一种具有镇痛和消炎的药物组合物及其生产方法

xiaoxiao2020-6-23  111


专利名称::一种具有镇痛和消炎的药物组合物及其生产方法
技术领域
:本发明涉及一种具有镇痛和消炎的药物组合物,特别是添加有中药贯叶连翘提取物的具有镇痛和消炎的药物组合物及其生产方法。
背景技术
:目前文献报道公开和医院使用的镇痛和消炎药物有多种,西药有阿司匹林、去痛片、消炎痛、布洛芬、酮洛芬、案普生、保泰松、尼美舒利、莫非唑拉等,中药有牛黄消炎片、麻黄细辛汤、止痛消炎膏、乌药提取物、竹黄提取物、莲胆消炎胶囊等,《中药新药与临床药理》2001,12(2)“牛黄千金散抗炎镇痛和免疫抑制作用”报道了对牛黄千金散的消炎、镇痛、免疫抑制作用的研究,探讨牛黄千金散的药理作用,方法抗炎作用应用大折鼠足趾肿胀法、小白鼠耳廓肿胀法;镇痛作用运用小白鼠扭体法、大白鼠钾离子皮下透入致痛法;免疫抑制作用,测定外周血T淋巴细胞百分率、小白鼠脾淋巴细胞转化率、巨噬细胞吞噬功能、迟发性变态反应(DTH)、血清溶血素和抗体形成细胞的功能。结果牛黄千金散有明显的抗炎作用,并能加强可待因的镇痛作用及免疫抑制作用,与生理盐水对照组比较有非常显著性的差异,证实了牛黄千金散有抗炎、镇痛及免疫抑制作用。从文献介绍的镇痛消炎的药物中,我们了解到,西药的特性在于抵抗细菌或病毒感染、抑制神经中枢的疼痛传递物质传送;而中药作用是热清毒化,湿祛瘟散,腐法新生,带脉宣通畅达,则谙症自除的目的。贯叶连翘为藤黄科金丝桃属(HyprzeumL)植物贯叶连翘(HypericumperforatumLinn,EHPL)的全草,它主要被用于抗抑郁、收敛止血、治吐血、外伤出血、肿毒及止痛等症。近年来国外的研究发现,金丝桃素是贯叶连翘中的主要有效成分,可以治疗甲型肝炎、乙型肝炎、风湿骨痛等。金丝桃索还是一种有前途的内源性光敏剂,可应用于肿瘤的光化学诊断与治疗,具有显著的抗DNA、RNA病毒的作用。本发明人还经过检索,了解贯叶连翘国内外的研究和治疗疾病的进展情况,并检索到有关贯叶连翘的公开文献有以下一些1、“国产贯叶连翘化学成分的研究”,殷志琦叶文才,(中国药科大学)《中国药科大学学报》。2002,33(4)文摘对我国贵州产贯叶连翘的化学成分进行了较系统的化学研究。利用各种色谱技术进行分离纯化,经理化常数和波谱分析等进行结构鉴定。分离得到8个化合物槲皮素(quercetin,I),皮苷(quercitrin,II),山萘酚(kaempferol,III),1,7-二羟基山酮(1,7-dihydroxyxanthone,IV),kielcorin(5-hydroxymethyl-6-guaiacyl-2,33’,2’,4’-methoxy-xanthone-1,4-dioxane,V),大黄素(emodin,VI),2,5-二甲基-7-羟基色原酮(2,5-dimethyl-7-hydroxychromone,VII),香草酸(vanillicacid,VII)。结论化合物IV,VII和VIII为首次从贯叶连翘中分离得到。2、“贯叶连翘提取物抗抑郁作用研究”作者,徐静、蔡爽等(沈阳药科大学、中国医科大学附属第一临床医院),《中药药理与临床》。2002,18(5),文摘目的研究贯叶连翘提取物对小鼠的抑郁作用。方法选取了强迫小鼠游泳实验,小鼠尾悬吊应激实验,拮抗利血平所致的抑制症状等实验指标。结果贯叶连翘提取物150mg/kg,300mg/kg显著缩短迫游泳小鼠及尾悬吊小鼠的不动时间;显著拮抗利血平所致的体温下降作用和小鼠眼睑下垂作用。结论贯叶连翘提取物具有一定的抗抑郁作用。3、“贯叶连翘中的新抗真菌黄酮苷”,作者,卢艳花张臻等(南京师范大学、南京大学)《植物学报》。2002,44(6)。文摘从贯叶连翘(HypericumperforatumL.)地上部分的80%乙醇提取物中分离得到1个新的黄酮苷和6个已知黄酮类化合物。采用红外光谱,紫外光谱,质谱和核磁共振光谱等波谱技术测得新黄酮苷的结构为6″-O-乙酰基槲皮素-3-O-β-D-阿洛糖苷(1,6″-O-acetylquercetin3-O-β-D-alloside),6个已知化合物分别被鉴定为槲皮苷(quercitrin),金丝桃苷(hyperoside),扁蓄苷(avicularin),芦丁(rutin),槲皮素(quercetin)和山萘酚(kaemfero10。体外抗真菌活性实验表明,新黄酮苷(1),槲皮苷和槲皮素对植物病原菌HelminthosporiumsativumPamelKingetBakke具有一定的抑制作用,三者的最小抑制浓度(MIC)分别为25,50和50μg/mL。另外,1和槲皮苷对禾赤色镰孢霉(FusariumgraminearumSchw.)的生长也有抑制作用(MIC值均为100μg/mL)。4、“贯叶连翘中金丝桃素醇法提取工艺的改进”,温普红王晓玲(宝鸡文理学院),《中国医药工业杂志》。2002,33(4)。文摘对现行醇法提取植物贯叶连翘中金丝桃素的生产工艺进行了研究和改进。研制出了价廉、无毒、新型的W.X.除杂剂,使生产工序大为简化。一般经提取、除杂、调pH沉降三步,即可得到合格产品。经HPLC测定,产品中金丝桃素含量达到0.7%,远远大于国际市场要求的0.3%。同时,消除了原料中金丝桃素含量高低对产品质量的影响。5、“贯叶连翘活性成分研究新进展”,李宏、姜怀春等(武汉大学、重庆商学院)《中草药》。2001,32(7)。文摘介绍了贯叶连翘的活性成分,抗抑郁、抗肿瘤、抗病毒等药理作用和副作用的研究新进展。6、“贯叶连翘的研究进展与可持续发展对策”,李会宁王存莲(汉中师范学院)《汉中师范学院学报自科版》。2000,18(1)文摘贯叶连翘除作为传统的中药材入药外,它的活性成分在治疗抑郁症,肝炎和艾滋病以及抗癌等方面具有重要的利用前景而被广泛关注。本文综述了贯叶连翘的生药显微鉴定特征,有效成分的研究,药理和临床试验等方面的研究进展。同时探讨了可持续发展的对策。7、“贯叶连翘的生药学研究”,雷国莲王继涛(陕西中医学院)《陕西中医学院学报》。1999,22(6)。文摘为寻找和研究新而有效,无毒,安全可靠,非麻醉性的特殊性镇痛药,作者对秦岭地区资料十分丰富,且富含金丝桃甙的植物贯叶连翘首次作了为系统的生药学研究,为该药的开发与利用提供可靠的鉴定和研究资料。8、“金丝桃素的研究进展”,梁巧丽高宏成(北京大学),《中草药》。1999,30(9)。文摘综述金丝桃素在抗抑郁,抗病毒,对癌症的光化学治疗,免疫等方面的最新研究成果,为开发新药提供参考。从上述文献了解到,贯叶连翘在治疗某些疾病方面得到了证明,尤其是抗抑郁作用的研究较多,其中文献7提示了含金丝桃甙的植物贯叶连翘可作为镇痛药的内容,但未公开其使用方法、也未见有贯叶连翘提取物与其它药物配成组合物的公开文献报道。技术内容本发明人经过对贯叶连翘的化学成分及药效学、药理学进行研究,并与多种维生素进行单独组合或者复配组合,发现一些组合物具有较好的镇痛和消炎作用。本发明的技术方案如下具有镇痛和消炎的药物组合物包括贯叶连翘提取物、维生素B,其药物的成分和重量百分含量如下维生素B20.5-5%维生素B65-15%贯叶连翘提取物余量或者采用维生素B11-5%维生素B20.5-5%维生素B65-15%贯叶连翘提取物余量以上所述的贯叶连翘提取物含金丝桃素2-5%,其提取方法可以采用50℃左右的热水浸泡2h后,加入0.5%NaOH,用75%甲醇在0.05Mpa下78℃提取3-5次,每次1.5h,溶媒量为5倍,在80℃条件下浓缩干燥;也可以采用80%乙醇为溶剂,撮出贯叶连翘中的蒽衍生物,再用吸附树脂,结合硅胶层析法把金丝桃素分离出来,得到含量为4.26%的金丝桃素产品;有的文献介绍用95%乙醇作为溶剂来提取金丝桃甙,浓缩时加入少量(NH4)2SO4,在真空度为34~8kPa的条件下浓缩,采用喷雾干燥的方法得到。本发明的具有镇痛和消炎的药物组合物根据需要可以做成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、针剂。所述的片剂的制备方法是将贯叶连翘提取物、维生素B,与赋形剂制成颗粒干燥,加入崩解剂、润滑剂,压片,或直接包装,或包糖衣,或包薄膜衣即得到产品。以上片剂所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等;所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等;所述的润滑剂为硬脂酸镁等;所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等;所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5~75%、0.5~20%、0.5~2.0%、2~45%。胶囊剂的生产方法将贯叶连翘提取物、维生素B,加入赋形剂,和崩解剂、助流剂,并使之干燥,然后装入胶囊中,得到产品。以上制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁等。重量20~80%。助流剂选用微分硅胶,用量为0.5-1%。丸剂的生产方法将将贯叶连翘提取物、维生素B加入赋形剂,制丸。①制成浓缩丸;②加入赋形剂重量10~100%、蜜糖,制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂,并制成颗粒,使之干燥,得到产品。加入赋形剂的成分和含量蔗糖50~95%、乳糖50~90%、糊精50~70%。合剂的生产方法将将贯叶连翘提取物、维生素B与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀,即得到产品。加入的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10~60%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%。糖浆剂的生产方法将将贯叶连翘提取物、维生素B与蔗糖、蜜糖防腐剂溶液混合均匀,即得到产品。加入的蔗糖或蜜糖的重量比为60~70%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%。本发明的突出的实质性特点和显著的进步为1、安全性从公开文献中我们已经了解到,贯叶连翘提取物的毒理工作已在小鼠,大鼠和犬等动物身上进行了长达26星期的试验。最大试验剂量为5000mg/kg,最初不耐受剂量为每日900mg/kg。LD50大于最大剂量。所有试验末显示有基因毒和诱变作用。在13个男性正常人每日服用900,1800和3600mg贯叶连翅提取物试验中,每日900mg是大多数临床试验采用的安全有效剂量。在我们进行的临床试验中,也证明了人服用贯叶连翘提取物的安全性。2、镇痛和消炎作用的有效性本发明的贯叶连翘提取物与复合维生素B组合后有明显的镇痛作用,并且部分减轻甲醛引起的水肿症状。而单独使用贯叶连翘提取物或单独使用复合维生素B达不到复合后的效果。3、对人体的其它辅助治疗效果与复合维生素复配后,显示出该药物组合物不仅具有镇痛和消炎作用,而且还有抗抑郁、抗肿瘤的效果,还可以补充人体所缺乏的部分维生素。具体实施例方式实施例1取贯叶连翘提取物900g,维生素B220g,维生素B680g,与5~75%淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合,制成颗粒,干燥,加入0.5~20%羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5~2.0%硬脂酸镁,压片,或直接包装,或包糖衣,或包薄膜衣即得到产品。实施例2取贯叶连翘提取物750g,维生素B50g,维生素B250g,维生素B6150g,与5~75%淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合,制成颗粒,干燥,加入0.5~20%羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5~2.0%硬脂酸镁,压片,或直接包装,或包糖衣,或包薄膜衣即得到产品。实施例3取贯叶连翘提取物820g,维生素B240g,维生素B6140g,与5~75%淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒,干燥,加入助流剂微分硅胶,装胶囊,即得到产品。实施例4取贯叶连翘提取物800g,维生素B15g,维生素B250g,维生素B6145g,与5~75%淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒,干燥,加入助流剂微分硅胶,装胶囊,即得到产品。实施例5取贯叶连翘提取物800g,维生素B250g,维生素B6150g,与赋形剂蔗糖100g、乳糖100g、糊精300g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。实施例6取贯叶连翘提取物850g,维生素B130g,维生素B220g,维生素B6100g,与赋形剂蔗糖200g、乳糖100g、糊精200g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。实施例7取贯叶连翘提取物800g,维生素B140g,维生素B260g,维生素B6100g,加入蔗糖500g、糊精500g,制成颗粒,干燥,得到产品。实施例8取贯叶连翘提取物872g,维生素B28g,维生素B6120g,加入蔗糖400g、糊精300g,制成颗粒,干燥,得到产品。实施例9取贯叶连翘提取物850g,维生素B250g,维生素B6100g,与蔗糖10~55%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%混合,制成合剂。实施例10取贯叶连翘提取物800g,维生素B140g,维生素B240g,维生素B6120g,与蔗糖10~55%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%混合,制成合剂。实施例11取贯叶连翘提取物800g,维生素B250g,维生素B6150g,与蔗糖量为60~70%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%合并,制成糖浆剂。实施例12取贯叶连翘提取物850g,维生素B130g,维生素B220g,维生素B6100g,与蜜糖为60~70%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%合并,制成糖浆剂。本发明有关临床试验、药理、药效学情况一、贯叶连翘提取物和维生素B复方的镇痛作用研究试验单位,北京大学医学部神经病理室试验时间2002年9月-2003年1月摘要目的对贯叶连翘提取物和维生素B2、维生素B6复方的镇痛、抗炎作用进行研究。方法连续给小鼠灌胃给药CMC-Na、吗啡(5mg/kg,i.p.)、氯丙咪嗪(10mg/kg,i.p.)、复合物(本发明片剂或未混合的单一化合物)高剂量、中剂量、低剂量,共7天,末次给药后1小时(吗啡注射后30分钟)进行甲醛致痛实验,测定注射甲醒后0-5分钟、15-30分钟的舔脚时间、注射甲醛后4小时的右足水肿情况及病理切片,显微镜下观察炎症组织的炎症细胞浸润和水肿情况。结果吗啡、氯丙咪嗪、高、中剂量复合物能够减少0-5分钟、15-30分钟两个时相舔脚时间,能够抑制右足水肿,抑制炎症部位炎症细胞浸润及水肿,均有统计学意义。低剂量复合物能够减少0-5分钟及15-30分钟的舔脚时间,但无统计学意义,不能抑制右足水肿及炎症部位炎症细胞浸润及水肿。结论贯叶连翘提取物、维生素B2和维生素B6组成的复方在小鼠甲醛致痛模型中具有明确的镇痛作用。关键词贯叶连翘提取物维生素B2维生素B6镇痛抗炎前言贯叶连翘(HypericumperforatumLinn,EHPL)为藤黄科金丝桃素属多年生草本,在北美、欧洲及我国均有分布,西方又称之为St.Joim′wort,具有抗抑郁、抗病毒、抗菌等药理作用。贯叶连翘在民间已有2400年历史,德国用于抗抑郁已有百余年历史。贯叶连翘临床上广泛用于抑郁症的治疗,历史悠久,副作用较小,美国已作为保健品。B族维生素缺乏尤其是维生素B1、维生素B2和维生素B6缺乏将导致惊厥,腕管综合症,慢性痛等病理状态,说明B族维生素对维持神经系统的正常功能不可缺少,B族维生素已广泛用于治疗及预防其缺乏所造成的功能紊乱。文献报道,在小鼠、大鼠热板及苯醌(benzoquinone)扭体实验中,联合使用维生素B1,维生素B6,维生素B12有镇痛作用,在角叉菜胶诱发痛敏实验中维生素B6能够增强非凶体消炎药的镇痛作用,在小鼠醋酸扭体及甲醛致痛的模型中维生素B1,维生素B2及维生素B6单独或联合使用都有明显的镇痛作用,并且部分减轻甲醛引起的水肿,B族维生素可以减轻病人的炎症性疼痛。近年来B族维生素在国外被视为治疗病理性疼痛的有效药物。既然贯叶连翘提取物具有镇痛和抗炎作用,B族维生素(VitB1、VitB2、vitB6)也具有镇痛和抗炎作用,为了减少用药剂量,增加疗效及减轻不良反应,我们将贯叶连翘提取物及B族维生素(维生素B1、维生素B2、维生素B6)组成多个复方,根据镇痛效应正交设计原理进行了筛选,进行镇痛和抗炎作用的研究。1材料1.1动物昆明种小鼠,雄性,25-35g,食水自由,温度20±2摄氏度,自然明暗周期。动物在实验室适应1周后正式实验,实验前禁食、不禁水12小时,动物由北京大学医学部实验动物中心提供,合格证013056,等级一级。1.2药品与试剂贯叶连翘提取物(广西南宁邕江药业有限公司提供,生产批号1605795金丝桃素含量3‰,棕色瓶避光保存),盐酸吗啡(青海制药厂生产,生产批号01130),甲醛溶液(北京化学试剂公司,优级纯,批号990728),维生素B2(粉剂,97.5-102%,北京芳草医药化工研制公司生产,批号961220),维生素B6(粉剂,广西南宁邕江药业有限公司提供,批号3030010010),羧甲基纤维素钠。氯丙咪嗪,苏木精(德国生产),伊红(美国生产)。1.3仪器50μl微量进样器,宁波市镇海玻璃仪器厂制造,89量制浙字02200206号。秒表,深圳市惠波工贸有限公司制造,98量制粤制03000202号。切片机Leica2实验方法2.1分组阴性对照组(CMC-Na)0.25%CMC-Na(羧甲基纤维素钠),口服。阳性对照组(morphine)盐酸吗啡5mg/kg,腹腔注射。阳性对照组(clomipramine)氯丙咪溱10mg/kg。高剂量组(complex-H)EHPL1200mg/kg、维生素B212mg/kg、维生素B6160mg/kg。中剂量组(complex-M)EHPL600mg/kg、维生素B26mg/kg、维生素B680mg/kg。低剂量组(complex-L)EHPL300mg/kg、维生素B23mg/kg、维生素B640mg/kg。各组药物均以0.25%CMC-Na研磨配制,给药容积各组均为0.1ml/10g,每天约药1次,连续给药7天。吗啡组连续腹腔注射生理盐水6天,第7天末次给药为腹腔注射吗啡。2.2实验方法甲醛致痛实验第7天给药1小时后(吗啡注射后30分钟)将0.92%的甲醛溶液(生理盐水配制)20μl注射至小鼠右足背皮下,分别记录0-5分钟及15-30分钟这两个时相舔右后足的时间。注射甲醛后4小时断头处死小鼠,由膝关节切下两侧后足,分别称重,以右足与左足重量差值代表右足水肿情况。左、右足后足称重后炎症部侠进行组织切片,固定和染色后于显微镜下观察不同药物组别的炎症情况。组织切片及染色方法取小鼠足背致炎组织,10%甲醛固定,乙醇梯度脱水,二甲苯透明,浸蜡,包埋,切片,H.E.染色。2.5统计分析结果以均数±标准差表示,采用microsoftexcel软件进行结果处理,组间对照采用双尾t检验,显著性为P<0.05。tableEffectsofcomplexchronictreatmentonthenociceptiveresponseandedemainducedbysubcutaneousofformaldehydeintotherighthindpawofmouse(m±s,n=12)ExperimentalTimespendinginlickingrighthindpaw(s)Weightdifference(mg)group0-5min15-30min4hCMC-Na28.5±16.039.6±31.635.6±15.0Morphine9.1±9.7***13.6±18.9*21.1±11.8*clomipramine12.3±9.6**11.7±27.317.2±14.2**Complex-H15.4±10.1*17.2±21.2*17.8±16.1**Complex-M13.8±6.8**17.2±18.4*19.8±14.4*Complex-L22.1±15.624.4±24.433.9±27.5ComparedwiththeresultofCMC-Nagroup,*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001CMC0.25%缩甲基纤维素钠,morphine吗啡,clomipramine氯丙咪嗪,Complex-H高剂量,Complex-M中剂量,Complex-L低剂量。表1显示慢性给药吗啡、氯丙咪嗪、高、中剂量组中均能明显减少小鼠注射甲醛后0-5分钟、15-30分钟两个时相的舔脚时间及注射甲醛后4小时的足水肿。低剂量组能减少两相时相的舔脚时间,但无统计意义,不能抑制甲醛引起的足水肿。显微镜下观察不同药物组的炎症情况显示吗啡、氯丙咪嗪、大、中剂量药物能明显抑制炎症部位组织内炎症细胞的浸润及组织水肿。4讨论慢性神经痛是多种原因引起的一类疼痛,疼痛剧烈难以忍受,多见于肿瘤、糖尿病、病毒感染后,原发部位损伤并不明显,但有明显痛敏现象,对这类疼痛解热镇痛药或麻醉性镇痛药有时效果并不理想,近年来推荐抗抑郁药。贯叶连翘长期以来作为抗抑郁广泛应用于临床,其抗抑郁作用的机制可能是通过抑制5-HT、NE、DA的重摄取和抑制单胺氧化酶的活性,从而提高脑内5-HT、NE的浓度[10,11]。NE和5-HT是疼痛传递抑制系统的重要神经递质,如延脑头端腹侧的痛抑制系统有5-HT神经原存在,刺激此区抑制脊髓-丘脑束传递的疼痛反腹侧的痛抑制系统有5-HT神经原存在,刺激此区抑制脊髓-丘脑束传递的疼痛反应,NE作用于脊髓α2受体,可以起到镇痛作用。贯叶连翘具有抑制炎症及抑制白细胞浸润作用,抑制多种炎症介质的合成及释放,也可以起到镇痛的作用[12]。综上所述,贯叶连翘可能对慢性神经痛有镇痛作用。国外有几种B族维生素复合物用于临床,亦有文献证明期镇痛有效,其可能的镇痛机制1、中枢神经系统的作用单独使用维生素B6或联合使用维生素B1、维生素B12、维生素B6能够减弱由电刺激C纤维或伤害性热刺激诱发的背角[6,13]及丘脑[14]神经原活动的增强,此作用可能与有些神经递质合成的改变有关,而这些神经质在中枢神经系统伤害性反应中起重要作用。维生素B6的缺乏伴有脑内5-HT的合成[17]。2、B族维生素的镇痛作用也可以涉及抑制炎症介质的合成,而炎症介质能够激活或敏化初级传入纤维[5,6]。总之,通过实验证实,经过正交设计筛选出的复合物(complex)贯叶连翘提取物、维生素B2及维生素B6复方具有明确的镇痛、抗炎作用,因其各分副作用小的特点,在慢性神经痛的镇痛中可能广泛的应用前景。二、贯叶连翘提取物和维生素B复方镇痛作用的机制研究试验单位,北京大学医学部神经病理室试验时间2002年9月-2003年1月摘要目的了解贯叶连翘提取物、维生素B复方的镇痛与阿片受体及单胺类神经递质的关系。方法连续灌胃给药CMC-Na,吗啡(5mg/kg,I.P.),贯叶连翘提取物(60mg/kg)、维生素B2(6mg/kg)、维生素B6(80mg/kg)复合物7天,末次给药前30分钟腹腔注射纳洛酮10mg/kg,末次给药后1小时(吗啡腹腔注射后30分钟)进行甲醛致痛实验。测定注射甲醛后0-5分钟、15-30分钟的舔脚时间。连续给药CMC-Na,贯叶连翘提取物(600mg/kg)、维生素B2(6mg/kg)、维生素B6(80mg/kg)复合物,末次给药前24小时腹腔注射利血平(1mg/kg),末次给药后1小时进行甲醛致痛实验,测定注射甲醛后0-5分钟、15-30分钟的舔脚时间。结果纳洛酮能够完全拮抗吗啡在两个小时相的镇痛作用,对复方在两个小时相的镇痛作用无影响;利血平能够完全拮抗复方在0-5分钟的镇痛作用,对复方在15-30分钟的镇痛作用无影响。关键词贯叶连翘提取物维生素B2维生素B6单胺类神经递质利血平镇痛动物实验已证实贯叶连翘提取物和维生素B复方对由足背注射甲醛所引起的疼痛有明确的镇痛、抗炎作用,之后我室对复方的镇痛作用机制进行了如下研究。1动物与材料动物ICR种小鼠,在雄性,25-35g,食水自由,温度20±2摄氏度,自然明暗周期。动物在实验室适应1周后正式实验,实验前禁食、不禁水12小时,动物由北京大学医学部实验动物中心提供,合格证013056,等级一级。药品与试剂贯叶连翘提取物(广西南宁邕江药业有限公司提供,生产批号1605795金丝桃素含量3‰,棕色瓶避光保存),盐酸吗啡(青海制药厂生产,生产批号01130),甲醛溶液(北京化学试剂公司,优级纯,批号990728),维生素B2(粉剂,97.5-102%,北京芳草医药化工研制公司生产,批号961220),维生素B6(粉剂,广西南宁邕江药业有限公司提供,批号3030010010),羧甲基纤维素钠,利血平(上海医科大学红旗制药厂,批号940102),盐酸纳洛酮(Sigma公司)。仪器50μl微量进样器,宁波市镇海玻璃仪器厂制造,89量制浙字02200206号。秒表,深圳市惠波工贸有限公司制造,98量制粤制03000202号。2实验方法2.1纳洛酮拮抗实验[1]阴性对照组(CMC-Na)两组0.25%CMC-Na(羧甲基纤维素钠),口服。阳性对照组(morphine)两组盐酸吗啡5mg/kg,腹腔注射。复方组(complex)两组EHPL600mg/kg、维生素B26mg/kg、维生素B680mg/kg。各组药物均以0.25%CMC-Na研磨配制,给药容积各组均为0.1ml/10g,每天约药1次,连续给药7天。小鼠第7天末次给药前30分钟阴性对照组(CMC)、阳性对照组(MF)、复方组(COM)中各1组(共3组)腹腔注射纳洛酮(10mg/kg),其余3组腹腔注射生理盐酸,6个组均于末次给药1小时(吗啡注射后30分钟)后将0.92%的甲醛溶液(生理盐水配制)20μl注射至小鼠右足背下,分别记录0-5及15-30分钟这两个小时小鼠舔右后足的时间。2.2利血平耗竭实验[2]阴性对照组(CMC-Na)两组0.25%CMC-Na(羧甲基纤维素钠),口服。复方组(complex)两组EHPL600mg/kg、维生素B2mg/kg、维生素B680mg/kg各组药物均以0.25%CMC-Na研磨配制,给药容积各组均为0.1ml/10g,每天给药1次,连续给药7天。小鼠第7天末次给药前24小时阴性对照组(CMC)、复方组(COM)中各1组(共2组)腹腔注射利血平(1mg/kg),其余2组腹腔注射生理盐酸,4个组均于末次给药1小时后将0.92%的甲醛溶液(生理盐水酸配制)20μl注射至小鼠右足背皮下,分别记录0-5及15-30分钟这两个时相小鼠舔右后足的时间。2.3统计分析结果以均数±标准差表示,采用microsoftexcel软件进行结果处理,组间对照采用双尾t检验,显著性为P<0.05。3结果tableEffectsofnaloxone(10mg/kg,i.p.)ontheantinociceptionofcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(0-5min)(m±s,n=12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na34.3+/-6.842.1+/-19.9Morphine8.6+/-5.744.8+/-15.0***Complex14.3+/-10.216.0+/-11.2Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex,***p<0.001EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表1显示纳洛酮能够完全拮抗吗啡在注射甲醛后0-5分钟的镇痛作用,对复方在注射甲醛后0-5分钟镇痛作用无影响。table2Effectsofnaloxone(10mg/kg,i.p.)ontheantinociceptioninducedbycomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s,15-30min)(n=12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na28.9+/-16.828.5+/-22.0Morphine11.3+/-11.925.5+/-20.9*Complex8.3+/-14.18.1+/-23.0Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex,p<0.05EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表2显示纳洛酮能够完全拮抗吗啡在注射甲醛后15-30分钟的镇痛作用,对复方在注射甲醛后15-30分钟的镇痛作用无影响。table3Effectsofreserpine(1mg/kg)ontheantinociceptionofcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s,0-5min)(n=12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na31.5+/-15.034.8+/-31.6Complex8.3+/-14.12.6+/-3.5Morphine+naloxoneVSmorphine+NScomplex,**p<0.01EHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表3显示利血平能够完全拮抗复方在注射甲醛后0-5分钟的镇痛作用。table4Effectsofreserpineontheantinociceptioninducedbyeachcomplexchronictreatmentintheformaldehyde-inducedpainmodel(m±s,15-30min)(n=12)ExperimentalgroupTimespendinginlickingrighthindpaw(s)NSnaloxoneCMC-Na24.2+/-15.034.8+/-31.6Complex9.3+/-11.42.6+/-3.5ComplexEHPL600mg/kg+VitB26mg/kg+VitB680mg/kg表4显示利血平对复方在注射甲醛后15-30分钟的镇痛作用无影响。4讨论分析贯叶连翘、维生素B2和维生素B6复方的镇痛机制所采用的动物模型为小鼠甲醛致痛模型,注射甲醛后产生两个截然分开的疼痛时相,分别为注射甲醛后0-5分钟及注射甲醛后15-30分钟。这两个进相引起疼痛的性质不同,第一时相是由甲醛直接作用于伤害性感受器引起,为非炎症性疼痛;第二时相是由炎症引起疼痛。由于两个时相产生疼痛的性质不同,导致不同种类的镇痛药在两个时相的镇效果也不相同,麻醉性镇痛药如吗啡为中枢性镇痛药,对两个时相均有镇痛作用;前列腺合成抑制剂如吲哚美辛对第一时相镇痛无效,对第二时相镇痛有效;具有抗炎作用的类固醇如氢化考的松对第一时相无效,对第十时相有效[3]。贯叶连翘提物、维生素B复方对第一及第二时相均有效,利血平使单胺类神经递质耗竭后拮抗第一时相的镇痛作用,而对第二时相的镇痛无影响。推测本复方在第一地相的镇痛作用是通过影响单胺类神经递质生产的。文献报道,贯叶连翘提取物能够抑制5HT、NE、DA的重摄取和抑制单胺氧化酶的活性,能够提高脑内单胺神经递质5-HT、NE的浓度[4,5];维生素B具有镇痛作用,其可能的镇痛机制涉及中枢神经系统的作用单独使用维生素B6或联合使用维生素B1、维生素B12、维生素B6能够减弱由电刺激C纤维或伤害性热刺激诱发的背角[1,6]及丘脑[7]神经原活动的增强,此作用可能与有些神经递质合成的改变有关,而这些神经递质在中枢神经系统伤害性反应中起重要作用。维生素B6的缺乏伴有脑内5-HT和其他下丘脑神经递质的减少。而维生素B6的治疗可增加脑内5-HT的合成。复方对第二时相有效,考虑主要是其抗炎作用,文献报道,贯叶连翘提取物具有显著的抗炎作用,能够加强吲哚美辛的抗炎作用[11],在大鼠角叉菜胶及前列腺素E1致炎动物模型中,能抑制炎症反应及白细胞渗出。Westernblot分析显示在在实验中贯叶连翘提取物能够调节脂多糖、γ-干扰素,100mg/kg能抑制环氧酶及可诱导的一氧化氮合酶的表达。B族维生素能够抑制小鼠甲醛引起的足水肿,B族维生素的镇痛作用可能也涉及抑制炎症介质的合成,而炎症介质能够激活或敏化初级传入纤维。本室前期实验也显示复方具有减轻甲醛引起的足水肿,减少炎症组织内的炎症细胞浸润及水肿。在小鼠甲醛致痛的动物模型中,纳洛酮能完全拮抗吗啡在两个时相的镇痛作用,而对复方在两个时相的致痛作用都无影响,表明复方在此模型中的镇痛作用与阿片系统无直接关系。综上所述,贯叶连翘提取物和维生素B2、维生素B6复方的镇痛作用可能与增加单胺类神经递质,抗炎作用有关,无阿片系统的参与,关于其抗炎机制有待进一步研究。权利要求1.一种具有镇痛和消炎的药物组合物,其特征在于它包括贯叶连翘提取物、维生素B,其成分和重量百分含量如下维生素B20.5-5%维生素B65-15%贯叶连翘提取物余量。2.一种具有镇痛和消炎的药物组合物,其特征在于它包括贯叶连翘提取物、维生素B,其成分和重量百分含量如下维生素B11-5%维生素B20.5-5%维生素B65-15%贯叶连翘提取物余量。3.一种如权利要求1和2所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于药物组合物根据需要可以做成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、针剂。4.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的片剂的制备方法是将贯叶连翘提取物、维生素B,与赋形剂制成颗粒干燥,加入崩解剂、润滑剂,压片,或直接包装,或包糖衣,或包薄膜衣即得到产品;以上片剂所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等;所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等;所述的润滑剂为硬脂酸镁等;所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等;所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5~75%、0.5~20%、0.5~2.0%、2~45%。5.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的胶囊剂的生产方法是将贯叶连翘提取物、维生素B,加入赋形剂,和崩解剂、助流剂,并使之干燥,然后装入胶囊中,得到产品。以上所述的制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁等。重量20~80%。助流剂选用微分硅胶,用量为0.5-1%。6.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的丸剂的生产方法将将贯叶连翘提取物、维生素B加入赋形剂,制丸。①制成浓缩丸;②加入赋形剂重量10~100%、蜜糖,制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。7.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂,并制成颗粒,使之干燥,得到产品;所述的加入赋形剂的成分和含量蔗糖50~95%、乳糖50~90%、糊精50~70%。8.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的合剂的生产方法;将将贯叶连翘提取物、维生素B与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀,即得到产品;所述的加入的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10~60%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%。9.根据权利要求3所述的具有镇痛和消炎的药物组合物的生产方法,其特征在于所述的糖浆剂的生产方法将将贯叶连翘提取物、维生素B与蔗糖、蜜糖防腐剂溶液混合均匀,即得到产品;所述的加入的蔗糖或蜜糖的重量比为60~70%、防腐剂山梨酸钾0.1~1%、尼泊金乙酯0.1~0.3%。全文摘要本发明涉及一种具有镇痛和消炎的药物组合物及其生产方法,该药物组合物添加有中药贯叶连翘提取物和复合维生素B,根据需要可以将其做成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、针剂,这种药物组合物具有安全性、镇痛和消炎作用效果显著,而且还有抗抑郁、抗肿瘤的效果,还可以补充人体所缺乏的部分维生素。文档编号A61K31/7042GK1452980SQ0312800公开日2003年11月5日申请日期2003年5月17日优先权日2003年5月17日发明者库宝善,罗润昌,麻叔林,汤萍英,孙宜申请人:广西化工生物技术研究所

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