专利名称:胶陀螺多糖,其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物的制作方法
技术领域:
本发明公开一种胶陀螺多糖,同时提供了其制备方法和以该化合物为活性成分的药物组合物,属于中药有效成分提取物应用技术领域。
背景技术:
胶陀螺(Jiaotuoluo,Bulgaria)为胶陀螺科真菌胶陀螺Bulgariainquinans(Pers.)Fr.的干燥子实体,又称“猪嘴蘑”、“拱嘴蘑”。目前由于发现胶陀螺有很高的医疗价值,从中分离得到麦角甾醇、半乳糖醇和草酸等成分,对其药用价值正在深入研究。用胶陀螺乙醇提取物制成的药物制剂(陀螺银消胶囊)具有治疗银屑病的作用。但用胶陀螺为原料,大量制备胶陀螺多糖,并制成药物,用于抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的医学临床应用未见报道。
发明内容
本发明提供了一种具有药用价值的胶陀螺多糖。
本发明还提供了从胶陀螺或其菌丝体中提取上述物质的制备方法,适用于工业化生产。
本发明进一步提供了以活性胶陀螺多糖组分为主要药物或与其他药物组方用于抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的药物。
胶陀螺多糖是通过以下提取方法获得的将胶陀螺或其菌丝体粉碎,加4~8倍水煎煮2~4小时,过滤取滤液,反复2~4次,合并滤液,浓缩至1200~1800ml,放置,冷却至室温,经活性炭过柱2次,收集流出液,浓缩至800~1500ml,加4~6倍乙醇沉淀,放置18~24小时,过滤,并加适量乙醇洗脱,将所得沉淀减压干燥(温度65~75℃,真空度0.085~0.095mPa),即得胶陀螺多糖。
用酚硫酸法,在490nm紫外波长,以葡萄糖为对照品测得胶陀螺多糖的纯度为35~55%。
经过药理学试验筛选,上述化合物具有抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的药理活性。
按药剂学方法,可以将本发明的胶陀螺多糖制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的药物,所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
本发明的药物组合物含有治疗有效量的上述化合物为活性成分,以及含有一种或多种药学上可以接受的载体。
上文的载体是指药学领域常规的药物载体,包括稀释剂、赋型剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体。
本发明可以组合物的形式通过口服、直肠、静脉、肌肉注射或胃肠外给药方式施用于这种治疗的患者。按照药学领域的常规生产方法制备各种剂型如片剂、颗粒剂、冲剂、胶囊、栓剂、喷雾剂、缓释剂和注射剂。也可使其活性成分与一种或多种载体或药物混合,自成所需剂型。
本发明的药物优选含有1%-99%的胶陀螺多糖和99%-1%的赋型剂(包括其他配伍用的药物),优选含有30%-80%的胶陀螺多糖和70%-20%的赋型剂(包括其他配伍用的药物),最好含有60%-70%的胶陀螺多糖和40%-30%的赋型剂(包括其他配伍用的药物)。
本发明的积极效果在于从胶陀螺中提取具有治疗效果的多糖物质,用于生产抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的药物,疗效显著,毒副作用小,实用方便。
下述的药理实验证实了胶陀螺多糖具有抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂等药理活性胶陀螺多糖的药理学作用摘要以荷S180瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型,研究了胶陀螺多糖的体内抗肿瘤作用。结果表明胶陀螺多糖不仅具有抗肿瘤作用,还能增强机体的免疫能力。另外,胶陀螺多糖还具有明显的升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、降血脂作用。
1材料
1.1药物胶陀螺多糖为多脂磷伞中提取的多糖物质。环磷酰胺上海华联制药有限公司产品,批号20010304。
1.2 S180及艾氏腹水瘤株中国医学科学院肿瘤医院定期传代瘤株。
1.3动物昆明种小鼠,雌雄兼用,体重(22±2)g,购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心。
2方法2.1小鼠荷瘤取接种6d的S180及艾氏腹水型小鼠腹水,用灭菌生理盐水(13)稀释,经右上肢靠右肩甲骨处皮下注射(sc)或腹腔注射(ip)0.2mL(4×106~6×106个瘤细胞,活细胞率>95%),制成实体瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。
2.2药物剂量与给药途径按实验设计剂量ip(实体瘤型)或肌肉注射im(腹水瘤型)给药,阴性对照组用生理盐水ip或肌肉注射(im),阳性对照组用环磷酰胺ip或im,每只小鼠每天用药1次。
2.3抑瘤率、脾指数和胸腺指数的计算荷S180实体瘤型小鼠于接种后24h随机分组,连续给药8d,8d后称重、处死,分别取瘤、脾和胸腺,体重,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数并进行统计学处理。
2.4存活率的计算艾氏腹水型小鼠于接种后24h随机分组,连续给药8d,停药后继续观察,直到自然死亡,计算其存活延长率。
3结果3.1对荷S180瘤小鼠的抑瘤作用结果表明,胶陀螺多糖100-400mg/kg·d有明显抑瘤作用(22.6%-63.2%),胶陀螺多糖400mg/kg·d与阳性对照组环磷酰胺组相比,抑瘤率与后者(58.3%)相近。见表1。
表1对荷S180小鼠肿瘤的抑制作用(x±s)
与对照组相比*P<0.05**P<0。
3.2对艾氏腹水型小鼠存活期的影响
结果表明,胶陀螺多糖400mg/kg·d能明显延长艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0%),胶陀螺多糖400mg/kg·d与阳性对照组环磷酰胺组相比,存活期延长率比后者(29.7%)高。见表2。
表2对艾氏腹水型小鼠存活期的影响(x±s)
与对照组相比*P<0.05**P<0.01;与环磷酰胺组相比□P<0.053.3对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响小鼠荷瘤后,引起免疫指标不正常,表现为脾指数升高,为正常鼠的198.1%,胸腺指数下降,为正常鼠的56.5%,胶陀螺多糖不同剂量组均能使荷瘤小鼠脾指数降低,胸腺指数升高,向正常值靠拢。胶陀螺多糖400mg/kg·d剂量组降低脾指数最显著(127.8%),与对照组相比有显著差异(P<0.01,与环磷酰胺组相比无显著差异(P>0.05)。400mg/kg·d剂量组上升胸腺指数最显著,与对照组相比有显著差异(P<0.01,与环磷酰胺组(69.4%)相比有显著差异(P<0.01,说明胶陀螺多糖增强免疫功能的作用强于环磷酰胺。见表3。
表3对荷S180瘤小鼠免疫指标的影响(x±s)
#空白对照组、各用药组与正常组脾指数比率;##空白对照组、各用药组与正常组胸腺指数比率。与对照组相比*P<0.01;与环磷酰胺组相比□P<0.01综上(表1-3)所述,胶陀螺多糖不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长小鼠生命,而且有增强荷瘤小鼠免疫机能的作用。
3.4对化疗小鼠的升高白细胞作用结果表明,胶陀螺多糖对化疗小鼠具有明显的升高白细胞作用。结果见表4。
表4腔陀螺多糖对化疗小鼠升高白细胞作用(x±s,n=10)组别剂量WBC(109/L)(mg/kg) 0d 3d6d9d12d对照 8.2±1.12 8.3±0.30 8.0±0.32 8.4±0.59 8.8±0.46模型组8.3±1.12 3.3±0.30***2.6±0.32***4.4±0.59***6.8±0.46*胶陀螺多糖400 8.3±0.64 6.8±0.80##5.5±0.42###7.9±0.33###9.6±0.32##200 8.4±0.71 5.8±0.57#5.0±0.57##6.9±0.27##8.4±0.28##100 8.3±0.64 4.8±0.80 4.5±0.42#6.9±0.33##7.5±0.32与对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。
3.5对放疗小鼠的升高白细胞作用结果表明,胶陀螺多糖对放疗小鼠具有明显的升高白细胞作用。结果见表4。
表4胶陀螺多糖对放疗小鼠升高白细胞作用(x±s,n=10)组别剂量 WBC(109/L)(mg/kg) 0d 3d6d9d12d对照 7.8±1.32 7.9±0.35 7.7±0.25 7.9±0.61 8.2±0.26模型组7.6±1.32 3.6±0.30***3.0±0.32***5.4±0.59***7.0±0.46*胶陀螺多糖400 7.8±0.71 4.8±0.80 5.7±0.42##8.5±0.33###10.3±0.52###200 7.4±0.66 4.2±0.45 5.0±0.57##7.9±0.27##9.4±0.28###100 7.3±0.51 3.8±0.80 4.7±0.22#6.5±0.21##8.5±0.26与对照组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;与模型组比较#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001。
3.6抗溃疡作用按表6分组给药,于7天内,每天灌胃一次,对照组灌胃等体积蒸馏水,末次给药2h后,按文献方法,测定大鼠应激型溃疡等级。结果见表6。胶陀螺多糖具有明显的抗溃疡作用。
表6胶陀螺多糖的抗溃疡作用(x±s,n=10)组别 剂量(mg/kg)溃疡等级(x±s)对照 - 4.91±0.678胶陀螺多糖4001.75±2.64***2001.98±2.63***1002.21±2.47**与对照比较,**P<0.01,***P<0.0013.7抗肝炎作用按表7分组,模型组和给药组按10ml/kg ip 0.1%CCl4豆油溶液,对照组ip同体积豆油,每天一次,连续3天,从第4天开始给药治疗,每天ig胶陀螺多糖一次,对照组和模型组ig同体积蒸馏水,连续6天,末次给药后,禁食16h,取血分离血清,测血清谷丙转氨酶(SGPT),结果表明,胶陀螺多糖对肝损伤小鼠具有降低谷丙转氨酶的作用。
表7胶陀螺多糖降谷丙转氨酶的作用(x±s,n=10)组别 剂量 SGPT(g/kg) (U/dL)对照组-158±25.36***模型组-502±104.32胶陀螺多糖400 295±114.71**200 346±103.64***100 396±101.56***与模型组比较*P<0.05**P<0.01***P<0.0013.8降血脂作用将小鼠(18~22g)按表8所示分组给药,每组动物雌雄各半,对照组和模型组灌胃蒸馏水10ml/kg。于15天内每天灌胃一次,末次给药1h后,模型组和给药组按10ml/kg腹腔注射75%蛋黄生理盐水溶液,对照组腹腔注射等体积生理盐水,禁食16h后,再灌胃给药一次,1h后,处死动物,取血,分离血清,按常规方法测TC、TG、HDL-C、LDL-C,结果见表8。胶陀螺多糖高剂量可明显降低高脂血症小鼠TC、TG、LDL-C水平。
表3腔陀螺多糖对高脂血症小鼠血脂的影响(mmol/L,x±s)组别 剂量(mg/kg) TCTGLDL-C对照 5.2±0.6***1.1±0.3**5.0±5.2**模 9.0±0.9 1.4±1.5 7.1±1.2胶陀螺多糖400 7.0±2.0**1.3±0.9*5.6±1.2**200 8.1±2.6 1.4±1.4 7.2±1.4n=10,与模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.00l
4结论胶陀螺多糖不仅具有抗肿瘤作用,还能增强机体的免疫能力。另外,胶陀螺多糖还具有明显的升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、降血脂作用。
具体实施例方式下列实施例旨在进一步举例描述本发明,而不是以任何方式限制本发明.在不背离本发明的精神和原则的前提下,对本发明所作的本领城普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的待批权利要求范围之内。
实施例1将胶陀螺或其菌丝体1kg粉碎,加6倍水煎煮3小时,过滤取滤液,反复3次,合并滤液,浓缩至2000ml,放置,冷却至室温,经活性炭过柱2次,收集流出液,浓缩至1000ml,加5倍乙醇沉淀,放置24小时,过滤,并加适量乙醇洗脱,将所得沉淀减压干燥(温度70℃,真空度0.090mPa),即得胶陀螺多糖。用酚硫酸法,在490nm紫外波长,以葡萄糖为对照品测得胶陀螺多糖的纯度为45%。
实施例2将胶陀螺或其菌丝体1kg粉碎,加6倍水煎煮3小时,过滤取滤液,反复3次,合并滤液,浓缩至2000ml,放置,冷却至室温,经活性炭过柱2次,收集流出液,浓缩至1000ml,加5倍乙醇沉淀,放置24小时,过滤,并加适量乙醇洗脱,将所得沉淀减压干燥(温度70℃,真空度0.090mPa),即得胶陀螺多糖。用酚硫酸法,在490nm紫外波长,,以葡萄糖为对照品测得胶陀螺多糖的纯度为45%。配液后G4漏斗过滤,滤液分装灭菌,制成注射剂。
实施例3胶陀螺多糖1kg,药用淀粉0.5kg,用80%浓度的乙醇湿法制粒,整粒,干燥,装1#胶囊,每粒0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项下要求。
实施例4胶陀螺多糖1kg,药用淀粉0.5kg,糊精1kg,50%浓度乙醇适量,制粒,整粒,干燥,压片,每片0.2g。其它项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项下要求。
权利要求
1.一种胶陀螺多糖,其特征在于由下述方法制备获得将胶陀螺或其菌丝体粉碎,加4~8倍水煎煮2~4小时,过滤取滤液,反复2~4次,合并滤液,浓缩至1200~1800ml,放置,冷却至室温,经活性炭过柱2次,收集流出液,浓缩至800~1500ml,加4~6倍乙醇沉淀,放置18~24小时,过滤,并加乙醇洗脱,将所得沉淀物减压干燥,即得胶陀螺多糖。
2.胶陀螺多糖在抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂药物中的应用。
3.用于抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂的药物组合物,其中含有治疗有效量的胶陀螺多糖和药学上可接受的载体。
4.根据权利要求2、3所述的药物,其特征在于所说的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
全文摘要
本发明提供了一种胶陀螺多糖,并提供了其制备方法,将胶陀螺或其菌丝体粉碎,加水煎煮,过滤取滤液,合并滤液,浓缩,放置,冷却至室温,经活性炭过柱2次,收集流出液,浓缩,加乙醇沉淀,放置,过滤,并加适量乙醇洗脱,将所得沉淀减压干燥,即得胶陀螺多糖。同时提供了以胶陀螺多糖组分为主要药物或与其他药物组方,可用于抗肿瘤、升高白细胞、抗溃疡、抗肝炎、增强免疫、降血脂。
文档编号A61P1/04GK1523041SQ0312714
公开日2004年8月25日 申请日期2003年9月10日 优先权日2003年9月10日
发明者徐凌, 于春波, 陈晓光, 徐 凌 申请人:吉林高科生态开发有限公司