用于抑制细胞增殖的取代的双吲哚基马来酰亚胺的制作方法
专利名称：用于抑制细胞增殖的取代的双吲哚基马来酰亚胺的制作方法
技术领域：
本发明专利申请是依据1996年7月29日提交的国际申请号为PCT/EP97/03889、国际公开号为WO 98/04552的发明专利申请，即为于1999年1月25日在中国提交的申请号为97196776.8、发明名称为“用于抑制细胞增殖的取代的双吲哚基马来酰亚胺”的发明专利申请的分案申请。本发明涉及取代的吡咯。更具体地说，本发明涉及下式的取代的吡咯 其中R1和R1’各自为烷基、芳基、链烯基或炔基；R2和R2’各自为氢或烷基；R4、R5、R6和R7每个独立为CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CHO、CH2NR11R12、CON(R13)2、氢、卤素、氰基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、卤代烷基、硝基、氨基、酰氨基、芳烷氧基、一烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基或烷基磺酰基，其条件是R4、R5、R6或R7的至少一个是氰基、CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2；R8为烷基、芳烷基或芳基；R9为烷基、芳烷基或芳基；R10为氢、烷基、芳烷基或芳基；
R11和R12各自为氢、烷基、芳基、芳烷基或酰基；R13为氢、烷基、芳基或芳烷基；以及X和Y之一表示O，另一个表示O、S、(H，OH)或(H，H)；及其药学上可接受的前药，或者式I的酸性化合物与碱、或式I的碱性化合物与酸所形成的药学上可接受的盐。
式I化合物及其药学上可接受的盐是抗增殖剂，可用于治疗或控制癌症，特别是用于治疗或控制实体瘤。本发明化合物尤其可用于治疗或控制乳房肿瘤和结肠肿瘤。
这里所用的“烷基”一词，在单独或结合使用时均指最多含有10个碳原子、优选最多含有5个碳原子的直链或支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和戊基，该烃基是未取代的，或者被一个或多个取代基取代，取代基选自由羟基、烷氧基、氨基、卤素、硫代烷基、氰基、羧基或羧酸衍生物、或烷基亚磺酰基组成的组。术语“烷氧基”所表示的基团中烷基部分是如上定义的，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基和叔丁氧基等等。卤代烷基可以携带一个或多个卤原子，这样的基团的实例是氯甲基和三氟甲基。单独或结合使用时的术语“酰基”指来自最多含有10个碳原子、优选最多含有5个碳原子的未取代或取代的链烷酸的基团，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、三氟乙酰基、氯乙酰基、三氯乙酰基、氨基乙酰基或2-氨基-丙酰基等等，或者是来自未取代或取代的芳族羧酸的基团，例如苯甲酰基。链烷酸上的取代基实例包括下列之一或多个羟基、烷氧基、氨基、卤素、硫代烷基、氰基、羧基、羧酸衍生物或烷基亚磺酰等等。芳族羧酸上的取代基实例包括下列之一或多个卤素、烷基、羟基、苯甲氧基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基、氰基等等。单独或结合使用时的术语“芳基”指未取代的苯基或携带一个或多个、优选一至三个取代基的苯基，取代基实例为卤素、烷基、羟基、苯甲氧基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基和氰基。术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。术语“羧酸衍生物”指酯、酰胺、氰基、酰氯等等。术语“链烯基”指具有至少一条双键的2至5个碳原子(优选3至5个碳原子)的直链或支链烃基。术语“炔基”指具有至少一条叁键的2至5个碳原子(优选3至5个碳原子)的直链或支链烃基。
这里所用的“药学上可接受的前药”指一种在生理学条件下或通过溶剂分解作用可以转化为式I化合物或其药学上可接受的盐的化合物。
在上式I中，R1和R1’优选为烷基。在一个特别优选的实施方式中，R1和R1’优选为甲基。
优选地，R4、R5、R6和R7之一为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2，其他为氢。
在一个特别优选的实施方式中，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2，R4、R5和R7为氢。
特别优选的式I化合物是，其中R1为甲基，R2为氢，R1’为甲基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CON(R13)2或CHO。
在特别优选的化合物中，R1为甲基，R2为氢，R1’为甲基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CON(R13)2和CHO，其中R8和R9为烷基、优选为甲基，R10为烷基、优选为甲基、或氢，R11、R12和R13为氢。
其中X和Y都表示O的式I化合物是按照下列流程I进行制备的。
其中R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6和R7是如上定义的；其条件是若任一个R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6或R7是与酰氯反应的取代基，例如若任一个R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6或R7是羟基、羟基烷基、氨基、一烷基氨基或氨基烷基，则这样的取代基被一种惯用的保护基团保护起来。
如流程I所述，式II化合物是一种已知的化合物或者是按照已知方法制备的化合物，按照常规方法，使式II化合物与草酰氯反应，反适宜在一种惰性有机溶剂中进行，例如卤代脂肪烃，反应温度为约0℃至溶剂的回流温度，反应生成相应的式III化合物。
在约0至25℃的温度下，在二氯甲烷等一种溶剂中，使式III化合物与式IV化合物和三乙胺反应，该式IV化合物是一种已知的化合物或者是按照已知方法制备的化合物，然后在约25℃的温度下，在甲苯等一种溶剂中，用对甲苯磺酸处理，得到相应的式Ia化合物。如果在式III化合物与式IV化合物的反应过程中使用了一种保护基团，此时用已知方法除去之。
用一种复合金属氢化物还原其中X和Y都表示O的式I(即式Ia)化合物，藉此制备其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，OH)的式I化合物。
该还原反应可以用一种已知方式进行，包括按照已知方法在还原前保护吲哚环上的取代基，还原后去保护。氢化锂铝等一种碱金属铝的氢化物优选用作复合金属氢化物，不过也能使用其他氢化物，例如氢化二异丁基铝和二氢-双(2-甲氧基-乙氧基)铝酸钠。适合在其中进行该还原反应的惰性有机溶剂包括脂肪族醚和环醚，例如二乙醚或四氢呋喃(THF)，还包括烃类，例如己烷、苯和甲苯。该还原反应宜在室温下进行。
催化氢化其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，OH)的式I化合物，藉此可制备其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，H)的式I化合物。
在进行催化氢化反应时可以采用常规方法，包括按照已知方法保护和去保护吲哚环上的取代基。
因此该催化氢化反应可以在钯或铂催化剂等一种贵金属催化剂(例如钯/碳(Pd/C)催化剂)和链烷醇等一种惰性有机溶剂(例如甲醇或乙醇)的存在下进行。该催化氢化反应适宜在约室温下和大气压下进行。
使其中X和Y都表示O的式I化合物与一种硫化剂反应，藉此制备其中X和Y之一表示O、另一个表示S的式I化合物。
进行硫化反应可以采用常规方法，包括硫化反应前取代基的保护和硫化反应后的去保护，这对本领域的技术人员来说是已知的。在进行该硫化反应时宜使用五硫化磷、Lawesson试剂(2，4-双(4-甲氧基苯基)-1，2-二硫代-1，3，2，4-dithiaphosphetane《比利时化学会通报》87(1978)229-238)或Davy试剂(2，4-双(甲硫基)-1，3，2，4-dithiadiphosphetane《硫快报》1983，1，167)。该反应宜在诸如脂肪醚或环醚(例如二甲氧基乙烷)、或芳族烃等一种惰性有机溶剂中进行，该芳族烃可以是卤代的(例如苯、甲苯或氯苯)，并且宜在高温下进行，尤其是在反应混合物的回流温度下。
如果需要的话，可以用一种碱将式I的酸性化合物转化为药学上可接受的盐，或者可以用一种酸将式I的碱性化合物转化为药学上可接受的盐。
按照已知方法，通过一种适当的碱的处理，可以进行式I的酸性化合物向药学上可接受的盐的转化。适当的盐不仅来源于无机碱、如钠盐、钾盐或钙盐，也来源于有机碱、如乙二胺、一乙醇胺或二乙醇胺。按照已知方法，通过一种适当的酸的处理，可以进行式I的碱性化合物向药学上可接受的盐的转化。适当的盐不仅来源于无机酸、如氢氯酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，也来源于有机酸、如乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
式I的吡咯及其药学上可接受的盐抑制细胞活动，例如细胞增殖，因此可用于治疗或控制诸如关节炎等炎症、免疫疾病以及器官移植和肿瘤。
从ATCC(美国典型培养物保藏中心)购得乳癌上皮细胞系MDA-MB435和结肠癌细胞系SW480，在ATCC推荐的培养基中进行培养。为了分析不同化合物对这些细胞生长的作用，将细胞置于96池组织培养皿(“供试皿”)中，浓度为1500个细胞/池。放置细胞后的第二天，将所要分析的化合物溶于100％DMSO(二甲基亚砜)，得到10mM储备溶液。每种化合物在H2O中稀释至1mM，加入到96池主皿第一排含有培养基的三重池中，得到最终浓度为40μM。然后将化合物连续稀释在“主皿”培养基中。然后将稀释了的化合物转移至含有细胞的供试皿中。一排作为媒介物的“对照细胞”接受DMSO。每池中DMSO的最终浓度为0.1％。在药物加入后第5天，如下对含有MDA-MB435细胞的培养皿进行分析。在药物加入后第7天，如下对含有SW480细胞的培养皿进行分析。
向每池中加入MTT([溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓]；噻唑基蓝)，得到最终浓度为1mg/ml。然后在37℃下将培养皿培养2 1/2-3小时。然后除去含有MTT的培养基，向每池中加入50μl100％乙醇，以溶解甲。然后用自动培养皿读数器(Bio-tek微量培养皿读数器)读取吸收率。用Reed与Munsch方程计算IC50，见《美国卫生学杂志》27卷493-497页，1938。
结果如下表I所述。
表I抗增殖活性细胞系
*两次独立实验的平均值式I的吡咯及其上述盐可被用作药物，例如以药物制剂的形式，可以口服给药，例如以片剂、包衣片、糖衣丸、硬胶囊或软胶囊、溶液、乳液或混悬液的形式。它们也能通过直肠给药，例如以栓剂的形式，或者通过胃肠外给药，例如以注射溶液的形式。
在制备药物制剂时，可以将这些化合物与治疗学上惰性的无机或有机载体进行配制。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐可被用作这样的载体，用来制备片剂、包衣片、糖衣丸和硬胶囊。适用于制备软胶囊的载体为植物油、蜡、脂、半固态或液态多元醇。不过根据活性物质的性质，在制备软胶囊时一般不需要载体。适用于制备溶液和糖浆的载体为水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。适用于制备注射溶液的载体为水、醇、多元醇、甘油和植物油、蜡、脂和半液态多元醇。适用于制备栓剂的载体为天然或硬化油、蜡、脂和半液态多元醇。
药物制剂也可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们也还可以含有其他有治疗学价值的物质。
如上所述，式I的吡咯及其上述盐可用于治疗或控制肿瘤、炎症、免疫学疾病、支气管肺疾病和心血管疾病。剂量可以在较宽的限度内变化，当然在特定情况中要根据个体需要来进行调整。一般来说，在对成年人口服给药的情况下，约5mg至5000mg的每日剂量应当是适当的，不过在需要时可以超过该上限。每日剂量可以单剂量给药，也可以分剂量给药。
下列实施例举例说明本发明。
实施例11-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈将已知化合物1-甲基-1H-吲哚-6-腈(1.0g，6.4mmol)溶于乙醚(Et2O，25ml)，在冰浴中冷却，用草酰氯(0.95ml，10.9mmol，1.7当量)处理。除去冰浴后，很快有黄色固体沉淀出来。该混合物在室温下搅拌过夜，然后收集固体，用乙醚洗涤，并在真空下干燥30分钟，得到1.53g(96％)的(6-氰基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧-乙酰氯。将该物质(1.53g，6.2mmol)连同盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(1.66g，6.2mmol，1当量)混悬在CH2Cl2(100ml)中，在冰浴中冷却。混合物用Et3N(3.5ml，24.8mmol，4当量)处理，在0℃下搅拌30分钟，然后另外在室温下搅拌3小时。反应混合物然后用CH2Cl2(150ml)稀释，用H2O(50ml)洗涤，再用0.5N HCl(50ml)洗涤。有机部分经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一深色油状物。将残余物溶于甲苯(30ml)，在冰浴中冷却，然后用pTsOH(1.3g，6.8mmol，1.1当量)处理，然后在室温下搅拌2小时。收集所沉淀出来的红色固体，用少量甲苯、己烷、H2O洗涤，然后使其在500ml CH2Cl2和75ml饱和NaHCO3之间分配。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到2g红色固体。该固体用冷CH2Cl2洗涤，然后从丙酮/己烷中重结晶，得到938mg的1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈。
实施例21-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈将已知化合物1-甲基-1H-吲哚-5-腈(0.4g，2.55mmol)溶于乙醚(25ml)，在冰浴中冷却，用草酰氯(0.35ml，4.0mmol，1.6当量)处理。混合物在室温下搅拌过夜，然后蒸发除去溶剂，再次从CH2Cl2中蒸发。将该残余物连同盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(0.68g，2.55mmol，1当量)混悬在CH2Cl2(50ml)中，在冰浴中冷却。混合物用三乙胺Et3N(1.4ml，10mmol，4当量)处理，在0℃下搅拌30分钟，然后另外在室温下搅拌3小时。反应混合物然后用CH2Cl2(100ml)稀释，用H2O(25ml)洗涤，再用0.5N HCl(25ml)洗涤。有机部分经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一深色油状物。将残余物溶于甲苯(50ml)，在冰浴中冷却，然后用pTsOH(0.53g，2.8mmol，1.1当量)处理，然后在室温下搅拌过夜。蒸发甲苯，将残余物溶于CH2Cl2(100ml)，然后用饱和NaHCO3(30ml)、H2O(30ml)和盐水(30ml)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，然后用闪蒸柱色谱法精制(己烷中含10％乙酸乙酯(EtOAc))。产物进一步用冷CH2Cl2洗涤精制，得到0.43g的1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈。
实施例3乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯a)乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯将N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(20ml)中的NaH(8.2mM)冷却至0℃，然后用已知的1H-吲哚-6-甲醇(1g，6.8mM)的DMF(8ml)溶液处理。在0℃下搅拌1小时后，加入溶于DMF(2ml)中的甲基碘(MeI，.51ml，8.2mM)，混合物在0℃下搅拌过夜，然后倾入冰/H2O(250ml)中，用EtOAc萃取(50ml×3)。有机部分经MgSO4干燥，过滤，蒸发，并用闪蒸柱色谱法精制，得到1-甲基-1H-吲哚-6-甲醇(.82g，75％)。将该产物(1-甲基-1H-吲哚-6-甲醇，1g，6.2mM)溶于吡啶(5ml)与乙酸酐(Ac2O，5ml)的混合物，在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，残余物用闪蒸柱色谱法精制，得到1.09g乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯。
b)将乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯(1.09g，5.7mM)溶于Et2O(30ml)，冷却至0℃，用草酰氯(0.87ml，10mm)处理。混合物搅拌过夜，同时使温度升至室温。收集黄色沉淀，用Et2O洗涤并干燥，得到1.5g乙醛酰氯加合物乙酸3-氯碳羰基-1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯。将乙醛酰氯加合物(1.5g，5mM)和盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(1.3g，5mM)与CH2Cl2(30ml)混合，冷却至0℃，用Et3N(2.84ml，20mM)处理。使温度升至室温过夜后，反应混合物用CH2Cl2稀释，用H2O(50ml)和0.5M HCl(50ml)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一红色固体。将该物质与甲苯(70ml)混合，用对甲苯磺酸(pTsOH，1g，5.5mM)处理，然后搅拌三小时。过滤后，不溶物用甲苯洗涤，然后溶于CH2Cl2(250ml)，用NaHCO3萃取(2×200ml)。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一红色残余物。该残余物进一步用乙酸乙酯和冷丙酮洗涤精制，得到乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯；熔点271℃。
实施例4下列化合物按照类似于例3b的方法制备。
a)从1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1 H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸甲酯，熔点245℃。
b)从1-甲基-1H-吲哚-6-羧醛制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧醛，熔点241℃。
c)从6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚制得3-(6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮，熔点216-217℃。
6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚是按照下列方法制备的在0℃下，将已知的1H-吲哚-6-甲醇(0.5g，3.4mM)的DMF(30ml)溶液用NaH(8.16mM)处理。搅拌1小时后，混合物用MeI(0.5ml，8.1mM)的DMF(2ml)溶液处理。使混合物温度升至室温过夜，然后倾入H2O(150ml)中，用CH2Cl2萃取(50ml×3)。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发。经过闪蒸柱色谱法精制，得到0.28g的6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚。
实施例53-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮将乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯(0.87g，2mM)与Et3N/H2O/甲醇(MeOH)(5∶4∶1)溶液混合，在～50℃下加热，直至薄层色谱法显示原料已消失。蒸发溶剂后，将残余物溶于CH2Cl2(150ml)，用H2O(50ml)、0.05M HCl(50ml)和饱和NaHCO3溶液(50ml)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发。从EtOAc中结晶，得到0.35g的3-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；熔点245-246℃。
实施例61-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸酰胺在氩气下，将0.7g(1.84mmol)1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈、15ml水中的2.4g(15.6mmol)过硼酸钠四水合物和250ml甲醇的混合物在50℃下加热2天。在真空下除去大部分溶剂后，残余物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到0.6g红色固体物质，将其在乙酸乙酯中回流。将混悬液置于冰箱中，过滤收集红色固体，得到154.3mg(21％)纯1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸酰胺；熔点176-182℃(分解)。
实施例71-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸乙酯a) 将1-甲基-6-氰基吲哚(3.12g，21.9mmol)在含有15g氢氧化钾的180ml乙醇/水(8∶1)中回流加热，得到3.0g的1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸，为一白色固体。
b)在室温下，一边搅拌一边向1.905g(10mmol)盐酸1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)-碳二亚胺、1.20g(10mmol)4-二甲氨基吡啶的20ml亚甲基氯溶液中加入1.05g(6.0mmol)1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸的15ml亚甲基氯溶液。加入乙醇，反应混合物搅拌15h。反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，在无水硫酸镁上干燥。色谱法精制该物质，得到1.08g(89％)1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸乙酯，为一淡黄色油状物。
c)用类似于例3b所述的方法，从1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸乙酯制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸乙酯，熔点215-216℃。
实施例83-[1-(2-丙基)-6-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮a)在氩气下，将10g(55.2mmol)4-甲基-3-硝基-苯甲酸、16.8ml(126.96mmol)N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛的无水N，N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液在140℃下加热17h。反应混合物冷却至室温并蒸发，得到一深红色残余物，将其溶于70ml热甲醇，在25℃下保持3h后在4℃下过夜。过滤结晶产物，晶体用冰冷却的甲醇洗涤，然后用己烷洗涤。在高真空下干燥，得到10.6g(76.9％)4-(2-二甲氨基-乙烯基)-3-硝基-苯甲酸甲酯。
b)将4-(2-二甲氨基-乙烯基)-3-硝基-苯甲酸甲酯(10.4g，41.5mmol)的160ml甲醇溶液在氩气下搅拌，滴加12.9ml(101.92mmol)氯三甲硅烷。所得浅红色溶液回流18h，用己烷/乙酸乙酯(65∶35)的薄层色谱法指示反应完全。蒸发反应混合物得到一油状残余物，重新溶于100ml乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液萃取，有机层经硫酸镁干燥，蒸发得到一油状物。从30ml无水乙醚中结晶，得到10.8g的4-甲酯基-2-硝基苯基-乙醛二甲基乙缩醛。
c)在氢气(50psi，0.45g的10％Pd/C)下，将4-甲酯基-2-硝基苯基-乙醛二甲基乙缩醛(8.75g，41.43mmol)在170ml甲醇中还原2.5h。溶液通过硅藻土过滤，蒸发得到一油状物。从乙醚与己烷中结晶，得到6.16g的2-氨基-4-甲酯基-苯乙醛二甲基乙缩醛。
d)在氩气下，将5.9g(24.66mmol)2-氨基-4-甲酯基-苯乙醛二甲基乙缩醛的160ml乙酸溶液与4.8ml(65.12mmol)丙酮、无水硫酸钠(46.24g，325.6mmol)搅拌10分钟。历时2分钟加入三乙酰氧基硼氢化钠(20.7g，97.68mmol)，反应混合物在25℃下搅拌20分钟。将反应混合物缓慢倾入490ml饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸镁干燥。溶液过滤后浓缩，得到一油状残余物(6g)，用闪蒸色谱法(75％乙酸乙酯/己烷)精制，得到3.8g的4-甲酯基-2-(N-2-丙氨基)-苯乙醛二甲基乙缩醛。
e)将4-甲酯基-2-(N-2-丙氨基)-苯乙醛二甲基乙缩醛(3.7g，13.15mmol)与100ml的1N氢氯酸在甲醇中回流1h。溶液浓缩，将残余物溶于50ml乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机层经硫酸镁干燥并蒸发，得到2.78g的6-甲酯基-1-(2-丙基)-吲哚。
f)在氩气、0℃下，一边搅拌一边向氢化锂铝(52.4mg，1.38mmol)的7ml无水四氢呋喃浆液中滴加0.250g(1.15mmol)6-甲酯基-1-(2-丙基)-吲哚的2ml无水四氢呋喃溶液，然后在25℃下搅拌45分钟。溶液冷却至0℃后，滴加0.340ml甲醇，然后滴加0.58ml的1N氢氧化钠溶液。浆液在25℃下搅拌15分钟。通过硅藻土过滤白色沉淀，溶液浓缩。将残余物混悬在20ml乙酸乙酯和20ml水中。分层。含水层用乙酸乙酯反萃取，合并两次的乙酸乙酯层，经硫酸镁干燥。浓缩得到6-羟甲基-1-(2-丙基)-吲哚，为一油状物(214mg)。
g)在0℃、氩气下，向95％NaH(35.2mg，1.36mmol)的6ml无水N，N-二甲基甲酰胺浆液中滴加6-羟甲基-1-(2-丙基)-吲哚(0.214g，1.13mmol)的2ml N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应混合物在0℃下搅拌1h，然后加入甲基碘(84.7ml，1.356mmol)。反应混合物然后在20℃、氩气下搅拌17h。倾入冰水(50ml)中，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层经无水硫酸镁干燥后蒸发。用乙酸乙酯(2-5％)/己烷进行闪蒸色谱法精制，得到107mg的6-甲氧基甲基-1-(2-丙基)-吲哚。
h)如例3b所述，使6-甲氧基甲基-1-(2-丙基)-吲哚与草酰氯反应，然后与盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯反应，得到3-[1-(2-丙基)-6-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
实施例9片剂
化合物A代表一种本发明的化合物。
制备过程1.将第1、2和3项在一种适当的混合器中混合15分钟。
2.将来自步骤1的粉末混合物与20％聚维酮K30溶液(第4项)造粒。
3.在50℃下干燥来自步骤2的颗粒。
4.使来自步骤3的颗粒通过一种适当的研磨设备。
5.向来自步骤4的研磨了的颗粒中加入第5项，混合3分钟。
6.在一种适当的压片机上压制来自步骤5的颗粒。
实施例10胶囊剂
制备过程1.将第1、2和3项在一种适当的混合器中混合15分钟。
2.加入第4和5项，混合3分钟。
3.装填在一种适当的胶囊中。
实施例11注射溶液/乳液的制备项目成分 mg/ml1 化合物A 1mg2 PEG400 10-50mg3 卵磷脂 20-50mg4 大豆油 1-5mg5 甘油 8-12mg6 水 适量，加至1ml制备过程
1.将第1项溶于第2项。
2.向第6项中加入第3、4和5项，混合直至分散，然后使之均匀。
3.向来自步骤2的混合物中加入来自步骤1的溶液，并使之均匀，直至该分散系呈半透明。
4.通过0.2μm滤器进行除菌过滤，灌装在小瓶中。
实施例12注射溶液/乳液的制备项目 成分 mg/ml1化合物A 1mg2葡糖糠醛 10-50mg3卵磷脂20-50mg4大豆油1-5mg5甘油 8-12mg6水适量，加至1ml制备过程1.将第1项溶于第2项。
2.向第6项中加入第3、4和5项，混合直至分散，然后使之均匀。
3.向来自步骤2的混合物中加入来自步骤1的溶液，并使之均匀，直至该分散系呈半透明。
4.通过0.2μm滤器进行除菌过滤，灌装在小瓶中。
权利要求
1.一种下式化合物 R1和R1’各自为烷基、芳基、链烯基或炔基；R2和R2’各自为氢或烷基；R4、R5、R6和R7每个独立为CH2OC(O)R8、CH2OR10、CHO、CH2NR11R12、氢、卤素、氰基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、卤代烷基、硝基、氨基、酰氨基、芳烷氧基、一烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基或烷基磺酰基，其条件是R4、R5、R6或R7的至少一个是氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO；R8为烷基、芳烷基或芳基；R9为烷基、芳烷基或芳基；R10为氢、烷基、芳烷基或芳基；R11和R12各自为氢、烷基、芳基、芳烷基或酰基；R13为氢、烷基、芳基或芳烷基；和X和Y之一表示O，另一个表示O、S、(H，OH)或(H，H)；以及其药学上可接受的前体药物，或者式I的酸性化合物与碱、或式I的碱性化合物与酸所形成的药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中R1为烷基，优选甲基。
3.权利要求1的化合物，其中R1’为烷基，优选甲基，R2’为氢。
4.权利要求1的化合物，其中R4、R5、R6和R7之一为氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO，其余为氢；优选R6为氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO，而R4、R5和R7为氢。
5.权利要求4的化合物，其中R8为烷基，优选甲基，R9为烷基，优选甲基，R10为氢或烷基，优选甲基，R11、R12和R13为氢。
6.权利要求1的化合物，其中R1为烷基，R2为氢，R1’为烷基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO、CON(R13)2。
7.权利要求13的化合物，其中R8为烷基，R9为烷基，R10为氢或烷基，R11、R12和R13为氢，其中所述烷基优选为甲基。
8.权利要求1的化合物，该化合物是1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈；1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈；乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯；1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-甲醛；3-(6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；或3-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
9.一种药物组合物，该组合物含有如权利要求1-8中任意一项所要求保护的式I化合物、或其药学上可接受的前药、或式I的酸性化合物与一种碱或式I的碱性化合物与一种酸所形成的药学上可接受的盐，和一种惰性载体。
10.如权利要求1-8中任意一项所要求保护的化合物的用途，用于抑制细胞增殖或用于制备相应的药物。
全文摘要
式(I)化合物，其中R
文档编号A61K31/40GK1495182SQ03127540
公开日2004年5月12日 申请日期1997年7月19日 优先权日1996年7月29日
发明者唐娜·M·赫因, 丹尼斯·D·基思, D 基思, 唐娜 M 赫因 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
技术领域：
本发明专利申请是依据1996年7月29日提交的国际申请号为PCT/EP97/03889、国际公开号为WO 98/04552的发明专利申请，即为于1999年1月25日在中国提交的申请号为97196776.8、发明名称为“用于抑制细胞增殖的取代的双吲哚基马来酰亚胺”的发明专利申请的分案申请。本发明涉及取代的吡咯。更具体地说，本发明涉及下式的取代的吡咯 其中R1和R1’各自为烷基、芳基、链烯基或炔基；R2和R2’各自为氢或烷基；R4、R5、R6和R7每个独立为CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CHO、CH2NR11R12、CON(R13)2、氢、卤素、氰基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、卤代烷基、硝基、氨基、酰氨基、芳烷氧基、一烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基或烷基磺酰基，其条件是R4、R5、R6或R7的至少一个是氰基、CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2；R8为烷基、芳烷基或芳基；R9为烷基、芳烷基或芳基；R10为氢、烷基、芳烷基或芳基；
R11和R12各自为氢、烷基、芳基、芳烷基或酰基；R13为氢、烷基、芳基或芳烷基；以及X和Y之一表示O，另一个表示O、S、(H，OH)或(H，H)；及其药学上可接受的前药，或者式I的酸性化合物与碱、或式I的碱性化合物与酸所形成的药学上可接受的盐。
式I化合物及其药学上可接受的盐是抗增殖剂，可用于治疗或控制癌症，特别是用于治疗或控制实体瘤。本发明化合物尤其可用于治疗或控制乳房肿瘤和结肠肿瘤。
这里所用的“烷基”一词，在单独或结合使用时均指最多含有10个碳原子、优选最多含有5个碳原子的直链或支链饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基和戊基，该烃基是未取代的，或者被一个或多个取代基取代，取代基选自由羟基、烷氧基、氨基、卤素、硫代烷基、氰基、羧基或羧酸衍生物、或烷基亚磺酰基组成的组。术语“烷氧基”所表示的基团中烷基部分是如上定义的，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基和叔丁氧基等等。卤代烷基可以携带一个或多个卤原子，这样的基团的实例是氯甲基和三氟甲基。单独或结合使用时的术语“酰基”指来自最多含有10个碳原子、优选最多含有5个碳原子的未取代或取代的链烷酸的基团，例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、三氟乙酰基、氯乙酰基、三氯乙酰基、氨基乙酰基或2-氨基-丙酰基等等，或者是来自未取代或取代的芳族羧酸的基团，例如苯甲酰基。链烷酸上的取代基实例包括下列之一或多个羟基、烷氧基、氨基、卤素、硫代烷基、氰基、羧基、羧酸衍生物或烷基亚磺酰等等。芳族羧酸上的取代基实例包括下列之一或多个卤素、烷基、羟基、苯甲氧基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基、氰基等等。单独或结合使用时的术语“芳基”指未取代的苯基或携带一个或多个、优选一至三个取代基的苯基，取代基实例为卤素、烷基、羟基、苯甲氧基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基和氰基。术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。术语“羧酸衍生物”指酯、酰胺、氰基、酰氯等等。术语“链烯基”指具有至少一条双键的2至5个碳原子(优选3至5个碳原子)的直链或支链烃基。术语“炔基”指具有至少一条叁键的2至5个碳原子(优选3至5个碳原子)的直链或支链烃基。
这里所用的“药学上可接受的前药”指一种在生理学条件下或通过溶剂分解作用可以转化为式I化合物或其药学上可接受的盐的化合物。
在上式I中，R1和R1’优选为烷基。在一个特别优选的实施方式中，R1和R1’优选为甲基。
优选地，R4、R5、R6和R7之一为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2，其他为氢。
在一个特别优选的实施方式中，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO或CON(R13)2，R4、R5和R7为氢。
特别优选的式I化合物是，其中R1为甲基，R2为氢，R1’为甲基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CON(R13)2或CHO。
在特别优选的化合物中，R1为甲基，R2为氢，R1’为甲基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、 CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CON(R13)2和CHO，其中R8和R9为烷基、优选为甲基，R10为烷基、优选为甲基、或氢，R11、R12和R13为氢。
其中X和Y都表示O的式I化合物是按照下列流程I进行制备的。
其中R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6和R7是如上定义的；其条件是若任一个R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6或R7是与酰氯反应的取代基，例如若任一个R1、R1’、R2、R2’、R4、R5、R6或R7是羟基、羟基烷基、氨基、一烷基氨基或氨基烷基，则这样的取代基被一种惯用的保护基团保护起来。
如流程I所述，式II化合物是一种已知的化合物或者是按照已知方法制备的化合物，按照常规方法，使式II化合物与草酰氯反应，反适宜在一种惰性有机溶剂中进行，例如卤代脂肪烃，反应温度为约0℃至溶剂的回流温度，反应生成相应的式III化合物。
在约0至25℃的温度下，在二氯甲烷等一种溶剂中，使式III化合物与式IV化合物和三乙胺反应，该式IV化合物是一种已知的化合物或者是按照已知方法制备的化合物，然后在约25℃的温度下，在甲苯等一种溶剂中，用对甲苯磺酸处理，得到相应的式Ia化合物。如果在式III化合物与式IV化合物的反应过程中使用了一种保护基团，此时用已知方法除去之。
用一种复合金属氢化物还原其中X和Y都表示O的式I(即式Ia)化合物，藉此制备其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，OH)的式I化合物。
该还原反应可以用一种已知方式进行，包括按照已知方法在还原前保护吲哚环上的取代基，还原后去保护。氢化锂铝等一种碱金属铝的氢化物优选用作复合金属氢化物，不过也能使用其他氢化物，例如氢化二异丁基铝和二氢-双(2-甲氧基-乙氧基)铝酸钠。适合在其中进行该还原反应的惰性有机溶剂包括脂肪族醚和环醚，例如二乙醚或四氢呋喃(THF)，还包括烃类，例如己烷、苯和甲苯。该还原反应宜在室温下进行。
催化氢化其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，OH)的式I化合物，藉此可制备其中X和Y之一表示O、另一个表示(H，H)的式I化合物。
在进行催化氢化反应时可以采用常规方法，包括按照已知方法保护和去保护吲哚环上的取代基。
因此该催化氢化反应可以在钯或铂催化剂等一种贵金属催化剂(例如钯/碳(Pd/C)催化剂)和链烷醇等一种惰性有机溶剂(例如甲醇或乙醇)的存在下进行。该催化氢化反应适宜在约室温下和大气压下进行。
使其中X和Y都表示O的式I化合物与一种硫化剂反应，藉此制备其中X和Y之一表示O、另一个表示S的式I化合物。
进行硫化反应可以采用常规方法，包括硫化反应前取代基的保护和硫化反应后的去保护，这对本领域的技术人员来说是已知的。在进行该硫化反应时宜使用五硫化磷、Lawesson试剂(2，4-双(4-甲氧基苯基)-1，2-二硫代-1，3，2，4-dithiaphosphetane《比利时化学会通报》87(1978)229-238)或Davy试剂(2，4-双(甲硫基)-1，3，2，4-dithiadiphosphetane《硫快报》1983，1，167)。该反应宜在诸如脂肪醚或环醚(例如二甲氧基乙烷)、或芳族烃等一种惰性有机溶剂中进行，该芳族烃可以是卤代的(例如苯、甲苯或氯苯)，并且宜在高温下进行，尤其是在反应混合物的回流温度下。
如果需要的话，可以用一种碱将式I的酸性化合物转化为药学上可接受的盐，或者可以用一种酸将式I的碱性化合物转化为药学上可接受的盐。
按照已知方法，通过一种适当的碱的处理，可以进行式I的酸性化合物向药学上可接受的盐的转化。适当的盐不仅来源于无机碱、如钠盐、钾盐或钙盐，也来源于有机碱、如乙二胺、一乙醇胺或二乙醇胺。按照已知方法，通过一种适当的酸的处理，可以进行式I的碱性化合物向药学上可接受的盐的转化。适当的盐不仅来源于无机酸、如氢氯酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐或硫酸盐，也来源于有机酸、如乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
式I的吡咯及其药学上可接受的盐抑制细胞活动，例如细胞增殖，因此可用于治疗或控制诸如关节炎等炎症、免疫疾病以及器官移植和肿瘤。
从ATCC(美国典型培养物保藏中心)购得乳癌上皮细胞系MDA-MB435和结肠癌细胞系SW480，在ATCC推荐的培养基中进行培养。为了分析不同化合物对这些细胞生长的作用，将细胞置于96池组织培养皿(“供试皿”)中，浓度为1500个细胞/池。放置细胞后的第二天，将所要分析的化合物溶于100％DMSO(二甲基亚砜)，得到10mM储备溶液。每种化合物在H2O中稀释至1mM，加入到96池主皿第一排含有培养基的三重池中，得到最终浓度为40μM。然后将化合物连续稀释在“主皿”培养基中。然后将稀释了的化合物转移至含有细胞的供试皿中。一排作为媒介物的“对照细胞”接受DMSO。每池中DMSO的最终浓度为0.1％。在药物加入后第5天，如下对含有MDA-MB435细胞的培养皿进行分析。在药物加入后第7天，如下对含有SW480细胞的培养皿进行分析。
向每池中加入MTT([溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑鎓]；噻唑基蓝)，得到最终浓度为1mg/ml。然后在37℃下将培养皿培养2 1/2-3小时。然后除去含有MTT的培养基，向每池中加入50μl100％乙醇，以溶解甲。然后用自动培养皿读数器(Bio-tek微量培养皿读数器)读取吸收率。用Reed与Munsch方程计算IC50，见《美国卫生学杂志》27卷493-497页，1938。
结果如下表I所述。
表I抗增殖活性细胞系
*两次独立实验的平均值式I的吡咯及其上述盐可被用作药物，例如以药物制剂的形式，可以口服给药，例如以片剂、包衣片、糖衣丸、硬胶囊或软胶囊、溶液、乳液或混悬液的形式。它们也能通过直肠给药，例如以栓剂的形式，或者通过胃肠外给药，例如以注射溶液的形式。
在制备药物制剂时，可以将这些化合物与治疗学上惰性的无机或有机载体进行配制。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐可被用作这样的载体，用来制备片剂、包衣片、糖衣丸和硬胶囊。适用于制备软胶囊的载体为植物油、蜡、脂、半固态或液态多元醇。不过根据活性物质的性质，在制备软胶囊时一般不需要载体。适用于制备溶液和糖浆的载体为水、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。适用于制备注射溶液的载体为水、醇、多元醇、甘油和植物油、蜡、脂和半液态多元醇。适用于制备栓剂的载体为天然或硬化油、蜡、脂和半液态多元醇。
药物制剂也可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、包衣剂或抗氧化剂。它们也还可以含有其他有治疗学价值的物质。
如上所述，式I的吡咯及其上述盐可用于治疗或控制肿瘤、炎症、免疫学疾病、支气管肺疾病和心血管疾病。剂量可以在较宽的限度内变化，当然在特定情况中要根据个体需要来进行调整。一般来说，在对成年人口服给药的情况下，约5mg至5000mg的每日剂量应当是适当的，不过在需要时可以超过该上限。每日剂量可以单剂量给药，也可以分剂量给药。
下列实施例举例说明本发明。
实施例11-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈将已知化合物1-甲基-1H-吲哚-6-腈(1.0g，6.4mmol)溶于乙醚(Et2O，25ml)，在冰浴中冷却，用草酰氯(0.95ml，10.9mmol，1.7当量)处理。除去冰浴后，很快有黄色固体沉淀出来。该混合物在室温下搅拌过夜，然后收集固体，用乙醚洗涤，并在真空下干燥30分钟，得到1.53g(96％)的(6-氰基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧-乙酰氯。将该物质(1.53g，6.2mmol)连同盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(1.66g，6.2mmol，1当量)混悬在CH2Cl2(100ml)中，在冰浴中冷却。混合物用Et3N(3.5ml，24.8mmol，4当量)处理，在0℃下搅拌30分钟，然后另外在室温下搅拌3小时。反应混合物然后用CH2Cl2(150ml)稀释，用H2O(50ml)洗涤，再用0.5N HCl(50ml)洗涤。有机部分经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一深色油状物。将残余物溶于甲苯(30ml)，在冰浴中冷却，然后用pTsOH(1.3g，6.8mmol，1.1当量)处理，然后在室温下搅拌2小时。收集所沉淀出来的红色固体，用少量甲苯、己烷、H2O洗涤，然后使其在500ml CH2Cl2和75ml饱和NaHCO3之间分配。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到2g红色固体。该固体用冷CH2Cl2洗涤，然后从丙酮/己烷中重结晶，得到938mg的1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈。
实施例21-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈将已知化合物1-甲基-1H-吲哚-5-腈(0.4g，2.55mmol)溶于乙醚(25ml)，在冰浴中冷却，用草酰氯(0.35ml，4.0mmol，1.6当量)处理。混合物在室温下搅拌过夜，然后蒸发除去溶剂，再次从CH2Cl2中蒸发。将该残余物连同盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(0.68g，2.55mmol，1当量)混悬在CH2Cl2(50ml)中，在冰浴中冷却。混合物用三乙胺Et3N(1.4ml，10mmol，4当量)处理，在0℃下搅拌30分钟，然后另外在室温下搅拌3小时。反应混合物然后用CH2Cl2(100ml)稀释，用H2O(25ml)洗涤，再用0.5N HCl(25ml)洗涤。有机部分经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一深色油状物。将残余物溶于甲苯(50ml)，在冰浴中冷却，然后用pTsOH(0.53g，2.8mmol，1.1当量)处理，然后在室温下搅拌过夜。蒸发甲苯，将残余物溶于CH2Cl2(100ml)，然后用饱和NaHCO3(30ml)、H2O(30ml)和盐水(30ml)洗涤。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，然后用闪蒸柱色谱法精制(己烷中含10％乙酸乙酯(EtOAc))。产物进一步用冷CH2Cl2洗涤精制，得到0.43g的1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈。
实施例3乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯a)乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯将N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(20ml)中的NaH(8.2mM)冷却至0℃，然后用已知的1H-吲哚-6-甲醇(1g，6.8mM)的DMF(8ml)溶液处理。在0℃下搅拌1小时后，加入溶于DMF(2ml)中的甲基碘(MeI，.51ml，8.2mM)，混合物在0℃下搅拌过夜，然后倾入冰/H2O(250ml)中，用EtOAc萃取(50ml×3)。有机部分经MgSO4干燥，过滤，蒸发，并用闪蒸柱色谱法精制，得到1-甲基-1H-吲哚-6-甲醇(.82g，75％)。将该产物(1-甲基-1H-吲哚-6-甲醇，1g，6.2mM)溶于吡啶(5ml)与乙酸酐(Ac2O，5ml)的混合物，在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，残余物用闪蒸柱色谱法精制，得到1.09g乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯。
b)将乙酸1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯(1.09g，5.7mM)溶于Et2O(30ml)，冷却至0℃，用草酰氯(0.87ml，10mm)处理。混合物搅拌过夜，同时使温度升至室温。收集黄色沉淀，用Et2O洗涤并干燥，得到1.5g乙醛酰氯加合物乙酸3-氯碳羰基-1-甲基-1H-吲哚-6-基甲酯。将乙醛酰氯加合物(1.5g，5mM)和盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯(1.3g，5mM)与CH2Cl2(30ml)混合，冷却至0℃，用Et3N(2.84ml，20mM)处理。使温度升至室温过夜后，反应混合物用CH2Cl2稀释，用H2O(50ml)和0.5M HCl(50ml)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一红色固体。将该物质与甲苯(70ml)混合，用对甲苯磺酸(pTsOH，1g，5.5mM)处理，然后搅拌三小时。过滤后，不溶物用甲苯洗涤，然后溶于CH2Cl2(250ml)，用NaHCO3萃取(2×200ml)。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到一红色残余物。该残余物进一步用乙酸乙酯和冷丙酮洗涤精制，得到乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯；熔点271℃。
实施例4下列化合物按照类似于例3b的方法制备。
a)从1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸甲酯制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1 H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸甲酯，熔点245℃。
b)从1-甲基-1H-吲哚-6-羧醛制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧醛，熔点241℃。
c)从6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚制得3-(6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮，熔点216-217℃。
6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚是按照下列方法制备的在0℃下，将已知的1H-吲哚-6-甲醇(0.5g，3.4mM)的DMF(30ml)溶液用NaH(8.16mM)处理。搅拌1小时后，混合物用MeI(0.5ml，8.1mM)的DMF(2ml)溶液处理。使混合物温度升至室温过夜，然后倾入H2O(150ml)中，用CH2Cl2萃取(50ml×3)。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发。经过闪蒸柱色谱法精制，得到0.28g的6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚。
实施例53-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮将乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯(0.87g，2mM)与Et3N/H2O/甲醇(MeOH)(5∶4∶1)溶液混合，在～50℃下加热，直至薄层色谱法显示原料已消失。蒸发溶剂后，将残余物溶于CH2Cl2(150ml)，用H2O(50ml)、0.05M HCl(50ml)和饱和NaHCO3溶液(50ml)萃取。有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发。从EtOAc中结晶，得到0.35g的3-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；熔点245-246℃。
实施例61-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸酰胺在氩气下，将0.7g(1.84mmol)1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈、15ml水中的2.4g(15.6mmol)过硼酸钠四水合物和250ml甲醇的混合物在50℃下加热2天。在真空下除去大部分溶剂后，残余物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到0.6g红色固体物质，将其在乙酸乙酯中回流。将混悬液置于冰箱中，过滤收集红色固体，得到154.3mg(21％)纯1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸酰胺；熔点176-182℃(分解)。
实施例71-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸乙酯a) 将1-甲基-6-氰基吲哚(3.12g，21.9mmol)在含有15g氢氧化钾的180ml乙醇/水(8∶1)中回流加热，得到3.0g的1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸，为一白色固体。
b)在室温下，一边搅拌一边向1.905g(10mmol)盐酸1-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)-碳二亚胺、1.20g(10mmol)4-二甲氨基吡啶的20ml亚甲基氯溶液中加入1.05g(6.0mmol)1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸的15ml亚甲基氯溶液。加入乙醇，反应混合物搅拌15h。反应混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用盐水洗涤，在无水硫酸镁上干燥。色谱法精制该物质，得到1.08g(89％)1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸乙酯，为一淡黄色油状物。
c)用类似于例3b所述的方法，从1-甲基-1H-吲哚-6-羧酸乙酯制得1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-羧酸乙酯，熔点215-216℃。
实施例83-[1-(2-丙基)-6-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮a)在氩气下，将10g(55.2mmol)4-甲基-3-硝基-苯甲酸、16.8ml(126.96mmol)N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛的无水N，N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液在140℃下加热17h。反应混合物冷却至室温并蒸发，得到一深红色残余物，将其溶于70ml热甲醇，在25℃下保持3h后在4℃下过夜。过滤结晶产物，晶体用冰冷却的甲醇洗涤，然后用己烷洗涤。在高真空下干燥，得到10.6g(76.9％)4-(2-二甲氨基-乙烯基)-3-硝基-苯甲酸甲酯。
b)将4-(2-二甲氨基-乙烯基)-3-硝基-苯甲酸甲酯(10.4g，41.5mmol)的160ml甲醇溶液在氩气下搅拌，滴加12.9ml(101.92mmol)氯三甲硅烷。所得浅红色溶液回流18h，用己烷/乙酸乙酯(65∶35)的薄层色谱法指示反应完全。蒸发反应混合物得到一油状残余物，重新溶于100ml乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液萃取，有机层经硫酸镁干燥，蒸发得到一油状物。从30ml无水乙醚中结晶，得到10.8g的4-甲酯基-2-硝基苯基-乙醛二甲基乙缩醛。
c)在氢气(50psi，0.45g的10％Pd/C)下，将4-甲酯基-2-硝基苯基-乙醛二甲基乙缩醛(8.75g，41.43mmol)在170ml甲醇中还原2.5h。溶液通过硅藻土过滤，蒸发得到一油状物。从乙醚与己烷中结晶，得到6.16g的2-氨基-4-甲酯基-苯乙醛二甲基乙缩醛。
d)在氩气下，将5.9g(24.66mmol)2-氨基-4-甲酯基-苯乙醛二甲基乙缩醛的160ml乙酸溶液与4.8ml(65.12mmol)丙酮、无水硫酸钠(46.24g，325.6mmol)搅拌10分钟。历时2分钟加入三乙酰氧基硼氢化钠(20.7g，97.68mmol)，反应混合物在25℃下搅拌20分钟。将反应混合物缓慢倾入490ml饱和碳酸氢钠溶液，用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸镁干燥。溶液过滤后浓缩，得到一油状残余物(6g)，用闪蒸色谱法(75％乙酸乙酯/己烷)精制，得到3.8g的4-甲酯基-2-(N-2-丙氨基)-苯乙醛二甲基乙缩醛。
e)将4-甲酯基-2-(N-2-丙氨基)-苯乙醛二甲基乙缩醛(3.7g，13.15mmol)与100ml的1N氢氯酸在甲醇中回流1h。溶液浓缩，将残余物溶于50ml乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，有机层经硫酸镁干燥并蒸发，得到2.78g的6-甲酯基-1-(2-丙基)-吲哚。
f)在氩气、0℃下，一边搅拌一边向氢化锂铝(52.4mg，1.38mmol)的7ml无水四氢呋喃浆液中滴加0.250g(1.15mmol)6-甲酯基-1-(2-丙基)-吲哚的2ml无水四氢呋喃溶液，然后在25℃下搅拌45分钟。溶液冷却至0℃后，滴加0.340ml甲醇，然后滴加0.58ml的1N氢氧化钠溶液。浆液在25℃下搅拌15分钟。通过硅藻土过滤白色沉淀，溶液浓缩。将残余物混悬在20ml乙酸乙酯和20ml水中。分层。含水层用乙酸乙酯反萃取，合并两次的乙酸乙酯层，经硫酸镁干燥。浓缩得到6-羟甲基-1-(2-丙基)-吲哚，为一油状物(214mg)。
g)在0℃、氩气下，向95％NaH(35.2mg，1.36mmol)的6ml无水N，N-二甲基甲酰胺浆液中滴加6-羟甲基-1-(2-丙基)-吲哚(0.214g，1.13mmol)的2ml N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应混合物在0℃下搅拌1h，然后加入甲基碘(84.7ml，1.356mmol)。反应混合物然后在20℃、氩气下搅拌17h。倾入冰水(50ml)中，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层经无水硫酸镁干燥后蒸发。用乙酸乙酯(2-5％)/己烷进行闪蒸色谱法精制，得到107mg的6-甲氧基甲基-1-(2-丙基)-吲哚。
h)如例3b所述，使6-甲氧基甲基-1-(2-丙基)-吲哚与草酰氯反应，然后与盐酸2-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙酰亚胺酸异丙酯反应，得到3-[1-(2-丙基)-6-甲氧基甲基-1H-吲哚-3-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
实施例9片剂
化合物A代表一种本发明的化合物。
制备过程1.将第1、2和3项在一种适当的混合器中混合15分钟。
2.将来自步骤1的粉末混合物与20％聚维酮K30溶液(第4项)造粒。
3.在50℃下干燥来自步骤2的颗粒。
4.使来自步骤3的颗粒通过一种适当的研磨设备。
5.向来自步骤4的研磨了的颗粒中加入第5项，混合3分钟。
6.在一种适当的压片机上压制来自步骤5的颗粒。
实施例10胶囊剂
制备过程1.将第1、2和3项在一种适当的混合器中混合15分钟。
2.加入第4和5项，混合3分钟。
3.装填在一种适当的胶囊中。
实施例11注射溶液/乳液的制备项目成分 mg/ml1 化合物A 1mg2 PEG400 10-50mg3 卵磷脂 20-50mg4 大豆油 1-5mg5 甘油 8-12mg6 水 适量，加至1ml制备过程
1.将第1项溶于第2项。
2.向第6项中加入第3、4和5项，混合直至分散，然后使之均匀。
3.向来自步骤2的混合物中加入来自步骤1的溶液，并使之均匀，直至该分散系呈半透明。
4.通过0.2μm滤器进行除菌过滤，灌装在小瓶中。
实施例12注射溶液/乳液的制备项目 成分 mg/ml1化合物A 1mg2葡糖糠醛 10-50mg3卵磷脂20-50mg4大豆油1-5mg5甘油 8-12mg6水适量，加至1ml制备过程1.将第1项溶于第2项。
2.向第6项中加入第3、4和5项，混合直至分散，然后使之均匀。
3.向来自步骤2的混合物中加入来自步骤1的溶液，并使之均匀，直至该分散系呈半透明。
4.通过0.2μm滤器进行除菌过滤，灌装在小瓶中。
权利要求
1.一种下式化合物 R1和R1’各自为烷基、芳基、链烯基或炔基；R2和R2’各自为氢或烷基；R4、R5、R6和R7每个独立为CH2OC(O)R8、CH2OR10、CHO、CH2NR11R12、氢、卤素、氰基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、卤代烷基、硝基、氨基、酰氨基、芳烷氧基、一烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、烷基亚磺酰基或烷基磺酰基，其条件是R4、R5、R6或R7的至少一个是氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO；R8为烷基、芳烷基或芳基；R9为烷基、芳烷基或芳基；R10为氢、烷基、芳烷基或芳基；R11和R12各自为氢、烷基、芳基、芳烷基或酰基；R13为氢、烷基、芳基或芳烷基；和X和Y之一表示O，另一个表示O、S、(H，OH)或(H，H)；以及其药学上可接受的前体药物，或者式I的酸性化合物与碱、或式I的碱性化合物与酸所形成的药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中R1为烷基，优选甲基。
3.权利要求1的化合物，其中R1’为烷基，优选甲基，R2’为氢。
4.权利要求1的化合物，其中R4、R5、R6和R7之一为氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO，其余为氢；优选R6为氰基、CH2OC(O)R8、CH2OR10、CH2NR11R12或CHO，而R4、R5和R7为氢。
5.权利要求4的化合物，其中R8为烷基，优选甲基，R9为烷基，优选甲基，R10为氢或烷基，优选甲基，R11、R12和R13为氢。
6.权利要求1的化合物，其中R1为烷基，R2为氢，R1’为烷基，R2’为氢，R4、R5、R7为氢，R6为氰基、CH2OC(O)R8、CO2R9、CH2OR10、CH2NR11R12、CHO、CON(R13)2。
7.权利要求13的化合物，其中R8为烷基，R9为烷基，R10为氢或烷基，R11、R12和R13为氢，其中所述烷基优选为甲基。
8.权利要求1的化合物，该化合物是1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-腈；1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-5-腈；乙酸1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-基甲酯；1-甲基-3-[4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-2，5-二氧-2，5-二氢-1H-吡咯-3-基]-1H-吲哚-6-甲醛；3-(6-甲氧基甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮；或3-(6-羟甲基-1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮。
9.一种药物组合物，该组合物含有如权利要求1-8中任意一项所要求保护的式I化合物、或其药学上可接受的前药、或式I的酸性化合物与一种碱或式I的碱性化合物与一种酸所形成的药学上可接受的盐，和一种惰性载体。
10.如权利要求1-8中任意一项所要求保护的化合物的用途，用于抑制细胞增殖或用于制备相应的药物。
全文摘要
式(I)化合物，其中R
文档编号A61K31/40GK1495182SQ03127540
公开日2004年5月12日 申请日期1997年7月19日 优先权日1996年7月29日
发明者唐娜·M·赫因, 丹尼斯·D·基思, D 基思, 唐娜 M 赫因 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
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