吡啶和喹啉衍生物的制作方法
专利名称：吡啶和喹啉衍生物的制作方法
技术领域：
本发明主要涉及通过选择性阻断肿瘤细胞或受寄生虫感染的细胞中的胆碱激酶来阻断磷酸胆碱的生物合成，从而用于治疗包括人类的动物体内的肿瘤和寄生虫病或由病毒、细菌和真菌引起的疾病的化合物；以及也涉及本发明所述化合物和所述方法中某些中间体的制备方法。
背景技术：
胆碱激酶在肯尼迪或磷脂酰胆碱(PC)合成途径中是第一酶，使用腺苷5’-三磷酸(ATP)为磷酸基供体，将胆碱磷酸化为磷酸胆碱(PCho)[Kent，C.Prog.Lipid Res.，29，87-105(1990)；Kennedy，E.P.Fed.Proc.，20，934-940(1961)]。RAS基因形成了称为致癌基因的家族，因为致癌基因在25-30％的所有人类肿瘤中被活化，以及某些致癌基因在90％的所有人类肿瘤中被活化，所以其得到了广泛的研究[Bos，JL.Cancer Res49，4682-4689(1989)；Kiaris，H.，Spandidos，D.A.Int.J.Oncol.，413-421(1995)]。由于其涉及调节细胞增殖、终末分化和衰老，因此RAS蛋白在细胞内信号传递中起着重要的作用[Abdellatif，M.，MacLellan，W.R.；Schneider，M.D.J.Biol.Chem.，269，15423-15426(1994)；Wiesmüller，L.，Wittinghofer，F.Cell Signal.，6，247-267(1994)；Barbacid，M.Eur.J.Clin.Invest.，20，225-235(1990)；Hahn & Weinberg Nat.Rev.Cancer，2331(2002)；Wright & Shay Nat.Biotech，20682(2002)；Drayton &Peters Curr.Op.Gen.Dev，1298(2002)]。由各种致癌基因(其中ras致癌基因显著突出)介导的转化诱导了高水平的胆碱激酶活性，这导致其产物Pcho的细胞内水平异常增加[Lacal等人，Nature 330，269-272(1987)；Lacal J.C.Mol.Cell.Biol.10，333-340(1990)；Teegarden，D.，Taparowsky，E.J.，Kent，C.J.Biol.Chem.265，6042-6047(1990)；Ratnam，S.；Kent，C.Arch.Biochem.Biophys.323，313-322(1995)；Ramírez de Molina，A.，Rodríguez-González，A.， V.，Lucas，L.，Lacal，J.C.Biochem.Biophys.Res.Commun.285，873-879(2001)；Ramírez de Molina，A.， V.；Lucas，L.，Lacal，J.C.Oncogene 21，937-946(2002)]。因为使用核磁共振(NMR)技术的研究显示相对于正常组织，在包括但不限于乳腺、结肠、肺和前列腺的人肿瘤组织中存在着高水平的Pcho，所以补充的事实支持了ChoK在人肿瘤产生中的作用[Ruiz-Cabello，J.，Cohen，J.S.NMR Biomed.5，226-233(1992)；deCertaines，J.D.，Larsen，V.A.，Podo，F.，Carpinelli，G.，Briot，O.，Henriksen，O.NMR Biomed.6，345-365(1993)；Smith，T.A.D.，Bush，C.，Jameson，C.，Titley，J.C.，Leach，M.O.，Wilman，D.E.V.，McCready，V.R.NMR Biomed.6，318-323(1993)]。众所周知ras是在人的致癌作用方面最深入研究的致癌基因之一，以及ChoK抑制作用显示为在由致癌基因转化的细胞中的新的有效抗肿瘤策略[Cuadrado，A.，Carnero，A.，Dolfi，F.，Jiménez，B.，Lacal，J.C.Oncogene，8，2959-2968(1993)；Jiménez，B.，del Peso，L.，Montaner，S.，Esteve，P.Lacal，J.C.J.CellBiochem.，57，141-149(1995)；Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M.A.，Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]。这些起初的发现随后外推到裸鼠体内[Hernández-Alcoceba，R.，Fernández，F.，Lacal，J.C.Cancer Res.59，3112-3118(1999)]。关于ChoK抑制剂的研究鉴别了密胆碱-3(HC-3)为相对强效的和选择性的阻断剂[Cuadrado A.，Carnero A.，Dolfi F.，Jiménez B.and Lacal J.C.Oncogene 8，2959-2968(1993)；Jiménez B.，delPeso L.，Montaner S.，Esteve P.and Lacal J.C.J.Cell Biochem.57，141-149(1995)；Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M.A.，Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]。该具有联苯结构的胆碱同系物已用于设计新的抗肿瘤药物。因为HC-3是强效的呼吸作用麻痹剂，所以在临床应用中其不是良好的候选者。数个衍生物的合成是基于HC-3的结构修饰，以改进ChoK的抑制活性并抑制其毒性作用。由双季铵化的(bisquaternized)对称化合物产生的对增殖的抑制作用与诱导Pcho在整个细胞中产生的能力相互关联[Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M. Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)and ES 2 117 950]。当1，2-亚乙基-对-(联苄基二甲基-二基)残基用作在4位取代的两个阳离子吡啶鎓顶部之间的间隔基时[Campos，J.， M.C.，Rodríguez，V.，Gallo，M. Espinosa，A.Bioorg.& Med.Chem.Lett.10，767-770(2000)]，该结构通过其抑制分离的ChoK(在体外条件下)的能力来评价[Lacal J.C.IDrugs 4419-426(2001)]。该4-NR2基提供了相当大的作用，以及认为通过正电荷的离域作用，该基团的作用是电性的[Campos，J.， M.C.，Rodríguez，V.，Gallo，M. Espinosa.A.Bioorg.& Med.Chem.Lett.10，767-770(2000)]。已公开了在多种的人乳腺癌中ChoK活性增加[Ramírez de Molina，A.，Gutiérrez，R.，Ramos，M.A.，Silva，J.M.，Silva，J.，Sánchez，J.J.，Bonilla，F.，Lacal，J.C.Oncogene 21，4317-4322(2002)]。据近期报导，在诸如肺肿瘤、结肠直肠肿瘤和前列腺肿瘤的一些人类的肿瘤中，ChoK的变化是频繁事件[Ramírez de Molina，A.，Rodríguez-González，A.，Gutiérrez，R.， L，Sánchez，J.J.，Bonilla，F.，Rosell，R.，Lacal，J.C.Biochem.Biophys.Res.Commun.296，580-583(2002)]。
但是，现有技术以及特别是在西班牙专利第2 117 950号中描述的双季铵化的吡啶鎓衍生物显示了高水平的毒性，这限制了其长期的治疗应用。
因此，现有技术中，亟需开发具有阻断肿瘤细胞中的或由寄生虫、病毒、细菌或真菌感染产生的过程中的磷酸胆碱生物合成的活性，以及同时，具有低水平的毒性的化合物。
本发明的创作者经过勤勉的研究后，发现现有技术中及特别是在西班牙专利第2 117 950号中描述的所述化合物结构中的某些修饰出乎意料地，因而令人惊讶地显著降低了现有技术中所述化合物的毒性水平。
发明的简要说明因此，本发明的第一个目的是提供了具有通式I结构的化合物家族 该化合物结构的特征在于具有两个通过间隔基连接的N-芳基-氨基吡啶鎓基团。除了通过选择性地阻断肿瘤细胞中的或潜在地阻断由寄生虫、病毒、细菌或真菌感染产生的过程中的胆碱激酶来用作磷酸胆碱生物合成的阻断剂之外，该家族的化合物还具有低水平的毒性。
在第二个目的中，本发明提供了通式I的化合物在医药中的用途。
本发明的另一目的是提供包含至少一种通式I的化合物的药物制剂。
在另一目的中，本发明提供了通式I的化合物的制备方法。
最后，本发明提供了作为起始化合物，参与通式I的化合物的制备方法的通式VII的化合物。
本发明的详细说明在其第一个目的中，本发明提供了对应于通式I的化合物家族 其中
Q-表示药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱；R1和R’1互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3和R’3互相独立地表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R3和R’3分别与R4和R’4一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
R4和R’4互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R4和R’4分别与R3和R’3一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；以及A表示间隔基。
除了通过选择性地阻断肿瘤细胞中的或受寄生虫感染的细胞中的胆碱激酶来用作磷酸胆碱生物合成的阻断剂之外，属于此家族的所述化合物的特征还在于与现有技术中公知的那些结构相似的化合物相比，其具有较低的毒性水平。本发明所述化合物的此特征显示于下文提供的实施例。
至于本发明，间隔基“A”理解为任何二价的有机结构，该二价的有机结构用作存在于由通式I定义的结构中的两个吡啶鎓基团之间的连接链。在本发明的特定实施方案中，该间隔基A具有通式II，III，IV，V和VI之一的结构。这些通式表示基团；其中，末端的线-表示键，而不是甲基。
其中，m、n和p表示为可具有以下值的整数m＝0，1；n＝0，1-10；p＝0，1；条件是m、n和p不能同时为零值。
根据本发明，所述基团R1和R’1、R2和R’2，以及R3和R4、R’3和R’4可表示不同的基团或相同的基团，产生不对称或对称化合物。
在本发明特定实施方案中，所述基团R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基和烷氧基取代的苯基。在本发明的另一特定实施方案中，所述基团R1和R’1表示甲基、然而所述基团R2和R’2互相独立地表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的苯基。在第三个特定实施方案中，所述基团R3和R4及基团R’3和R’4，虽然互相独立地，但均共同表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
本发明优选的化合物显示于表I中
表I *R3和R4可以或者每一个为氢或者二者形成单个的基团。
最后，在本发明的优选实施方案中，药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱Q表示为Br(溴)或F6P(六氟磷酸盐)。
本发明所述化合物对转化某些致癌基因所必需的信号途径有选择性作用，该化合物在相同的强度下不影响正常细胞，因此在抗肿瘤治疗中为更大的效力留下了充足的空间。
在另一方面，因为已知数种诸如恶性疟原虫(plasmodiumfalciparum)或克氏锥虫(trypanosoma cruzi)的寄生虫、数种诸如腺病毒(adenovirus)的病毒、诸如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)的细菌和诸如白色念珠菌(Candida albicans)的真菌为了完成其在人和动物体内的感染周期，需要通过胆碱激酶的磷脂酰胆碱合成的代谢途径，所以本发明创作者实施的生物分析允许将这类活性扩展至抗病毒、抗寄生虫或抗真菌活性。在此意义上，文献中的背景支持了ChoK在Hep-G2细胞中某些核苷的细胞内代谢中的作用[参见Martin，L.T.；Faraj，A.；Schinazi，R.F.；Gosselin，G.；Mathe，C.；Imbach，J.-L.；Sommadossi，J.-P.Biochemical Pharmacology，53，75-87(1997)]，在寄生虫疾病中ChoK作为酶标记物的应用[参见Wunderlich，F.；Helwig，M.；Schillinger，G.；Vial，H.；Philippot，J.；Speth，V.Molecular and Biochemical Parasitology，23，103-115(1987)；Ancelin，M.L.；Vial，H.J.Biochimica et BiophysicaActa(BBA)-Lipids and Lipid Metabolism，875，52-58(1986)]，以及ChoK参与病毒中[Balakivera L.，Schoen G.，Thouvenin E.，Chroboczek J.J.Virol.774858-4866(2003)]、细菌中[Whiting GC，Gillespie SH.FEMSMicrobiol Lett.138141-145(1996)]以及真菌中[Mago N，Khuller GK.JMed Vet Mycol.28355-362(1990)；Mago N，Khuller GK.J Med VetMycol.28355-362(1990)]重要磷脂的生物合成。所有这些研究均支持ChoK抑制在上述疾病的治疗中可能具有重要的治疗效果。
因此，在第二个目的中，本发明提供了通式I的化合物在医药中的应用。尤其是，要求了通式I的化合物在医药中的用途。在特别的实施方案中，本发明提供了通式I的化合物用于癌症，优选为乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌和胰腺癌的治疗。在另一特别的实施方案中，本发明提供了通式I的化合物用于病毒性疾病，优选为那些由腺病毒引起的疾病的治疗；以及还用于抗寄生虫的，优选为那些由疟原虫(Plasmodium)或锥虫(Trypanosoma)引起的疾病的治疗；抗菌治疗，优选为那些由链球菌(Streptococcus)引起的疾病的治疗；以及抗真菌治疗，优选为那些念珠菌(Candida)引起的疾病的治疗。
在另一方面，要求通式I的化合物在药物制备中的用途。在特别的实施方案中，所述通式I的化合物用于制备治疗癌症，优选为乳癌、肺癌、结肠直肠癌或胰腺癌的药物。在另一特别的实施方案中，所述通式I的化合物用于制造治疗病毒性疾病，优选为那些由腺病毒引起的疾病的药物；以及用于制造抗寄生虫治疗的，优选为用于那些由疟原虫或锥虫引起的疾病的药物；用于制造治疗细菌性疾病，优选为那些由链球菌引起的疾病的药物，以及用于制造治疗真菌性疾病，优选为那些由念珠菌引起的疾病的药物。
在其第三个目的中，本发明提供了包含至少一个通式I的化合物作为活性成分的药物制剂。所述药物制剂可含有一种或多种赋形剂和/或载体物质。此外，所述制剂可含有任何其它的抑制胆碱激酶功能的活性成分。
所述赋形剂、载体物质和辅助物质必须为药剂学及药理学上可耐受的，以便其可与所述制剂或配制品中的其它组分结合而在治疗的有机体中无副作用。虽然最好的给药途径依赖于病人的情况，但是所述药物组合物或制剂包括那些适用于口服或肠胃外给药(包括皮下，皮内，肌内以及静脉给药)的药物组合物或制剂。所述制剂可以是单次剂量的形式，可根据药物学领域中公知的方法制备所述制剂。给药的活性物质的量可根据治疗的特异性而变化。
本发明还提供了制备通式I的化合物的方法。根据通式I的化合物是否具有相同或不同的氨基吡啶鎓基团，本发明的此目的有两个不同的实施方案。
a)用于获得具有相同的氨基吡啶鎓基团的通式I化合物的方法所述方法包括在有机溶剂中，以2∶1摩尔量，将相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2(其中X代表卤素原子Cl，Br或I)反应。所述反应优选地在丁酮中，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下发生。
b)用于获得具有不同的氨基吡啶鎓基团的通式I化合物的方法所述方法包括在有机溶剂中，以1∶1摩尔量，将相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2(其中X代表卤素原子；Cl，Br或I)反应，以得到单季铵化的产物，使用另一种有机溶剂，以1∶1的摩尔比，将该单季铵化的产物再与另一种不同的杂环衍生物分子反应，该另一种有机溶剂比第一种有机溶剂极性更大，使得先前形成的单季铵化的盐可以溶解。该反应的第一步优选地在丁酮，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下发生；然而第二步优选地在乙醇中，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下进行。
最后，在其最后的目的中，本发明提供了所述通式VII的化合物，该通式VII的化合物作为起始化合物参与通式I的化合物的制备方法。
其中R1表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R4一起表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R3一起表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
在通式VII的化合物中，优选为通式VIII的化合物
作为本发明的示例性描述，提供以下实施例。
实施例制备实施例化合物1(代码ACG560B)1，1’-(苯-1，3-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺)吡啶(125mg，0.57毫摩尔)与1，3-双(溴甲基)苯(75mg，0.28毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热144小时。过滤后，用丁酮、EtOAc和Et2O进行严格的洗涤，获得白色固体状的纯化合物1(125.2mg，62.7％)；m.p.197-198℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(d，4H，H-2，6pyr，J＝6.6)；7.64(d，4H，H-3，5anil，J＝8.6)；7.57(s，1H，H-2Ph)；7.45(d，5H，H-2，6aniland H-5Ph；J＝8.6)；7.37(d，2H，H-4，6Ph，J＝7.7)；6.95(bs，4H，H-3，5pyr)；5.49(s，4H，CH2N+)；3.46(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；142.75(C-2，6pyr)；141.96(C-1anil)；136.18(C-1.3Ph)；132.78(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.73(C-5Ph)；128.37(C-2，6anil)；128.18(C-4，6Ph)；127.89(C-2Ph)；109.15(C-3，5pyr)；59.16(CH2N+)；41.42(Me)。
HRMS(m/z)计算为C32H30N4Cl2Br(M-Br)+619.1031；实际为619.1031。分析为C32H30N4Cl2Br2·1H2O。计算为C 53.43；H 4.56；N7.63％。实际为C 53.14；H 4.48；N 7.79％。
化合物2(代码ACG416B)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(N-甲基苯胺)吡啶(216mg，1.17毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(200mg，0.58毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热24小时。过滤后，用丁酮进行彻底的洗涤，通过从MeOH中重结晶来纯化所述固体产品，残留物用Et2O进行研磨。获得白色固体状的化合物2(294mg，71.5％)；m.p.124-125℃。
1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ8.35(bs，4H，H-2，6pyr)；7.84(s，2H，H-2Ph)；7.67(d，2H，H-6Ph，J＝7.7)；7.56(t，4H，H-3，5anil，J＝7.6)；7.50-7.44(m，4H，H-5Phand H-4anil)；7.39(d，2H，H-4Ph，J＝7.7)；7.33(d，4H，H-2，6anil，J＝7.5)；6.95(bs，4H，H-3，5pyr)；5.47(s，4H，CH2N+)；3.51(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，CD3OD)δ158.48(C-4pyr)；144.82(C-1anil)；143.80(C-2.6pyr)；142.60(C-1Ph)；136.82(C-3Ph)；132.01(C-3，5anil)；131.14(C-5Ph)；130.12(C-4anil)；128.99(C-4Ph)；128.82(C-6Ph)；128.58(C-2Ph)；127.52(C-2，6anil)；110.29(C-3，5pyr)；61.97(CH2N+)；41.42(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H36N4Br(M-Br)+627.2123；实际为627.2122。分析为C38H36N4Br2·2.5H2O。计算为C 60.56；H 5.48；N7.43％。实际为C 60.70；H 5.83；N 7.20％。
化合物3(代码ACG548B)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺)吡啶(235mg，1.07毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(183mg，0.53毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热24小时。过滤后，用CHCl3进行彻底的洗涤，加入Et2O直到混浊后，通过从MeOH中重结晶来纯化所述固体产品。获得白色固体状的化合物3(205mg，49.7％)；m.p.279-280℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.57(d，4H，H-2，6pyr，J＝6.5)；7.88(s，2H，H-2Ph)；7.67(d，2H，H-6Ph，J＝7.7)；7.61(d，4H，H-3，5anil，J＝8.6)；7.51(t，2H，H-5Ph，J＝7.7)；7.42(d，6H，H-4Phand H-2，6anil，J＝8.6)；6.99(bs，4H，H-3，5pyr)；5.51(s，4H，CH2N+)；3.43(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；142.72(C-2，6pyr)；142.05(C-1anil)；140.01(C-1Ph)；136.20(C-3Ph)；132.79(C-4anil)；130.53(C-3，5anil)；129.73(C-5Ph)；128.47(C-2，6anil)；127.51(C-4Ph)；127.14(C-6Ph)；127.04(C-2Ph)；109.20(C-3，5pyr)；59.55(CH2N+)；40.73(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H34N4Cl2Br(M-Br)+695.1344；实际为695.1344。分析为C38H34N4Cl2Br2·1.2H2O。计算为C 57.12；H 4.59；N7.01％。实际为C 57.55；H 4.99；N 6.97％。
化合物4(代码ACG604A)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺)吡啶(200mg，0.8毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(136mg，0.4毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和Et2O进行彻底地洗涤，获得纯的白色固体状的化合物4(270mg，79.7％)；m.p.312-313℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.63(d，4H，H-2，6pyr，J＝7.1)；7.92(s，2H，H-2Ph)；7.75(s，2H，H-4anil)；7.70(d，2H，H-6Ph，J＝7.6)；7.62(d，4H，H-2，6anil，J＝1.8)；7.53(t，2H，H-5Ph，J＝7.6)；7.45(d，2H，H-4Ph，J＝7.6)；7.04(d，4H，H-3，5pyr，J＝7.1)；5.56(s，4H，CH2N+)；3.44(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；145.27(C-1anil)；142.86(C-2，6pyr)；140.08(C-1Ph)；136.11(C-3Ph)；135.34(C-3，5anil)；129.70(C-5Ph)；128.33(C-4anil)；127.55(C-4Ph)；127.14(C-6Ph)；127.07(C-2Ph)；125.97(C-2，6anil)；109.53(C-3，5pyr)；59.65(CH2N+)；40.59(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H32N4Cl4Br(M-Br)+763.0564；实际为763.0563。分析为C38H32N4Cl4Br2·0.1H2O。计算为C 53.81；H 3.81；N6.60％。实际为C 53.41；H 4.19；N 6.25％。
化合物5(代码RSM964A)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(212mg，0.78毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)苯(134mg，0.39毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮、EtOAc和Et2O进行彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物5(134mg，40％)；m.p.217-218℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.24(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.18(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.84(s，2H，H-2Ph)；7.63(d，J＝7.5，2H，H-5quin)；7.56-7.43(m，18H，H-5，6Ph，H-2，3，5，6anil，H-3，6，7quin)；7.23(d，J＝7.4，2H，H-4Ph)；6.08(s，4H，N+-CH2)；3.74(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.87(C-4quin)；147.46(C-2quin)；146.42(C-1anil)；140.03(C-1Ph)；138.83(C-8aquin)；135.61(C-3Ph)；133.50(C-7quin)；131.69(C-4anil)；130.27(C-3，5anil)；129.62(C-5Ph)；127.35(C-6Ph)；127.18(C-2，6anil)；126.73(C-6quin)；126.09(C-4Ph)；125.87(C-5quin)；125.67(C-2Ph)；119.65(C-4aquin)；119.14(C-8quin)；107.10(C-3quin)；57.28(N+-CH2)；44.94(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H38N4Cl2Br2[(M-Br)]+795.1657；实际为795.1656。分析为C46H38N4Cl2Br2·3H2O。计算为C 59.31；H 4.76；N6.01％。实际为C 59.24；H 4.70；N 5.65％。
化合物6(代码RSM820C)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(168mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和CHCl3彻底地洗涤，加入Et2O直到混浊后，从EtOH或EtOH/MeOH中重结晶来纯化所述固体产品，获得浅黄色固体状的化合物6(154mg，45％)；m.p.220-221℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.5，2H，H-2quin)；8.29(d，J＝1.7，2H，H-8quin)；7.85(s，2H，H-2Ph)；7.64(d，J＝7.2，2H，H-5quin)；7.57-7.45(m，16H，H-5，6Ph，H-2，3，5，6anil，H-3，6quin)；7.25(d，J＝7.7，2H，H-4Ph)；6.08(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ157.68(C-4quin)；148.01(C-2quin)；146.14(C-1anil)；140.14(C-1Ph)；139.85(C-8aquin)；138.48(C-7quin)；135.51(C-3Ph)；132.11(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.80(C-5Ph)；129.45(C-6Ph)；127.32(C-2，6anil)；126.89(C-6quin)；126.12(C-4Ph)；125.91(C-5quin)；125.82(C-2Ph)；118.48(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.38(C-3quin)；57.14(N+-CH2)；45.18(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H36N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+783.1616；实际为783.1616。分析为C46H36N4Cl4Br2·1.5H2O。计算为C 56.76；H 4.04；N 5.76％。实际为C 56.72；H 4.18；N 5.71％。
化合物7(代码RSM932A)1，1’-(联苯-4，4’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(240mg，0.89毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苯(152mg，0.44毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物7(121mg，30％)；m.p.255-257℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.12(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.83(pst，J＝7.5，2H，H-7quin)；7.66(d，J＝8.2，2H，H-5quin)；7.55(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.44(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.56-7.39(m，12H，H-2，3，5，6Ph，H-3quin，H-6quin)；6.05(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ157.86(C-4quin)；147.41(C-2quin)；146.40(C-1anil)；139.11(C-1Ph)；138.78(C-8aquin)；134.30(C-4Ph)；133.47(C-7quin)；131.69(C-4anil)；130.26(C-3，5anil)；127.34(C-3，5Ph)；127.18(C-2，6anil)，(C-2，6Ph)；127.08(C-6quin)；126.08(C-5quin)；119.65(C-4aquin)；119.12(C-8quin)；107.06(C-3quin)；56.94(N+-CH2)；44.94(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H38N4Cl2Br2[(M-Br)]+795.1657；实际为795.1658。分析为C46H38N4Cl2Br2·2H2O。计算为C 60.48；H 4.63；N6.13％。实际为C 60.06；H 4.48；N 5.87％。
化合物8(代码RSM824B)1，1’-(联苯-4，4’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(100ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苯(168mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物8(195mg，48％)；m.p.276-277℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.23(d，J＝1.6，2H，H-8quin)；7.73(d，J＝8.3，2H，H-5quin)；7.69(d，J＝8.4，4H，H-2，6Ph)；7.56(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.46(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.50-7.46(m，6H，H-6quin，H-3quin)；7.41(d，J＝8.4，4H，H-3，5Ph)；6.04(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.69(C-4quin)；147.98(C-2quin)；146.13(C-1anil)；139.82(C-8aquin)；139.21(C-1Ph)；138.51(C-7quin)；134.22(C-4Ph)；132.14(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.45(C-2，6anil)；127.54(C-3，5Ph)；127.33(C-6quin)；127.23(C-2，6Ph)；126.52(C-5quin)；118.47(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.33(C-3quin)；56.83(N+-CH2)；45.19(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H36N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+783.1616；实际为783.1614。分析为C46H36N4Cl4Br2。计算为C 58.38；H 3.83；N5.92％。实际为C 58.73；H 3.96；N 5.74％。
化合物9(代码RSM936A)1，1’-[亚乙基-双(苯-1，4-二基亚甲基)]双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(204mg，0.76毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苄(140mg，0.37毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和CHCl3彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物9(70mg，20％)；m.p.212-214℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.10(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.82(pst，J＝7，5，2H，H-7quin)；7.54(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.44(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.52-7.39(m，6H，H-3quin，H-5quin，H-6quin)；7.24(s，8H，H-2，3，5，6Ph)；5.98(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)；2.80(s，4H，CH2-Ph)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.80(C-4quin)；147.34(C-2quin)；146.44(C-1anil)；141.55(C-1Ph)；138.74(C-8aquin)；133.36(C-7quin)；132.32(C-4Ph)；131.63(C-4anil)；130.25(C-3，5anil)；128.79(C-3，5Ph)；127.26(C-6quin)；127.17(C-2，6anil)；126.74(C-2，6Ph)；126.04(C-5quin)；119.66(C-4aquin)；119.19(C-8quin)；107.06(C-3quin)；57.10(N+-CH2)；44.93(Me)；36.22(CH2-Ph)。
HRMS(m/z)计算为C48H42N4Cl2Br2[(M-Br)]+823.1970；实际为823.1970。分析C48H42N4Cl2Br2·1H2O。计算为C 62.42；H 4.80；N6.07％。实际为C 62.29；H 4.59；N 6.09％。
化合物10(代码RSM828B)1，1’-[亚乙基-双(苯-1，4-二基亚甲基)]双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苄(182mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物10(229mg，48％)；m.p.256-257℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.11(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.18(d，J＝1.5，2H，H-8quin)；7.55(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.46(d，J＝8.8，4H，H-2，6anil)；7.56-7.44(m，6H，H-3quin，H-5quin，H-6quin)；7.24(s，8H，H-2，3，5，6Ph)；5.97(s，4H，N+-CH2)；3.72(s，6H，Me)；2.82(s，4H，CH2-Ph)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.63(C-4quin)；147.91(C-2quin)；146.16(C-1anil)；141.74，139.75and 138.88(C-7quin，C-8aquinandC-4ph)；132.20(C-4anil)；132.08(C-1Ph)；130.50(C-3，5anil)；129.39(C-6quin)；128.99(C-3，5Ph)；127.32(C-2，6anil)；126.90(C-2，6Ph)；126.48(C-5quin)；118.55(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.32(C-3quin)；57.02(N+-CH2)；45.17(Me)；36.33(CH2-Ph)。
HRMS(m/z)计算为C48H40N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+811.1927；实际为811.1926。分析C48H40N4Cl4Br2·2H2O。计算为C 57.05；H 4.39；N5.54％。实际为C 57.14；H 4.07；N 5.46％。
制备试剂化合物α，α’-二溴-间-二甲苯是由Sigma-Aldrich Química S.A.提供的商品化产品，该公司地址为Avenida Valdelaparra No.51-53，28100Alcobendas(马德里)。
α，α’-二溴-间-二甲苯利用各自参考文献所描述的方法制备以下起始原料1.-3，3’-双(溴甲基)联苯 Werner，W.J.Org.Chem.17，523-528(1952)。
2.-4，4’-双(溴甲基)联苯 Szendey，G.L.，Munnes，S.Chem.Ber.94，38-42(1961)；Staab，H.A.，Haenel，M.Chem.Ber.106，2190-2202(1973)。
3.-双-对-(溴甲基)联苄 Cram，D.J.，Steinberg，J.J.Am.Chem.Soc.73，5691-5704(1951)。
4.-4-(N-甲基苯胺基)吡啶 Campos，J.， M.C.，Sánchez，R.，Gómez-Vidal，J.A.，Rodríguez-Gonzá1ez，A.， M.，Gallo，M. Lacal，J.C.，Espinosa，A.Bioorg.& Med.Chem.10，2215-2231(2002)。
5.-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶 Conejo-García，A.，Campos，J.，Sánchez，R.，Rodríguez-González，A.，Lacal，J.C.，Gallo，M. Espinosa，A.Eur.J.Med.Chem.38，109-116(2003)。
6.-4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶 根据先前描述的方法，从盐酸4-氯吡啶和4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶中制备此化合物Conejo-García，A.，Campos，J.，Sánchez，R.，Rodríguez-González，A.，Lacal，J.C.，Gallo，M. Espinosa，A.Eur.J.Med.Chem.38，109-116(2003)。另一方面，通过以下研究中描述的方法获得3，5-二氯-N-甲基苯胺Leeson，P.D.，Baker，R.，Carling，R.W.，Curtis，N.R.，Moore，K.W.，Williams，B.J.，Foster，A.C.，Donald，A.E.，Kemp，J.A.，Marshall，G.R.J.Med.Chem.34，1243-1252(1991)。
7.-4，4’-双(氯甲基)-[2，2’]联噻唑.
参考Chi，AND.F.；Chu，T.I.Record(Peking)，1，45(1957)；Chem.Abstract，52，6321 a，b(1957)。
8.-4，4’-双(溴甲基)-[2，2’]联噻唑基-5，5’-二羧酸二乙酯 参考Lehn，J.-M.；Regnouf de Vains，J.-B.Tetrahedron Lett.，30，2209-2212(1989)。
9.-6，6’-双(溴甲基)-[2，2’]联吡啶
参考Rodríguez-Ubis，J.-C.；Alpha，B.；Plancherel，D.；Lehn，J.-M.Helv.Chim.Acta，67，2264(1984)。
10.-6，6’-双(溴甲基)-4，4’-二甲基-[2，2’]联嘧啶 参考Lehn，J.-M.；Regnouf de Vains，J.-B.Tetrahedron Lett.，30，2209-2212(1989)。
新起始原料的制备通式VII的化合物 可通过在回流状态下，4-苯胺或喹啉衍生物与相应的4-氯-苯胺在冰醋酸中反应来制备。冷却后，用氢氧化钠溶液碱化所述溶液，随后将所得混悬液进行浓缩，并通过快速色谱法纯化。
获得通式VIII的化合物的实施例提供如下
化合物VIII A4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉将冰醋酸(15ml)中的4-氯喹啉(5毫摩尔)和4-氯-N-甲基苯胺(10毫摩尔)的溶液在氩气流中，加热回流3小时。冷却后，用10％NaOH溶液碱化所述溶液直到pH＝10，并将所得混悬液在旋转蒸发器中进行浓缩，且利用快速色谱法纯化(9∶1，CH2Cl2∶MeOH)，得到浅黄色糖浆状的目标分子(97％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.5，1H，H-2quin)；7.70(d，J＝8.5，1H，H-5quin)；7.65(t，J＝7.9，1H，H-7quin)；7.38(t，J＝8.5，1H，H-6quin)；7.35(d，J＝7.9，1H，H-8quin)；7.17(d，J＝8.9，2H，H-3，5anil)；7.14(d，J＝8.5，1H，H-3quin)；6.76(d，J＝8.9，2H，H-2，6anil)；3.45(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ153.37(C-4quin)；151.16(C-2quin)；150.01(C-1anil)；148.17(C-8aquin)；135.02(C-4anil)；130.07(C-7quin)；129.52(C-6quin)；129.29(C-3，5anil)；126.26(C-4aquin)；126.07(C-5quin)；124.40(C-8quin)；119.79(C-2，6anil)；115.08(C-3quin)；41.75(Me)。
HRMS(m/z)计算为C16H13N2Cl[(M+H)]+269.0845；实际为269.084。分析C16H13N2Cl。计算为C 71.51；H 4.88；N 10.42％。实际为C 71.60；H 4.71；N 10.33％。
化合物VIII B7-氯-4-(4-氯-V-甲基苯胺基)喹啉将冰醋酸(15ml)中的4，7-二氯喹啉(5毫摩尔)和4-氯-N-甲基苯胺(10毫摩尔)的溶液在氩气流中，加热回流3小时。冷却后，用10％NaOH溶液碱化所述溶液直到pH＝10，并将所得混悬液在旋转蒸发器中进行浓缩，且利用快速色谱法纯化(9∶1，CH2Cl2∶MeOH)，得到浅黄色糖浆状的所述中间体II(59％)。
1H-NMR(300MHz，CH3OD)δ8.66(d，J＝7.1，1H，H-2quin)；7.94(d，J＝2.0，1H，H-8quin)；7.53(d，J＝8.8，2H，H-3，5anil)；7.41-7.37(m，2H，H-5，6quin)；7.47(d，J＝8.8，2H，H-2，6anil)；7.32(d，J＝7.1，2H，H-3quin)；3.76(s，3H，Me)。13C-NMR(75MHz，CH3OD)δ159.86(C-4quin)；147.63(C-7quin)；143.86(C-2quin)；141.46(C-1anil)；140.56(C-8aquin)；135.02(C-4anil)；132.01(C-3，5anil)；129.92(C-6quin)；128.58(C-2，6anil)；127.98(C-5quin)；120.56(C-8quin)；118.71(C-4aquin)；107.38(C-3quin)；45.74(Me)。
HRMS(m/z)计算为C16H12N2Cl2[(M+H)]+303.0456；实际为303.0456。分析C16H12N2Cl2。计算为C 63.38；H 3.99；N 9.24％。实际为C 63.46；H 3.71；N 9.17％。
人CHOK活性的体外分析分析缓冲液(100mM Tris-HCl pH 8.0、100mM MgCl2、10mM ATP和200μM胆碱，存在有甲基[14C]-氯化胆碱(50-60μCi/mmol))中的E.coli中表达的重组胆碱激酶用于所述体外分析中。在37℃下，所述反应进行30分钟，并用冰冷却的三氯乙酸停止反应，直到终浓度为16％。用水饱和的乙醚洗涤样品并冻干。根据已描述的方法在薄层色谱板中解析亲水的胆碱衍生物[Ramírez，A.，Penalva，V.，Lucas，L.，Lacal，J.C.Oncogene 21，937-946(2002)]。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6进行这些分析。所述结果总结于表II中。
细胞增殖分析将HT-29细胞接种在24孔板中(35×103细胞/孔)并孵育24小时。然后在普通的培养基中用不同浓度的ChoK抑制剂处理该细胞。三天后，抽吸所述的孔并加入新鲜的培养基和更多量的药物，将所述细胞再维持三天。利用具有一些改进的[参见Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M. Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]结晶紫方法[参见Gillies，R.J.，Didier，N.，Denton，M.Anal.Biochem.159，109-113(1986)]来量化每孔中剩余的细胞。简而言之，所述细胞用TD缓冲液洗涤，并用1％戊二醛固定15分钟。再用TD洗涤后，用0.1％结晶紫将所述细胞核至少染色30分钟，并用蒸馏水洗涤三次。将所吸附的色彩再混悬在10％醋酸中，并在分光计中测定595nm处的吸光度。所得结果以IC50值的形式概述，即产生50％抑制作用所需要的化合物浓度。通过反复的曲线调整来确定该值。对该曲线中的每个点要测定两个值，所述试验重复两或三次，并评估平均值。在少数情况中，所述两个值差异超过50％，进行第三次试验以确定真实值。作为效价测量的IC50值用于将所述化合物的生物活性与其化学结构相关联。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术中公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6实施这些分析。所述结果总结于表II中。
毒性分析在试验开始时，用1月龄的体重约25-30克的Balb C小鼠进行毒性分析。用每日剂量为0.1mg/kg直至为25mg/kg不同量的的每种化合物向所述小鼠连续接种五天。五天剂量后，使该小鼠休息9天，并分析存活率和一般状况，特别关注对小鼠的皮毛、行为、摄食习性和体重的作用。将引起50％死亡率的剂量记录为相应的毒性IC50。用所述新化合物获得的结果显示经其相应的IC50测定，所述活性有明显的改善，同时其毒性减少。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术中公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6实施这些分析。所述结果总结于表II中。
以下表II中总结了上述进行的分析中获得的结果。
表II
*R3和R4可以或者每一个为氢或者两者形成单个的基团。
从表II的数据中可以观察到与专利ES 2 117 950中所述的化合物相比，本发明所述的化合物具有大大降低的毒性，然而其对肿瘤培养物来源的细胞具有相似的或更大的抗增殖活性价值，以及对接种在免疫抑制小鼠中的人肿瘤具有相似的或更大的体内抗肿瘤活性。
权利要求
1.具有通式I的化合物 其中Q-表示药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱；R1和R’1互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3和R’3互相独立地表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R3和R’3分别与R4和R’4一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4和R’4互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R4和R’4分别与R3和R’3一起，且互相独立地表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；以及A表示间隔基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于间隔基A具有选自 其中，m、n和p表示能具有以下值的整数m＝0，1；n＝0，1-10；p＝0，1；其中m、n和p不能同时为零值； 的通式。
3.如前述权利要求所述的化合物，其特征在于R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基和烷氧基取代的苯基。
4.如权利要求3所述的化合物，其特征在于R1和R’1表示甲基，以及R2和R’2互相独立地表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的苯基。
5.如前述权利要求所述的化合物，其特征在于虽然相互独立地，但是R3和R4与R’3和R’4一起表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于其具有以下取代基 *R3和R4或者每一个为氢或者两者形成单个的基团。
7.如权利要求6所述的化合物，其特征在于Q表示为Br(溴)或F6P(六氟磷酸盐)。
8.包含至少一种如权利要求1至7定义的化合物作为活性成分的药物制剂。
9.如权利要求1至7所述的化合物在医药中的用途，特别是其在癌症治疗、抗病毒、抗寄生虫和抗真菌治疗中的用途。
10.如权利要求1至7所述的化合物在乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌及胰腺癌的治疗中的用途。
11.如权利要求1至7所述的化合物在药物制备，特别是在用于癌症治疗、抗病毒、抗寄生虫和抗真菌治疗的药物制备中的用途。
12.如权利要求1至7所述的化合物在用于乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌及胰腺癌治疗的药物制备中的用途。
13.制备如权利要求1所述化合物的方法，其包括a)在有机溶剂中，以2∶1摩尔量，使相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2反应，其中X代表卤素原子Cl、Br或I，或者b)在有机溶剂中，以1∶1摩尔比，将相应的所述通式VII的杂环衍生物与所述双卤代衍生物AX2反应，其中X代表卤素原子Cl、Br或I，以得到单季铵化的产物，使用比第一种有机溶剂极性更大的有机溶剂，以1∶1的摩尔比，将所得到的单季铵化产物再与另一种不同的杂环衍生物分子反应。
14.具有通式VII的化合物 其中R1表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R4一起表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R3一起表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
15.如权利要求14所述的具有式4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉 和7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉的化合物
全文摘要
本发明提供了通式I的化合物，该通式I化合物通过选择性阻断在肿瘤细胞或受寄生虫感染侵袭的细胞中的胆碱激酶来阻断磷酸胆碱的生物合成，从而用于治疗包括人类的动物体内的肿瘤和寄生虫病或由病毒、细菌和真菌引起的疾病。本发明还涉及制备上述化合物的方法和所述方法中的某些中间体。
文档编号A61P35/00GK1910153SQ200580002428
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月11日 优先权日2004年1月14日
发明者胡安卡洛斯·劳科尔圣胡安, 华金·坎波斯罗萨, 米格尔安赫尔·加略梅萨, 安东尼奥·埃斯皮诺萨乌韦达 申请人:康斯乔最高科学研究公司, 西班牙格拉纳达大学
技术领域：
本发明主要涉及通过选择性阻断肿瘤细胞或受寄生虫感染的细胞中的胆碱激酶来阻断磷酸胆碱的生物合成，从而用于治疗包括人类的动物体内的肿瘤和寄生虫病或由病毒、细菌和真菌引起的疾病的化合物；以及也涉及本发明所述化合物和所述方法中某些中间体的制备方法。
背景技术：
胆碱激酶在肯尼迪或磷脂酰胆碱(PC)合成途径中是第一酶，使用腺苷5’-三磷酸(ATP)为磷酸基供体，将胆碱磷酸化为磷酸胆碱(PCho)[Kent，C.Prog.Lipid Res.，29，87-105(1990)；Kennedy，E.P.Fed.Proc.，20，934-940(1961)]。RAS基因形成了称为致癌基因的家族，因为致癌基因在25-30％的所有人类肿瘤中被活化，以及某些致癌基因在90％的所有人类肿瘤中被活化，所以其得到了广泛的研究[Bos，JL.Cancer Res49，4682-4689(1989)；Kiaris，H.，Spandidos，D.A.Int.J.Oncol.，413-421(1995)]。由于其涉及调节细胞增殖、终末分化和衰老，因此RAS蛋白在细胞内信号传递中起着重要的作用[Abdellatif，M.，MacLellan，W.R.；Schneider，M.D.J.Biol.Chem.，269，15423-15426(1994)；Wiesmüller，L.，Wittinghofer，F.Cell Signal.，6，247-267(1994)；Barbacid，M.Eur.J.Clin.Invest.，20，225-235(1990)；Hahn & Weinberg Nat.Rev.Cancer，2331(2002)；Wright & Shay Nat.Biotech，20682(2002)；Drayton &Peters Curr.Op.Gen.Dev，1298(2002)]。由各种致癌基因(其中ras致癌基因显著突出)介导的转化诱导了高水平的胆碱激酶活性，这导致其产物Pcho的细胞内水平异常增加[Lacal等人，Nature 330，269-272(1987)；Lacal J.C.Mol.Cell.Biol.10，333-340(1990)；Teegarden，D.，Taparowsky，E.J.，Kent，C.J.Biol.Chem.265，6042-6047(1990)；Ratnam，S.；Kent，C.Arch.Biochem.Biophys.323，313-322(1995)；Ramírez de Molina，A.，Rodríguez-González，A.， V.，Lucas，L.，Lacal，J.C.Biochem.Biophys.Res.Commun.285，873-879(2001)；Ramírez de Molina，A.， V.；Lucas，L.，Lacal，J.C.Oncogene 21，937-946(2002)]。因为使用核磁共振(NMR)技术的研究显示相对于正常组织，在包括但不限于乳腺、结肠、肺和前列腺的人肿瘤组织中存在着高水平的Pcho，所以补充的事实支持了ChoK在人肿瘤产生中的作用[Ruiz-Cabello，J.，Cohen，J.S.NMR Biomed.5，226-233(1992)；deCertaines，J.D.，Larsen，V.A.，Podo，F.，Carpinelli，G.，Briot，O.，Henriksen，O.NMR Biomed.6，345-365(1993)；Smith，T.A.D.，Bush，C.，Jameson，C.，Titley，J.C.，Leach，M.O.，Wilman，D.E.V.，McCready，V.R.NMR Biomed.6，318-323(1993)]。众所周知ras是在人的致癌作用方面最深入研究的致癌基因之一，以及ChoK抑制作用显示为在由致癌基因转化的细胞中的新的有效抗肿瘤策略[Cuadrado，A.，Carnero，A.，Dolfi，F.，Jiménez，B.，Lacal，J.C.Oncogene，8，2959-2968(1993)；Jiménez，B.，del Peso，L.，Montaner，S.，Esteve，P.Lacal，J.C.J.CellBiochem.，57，141-149(1995)；Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M.A.，Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]。这些起初的发现随后外推到裸鼠体内[Hernández-Alcoceba，R.，Fernández，F.，Lacal，J.C.Cancer Res.59，3112-3118(1999)]。关于ChoK抑制剂的研究鉴别了密胆碱-3(HC-3)为相对强效的和选择性的阻断剂[Cuadrado A.，Carnero A.，Dolfi F.，Jiménez B.and Lacal J.C.Oncogene 8，2959-2968(1993)；Jiménez B.，delPeso L.，Montaner S.，Esteve P.and Lacal J.C.J.Cell Biochem.57，141-149(1995)；Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M.A.，Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]。该具有联苯结构的胆碱同系物已用于设计新的抗肿瘤药物。因为HC-3是强效的呼吸作用麻痹剂，所以在临床应用中其不是良好的候选者。数个衍生物的合成是基于HC-3的结构修饰，以改进ChoK的抑制活性并抑制其毒性作用。由双季铵化的(bisquaternized)对称化合物产生的对增殖的抑制作用与诱导Pcho在整个细胞中产生的能力相互关联[Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M. Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)and ES 2 117 950]。当1，2-亚乙基-对-(联苄基二甲基-二基)残基用作在4位取代的两个阳离子吡啶鎓顶部之间的间隔基时[Campos，J.， M.C.，Rodríguez，V.，Gallo，M. Espinosa，A.Bioorg.& Med.Chem.Lett.10，767-770(2000)]，该结构通过其抑制分离的ChoK(在体外条件下)的能力来评价[Lacal J.C.IDrugs 4419-426(2001)]。该4-NR2基提供了相当大的作用，以及认为通过正电荷的离域作用，该基团的作用是电性的[Campos，J.， M.C.，Rodríguez，V.，Gallo，M. Espinosa.A.Bioorg.& Med.Chem.Lett.10，767-770(2000)]。已公开了在多种的人乳腺癌中ChoK活性增加[Ramírez de Molina，A.，Gutiérrez，R.，Ramos，M.A.，Silva，J.M.，Silva，J.，Sánchez，J.J.，Bonilla，F.，Lacal，J.C.Oncogene 21，4317-4322(2002)]。据近期报导，在诸如肺肿瘤、结肠直肠肿瘤和前列腺肿瘤的一些人类的肿瘤中，ChoK的变化是频繁事件[Ramírez de Molina，A.，Rodríguez-González，A.，Gutiérrez，R.， L，Sánchez，J.J.，Bonilla，F.，Rosell，R.，Lacal，J.C.Biochem.Biophys.Res.Commun.296，580-583(2002)]。
但是，现有技术以及特别是在西班牙专利第2 117 950号中描述的双季铵化的吡啶鎓衍生物显示了高水平的毒性，这限制了其长期的治疗应用。
因此，现有技术中，亟需开发具有阻断肿瘤细胞中的或由寄生虫、病毒、细菌或真菌感染产生的过程中的磷酸胆碱生物合成的活性，以及同时，具有低水平的毒性的化合物。
本发明的创作者经过勤勉的研究后，发现现有技术中及特别是在西班牙专利第2 117 950号中描述的所述化合物结构中的某些修饰出乎意料地，因而令人惊讶地显著降低了现有技术中所述化合物的毒性水平。
发明的简要说明因此，本发明的第一个目的是提供了具有通式I结构的化合物家族 该化合物结构的特征在于具有两个通过间隔基连接的N-芳基-氨基吡啶鎓基团。除了通过选择性地阻断肿瘤细胞中的或潜在地阻断由寄生虫、病毒、细菌或真菌感染产生的过程中的胆碱激酶来用作磷酸胆碱生物合成的阻断剂之外，该家族的化合物还具有低水平的毒性。
在第二个目的中，本发明提供了通式I的化合物在医药中的用途。
本发明的另一目的是提供包含至少一种通式I的化合物的药物制剂。
在另一目的中，本发明提供了通式I的化合物的制备方法。
最后，本发明提供了作为起始化合物，参与通式I的化合物的制备方法的通式VII的化合物。
本发明的详细说明在其第一个目的中，本发明提供了对应于通式I的化合物家族 其中
Q-表示药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱；R1和R’1互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3和R’3互相独立地表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R3和R’3分别与R4和R’4一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
R4和R’4互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R4和R’4分别与R3和R’3一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；以及A表示间隔基。
除了通过选择性地阻断肿瘤细胞中的或受寄生虫感染的细胞中的胆碱激酶来用作磷酸胆碱生物合成的阻断剂之外，属于此家族的所述化合物的特征还在于与现有技术中公知的那些结构相似的化合物相比，其具有较低的毒性水平。本发明所述化合物的此特征显示于下文提供的实施例。
至于本发明，间隔基“A”理解为任何二价的有机结构，该二价的有机结构用作存在于由通式I定义的结构中的两个吡啶鎓基团之间的连接链。在本发明的特定实施方案中，该间隔基A具有通式II，III，IV，V和VI之一的结构。这些通式表示基团；其中，末端的线-表示键，而不是甲基。
其中，m、n和p表示为可具有以下值的整数m＝0，1；n＝0，1-10；p＝0，1；条件是m、n和p不能同时为零值。
根据本发明，所述基团R1和R’1、R2和R’2，以及R3和R4、R’3和R’4可表示不同的基团或相同的基团，产生不对称或对称化合物。
在本发明特定实施方案中，所述基团R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基和烷氧基取代的苯基。在本发明的另一特定实施方案中，所述基团R1和R’1表示甲基、然而所述基团R2和R’2互相独立地表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的苯基。在第三个特定实施方案中，所述基团R3和R4及基团R’3和R’4，虽然互相独立地，但均共同表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
本发明优选的化合物显示于表I中
表I *R3和R4可以或者每一个为氢或者二者形成单个的基团。
最后，在本发明的优选实施方案中，药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱Q表示为Br(溴)或F6P(六氟磷酸盐)。
本发明所述化合物对转化某些致癌基因所必需的信号途径有选择性作用，该化合物在相同的强度下不影响正常细胞，因此在抗肿瘤治疗中为更大的效力留下了充足的空间。
在另一方面，因为已知数种诸如恶性疟原虫(plasmodiumfalciparum)或克氏锥虫(trypanosoma cruzi)的寄生虫、数种诸如腺病毒(adenovirus)的病毒、诸如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)的细菌和诸如白色念珠菌(Candida albicans)的真菌为了完成其在人和动物体内的感染周期，需要通过胆碱激酶的磷脂酰胆碱合成的代谢途径，所以本发明创作者实施的生物分析允许将这类活性扩展至抗病毒、抗寄生虫或抗真菌活性。在此意义上，文献中的背景支持了ChoK在Hep-G2细胞中某些核苷的细胞内代谢中的作用[参见Martin，L.T.；Faraj，A.；Schinazi，R.F.；Gosselin，G.；Mathe，C.；Imbach，J.-L.；Sommadossi，J.-P.Biochemical Pharmacology，53，75-87(1997)]，在寄生虫疾病中ChoK作为酶标记物的应用[参见Wunderlich，F.；Helwig，M.；Schillinger，G.；Vial，H.；Philippot，J.；Speth，V.Molecular and Biochemical Parasitology，23，103-115(1987)；Ancelin，M.L.；Vial，H.J.Biochimica et BiophysicaActa(BBA)-Lipids and Lipid Metabolism，875，52-58(1986)]，以及ChoK参与病毒中[Balakivera L.，Schoen G.，Thouvenin E.，Chroboczek J.J.Virol.774858-4866(2003)]、细菌中[Whiting GC，Gillespie SH.FEMSMicrobiol Lett.138141-145(1996)]以及真菌中[Mago N，Khuller GK.JMed Vet Mycol.28355-362(1990)；Mago N，Khuller GK.J Med VetMycol.28355-362(1990)]重要磷脂的生物合成。所有这些研究均支持ChoK抑制在上述疾病的治疗中可能具有重要的治疗效果。
因此，在第二个目的中，本发明提供了通式I的化合物在医药中的应用。尤其是，要求了通式I的化合物在医药中的用途。在特别的实施方案中，本发明提供了通式I的化合物用于癌症，优选为乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌和胰腺癌的治疗。在另一特别的实施方案中，本发明提供了通式I的化合物用于病毒性疾病，优选为那些由腺病毒引起的疾病的治疗；以及还用于抗寄生虫的，优选为那些由疟原虫(Plasmodium)或锥虫(Trypanosoma)引起的疾病的治疗；抗菌治疗，优选为那些由链球菌(Streptococcus)引起的疾病的治疗；以及抗真菌治疗，优选为那些念珠菌(Candida)引起的疾病的治疗。
在另一方面，要求通式I的化合物在药物制备中的用途。在特别的实施方案中，所述通式I的化合物用于制备治疗癌症，优选为乳癌、肺癌、结肠直肠癌或胰腺癌的药物。在另一特别的实施方案中，所述通式I的化合物用于制造治疗病毒性疾病，优选为那些由腺病毒引起的疾病的药物；以及用于制造抗寄生虫治疗的，优选为用于那些由疟原虫或锥虫引起的疾病的药物；用于制造治疗细菌性疾病，优选为那些由链球菌引起的疾病的药物，以及用于制造治疗真菌性疾病，优选为那些由念珠菌引起的疾病的药物。
在其第三个目的中，本发明提供了包含至少一个通式I的化合物作为活性成分的药物制剂。所述药物制剂可含有一种或多种赋形剂和/或载体物质。此外，所述制剂可含有任何其它的抑制胆碱激酶功能的活性成分。
所述赋形剂、载体物质和辅助物质必须为药剂学及药理学上可耐受的，以便其可与所述制剂或配制品中的其它组分结合而在治疗的有机体中无副作用。虽然最好的给药途径依赖于病人的情况，但是所述药物组合物或制剂包括那些适用于口服或肠胃外给药(包括皮下，皮内，肌内以及静脉给药)的药物组合物或制剂。所述制剂可以是单次剂量的形式，可根据药物学领域中公知的方法制备所述制剂。给药的活性物质的量可根据治疗的特异性而变化。
本发明还提供了制备通式I的化合物的方法。根据通式I的化合物是否具有相同或不同的氨基吡啶鎓基团，本发明的此目的有两个不同的实施方案。
a)用于获得具有相同的氨基吡啶鎓基团的通式I化合物的方法所述方法包括在有机溶剂中，以2∶1摩尔量，将相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2(其中X代表卤素原子Cl，Br或I)反应。所述反应优选地在丁酮中，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下发生。
b)用于获得具有不同的氨基吡啶鎓基团的通式I化合物的方法所述方法包括在有机溶剂中，以1∶1摩尔量，将相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2(其中X代表卤素原子；Cl，Br或I)反应，以得到单季铵化的产物，使用另一种有机溶剂，以1∶1的摩尔比，将该单季铵化的产物再与另一种不同的杂环衍生物分子反应，该另一种有机溶剂比第一种有机溶剂极性更大，使得先前形成的单季铵化的盐可以溶解。该反应的第一步优选地在丁酮，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下发生；然而第二步优选地在乙醇中，在封闭的管中以及在90-110℃的温度下进行。
最后，在其最后的目的中，本发明提供了所述通式VII的化合物，该通式VII的化合物作为起始化合物参与通式I的化合物的制备方法。
其中R1表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R4一起表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R3一起表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
在通式VII的化合物中，优选为通式VIII的化合物
作为本发明的示例性描述，提供以下实施例。
实施例制备实施例化合物1(代码ACG560B)1，1’-(苯-1，3-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺)吡啶(125mg，0.57毫摩尔)与1，3-双(溴甲基)苯(75mg，0.28毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热144小时。过滤后，用丁酮、EtOAc和Et2O进行严格的洗涤，获得白色固体状的纯化合物1(125.2mg，62.7％)；m.p.197-198℃。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.48(d，4H，H-2，6pyr，J＝6.6)；7.64(d，4H，H-3，5anil，J＝8.6)；7.57(s，1H，H-2Ph)；7.45(d，5H，H-2，6aniland H-5Ph；J＝8.6)；7.37(d，2H，H-4，6Ph，J＝7.7)；6.95(bs，4H，H-3，5pyr)；5.49(s，4H，CH2N+)；3.46(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；142.75(C-2，6pyr)；141.96(C-1anil)；136.18(C-1.3Ph)；132.78(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.73(C-5Ph)；128.37(C-2，6anil)；128.18(C-4，6Ph)；127.89(C-2Ph)；109.15(C-3，5pyr)；59.16(CH2N+)；41.42(Me)。
HRMS(m/z)计算为C32H30N4Cl2Br(M-Br)+619.1031；实际为619.1031。分析为C32H30N4Cl2Br2·1H2O。计算为C 53.43；H 4.56；N7.63％。实际为C 53.14；H 4.48；N 7.79％。
化合物2(代码ACG416B)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(N-甲基苯胺)吡啶(216mg，1.17毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(200mg，0.58毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热24小时。过滤后，用丁酮进行彻底的洗涤，通过从MeOH中重结晶来纯化所述固体产品，残留物用Et2O进行研磨。获得白色固体状的化合物2(294mg，71.5％)；m.p.124-125℃。
1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ8.35(bs，4H，H-2，6pyr)；7.84(s，2H，H-2Ph)；7.67(d，2H，H-6Ph，J＝7.7)；7.56(t，4H，H-3，5anil，J＝7.6)；7.50-7.44(m，4H，H-5Phand H-4anil)；7.39(d，2H，H-4Ph，J＝7.7)；7.33(d，4H，H-2，6anil，J＝7.5)；6.95(bs，4H，H-3，5pyr)；5.47(s，4H，CH2N+)；3.51(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，CD3OD)δ158.48(C-4pyr)；144.82(C-1anil)；143.80(C-2.6pyr)；142.60(C-1Ph)；136.82(C-3Ph)；132.01(C-3，5anil)；131.14(C-5Ph)；130.12(C-4anil)；128.99(C-4Ph)；128.82(C-6Ph)；128.58(C-2Ph)；127.52(C-2，6anil)；110.29(C-3，5pyr)；61.97(CH2N+)；41.42(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H36N4Br(M-Br)+627.2123；实际为627.2122。分析为C38H36N4Br2·2.5H2O。计算为C 60.56；H 5.48；N7.43％。实际为C 60.70；H 5.83；N 7.20％。
化合物3(代码ACG548B)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺)吡啶(235mg，1.07毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(183mg，0.53毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热24小时。过滤后，用CHCl3进行彻底的洗涤，加入Et2O直到混浊后，通过从MeOH中重结晶来纯化所述固体产品。获得白色固体状的化合物3(205mg，49.7％)；m.p.279-280℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.57(d，4H，H-2，6pyr，J＝6.5)；7.88(s，2H，H-2Ph)；7.67(d，2H，H-6Ph，J＝7.7)；7.61(d，4H，H-3，5anil，J＝8.6)；7.51(t，2H，H-5Ph，J＝7.7)；7.42(d，6H，H-4Phand H-2，6anil，J＝8.6)；6.99(bs，4H，H-3，5pyr)；5.51(s，4H，CH2N+)；3.43(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；142.72(C-2，6pyr)；142.05(C-1anil)；140.01(C-1Ph)；136.20(C-3Ph)；132.79(C-4anil)；130.53(C-3，5anil)；129.73(C-5Ph)；128.47(C-2，6anil)；127.51(C-4Ph)；127.14(C-6Ph)；127.04(C-2Ph)；109.20(C-3，5pyr)；59.55(CH2N+)；40.73(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H34N4Cl2Br(M-Br)+695.1344；实际为695.1344。分析为C38H34N4Cl2Br2·1.2H2O。计算为C 57.12；H 4.59；N7.01％。实际为C 57.55；H 4.99；N 6.97％。
化合物4(代码ACG604A)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺)吡啶(200mg，0.8毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(136mg，0.4毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和Et2O进行彻底地洗涤，获得纯的白色固体状的化合物4(270mg，79.7％)；m.p.312-313℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.63(d，4H，H-2，6pyr，J＝7.1)；7.92(s，2H，H-2Ph)；7.75(s，2H，H-4anil)；7.70(d，2H，H-6Ph，J＝7.6)；7.62(d，4H，H-2，6anil，J＝1.8)；7.53(t，2H，H-5Ph，J＝7.6)；7.45(d，2H，H-4Ph，J＝7.6)；7.04(d，4H，H-3，5pyr，J＝7.1)；5.56(s，4H，CH2N+)；3.44(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ156.20(C-4pyr)；145.27(C-1anil)；142.86(C-2，6pyr)；140.08(C-1Ph)；136.11(C-3Ph)；135.34(C-3，5anil)；129.70(C-5Ph)；128.33(C-4anil)；127.55(C-4Ph)；127.14(C-6Ph)；127.07(C-2Ph)；125.97(C-2，6anil)；109.53(C-3，5pyr)；59.65(CH2N+)；40.59(Me)。
HRMS(m/z)计算为C38H32N4Cl4Br(M-Br)+763.0564；实际为763.0563。分析为C38H32N4Cl4Br2·0.1H2O。计算为C 53.81；H 3.81；N6.60％。实际为C 53.41；H 4.19；N 6.25％。
化合物5(代码RSM964A)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(212mg，0.78毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)苯(134mg，0.39毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮、EtOAc和Et2O进行彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物5(134mg，40％)；m.p.217-218℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.24(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.18(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.84(s，2H，H-2Ph)；7.63(d，J＝7.5，2H，H-5quin)；7.56-7.43(m，18H，H-5，6Ph，H-2，3，5，6anil，H-3，6，7quin)；7.23(d，J＝7.4，2H，H-4Ph)；6.08(s，4H，N+-CH2)；3.74(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.87(C-4quin)；147.46(C-2quin)；146.42(C-1anil)；140.03(C-1Ph)；138.83(C-8aquin)；135.61(C-3Ph)；133.50(C-7quin)；131.69(C-4anil)；130.27(C-3，5anil)；129.62(C-5Ph)；127.35(C-6Ph)；127.18(C-2，6anil)；126.73(C-6quin)；126.09(C-4Ph)；125.87(C-5quin)；125.67(C-2Ph)；119.65(C-4aquin)；119.14(C-8quin)；107.10(C-3quin)；57.28(N+-CH2)；44.94(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H38N4Cl2Br2[(M-Br)]+795.1657；实际为795.1656。分析为C46H38N4Cl2Br2·3H2O。计算为C 59.31；H 4.76；N6.01％。实际为C 59.24；H 4.70；N 5.65％。
化合物6(代码RSM820C)1，1’-(联苯-3，3’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与3，3’-双(溴甲基)联苯(168mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和CHCl3彻底地洗涤，加入Et2O直到混浊后，从EtOH或EtOH/MeOH中重结晶来纯化所述固体产品，获得浅黄色固体状的化合物6(154mg，45％)；m.p.220-221℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.5，2H，H-2quin)；8.29(d，J＝1.7，2H，H-8quin)；7.85(s，2H，H-2Ph)；7.64(d，J＝7.2，2H，H-5quin)；7.57-7.45(m，16H，H-5，6Ph，H-2，3，5，6anil，H-3，6quin)；7.25(d，J＝7.7，2H，H-4Ph)；6.08(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ157.68(C-4quin)；148.01(C-2quin)；146.14(C-1anil)；140.14(C-1Ph)；139.85(C-8aquin)；138.48(C-7quin)；135.51(C-3Ph)；132.11(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.80(C-5Ph)；129.45(C-6Ph)；127.32(C-2，6anil)；126.89(C-6quin)；126.12(C-4Ph)；125.91(C-5quin)；125.82(C-2Ph)；118.48(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.38(C-3quin)；57.14(N+-CH2)；45.18(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H36N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+783.1616；实际为783.1616。分析为C46H36N4Cl4Br2·1.5H2O。计算为C 56.76；H 4.04；N 5.76％。实际为C 56.72；H 4.18；N 5.71％。
化合物7(代码RSM932A)1，1’-(联苯-4，4’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(240mg，0.89毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苯(152mg，0.44毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物7(121mg，30％)；m.p.255-257℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.12(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.83(pst，J＝7.5，2H，H-7quin)；7.66(d，J＝8.2，2H，H-5quin)；7.55(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.44(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.56-7.39(m，12H，H-2，3，5，6Ph，H-3quin，H-6quin)；6.05(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)δ157.86(C-4quin)；147.41(C-2quin)；146.40(C-1anil)；139.11(C-1Ph)；138.78(C-8aquin)；134.30(C-4Ph)；133.47(C-7quin)；131.69(C-4anil)；130.26(C-3，5anil)；127.34(C-3，5Ph)；127.18(C-2，6anil)，(C-2，6Ph)；127.08(C-6quin)；126.08(C-5quin)；119.65(C-4aquin)；119.12(C-8quin)；107.06(C-3quin)；56.94(N+-CH2)；44.94(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H38N4Cl2Br2[(M-Br)]+795.1657；实际为795.1658。分析为C46H38N4Cl2Br2·2H2O。计算为C 60.48；H 4.63；N6.13％。实际为C 60.06；H 4.48；N 5.87％。
化合物8(代码RSM824B)1，1’-(联苯-4，4’-二基亚甲基)双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(100ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苯(168mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物8(195mg，48％)；m.p.276-277℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.14(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.23(d，J＝1.6，2H，H-8quin)；7.73(d，J＝8.3，2H，H-5quin)；7.69(d，J＝8.4，4H，H-2，6Ph)；7.56(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.46(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.50-7.46(m，6H，H-6quin，H-3quin)；7.41(d，J＝8.4，4H，H-3，5Ph)；6.04(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.69(C-4quin)；147.98(C-2quin)；146.13(C-1anil)；139.82(C-8aquin)；139.21(C-1Ph)；138.51(C-7quin)；134.22(C-4Ph)；132.14(C-4anil)；130.50(C-3，5anil)；129.45(C-2，6anil)；127.54(C-3，5Ph)；127.33(C-6quin)；127.23(C-2，6Ph)；126.52(C-5quin)；118.47(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.33(C-3quin)；56.83(N+-CH2)；45.19(Me)。
HRMS(m/z)计算为C46H36N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+783.1616；实际为783.1614。分析为C46H36N4Cl4Br2。计算为C 58.38；H 3.83；N5.92％。实际为C 58.73；H 3.96；N 5.74％。
化合物9(代码RSM936A)1，1’-[亚乙基-双(苯-1，4-二基亚甲基)]双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(204mg，0.76毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苄(140mg，0.37毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮和CHCl3彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物9(70mg，20％)；m.p.212-214℃。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.19(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.10(d，J＝8.9，2H，H-8quin)；7.82(pst，J＝7，5，2H，H-7quin)；7.54(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.44(d，J＝8.9，4H，H-2，6anil)；7.52-7.39(m，6H，H-3quin，H-5quin，H-6quin)；7.24(s，8H，H-2，3，5，6Ph)；5.98(s，4H，N+-CH2)；3.73(s，6H，Me)；2.80(s，4H，CH2-Ph)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.80(C-4quin)；147.34(C-2quin)；146.44(C-1anil)；141.55(C-1Ph)；138.74(C-8aquin)；133.36(C-7quin)；132.32(C-4Ph)；131.63(C-4anil)；130.25(C-3，5anil)；128.79(C-3，5Ph)；127.26(C-6quin)；127.17(C-2，6anil)；126.74(C-2，6Ph)；126.04(C-5quin)；119.66(C-4aquin)；119.19(C-8quin)；107.06(C-3quin)；57.10(N+-CH2)；44.93(Me)；36.22(CH2-Ph)。
HRMS(m/z)计算为C48H42N4Cl2Br2[(M-Br)]+823.1970；实际为823.1970。分析C48H42N4Cl2Br2·1H2O。计算为C 62.42；H 4.80；N6.07％。实际为C 62.29；H 4.59；N 6.09％。
化合物10(代码RSM828B)1，1’-[亚乙基-双(苯-1，4-二基亚甲基)]双[4-(4-氯-N-甲基苯胺基)-7-氯喹啉鎓]二溴化物将干燥的丁酮(40ml)中的7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉(300mg，0.98毫摩尔)与4，4’-双(溴甲基)联苄(182mg，0.49毫摩尔)的混合物于100℃在封闭的管中加热72小时。过滤后，用丁酮彻底地洗涤，获得纯的浅黄色固体状的化合物10(229mg，48％)；m.p.256-257℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.11(d，J＝7.4，2H，H-2quin)；8.18(d，J＝1.5，2H，H-8quin)；7.55(d，J＝8.8，4H，H-3，5anil)；7.46(d，J＝8.8，4H，H-2，6anil)；7.56-7.44(m，6H，H-3quin，H-5quin，H-6quin)；7.24(s，8H，H-2，3，5，6Ph)；5.97(s，4H，N+-CH2)；3.72(s，6H，Me)；2.82(s，4H，CH2-Ph)。13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ157.63(C-4quin)；147.91(C-2quin)；146.16(C-1anil)；141.74，139.75and 138.88(C-7quin，C-8aquinandC-4ph)；132.20(C-4anil)；132.08(C-1Ph)；130.50(C-3，5anil)；129.39(C-6quin)；128.99(C-3，5Ph)；127.32(C-2，6anil)；126.90(C-2，6Ph)；126.48(C-5quin)；118.55(C-8quin)；118.35(C-4aquin)；107.32(C-3quin)；57.02(N+-CH2)；45.17(Me)；36.33(CH2-Ph)。
HRMS(m/z)计算为C48H40N4Cl4Br2[(M-HBr-Br)]+811.1927；实际为811.1926。分析C48H40N4Cl4Br2·2H2O。计算为C 57.05；H 4.39；N5.54％。实际为C 57.14；H 4.07；N 5.46％。
制备试剂化合物α，α’-二溴-间-二甲苯是由Sigma-Aldrich Química S.A.提供的商品化产品，该公司地址为Avenida Valdelaparra No.51-53，28100Alcobendas(马德里)。
α，α’-二溴-间-二甲苯利用各自参考文献所描述的方法制备以下起始原料1.-3，3’-双(溴甲基)联苯 Werner，W.J.Org.Chem.17，523-528(1952)。
2.-4，4’-双(溴甲基)联苯 Szendey，G.L.，Munnes，S.Chem.Ber.94，38-42(1961)；Staab，H.A.，Haenel，M.Chem.Ber.106，2190-2202(1973)。
3.-双-对-(溴甲基)联苄 Cram，D.J.，Steinberg，J.J.Am.Chem.Soc.73，5691-5704(1951)。
4.-4-(N-甲基苯胺基)吡啶 Campos，J.， M.C.，Sánchez，R.，Gómez-Vidal，J.A.，Rodríguez-Gonzá1ez，A.， M.，Gallo，M. Lacal，J.C.，Espinosa，A.Bioorg.& Med.Chem.10，2215-2231(2002)。
5.-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)吡啶 Conejo-García，A.，Campos，J.，Sánchez，R.，Rodríguez-González，A.，Lacal，J.C.，Gallo，M. Espinosa，A.Eur.J.Med.Chem.38，109-116(2003)。
6.-4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶 根据先前描述的方法，从盐酸4-氯吡啶和4-(3，5-二氯-N-甲基苯胺基)吡啶中制备此化合物Conejo-García，A.，Campos，J.，Sánchez，R.，Rodríguez-González，A.，Lacal，J.C.，Gallo，M. Espinosa，A.Eur.J.Med.Chem.38，109-116(2003)。另一方面，通过以下研究中描述的方法获得3，5-二氯-N-甲基苯胺Leeson，P.D.，Baker，R.，Carling，R.W.，Curtis，N.R.，Moore，K.W.，Williams，B.J.，Foster，A.C.，Donald，A.E.，Kemp，J.A.，Marshall，G.R.J.Med.Chem.34，1243-1252(1991)。
7.-4，4’-双(氯甲基)-[2，2’]联噻唑.
参考Chi，AND.F.；Chu，T.I.Record(Peking)，1，45(1957)；Chem.Abstract，52，6321 a，b(1957)。
8.-4，4’-双(溴甲基)-[2，2’]联噻唑基-5，5’-二羧酸二乙酯 参考Lehn，J.-M.；Regnouf de Vains，J.-B.Tetrahedron Lett.，30，2209-2212(1989)。
9.-6，6’-双(溴甲基)-[2，2’]联吡啶
参考Rodríguez-Ubis，J.-C.；Alpha，B.；Plancherel，D.；Lehn，J.-M.Helv.Chim.Acta，67，2264(1984)。
10.-6，6’-双(溴甲基)-4，4’-二甲基-[2，2’]联嘧啶 参考Lehn，J.-M.；Regnouf de Vains，J.-B.Tetrahedron Lett.，30，2209-2212(1989)。
新起始原料的制备通式VII的化合物 可通过在回流状态下，4-苯胺或喹啉衍生物与相应的4-氯-苯胺在冰醋酸中反应来制备。冷却后，用氢氧化钠溶液碱化所述溶液，随后将所得混悬液进行浓缩，并通过快速色谱法纯化。
获得通式VIII的化合物的实施例提供如下
化合物VIII A4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉将冰醋酸(15ml)中的4-氯喹啉(5毫摩尔)和4-氯-N-甲基苯胺(10毫摩尔)的溶液在氩气流中，加热回流3小时。冷却后，用10％NaOH溶液碱化所述溶液直到pH＝10，并将所得混悬液在旋转蒸发器中进行浓缩，且利用快速色谱法纯化(9∶1，CH2Cl2∶MeOH)，得到浅黄色糖浆状的目标分子(97％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝8.5，1H，H-2quin)；7.70(d，J＝8.5，1H，H-5quin)；7.65(t，J＝7.9，1H，H-7quin)；7.38(t，J＝8.5，1H，H-6quin)；7.35(d，J＝7.9，1H，H-8quin)；7.17(d，J＝8.9，2H，H-3，5anil)；7.14(d，J＝8.5，1H，H-3quin)；6.76(d，J＝8.9，2H，H-2，6anil)；3.45(s，6H，Me)。13C-NMR(100MHz，CDCl3)δ153.37(C-4quin)；151.16(C-2quin)；150.01(C-1anil)；148.17(C-8aquin)；135.02(C-4anil)；130.07(C-7quin)；129.52(C-6quin)；129.29(C-3，5anil)；126.26(C-4aquin)；126.07(C-5quin)；124.40(C-8quin)；119.79(C-2，6anil)；115.08(C-3quin)；41.75(Me)。
HRMS(m/z)计算为C16H13N2Cl[(M+H)]+269.0845；实际为269.084。分析C16H13N2Cl。计算为C 71.51；H 4.88；N 10.42％。实际为C 71.60；H 4.71；N 10.33％。
化合物VIII B7-氯-4-(4-氯-V-甲基苯胺基)喹啉将冰醋酸(15ml)中的4，7-二氯喹啉(5毫摩尔)和4-氯-N-甲基苯胺(10毫摩尔)的溶液在氩气流中，加热回流3小时。冷却后，用10％NaOH溶液碱化所述溶液直到pH＝10，并将所得混悬液在旋转蒸发器中进行浓缩，且利用快速色谱法纯化(9∶1，CH2Cl2∶MeOH)，得到浅黄色糖浆状的所述中间体II(59％)。
1H-NMR(300MHz，CH3OD)δ8.66(d，J＝7.1，1H，H-2quin)；7.94(d，J＝2.0，1H，H-8quin)；7.53(d，J＝8.8，2H，H-3，5anil)；7.41-7.37(m，2H，H-5，6quin)；7.47(d，J＝8.8，2H，H-2，6anil)；7.32(d，J＝7.1，2H，H-3quin)；3.76(s，3H，Me)。13C-NMR(75MHz，CH3OD)δ159.86(C-4quin)；147.63(C-7quin)；143.86(C-2quin)；141.46(C-1anil)；140.56(C-8aquin)；135.02(C-4anil)；132.01(C-3，5anil)；129.92(C-6quin)；128.58(C-2，6anil)；127.98(C-5quin)；120.56(C-8quin)；118.71(C-4aquin)；107.38(C-3quin)；45.74(Me)。
HRMS(m/z)计算为C16H12N2Cl2[(M+H)]+303.0456；实际为303.0456。分析C16H12N2Cl2。计算为C 63.38；H 3.99；N 9.24％。实际为C 63.46；H 3.71；N 9.17％。
人CHOK活性的体外分析分析缓冲液(100mM Tris-HCl pH 8.0、100mM MgCl2、10mM ATP和200μM胆碱，存在有甲基[14C]-氯化胆碱(50-60μCi/mmol))中的E.coli中表达的重组胆碱激酶用于所述体外分析中。在37℃下，所述反应进行30分钟，并用冰冷却的三氯乙酸停止反应，直到终浓度为16％。用水饱和的乙醚洗涤样品并冻干。根据已描述的方法在薄层色谱板中解析亲水的胆碱衍生物[Ramírez，A.，Penalva，V.，Lucas，L.，Lacal，J.C.Oncogene 21，937-946(2002)]。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6进行这些分析。所述结果总结于表II中。
细胞增殖分析将HT-29细胞接种在24孔板中(35×103细胞/孔)并孵育24小时。然后在普通的培养基中用不同浓度的ChoK抑制剂处理该细胞。三天后，抽吸所述的孔并加入新鲜的培养基和更多量的药物，将所述细胞再维持三天。利用具有一些改进的[参见Hernández-Alcoceba，R.，Saniger，L.，Campos，J.， M.C.，Khaless，F.，Gallo，M. Espinosa，A.，Lacal，J.C.Oncogene，15，2289-2301(1997)]结晶紫方法[参见Gillies，R.J.，Didier，N.，Denton，M.Anal.Biochem.159，109-113(1986)]来量化每孔中剩余的细胞。简而言之，所述细胞用TD缓冲液洗涤，并用1％戊二醛固定15分钟。再用TD洗涤后，用0.1％结晶紫将所述细胞核至少染色30分钟，并用蒸馏水洗涤三次。将所吸附的色彩再混悬在10％醋酸中，并在分光计中测定595nm处的吸光度。所得结果以IC50值的形式概述，即产生50％抑制作用所需要的化合物浓度。通过反复的曲线调整来确定该值。对该曲线中的每个点要测定两个值，所述试验重复两或三次，并评估平均值。在少数情况中，所述两个值差异超过50％，进行第三次试验以确定真实值。作为效价测量的IC50值用于将所述化合物的生物活性与其化学结构相关联。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术中公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6实施这些分析。所述结果总结于表II中。
毒性分析在试验开始时，用1月龄的体重约25-30克的Balb C小鼠进行毒性分析。用每日剂量为0.1mg/kg直至为25mg/kg不同量的的每种化合物向所述小鼠连续接种五天。五天剂量后，使该小鼠休息9天，并分析存活率和一般状况，特别关注对小鼠的皮毛、行为、摄食习性和体重的作用。将引起50％死亡率的剂量记录为相应的毒性IC50。用所述新化合物获得的结果显示经其相应的IC50测定，所述活性有明显的改善，同时其毒性减少。
用本发明所述的化合物1-10，以及现有技术中公知的化合物，尤其是专利ES 2 117 950中的化合物EC1-EC6实施这些分析。所述结果总结于表II中。
以下表II中总结了上述进行的分析中获得的结果。
表II
*R3和R4可以或者每一个为氢或者两者形成单个的基团。
从表II的数据中可以观察到与专利ES 2 117 950中所述的化合物相比，本发明所述的化合物具有大大降低的毒性，然而其对肿瘤培养物来源的细胞具有相似的或更大的抗增殖活性价值，以及对接种在免疫抑制小鼠中的人肿瘤具有相似的或更大的体内抗肿瘤活性。
权利要求
1.具有通式I的化合物 其中Q-表示药物适合的有机酸或无机酸的共轭碱；R1和R’1互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3和R’3互相独立地表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R3和R’3分别与R4和R’4一起，且互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4和R’4互相独立地表示选自H和C1-6烷基的基团，所述C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者R4和R’4分别与R3和R’3一起，且互相独立地表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；以及A表示间隔基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于间隔基A具有选自 其中，m、n和p表示能具有以下值的整数m＝0，1；n＝0，1-10；p＝0，1；其中m、n和p不能同时为零值； 的通式。
3.如前述权利要求所述的化合物，其特征在于R2和R’2互相独立地表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基和烷氧基取代的苯基。
4.如权利要求3所述的化合物，其特征在于R1和R’1表示甲基，以及R2和R’2互相独立地表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的苯基。
5.如前述权利要求所述的化合物，其特征在于虽然相互独立地，但是R3和R4与R’3和R’4一起表示任选地由一种或多种卤素取代基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于其具有以下取代基 *R3和R4或者每一个为氢或者两者形成单个的基团。
7.如权利要求6所述的化合物，其特征在于Q表示为Br(溴)或F6P(六氟磷酸盐)。
8.包含至少一种如权利要求1至7定义的化合物作为活性成分的药物制剂。
9.如权利要求1至7所述的化合物在医药中的用途，特别是其在癌症治疗、抗病毒、抗寄生虫和抗真菌治疗中的用途。
10.如权利要求1至7所述的化合物在乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌及胰腺癌的治疗中的用途。
11.如权利要求1至7所述的化合物在药物制备，特别是在用于癌症治疗、抗病毒、抗寄生虫和抗真菌治疗的药物制备中的用途。
12.如权利要求1至7所述的化合物在用于乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌及胰腺癌治疗的药物制备中的用途。
13.制备如权利要求1所述化合物的方法，其包括a)在有机溶剂中，以2∶1摩尔量，使相应的通式VII的杂环衍生物与双卤代衍生物AX2反应，其中X代表卤素原子Cl、Br或I，或者b)在有机溶剂中，以1∶1摩尔比，将相应的所述通式VII的杂环衍生物与所述双卤代衍生物AX2反应，其中X代表卤素原子Cl、Br或I，以得到单季铵化的产物，使用比第一种有机溶剂极性更大的有机溶剂，以1∶1的摩尔比，将所得到的单季铵化产物再与另一种不同的杂环衍生物分子反应。
14.具有通式VII的化合物 其中R1表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基或烷氧基取代；R2表示任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的芳基；R3表示选自H、卤素、三氟甲基、羟基、氨基、烷氧基和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R4一起表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基；R4表示选自H和C1-6烷基的基团，该C1-6烷基任选地由卤素、三氟甲基、羟基、氨基或烷氧基取代，或者与R3一起表示为任选地由卤素、三氟甲基、羟基、C1-6烷基、氨基或烷氧基取代的-CH＝CH-CH＝CH-基。
15.如权利要求14所述的具有式4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉 和7-氯-4-(4-氯-N-甲基苯胺基)喹啉的化合物
全文摘要
本发明提供了通式I的化合物，该通式I化合物通过选择性阻断在肿瘤细胞或受寄生虫感染侵袭的细胞中的胆碱激酶来阻断磷酸胆碱的生物合成，从而用于治疗包括人类的动物体内的肿瘤和寄生虫病或由病毒、细菌和真菌引起的疾病。本发明还涉及制备上述化合物的方法和所述方法中的某些中间体。
文档编号A61P35/00GK1910153SQ200580002428
公开日2007年2月7日 申请日期2005年1月11日 优先权日2004年1月14日
发明者胡安卡洛斯·劳科尔圣胡安, 华金·坎波斯罗萨, 米格尔安赫尔·加略梅萨, 安东尼奥·埃斯皮诺萨乌韦达 申请人:康斯乔最高科学研究公司, 西班牙格拉纳达大学
最新回复(0)