芒果叶总苷止咳中药制剂及其生产方法
专利名称：芒果叶总苷止咳中药制剂及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的中药制剂，特别是以芒果叶或扁桃叶为原料提取其有效成分作为止咳药的中药制剂及其生产方法。
背景技术：
芒果和扁桃是味道鲜美、营养丰富的热带水果，芒果为漆树科植物Mangiferae L.；扁桃为漆树科植物Mangiferae persiciformis C.Y.Wu et T.L.Ming。随着人们生活的普遍提高，两种果树栽种的面积越来越多。尤其是芒果，二十多年来，我国的广西、广东、海南、云南等省区不断引进和培育新品种，使我国成为了芒果生产大国。广西的芒果树种植面积就超过10万公顷，扁桃树种植面积5万公顷，因此芒果叶和扁桃叶的数量也很多，每年修枝和果树淘汰所产生的叶子有上千万吨。以往果农对芒果叶和扁桃叶的处理一般是将它们当作柴火烧掉或者任其在果园中腐烂，造成了资源的极大浪费。芒果叶和扁桃叶性味相近，是很有医药价值的中药材；化学成分方面，都含有芒果苷、异芒果苷、高芒果苷等成分。据有关文献报道，芒果叶性味酸、甘、凉，平，具有行气疏滞，去痧积、清热解毒、消肿止痛、退湿的功能，用于感冒发烧，咽喉肿痛、风湿等症，从芒果叶和扁桃叶中提取的芒果苷具有抗菌、抗病毒、祛痰、镇咳等作用。《福建中医药》2001，32(2)刊登的“复方芒果叶的薄层层析及抗菌试验”提到，将芒果叶提取物进行体外抗菌实验，结果表明，芒果叶对金葡25023菌、金葡京耐菌、白葡球菌、奈氏球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、福氏杆菌、伤寒杆菌均有较强抗菌作用。广西民族医药研究所余胜民、钟鸣在《中国中医药科技》1999，6(3)发表的“芒果苷药理研究进展”综述了芒果苷的一些药用机理，指出了芒果苷(mangiferin)是一种四羟基吡酮的碳糖苷，属双苯吡酮类化合物，现代药理和临床研究证明，芒果苷具有以下多方面生理活性和药理作用。1、对中枢神经系统作用，芒果苷具有明显的中枢神经系统兴奋作用。50-100mg/kg剂量的芒果苷腹腔注射(i.p)可使所有受试动物出现动作震颤，竖毛，强迫性撕打和自主活动增加等症状。说明芒果苷可能是中脑边缘系统D2受体的激动剂。2、对心血管系统的作用，1-2mg剂量的芒果苷对正常或功能低下的离体Ringer’s液留灌注蛙心均有短暂，确切的增强心肌收缩力的作用，凡该作用不被心得安所阻断，认为它可能是一种心脏直接刺激剂。3、保肝利胆作用，采用模似高原急性低氧造成大鼠肝损伤的方法，观察芒果苷对肝脏的保护作用，在大鼠肝溶酶体体外温孵实验中发现，芒果苷有稳定溶酶体膜的作用，且对溶酶体酸性磷酶活力有直接抑制作用。4、抗脂质过氧化作用，芒果苷能快速彻底地清除[-dipheny]-2-picrylhydrazyl(DPPH)，并抑制大鼠肝脏微粒体中由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯还原酶(NADPH)或非酶类因子抗坏血酸、Fenton’s提示芒果苷具有抗氧化活力，可能由于与它能专一清除类脂化合物过氧化反应起动阶段的自由基有关。5、抗病毒作用，芒果树叶提取的芒果苷进行抗I型单纯疱疹病毒(HSV-I)作用的实验观察。检测其抗病毒药效时，采用原代人胚肌皮单层细胞，病毒对照组与给药组平行操作25-250ug/ml药物直接或同时作用病毒以及先感染病毒在细胞内复制。芒果苷抑制50％空斑形成有效浓度(ECso)为111.7ug/ml。药物加入和去除试验结果提示芒果苷抗HSV-B作用的机制可能是抑制病毒在细胞内复制的晚期。6、免疫、抗炎、镇痛作用，一定剂量芒果苷提高红细胞补体受体(CRI)活性，可能与抑制脂质过氧化反应有关。有人提出在应用体外诱生抗体方法研究中药免疫调节作用机理的实验中，证明芒果苷(0.1ug/ml)有免疫抑制作用而不影响细胞活力。曾有药理实验证明芒果苷治疗慢性支气管炎有较好的疗效，疗程20d，有效率可达82.4％。另外，公开文献也分别报道了芒果苷的治病作用，如“芒果苷对II型单纯疱疹病毒体外复制的抑制作用”《中国药理学报》1993，14(5)，“芒果苷对大鼠血液过氧化脂质代谢的影响”《中国中医药科技》1999，6(2)，“芒果苷对肝癌大鼠血清上皮钙粘蛋白和癌胚抗原以及单胺氧化酶的影响”《医学综述》2001，7(12)，“芒果苷对肝癌可溶性E-上皮钙黏蛋白及癌胚抗原和单胺氧化酶的影响”《中华消化杂志》2001，21(8).“脂质过氧化大鼠脑组织超微结构改变及芒果苷对脑组织的保护作用”《广西科学》2000，7(2)。“芒果苷对肝癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导”《中华消化杂志》2002，22(6)，观察芒果苷对人肝癌细胞株BEL-7404的毒性和诱导凋亡作用及对细胞周期的阴滞作用，探讨芒果苷作为肿瘤化学预防药物的可能性，用MTT法观察芒果苷对人肝癌细胞株增殖的抑制作用。用光学显微镜观察芒果苷对细胞的毒性作用。以流式细胞仪检测芒果苷对细胞凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果表明，不同浓度的芒果苷在不同时间对肝癌细胞株均有毒性作用，并随浓度升高和作用时间的延长而毒性作用增强，凋亡也随之增加，芒果苷阻滞肝癌细胞周期于G2/M期，20μmol/L芒果苷作用24h后上述效果开始明显。证明芒果苷对肝癌细胞株有明显的毒性作用，能诱导肝癌细胞凋亡和阻滞细胞周期于G2/M期具有潜在药用价值。
从上述检索到的文献了解到，由于芒果苷对人体的一些疾病有较好的治疗作用，所以芒果叶和扁桃叶已经得到越来越多的应用。本申请人广西中医学院制药厂生产了芒果止咳片，含有芒果叶提取物、扑尔敏、鱼腥草素钠(人工合成品)，是中西药复方制剂。具有宣肺化痰，止咳平喘的功效，主要用于咳嗽、气喘、多痰等症。有关芒果止咳片的研究在科技文献中也发表过一些文章，如“芒果止咳片的药效学研究(I)”，郑作文、邓家刚等，广西中医学院药理教研室，《中医药学刊》.2002，20(3)，介绍芒果止咳片能明显延长豚鼠Ach引喘的潜伏期和对抗Ach所致气管平滑肌的收缩，对小鼠二氧化硫引咳能明显延长咳嗽潜伏期，并能减少刺激猫喉上神经引起的咳嗽粢九，能明显增加小鼠气管的酚红排泌量，并有一定的抗炎症渗出及平喘，止咳，化痰作用。“芒果止咳片治疗风热犯肺型咳嗽的疗效观察”邓家刚、郑作文，广西中医学院，《辽宁中医杂志》2000，27(9)，为观察芒果止咳片对风热犯肺型咳嗽的临床治疗效果，用芒果止咳片治疗风热犯肺咳嗽300例，总有效率93.3％，随机设银黄片对照组100例，总有效率91.0％，两组疗效比较无显著性差异，结果表明，芒果止咳片用于治疗风热犯肺型咳嗽疗效确切。但目前有关从芒果叶和扁桃叶中提取芒果苷的公开文献不多，而且基本是论述芒果苷用于抗肿瘤的药理作用方面的文章，未提及芒果苷中包含的所有成分。
技术内容本发明人经过几年的研究和试验，对从芒果叶或扁桃叶中提取芒果苷的各种方法及芒果苷治疗一些疾病的机理进行了深入的探索，特别是对芒果苷在止咳、化痰、平喘、抗炎的作用进行了药效学、药理学的试验，取得了重要的成果。
本发明的技术方案包括芒果叶总苷的提取和芒果叶总苷在止咳、化痰、平喘、抗炎的应用。所述芒果叶总苷是芒果叶和扁桃叶中具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的成分，在干叶中的含量达2％以上。芒果叶总苷包括芒果苷、异芒果苷、高芒果苷等几种成分，芒果叶总苷中，以芒果苷的含量最高。芒果苷和异芒果苷是同分异构体，高芒果苷是芒果苷的同核衍生物，结构上，在苷元母核上多一个“-CH3”。药理实验证明，这几种苷均具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用，而且，当它们混合使用时，具有一定的协同增效作用，即作用强度比单独使用的效果总和要好。
本发明的止咳中药制剂包含有芒果叶总苷和辅料，其成分和重量百分含量如下(干物质计)芒果叶总苷 0.05-100％辅料0-99.95％本发明所述的止咳中药制剂，生产工艺采用惯常的、通用的制药工艺完成，工艺包括从芒果叶或扁桃叶中提取芒果叶总苷、芒果叶总苷与辅料混合、压制或调配成产品等几个过程。
从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序。
所述的乙醇回流提取，用50-95％(体积浓度)以上的乙醇水溶液回流提取2～3次，每次加相当于芒果叶(或扁桃叶)重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1～1.5小时。
所述的非极性溶剂萃取，是用石油醚、苯、乙醚、溶剂汽油、乙酸乙脂、乙酸丁脂等非极性溶剂萃取除去叶绿素等脂溶性成分的过程。
所述的脱色，在溶液中加入活性碳、硅藻土等进行，或者用大孔树脂进行脱色。
所述的结晶，是指去除溶液中的乙醇和大部分水后，冷却，将芒果叶总苷等成分析出的过程。
采用上述提取方法得到的芒果叶总苷是一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的芒果苷及其同分异构体形成的混合物，可以制成止咳中药制剂，剂型采用口服药物剂型，一般有片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、口含片等，各种剂型所需的辅料采用符合国家或国际标准的起赋形、赋香、防腐、填充等作用的制剂，如制备口服制剂时，选用的辅料可以是淀粉、羧甲基纤维素、环糊精、蔗糖、硬脂酸镁、聚乙二醇等常规填充剂，可采用药剂学常规制备工艺；在制备注射制剂时，可以采用加入脂质体、聚乙二醇、药用酒精、去氧胆酸、胆固醇等常规填充剂，可采用药剂学常规制备工艺。
本发明与现有技术相比，其突出的实质性特点和显著的进步是1、提供了芒果叶总苷的提取方法，得到了芒果苷和异芒果苷、高芒果苷的混合物，治疗效果比芒果苷单一作用的好。芒果苷60-80％，异芒果苷3-9％，高芒果苷0.5-1.8％2、芒果叶总苷是芒果叶和扁桃叶止咳、化痰、平喘、抗炎的有效成分。用芒果叶总苷生产止咳中药，具有有效成分含量高，剂量小等特点。
3、芒果止咳片使用芒果叶提取物，本发明使用芒果叶或扁桃叶的有效部位。
4、芒果止咳片是中西药复方制剂，本发明是纯中药制剂。
具体实施例方式
一、芒果叶总苷提取实施例一干芒果叶，切成碎片或加工成粗粉，以95％的乙醇回流提取2次，每次加相当于芒果叶重量10倍的乙醇，每次回流1.5小时。合并提取液，回收乙醇，用热水化开，用石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤，滤渣即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达50％以上。
实施例二鲜芒果叶，以75％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加相当于芒果叶重量8倍的乙醇水溶液，每次回流1小时。合并提取液，回收乙醇，用乙酸丁脂萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤，滤渣即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达50％以上。
实施例三干扁桃叶，以50％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加相当于扁桃叶重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1.5小时。合并提取液，回收乙醇，用石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤。滤渣再用50％的乙醇水溶液回流溶解，溶解液用活性碳脱色，过滤，滤液回收乙醇，去除大部分水，结晶析出的即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达70％以上。
实施例四实施实例一所得的芒果叶总苷，用50％的乙醇水溶液回流溶解，上大孔树脂D301脱色，脱色液回收乙醇，去除大部分水，结晶析出的即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达70％以上。
二、止咳中药制剂生产实例实施例一按提取实例一方法所得芒果叶总苷，加入2倍量的白糖细粉，用70％酒精湿润，制成颗粒，分装，即得芒果叶总苷颗粒剂。
实施例二按提取实例三方法所得芒果叶总苷，加入适量淀粉和滑石粉，用70％酒精湿润，制成颗粒，用压片机压片，即得芒果叶总苷片。
实施例三按提取实例三方法所得芒果叶总苷，加入适量结晶山梨醇，制成口含片。
实施例四按提取实例二方法所得芒果叶总苷，加入适量羧甲基纤维素、环糊精，得到芒果叶总苷胶囊。
药理药效学及临床试验情况一、药理实验结果本发明生产的片剂(芒果叶总苷片)，经广西中医学院药理教研室进行试验，结果表明，芒果叶总苷片口服给药，12.6g生药/kg和6.3g生药/kg，可显著延长小鼠氨水致咳的潜伏期，减少咳嗽次数，促进气管酚红排泌量，显著延长由0.4％的磷酸组织胺和2％氯化胆碱(1∶1)的混合引起豚鼠出现IV哮喘反应的潜伏期，抑制巴豆油引起小鼠耳廓肿胀，提示芒果叶总昔片具有镇咳、化痰、平喘、抗炎作用。
二、毒理实验结果本发明生产的片剂(芒果叶总苷片)，经广西中医学院药理教研室进行急性毒性试验，结果表明，芒果叶总苷片口服给药的LD50为426g生药/kg体重，95％可信限为468-387g生药/kg体重。结果提示，按正常日剂量(36g生药)，不会出现毒性反应。
三、临床报告病例1陈某，女，28岁。自述2天前出现咳嗽，咯痰白、粘，伴咽痛口干，恶寒发热；无气喘、胸闷、心悸等。检查体温38.2℃，咽充血(+)，两侧扁桃体I°肿大，无脓性分泌物，心肺检查无异常。舌质红，舌苔薄黄，脉浮数。中医诊断咳嗽(风热犯肺证)。西医诊断急性上呼吸道感染。给予芒果叶总苷片治疗，每次3片，每日3次，连用7天。服用3天体温下降至37.6℃，咳嗽、咽痛、口干减轻。至第7天，发热消退，体温36.7℃，咳嗽、咳痰、咽痛等症消失。疗效评定痊愈。
病例2 黄某，男，37岁。自述3天前出现咳嗽，咯黄色粘痰，量较多，伴口干，乏力，纳差。检查体温37.2℃，两肺可闻少许散在性干罗音，舌质红，舌苔薄黄，脉浮数。中医诊断咳嗽(风热犯肺证)。西医诊断急性支气管炎。给予芒果叶总昔片治疗，每次3片，每日3次，连用7天。服用3天后咳嗽、咯痰减轻，口干消失。至第7天，咳嗽、咯痰、乏力、纳差等症消失，两侧肺部听诊未发现异常。疗效评定痊愈。
权利要求
1.一种芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于它包含有芒果叶总苷和辅料，其成分和重量百分含量如下芒果叶总苷0.05-100％辅料 0-99.95％所述的芒果叶总苷是指从漆树科植物芒果Mangiferae L.或漆树科植物扁桃Mangiferaepersiciformis C.Y.Wu et T.L.Ming的鲜叶或干叶中提取的，主要由芒果苷、异芒果苷及高芒果苷等组成的苷类混合物；所述的辅料是从国际或国家药品监督管理部门认可的起赋形、赋香、防腐、填充等作用的药用辅料中选用。
2.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，生产工艺采用惯常的、通用的制药工艺完成，工艺包括从芒果叶或扁桃叶中提取芒果叶总苷、芒果叶总苷与辅料混合、压制或调配成产品等几个过程。
3.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其剂型为口服药物剂型的片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、口含片。
4.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序。
5.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的乙醇回流提取，是用50-95％(体积浓度)以上的乙醇水溶液回流提取2～3次，每次加相当于芒果叶(或扁桃叶)重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1～1.5小时。
6.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的非极性溶剂萃取，是用石油醚、苯、乙醚、溶剂汽油、乙酸乙脂、乙酸丁脂等非极性溶剂萃取除去叶绿素等脂溶性成分的过程。
7.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的脱色，在溶液中加入活性碳、硅藻土等进行，或者用大孔树脂进行脱色。
8.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的结晶，是指去除溶液中的乙醇和大部分水后，冷却，芒果叶总苷等成分析出的过程。
全文摘要
本发明涉及一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的中药制剂，特别是以芒果叶或扁桃叶为原料提取其有效成分作为止咳药的中药制剂及其生产方法，从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序，用芒果叶总苷生产止咳中药，不添加或只添加适量的辅料，制备成止咳化痰作用的口服制剂，具有有效成分含量高，服用剂量小等特点。
文档编号A61P11/00GK1488355SQ03125270
公开日2004年4月14日 申请日期2003年8月12日 优先权日2003年8月12日
发明者黄海滨, 岑家铭, 邓家刚, 王乃平, 李学坚 申请人:广西中医学院制药厂
技术领域：
本发明涉及一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的中药制剂，特别是以芒果叶或扁桃叶为原料提取其有效成分作为止咳药的中药制剂及其生产方法。
背景技术：
芒果和扁桃是味道鲜美、营养丰富的热带水果，芒果为漆树科植物Mangiferae L.；扁桃为漆树科植物Mangiferae persiciformis C.Y.Wu et T.L.Ming。随着人们生活的普遍提高，两种果树栽种的面积越来越多。尤其是芒果，二十多年来，我国的广西、广东、海南、云南等省区不断引进和培育新品种，使我国成为了芒果生产大国。广西的芒果树种植面积就超过10万公顷，扁桃树种植面积5万公顷，因此芒果叶和扁桃叶的数量也很多，每年修枝和果树淘汰所产生的叶子有上千万吨。以往果农对芒果叶和扁桃叶的处理一般是将它们当作柴火烧掉或者任其在果园中腐烂，造成了资源的极大浪费。芒果叶和扁桃叶性味相近，是很有医药价值的中药材；化学成分方面，都含有芒果苷、异芒果苷、高芒果苷等成分。据有关文献报道，芒果叶性味酸、甘、凉，平，具有行气疏滞，去痧积、清热解毒、消肿止痛、退湿的功能，用于感冒发烧，咽喉肿痛、风湿等症，从芒果叶和扁桃叶中提取的芒果苷具有抗菌、抗病毒、祛痰、镇咳等作用。《福建中医药》2001，32(2)刊登的“复方芒果叶的薄层层析及抗菌试验”提到，将芒果叶提取物进行体外抗菌实验，结果表明，芒果叶对金葡25023菌、金葡京耐菌、白葡球菌、奈氏球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、福氏杆菌、伤寒杆菌均有较强抗菌作用。广西民族医药研究所余胜民、钟鸣在《中国中医药科技》1999，6(3)发表的“芒果苷药理研究进展”综述了芒果苷的一些药用机理，指出了芒果苷(mangiferin)是一种四羟基吡酮的碳糖苷，属双苯吡酮类化合物，现代药理和临床研究证明，芒果苷具有以下多方面生理活性和药理作用。1、对中枢神经系统作用，芒果苷具有明显的中枢神经系统兴奋作用。50-100mg/kg剂量的芒果苷腹腔注射(i.p)可使所有受试动物出现动作震颤，竖毛，强迫性撕打和自主活动增加等症状。说明芒果苷可能是中脑边缘系统D2受体的激动剂。2、对心血管系统的作用，1-2mg剂量的芒果苷对正常或功能低下的离体Ringer’s液留灌注蛙心均有短暂，确切的增强心肌收缩力的作用，凡该作用不被心得安所阻断，认为它可能是一种心脏直接刺激剂。3、保肝利胆作用，采用模似高原急性低氧造成大鼠肝损伤的方法，观察芒果苷对肝脏的保护作用，在大鼠肝溶酶体体外温孵实验中发现，芒果苷有稳定溶酶体膜的作用，且对溶酶体酸性磷酶活力有直接抑制作用。4、抗脂质过氧化作用，芒果苷能快速彻底地清除[-dipheny]-2-picrylhydrazyl(DPPH)，并抑制大鼠肝脏微粒体中由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯还原酶(NADPH)或非酶类因子抗坏血酸、Fenton’s提示芒果苷具有抗氧化活力，可能由于与它能专一清除类脂化合物过氧化反应起动阶段的自由基有关。5、抗病毒作用，芒果树叶提取的芒果苷进行抗I型单纯疱疹病毒(HSV-I)作用的实验观察。检测其抗病毒药效时，采用原代人胚肌皮单层细胞，病毒对照组与给药组平行操作25-250ug/ml药物直接或同时作用病毒以及先感染病毒在细胞内复制。芒果苷抑制50％空斑形成有效浓度(ECso)为111.7ug/ml。药物加入和去除试验结果提示芒果苷抗HSV-B作用的机制可能是抑制病毒在细胞内复制的晚期。6、免疫、抗炎、镇痛作用，一定剂量芒果苷提高红细胞补体受体(CRI)活性，可能与抑制脂质过氧化反应有关。有人提出在应用体外诱生抗体方法研究中药免疫调节作用机理的实验中，证明芒果苷(0.1ug/ml)有免疫抑制作用而不影响细胞活力。曾有药理实验证明芒果苷治疗慢性支气管炎有较好的疗效，疗程20d，有效率可达82.4％。另外，公开文献也分别报道了芒果苷的治病作用，如“芒果苷对II型单纯疱疹病毒体外复制的抑制作用”《中国药理学报》1993，14(5)，“芒果苷对大鼠血液过氧化脂质代谢的影响”《中国中医药科技》1999，6(2)，“芒果苷对肝癌大鼠血清上皮钙粘蛋白和癌胚抗原以及单胺氧化酶的影响”《医学综述》2001，7(12)，“芒果苷对肝癌可溶性E-上皮钙黏蛋白及癌胚抗原和单胺氧化酶的影响”《中华消化杂志》2001，21(8).“脂质过氧化大鼠脑组织超微结构改变及芒果苷对脑组织的保护作用”《广西科学》2000，7(2)。“芒果苷对肝癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导”《中华消化杂志》2002，22(6)，观察芒果苷对人肝癌细胞株BEL-7404的毒性和诱导凋亡作用及对细胞周期的阴滞作用，探讨芒果苷作为肿瘤化学预防药物的可能性，用MTT法观察芒果苷对人肝癌细胞株增殖的抑制作用。用光学显微镜观察芒果苷对细胞的毒性作用。以流式细胞仪检测芒果苷对细胞凋亡的诱导作用和对细胞周期的干预作用。结果表明，不同浓度的芒果苷在不同时间对肝癌细胞株均有毒性作用，并随浓度升高和作用时间的延长而毒性作用增强，凋亡也随之增加，芒果苷阻滞肝癌细胞周期于G2/M期，20μmol/L芒果苷作用24h后上述效果开始明显。证明芒果苷对肝癌细胞株有明显的毒性作用，能诱导肝癌细胞凋亡和阻滞细胞周期于G2/M期具有潜在药用价值。
从上述检索到的文献了解到，由于芒果苷对人体的一些疾病有较好的治疗作用，所以芒果叶和扁桃叶已经得到越来越多的应用。本申请人广西中医学院制药厂生产了芒果止咳片，含有芒果叶提取物、扑尔敏、鱼腥草素钠(人工合成品)，是中西药复方制剂。具有宣肺化痰，止咳平喘的功效，主要用于咳嗽、气喘、多痰等症。有关芒果止咳片的研究在科技文献中也发表过一些文章，如“芒果止咳片的药效学研究(I)”，郑作文、邓家刚等，广西中医学院药理教研室，《中医药学刊》.2002，20(3)，介绍芒果止咳片能明显延长豚鼠Ach引喘的潜伏期和对抗Ach所致气管平滑肌的收缩，对小鼠二氧化硫引咳能明显延长咳嗽潜伏期，并能减少刺激猫喉上神经引起的咳嗽粢九，能明显增加小鼠气管的酚红排泌量，并有一定的抗炎症渗出及平喘，止咳，化痰作用。“芒果止咳片治疗风热犯肺型咳嗽的疗效观察”邓家刚、郑作文，广西中医学院，《辽宁中医杂志》2000，27(9)，为观察芒果止咳片对风热犯肺型咳嗽的临床治疗效果，用芒果止咳片治疗风热犯肺咳嗽300例，总有效率93.3％，随机设银黄片对照组100例，总有效率91.0％，两组疗效比较无显著性差异，结果表明，芒果止咳片用于治疗风热犯肺型咳嗽疗效确切。但目前有关从芒果叶和扁桃叶中提取芒果苷的公开文献不多，而且基本是论述芒果苷用于抗肿瘤的药理作用方面的文章，未提及芒果苷中包含的所有成分。
技术内容本发明人经过几年的研究和试验，对从芒果叶或扁桃叶中提取芒果苷的各种方法及芒果苷治疗一些疾病的机理进行了深入的探索，特别是对芒果苷在止咳、化痰、平喘、抗炎的作用进行了药效学、药理学的试验，取得了重要的成果。
本发明的技术方案包括芒果叶总苷的提取和芒果叶总苷在止咳、化痰、平喘、抗炎的应用。所述芒果叶总苷是芒果叶和扁桃叶中具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的成分，在干叶中的含量达2％以上。芒果叶总苷包括芒果苷、异芒果苷、高芒果苷等几种成分，芒果叶总苷中，以芒果苷的含量最高。芒果苷和异芒果苷是同分异构体，高芒果苷是芒果苷的同核衍生物，结构上，在苷元母核上多一个“-CH3”。药理实验证明，这几种苷均具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用，而且，当它们混合使用时，具有一定的协同增效作用，即作用强度比单独使用的效果总和要好。
本发明的止咳中药制剂包含有芒果叶总苷和辅料，其成分和重量百分含量如下(干物质计)芒果叶总苷 0.05-100％辅料0-99.95％本发明所述的止咳中药制剂，生产工艺采用惯常的、通用的制药工艺完成，工艺包括从芒果叶或扁桃叶中提取芒果叶总苷、芒果叶总苷与辅料混合、压制或调配成产品等几个过程。
从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序。
所述的乙醇回流提取，用50-95％(体积浓度)以上的乙醇水溶液回流提取2～3次，每次加相当于芒果叶(或扁桃叶)重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1～1.5小时。
所述的非极性溶剂萃取，是用石油醚、苯、乙醚、溶剂汽油、乙酸乙脂、乙酸丁脂等非极性溶剂萃取除去叶绿素等脂溶性成分的过程。
所述的脱色，在溶液中加入活性碳、硅藻土等进行，或者用大孔树脂进行脱色。
所述的结晶，是指去除溶液中的乙醇和大部分水后，冷却，将芒果叶总苷等成分析出的过程。
采用上述提取方法得到的芒果叶总苷是一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的芒果苷及其同分异构体形成的混合物，可以制成止咳中药制剂，剂型采用口服药物剂型，一般有片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、口含片等，各种剂型所需的辅料采用符合国家或国际标准的起赋形、赋香、防腐、填充等作用的制剂，如制备口服制剂时，选用的辅料可以是淀粉、羧甲基纤维素、环糊精、蔗糖、硬脂酸镁、聚乙二醇等常规填充剂，可采用药剂学常规制备工艺；在制备注射制剂时，可以采用加入脂质体、聚乙二醇、药用酒精、去氧胆酸、胆固醇等常规填充剂，可采用药剂学常规制备工艺。
本发明与现有技术相比，其突出的实质性特点和显著的进步是1、提供了芒果叶总苷的提取方法，得到了芒果苷和异芒果苷、高芒果苷的混合物，治疗效果比芒果苷单一作用的好。芒果苷60-80％，异芒果苷3-9％，高芒果苷0.5-1.8％2、芒果叶总苷是芒果叶和扁桃叶止咳、化痰、平喘、抗炎的有效成分。用芒果叶总苷生产止咳中药，具有有效成分含量高，剂量小等特点。
3、芒果止咳片使用芒果叶提取物，本发明使用芒果叶或扁桃叶的有效部位。
4、芒果止咳片是中西药复方制剂，本发明是纯中药制剂。
具体实施例方式
一、芒果叶总苷提取实施例一干芒果叶，切成碎片或加工成粗粉，以95％的乙醇回流提取2次，每次加相当于芒果叶重量10倍的乙醇，每次回流1.5小时。合并提取液，回收乙醇，用热水化开，用石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤，滤渣即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达50％以上。
实施例二鲜芒果叶，以75％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加相当于芒果叶重量8倍的乙醇水溶液，每次回流1小时。合并提取液，回收乙醇，用乙酸丁脂萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤，滤渣即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达50％以上。
实施例三干扁桃叶，以50％的乙醇水溶液回流提取3次，每次加相当于扁桃叶重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1.5小时。合并提取液，回收乙醇，用石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性成分，过滤。滤渣再用50％的乙醇水溶液回流溶解，溶解液用活性碳脱色，过滤，滤液回收乙醇，去除大部分水，结晶析出的即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达70％以上。
实施例四实施实例一所得的芒果叶总苷，用50％的乙醇水溶液回流溶解，上大孔树脂D301脱色，脱色液回收乙醇，去除大部分水，结晶析出的即为芒果叶总苷。芒果叶总苷的含量达70％以上。
二、止咳中药制剂生产实例实施例一按提取实例一方法所得芒果叶总苷，加入2倍量的白糖细粉，用70％酒精湿润，制成颗粒，分装，即得芒果叶总苷颗粒剂。
实施例二按提取实例三方法所得芒果叶总苷，加入适量淀粉和滑石粉，用70％酒精湿润，制成颗粒，用压片机压片，即得芒果叶总苷片。
实施例三按提取实例三方法所得芒果叶总苷，加入适量结晶山梨醇，制成口含片。
实施例四按提取实例二方法所得芒果叶总苷，加入适量羧甲基纤维素、环糊精，得到芒果叶总苷胶囊。
药理药效学及临床试验情况一、药理实验结果本发明生产的片剂(芒果叶总苷片)，经广西中医学院药理教研室进行试验，结果表明，芒果叶总苷片口服给药，12.6g生药/kg和6.3g生药/kg，可显著延长小鼠氨水致咳的潜伏期，减少咳嗽次数，促进气管酚红排泌量，显著延长由0.4％的磷酸组织胺和2％氯化胆碱(1∶1)的混合引起豚鼠出现IV哮喘反应的潜伏期，抑制巴豆油引起小鼠耳廓肿胀，提示芒果叶总昔片具有镇咳、化痰、平喘、抗炎作用。
二、毒理实验结果本发明生产的片剂(芒果叶总苷片)，经广西中医学院药理教研室进行急性毒性试验，结果表明，芒果叶总苷片口服给药的LD50为426g生药/kg体重，95％可信限为468-387g生药/kg体重。结果提示，按正常日剂量(36g生药)，不会出现毒性反应。
三、临床报告病例1陈某，女，28岁。自述2天前出现咳嗽，咯痰白、粘，伴咽痛口干，恶寒发热；无气喘、胸闷、心悸等。检查体温38.2℃，咽充血(+)，两侧扁桃体I°肿大，无脓性分泌物，心肺检查无异常。舌质红，舌苔薄黄，脉浮数。中医诊断咳嗽(风热犯肺证)。西医诊断急性上呼吸道感染。给予芒果叶总苷片治疗，每次3片，每日3次，连用7天。服用3天体温下降至37.6℃，咳嗽、咽痛、口干减轻。至第7天，发热消退，体温36.7℃，咳嗽、咳痰、咽痛等症消失。疗效评定痊愈。
病例2 黄某，男，37岁。自述3天前出现咳嗽，咯黄色粘痰，量较多，伴口干，乏力，纳差。检查体温37.2℃，两肺可闻少许散在性干罗音，舌质红，舌苔薄黄，脉浮数。中医诊断咳嗽(风热犯肺证)。西医诊断急性支气管炎。给予芒果叶总昔片治疗，每次3片，每日3次，连用7天。服用3天后咳嗽、咯痰减轻，口干消失。至第7天，咳嗽、咯痰、乏力、纳差等症消失，两侧肺部听诊未发现异常。疗效评定痊愈。
权利要求
1.一种芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于它包含有芒果叶总苷和辅料，其成分和重量百分含量如下芒果叶总苷0.05-100％辅料 0-99.95％所述的芒果叶总苷是指从漆树科植物芒果Mangiferae L.或漆树科植物扁桃Mangiferaepersiciformis C.Y.Wu et T.L.Ming的鲜叶或干叶中提取的，主要由芒果苷、异芒果苷及高芒果苷等组成的苷类混合物；所述的辅料是从国际或国家药品监督管理部门认可的起赋形、赋香、防腐、填充等作用的药用辅料中选用。
2.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，生产工艺采用惯常的、通用的制药工艺完成，工艺包括从芒果叶或扁桃叶中提取芒果叶总苷、芒果叶总苷与辅料混合、压制或调配成产品等几个过程。
3.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其剂型为口服药物剂型的片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、口含片。
4.根据权利要求1所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序。
5.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的乙醇回流提取，是用50-95％(体积浓度)以上的乙醇水溶液回流提取2～3次，每次加相当于芒果叶(或扁桃叶)重量10倍的乙醇水溶液，每次回流1～1.5小时。
6.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的非极性溶剂萃取，是用石油醚、苯、乙醚、溶剂汽油、乙酸乙脂、乙酸丁脂等非极性溶剂萃取除去叶绿素等脂溶性成分的过程。
7.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的脱色，在溶液中加入活性碳、硅藻土等进行，或者用大孔树脂进行脱色。
8.根据权利要求1和4所述的芒果叶总苷止咳中药制剂，其特征在于所述的结晶，是指去除溶液中的乙醇和大部分水后，冷却，芒果叶总苷等成分析出的过程。
全文摘要
本发明涉及一种具有止咳、化痰、平喘、抗炎作用的中药制剂，特别是以芒果叶或扁桃叶为原料提取其有效成分作为止咳药的中药制剂及其生产方法，从芒果叶和扁桃叶中提取芒果叶总苷的方法包括芒果叶或扁桃叶的粉碎、乙醇回流提取、非极性溶剂萃取、脱色、过滤、结晶等工序，用芒果叶总苷生产止咳中药，不添加或只添加适量的辅料，制备成止咳化痰作用的口服制剂，具有有效成分含量高，服用剂量小等特点。
文档编号A61P11/00GK1488355SQ03125270
公开日2004年4月14日 申请日期2003年8月12日 优先权日2003年8月12日
发明者黄海滨, 岑家铭, 邓家刚, 王乃平, 李学坚 申请人:广西中医学院制药厂
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