稳定的干扰素局部用组合物的制作方法
专利名称：稳定的干扰素局部用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种稳定的非注射的干扰素液态局部给药组合物。可制成酊剂、滴眼剂、滴鼻剂、滴耳剂、气(粉)雾剂或喷雾剂、洗剂和搽剂，也可用于口腔、鼻腔给药或超声雾化吸入给药，用于治疗或预防多种病毒引起的皮肤、粘膜和眼部、口腔、耳道、呼吸系统和外生殖器疾病。
背景技术：
干扰素独特的抗病毒机理使其成为预防和治疗病毒感染性疾病的重要药物。然而由于干扰素作为蛋白质的大分子特性，常规注射给药时体内半衰期短，难以在病变部位达到有效剂量。而加大给药剂量又会增大干扰素对机体的毒副作用。如果可以将干扰素制成局部给药剂型，用于预防和治疗多种病毒引起的皮肤和眼部、鼻腔、口腔、尿道、阴道等处的如疾病，或通过雾化吸入的方式，用于呼吸系统感染，可以保证在使用较小剂量即可实现局部有效的同时，降低或不引起干扰素的全身副反应。
单纯疱疹病毒(HSV)中HSV-1型常引起口唇和角膜疱疹，并导致单纯疱疹性角膜炎，原发性和复发性疱疹性口炎等其他病变；HSV-2型则引起生殖器疱疹；水痘-带状疱疹病毒不仅可引起水痘，当潜伏在后根神经节中的病毒被激活时则出现带状疱疹；人乳头瘤病毒(HPV)能诱发各种疣；流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒和冠状病毒可引起呼吸道病毒感染，导致流感、气管支气管炎和病毒性肺炎；腮腺炎病毒引起流行性腮腺炎。体外实验和动物实验均显示干扰素对上述病毒有明显抑制作用。国外早在七十年代就有将干扰素制成外用剂型用于预防和治疗局部病毒感染的报导。国内也已相继出现干扰素滴眼液、凝胶、软膏、栓剂等外用制剂。
为了制备干扰素局部制剂，重要的问题是保持干扰素的活性。目前已上市的干扰素的外用制剂，大多含有人血液提取成分作为稳定剂，如CN1284381A公开了一种重组人α-干扰素凝胶，以及CN1132098A公开的干扰素的喷雾制剂，其中均含有人血清白蛋白作为稳定剂。人血液成分的使用导致了生产工艺复杂，特别是还有血液制品污染和传播病毒的问题。
作为不含人血液成分的干扰素制剂，CN1200942A公开了一种外用的干扰素脂质体凝胶，其中含有干扰素脂质体和羟丙甲基纤维素。但是其中没有提及药物的稳定性。CN1327853A公开了一种稳定的α-干扰素制剂，其中使用了羟乙基淀粉和/或葡聚糖作为稳定剂，其中虽然说到了该制剂可以用作口服和注射之外的制剂，但是并没有实际公开这些内容。WO01/41793A1公开了一种稳定的α-干扰素水溶液制剂，其中使用了羟乙基淀粉作为稳定剂，其中虽然说到了该制剂可以用作口服和注射之外的制剂，但是并没有实际公开这些内容。
CN1389470A公开了一种含有明胶的重组α-干扰素液体稳定剂，但是其涉及的是含有明胶的注射剂，对于局部给药制剂来说，效果如何尚不可知。
本发明的目的在于提供一种稳定的干扰素液态局部制剂，其中可以不含有人血成分，可以长期保持活性，并且局部给药具有较高的作用。
发明概述本发明技术方案如下1.一种含有干扰素的局部用组合物，其特征在于至少含有明胶作为稳定剂。
2.根据1的组合物，稳定剂中还含有至少一种其它非人源的可药用高分子化合物。
3.根据2的组合物，其中所述可药用高分子选自羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙二醇和乙基纤维素或其可药用衍生物。
4.根据1～3之一的组合物，其中还含有保湿剂。
5.根据4的组合物，所述保湿剂选自山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇。
6.根据1～3之一的组合物，其中还含有透皮吸收促进剂。
7.根据6的组合物，所述透皮吸收促进剂选自尿素、二甲基亚砜(DMSO)、十二烷基硫酸钠(SDS)和月桂氮卓酮(氮酮)。
8.根据1～3之一的组合物，其中还含有渗透压调节剂。
9.根据8的组合物，所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖。
10.1～9中的任一项组合物用于治疗局部病毒感染导致的疾病，例如复发性口唇疱疹、尖锐湿疣、流感、病毒性支气管炎、病毒性肺炎和流行性腮腺炎。
11.1～9中的任一项制剂用于治疗单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、水痘-带状疱疹病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、冠状病毒和腮腺炎病毒感染。
本文中所述局部用组合物是指含有主药和辅料的组合物本身，该组合物如果灌装入给药用具制成药品的话，可以作为喷雾剂、搽剂、酊剂、凝胶剂等使用。因此，本发明中的“组合物”与“制剂”的含义实际上是相同的。
具体来说，在本发明提供了一种可以不含有人血提取成分的稳定的干扰素外用组合物，其中主要含有以下成分1.α-干扰素2.保持pH为5.0-7.5的缓冲体系3.干扰素活性保护剂和保湿剂和/或成膜剂4.透皮吸收促进剂5.渗透压调节剂6.防腐剂7.注射用水在本发明的上述可以不含有人血提取成分的稳定的干扰素局部用组合物的制备的方法，包括将α-干扰素，保持pH为5.0-7.5的缓冲体系，干扰素活性保护剂与保湿剂和/或成膜剂，透皮吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂和适量注射用水依次混合制成水溶液的步骤。
根据本发明，将本发明组合物灌装入药用喷雾瓶的药品，其中的药用喷雾瓶装有有效量的本发明的稳定的干扰素水溶液制剂。因此，本发明也提供了一种可以适用于喷雾给药的稳定的干扰素液体制剂，另外通过调节处方、粘度等，可以适用于搽剂、酊剂、凝胶剂等剂型。
发明详述本发明的稳定的干扰素局部用制剂中含有干扰素，优选α-干扰素，更优选干扰素α-2b作为有效成分。
为保持干扰素活性，其中还至少含有明胶作为干扰素活性保护剂。为了增强明胶的作用，干扰素活性保护剂中优选进一步含有其它可药用高分子。
本领域技术人员可以理解，干扰素应当处于生理pH附近的缓冲体系中，例如保持pH为4.0-9.0，优选5.0-7.5左右的缓冲体系。
本发明制剂中优选含有保湿剂和渗透压调节剂。
为了促进干扰素的吸收，在外用的情况下，该局部制剂还应当含有透皮吸收促进剂。
本发明中，术语“干扰素”主要指“α-干扰素”，是指已工业化生产并临床应用的任何天然和重组生产的所有α型的干扰素及其具有抗病毒和免疫调节活性的衍生物。在本发明的制剂中，干扰素的含量没有具体限定，可以在广泛范围内适用本发明。优选的，本发明制剂中的干扰素含量为0.5～100万/mL，更优选优选5万～100万/mL。本领域技术人员可以理解，干扰素浓度越高，活性越强，因此，采用本发明有助于提高干扰素的有效浓度，对发挥干扰素的治疗作用是有益的。
本发明的术语“保持pH为5.0-7.5的缓冲体系”是指那些能保持水溶液制剂的pH范围在5.0-7.5的任何一种缓冲体系，包括磷酸，枸橼酸，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠等物质及其组合。优选地，是枸橼酸和磷酸氢二钠缓冲体系，因为这两种成分组合后可以络合溶液中微量重金属离子，起到抑制干扰素自氧化的作用。
本发明的术语“干扰素活性保护剂”是指本领域公知的任何高分子物质，包括但不限于明胶，纤维素衍生物、淀粉衍生物等。本发明中“干扰素活性保护剂”至少包含明胶，但是也可以进一步含有其它可以用作干扰素活性保护剂的药用高分子化合物，如羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素或其盐，乙基纤维素、羟乙基淀粉、羧甲基淀粉或其盐、葡聚糖等。优选地，是明胶和羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基淀粉等的组合，最优选明胶和羟丙甲基纤维素的组合。在此稳定剂存在下，可以将干扰素分子包裹在水溶性高分子中，从而稳定干扰素分子的空间构象，保持其活性，并防止其被氧化。
本发明的术语“保湿剂”是指本领域公知的任何保湿剂或称润湿剂，包括但不限于山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇等。其可以降低药物微粒于分散介质间的界面张力，保持干扰素处于润湿的环境，保证干扰素活性的正常发挥。优选地，是山梨醇和丙二醇的组合。
本发明的术语“成膜剂”是指本领域公知的任何成膜材料，包括但不限于羟丙甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇等。优选地，是羟丙甲基纤维素，因为它不仅具有良好的成膜性，还对干扰素其到稳定的作用。在本发明中，明胶也可以起成膜剂的作用。另外，成膜剂也可以采用其它本领域技术人员熟悉的物质。
本发明的术语“透皮吸收促进剂”是指本领域公知的任何透皮促进剂，包括但不限于尿素、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂氮卓酮(氮酮)等。优选地，月桂氮卓酮(氮酮)。
本发明的术语“渗透压调节剂”是指本领域公知的渗透压调节剂，包括但不限于氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖等。优选氯化钠。
本发明的术语“防腐剂”是指本领域公知的防腐剂，包括但不限于苯甲酸钠、苯扎溴铵、山梨酸等。优选苯甲酸钠。
本发明的可以不含有人血液提取成分的稳定的干扰素制剂例如可以包括下列组分1.α-干扰素2.保持pH为5.0-7.5的缓冲体系3.干扰素活性保护剂与保湿剂和/或成膜剂4.透皮吸收促进剂
5.渗透压调节剂6.防腐剂7.注射用水该制剂在2-10℃下贮藏24个月后，仍然保持着α-干扰素的高生物学和物理学稳定性。
更具体的，本发明的可以不含有人血液提取成分的稳定的干扰素水溶液剂组成如下1.α-干扰素(0.5万-100万IU/毫升)2.磷酸氢二钠和枸橼酸(使pH达到5.0-7.5的范围)3.明胶(0.1-2％)4.山梨醇(1-5％)、丙二醇(5-15％)5.羟丙甲基纤维素(0.1-2％)6.氮酮(0.1-1％)7.氯化钠(1-10毫克/毫升)8.苯甲酸钠(0.1-1％)9.注射用水(溶剂)该制剂在2-10℃下贮藏24个月后，仍然保持着α-干扰素的高生物学和物理学稳定性。
本发明的上述稳定的可以不含有血液提取成分的干扰素水溶液制剂的制备方法，包括用适量注射用水将保持pH为5.0-7.5的缓冲剂，稳定剂，保湿剂，成膜剂，透皮吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂溶解混合，加入适量α-干扰素半成品使稀释至规定浓度的溶液，无菌灌装等步骤。本领域技术人员可以根据组成的区别相应调整。
而且，本发明的干扰素水溶液制剂可以是以精确的计量灌装在药用喷雾瓶中的形式的。这种形式卫生方便，避免污染，可以临床应用于局部皮肤的病毒感染性疾病，例如单纯疱疹感染，尖锐湿疣，水痘等。另外，也可以将此干扰素水溶液制剂通过超声雾化器雾化吸入治疗下呼吸道病毒感染，如呼吸道合胞病毒引起的毛细支气管炎等。
另外，在本领域的技术人员的能力范围内，无需创造性劳动，在本发明的稳定干扰素的体系基础上，可以通过加入本领域公知的各种其他剂型的稳定干扰素药品，如口腔喷剂，涂剂，凝胶剂，酊剂，软膏剂等，也可以制成其他具有生物活性的蛋白质的稳定体系。
本发明具有以下优点1.制剂处方中无人血成分，避免污染。
2.明胶和羟丙甲基纤维素等纤维素成分配合使用作为稳定剂和成膜剂，山梨醇和丙二醇等作为保湿剂，保证干扰素活性正常发挥。
3.本发明所选择的缓冲体系具有缓冲-络合双重作用，pH范围与人体接近，避免刺激性；同时该体系成分具有络合金属离子和防止自氧化作用，从而使配方组成简单化。
4.氮酮、丙二醇和尿素等具有透皮吸收促进作用，协助大分子干扰素的透皮吸收。本发明透皮吸收效果良好，实验测得皮肤匀浆中每克皮肤中含hIFN-α446.58IU/ml，超过体外实验抑制各型HSV的IC50值。
5.采用的干扰素喷雾剂剂型，用于治疗局部皮肤和粘膜等体表上的病毒性疾病，或通过超声雾化吸入给药时，具有针对性强、定量准确、避免污染、减少疼痛、使用方便等优点。与通常的注射给药方式相比副作用小，基本没有注射给药时常有的发热、寒战等流感样副反应。
本发明的组合物可以如下制备称量适当量的基质，用注射用水溶解，搅拌，静置至溶胀，用湿热等适当方法进行灭菌，降温至2-10℃保存；加入适量的α-干扰素原液，混匀，无菌分装于容器中，2-10℃保存。
以下举出实施例和实验例对本发明进行进一步的说明，但本发明技术内容不限于此。本领域技术人员在上述本发明技术方案基础上，参照以下实施例对本发明进行的各种改进也在本发明保护范围内。
实施例1制备具有以下组成的组合物(pH为5.6)α-干扰素 1×108IU
明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇20g丙二醇80g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g氮酮 5g苯甲酸钠 5g注射用蒸馏水至1000mL将明胶和羟丙甲基纤维素用注射蒸馏水溶解，搅拌，静置至溶胀，加入除干扰素以外的其它成分，搅拌溶解。过滤，高温水蒸汽灭菌，降温至2-10℃，加入α-干扰素原液，混匀，加入注射用蒸馏水定容，无菌过滤，分装于容器中(10mL/瓶)，2-10℃保存。
实施例2除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.2)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇14g甘油 100mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g吐温-20 1mL5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL
实施例3除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羧甲基纤维素钠5g甘露醇5g甘油 100mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例4除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.7)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇20g丙二醇80g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g尿素 10g苯甲酸钠 5g注射用蒸馏水至1000mL
实施例5除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.4)α-干扰素 1×108IU明胶 3g羟丙甲基纤维素3g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 3.6mL注射用蒸馏水至1000mL实施例6除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)α-干扰素 1×108IU羟丙甲基纤维素10gPEG-200 50g山梨醇20g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例7除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)
α-干扰素 1×108IU羟丙甲基纤维素10gPEG-200 50g山梨醇20g丙二醇80mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例8除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.4)α-干扰素 1×108IU羧甲基纤维素钠10g甘油 100g山梨酸1.5g注射用蒸馏水至1000mL实验例A.稳定性测定1.本发明的局部用组合物(实施例1的制剂)在振摇、冻融和光照条件下的稳定性1.1振摇对稳定性的影响将待测样品置于25℃，250rpm摇床中振摇，随机抽样检查，结果如下。
1.1.1外观振摇10天，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.1.2生物学活性(105IU/ml)振摇10天，未发现明显变化。结果见表1。
1.1.3pH振摇10天，pH均在5.63-5.86内。结果见表1。
表1
1.1.4无菌振摇10天，无菌均合格。
本发明的制剂在25℃，250rpm条件振摇10天，稳定性未发现明显变化。
1.2冰冻复融对稳定性的影响将待测样品置于冰箱-15℃冷冻室中冻结，然后在室温下融化，反复多次，随机抽样检查，结果如下1.2.1外观反复冻融10次，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.2.2生物学活性(105IU/ml)反复冻融10次，未发现明显变化。结果见表2。
1.2.3pH反复冻融10次，pH均在5.63～5.68内。结果见表2。
表2
1.2.4无菌反复冻融10次，无菌均合格。
本发明的制剂反复冻融10次，稳定性未发现明显变化。
1.3光照对稳定性的影响将待测样品分别无菌分装于西林瓶和喷雾瓶中，置于澄明度检测灯下，光照强度为4000Lx，抽样检查，结果如下1.3.1外观光照10天，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.3.2生物学活性(105IU/ml)光照10天，用西林瓶装3天，用喷雾瓶装10天，稳定性未发现明显变化。结果见表3.1和3.2。
1.3.3pH光照10天，pH均在5.63～5.77内。结果见表3.1和3.2。
表3.1西林瓶装
表3.2喷雾瓶装
1.3.4无菌光照10天，无菌均合格。
本发明的制剂在4000Lx光照条件下，用西林瓶装3天，用喷雾瓶装10天，稳定性未发现明显变化。
2.本发明的局部用制剂(实施例1、2、4、6、7)在不同温度(6℃、18℃、25℃及37℃)的贮藏条件下的稳定性2.16℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于6±2℃冰箱中存放24个月，定期抽样检查，结果如下2.1.1外观在6℃下存放24个月，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。(冷藏时略显混浊，升至室温后为微黄色。)2.1.2生物学活性(105IU/ml)结果见表4。(表中“-”表示“未检测”)表4
2.1.3pH在6℃下存放24个月，pH均在5.0～7.5内。
2.1.4无菌6℃下存放24个月，无菌均合格。
2.2在25℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于25±0.5℃恒温箱中存放，定期抽样检查，结果如下2.2.1外观25℃下存放8周，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
2.2.2生物学活性(105IU/ml)结果见表5。(表中“-”表示“未检测”)
表5
2.2.3pH25℃下存放8周，pH均在5.0～7.5内。
2.2.4无菌25℃下存放8周，无菌均合格。
2.3在37℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于37±0.5℃恒温箱中存放，定期抽样检查，结果如下。
2.3.1外观37℃下存放6周，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
2.3.2生物学活性(105IU/ml)实验条件下生物学活性逐渐降低。结果见表6。(表中“-”表示“未检测”)
表6
2.4.3pH37℃下存放6周，pH均在5.0～7.5内。
2.4.4无菌37℃下存放6周，无菌均合格。
B.药代学测试皮肤的吸收途径可分为两条一是经皮肤吸收；另一种是经附属器吸收。皮肤受损或疾病时通透性比正常的完整皮肤高出很多(这是主要的影响因素)；不同部位皮肤渗透性不同；皮肤含水量不同时透过性也有差异，干燥皮肤吸收很少；增加用药面积、应用次数和接触时间也能增加吸收；对皮肤进行加压、按摩也有利于药物吸收。被HSV感染的患者患病部位常有皮肤破损，干扰素外用时药物可直接作用于病毒感染细胞；在制剂中加入保湿剂和透皮吸收剂后也可增加干扰素的吸收。透皮试验显示，采用乳猪皮肤在体实验，以划痕法和锉伤法使不同程度的皮肤角质层和部分表皮受损后，作所测试制剂的透皮试验，用ELISA作皮肤中hIFN-α检测，结果显示rhIFN-α大分子可透入破损皮肤皮内。二种皮肤破损法处理的乳猪皮肤中，以锉伤法损伤更接近疱疹皮损的临床情况，在临床使用制剂规格及用量(外用10万IU/ml，0.32ml透皮4hrs后，皮肤匀浆中可检测到每克皮肤中含hIFN-α446.58IU/ml，此浓度已超过本IFN体外抑制各型HSV IC50值。
C.毒性测试皮肤急性毒性试验分别于大鼠完整及破损皮肤涂抹所测试制剂1ml/只。试验当日涂药三次，每次间隔四小时，连续观察7天，未见皮肤吸收所致急性毒性反应。
皮肤刺激试验家兔完整及破损皮肤多次涂抹所测试制剂，未出现红斑、水肿、焦痂等症状。本品多次给药对家兔皮肤无刺激性。
皮肤过敏试验所测试制剂涂于豚鼠皮肤(0.2ml/只)致敏，每周涂一次，共涂三次，于末次给药后第14天再次涂于豚鼠皮肤(0.2ml/只)激发，结果未见过敏反应。
D.临床试验1.单纯疱疹采用多中心、随机、双盲、空白基质对照临床试验。患者自行外用涂于患处，每天3次，疗程7天。共进行病例217例(试验药物组110例，空白对照组107例)。在治疗第3、5、7、10、14天的客观症状，平均皮损面积、糜烂个数、水疱个数的数值试验组均优于对照组；其中平均皮损、糜烂个数、水疱个数第3天两组间经秩和检验具有显著性差异。平均皮损面积在第7天两组间经秩和检验具有显著性差异。试验组于对照组相比较，两组间的开始结痂时间、全部结痂时间、开始脱痂时间及全部脱痂时间，试验组均优于对照组，有着显著性差异。总之，在治疗第3、5、7、10、14天的治愈率、显效率、有效率试验组均高于对照组；两组间总体疗效试验组均高于对照组，有显著性差异。试验组和对照组均未出现全身性不良反应，但有4例用药后出现局部不良反应，不良反应发生率为试验组1.81％(2/110)，对照组1.87％(2/107)。
2.尖锐湿疣采用多中心、随机双盲、阳性药物对照临床试验。试验药物或对照药物外用喷于患处，每日4次，疗程6周。试验第6周时，通过计算对比每一患者治疗前后疣体数目和面积的改变，分别统计出两组的治愈率及总有效率。干扰素涂剂组治愈率为17.0％、总有效率为22.0％，酞丁安搽剂组治愈率为14.8％、总有效率为22.9％，经统计学检验两组无显著性差异，说明疗效相似。在6周的疗程中，两组患者均未发现系统不良反应。
3.超声雾化吸入给药治疗毛细支气管炎采用多中心、随机双盲、阳性药物对照临床试验。治疗组53例，对照组47例。治疗组采用超声雾化吸入给药，浓度为2×105IU加生理盐水稀释至20ml，采用德国PAR137型超声雾化治疗，每日2次，疗程7日；对照组应用双黄连200mg加生理盐水稀释至20ml，雾化治疗，每日次数、疗程同治疗组。其他治疗如退热、平喘、祛痰、镇静、给氧及必要时应用抗生素、强心等综合治疗，两组患者相同。结果显示，治疗组的咳嗽、喘憋、肺部哮鸣音消失天数均小于对照组，差别有非常显著性意义。见表7。
表7
治疗前，两组的血氧分压及血氧饱和度无显著性差异；治疗后5-7天，治疗组血氧分压(9.2±1.0kPa)及血氧饱和度(0.925±0.021)显著高于对照组(分别为8.6±1.2kPa，t＝2.16，P＜0.05；0.906±0.041，t＝2.10，P＜0.05)。胸部x线片，治疗组片点片状阴影恢复(92.8％)、肺气肿征象(83.1％)恢复显著高于对照组(分别为69.9％，X2＝4.98，P＜0.05；57.5％，X2＝1.79，P＜0.05；)。治疗组经5天的治疗，未发现系统不良反应。通过雾化吸入使干扰素通过气道直接进入下呼吸道的病灶区，会大大增加病灶的药物浓度而增加质量效果。因此，采用本发明的组合物采用吸入式给药方式也可以治疗其它病毒导致的呼吸道疾病。
权利要求
1.一种含有干扰素的局部用组合物，其特征在于含有明胶作为稳定剂。
2.根据权利要求1的组合物，稳定剂中还含有至少一种其它非人血来源的可药用高分子化合物。
3.根据权利要求2的组合物，其中所述可药用高分子选自羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙二醇和乙基纤维素或其可药用衍生物。
4.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有保湿剂。
5.根据权利要求4的组合物，所述保湿剂选自山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇。
6.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有透皮吸收促进剂。
7.根据权利要求6的组合物，所述透皮吸收促进剂选自尿素、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠和月桂氮卓酮。
8.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有渗透压调节剂。
9.根据权利要求8的组合物，所述渗透压调节剂包括氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖。
10.权利要求1～9中的任一项组合物在制备用于预防或治疗局部病毒感染导致的疾病的药物中的应用。
11.权利要求1～9中的任一项制剂在制备用于预防和治疗单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、水痘-带状疱疹病毒、流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒和腮腺炎感染的药物中的应用。
全文摘要
一种含有干扰素的局部用组合物，其中含有明胶或者明胶和其他非人血来源可药用高分子作为作为稳定剂。
文档编号A61K47/42GK1539499SQ0312793
公开日2004年10月27日 申请日期2003年4月25日 优先权日2003年4月25日
发明者张磊, 田莉, 李睿, 刘睿, 曹琳, 谢皖, 耿晓龙, 吴伯冬, 梁凤玲, 张 磊 申请人:天津华立达生物工程有限公司
技术领域：
本发明涉及一种稳定的非注射的干扰素液态局部给药组合物。可制成酊剂、滴眼剂、滴鼻剂、滴耳剂、气(粉)雾剂或喷雾剂、洗剂和搽剂，也可用于口腔、鼻腔给药或超声雾化吸入给药，用于治疗或预防多种病毒引起的皮肤、粘膜和眼部、口腔、耳道、呼吸系统和外生殖器疾病。
背景技术：
干扰素独特的抗病毒机理使其成为预防和治疗病毒感染性疾病的重要药物。然而由于干扰素作为蛋白质的大分子特性，常规注射给药时体内半衰期短，难以在病变部位达到有效剂量。而加大给药剂量又会增大干扰素对机体的毒副作用。如果可以将干扰素制成局部给药剂型，用于预防和治疗多种病毒引起的皮肤和眼部、鼻腔、口腔、尿道、阴道等处的如疾病，或通过雾化吸入的方式，用于呼吸系统感染，可以保证在使用较小剂量即可实现局部有效的同时，降低或不引起干扰素的全身副反应。
单纯疱疹病毒(HSV)中HSV-1型常引起口唇和角膜疱疹，并导致单纯疱疹性角膜炎，原发性和复发性疱疹性口炎等其他病变；HSV-2型则引起生殖器疱疹；水痘-带状疱疹病毒不仅可引起水痘，当潜伏在后根神经节中的病毒被激活时则出现带状疱疹；人乳头瘤病毒(HPV)能诱发各种疣；流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒和冠状病毒可引起呼吸道病毒感染，导致流感、气管支气管炎和病毒性肺炎；腮腺炎病毒引起流行性腮腺炎。体外实验和动物实验均显示干扰素对上述病毒有明显抑制作用。国外早在七十年代就有将干扰素制成外用剂型用于预防和治疗局部病毒感染的报导。国内也已相继出现干扰素滴眼液、凝胶、软膏、栓剂等外用制剂。
为了制备干扰素局部制剂，重要的问题是保持干扰素的活性。目前已上市的干扰素的外用制剂，大多含有人血液提取成分作为稳定剂，如CN1284381A公开了一种重组人α-干扰素凝胶，以及CN1132098A公开的干扰素的喷雾制剂，其中均含有人血清白蛋白作为稳定剂。人血液成分的使用导致了生产工艺复杂，特别是还有血液制品污染和传播病毒的问题。
作为不含人血液成分的干扰素制剂，CN1200942A公开了一种外用的干扰素脂质体凝胶，其中含有干扰素脂质体和羟丙甲基纤维素。但是其中没有提及药物的稳定性。CN1327853A公开了一种稳定的α-干扰素制剂，其中使用了羟乙基淀粉和/或葡聚糖作为稳定剂，其中虽然说到了该制剂可以用作口服和注射之外的制剂，但是并没有实际公开这些内容。WO01/41793A1公开了一种稳定的α-干扰素水溶液制剂，其中使用了羟乙基淀粉作为稳定剂，其中虽然说到了该制剂可以用作口服和注射之外的制剂，但是并没有实际公开这些内容。
CN1389470A公开了一种含有明胶的重组α-干扰素液体稳定剂，但是其涉及的是含有明胶的注射剂，对于局部给药制剂来说，效果如何尚不可知。
本发明的目的在于提供一种稳定的干扰素液态局部制剂，其中可以不含有人血成分，可以长期保持活性，并且局部给药具有较高的作用。
发明概述本发明技术方案如下1.一种含有干扰素的局部用组合物，其特征在于至少含有明胶作为稳定剂。
2.根据1的组合物，稳定剂中还含有至少一种其它非人源的可药用高分子化合物。
3.根据2的组合物，其中所述可药用高分子选自羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙二醇和乙基纤维素或其可药用衍生物。
4.根据1～3之一的组合物，其中还含有保湿剂。
5.根据4的组合物，所述保湿剂选自山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇。
6.根据1～3之一的组合物，其中还含有透皮吸收促进剂。
7.根据6的组合物，所述透皮吸收促进剂选自尿素、二甲基亚砜(DMSO)、十二烷基硫酸钠(SDS)和月桂氮卓酮(氮酮)。
8.根据1～3之一的组合物，其中还含有渗透压调节剂。
9.根据8的组合物，所述渗透压调节剂包括但不限于氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖。
10.1～9中的任一项组合物用于治疗局部病毒感染导致的疾病，例如复发性口唇疱疹、尖锐湿疣、流感、病毒性支气管炎、病毒性肺炎和流行性腮腺炎。
11.1～9中的任一项制剂用于治疗单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、水痘-带状疱疹病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、冠状病毒和腮腺炎病毒感染。
本文中所述局部用组合物是指含有主药和辅料的组合物本身，该组合物如果灌装入给药用具制成药品的话，可以作为喷雾剂、搽剂、酊剂、凝胶剂等使用。因此，本发明中的“组合物”与“制剂”的含义实际上是相同的。
具体来说，在本发明提供了一种可以不含有人血提取成分的稳定的干扰素外用组合物，其中主要含有以下成分1.α-干扰素2.保持pH为5.0-7.5的缓冲体系3.干扰素活性保护剂和保湿剂和/或成膜剂4.透皮吸收促进剂5.渗透压调节剂6.防腐剂7.注射用水在本发明的上述可以不含有人血提取成分的稳定的干扰素局部用组合物的制备的方法，包括将α-干扰素，保持pH为5.0-7.5的缓冲体系，干扰素活性保护剂与保湿剂和/或成膜剂，透皮吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂和适量注射用水依次混合制成水溶液的步骤。
根据本发明，将本发明组合物灌装入药用喷雾瓶的药品，其中的药用喷雾瓶装有有效量的本发明的稳定的干扰素水溶液制剂。因此，本发明也提供了一种可以适用于喷雾给药的稳定的干扰素液体制剂，另外通过调节处方、粘度等，可以适用于搽剂、酊剂、凝胶剂等剂型。
发明详述本发明的稳定的干扰素局部用制剂中含有干扰素，优选α-干扰素，更优选干扰素α-2b作为有效成分。
为保持干扰素活性，其中还至少含有明胶作为干扰素活性保护剂。为了增强明胶的作用，干扰素活性保护剂中优选进一步含有其它可药用高分子。
本领域技术人员可以理解，干扰素应当处于生理pH附近的缓冲体系中，例如保持pH为4.0-9.0，优选5.0-7.5左右的缓冲体系。
本发明制剂中优选含有保湿剂和渗透压调节剂。
为了促进干扰素的吸收，在外用的情况下，该局部制剂还应当含有透皮吸收促进剂。
本发明中，术语“干扰素”主要指“α-干扰素”，是指已工业化生产并临床应用的任何天然和重组生产的所有α型的干扰素及其具有抗病毒和免疫调节活性的衍生物。在本发明的制剂中，干扰素的含量没有具体限定，可以在广泛范围内适用本发明。优选的，本发明制剂中的干扰素含量为0.5～100万/mL，更优选优选5万～100万/mL。本领域技术人员可以理解，干扰素浓度越高，活性越强，因此，采用本发明有助于提高干扰素的有效浓度，对发挥干扰素的治疗作用是有益的。
本发明的术语“保持pH为5.0-7.5的缓冲体系”是指那些能保持水溶液制剂的pH范围在5.0-7.5的任何一种缓冲体系，包括磷酸，枸橼酸，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠等物质及其组合。优选地，是枸橼酸和磷酸氢二钠缓冲体系，因为这两种成分组合后可以络合溶液中微量重金属离子，起到抑制干扰素自氧化的作用。
本发明的术语“干扰素活性保护剂”是指本领域公知的任何高分子物质，包括但不限于明胶，纤维素衍生物、淀粉衍生物等。本发明中“干扰素活性保护剂”至少包含明胶，但是也可以进一步含有其它可以用作干扰素活性保护剂的药用高分子化合物，如羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素或其盐，乙基纤维素、羟乙基淀粉、羧甲基淀粉或其盐、葡聚糖等。优选地，是明胶和羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基淀粉等的组合，最优选明胶和羟丙甲基纤维素的组合。在此稳定剂存在下，可以将干扰素分子包裹在水溶性高分子中，从而稳定干扰素分子的空间构象，保持其活性，并防止其被氧化。
本发明的术语“保湿剂”是指本领域公知的任何保湿剂或称润湿剂，包括但不限于山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇等。其可以降低药物微粒于分散介质间的界面张力，保持干扰素处于润湿的环境，保证干扰素活性的正常发挥。优选地，是山梨醇和丙二醇的组合。
本发明的术语“成膜剂”是指本领域公知的任何成膜材料，包括但不限于羟丙甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇等。优选地，是羟丙甲基纤维素，因为它不仅具有良好的成膜性，还对干扰素其到稳定的作用。在本发明中，明胶也可以起成膜剂的作用。另外，成膜剂也可以采用其它本领域技术人员熟悉的物质。
本发明的术语“透皮吸收促进剂”是指本领域公知的任何透皮促进剂，包括但不限于尿素、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠(SDS)、月桂氮卓酮(氮酮)等。优选地，月桂氮卓酮(氮酮)。
本发明的术语“渗透压调节剂”是指本领域公知的渗透压调节剂，包括但不限于氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖等。优选氯化钠。
本发明的术语“防腐剂”是指本领域公知的防腐剂，包括但不限于苯甲酸钠、苯扎溴铵、山梨酸等。优选苯甲酸钠。
本发明的可以不含有人血液提取成分的稳定的干扰素制剂例如可以包括下列组分1.α-干扰素2.保持pH为5.0-7.5的缓冲体系3.干扰素活性保护剂与保湿剂和/或成膜剂4.透皮吸收促进剂
5.渗透压调节剂6.防腐剂7.注射用水该制剂在2-10℃下贮藏24个月后，仍然保持着α-干扰素的高生物学和物理学稳定性。
更具体的，本发明的可以不含有人血液提取成分的稳定的干扰素水溶液剂组成如下1.α-干扰素(0.5万-100万IU/毫升)2.磷酸氢二钠和枸橼酸(使pH达到5.0-7.5的范围)3.明胶(0.1-2％)4.山梨醇(1-5％)、丙二醇(5-15％)5.羟丙甲基纤维素(0.1-2％)6.氮酮(0.1-1％)7.氯化钠(1-10毫克/毫升)8.苯甲酸钠(0.1-1％)9.注射用水(溶剂)该制剂在2-10℃下贮藏24个月后，仍然保持着α-干扰素的高生物学和物理学稳定性。
本发明的上述稳定的可以不含有血液提取成分的干扰素水溶液制剂的制备方法，包括用适量注射用水将保持pH为5.0-7.5的缓冲剂，稳定剂，保湿剂，成膜剂，透皮吸收促进剂，渗透压调节剂，防腐剂溶解混合，加入适量α-干扰素半成品使稀释至规定浓度的溶液，无菌灌装等步骤。本领域技术人员可以根据组成的区别相应调整。
而且，本发明的干扰素水溶液制剂可以是以精确的计量灌装在药用喷雾瓶中的形式的。这种形式卫生方便，避免污染，可以临床应用于局部皮肤的病毒感染性疾病，例如单纯疱疹感染，尖锐湿疣，水痘等。另外，也可以将此干扰素水溶液制剂通过超声雾化器雾化吸入治疗下呼吸道病毒感染，如呼吸道合胞病毒引起的毛细支气管炎等。
另外，在本领域的技术人员的能力范围内，无需创造性劳动，在本发明的稳定干扰素的体系基础上，可以通过加入本领域公知的各种其他剂型的稳定干扰素药品，如口腔喷剂，涂剂，凝胶剂，酊剂，软膏剂等，也可以制成其他具有生物活性的蛋白质的稳定体系。
本发明具有以下优点1.制剂处方中无人血成分，避免污染。
2.明胶和羟丙甲基纤维素等纤维素成分配合使用作为稳定剂和成膜剂，山梨醇和丙二醇等作为保湿剂，保证干扰素活性正常发挥。
3.本发明所选择的缓冲体系具有缓冲-络合双重作用，pH范围与人体接近，避免刺激性；同时该体系成分具有络合金属离子和防止自氧化作用，从而使配方组成简单化。
4.氮酮、丙二醇和尿素等具有透皮吸收促进作用，协助大分子干扰素的透皮吸收。本发明透皮吸收效果良好，实验测得皮肤匀浆中每克皮肤中含hIFN-α446.58IU/ml，超过体外实验抑制各型HSV的IC50值。
5.采用的干扰素喷雾剂剂型，用于治疗局部皮肤和粘膜等体表上的病毒性疾病，或通过超声雾化吸入给药时，具有针对性强、定量准确、避免污染、减少疼痛、使用方便等优点。与通常的注射给药方式相比副作用小，基本没有注射给药时常有的发热、寒战等流感样副反应。
本发明的组合物可以如下制备称量适当量的基质，用注射用水溶解，搅拌，静置至溶胀，用湿热等适当方法进行灭菌，降温至2-10℃保存；加入适量的α-干扰素原液，混匀，无菌分装于容器中，2-10℃保存。
以下举出实施例和实验例对本发明进行进一步的说明，但本发明技术内容不限于此。本领域技术人员在上述本发明技术方案基础上，参照以下实施例对本发明进行的各种改进也在本发明保护范围内。
实施例1制备具有以下组成的组合物(pH为5.6)α-干扰素 1×108IU
明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇20g丙二醇80g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g氮酮 5g苯甲酸钠 5g注射用蒸馏水至1000mL将明胶和羟丙甲基纤维素用注射蒸馏水溶解，搅拌，静置至溶胀，加入除干扰素以外的其它成分，搅拌溶解。过滤，高温水蒸汽灭菌，降温至2-10℃，加入α-干扰素原液，混匀，加入注射用蒸馏水定容，无菌过滤，分装于容器中(10mL/瓶)，2-10℃保存。
实施例2除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.2)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇14g甘油 100mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g吐温-20 1mL5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL
实施例3除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羧甲基纤维素钠5g甘露醇5g甘油 100mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例4除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.7)α-干扰素 1×108IU明胶 5g羟丙甲基纤维素10g山梨醇20g丙二醇80g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g尿素 10g苯甲酸钠 5g注射用蒸馏水至1000mL
实施例5除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.4)α-干扰素 1×108IU明胶 3g羟丙甲基纤维素3g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 3.6mL注射用蒸馏水至1000mL实施例6除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)α-干扰素 1×108IU羟丙甲基纤维素10gPEG-200 50g山梨醇20g十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例7除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为6.0)
α-干扰素 1×108IU羟丙甲基纤维素10gPEG-200 50g山梨醇20g丙二醇80mL十二水磷酸氢二钠 6.03g枸橼酸1.3g氯化钠5g5％苯扎溴铵 10mL注射用蒸馏水至1000mL实施例8除采用以下组成外，按照实施例1方法进行制备。
(pH为5.4)α-干扰素 1×108IU羧甲基纤维素钠10g甘油 100g山梨酸1.5g注射用蒸馏水至1000mL实验例A.稳定性测定1.本发明的局部用组合物(实施例1的制剂)在振摇、冻融和光照条件下的稳定性1.1振摇对稳定性的影响将待测样品置于25℃，250rpm摇床中振摇，随机抽样检查，结果如下。
1.1.1外观振摇10天，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.1.2生物学活性(105IU/ml)振摇10天，未发现明显变化。结果见表1。
1.1.3pH振摇10天，pH均在5.63-5.86内。结果见表1。
表1
1.1.4无菌振摇10天，无菌均合格。
本发明的制剂在25℃，250rpm条件振摇10天，稳定性未发现明显变化。
1.2冰冻复融对稳定性的影响将待测样品置于冰箱-15℃冷冻室中冻结，然后在室温下融化，反复多次，随机抽样检查，结果如下1.2.1外观反复冻融10次，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.2.2生物学活性(105IU/ml)反复冻融10次，未发现明显变化。结果见表2。
1.2.3pH反复冻融10次，pH均在5.63～5.68内。结果见表2。
表2
1.2.4无菌反复冻融10次，无菌均合格。
本发明的制剂反复冻融10次，稳定性未发现明显变化。
1.3光照对稳定性的影响将待测样品分别无菌分装于西林瓶和喷雾瓶中，置于澄明度检测灯下，光照强度为4000Lx，抽样检查，结果如下1.3.1外观光照10天，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
1.3.2生物学活性(105IU/ml)光照10天，用西林瓶装3天，用喷雾瓶装10天，稳定性未发现明显变化。结果见表3.1和3.2。
1.3.3pH光照10天，pH均在5.63～5.77内。结果见表3.1和3.2。
表3.1西林瓶装
表3.2喷雾瓶装
1.3.4无菌光照10天，无菌均合格。
本发明的制剂在4000Lx光照条件下，用西林瓶装3天，用喷雾瓶装10天，稳定性未发现明显变化。
2.本发明的局部用制剂(实施例1、2、4、6、7)在不同温度(6℃、18℃、25℃及37℃)的贮藏条件下的稳定性2.16℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于6±2℃冰箱中存放24个月，定期抽样检查，结果如下2.1.1外观在6℃下存放24个月，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。(冷藏时略显混浊，升至室温后为微黄色。)2.1.2生物学活性(105IU/ml)结果见表4。(表中“-”表示“未检测”)表4
2.1.3pH在6℃下存放24个月，pH均在5.0～7.5内。
2.1.4无菌6℃下存放24个月，无菌均合格。
2.2在25℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于25±0.5℃恒温箱中存放，定期抽样检查，结果如下2.2.1外观25℃下存放8周，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
2.2.2生物学活性(105IU/ml)结果见表5。(表中“-”表示“未检测”)
表5
2.2.3pH25℃下存放8周，pH均在5.0～7.5内。
2.2.4无菌25℃下存放8周，无菌均合格。
2.3在37℃贮藏条件下的稳定性将待测样品置于37±0.5℃恒温箱中存放，定期抽样检查，结果如下。
2.3.1外观37℃下存放6周，外观均为无色或微黄色、略带粘稠的液体。
2.3.2生物学活性(105IU/ml)实验条件下生物学活性逐渐降低。结果见表6。(表中“-”表示“未检测”)
表6
2.4.3pH37℃下存放6周，pH均在5.0～7.5内。
2.4.4无菌37℃下存放6周，无菌均合格。
B.药代学测试皮肤的吸收途径可分为两条一是经皮肤吸收；另一种是经附属器吸收。皮肤受损或疾病时通透性比正常的完整皮肤高出很多(这是主要的影响因素)；不同部位皮肤渗透性不同；皮肤含水量不同时透过性也有差异，干燥皮肤吸收很少；增加用药面积、应用次数和接触时间也能增加吸收；对皮肤进行加压、按摩也有利于药物吸收。被HSV感染的患者患病部位常有皮肤破损，干扰素外用时药物可直接作用于病毒感染细胞；在制剂中加入保湿剂和透皮吸收剂后也可增加干扰素的吸收。透皮试验显示，采用乳猪皮肤在体实验，以划痕法和锉伤法使不同程度的皮肤角质层和部分表皮受损后，作所测试制剂的透皮试验，用ELISA作皮肤中hIFN-α检测，结果显示rhIFN-α大分子可透入破损皮肤皮内。二种皮肤破损法处理的乳猪皮肤中，以锉伤法损伤更接近疱疹皮损的临床情况，在临床使用制剂规格及用量(外用10万IU/ml，0.32ml透皮4hrs后，皮肤匀浆中可检测到每克皮肤中含hIFN-α446.58IU/ml，此浓度已超过本IFN体外抑制各型HSV IC50值。
C.毒性测试皮肤急性毒性试验分别于大鼠完整及破损皮肤涂抹所测试制剂1ml/只。试验当日涂药三次，每次间隔四小时，连续观察7天，未见皮肤吸收所致急性毒性反应。
皮肤刺激试验家兔完整及破损皮肤多次涂抹所测试制剂，未出现红斑、水肿、焦痂等症状。本品多次给药对家兔皮肤无刺激性。
皮肤过敏试验所测试制剂涂于豚鼠皮肤(0.2ml/只)致敏，每周涂一次，共涂三次，于末次给药后第14天再次涂于豚鼠皮肤(0.2ml/只)激发，结果未见过敏反应。
D.临床试验1.单纯疱疹采用多中心、随机、双盲、空白基质对照临床试验。患者自行外用涂于患处，每天3次，疗程7天。共进行病例217例(试验药物组110例，空白对照组107例)。在治疗第3、5、7、10、14天的客观症状，平均皮损面积、糜烂个数、水疱个数的数值试验组均优于对照组；其中平均皮损、糜烂个数、水疱个数第3天两组间经秩和检验具有显著性差异。平均皮损面积在第7天两组间经秩和检验具有显著性差异。试验组于对照组相比较，两组间的开始结痂时间、全部结痂时间、开始脱痂时间及全部脱痂时间，试验组均优于对照组，有着显著性差异。总之，在治疗第3、5、7、10、14天的治愈率、显效率、有效率试验组均高于对照组；两组间总体疗效试验组均高于对照组，有显著性差异。试验组和对照组均未出现全身性不良反应，但有4例用药后出现局部不良反应，不良反应发生率为试验组1.81％(2/110)，对照组1.87％(2/107)。
2.尖锐湿疣采用多中心、随机双盲、阳性药物对照临床试验。试验药物或对照药物外用喷于患处，每日4次，疗程6周。试验第6周时，通过计算对比每一患者治疗前后疣体数目和面积的改变，分别统计出两组的治愈率及总有效率。干扰素涂剂组治愈率为17.0％、总有效率为22.0％，酞丁安搽剂组治愈率为14.8％、总有效率为22.9％，经统计学检验两组无显著性差异，说明疗效相似。在6周的疗程中，两组患者均未发现系统不良反应。
3.超声雾化吸入给药治疗毛细支气管炎采用多中心、随机双盲、阳性药物对照临床试验。治疗组53例，对照组47例。治疗组采用超声雾化吸入给药，浓度为2×105IU加生理盐水稀释至20ml，采用德国PAR137型超声雾化治疗，每日2次，疗程7日；对照组应用双黄连200mg加生理盐水稀释至20ml，雾化治疗，每日次数、疗程同治疗组。其他治疗如退热、平喘、祛痰、镇静、给氧及必要时应用抗生素、强心等综合治疗，两组患者相同。结果显示，治疗组的咳嗽、喘憋、肺部哮鸣音消失天数均小于对照组，差别有非常显著性意义。见表7。
表7
治疗前，两组的血氧分压及血氧饱和度无显著性差异；治疗后5-7天，治疗组血氧分压(9.2±1.0kPa)及血氧饱和度(0.925±0.021)显著高于对照组(分别为8.6±1.2kPa，t＝2.16，P＜0.05；0.906±0.041，t＝2.10，P＜0.05)。胸部x线片，治疗组片点片状阴影恢复(92.8％)、肺气肿征象(83.1％)恢复显著高于对照组(分别为69.9％，X2＝4.98，P＜0.05；57.5％，X2＝1.79，P＜0.05；)。治疗组经5天的治疗，未发现系统不良反应。通过雾化吸入使干扰素通过气道直接进入下呼吸道的病灶区，会大大增加病灶的药物浓度而增加质量效果。因此，采用本发明的组合物采用吸入式给药方式也可以治疗其它病毒导致的呼吸道疾病。
权利要求
1.一种含有干扰素的局部用组合物，其特征在于含有明胶作为稳定剂。
2.根据权利要求1的组合物，稳定剂中还含有至少一种其它非人血来源的可药用高分子化合物。
3.根据权利要求2的组合物，其中所述可药用高分子选自羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素、聚乙二醇和乙基纤维素或其可药用衍生物。
4.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有保湿剂。
5.根据权利要求4的组合物，所述保湿剂选自山梨醇、丙二醇、甘油、聚乙烯醇。
6.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有透皮吸收促进剂。
7.根据权利要求6的组合物，所述透皮吸收促进剂选自尿素、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠和月桂氮卓酮。
8.根据权利要求1～3之一的组合物，其中还含有渗透压调节剂。
9.根据权利要求8的组合物，所述渗透压调节剂包括氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖。
10.权利要求1～9中的任一项组合物在制备用于预防或治疗局部病毒感染导致的疾病的药物中的应用。
11.权利要求1～9中的任一项制剂在制备用于预防和治疗单纯疱疹病毒(HSV)、人乳头瘤病毒(HPV)、水痘-带状疱疹病毒、流感病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒和腮腺炎感染的药物中的应用。
全文摘要
一种含有干扰素的局部用组合物，其中含有明胶或者明胶和其他非人血来源可药用高分子作为作为稳定剂。
文档编号A61K47/42GK1539499SQ0312793
公开日2004年10月27日 申请日期2003年4月25日 优先权日2003年4月25日
发明者张磊, 田莉, 李睿, 刘睿, 曹琳, 谢皖, 耿晓龙, 吴伯冬, 梁凤玲, 张 磊 申请人:天津华立达生物工程有限公司
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