滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法
专利名称：滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
六味地黄制剂为中医滋补肾阴的代表方剂，由金匮肾气丸衍化而来，由熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、泽泻、茯苓共六味药组成；具有滋阴补肾的功效，用于治疗肾阴不足、虚火上炎所致的头晕、耳鸣、腰膝酸软、盗汗、遗精、手足心热等症。其中“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”在中国药典、部颁中药成方制剂、国家地标升国标中成药上均有记载，该药物在临床上应用多年，在治疗肾阴不足、虚火上炎所致的头晕、耳鸣、腰膝酸软、盗汗、遗精、手足心热等症方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”均存在质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点。牡丹皮与山茱萸为六味地黄制剂中起主要作用的药物，而现有制剂质量标准中要么不对其有效成分进行含量测定，要么所用含量测定方法准确度不够高，故现有质量控制方法不能有效控制这种滋阴补肾的口服制剂的质量，从而将影响该制剂的临床疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，本发明针对现有质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，对主要药物牡丹皮与山茱萸的含量测定方法进行了对比和筛选，提高了其质量控制标准，从而保证了本制剂的临床疗效。
本发明所述滋阴补肾的口服制剂，按照重量组份计算它主要由熟地黄100-200、牡丹皮20-100、山药40-150、山茱萸40-150、泽泻20-100、茯苓20-100制备而成。
本发明所述制剂按照中国药典、部颁中药成方制剂、国家地标升国标中成药上关于“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”上记载的方法制备，或均按照下述方法制备方法一取茯苓部分粉碎成细粉，筛余部分与剩余茯苓加水煎煮1-5次，合并滤液，浓缩至稠膏状；山茱萸加乙醇回流提取1-5次，滤过，药渣备用，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏状；牡丹皮用水蒸气蒸馏，蒸馏液结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，研成细粉；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、山茱萸药渣与其余熟地黄等三味加水煎煮1-5次，合并滤液，通过大孔吸附树脂柱，用乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至稠膏状，加入上述茯苓稠膏、山茱萸稠膏及茯苓细粉、牡丹皮提取物及辅料，混匀，再按照不同的方法制成胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂。
方法二茯苓部分粉碎成细粉，山茱萸加乙醇回流提取1-5次，滤过，药渣备用，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏状；牡丹皮用水蒸气蒸馏，蒸馏液结晶，备用；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、山茱萸药渣、剩余茯苓与其余熟地黄等三味加水煎煮1-5次，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏状；加入上述茯苓细粉、山茱萸稠膏、牡丹皮提取物和辅料，混匀，再按照不同的方法制成胶囊剂、颗粒剂或丸剂。
所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定。
本制剂中牡丹皮的鉴别方法是以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂的薄层鉴别方法。
鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本制剂中丹皮酚的含量测定方法是以C18或C4或C8柱为色谱柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱测定法。
本制剂中熊果酸的含量测定方法是以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂的薄层扫描法。
含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
具体的含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查应符合中国药典胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
经研究我们发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种滋阴补肾的口服制剂的质量，更利于保证制剂的临床疗效。故所述质量控制方法还可包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
牡丹皮为本制剂中发挥作用的主要药物，其中丹皮酚又是牡丹皮中的主要有效成分。故本制剂中应对牡丹皮中丹皮酚的含量进行测定。丹皮酚的含量测定方法中文献报道较多有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用紫外分光光度法对牡丹皮中丹皮酚进行含量测定时，由于在样品的处理过程中因人为操作等诸多因素影响，其专属性不强，相对标准偏差较高效液相色谱法大，测定结果不稳定，故本发明采用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量。山茱萸也是本制剂中发挥作用的主要药物，其中熊果酸是山茱萸的主要有效成分。在对本制剂中熊果酸的含量测定方法中，我们曾采用高效液相色谱法对熊果酸进行含量测定，由于熊果酸与同分异构体齐墩果酸化学性质非常相似，难以分离，故未能用高效液相色谱法建立熊果酸的含量测定方法，而以薄层色谱扫描法对山茱萸中熊果酸进行含量测定。经过大量实验，本发明选择色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm的高效液相色谱法测定制剂中丹皮酚的含量。结果表明，药品中有效成分提取完全，且在该条件下，待测组分与其他组分分离完全(分离度＞1.5)，重现性、回收率等均能符合要求，说明本发明方法可行。另以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，波长λS＝200-600nm、λR＝600-900nm的薄层扫描法测量本制剂中熊果酸的含量。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，测量结果准确。由于本发明制剂中有药粉入药，故本发明还对本制剂进行显微鉴别。另外，本发明还对牡丹皮药材进行薄层鉴别研究，并选择以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂鉴别制剂中牡丹皮药材。结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制这种滋阴补肾口服制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。
本发明质量控制方法是经过大量的实验得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。
一、牡丹皮含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究取药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，分别采用超声处理、浸渍、回流提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后分别测其含量，结果如下
根据试验结果可知，采用超声提取的方法，丹皮酚提取更为完全。
2、流动相的选择流动相1以甲醇、水、冰醋酸不同比例的混合溶液为流动相。
流动相2以甲醇、水不同比例的混合溶液为流动相。
流动相3以乙腈、水不同比例的混合溶液为流动相。
流动相4以甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液为流动相。
结果以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；阴性样品色谱图在盐酸麻黄碱位置处无假阳性峰，丹皮酚和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即在该条件下丹皮酚与其他组分分离完全。最佳流动相为甲醇∶水＝7∶3。
3、重现性试验取本口服制剂，按本发明中牡丹皮含量测定项下供试液制备方法分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，计算结果列入下表。结果表明，该试验重现性良好。
4、回收率试验采用加样回收法，精密称取已测定含量的制剂，置具塞锥形瓶中，精密加入丹皮酚对照品溶液(0.0432mg/ml)25ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤膜(0.45μm)滤过，制得供试液。分别制备5份，测定结果，见下表。
5、丹皮酚是牡丹皮中的主要有效成分，丹皮酚的含量测定方法中文献报道较多的有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用紫外分光光度法对牡丹皮中丹皮酚进行含量测定，其专属性不强，误差大，测定结果不稳定，相对标准偏差较高效液相色谱法大，故本发明采用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量，以下是本发明制剂采用高效液相色谱法与紫外分光光度法测定结果比较六味地黄制剂用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定结果(n＝5)
二、山茱萸含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究方法一取药物，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流4小时，提取液蒸干，残渣加适量无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液，微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
方法二取药物，研细，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(浸泡约2分钟)，倾去石油醚，残渣加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液适量，微热使溶解，转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
根据试验结果可知，采用方法1制备供试品溶液，熊果酸提取较为完全。
2、展开剂的选择展开剂1以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯和甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。
展开剂2以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。
结果以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。
三、牡丹皮薄层鉴别研究以丹皮酚对照品制备对照品溶液。
供试品溶液制备方法一取药物，研细。加硅藻土拌匀，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；同法制备缺牡丹皮阴性对照液。
供试品溶液制备方法二取药物，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺牡丹皮阴性对照液。
展开剂选择分别以环己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；以石油醚、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。
结果采用方法二制备供试品溶液，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为环己烷∶醋酸乙酯＝3∶1。
与现有技术相比，本发明质量控制方法对牡丹皮中丹皮酚和山茱萸中熊果酸的含量测定方法进行了对比、筛选，并对牡丹皮药材的薄层鉴别进行了研究，所采用的方法分离度好，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了现有质量控制标准，可有效控制滋阴补肾的口服制剂的质量，从而保证了该制剂的临床疗效。
具体实施例方式本发明实施例1性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂2.5g；或取颗粒剂6g，加乙醚60ml，加热回流2小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1.5ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶水＝7∶3为流动相；检测波长274nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1500；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚16μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.3g，或取丸剂、颗粒剂3g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉5g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流5小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝3∶2的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液4μl与8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝25∶15∶5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝520nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例2性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C8柱，以乙腈∶水＝1∶9为流动相；检测波长200nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1g，或取丸剂、颗粒剂1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；
(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1∶9的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10∶25∶1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200nm，λR＝600nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例3性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5g；或取颗粒剂3g，加乙醚20ml，加热回流0.5小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1∶9为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C4柱，以甲醇∶水＝9∶1为流动相；检测波长500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.5g，或取丸剂、颗粒剂5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.25μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g。
本发明实施例4性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂5g；或取颗粒剂10g，加乙醚100ml，加热回流3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝9∶1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝50∶10∶10∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝600nm，λR＝900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例5
性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以乙腈∶水＝3∶7为流动相；检测波长400nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚12μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.4g，或取丸剂、颗粒剂4g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉2g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流4小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝3∶7的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝20∶20∶8∶4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝520nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
权利要求
1.一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，该口服制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂和丸剂，其特征在于所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定。
2.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中牡丹皮的鉴别方法是以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂的薄层鉴别方法。
3.按照权利要求1或2所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.按照权利要求3所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；所述“5％酸性三氯化铁乙醇溶液”由5％三氯化铁乙醇溶液10ml加盐酸2ml混匀而得。
5.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中丹皮酚的含量测定方法是以C18或C4或C8柱为色谱柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱测定法。
6.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中熊果酸的含量测定方法是以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂的薄层扫描法。
7.按照权利要求1、5或6所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸 分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
8.按照权利要求7所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于具体的含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
9.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮 采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸 分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
10.按照权利要求9所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；所述“5％酸性三氯化铁乙醇溶液”由5％三氯化铁乙醇溶液10ml加盐酸2ml混匀而得；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
全文摘要
本发明提供了一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定；与现有技术相比，本发明质量控制方法对丹皮酚和熊果酸的含量测定方法进行了对比、筛选，并对牡丹皮药材的薄层鉴别进行了研究，所采用的方法分离度好，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了现有质量控制标准，可有效控制滋阴补肾的口服制剂的质量，从而保证了该制剂的临床疗效。
文档编号A61K9/20GK1824126SQ20051020088
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月29日 优先权日2005年12月29日
发明者叶湘武, 张梅 申请人:贵州益佰制药股份有限公司
技术领域：
本发明涉及一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，属于对药品进行质量控制的技术领域。
背景技术：
六味地黄制剂为中医滋补肾阴的代表方剂，由金匮肾气丸衍化而来，由熟地黄、牡丹皮、山药、山茱萸、泽泻、茯苓共六味药组成；具有滋阴补肾的功效，用于治疗肾阴不足、虚火上炎所致的头晕、耳鸣、腰膝酸软、盗汗、遗精、手足心热等症。其中“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”在中国药典、部颁中药成方制剂、国家地标升国标中成药上均有记载，该药物在临床上应用多年，在治疗肾阴不足、虚火上炎所致的头晕、耳鸣、腰膝酸软、盗汗、遗精、手足心热等症方面取得比较满意的治疗效果，但经我们研究发现，“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”均存在质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点。牡丹皮与山茱萸为六味地黄制剂中起主要作用的药物，而现有制剂质量标准中要么不对其有效成分进行含量测定，要么所用含量测定方法准确度不够高，故现有质量控制方法不能有效控制这种滋阴补肾的口服制剂的质量，从而将影响该制剂的临床疗效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，本发明针对现有质量控制标准简单，产品质量不易控制的缺点，对本制剂的质量控制方法进行了研究，对主要药物牡丹皮与山茱萸的含量测定方法进行了对比和筛选，提高了其质量控制标准，从而保证了本制剂的临床疗效。
本发明所述滋阴补肾的口服制剂，按照重量组份计算它主要由熟地黄100-200、牡丹皮20-100、山药40-150、山茱萸40-150、泽泻20-100、茯苓20-100制备而成。
本发明所述制剂按照中国药典、部颁中药成方制剂、国家地标升国标中成药上关于“六味地黄胶囊”、“六味地黄片”、“六味地黄颗粒”和“六味地黄丸”上记载的方法制备，或均按照下述方法制备方法一取茯苓部分粉碎成细粉，筛余部分与剩余茯苓加水煎煮1-5次，合并滤液，浓缩至稠膏状；山茱萸加乙醇回流提取1-5次，滤过，药渣备用，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏状；牡丹皮用水蒸气蒸馏，蒸馏液结晶，滤过，结晶用水洗涤，低温干燥，研成细粉；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、山茱萸药渣与其余熟地黄等三味加水煎煮1-5次，合并滤液，通过大孔吸附树脂柱，用乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩至稠膏状，加入上述茯苓稠膏、山茱萸稠膏及茯苓细粉、牡丹皮提取物及辅料，混匀，再按照不同的方法制成胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂。
方法二茯苓部分粉碎成细粉，山茱萸加乙醇回流提取1-5次，滤过，药渣备用，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏状；牡丹皮用水蒸气蒸馏，蒸馏液结晶，备用；蒸馏后的水溶液及牡丹皮药渣、山茱萸药渣、剩余茯苓与其余熟地黄等三味加水煎煮1-5次，滤过，合并滤液，浓缩至稠膏状；加入上述茯苓细粉、山茱萸稠膏、牡丹皮提取物和辅料，混匀，再按照不同的方法制成胶囊剂、颗粒剂或丸剂。
所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定。
本制剂中牡丹皮的鉴别方法是以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂的薄层鉴别方法。
鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本制剂中丹皮酚的含量测定方法是以C18或C4或C8柱为色谱柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱测定法。
本制剂中熊果酸的含量测定方法是以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂的薄层扫描法。
含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
具体的含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查应符合中国药典胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
经研究我们发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种滋阴补肾的口服制剂的质量，更利于保证制剂的临床疗效。故所述质量控制方法还可包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
牡丹皮为本制剂中发挥作用的主要药物，其中丹皮酚又是牡丹皮中的主要有效成分。故本制剂中应对牡丹皮中丹皮酚的含量进行测定。丹皮酚的含量测定方法中文献报道较多有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用紫外分光光度法对牡丹皮中丹皮酚进行含量测定时，由于在样品的处理过程中因人为操作等诸多因素影响，其专属性不强，相对标准偏差较高效液相色谱法大，测定结果不稳定，故本发明采用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量。山茱萸也是本制剂中发挥作用的主要药物，其中熊果酸是山茱萸的主要有效成分。在对本制剂中熊果酸的含量测定方法中，我们曾采用高效液相色谱法对熊果酸进行含量测定，由于熊果酸与同分异构体齐墩果酸化学性质非常相似，难以分离，故未能用高效液相色谱法建立熊果酸的含量测定方法，而以薄层色谱扫描法对山茱萸中熊果酸进行含量测定。经过大量实验，本发明选择色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长为200-500nm的高效液相色谱法测定制剂中丹皮酚的含量。结果表明，药品中有效成分提取完全，且在该条件下，待测组分与其他组分分离完全(分离度＞1.5)，重现性、回收率等均能符合要求，说明本发明方法可行。另以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，波长λS＝200-600nm、λR＝600-900nm的薄层扫描法测量本制剂中熊果酸的含量。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，测量结果准确。由于本发明制剂中有药粉入药，故本发明还对本制剂进行显微鉴别。另外，本发明还对牡丹皮药材进行薄层鉴别研究，并选择以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂鉴别制剂中牡丹皮药材。结果其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。故采用本发明质量控制方法可有效控制这种滋阴补肾口服制剂的质量，从而保证该制剂的临床疗效。
本发明质量控制方法是经过大量的实验得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程。
一、牡丹皮含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究取药物，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，称定重量，分别采用超声处理、浸渍、回流提取，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，然后分别测其含量，结果如下
根据试验结果可知，采用超声提取的方法，丹皮酚提取更为完全。
2、流动相的选择流动相1以甲醇、水、冰醋酸不同比例的混合溶液为流动相。
流动相2以甲醇、水不同比例的混合溶液为流动相。
流动相3以乙腈、水不同比例的混合溶液为流动相。
流动相4以甲醇、冰醋酸不同比例的混合溶液为流动相。
结果以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；阴性样品色谱图在盐酸麻黄碱位置处无假阳性峰，丹皮酚和相近的杂质峰分离完全(分离度＞1.5)，即在该条件下丹皮酚与其他组分分离完全。最佳流动相为甲醇∶水＝7∶3。
3、重现性试验取本口服制剂，按本发明中牡丹皮含量测定项下供试液制备方法分别制备5份供试液，进样，测定峰面积，计算结果列入下表。结果表明，该试验重现性良好。
4、回收率试验采用加样回收法，精密称取已测定含量的制剂，置具塞锥形瓶中，精密加入丹皮酚对照品溶液(0.0432mg/ml)25ml，称定重量，密塞，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤膜(0.45μm)滤过，制得供试液。分别制备5份，测定结果，见下表。
5、丹皮酚是牡丹皮中的主要有效成分，丹皮酚的含量测定方法中文献报道较多的有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。经我们研究发现，本制剂采用紫外分光光度法对牡丹皮中丹皮酚进行含量测定，其专属性不强，误差大，测定结果不稳定，相对标准偏差较高效液相色谱法大，故本发明采用高效液相色谱法测定丹皮酚的含量，以下是本发明制剂采用高效液相色谱法与紫外分光光度法测定结果比较六味地黄制剂用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定结果(n＝5)
二、山茱萸含量测定方法研究1、供试品溶液制备方法研究方法一取药物，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流4小时，提取液蒸干，残渣加适量无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液，微热使溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
方法二取药物，研细，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次15ml(浸泡约2分钟)，倾去石油醚，残渣加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液适量，微热使溶解，转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
根据试验结果可知，采用方法1制备供试品溶液，熊果酸提取较为完全。
2、展开剂的选择展开剂1以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯和甲酸不同比例的混合溶液为展开剂。
展开剂2以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。
结果以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。
三、牡丹皮薄层鉴别研究以丹皮酚对照品制备对照品溶液。
供试品溶液制备方法一取药物，研细。加硅藻土拌匀，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；同法制备缺牡丹皮阴性对照液。
供试品溶液制备方法二取药物，加乙醚加热回流提取，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮使溶解，作为供试品溶液；同法制备缺牡丹皮阴性对照液。
展开剂选择分别以环己烷、醋酸乙酯不同比例的混合溶液；以石油醚、醋酸乙酯不同比例的混合溶液为展开剂。
结果采用方法二制备供试品溶液，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，其分离度好，斑点显色清晰，阴性对照无干扰，方法重现性好。最佳展开剂为环己烷∶醋酸乙酯＝3∶1。
与现有技术相比，本发明质量控制方法对牡丹皮中丹皮酚和山茱萸中熊果酸的含量测定方法进行了对比、筛选，并对牡丹皮药材的薄层鉴别进行了研究，所采用的方法分离度好，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了现有质量控制标准，可有效控制滋阴补肾的口服制剂的质量，从而保证了该制剂的临床疗效。
具体实施例方式本发明实施例1性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂2.5g；或取颗粒剂6g，加乙醚60ml，加热回流2小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1.5ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝3∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以甲醇∶水＝7∶3为流动相；检测波长274nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1500；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚16μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.3g，或取丸剂、颗粒剂3g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉5g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流5小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝3∶2的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl，对照品溶液4μl与8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝25∶15∶5∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝520nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例2性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C8柱，以乙腈∶水＝1∶9为流动相；检测波长200nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1g，或取丸剂、颗粒剂1g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；
(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1∶9的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10∶25∶1∶5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝200nm，λR＝600nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例3性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5g；或取颗粒剂3g，加乙醚20ml，加热回流0.5小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1∶9为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C4柱，以甲醇∶水＝9∶1为流动相；检测波长500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.5g，或取丸剂、颗粒剂5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.25μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g。
本发明实施例4性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂5g；或取颗粒剂10g，加乙醚100ml，加热回流3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液(5％三氯化铁乙醇溶液10ml，加盐酸2ml，混匀)，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝9∶1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝50∶10∶10∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝600nm，λR＝900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
本发明实施例5
性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱，以乙腈∶水＝3∶7为流动相；检测波长400nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚12μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.4g，或取丸剂、颗粒剂4g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉2g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流4小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝3∶7的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝20∶20∶8∶4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λS＝520nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
权利要求
1.一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，该口服制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂和丸剂，其特征在于所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定。
2.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中牡丹皮的鉴别方法是以丹皮酚对照品为对照，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂的薄层鉴别方法。
3.按照权利要求1或2所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.按照权利要求3所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于具体的鉴别方法包括以下项目的部分或全部(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；所述“5％酸性三氯化铁乙醇溶液”由5％三氯化铁乙醇溶液10ml加盐酸2ml混匀而得。
5.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中丹皮酚的含量测定方法是以C18或C4或C8柱为色谱柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相的高效液相色谱测定法。
6.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于本制剂中熊果酸的含量测定方法是以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂的薄层扫描法。
7.按照权利要求1、5或6所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸 分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
8.按照权利要求7所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于具体的含量测定方法为(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
9.按照权利要求1所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加乙醚，加热回流，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮 采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解，即得对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，加入甲醇超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量并定容，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸 分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂，研细，混匀，取细粉，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流提取，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
10.按照权利要求9所述滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法包括性状对于胶囊剂产品内容物为浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于片剂药物显浅棕色至棕色的粉末或颗粒；味苦，微酸；对于颗粒剂产品为浅棕色至棕色的颗粒，味甜而酸；对于丸剂产品为浅棕色至棕色的丸剂，味微甜、酸、略苦；鉴别(1)分别取胶囊剂、片剂、颗粒剂或丸剂的细粉，置显微镜下观察不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛液溶化；菌丝无色或淡棕色，直径4～6μm；(2)分别取胶囊剂、片剂、或丸剂0.5-5g；或取颗粒剂3-10g，加乙醚20-100ml，加热回流0.5-3小时，滤过，滤液回收乙醚，残渣加丙酮0.2-1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含0.5-2ml的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶醋酸乙酯＝1-9∶9-1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％酸性三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；所述“5％酸性三氯化铁乙醇溶液”由5％三氯化铁乙醇溶液10ml加盐酸2ml混匀而得；检查应符合中国药典胶囊剂、片剂或颗粒项下有关的各项规定；含量测定(1)牡丹皮采用高效液相色谱法，色谱柱为C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝1-9∶9-1为流动相；检测波长200-500nm，理论板数按丹皮酚峰计算应不低于1000；精密称取丹皮酚对照品，用甲醇溶解制成每1ml中含丹皮酚10-20μg的对照品溶液；分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂0.1-0.5g，或取丸剂、颗粒剂1-5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理10-60分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.65μm及小于0.65μm的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪测定含量；该口服制剂中，胶囊剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于3mg/g；片剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于1mg/g；颗粒剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.4mg/g；丸剂中含牡丹皮以丹皮酚计，不得少于0.5mg/g；(2)山茱萸分别取装量差异项下的胶囊剂、片剂、丸剂、或颗粒剂，研细，混匀，取细粉0.5g-10g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚，加热回流1-8小时，提取液蒸干，残渣加入无水乙醇∶氯仿＝1-9∶9-1的混合液，微热使溶解并定量至5ml，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.1-1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液与对照品溶液各3-15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯∶甲酸＝10-50∶10-25∶1-10∶0.5-5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑点显色清晰，取出，薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照中国药典薄层扫描法进行扫描，波长λs＝200-600nm，λR＝600-900nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得；该口服制剂中，胶囊剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.3mg/g；片剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.1mg/g；颗粒剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.05mg/g；丸剂中含山茱萸以熊果酸计，不得少于0.02mg/g。
全文摘要
本发明提供了一种滋阴补肾的口服制剂的质量控制方法，所述质量控制方法主要包括性状、检查、鉴别、含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对茯苓药材的显微鉴别、以丹皮酚对照品鉴别制剂中牡丹皮药材的薄层鉴别；含量测定包括对制剂中丹皮酚、熊果酸的含量测定；与现有技术相比，本发明质量控制方法对丹皮酚和熊果酸的含量测定方法进行了对比、筛选，并对牡丹皮药材的薄层鉴别进行了研究，所采用的方法分离度好，重现性好，回收率高，测量结果准确，提高了现有质量控制标准，可有效控制滋阴补肾的口服制剂的质量，从而保证了该制剂的临床疗效。
文档编号A61K9/20GK1824126SQ20051020088
公开日2006年8月30日 申请日期2005年12月29日 优先权日2005年12月29日
发明者叶湘武, 张梅 申请人:贵州益佰制药股份有限公司
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