一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法
专利名称：一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
野菊花为菊科多年生草本植物野菊等的头状花序，别名苦薏。性味苦、辛，微寒，归肺、肝经。功能清热解毒，善治痈肿、疔毒、咽喉肿痛、风火赤眼、皮肤瘙痒等病证，同时又有很好的降压作用，可用于高血压病的辅助治疗。《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒。主妇人腹内宿血，解天行火毒丹疔。洗疮疥，又能去风杀虫”。野菊花中所含的绿原酸、挥发油和黄酮类化合物是其发挥药效的主要有效成分。已上市的制剂有野菊花颗粒、野菊花栓剂和野菊花注射液(WS-11041(ZD-1041)-2002)，其中注射液有清热解毒功效，用于外感热病、目赤肿痛、咽喉疼痛、上呼吸道感染、急性扁桃体炎属热毒上功者。野菊花注射液由于含有绿原酸及挥发油类成分，产品质量不稳定，对保存的要求较高，保存不当药液会由于氧化出现浑浊、沉淀、变色等情况；注射液质量标准中只对绿原酸的含量进行了测定，不能反映野菊花另一类活性成分黄酮类化合物的含量情况；同时注射液由于注射液制备工艺中采用了两步醇沉法，在醇沉过程中有效成分损失大；注射液对稳定性要求高，在携带、储藏、运输时容易破碎，也带来许多麻烦。
专利(CN1014611B)公开了一种野菊花香料浸膏的制备方法，浸膏主要含有油类成分；专利(申请号01100043)公开了一种纳米野菊花制剂药物及其制备方法，其特征是用纳米野菊花中药饮片制备药物制剂。。
在资料检索中未发现其它有关野菊花冻干粉针剂的报道。
发明内容
本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、质量稳定、方便使用的野菊花冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法(1)原料药的处方为野菊花。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6-8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20-1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，先用2-4倍量柱体积40％-50％乙醇洗脱后，再用3-5倍柱体积60％-80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
在野菊花冻干粉针剂的制备中，采用水蒸气蒸馏法提取野菊花中的挥发油后，再用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)进行包合。HP-β-CD为水溶性的包合物，用其包合的挥发油制成粉针剂溶解性好，注射时易吸收，生物利用度高，患者痛感小，易于被患者愉快的接受；而且用HP-β-CD对挥发油进行包合，使其在制备、贮藏、运输的过程中不易被空气氧化而变质，增加了挥发油的稳定性，提高了疗效。野菊花水提液中含有大量的有效成分黄酮类化合物及绿原酸，我们采用经典的水提醇沉法在除去部分杂质后，又用大孔吸附树脂对绿原酸和总黄酮进行了分离纯化，洗脱时先用40％-50％乙醇洗脱，使绿原酸和部分黄酮被洗脱，再用60-80％乙醇洗脱，使得大部分黄酮类成分被洗脱。经纯化后的野菊花提取物中主要有效成分总黄酮有效部位的含量大于50％，绿原酸含量大于0.6％。同时，冻干后制剂中的不稳定成分绿原酸和挥发油由于挥发油被包合互相隔离，绿原酸和挥发油的相互影响减少，且药物成分以固体状态存在，也提高了制剂的稳定性。
以上制备工艺中大孔树脂洗脱时，第一次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度优选优选为44-46％。第二次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度优选为68-72％。
二、含量测定分析1、野菊花制剂中总黄酮的含量测定1.1仪器与试药 日本岛津UV-3000A紫外分光光度计。野菊花注射液(雅安三九药业有限公司)；本发明野菊花冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠试剂均为分析纯，水为三蒸水(自制)。
1.2对照品溶液配制 精密称取芦丁对照品100mg，置50ml量瓶中，加入甲醇30ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。
1.3标准曲线制备 精密吸取上述对照品溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，分别加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min后分别加1％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，再分别加4％氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，照分光光度法在在500nm处测定吸收值A，以吸收值A对浓度进行回归计算，回归方程为Y＝0.124x-0.0034，r＝0.998。
1.4供试品溶液的制备 取本品内容物，精密称定，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心(12000rpm)10min，取上清液过滤，取续滤液，即得。1.5总黄酮的测定分别精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，照标准曲线方法进行测定，显色，在500nm波长处处测定A值，另精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在500nm波长处处测定A值，取两次吸收度差值，按回归方程计算总黄酮含量。结果见表1。
表1 制剂中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定含量(mg/支)批号 野菊花注射液 本发明野菊花冻干粉针剂1 36.0 46.22 35.8 44.03 33.0 48.42、野菊花制剂中绿原酸的含量测定参照野菊花注射液(WS-110419(ZD-1041)-2002)质量标准中绿原酸的含量测定方法进行测定，结果见表2表2 制剂中绿原酸含量测定含量(mg/支)批号 野菊花注射液 本发明野菊花冻干粉针剂1 0.24 0.562 0.22 0.573 0.21 0.51以上含量测定结果说明，本发明的野菊花冻干粉针剂中的总黄酮和绿原酸含量明显高于野菊花注射液(WS-11041(ZD-1041)-2002)的总黄酮和绿原酸含量。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
3、提取物中总黄酮和绿原酸的含量测定测定仪器、试药及方法同上。本发明野菊花提取物按本发明的制备方法所得；野菊花注射液提取物(按照(WS-11041(ZD-1041)-2002)中的制法所得)；结果见表3和表4。
表3 提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定含量(％)批次野菊花注射液提取物本发明野菊花提取物1 36.5 57.82 35.8 55.03 33.9 60.5表4 提取物中绿原酸含量测定含量(％)批次野菊花注射液提取物本发明野菊花提取物1 0.24 0.712 0.22 0.713 0.22 0.64以上含量测定结果说明，本发明的制备方法得到的提取物中的有效成分总黄酮和绿原酸含量明显高于野菊花注射液提取物(按照(WS-11041(ZD-1041)-2002)中的制法所得)中的总黄酮和绿原酸含量。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
四、药理实施例试药；生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)野菊花注射液(雅安三九药业有限公司)本发明野菊花冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)。
动物昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
细菌肺炎链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌及福氏志贺菌由北京中医药大学提供。
病毒细胞流行性感冒病毒A3/汉防/359/95(H3N2)引自国家流感中心。
1.抑菌试验实验方法将肺炎链球菌(1010个/ml)、大肠埃希菌(105个/ml)、金黄色葡萄球菌(105个/ml)、绿脓假单胞菌(105个/ml)及福氏志贺菌(105个/ml)，分别涂布于厚约6mm的药皿平板上，然后在其中打成直径约6mm的孔若干。加满野菊花冻干粉溶液和注射液，37℃培养24小时，观察抑菌圈大小，结果见表5。
表5 抑菌实验结果野菊花注射液本发明野菊花冻干粉细菌 (mm) (mm)肺炎链球菌(1010个/ml)9 15大肠埃希菌(105个/ml) 7 13金黄色葡萄球菌(105个/ml) 7 14绿脓假单胞菌(105个/ml) 7 13福氏志贺菌(105个/ml) 8 15本发明野菊花冻干粉针剂和野菊花注射液均能对以上细菌形成一定直径的抑菌圈，显示有较强的抑菌作用，但本发明野菊花冻干粉针剂的抑菌作用明显比野菊花注射液强，说明本发明野菊花冻干粉针剂的药理作用强于野菊花注射液。
2.对小白鼠鼻内接种流行性感冒病毒A3毒株所致死亡率的影响实验方法取小白鼠50只，随机分组，每组10只，按60g/kg剂量腹腔注射野菊花冻干粉，每天1次，连续7d，同时以生理盐水、野菊花注射液做平行对照，于第7天给药后2h，用流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种0.2ml/只，以小白鼠死亡为指标，观察48h，记录各组动物死亡数，相同方法重复三次，结果见表6表6 对流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种小鼠死亡率的影响组别 死亡数/总数 死亡率 P值23/30 76.7＜0.01生理盐水5/30 16.7＜0.05
野菊花注射液 0/30 0本发明野菊花冻干粉本发明野菊花冻干粉针剂和野菊花注射液均能显著降低流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种所致小鼠死亡率，呈显著抗病毒能力，但本发明野菊花冻干粉针剂的抗病毒作用明显比野菊花注射液强，说明本发明野菊花冻干粉针剂的药理作用强于野菊花注射液。
六、制备实施例实施例1(1)原料药的处方为野菊花1000g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加7倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.22的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用4倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇和葡聚糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例2
(1)原料药的处方为野菊花800g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达60％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，先用2倍量柱体积40％乙醇洗脱后，再用3倍柱体积60％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例3(1)原料药的处方为野菊花1200g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用5倍柱体积的水洗脱后，先用4倍量柱体积50％乙醇洗脱后，再用5倍柱体积80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例4(1)原料药的处方为野菊花900g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用5倍柱体积65％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入右旋果糖和乳糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例5(1)原料药的处方为野菊花1100g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.23的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用4倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖和果糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
权利要求
1.一种野菊花冻干粉针剂，其特征在于它是由野菊花挥发油HP-β-CD包合物、野菊花提取物和药用辅料制备而成；其特征还在于野菊花提取物中有效部位总黄酮的含量大于或等于50％，绿原酸含量大于或等于0.6％。
2.根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于药用辅料为甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。
3.一种野菊花冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)原料药的处方为野菊花。(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6-8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20-1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，先用2-4倍量柱体积40％-50％乙醇洗脱后，再用3-5倍柱体积60％-80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂为非极性或弱极性。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂优选为AB-8或D101型。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第一次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度为44-46％。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第二次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度为68-72％。
全文摘要
本发明公开了一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法。它是由野菊花的挥发油HP－β－CD包合物、提取物和药用辅料制备而成。挥发油采用水蒸气蒸馏法得到后，并用HP－β－CD进行包合，使其更加稳定，易于吸收，生物利用度提高；提取物采用水提醇沉、大孔吸附树脂分离纯化的方法获得，其中的主要有效成分总黄酮的含量大于50％，绿原酸含量大于0.6％。本发明还公开了其制备方法。含量测定结果和药理实验结果说明，本发明制剂含有的有效成分含量更高，药理作用更强。
文档编号A61K9/19GK1616038SQ20041007822
公开日2005年5月18日 申请日期2004年9月21日 优先权日2004年9月21日
发明者张平 申请人:张平
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
野菊花为菊科多年生草本植物野菊等的头状花序，别名苦薏。性味苦、辛，微寒，归肺、肝经。功能清热解毒，善治痈肿、疔毒、咽喉肿痛、风火赤眼、皮肤瘙痒等病证，同时又有很好的降压作用，可用于高血压病的辅助治疗。《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒。主妇人腹内宿血，解天行火毒丹疔。洗疮疥，又能去风杀虫”。野菊花中所含的绿原酸、挥发油和黄酮类化合物是其发挥药效的主要有效成分。已上市的制剂有野菊花颗粒、野菊花栓剂和野菊花注射液(WS-11041(ZD-1041)-2002)，其中注射液有清热解毒功效，用于外感热病、目赤肿痛、咽喉疼痛、上呼吸道感染、急性扁桃体炎属热毒上功者。野菊花注射液由于含有绿原酸及挥发油类成分，产品质量不稳定，对保存的要求较高，保存不当药液会由于氧化出现浑浊、沉淀、变色等情况；注射液质量标准中只对绿原酸的含量进行了测定，不能反映野菊花另一类活性成分黄酮类化合物的含量情况；同时注射液由于注射液制备工艺中采用了两步醇沉法，在醇沉过程中有效成分损失大；注射液对稳定性要求高，在携带、储藏、运输时容易破碎，也带来许多麻烦。
专利(CN1014611B)公开了一种野菊花香料浸膏的制备方法，浸膏主要含有油类成分；专利(申请号01100043)公开了一种纳米野菊花制剂药物及其制备方法，其特征是用纳米野菊花中药饮片制备药物制剂。。
在资料检索中未发现其它有关野菊花冻干粉针剂的报道。
发明内容
本发明的目的是公开一种富含活性成分、疗效好、质量稳定、方便使用的野菊花冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述冻干粉针制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法(1)原料药的处方为野菊花。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6-8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20-1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，先用2-4倍量柱体积40％-50％乙醇洗脱后，再用3-5倍柱体积60％-80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
在野菊花冻干粉针剂的制备中，采用水蒸气蒸馏法提取野菊花中的挥发油后，再用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)进行包合。HP-β-CD为水溶性的包合物，用其包合的挥发油制成粉针剂溶解性好，注射时易吸收，生物利用度高，患者痛感小，易于被患者愉快的接受；而且用HP-β-CD对挥发油进行包合，使其在制备、贮藏、运输的过程中不易被空气氧化而变质，增加了挥发油的稳定性，提高了疗效。野菊花水提液中含有大量的有效成分黄酮类化合物及绿原酸，我们采用经典的水提醇沉法在除去部分杂质后，又用大孔吸附树脂对绿原酸和总黄酮进行了分离纯化，洗脱时先用40％-50％乙醇洗脱，使绿原酸和部分黄酮被洗脱，再用60-80％乙醇洗脱，使得大部分黄酮类成分被洗脱。经纯化后的野菊花提取物中主要有效成分总黄酮有效部位的含量大于50％，绿原酸含量大于0.6％。同时，冻干后制剂中的不稳定成分绿原酸和挥发油由于挥发油被包合互相隔离，绿原酸和挥发油的相互影响减少，且药物成分以固体状态存在，也提高了制剂的稳定性。
以上制备工艺中大孔树脂洗脱时，第一次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度优选优选为44-46％。第二次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度优选为68-72％。
二、含量测定分析1、野菊花制剂中总黄酮的含量测定1.1仪器与试药 日本岛津UV-3000A紫外分光光度计。野菊花注射液(雅安三九药业有限公司)；本发明野菊花冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠试剂均为分析纯，水为三蒸水(自制)。
1.2对照品溶液配制 精密称取芦丁对照品100mg，置50ml量瓶中，加入甲醇30ml，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.2mg/ml的芦丁对照品溶液。
1.3标准曲线制备 精密吸取上述对照品溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，分别加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min后分别加1％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，再分别加4％氢氧化钠溶液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，照分光光度法在在500nm处测定吸收值A，以吸收值A对浓度进行回归计算，回归方程为Y＝0.124x-0.0034，r＝0.998。
1.4供试品溶液的制备 取本品内容物，精密称定，取约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心(12000rpm)10min，取上清液过滤，取续滤液，即得。1.5总黄酮的测定分别精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，照标准曲线方法进行测定，显色，在500nm波长处处测定A值，另精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在500nm波长处处测定A值，取两次吸收度差值，按回归方程计算总黄酮含量。结果见表1。
表1 制剂中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定含量(mg/支)批号 野菊花注射液 本发明野菊花冻干粉针剂1 36.0 46.22 35.8 44.03 33.0 48.42、野菊花制剂中绿原酸的含量测定参照野菊花注射液(WS-110419(ZD-1041)-2002)质量标准中绿原酸的含量测定方法进行测定，结果见表2表2 制剂中绿原酸含量测定含量(mg/支)批号 野菊花注射液 本发明野菊花冻干粉针剂1 0.24 0.562 0.22 0.573 0.21 0.51以上含量测定结果说明，本发明的野菊花冻干粉针剂中的总黄酮和绿原酸含量明显高于野菊花注射液(WS-11041(ZD-1041)-2002)的总黄酮和绿原酸含量。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
3、提取物中总黄酮和绿原酸的含量测定测定仪器、试药及方法同上。本发明野菊花提取物按本发明的制备方法所得；野菊花注射液提取物(按照(WS-11041(ZD-1041)-2002)中的制法所得)；结果见表3和表4。
表3 提取物中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定含量(％)批次野菊花注射液提取物本发明野菊花提取物1 36.5 57.82 35.8 55.03 33.9 60.5表4 提取物中绿原酸含量测定含量(％)批次野菊花注射液提取物本发明野菊花提取物1 0.24 0.712 0.22 0.713 0.22 0.64以上含量测定结果说明，本发明的制备方法得到的提取物中的有效成分总黄酮和绿原酸含量明显高于野菊花注射液提取物(按照(WS-11041(ZD-1041)-2002)中的制法所得)中的总黄酮和绿原酸含量。说明本发明的制备方法更加合理，更加科学，更具有实用性。
四、药理实施例试药；生理盐水(北京乾露春科技有限公司实验室提供)野菊花注射液(雅安三九药业有限公司)本发明野菊花冻干粉针剂(北京乾露春科技有限公司实验室提供)。
动物昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。
细菌肺炎链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌及福氏志贺菌由北京中医药大学提供。
病毒细胞流行性感冒病毒A3/汉防/359/95(H3N2)引自国家流感中心。
1.抑菌试验实验方法将肺炎链球菌(1010个/ml)、大肠埃希菌(105个/ml)、金黄色葡萄球菌(105个/ml)、绿脓假单胞菌(105个/ml)及福氏志贺菌(105个/ml)，分别涂布于厚约6mm的药皿平板上，然后在其中打成直径约6mm的孔若干。加满野菊花冻干粉溶液和注射液，37℃培养24小时，观察抑菌圈大小，结果见表5。
表5 抑菌实验结果野菊花注射液本发明野菊花冻干粉细菌 (mm) (mm)肺炎链球菌(1010个/ml)9 15大肠埃希菌(105个/ml) 7 13金黄色葡萄球菌(105个/ml) 7 14绿脓假单胞菌(105个/ml) 7 13福氏志贺菌(105个/ml) 8 15本发明野菊花冻干粉针剂和野菊花注射液均能对以上细菌形成一定直径的抑菌圈，显示有较强的抑菌作用，但本发明野菊花冻干粉针剂的抑菌作用明显比野菊花注射液强，说明本发明野菊花冻干粉针剂的药理作用强于野菊花注射液。
2.对小白鼠鼻内接种流行性感冒病毒A3毒株所致死亡率的影响实验方法取小白鼠50只，随机分组，每组10只，按60g/kg剂量腹腔注射野菊花冻干粉，每天1次，连续7d，同时以生理盐水、野菊花注射液做平行对照，于第7天给药后2h，用流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种0.2ml/只，以小白鼠死亡为指标，观察48h，记录各组动物死亡数，相同方法重复三次，结果见表6表6 对流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种小鼠死亡率的影响组别 死亡数/总数 死亡率 P值23/30 76.7＜0.01生理盐水5/30 16.7＜0.05
野菊花注射液 0/30 0本发明野菊花冻干粉本发明野菊花冻干粉针剂和野菊花注射液均能显著降低流行性感冒病毒A3毒株鼻内接种所致小鼠死亡率，呈显著抗病毒能力，但本发明野菊花冻干粉针剂的抗病毒作用明显比野菊花注射液强，说明本发明野菊花冻干粉针剂的药理作用强于野菊花注射液。
六、制备实施例实施例1(1)原料药的处方为野菊花1000g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加7倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.22的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用4倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入甘露醇和葡聚糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例2
(1)原料药的处方为野菊花800g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20的浸膏，加乙醇使含醇量达60％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，先用2倍量柱体积40％乙醇洗脱后，再用3倍柱体积60％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入聚乙烯吡咯烷酮，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例3(1)原料药的处方为野菊花1200g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的D101大孔吸附树脂柱，用5倍柱体积的水洗脱后，先用4倍量柱体积50％乙醇洗脱后，再用5倍柱体积80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例4(1)原料药的处方为野菊花900g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用4倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用5倍柱体积65％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入右旋果糖和乳糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
实施例5(1)原料药的处方为野菊花1100g。
(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。
(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.23的浸膏，加乙醇使含醇量达65％，静置12小时，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用3倍柱体积的水洗脱后，先用3倍量柱体积45％乙醇洗脱后，再用4倍柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入葡萄糖和果糖，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得500支。
一次1-2支，一日2次。
权利要求
1.一种野菊花冻干粉针剂，其特征在于它是由野菊花挥发油HP-β-CD包合物、野菊花提取物和药用辅料制备而成；其特征还在于野菊花提取物中有效部位总黄酮的含量大于或等于50％，绿原酸含量大于或等于0.6％。
2.根据权利要求1所述的冻干粉针剂，其特征在于药用辅料为甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。
3.一种野菊花冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)原料药的处方为野菊花。(2)取野菊花药材，加水浸泡1小时，用水蒸气蒸馏法提取挥发油，将收集的挥发油缓慢加入HP-β-CD饱和水溶液中，50℃-60℃保温条件下搅拌3小时，室温下继续搅拌5小时，冷藏过夜，过滤，60℃干燥得到包合物。(3)提取挥发油后的水液滤过，药渣再加6-8倍量的水提取2次，每次1小时；合并两次煎煮液，静置，滤过，合并提油后的滤液和煎煮滤液，浓缩至相对密度为1.20-1.24的浸膏，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置12小时，滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用3-5倍柱体积的水洗脱后，先用2-4倍量柱体积40％-50％乙醇洗脱后，再用3-5倍柱体积60％-80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到提取物。(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，滤过，加入药用辅料，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂为非极性或弱极性。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，大孔吸附树脂优选为AB-8或D101型。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第一次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度为44-46％。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第二次洗脱大孔吸附树脂的乙醇浓度为68-72％。
全文摘要
本发明公开了一种野菊花冻干粉针剂及其制备方法。它是由野菊花的挥发油HP－β－CD包合物、提取物和药用辅料制备而成。挥发油采用水蒸气蒸馏法得到后，并用HP－β－CD进行包合，使其更加稳定，易于吸收，生物利用度提高；提取物采用水提醇沉、大孔吸附树脂分离纯化的方法获得，其中的主要有效成分总黄酮的含量大于50％，绿原酸含量大于0.6％。本发明还公开了其制备方法。含量测定结果和药理实验结果说明，本发明制剂含有的有效成分含量更高，药理作用更强。
文档编号A61K9/19GK1616038SQ20041007822
公开日2005年5月18日 申请日期2004年9月21日 优先权日2004年9月21日
发明者张平 申请人:张平
最新回复(0)