g没药(炙) 2g 三七40g 海星(炙)10g鸡骨(炙) 20g 冰片1g 自然铜(煅) 10g乳香(炙) 2g 甜瓜子 2g制法取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子鉴定，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10目筛，粗粉再用振动磨机粉碎，制得中心粒径小于30μm的超微粉；另按聚丙烯酸钠∶明胶∶高岭土∶甘油＝4∶3∶6∶20比例取聚丙烯酸钠、明胶、高岭土、甘油，将明胶加适量水溶胀，于60℃水浴中加热溶解后，缓慢加入聚丙烯酸钠、高岭土、甘油进行搅拌，分散至均匀，恒温45℃，加入上述所得超微粉，搅拌1小时，然后均匀涂布于无纺布上，厚度约为1.5mm，面积4cm×5cm，并覆盖聚乙烯塑料膜，即得超微贴敷剂。
权利要求
1.一种中药组合物，其特征在于该中药组合物是由如下重量份的原料药制成的红花超微粉4～7份、土鳖虫超微粉17～23份、马钱子粉超微粉8～12份、炙没药超微粉1～3份、三七超微粉35～45份、炙海星超微粉8～12份、炙鸡骨超微粉17～23份、冰片超微粉1～2份、煅自然铜超微粉8～12份、炙乳香超微粉1～3份、甜瓜子超微粉1～3份。
2.如权利要求1所述中药组合物，其特征在于各原料药的优选配比为红花超微粉6份、土鳖虫超微粉20份、马钱子粉超微粉10份、炙没药超微粉2份、三七超微粉40份、炙海星超微粉10份、炙鸡骨超微粉20份、冰片超微粉1份、煅自然铜超微粉10份、炙乳香超微粉2份、甜瓜子超微粉2份。
3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于原料药中还可以有朱砂水飞极细粉4～7份。
4.如权利要求3所述中药组合物，其特征在于该药物组合物可以制成如下剂型中的任一种丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、软胶囊剂和外用贴敷剂。
5.如权利要求4所述的中药组合物的制备方法，其特征在于1)不含朱砂粉时的工艺过程为a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的产品。2)含有朱砂粉时的工艺过程为a.取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子混合，粉碎，得药粉；药粉再超微粉碎，制得超微粉；b.取朱砂水飞成极细粉，粒径小于50μm，制成包衣剂；c.将步骤a制得的超微粉，加入药剂常规辅料，制成所需剂型的半成品；再用步骤b制得的包衣剂包衣后，制成最终产品。
6.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于步骤a中的具体的粉碎方法为取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉再用气流粉碎、球磨粉碎、振动磨粉碎或超声粉碎法中的任一种或几种方法的组合，制得中心粒径小于30μm的超微粉。
7.如权利要求5所述的中药组合物的制备方法，其特征在于步骤a中的具体粉碎方法是取红花、土鳖虫、马钱子粉、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子，干燥，混合，用普通粉碎机进行粉碎后过10～100目筛；药粉加0.5～3倍量适宜的基质分散均匀，再用振动磨粉碎，制得中心粒径小于25μm的超微粉。
8.如权利要求7所述的中药组合物的制备方法，其特征在于超微粉时所用分散基质可以是如下的一种或几种的组合大豆油、麻油、花生油、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、甘油、1，2-丙二醇、磷脂。
9.如权利要求4所述中药组合物的质量监控方法，其特征在于该方法包含如下内容中任一种或几种的组合a、超微粉的显微研究取超微粉混匀，称取40mg，置50ml容量瓶中，加甘油醋酸试液至刻度，振摇使完全分散、混匀，取一滴置载玻片上，盖上盖玻片，装置观察；将显微镜视野放大到400倍，随机观察5个视野；每个视野下粒子个数不超过30个，5个视野中，大于75μm者，总计不超过30个，并不得有2个超过100μm；平行制作两个装置进行观察；b、薄层色谱法对三七进行检查取本品制剂8～12g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1和三七皂苷R1，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以15∶40∶22∶10的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；c、薄层色谱法对乳香进行检查取本品制剂8～12g，研细，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取乳香对照药材1g，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；d、高效液相色谱法对马钱子中士的宁的含量进行检查色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10∶90的乙腈-1％冰醋酸为流动相，检测波长254nm，柱温40℃；流速为1.0ml/min；理论板数按士的宁峰计算应不低于2000；对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品适量，加流动相制成每1ml含45μg的溶液，即得；供试品溶液的制备 取本品制剂，研细，取2～4g，精密称定，置锥形瓶中，加氨水5ml，精密加氯仿50ml，称定重量，水浴回流提取60分钟，放冷，称重，用氯仿补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣用流动相定量转移至25ml量瓶中，摇匀，以0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；测定法 分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；e、滴定法对朱砂中硫化汞的含量进行测定取本品粉末约10g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硫酸50ml与硝酸钾5g，加热使溶解，放冷，加水50ml，并加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示剂2ml，用0.1mol/L的硫氰酸铵滴定液滴定；每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。
10.如权利要求3所述的中药组合物在制备用于治疗跌打损伤、闪腰岔气、伤筋动骨，瘀血肿痛、损伤红肿等症和/或股骨头坏死的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物，该组合物是由红花、土鳖虫、马钱子、炙没药、三七、炙海星、炙鸡骨、冰片、煅自然铜、炙乳香、甜瓜子等药的超微粉为原料药，经常规工艺制成的制剂。该制剂比用原药材直接投料节省了药材量，且提高了疗效。本发明药物组合物对跌打损伤、闪腰岔气、伤筋动骨，淤血肿痛、损伤红肿等症及股骨头坏死都有明显的疗效。本发明同时还公开了该药物组合物的制备方法和质量控制方法。
文档编号A61K9/14GK1935192SQ20051020055
公开日2007年3月28日 申请日期2005年9月22日 优先权日2005年9月22日
发明者高淑英 申请人:北京凯瑞创新医药科技有限公司
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