一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法
专利名称：一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法。
背景技术：
明党参为伞形科植物明党参Changium smyrnioides Wolff的干燥根。用于“补 肺气，通下行”(《本草从新》)；“养血生津，清热解毒”(《本草求原》)；“温脾，化痰湿，平 肝风”(《饮片新参》)。明党参多糖和氨基酸为其活性成分，在药效上发挥着重要的作用。 研究表明，明党参及其多糖具有一定的扶正固本、增强免疫和适应原样作用，在防治癌症和 感染等疾病上有潜在的应用价值。明党参可以增强剂调节免疫功能，具有滋补强壮作用，并 能降血脂，保肝利胆，镇咳祛痰。明党参水煎液及多糖可显著延长氰化钾中毒小鼠的生存时 间，能对抗化学性缺氧，延长小鼠高温环境存活时间，提高抗高温能力。灌服明党参水提液 及明党参根中提得的天门冬酰胺均可极显著增加小鼠气管酚红的排泄量，可明显促进蛙纤 毛运动，并可极显著抑制氨水喷雾引起的咳嗽次数，对2%氯化乙酰胆碱和0.2%磷酸组织 胺引喘的豚鼠哮喘有显著的抑制作用。明党参多糖及水体也均能增加正常小鼠胸腺和脾脏 的重量。可使小鼠碳粒廓清速率明显提高，促进网状内皮系统的吞噬功能。还可真高正常小 鼠白细胞中暑及淋巴细胞数，并可对抗氢化可的松所致白细胞总数和淋巴细胞数减少。增 加外周血ANAE+淋巴细胞阳性百分率。由此可见明党参具有广阔的开发前景，因此，对明党 参多糖和氨基酸进行提取分离纯化具有重要意义。当前提取、纯化明党参多糖技术，主要由以下几种1)95%乙醇提取，残渣水提，减 压浓缩水煎液，冷藏、离心，沉淀物经乙醇、丙酮、乙醚处理后真空干燥，水溶，三氯醋酸除蛋 白，透析，透析液减压浓缩、离心、DEAE-纤维素柱层析等(王亚淑等发表的“分析测定明党 参多糖的分离、纯化及其理化性质”)。2)水提醇沉，经酶法和Sevag法脱淀粉、果胶和蛋白 质，透析后上S印har0Se-4B柱分离(张林维，吴东儒，赵帜平，等.药用植物明党参多糖的 研究[J].安徽大学学报(自然科学版)，1996，20(3) =95-100. ) 0 3)石油醚、95%乙醇回 流提取，残渣再用水提，Sevage法除蛋白，加醇至含醇量为80%，冷藏(杜清，秦民坚，郭巧 生.明党参多糖提取工艺研究[J].现代中药研究与实践，2005，19 (4) :51-53.)。上述方法 存在步骤复杂且成本高，制备量小，多糖活性低等问题。由于上述提取纯化技术所存在的问 题，因此需要进行改进。
发明内容
1、发明目的本发明的目的就在于提供一种适用于工业生产、综合提取明党参多 糖和氨基酸的方法。2、技术方案一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将明党参根洗净，切薄片，用8-12倍热水浸泡，加热煮沸提取2-3小时， 过滤，保留滤液；残渣加入4-8倍量的0. 1-0. 5mol/LHCl溶液，于30_50°C恒温提取0. 5-1小
3时，过滤，重复上述操作1-2次，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过阳离子交换树脂，先用去离子水洗脱，将洗脱 液A加入70-95%食用乙醇，滤出沉淀，加丙酮洗涤，干燥即得明党参多糖；再用氨水洗脱， 收集洗脱液B，备用；(3)乳状液的制备按膜溶剂食用油表面活性剂Span 80 磷酸酯载体的体积 比=(30-50) (2-10) (2-8)进行混合，在混合物中按(1-5) 1体积比加入浓度为 0. 2-0. 5mol/L的盐酸溶液，在5000_15000r/min搅拌2_5min，制得稳定的W/0型乳状液；(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至2-5，与乳状液按照一定的体积比 (10 1-10 4)加入提取器中，在100-500r/min低速搅拌提取5-15min，将乳状液转入分 液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，将所得水相真空冷冻干燥即得 明党参氨基酸。步骤(1)中重复操作热水与原药材的质量比为2 1-4 1;HC1溶液加入量为
4-6倍残渣质量。步骤(2)中洗脱剂为去离子水洗脱体积为3-6柱体积，洗脱速度为0. 8-4BV/h。步骤(2)中氨水浓度为0. 5-5mol/L.，洗脱至无氨基酸反应为止。综上所述，本发明具有条件温和、多糖损失少、氨基酸活性高、工序少，制备量大， 适用于医药、食品等领域。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明。实施例1 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取10g加入120ml热水浸泡 0. 5h，加热煮沸提取2h，过滤，保留滤液，残渣加入5倍量0. 5mol/LHCl,于40°C恒温提取 lh，过滤，滤渣再加入3倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入3倍量0. 5mol/LHCl,于 40°C恒温提取0. 5h，过滤，合并滤液。(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用5mol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入95%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品1. 03g,明党参多糖质量分数为80. 7%，收率约占药材干重的10. 3%。(4)乳状液的制备取膜溶剂食用油18mL，表面活性剂4mL，磷酸酯载体2. 5mL,将 三者混合，取20mL此混合物按3 1的体积比加入7mL0. 2mol/L的盐酸溶液，在8000r/min 搅拌3min，即得稳定的W/0型乳状液。(5)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 3加入提取器中，在220r/min的低速下搅拌提取8min，将乳状液转入 分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即得 明党参氨基酸0. 8mg。实施例2 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取2kg加入20L热水浸泡lh，加 热煮沸提取2. 5h，过滤，保留滤液，残渣加入6倍量0. 2mol/LHCl，于40°C恒温提取lh，过滤，滤渣再加入4倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入3倍量0. 2mol/LHCl，于40°C恒温 提取0. 5h，过滤，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用2mol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入70%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品246g，明党参多糖质量分数为85. 7%，收率约占药材干重的12. 3%。(3)乳状液的制备取膜溶剂食用油2. 5L，表面活性剂0. 7L，磷酸酯载体0. 8L，将 三者混合，此混合物按2 1的体积比加入0. 2mol/L的盐酸溶液，在9000r/min搅拌5min， 即得稳定的W/0型乳状液。(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 1加入提取器中，在300r/min的低速下搅拌提取15min，将乳状液转 入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即 得明党参氨基酸168mg。实施例3 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取5kg加入40L热水浸泡40min， 加热煮沸提取3h，过滤，保留滤液，残渣加入8倍量0. 4mol/LHCl，于40°C恒温提取lh，过 滤，滤渣再加入3倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入4倍量0. 4mol/LHCl，于40°C恒温 提取0. 5h，过滤，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用lmol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入85%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品572g，明党参多糖质量分数为83. 7%，收率约占药材干重的11. 4%。(4)乳状液的制备取膜溶剂食用油43L，表面活性剂3. 5L，磷酸酯载体5. 5L，将三 者混合，此混合物按4 1的体积比加入0. 5mol/L的盐酸溶液，在lOOOOr/min搅拌4min， 即得稳定的W/0型乳状液。(5)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 4加入提取器中，在280r/min的低速下搅拌提取lOmin，将乳状液转 入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即 得明党参氨基酸420mg。
权利要求
一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将明党参根洗净，切薄片，用8 12倍热水浸泡，加热煮沸提取2 3小时，过滤，保留滤液；残渣加入4 8倍量的0.1 0.5mol/LHCl溶液，于30 50℃恒温提取0.5 1小时，过滤，重复上述操作1 2次，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过阳离子交换树脂，先用去离子水洗脱，将洗脱液A加入70 95％食用乙醇，滤出沉淀，加丙酮洗涤，干燥即得明党参多糖；再用氨水洗脱，收集洗脱液B，备用；(3)乳状液的制备按膜溶剂食用油∶表面活性剂Span 80∶磷酸酯载体的体积比＝(30 50)∶(2 10)∶(2 8)进行混合，在混合物中按(1 5)∶1体积比加入浓度为0.2 0.5mol/L的盐酸溶液，在5000 15000r/min搅拌2 5min，制得稳定的W/O型乳状液；(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至2 5，与乳状液按照一定的体积比(10∶1 10∶4)加入提取器中，在100 500r/min低速搅拌提取5 15min，将乳状液转入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，将所得水相真空冷冻干燥即得明党参氨基酸。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中重复操作中热水与原药材的质量 比为2 1-4 1 ;HC1溶液加入量为4-6倍残渣质量。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中洗脱剂为去离子水洗脱体积为 3-6柱体积，洗脱速度为0. 8-4BV/h。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中氨水浓度为0.5-5mol/L.，洗脱至 无氨基酸反应为止。
全文摘要
本发明涉及一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，包括用热水和酸水提取，过滤后，上阳离子交换树脂柱，收集不被树脂吸附的流出液，流出液加入高浓度乙醇，滤取沉淀，丙酮洗涤，冷冻干燥即得明党参多糖；氨水洗脱树脂，调pH，乳状液膜分离，有机纳滤膜浓缩、干燥即得明党参氨基酸。该方法条件温和、多糖损失少、氨基酸活性高、工艺路径短、节约能源，适用于大规模生产。
文档编号A61P39/00GK101955547SQ20101018294
公开日2011年1月26日 申请日期2010年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法。
背景技术：
明党参为伞形科植物明党参Changium smyrnioides Wolff的干燥根。用于“补 肺气，通下行”(《本草从新》)；“养血生津，清热解毒”(《本草求原》)；“温脾，化痰湿，平 肝风”(《饮片新参》)。明党参多糖和氨基酸为其活性成分，在药效上发挥着重要的作用。 研究表明，明党参及其多糖具有一定的扶正固本、增强免疫和适应原样作用，在防治癌症和 感染等疾病上有潜在的应用价值。明党参可以增强剂调节免疫功能，具有滋补强壮作用，并 能降血脂，保肝利胆，镇咳祛痰。明党参水煎液及多糖可显著延长氰化钾中毒小鼠的生存时 间，能对抗化学性缺氧，延长小鼠高温环境存活时间，提高抗高温能力。灌服明党参水提液 及明党参根中提得的天门冬酰胺均可极显著增加小鼠气管酚红的排泄量，可明显促进蛙纤 毛运动，并可极显著抑制氨水喷雾引起的咳嗽次数，对2%氯化乙酰胆碱和0.2%磷酸组织 胺引喘的豚鼠哮喘有显著的抑制作用。明党参多糖及水体也均能增加正常小鼠胸腺和脾脏 的重量。可使小鼠碳粒廓清速率明显提高，促进网状内皮系统的吞噬功能。还可真高正常小 鼠白细胞中暑及淋巴细胞数，并可对抗氢化可的松所致白细胞总数和淋巴细胞数减少。增 加外周血ANAE+淋巴细胞阳性百分率。由此可见明党参具有广阔的开发前景，因此，对明党 参多糖和氨基酸进行提取分离纯化具有重要意义。当前提取、纯化明党参多糖技术，主要由以下几种1)95%乙醇提取，残渣水提，减 压浓缩水煎液，冷藏、离心，沉淀物经乙醇、丙酮、乙醚处理后真空干燥，水溶，三氯醋酸除蛋 白，透析，透析液减压浓缩、离心、DEAE-纤维素柱层析等(王亚淑等发表的“分析测定明党 参多糖的分离、纯化及其理化性质”)。2)水提醇沉，经酶法和Sevag法脱淀粉、果胶和蛋白 质，透析后上S印har0Se-4B柱分离(张林维，吴东儒，赵帜平，等.药用植物明党参多糖的 研究[J].安徽大学学报(自然科学版)，1996，20(3) =95-100. ) 0 3)石油醚、95%乙醇回 流提取，残渣再用水提，Sevage法除蛋白，加醇至含醇量为80%，冷藏(杜清，秦民坚，郭巧 生.明党参多糖提取工艺研究[J].现代中药研究与实践，2005，19 (4) :51-53.)。上述方法 存在步骤复杂且成本高，制备量小，多糖活性低等问题。由于上述提取纯化技术所存在的问 题，因此需要进行改进。
发明内容
1、发明目的本发明的目的就在于提供一种适用于工业生产、综合提取明党参多 糖和氨基酸的方法。2、技术方案一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将明党参根洗净，切薄片，用8-12倍热水浸泡，加热煮沸提取2-3小时， 过滤，保留滤液；残渣加入4-8倍量的0. 1-0. 5mol/LHCl溶液，于30_50°C恒温提取0. 5-1小
3时，过滤，重复上述操作1-2次，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过阳离子交换树脂，先用去离子水洗脱，将洗脱 液A加入70-95%食用乙醇，滤出沉淀，加丙酮洗涤，干燥即得明党参多糖；再用氨水洗脱， 收集洗脱液B，备用；(3)乳状液的制备按膜溶剂食用油表面活性剂Span 80 磷酸酯载体的体积 比=(30-50) (2-10) (2-8)进行混合，在混合物中按(1-5) 1体积比加入浓度为 0. 2-0. 5mol/L的盐酸溶液，在5000_15000r/min搅拌2_5min，制得稳定的W/0型乳状液；(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至2-5，与乳状液按照一定的体积比 (10 1-10 4)加入提取器中，在100-500r/min低速搅拌提取5-15min，将乳状液转入分 液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，将所得水相真空冷冻干燥即得 明党参氨基酸。步骤(1)中重复操作热水与原药材的质量比为2 1-4 1;HC1溶液加入量为
4-6倍残渣质量。步骤(2)中洗脱剂为去离子水洗脱体积为3-6柱体积，洗脱速度为0. 8-4BV/h。步骤(2)中氨水浓度为0. 5-5mol/L.，洗脱至无氨基酸反应为止。综上所述，本发明具有条件温和、多糖损失少、氨基酸活性高、工序少，制备量大， 适用于医药、食品等领域。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明。实施例1 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取10g加入120ml热水浸泡 0. 5h，加热煮沸提取2h，过滤，保留滤液，残渣加入5倍量0. 5mol/LHCl,于40°C恒温提取 lh，过滤，滤渣再加入3倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入3倍量0. 5mol/LHCl,于 40°C恒温提取0. 5h，过滤，合并滤液。(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用5mol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入95%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品1. 03g,明党参多糖质量分数为80. 7%，收率约占药材干重的10. 3%。(4)乳状液的制备取膜溶剂食用油18mL，表面活性剂4mL，磷酸酯载体2. 5mL,将 三者混合，取20mL此混合物按3 1的体积比加入7mL0. 2mol/L的盐酸溶液，在8000r/min 搅拌3min，即得稳定的W/0型乳状液。(5)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 3加入提取器中，在220r/min的低速下搅拌提取8min，将乳状液转入 分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即得 明党参氨基酸0. 8mg。实施例2 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取2kg加入20L热水浸泡lh，加 热煮沸提取2. 5h，过滤，保留滤液，残渣加入6倍量0. 2mol/LHCl，于40°C恒温提取lh，过滤，滤渣再加入4倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入3倍量0. 2mol/LHCl，于40°C恒温 提取0. 5h，过滤，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用2mol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入70%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品246g，明党参多糖质量分数为85. 7%，收率约占药材干重的12. 3%。(3)乳状液的制备取膜溶剂食用油2. 5L，表面活性剂0. 7L，磷酸酯载体0. 8L，将 三者混合，此混合物按2 1的体积比加入0. 2mol/L的盐酸溶液，在9000r/min搅拌5min， 即得稳定的W/0型乳状液。(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 1加入提取器中，在300r/min的低速下搅拌提取15min，将乳状液转 入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即 得明党参氨基酸168mg。实施例3 (1)明党参提取液的制备将明党参根切薄片，称取5kg加入40L热水浸泡40min， 加热煮沸提取3h，过滤，保留滤液，残渣加入8倍量0. 4mol/LHCl，于40°C恒温提取lh，过 滤，滤渣再加入3倍体积热水微沸提取lh，过滤，滤渣加入4倍量0. 4mol/LHCl，于40°C恒温 提取0. 5h，过滤，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过D85大孔弱酸性阳离子交换树脂柱，先用去离 子水洗脱，得洗脱液A，再用lmol/L氨水洗脱，得洗脱液B。(3)多糖的纯化将洗脱液A加入85%乙醇，滤取沉淀，用丙酮洗涤，喷雾干燥即得 明党参多糖样品572g，明党参多糖质量分数为83. 7%，收率约占药材干重的11. 4%。(4)乳状液的制备取膜溶剂食用油43L，表面活性剂3. 5L，磷酸酯载体5. 5L，将三 者混合，此混合物按4 1的体积比加入0. 5mol/L的盐酸溶液，在lOOOOr/min搅拌4min， 即得稳定的W/0型乳状液。(5)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至3，将pH = 3的氨基酸粗提液与乳状液按 照乳水体积比为10 4加入提取器中，在280r/min的低速下搅拌提取lOmin，将乳状液转 入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，所得水相真空冷冻干燥即 得明党参氨基酸420mg。
权利要求
一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，其特征在于包括以下步骤(1)提取将明党参根洗净，切薄片，用8 12倍热水浸泡，加热煮沸提取2 3小时，过滤，保留滤液；残渣加入4 8倍量的0.1 0.5mol/LHCl溶液，于30 50℃恒温提取0.5 1小时，过滤，重复上述操作1 2次，合并滤液；(2)离子树脂分离将上述滤液通过阳离子交换树脂，先用去离子水洗脱，将洗脱液A加入70 95％食用乙醇，滤出沉淀，加丙酮洗涤，干燥即得明党参多糖；再用氨水洗脱，收集洗脱液B，备用；(3)乳状液的制备按膜溶剂食用油∶表面活性剂Span 80∶磷酸酯载体的体积比＝(30 50)∶(2 10)∶(2 8)进行混合，在混合物中按(1 5)∶1体积比加入浓度为0.2 0.5mol/L的盐酸溶液，在5000 15000r/min搅拌2 5min，制得稳定的W/O型乳状液；(4)氨基酸的纯化将洗脱液B调pH至2 5，与乳状液按照一定的体积比(10∶1 10∶4)加入提取器中，在100 500r/min低速搅拌提取5 15min，将乳状液转入分液漏斗中静置分层，分出乳状液，水浴加热破乳后分出油层，将所得水相真空冷冻干燥即得明党参氨基酸。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中重复操作中热水与原药材的质量 比为2 1-4 1 ;HC1溶液加入量为4-6倍残渣质量。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中洗脱剂为去离子水洗脱体积为 3-6柱体积，洗脱速度为0. 8-4BV/h。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中氨水浓度为0.5-5mol/L.，洗脱至 无氨基酸反应为止。
全文摘要
本发明涉及一种综合提取明党参多糖和氨基酸的方法，包括用热水和酸水提取，过滤后，上阳离子交换树脂柱，收集不被树脂吸附的流出液，流出液加入高浓度乙醇，滤取沉淀，丙酮洗涤，冷冻干燥即得明党参多糖；氨水洗脱树脂，调pH，乳状液膜分离，有机纳滤膜浓缩、干燥即得明党参氨基酸。该方法条件温和、多糖损失少、氨基酸活性高、工艺路径短、节约能源，适用于大规模生产。
文档编号A61P39/00GK101955547SQ20101018294
公开日2011年1月26日 申请日期2010年5月26日 优先权日2010年5月26日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司
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