治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法
专利名称：治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗疱疹病毒的药物组合物，特别是添加有中药的治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法。
背景技术：
疱疹病毒(Herpes-virus)是在动物和人类中发现的一群中等大小、结构相似、有包膜的双股DNA病毒。现已发现100种以上。其中，单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常见的传染性病原体。HSV感染与先天畸形、流产、宫颈癌、脑炎、新生儿疾病、性病等10多种疾病有关。VZV感染可引起带状疱疹。
已知的单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)与艾滋病(HIV)有关联，据有关文献介绍，艾滋病HIV(+)携带者中往往常常受到疱疹病毒感染及致病，在艾滋病的治疗中了解到，HIV(+)携带者中疱疹病毒感染及致病有两个特点一是感染发病率高，二是临床症状严重，病程长，反复发作，预后不良。
Stavrianeas等报道了1988年至1996年希腊Andreas Sygros医院HIV(+)携带者中疱疹病毒感染致病情况。690名HIV(+)携带者中359人患有疱疹病毒感染性疾病，发病率高达52.03％。其中101人为HSV感染，110人为VSV感染，97人为EBV感染，51人为CMV感染。HSV主要感染生殖器和肛周(77/101)，占HSV感染者76.2％。其中18名HSV感染者表现为感染部位经久不愈的溃疡。VZV感染导致的带状疱疹中4例表现为肥厚型损害，7例出血坏死性损害，11例反复发作达31次，6例皮损为多皮区。CMV感染与CD4+T淋巴细胞水平低下有关，所有CMV感染者GD4+T淋巴细胞＜100个/ul。而在97名EBV感染者中，96人表现为口腔毛状白斑(Oral hairy lenukoplakia，OHL)，1人表现为Burkitt淋巴瘤[3]。
许多艾滋病患者都合并有HSV广泛皮肤或粘膜感染。这类HSV感染不仅难于诊断，并且可能与艾滋了病率和死亡率有关。Garcia-Plata等报道了1名44岁HIV(+)血浆特异性HSV-2抗体阳性率占35.7％，而在HIV(+)样本中则占82.7％，显示HIV与HSV-2具有显著相关性。因此他提出控制HSV-2感染可能是减少HIV在人群中传播的好方法[5]。Mwansasu检测了坦桑尼亚70名生殖器溃疡患者溃汤组织HSV-1，HSV-2和HIV感染情况。结果在64％的病例中检测到HSV-2 DNA，但未检测到HSV-1DNA的存在。HSV-2和HIV抗体的阳性率分别占到79.7％和42％，也提示HSV-2和HIV之间相关。
VZV感染在正常人群中多表现为带状疱疹，而VZV感染导致脉络膜和视网膜炎者一般仅见于艾滋病，急进性外周视网膜坏死(Progressive outerretinal necerosis，PORN)综合征是其中一种类型。PORN病情进展迅速，数日至数周就完全失明，且无有效治疗方法。
EBV感染所致B细胞淋巴样增生(B-cell lymphoid proliferarions)发生于原发或者获得性免疫功能障碍后。在HIV感染者中，EBV相关B细胞淋巴瘤(B-ecll lymphoma)多发生于严重免疫抑制的病人。HIV(+)携带者患Burkiff淋巴瘤(Burkitt lymphoma)的病例中有30F％～70％与EBV相关，提示EBV在艾滋病人患淋巴瘤过程中有起重要作用。
HHV-6于1986年首次从淋巴细胞增生性疾病(lymphoproliferativediseasea)患者和血液淋巴细胞中分离得到。人类HHV-6初次感染多发生在儿童时期，然后潜伏于淋巴组织中。一般认为在机体免疫低下时再次激活，临床表现为发热、肝炎、脑炎和间质性肺炎。Ranger-Rogez等对1085名，包括艾滋病患者、HIV(+)无症状者和HIV(-)者，检测HHV-6抗体，结果显示HHV-6抗体阳性率与HIV(+)和HIV感染疾病阶段无关。
1990年一种新的人类疱疹病毒，HHV-7，从健康成年人CD4-T淋巴细胞中分离得到。与HHV-6类似，人类HHV-7初次感染多发身生在儿童时期，然后潜伏于淋巴组织中。Kempf等研究结果表明。HIV感染导致机体免疫抑制是HHV-7活化的原因。
HHV-8是新发现的一种疱疹病毒，被认为是Kaposi’s肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)的病因，因此又名Kaposi’s肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)。HHV-8不像其它疱疹病毒那样在健康人中普遍存在，HIV-1(+)携带者中HHV-8感染率为20％～50％，高于健康人群[12]。艾滋病患者外周血中测出HHV-8或血清中测出HHV-8IgG抗体，提示KS的发生。HHV-8还与艾滋病患者体腔B细胞淋巴瘤的发生有关。
总之，人类感染疱疹病毒非常普遍，但多为隐性感染或原发感染症状较轻。原发感染后，疱疹病毒潜状在相应的组织细胞内，当机体遭受某些刺激，特别是机体细胞免疫功能受损时潜伏病毒活化导致疾病。HIV特异性攻击CD4+T淋巴细胞，机体细胞免疫功能严重受损，使潜伏的疱疹病毒活化引起疾病或者便机体易于感染疱疹病毒，并且可导致严重疱疹病毒感染性疾病。Bagdades等人发现HIV(+)携带者中HSV感染导致的溃疡与CD4+T淋巴细胞低水平紧密相关，提示出HIV(+)携带者HSV感染与细胞免疫水平的联系。
多项临床和实验结果显示，HHV-6也是HIV感染后病程发展的一个促进因子。不同于HIV感染的其它辅助因子(如HSV、CMV和ESV等)，HHV-6可攻击CD4+T淋巴细胞，并通过多种机制影响HIV感染发病，其可能机制有1.HHV-6直接感染或干扰机体数种免疫细胞，包括CD4+T淋巴细胞、自然杀伤细胞(naturekiller cell，NK cell)、部分B淋巴细胞和单核巨噬细胞，减弱机体免疫系统抗病毒功能。
2.HHV-6和HIV能在CD4+T淋巴细胞共同复制，HHV-6可反式激活HIV的长末端重复序列(long terminal repeat，LTR)增强HIV表达，加速宿主细胞死亡。
3.HHV-6能上调CD4分子在CD4+细胞的表达，还能诱导CD4mRNA和蛋白在CD4-细胞的表达，包括NK细胞、成熟CD4-CD8+T淋巴细胞和CD4-δY淋巴细胞。因此，HHV-6可以增宽HIV易感细胞范围，加强HIV在体内的播散。
4.HHV-6还能刺激某些炎性细胞因子的表达，如干扰素a(interterona，IFNa)、肿瘤坏死因子a(rumor necrosis factora，TNFa)、白细胞介素1β(inrerleukin 1β，IL1β)等。这些炎性因子在体外能影响HIV的表达，并且可能是艾滋病及其相关疾病发病机制之一。
综上所述，HIV感染导致机体免疫功能低下是疱疹病毒感染、复发的主要原因，而疱疹病毒(除HHV-7)又作为辅助因子增加HIV传播的可能性，促进艾滋病发病，加速病程并影响预后。因此必须重视艾滋病患者合并疱疹病毒感染的防治。
目前对艾滋病合并疱疹病毒感染的防治主要使用的抗病毒药物，包括(一)核苷类药物一代为阿昔洛韦(Acyclovir，ACV治疗HSV和VZV感染)；(二代为更昔洛韦(Ganciclovir，治疗CMV感染)、伐昔洛韦(Valaciclovir)；三代为泛昔洛韦(Famciclovir，治疗VZV感染)；(二)非核苷类药物膦甲酸钠(foscarnet sodium)、素立夫定(Sorivudine，治疗HSV感染)；(三)生物抗病毒药物干扰素(Interferon)。
但上述有的药物最近已出现耐药性，且有的毒副作用较大，价格昂贵。因此，医学科学家们还在不断寻找开发新的安全、有效的抗病毒药。
根据文献介绍，许多中草药或中药制剂例如甘草甜素、天花粉蛋白、黄芩、桑白皮、大蒜、蘑菇、番木瓜、人参、苦瓜、双黄连、紫花地丁、柴胡、丹参、夏枯草、白花蛇舌草、黄连、金银花、紫草、穿心莲、白头翁、防风、灵芝。黄芪、板蓝根、桑寄生、淫羊藿、苦参、小柴胡汤、六君子汤、赤芍制剂、归脾汤、补中益气汤等，在调节机体免疫功能和抗病毒、预防和治疗艾滋病方面有较大潜力，能增强淋巴细胞活力，改善AIDS症状、延长生存期及降低携带考的发病率有着重要作用。
但如何从治疗疱疹病出发，通过抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用目的，仍然是病毒医学家的研究课题。
技术内容本发明人在长期的科学研究中，通过对一些中草药的药理、药效学进行了比较，并筛选了一些天然抗病毒药物，发现贯叶连翘为主并加入一些氨基酸组合后的药物具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用。
本发明的技术方案如下治疗疱疹病毒的药物组合物包括贯叶连翘和赖氨酸盐酸盐，其成分和重量百分含量为贯叶连翘提取物 50-80％赖氨酸盐酸盐 20-50％以上所述的贯叶连翘提取物含金丝桃素2-5％，其提取方法可以采用50℃左右的热水浸泡2h后，加入0.5％NaOH，用75％甲醇在0.05Mpa下78℃提取3-5次，每次1.5h，溶媒量为5倍，在80℃条件下浓缩干燥；也可以采用80％乙醇为溶剂，撮出贯叶连翘中的蒽衍生物，再用吸附树脂，结合硅胶层析法把金丝桃素分离出来，得到含量为4.26％的金丝桃素产品；有的文献介绍用95％乙醇作为溶剂来提取金丝桃甙，浓缩时加入少量(NH4)2SO4，在真空度为34～8kPa的条件下浓缩，采用喷雾干燥的方法得到，也可以用文献介绍的其它方法提取得到。
以上所述的赖氨酸盐酸盐含量为95％以上。
所述的药物组合物做成的制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂。
本发明的药物组合物的生产方法如下1、片剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐，与赋形剂制成颗粒干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
以上片剂所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等；所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等；所述的润滑剂为硬脂酸镁等；所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等；所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
2、胶囊剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，和崩解剂并使之干燥，然后装入胶囊中，得到产品。
以上制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁、微分硅胶等。重量20～80％。
3、丸剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，制丸。①制成浓缩丸；②加入赋形剂重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。
4、颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂，并制成颗粒，使之干燥，得到产品。
加入赋形剂的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
5、合剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。
加入的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
6、糖浆剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与蔗糖、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。
加入的蔗糖量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
本发明药物组合物的抗炎作用机理以及其的突出实质性特点和显著的进步为贯叶连翘为藤黄科金丝桃属(Hyprzeum L)植物贯叶连翘(Hypericum perforatumLinn，EHPL)的全草，它主要被用于抗抑郁、收敛止血、治吐血、外伤出血、肿毒及止痛等症。近年来国外的研究发现，提取物中金丝桃素是贯叶连翘中的主要有效成分，可以治疗甲型肝炎、乙型肝炎、风湿骨痛等。有的文献介绍，金丝桃素还是一种有前途的内源性光敏剂，可应用于肿瘤的光化学诊断与治疗，具有显著的抗DNA、RNA病毒的作用。Meruelo D等研究表明贯叶连翘中所含的金丝桃素和伪金丝桃素在体内和体外均具有抗逆转录病毒(如HIV)作用。实验证明金丝桃素在体外还对HSV-1、HSV-1、副流感病毒、牛痘病毒、疱疹口炎病毒有抑制作用。
赖氨酸盐酸盐为L-赖氨酸，别名L-己氨酸、L-松氨酸、L-2，6-二氨基己酸的盐酸盐，外观为白色或近白色、可自由流动的结晶性粉末，无肉眼可见杂质，赖氨酸盐酸盐通常较稳定，高温下易结块，相对湿度60％以下稳定，60％以上则生成二水合物，碱性条件及直接在还原糖存在下加热则分解，易溶于水，水溶液呈中性至微酸性，与磷酸、盐酸、氢氧化钠、离子交换树脂等一起加热，能起到外消旋作用。
本发明人还经过检索，了解贯叶连翘国内外的研究和治疗疾病的进展情况，并检索到有关贯叶连翘的公开文献有以下一些1、“国产贯叶连翘化学成分的研究”，殷志琦叶文才，(中国药科大学)《中国药科大学学报》。2002，33(4)文摘对我国贵州产贯叶连翘的化学成分进行了较系统的化学研究。利用各种色谱技术进行分离纯化，经理化常数和波谱分析等进行结构鉴定。分离得到8个化合物槲皮素(quercetin，I)，皮苷(quercitrin，II)，山萘酚(kaempferol，III)，1，7-二羟基山酮(1，7-dihydroxyxanthone，IV)，kielcorin(5-hydroxymethyl-6-guaiacyl-2，33’，2’，4’-methoxy-xanthone-1，4-dioxane，V)，大黄素(emodin，VI)，2，5-二甲基-7-羟基色原酮(2，5-dimethyl-7-hydroxychromone，VII)，香草酸(vanillic acid，VII)。结论化合物IV，VII和VIII为首次从贯叶连翘中分离得到。2、“贯叶连翘提取物抗抑郁作用研究”作者，徐静、蔡爽等(沈阳药科大学、中国医科大学附属第一临床医院)，《中药药理与临床》。2002，18(5)，文摘目的研究贯叶连翘提取物对小鼠的抑郁作用。方法选取了强迫小鼠游泳实验，小鼠尾悬吊应激实验，拮抗利血平所致的抑制症状等实验指标。结果贯叶连翘提取物150mg/kg，300mg/kg显著缩短迫游泳小鼠及尾悬吊小鼠的不动时间；显著拮抗利血平所致的体温下降作用和小鼠眼睑下垂作用。结论贯叶连翘提取物具有一定的抗抑郁作用。3、“贯叶连翘中的新抗真菌黄酮苷”，作者，卢艳花张臻等(南京师范大学、南京大学)《植物学报》。2002，44(6)。文摘从贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)地上部分的80％乙醇提取物中分离得到1个新的黄酮苷和6个已知黄酮类化合物。采用红外光谱，紫外光谱，质谱和核磁共振光谱等波谱技术测得新黄酮苷的结构为6″-O-乙酰基槲皮素-3-O-β-D-阿洛糖苷(1，6″-O-acetyl quercetin3-O-β-D-alloside)，6个已知化合物分别被鉴定为槲皮苷(quercitrin)，金丝桃苷(hyperoside)，扁蓄苷(avicularin)，芦丁(rutin)，槲皮素(quercetin)和山萘酚(kaemfero10。体外抗真菌活性实验表明，新黄酮苷(1)，槲皮苷和槲皮素对植物病原菌Helminthosporium sativum Pamel King et Bakke具有一定的抑制作用，三者的最小抑制浓度(MIC)分别为25，50和50μg/mL。另外，1和槲皮苷对禾赤色镰孢霉(Fusarium graminearum Schw.)的生长也有抑制作用(MIC值均为100μg/mL)。4、“贯叶连翘活性成分研究新进展”，李宏、姜怀春等(武汉大学、重庆商学院)《中草药》。2001，32(7)。文摘介绍了贯叶连翘的活性成分，抗抑郁、抗肿瘤、抗病毒等药理作用和副作用的研究新进展。5、“贯叶连翘的研究进展与可持续发展对策”，李会宁 王存莲(汉中师范学院)《汉中师范学院学报自科版》。2000，18(1)文摘贯叶连翘除作为传统的中药材入药外，它的活性成分在治疗抑郁症，肝炎和艾滋病以及抗癌等方面具有重要的利用前景而被广泛关注。本文综述了贯叶连翘的生药显微鉴定特征，有效成分的研究，药理和临床试验等方面的研究进展。同时探讨了可持续发展的对策。6、“贯叶连翘的生药学研究”，雷国莲 王继涛(陕西中医学院)《陕西中医学院学报》。1999，22(6)。文摘为寻找和研究新而有效，无毒，安全可靠，非麻醉性的特殊性镇痛药，作者对秦岭地区资料十分丰富，且富含金丝桃甙的植物贯叶连翘首次作了为系统的生药学研究，为该药的开发与利用提供可靠的鉴定和研究资料。7、“金丝桃素的研究进展”，梁巧丽高宏成(北京大学)，《中草药》。1999，30(9)。文摘综述金丝桃素在抗抑郁，抗病毒，对癌症的光化学治疗，免疫等方面的最新研究成果，为开发新药提供参考。
赖氨酸及其衍生物单独治疗疾病在中国科技期刊和在中国专利中有以下一些公开的文献题名赖氨酸茶碱治疗支气管哮喘及喘息性支气管炎的临床观察刊名临床内科杂志。1995，12(4)文摘作者采用双盲法对照研究口服赖氨酸茶碱和氨茶碱治疗支气管哮喘及喘息性支气管炎的疗效及副作用，结果表明赖氨酸茶碱平喘、止咳及改善小气道痉挛作用与氨茶碱相似，且副作用比氨茶减小，是一种较好的支气管扩张药；题名苄达赖氨酸滴眼液对实验性白内障的治疗作用观察刊名眼科新进展。1997，17(3)；题名L-赖氨酸对大鼠脑损伤的作用刊名青岛大学医学院学报。2001，37(4)。文摘目的研究L-赖氨酸对大鼠闭合性脑损伤的作用。方法采用落体法致大鼠闭合性脑损伤，伤后立刻一次性腹腔注射L-赖氨酸，观察L-赖氨酸对脑损伤大鼠脑水肿、病死率的影响；采用光镜下特定区域坏死神经元计数方法，观察L-赖氨酸对皮质及海马CA-1神经元损害的作用。结果L-赖氨酸组(621.5mg/kg及310.8mg/kg)与对照组(NS组)比较，能显著减少相关脑区变性、坏死神经元的数量(H＝10.35，13.84，t＝2.16～9.25，P＜0.05，0.01)，显著减轻脑水肿(F＝3.52，q＝4.04～11.37，P＜0.01)，同时621.5mg/kg L-赖氨酸能显著降低脑损伤后大鼠的病死率(P＝0.009)。结论L-赖氨酸对脑损伤有一定的保护作用。4、中国专利<申请号>01111316<公告号>1365665<发明名称>用于与细胞外基质退化相关疾病的含有抗坏血酸盐和赖氨酸的药物组合物<文摘>公开了一种预防和治疗与细胞外基质降解有关的疾病或病态如包括但不限于退化性疾病，特别是动脉粥样硬化、癌症、感染或其他炎性疾病的组合物，包含赖氨酸、脯氨酸、抗坏血酸盐及其衍生物和合成的类似物和维生素、前维生素和微量元素。5、中国专利<申请号>96116212<发明名称>一种治疗脑血管病的药物<文摘>本发明公开了一种抗脑血管病新药——苏脑片，主要由丹皮酚、川芎嗪、赖氨酸、珍珠粉、维生素E等组成，它能改善脑梗塞后脑血流量，治疗各种原因引起的缺血性脑血管病以及颅脑外伤后出现的意识障碍等各种综合症。6、中国专利<申请号>95109783<授权公告日>2000年05月03日<发明名称>一种治疗颅脑外伤及其综合症的药物组合物，本发明是一种治疗颅脑外伤及其综合症的药物组合物，其主要成分是盐酸赖氨酸、维生素B6、维生素B 1和葡萄糖酸钙。6、中国专利<申请号>93103380<发明名称>L-赖氨酸盐酸在制备止血药物中的应用<文摘>本发明公开了一种止血新药(健身素颗粒剂)，这种止血新药 的主要成分是L-赖氨酸盐，用这种止血药物能治疗人体某些器官出血，如子宫异常出血、手术后异常出血，咯血，尿血等，从而开拓了L-赖氨酸的新用途。7、中国专利<申请号>93102915<发明名称>L-赖氨酸盐酸盐用于制备治疗颅脑外伤药物的应用<文摘>本发明提供了L-赖氨酸及其盐类的新用途，即用L-赖氨酸治疗颅脑损伤的药物，它对治疗颅脑受机械性损伤、脑血管病、大脑发育不全、更年期综合症的有效率达到90％以上，进一步拓宽了L-赖氨酸的新用途。
其中中国专利<申请号>95109783、93103380、93102915是本发明人(原单位广西南宁邕江制药厂)的发明创造。
从上述文献了解到，贯叶连翘在治疗某些疾病方面得到了证明，尤其是抗抑郁作用的研究较多，但未公开其使用方法、也未见有贯叶连翘提取物与其它药物配成组合物的公开文献报道；赖氨酸在治疗颅脑损伤、治疗人体某些器官出血、改善脑梗塞后脑血流量等方面也有了较多研究，并已经形成药物产品在市场上销售，但也未发现赖氨酸在治疗疱疹方面的药用报道，也未见将贯叶连翘和赖氨酸组合成药物的公开文献报道。
本发明人在对贯叶连翘和赖氨酸组合成药物进行研究的过程中对其药理学、药效学和临床试验，发现该药物组合物对二甲苯所致小鼠耳肿胀、棉球腋下埋藏诱发肉芽组织增生均有不同程度的抑制作用，但对急性炎症有非常显著性意义，抑菌作用试验结果提示该药对一些病菌如金黄色葡萄球菌有抑制作用；对急性炎症、慢性增生性炎症作用呈正相关。认为的作用机理可能与其抗炎、抑菌、抗菌作用及抗感染作用有关。
本发明的突出的实质性特点和显著的进步为1、安全性从公开文献中我们已经了解到，贯叶连翘提取物的毒理工作已在小鼠，大鼠和犬等动物身上进行了长达26星期的试验。最大试验剂量为5000mg/kg，最初不耐受剂量为每日900mg/kg。LD50大于最大剂量。所有试验末显示有基因毒和诱变作用。在13个男性正常人每日服用900，1800和3600mg贯叶连翅提取物试验中，每日900mg是大多数临床试验采用的安全有效剂量。在我们进行的临床试验中，也证明了人服用贯叶连翘提取物的安全性。
2、镇痛和消炎作用的有效性本发明的贯叶连翘提取物与赖氨酸盐酸盐组合后有明显治疗疱疹作用，而单独使用贯叶连翘提取物或单独使用赖氨酸盐酸盐达不到复合后的效果。
3、对人体的其它辅助治疗效果贯叶连翘提取物与赖氨酸盐酸盐复配后，显示出该药物组合物不仅具有治疗疱疹病作用，抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用，而且还有抗抑郁、抗肿瘤的效果，还可以补充人体所缺乏的部分维生素。
具体实施例方式
实施例1取贯叶连翘提取物500g，赖氨酸盐酸盐500g(其中贯叶连翘提取物中金丝桃素含量2-5％，赖氨酸盐酸盐含量为95％以上)，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合，制成颗粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5～2.0％硬脂酸镁，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
实施例2取贯叶连翘提取物750g，赖氨酸盐酸盐250g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合，制成颗粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5～2.0％硬脂酸镁，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
实施例3取贯叶连翘提取物800g，赖氨酸盐酸盐200g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒，干燥，加入助流剂微分硅胶，装胶囊，即得到产品。
实施例4取贯叶连翘提取物500g，赖氨酸盐酸盐250g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒，干燥，加入助流剂微分硅胶，装胶囊，即得到产品。
实施例5取贯叶连翘提取物700g，赖氨酸盐酸盐300g，与赋形剂蔗糖100g、乳糖100g、糊精300g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。
实施例6取贯叶连翘提取物650g，赖氨酸盐酸盐350g，30g，与赋形剂蔗糖200g、乳糖100g、糊精200g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。
实施例7取贯叶连翘提取物800g，赖氨酸盐酸盐350g，加入蔗糖500g、糊精500g，制成颗粒，干燥，得到产品。
实施例8取贯叶连翘提取物750g，赖氨酸盐酸盐250g，与蔗糖10～55％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％混合，制成合剂。
实施例9取贯叶连翘提取物650g，赖氨酸盐酸盐630g，与蔗糖量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％合并，制成糖浆剂。
本发明有关临床试验、药理、药效学情况一、贯叶连翘提取物和盐酸赖氨酸体外抗疱疹病毒实验研究试验单位，北京大学医学部神经病理研究室试验时间2002年9月-2003年1月摘要目的评价贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用的细胞毒性和抗疱疹病毒活性。方法采用细胞病变效应法(CPE)，测定贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用对Vero细胞和2BS细胞的细胞毒性，以及对单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)的抗病毒活性。结果盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独或联合使用在体外对HSV-1和VZV表现不同程度的抗病毒活性，最小有效浓度(MIC)、半数有效浓度(IC50)范围分别为9.7μg/mL～39.0μg/mL，6.8μg/mL～27.5μg/mL，与阳性对照药利巴韦林MIC、IC50相近。结论贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独或联合使用在体外具有抗HSV-1和VZV作用。
关键词贯叶连翘提取物；盐酸赖氨酸；单纯疱疹病毒；水痘-带状疱疹病毒；细胞病变效应。
疱疹病毒(Herpes-virus)是在动物和人类中发现的一群中等大小、结构相似、有包膜的双股DNA病毒。现已发现100种以上。其中，单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常见的传染性病原体。HSV感染与先天畸形、流产、宫颈癌、脑炎、新生儿疾病、性病等10多种疾病有关。VZV感染可此起带状疱疹。由于经典抗病毒药无环鸟苷(acyclovir，ACV)已出现耐药性，且毒副作用较大，价格昂贵。寻找开发新的安全、有效的抗病毒药成为热点。
贯叶连翘(Hypericum perforatum L)又名圣约翰草(St.John’s wort)，系藤黄科金丝桃属植物，全草入药，能清心明目，调经活血、止血生肌、解毒消炎，在我国秦巴地区广泛分布[2]。贯叶连翘还具有抗病毒、镇痛、抗炎、抗菌等多种药理作用，且安全性高。
赖氨酸是人体必需的8种氨基酸之一。文献报道，疱疹病毒感染患者口服赖氨酸(1000mg/d～3000mg/d)能防止疱疹复发或减少复发频率、缓解症状、缩短病程。Ehal M等注意到大部分具有抗疱疹病毒作用的肽类都富含赖氨酸。
对于赖氨酸能够抗HSV公认的理由是，病毒的复制必须有足够精氨酸，赖氨酸干扰精氨酸利用，从而抑制单纯疱疹及带状疱疹的复发，即使发作症状也较轻，病程较短。现临床主要用于带状疱疹和感冒疮的治疗，推荐剂量为一日三次，每次1000mg。
尽管临床报告不少，但至今缺乏贯叶连翘提取物和赖氨酸抗疱疹病毒作用的实验依据。本次实验的目的是通过评价贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用的细胞毒性和抗疱疹病毒活性，为其临床单独或联合使用提供实验依据，为开发治疗病毒感染药物提供实验基础。1.1材料1.1.1药品与仪器盐酸赖氨酸(广西南宁邕江药业有限公司生产，批号010605)，贯叶连翘提取物(广西南宁邕江药业有限公司提供，生产批号1605795，金丝桃素含量3‰，棕色瓶避光保存)，利巴韦林注射液(0.1g/mL，苏州第六制药厂生产，批号00023)，二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO，Sigma公司生产)。96孔微量细胞培养板，CO2培养箱，超净工作台，倒置显微镜。1.1.2实验分组实验分为(1)盐酸赖氨酸组、(2)贯叶连翘提取物组、(3)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比1∶1组、(4)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比1∶2组、(5)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比2∶1组。将各组药物溶于Eagle’s细胞培养维持液(含10％DMSO)，配制成5mg/mL浓度，离心取上清，无菌室滤膜过滤灭菌。(6)阳性对照组利巴韦林组(不含DMSO的Eagle’s细胞培养维持液稀释至5mg/mL浓度)、(7)空白对照组Eagle’s细胞培养维持液(含10％DMSO)。1.1.3病毒株单纯疱疹病毒I型(HSV-1)批号2002320，水痘-带状疱疹病毒(VZV)批号2002216，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。1.1.4细胞株非洲绿猴肾细胞(Green monkey kidney cells，Vero cell)，人胚肺二倍体细胞(2BS cell)10-13代细胞，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。1.1.5Eagle’s细胞培养维持液等试验材料，由中国预防医学科学院病毒学研究提提供。1.2方法1.2.1药物对Vero细胞和2BS细胞的毒性测定采用细胞病变效应法(cytopathic effect，CPE)，Vero细胞和2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24h，分别加入验证药物和阳性对照药物5000μg/mL～39μg/mL，空白对照(含10％DMSO)1∶10～1∶160(相当于DMSO浓度1.0％～0.063％)，每浓度接种4孔，每孔100μL。同时设正常细胞对照。置37℃，5％CO2培养5～7d。每24h在倒置显微镜下观察细胞形态变化，记录细胞形态变化以25％以下变化为+，26％～50％变化为++，51％～75％为+++，76％～100％变化为++++。用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。1.2.2在Vero细胞培养内对HSV-1病毒毒力的测定采用病毒CPE法，Vero细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入原始浓度的HSV-1，1∶10～1∶106，10倍稀释6个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。设正常细胞对照。37℃、50％CO2培养5～7d。观察细胞形态，用Reed-Muench法，计算HSV-1半数感染浓度(TCID50)。1.2.3在2BS细胞培养内对VZV病毒毒力的测定采用病毒CPE法，2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入原始浓度的VZV，1∶10～1∶80，2倍稀释4个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。设正常细胞对照。37℃、50％CO2培养5～7d。观察细胞形态，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度(TDID50)。1.2.4药物在Vero细胞培养内对HSV-1的抑制试验采用病毒CPE法，Vero细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入HSV-1的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2培养1h使其吸附，然后弃掉病毒液。分别加入验证药物，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)，各给药组625μg/mL～4.88μg/mL，空白对照组(含10％DMSO)1∶40～1∶5120(相当于DMSO浓度0.25％～0.002％)，2倍稀释8个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。利巴韦林注射液为935μg/mL～7.3μg/mL，2倍稀释8个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。同时设病毒对照和正常细胞对照，37℃、50％CO2培养5～7d，每24h倒置显微镜下观察病毒CPE，至病毒对照细胞变出现“+++～++++”时结束试验。同样试验重复三次求平均值，利用均值计算药物半数有效浓度(IC50)、最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)。1.2.5药物在2BS细胞培养内对VZV的抑制试验采用病毒CPE法，2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入VZV的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2吸附1h，弃掉病毒液。其余实验步骤同1.2.4所述，求出药物半数有效浓度(IC50)、最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)。2结果2.1药物对细胞的毒性作用正常Vero细胞和2BS细胞能耐受的药物浓度如表-1所示。TD50代表药物半数中毒浓度，TD0代表药物最大无毒浓度。由于贯叶连翘提取物不溶于水，各组药物均用含10％DMSO的Eagle’s细胞培养维持液(即空白对照)配制。DMSO具有一定细胞毒性，因此空白对照组稀释至1∶40(含0.25％DMSO)才对正常Vero细胞和2BS细胞无毒性作用。与空白对照相比，各试验组药物在稀释至1∶8(含1.25％DMSO)～1∶32(含0.31％DMSO)范围时达到TD0，所含DMSO浓度高于对细胞无毒浓度0.25％，说明药物组的有毒性作用有可能部分或全部来自于溶剂DMSO，其实际TD50、TD0应大于所测得值。而阳性对照利巴韦林需用不含DMSO的Eagle’s细胞培养维持液稀释，所以测得毒性为药物真实浓度。2.2在Vero和2BS细胞培养内对HSV-1和VZV病毒毒力测定结果(TCID50)观察CPE，计算HSV-1的半数感染量(TCID50)为1∶106，VZV的半数感染量(TCID50)1∶28。即接种每孔0.1mL滴度为1∶106的HSV-1可使50％Vero细胞发生明显病变，接种每孔0.1mL滴度为1∶28的VZV可使50％2BS细胞发生明显病变。2.3药物的讥病毒作用2.3.1药物在Vero细胞培养内对HSV-1病毒的抑制试验结果结果如表2所示，当HSV-1病毒以100TCID50浓度感染正常Vero细胞后，各组试验药物均显示有不同程度抗病毒作用。最小有效浓度(MIC)范围从9.7μg/ml～19.5μg/ml不等，半数有效浓度(IC50)范围从6.8μg/ml～27.5μg/ml不等。2.3.2药物在2BS细胞培养内对VZV病毒的抑制作用结果如表2所示，当VZV病毒以100TCID50浓度感染正常细胞后，各组试验药物均显示有不同程度抗病毒作用，最小有效浓度(MIC)范围从9.7μg/ml～39.0μg/ml不等，半数有效浓度(IC50)范围从6.8μg/ml～19.0μg/ml不等。3讨论近年来HSV感染发病率急剧增高，人群中有60％～90％HSV携带者，严重威胁人类健康[8]。带状疱疹是VZV引起的疼痛性疾病，其最常见和最令人因扰的并发症是疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia PHN)，尤其是老年患者多见，常持续数月或数年，表现为持续和/或间歇性自发刺激诱发痛，例如痛觉过敏，异常性疼痛。疼痛的后果包括疲劳、睡眠障食欲减退、抑郁、回避社交、影响日常生活降低生活质量[9]。
尽管核苷类似物如叠氮胞苷(zidovudine，AZT)、dideoxyinosine(ddI)、dideoxycytidine(ddC)、ACV作为抗病毒药已广泛应用于临床，但严重的副作用[10]和病毒抗药株[1]的出现使研制新的低毒、高效抗病毒药物刻不容缓。天然药物来源广泛，不良反应较少，其抗病毒作用日益受到重视。
贯叶连翘提取物(标准为含3‰金丝桃素)已作为抗郁药广泛使用，临床患者对其有良好的耐受性。用药后，其副作用的发生率与安慰剂相似。在美国甚至作为食品补充剂使用。贯叶连翘提取物药理作用广泛，具有镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多项药理作用。Meruelo D等研究表明贯叶连翘中所含的金丝桃素和伪金丝桃素在体内和体外均具有抗逆转录病毒(如人免疫缺陷病毒HIV)作用[12]。实验证明金丝桃素在体外还对HSV-1、HSV-2、副流感病毒、牛痘病毒、疱疹口炎病毒有抑制作用[13]。
赖氨酸是一种生理性物质，安全性高，作为食品添加剂使用。临床上已有一些用赖氨酸治疗疱疹病毒感染的报道，用量高达每天3000mg。
为了研究贯叶连翘提取物和赖氨酸这两种安全、低毒药物在体外抗疱疹病毒作用，本实验以HSV-1攻击Vero和VZV攻击2BS细胞为模型，通过CPE法研究盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独使用，及盐酸赖氨酸与贯叶连翘提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1联合使用时细胞毒性和体外抗HSV-1、VZV作用。从总体来看，最小有效浓度(MIC)、半数有效浓度(IC50)范围分别为9.7μg/ml～39.0μg/ml，6.8μg/ml～27.5μg/ml，与阳性对照药利巴韦林MIC、IC50相近。
实验中所测得的盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独使用，及盐酸赖氨酸与贯叶连翘提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1联合使用时细胞毒性高于利巴韦林。可能是因为验证药物用含10％DMSO的培养液配置，而利巴韦林需用不含DMSO的培养液配置。空白对照组的测定结果表明，当DMSO浓度高于0.25％时对正常Vero细胞和2BS细胞有毒性作用。所以验证药物与利巴韦林对细胞的毒性差异有可能部分或全部来自于溶剂DMSO的作用，而药物实际的安全性应较实验所示高。
综上所述，贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独或联合使用在体外具有抗疱疹病毒活性，贯叶连翘提取物、赖氨酸联合应用也为研究治疗病毒感染性疾病(如疱疹后遗神经痛PHN)提供了新的思路，有待进一步深入研究。
二、药理研究北京大学医学部药理学系和神经病理研究室于2002年9月-2003年1月还对本发明的药物组合物进行了药理研究，药理研究共做了以下几个项目
1、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠神经行为的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，观察灌胃给药是否对小鼠中枢神经系统有抑制作用，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠一般神经精神行为无影响。
2、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠自主活动的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，观察灌胃给药是否对小鼠中枢神经系统有抑制作用，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠有明显镇静作用。
3、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠肠蠕动的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比较，观察灌胃给药是否对小鼠肠道功能有影响，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠胃肠没有明显影响。
4、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物对大鼠LD50，种属为SD大鼠，雌雄各半，共50只，分成3组，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药后的死亡率，实验结果表明最大剂量(14000mg/kg)雌性组死亡90％，雄性20％，和中剂量(7072mg/kg)死亡率为0。
5、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠抗电惊厥的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比较，用110V交流电3秒致电惊厥，观察灌胃给药是否对小鼠抗最大电惊厥有无明显影响，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠抗最大电惊厥无。
6、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫心率和心电图的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫心率和心电图的变化，实验结果表明高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫心率和心电图没有明显变化。
7、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫呼吸的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫呼吸频率和呼吸幅度的变化，实验结果表明高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫心率和心电图没有明显变化。
8、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫血压的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫呼吸频率和呼吸幅度的变化，实验结果表明，观察240分钟，高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫血压没有明显变化。
权利要求
1.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物，其特征在于它包括贯叶连翘提取物和赖氨酸盐酸盐，其成分和重量含量如下贯叶连翘提取物 50-80％赖氨酸盐酸盐20-50％
2.根据权利要求1所述的治疗疱疹病毒的药物组合物，其特征在于贯叶连翘提取物的金丝桃含量为2-5％；赖氨酸盐酸盐含量为95％以上。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物可以做成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂。
4.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成片剂的生产方法是将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐，与赋形剂制成颗粒干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品；所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等；所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等；所述的润滑剂为硬脂酸镁等；所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等；所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
5.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成胶囊剂的生产方法是将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，和崩解剂并使之干燥，然后装入胶囊中，得到产品；所述的制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁、微分硅胶等。重量20～80％。
6.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成丸剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，制丸。①制成浓缩丸；②加入赋形剂重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。
7.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂，并制成颗粒，使之干燥，得到产品；所述的颗粒剂的赋形剂的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
8.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成合剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品；所述的合剂的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
9.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成糖浆剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与蔗糖、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。所述的蔗糖加入量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
全文摘要
本发明涉及一种具有治疗治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法，该药物组合物包括50－80％的贯叶连翘提取物和20－50％和赖氨酸盐酸盐，它能抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV－1，CMV和HIV的作用目的，无明显副作用，是一种治疗疱疹病毒感染的理想药物。
文档编号A61K31/7048GK1452981SQ0312800
公开日2003年11月5日 申请日期2003年5月17日 优先权日2003年5月17日
发明者库宝善, 罗润昌, 麻叔林, 汤萍英, 孙宜 申请人:广西化工生物技术研究所
技术领域：
本发明涉及一种治疗疱疹病毒的药物组合物，特别是添加有中药的治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法。
背景技术：
疱疹病毒(Herpes-virus)是在动物和人类中发现的一群中等大小、结构相似、有包膜的双股DNA病毒。现已发现100种以上。其中，单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常见的传染性病原体。HSV感染与先天畸形、流产、宫颈癌、脑炎、新生儿疾病、性病等10多种疾病有关。VZV感染可引起带状疱疹。
已知的单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)与艾滋病(HIV)有关联，据有关文献介绍，艾滋病HIV(+)携带者中往往常常受到疱疹病毒感染及致病，在艾滋病的治疗中了解到，HIV(+)携带者中疱疹病毒感染及致病有两个特点一是感染发病率高，二是临床症状严重，病程长，反复发作，预后不良。
Stavrianeas等报道了1988年至1996年希腊Andreas Sygros医院HIV(+)携带者中疱疹病毒感染致病情况。690名HIV(+)携带者中359人患有疱疹病毒感染性疾病，发病率高达52.03％。其中101人为HSV感染，110人为VSV感染，97人为EBV感染，51人为CMV感染。HSV主要感染生殖器和肛周(77/101)，占HSV感染者76.2％。其中18名HSV感染者表现为感染部位经久不愈的溃疡。VZV感染导致的带状疱疹中4例表现为肥厚型损害，7例出血坏死性损害，11例反复发作达31次，6例皮损为多皮区。CMV感染与CD4+T淋巴细胞水平低下有关，所有CMV感染者GD4+T淋巴细胞＜100个/ul。而在97名EBV感染者中，96人表现为口腔毛状白斑(Oral hairy lenukoplakia，OHL)，1人表现为Burkitt淋巴瘤[3]。
许多艾滋病患者都合并有HSV广泛皮肤或粘膜感染。这类HSV感染不仅难于诊断，并且可能与艾滋了病率和死亡率有关。Garcia-Plata等报道了1名44岁HIV(+)血浆特异性HSV-2抗体阳性率占35.7％，而在HIV(+)样本中则占82.7％，显示HIV与HSV-2具有显著相关性。因此他提出控制HSV-2感染可能是减少HIV在人群中传播的好方法[5]。Mwansasu检测了坦桑尼亚70名生殖器溃疡患者溃汤组织HSV-1，HSV-2和HIV感染情况。结果在64％的病例中检测到HSV-2 DNA，但未检测到HSV-1DNA的存在。HSV-2和HIV抗体的阳性率分别占到79.7％和42％，也提示HSV-2和HIV之间相关。
VZV感染在正常人群中多表现为带状疱疹，而VZV感染导致脉络膜和视网膜炎者一般仅见于艾滋病，急进性外周视网膜坏死(Progressive outerretinal necerosis，PORN)综合征是其中一种类型。PORN病情进展迅速，数日至数周就完全失明，且无有效治疗方法。
EBV感染所致B细胞淋巴样增生(B-cell lymphoid proliferarions)发生于原发或者获得性免疫功能障碍后。在HIV感染者中，EBV相关B细胞淋巴瘤(B-ecll lymphoma)多发生于严重免疫抑制的病人。HIV(+)携带者患Burkiff淋巴瘤(Burkitt lymphoma)的病例中有30F％～70％与EBV相关，提示EBV在艾滋病人患淋巴瘤过程中有起重要作用。
HHV-6于1986年首次从淋巴细胞增生性疾病(lymphoproliferativediseasea)患者和血液淋巴细胞中分离得到。人类HHV-6初次感染多发生在儿童时期，然后潜伏于淋巴组织中。一般认为在机体免疫低下时再次激活，临床表现为发热、肝炎、脑炎和间质性肺炎。Ranger-Rogez等对1085名，包括艾滋病患者、HIV(+)无症状者和HIV(-)者，检测HHV-6抗体，结果显示HHV-6抗体阳性率与HIV(+)和HIV感染疾病阶段无关。
1990年一种新的人类疱疹病毒，HHV-7，从健康成年人CD4-T淋巴细胞中分离得到。与HHV-6类似，人类HHV-7初次感染多发身生在儿童时期，然后潜伏于淋巴组织中。Kempf等研究结果表明。HIV感染导致机体免疫抑制是HHV-7活化的原因。
HHV-8是新发现的一种疱疹病毒，被认为是Kaposi’s肉瘤(Kaposi’s sarcoma，KS)的病因，因此又名Kaposi’s肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)。HHV-8不像其它疱疹病毒那样在健康人中普遍存在，HIV-1(+)携带者中HHV-8感染率为20％～50％，高于健康人群[12]。艾滋病患者外周血中测出HHV-8或血清中测出HHV-8IgG抗体，提示KS的发生。HHV-8还与艾滋病患者体腔B细胞淋巴瘤的发生有关。
总之，人类感染疱疹病毒非常普遍，但多为隐性感染或原发感染症状较轻。原发感染后，疱疹病毒潜状在相应的组织细胞内，当机体遭受某些刺激，特别是机体细胞免疫功能受损时潜伏病毒活化导致疾病。HIV特异性攻击CD4+T淋巴细胞，机体细胞免疫功能严重受损，使潜伏的疱疹病毒活化引起疾病或者便机体易于感染疱疹病毒，并且可导致严重疱疹病毒感染性疾病。Bagdades等人发现HIV(+)携带者中HSV感染导致的溃疡与CD4+T淋巴细胞低水平紧密相关，提示出HIV(+)携带者HSV感染与细胞免疫水平的联系。
多项临床和实验结果显示，HHV-6也是HIV感染后病程发展的一个促进因子。不同于HIV感染的其它辅助因子(如HSV、CMV和ESV等)，HHV-6可攻击CD4+T淋巴细胞，并通过多种机制影响HIV感染发病，其可能机制有1.HHV-6直接感染或干扰机体数种免疫细胞，包括CD4+T淋巴细胞、自然杀伤细胞(naturekiller cell，NK cell)、部分B淋巴细胞和单核巨噬细胞，减弱机体免疫系统抗病毒功能。
2.HHV-6和HIV能在CD4+T淋巴细胞共同复制，HHV-6可反式激活HIV的长末端重复序列(long terminal repeat，LTR)增强HIV表达，加速宿主细胞死亡。
3.HHV-6能上调CD4分子在CD4+细胞的表达，还能诱导CD4mRNA和蛋白在CD4-细胞的表达，包括NK细胞、成熟CD4-CD8+T淋巴细胞和CD4-δY淋巴细胞。因此，HHV-6可以增宽HIV易感细胞范围，加强HIV在体内的播散。
4.HHV-6还能刺激某些炎性细胞因子的表达，如干扰素a(interterona，IFNa)、肿瘤坏死因子a(rumor necrosis factora，TNFa)、白细胞介素1β(inrerleukin 1β，IL1β)等。这些炎性因子在体外能影响HIV的表达，并且可能是艾滋病及其相关疾病发病机制之一。
综上所述，HIV感染导致机体免疫功能低下是疱疹病毒感染、复发的主要原因，而疱疹病毒(除HHV-7)又作为辅助因子增加HIV传播的可能性，促进艾滋病发病，加速病程并影响预后。因此必须重视艾滋病患者合并疱疹病毒感染的防治。
目前对艾滋病合并疱疹病毒感染的防治主要使用的抗病毒药物，包括(一)核苷类药物一代为阿昔洛韦(Acyclovir，ACV治疗HSV和VZV感染)；(二代为更昔洛韦(Ganciclovir，治疗CMV感染)、伐昔洛韦(Valaciclovir)；三代为泛昔洛韦(Famciclovir，治疗VZV感染)；(二)非核苷类药物膦甲酸钠(foscarnet sodium)、素立夫定(Sorivudine，治疗HSV感染)；(三)生物抗病毒药物干扰素(Interferon)。
但上述有的药物最近已出现耐药性，且有的毒副作用较大，价格昂贵。因此，医学科学家们还在不断寻找开发新的安全、有效的抗病毒药。
根据文献介绍，许多中草药或中药制剂例如甘草甜素、天花粉蛋白、黄芩、桑白皮、大蒜、蘑菇、番木瓜、人参、苦瓜、双黄连、紫花地丁、柴胡、丹参、夏枯草、白花蛇舌草、黄连、金银花、紫草、穿心莲、白头翁、防风、灵芝。黄芪、板蓝根、桑寄生、淫羊藿、苦参、小柴胡汤、六君子汤、赤芍制剂、归脾汤、补中益气汤等，在调节机体免疫功能和抗病毒、预防和治疗艾滋病方面有较大潜力，能增强淋巴细胞活力，改善AIDS症状、延长生存期及降低携带考的发病率有着重要作用。
但如何从治疗疱疹病出发，通过抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用目的，仍然是病毒医学家的研究课题。
技术内容本发明人在长期的科学研究中，通过对一些中草药的药理、药效学进行了比较，并筛选了一些天然抗病毒药物，发现贯叶连翘为主并加入一些氨基酸组合后的药物具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用。
本发明的技术方案如下治疗疱疹病毒的药物组合物包括贯叶连翘和赖氨酸盐酸盐，其成分和重量百分含量为贯叶连翘提取物 50-80％赖氨酸盐酸盐 20-50％以上所述的贯叶连翘提取物含金丝桃素2-5％，其提取方法可以采用50℃左右的热水浸泡2h后，加入0.5％NaOH，用75％甲醇在0.05Mpa下78℃提取3-5次，每次1.5h，溶媒量为5倍，在80℃条件下浓缩干燥；也可以采用80％乙醇为溶剂，撮出贯叶连翘中的蒽衍生物，再用吸附树脂，结合硅胶层析法把金丝桃素分离出来，得到含量为4.26％的金丝桃素产品；有的文献介绍用95％乙醇作为溶剂来提取金丝桃甙，浓缩时加入少量(NH4)2SO4，在真空度为34～8kPa的条件下浓缩，采用喷雾干燥的方法得到，也可以用文献介绍的其它方法提取得到。
以上所述的赖氨酸盐酸盐含量为95％以上。
所述的药物组合物做成的制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂。
本发明的药物组合物的生产方法如下1、片剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐，与赋形剂制成颗粒干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
以上片剂所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等；所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等；所述的润滑剂为硬脂酸镁等；所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等；所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
2、胶囊剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，和崩解剂并使之干燥，然后装入胶囊中，得到产品。
以上制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁、微分硅胶等。重量20～80％。
3、丸剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，制丸。①制成浓缩丸；②加入赋形剂重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。
4、颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂，并制成颗粒，使之干燥，得到产品。
加入赋形剂的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
5、合剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。
加入的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
6、糖浆剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与蔗糖、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。
加入的蔗糖量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
本发明药物组合物的抗炎作用机理以及其的突出实质性特点和显著的进步为贯叶连翘为藤黄科金丝桃属(Hyprzeum L)植物贯叶连翘(Hypericum perforatumLinn，EHPL)的全草，它主要被用于抗抑郁、收敛止血、治吐血、外伤出血、肿毒及止痛等症。近年来国外的研究发现，提取物中金丝桃素是贯叶连翘中的主要有效成分，可以治疗甲型肝炎、乙型肝炎、风湿骨痛等。有的文献介绍，金丝桃素还是一种有前途的内源性光敏剂，可应用于肿瘤的光化学诊断与治疗，具有显著的抗DNA、RNA病毒的作用。Meruelo D等研究表明贯叶连翘中所含的金丝桃素和伪金丝桃素在体内和体外均具有抗逆转录病毒(如HIV)作用。实验证明金丝桃素在体外还对HSV-1、HSV-1、副流感病毒、牛痘病毒、疱疹口炎病毒有抑制作用。
赖氨酸盐酸盐为L-赖氨酸，别名L-己氨酸、L-松氨酸、L-2，6-二氨基己酸的盐酸盐，外观为白色或近白色、可自由流动的结晶性粉末，无肉眼可见杂质，赖氨酸盐酸盐通常较稳定，高温下易结块，相对湿度60％以下稳定，60％以上则生成二水合物，碱性条件及直接在还原糖存在下加热则分解，易溶于水，水溶液呈中性至微酸性，与磷酸、盐酸、氢氧化钠、离子交换树脂等一起加热，能起到外消旋作用。
本发明人还经过检索，了解贯叶连翘国内外的研究和治疗疾病的进展情况，并检索到有关贯叶连翘的公开文献有以下一些1、“国产贯叶连翘化学成分的研究”，殷志琦叶文才，(中国药科大学)《中国药科大学学报》。2002，33(4)文摘对我国贵州产贯叶连翘的化学成分进行了较系统的化学研究。利用各种色谱技术进行分离纯化，经理化常数和波谱分析等进行结构鉴定。分离得到8个化合物槲皮素(quercetin，I)，皮苷(quercitrin，II)，山萘酚(kaempferol，III)，1，7-二羟基山酮(1，7-dihydroxyxanthone，IV)，kielcorin(5-hydroxymethyl-6-guaiacyl-2，33’，2’，4’-methoxy-xanthone-1，4-dioxane，V)，大黄素(emodin，VI)，2，5-二甲基-7-羟基色原酮(2，5-dimethyl-7-hydroxychromone，VII)，香草酸(vanillic acid，VII)。结论化合物IV，VII和VIII为首次从贯叶连翘中分离得到。2、“贯叶连翘提取物抗抑郁作用研究”作者，徐静、蔡爽等(沈阳药科大学、中国医科大学附属第一临床医院)，《中药药理与临床》。2002，18(5)，文摘目的研究贯叶连翘提取物对小鼠的抑郁作用。方法选取了强迫小鼠游泳实验，小鼠尾悬吊应激实验，拮抗利血平所致的抑制症状等实验指标。结果贯叶连翘提取物150mg/kg，300mg/kg显著缩短迫游泳小鼠及尾悬吊小鼠的不动时间；显著拮抗利血平所致的体温下降作用和小鼠眼睑下垂作用。结论贯叶连翘提取物具有一定的抗抑郁作用。3、“贯叶连翘中的新抗真菌黄酮苷”，作者，卢艳花张臻等(南京师范大学、南京大学)《植物学报》。2002，44(6)。文摘从贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)地上部分的80％乙醇提取物中分离得到1个新的黄酮苷和6个已知黄酮类化合物。采用红外光谱，紫外光谱，质谱和核磁共振光谱等波谱技术测得新黄酮苷的结构为6″-O-乙酰基槲皮素-3-O-β-D-阿洛糖苷(1，6″-O-acetyl quercetin3-O-β-D-alloside)，6个已知化合物分别被鉴定为槲皮苷(quercitrin)，金丝桃苷(hyperoside)，扁蓄苷(avicularin)，芦丁(rutin)，槲皮素(quercetin)和山萘酚(kaemfero10。体外抗真菌活性实验表明，新黄酮苷(1)，槲皮苷和槲皮素对植物病原菌Helminthosporium sativum Pamel King et Bakke具有一定的抑制作用，三者的最小抑制浓度(MIC)分别为25，50和50μg/mL。另外，1和槲皮苷对禾赤色镰孢霉(Fusarium graminearum Schw.)的生长也有抑制作用(MIC值均为100μg/mL)。4、“贯叶连翘活性成分研究新进展”，李宏、姜怀春等(武汉大学、重庆商学院)《中草药》。2001，32(7)。文摘介绍了贯叶连翘的活性成分，抗抑郁、抗肿瘤、抗病毒等药理作用和副作用的研究新进展。5、“贯叶连翘的研究进展与可持续发展对策”，李会宁 王存莲(汉中师范学院)《汉中师范学院学报自科版》。2000，18(1)文摘贯叶连翘除作为传统的中药材入药外，它的活性成分在治疗抑郁症，肝炎和艾滋病以及抗癌等方面具有重要的利用前景而被广泛关注。本文综述了贯叶连翘的生药显微鉴定特征，有效成分的研究，药理和临床试验等方面的研究进展。同时探讨了可持续发展的对策。6、“贯叶连翘的生药学研究”，雷国莲 王继涛(陕西中医学院)《陕西中医学院学报》。1999，22(6)。文摘为寻找和研究新而有效，无毒，安全可靠，非麻醉性的特殊性镇痛药，作者对秦岭地区资料十分丰富，且富含金丝桃甙的植物贯叶连翘首次作了为系统的生药学研究，为该药的开发与利用提供可靠的鉴定和研究资料。7、“金丝桃素的研究进展”，梁巧丽高宏成(北京大学)，《中草药》。1999，30(9)。文摘综述金丝桃素在抗抑郁，抗病毒，对癌症的光化学治疗，免疫等方面的最新研究成果，为开发新药提供参考。
赖氨酸及其衍生物单独治疗疾病在中国科技期刊和在中国专利中有以下一些公开的文献题名赖氨酸茶碱治疗支气管哮喘及喘息性支气管炎的临床观察刊名临床内科杂志。1995，12(4)文摘作者采用双盲法对照研究口服赖氨酸茶碱和氨茶碱治疗支气管哮喘及喘息性支气管炎的疗效及副作用，结果表明赖氨酸茶碱平喘、止咳及改善小气道痉挛作用与氨茶碱相似，且副作用比氨茶减小，是一种较好的支气管扩张药；题名苄达赖氨酸滴眼液对实验性白内障的治疗作用观察刊名眼科新进展。1997，17(3)；题名L-赖氨酸对大鼠脑损伤的作用刊名青岛大学医学院学报。2001，37(4)。文摘目的研究L-赖氨酸对大鼠闭合性脑损伤的作用。方法采用落体法致大鼠闭合性脑损伤，伤后立刻一次性腹腔注射L-赖氨酸，观察L-赖氨酸对脑损伤大鼠脑水肿、病死率的影响；采用光镜下特定区域坏死神经元计数方法，观察L-赖氨酸对皮质及海马CA-1神经元损害的作用。结果L-赖氨酸组(621.5mg/kg及310.8mg/kg)与对照组(NS组)比较，能显著减少相关脑区变性、坏死神经元的数量(H＝10.35，13.84，t＝2.16～9.25，P＜0.05，0.01)，显著减轻脑水肿(F＝3.52，q＝4.04～11.37，P＜0.01)，同时621.5mg/kg L-赖氨酸能显著降低脑损伤后大鼠的病死率(P＝0.009)。结论L-赖氨酸对脑损伤有一定的保护作用。4、中国专利<申请号>01111316<公告号>1365665<发明名称>用于与细胞外基质退化相关疾病的含有抗坏血酸盐和赖氨酸的药物组合物<文摘>公开了一种预防和治疗与细胞外基质降解有关的疾病或病态如包括但不限于退化性疾病，特别是动脉粥样硬化、癌症、感染或其他炎性疾病的组合物，包含赖氨酸、脯氨酸、抗坏血酸盐及其衍生物和合成的类似物和维生素、前维生素和微量元素。5、中国专利<申请号>96116212<发明名称>一种治疗脑血管病的药物<文摘>本发明公开了一种抗脑血管病新药——苏脑片，主要由丹皮酚、川芎嗪、赖氨酸、珍珠粉、维生素E等组成，它能改善脑梗塞后脑血流量，治疗各种原因引起的缺血性脑血管病以及颅脑外伤后出现的意识障碍等各种综合症。6、中国专利<申请号>95109783<授权公告日>2000年05月03日<发明名称>一种治疗颅脑外伤及其综合症的药物组合物，本发明是一种治疗颅脑外伤及其综合症的药物组合物，其主要成分是盐酸赖氨酸、维生素B6、维生素B 1和葡萄糖酸钙。6、中国专利<申请号>93103380<发明名称>L-赖氨酸盐酸在制备止血药物中的应用<文摘>本发明公开了一种止血新药(健身素颗粒剂)，这种止血新药 的主要成分是L-赖氨酸盐，用这种止血药物能治疗人体某些器官出血，如子宫异常出血、手术后异常出血，咯血，尿血等，从而开拓了L-赖氨酸的新用途。7、中国专利<申请号>93102915<发明名称>L-赖氨酸盐酸盐用于制备治疗颅脑外伤药物的应用<文摘>本发明提供了L-赖氨酸及其盐类的新用途，即用L-赖氨酸治疗颅脑损伤的药物，它对治疗颅脑受机械性损伤、脑血管病、大脑发育不全、更年期综合症的有效率达到90％以上，进一步拓宽了L-赖氨酸的新用途。
其中中国专利<申请号>95109783、93103380、93102915是本发明人(原单位广西南宁邕江制药厂)的发明创造。
从上述文献了解到，贯叶连翘在治疗某些疾病方面得到了证明，尤其是抗抑郁作用的研究较多，但未公开其使用方法、也未见有贯叶连翘提取物与其它药物配成组合物的公开文献报道；赖氨酸在治疗颅脑损伤、治疗人体某些器官出血、改善脑梗塞后脑血流量等方面也有了较多研究，并已经形成药物产品在市场上销售，但也未发现赖氨酸在治疗疱疹方面的药用报道，也未见将贯叶连翘和赖氨酸组合成药物的公开文献报道。
本发明人在对贯叶连翘和赖氨酸组合成药物进行研究的过程中对其药理学、药效学和临床试验，发现该药物组合物对二甲苯所致小鼠耳肿胀、棉球腋下埋藏诱发肉芽组织增生均有不同程度的抑制作用，但对急性炎症有非常显著性意义，抑菌作用试验结果提示该药对一些病菌如金黄色葡萄球菌有抑制作用；对急性炎症、慢性增生性炎症作用呈正相关。认为的作用机理可能与其抗炎、抑菌、抗菌作用及抗感染作用有关。
本发明的突出的实质性特点和显著的进步为1、安全性从公开文献中我们已经了解到，贯叶连翘提取物的毒理工作已在小鼠，大鼠和犬等动物身上进行了长达26星期的试验。最大试验剂量为5000mg/kg，最初不耐受剂量为每日900mg/kg。LD50大于最大剂量。所有试验末显示有基因毒和诱变作用。在13个男性正常人每日服用900，1800和3600mg贯叶连翅提取物试验中，每日900mg是大多数临床试验采用的安全有效剂量。在我们进行的临床试验中，也证明了人服用贯叶连翘提取物的安全性。
2、镇痛和消炎作用的有效性本发明的贯叶连翘提取物与赖氨酸盐酸盐组合后有明显治疗疱疹作用，而单独使用贯叶连翘提取物或单独使用赖氨酸盐酸盐达不到复合后的效果。
3、对人体的其它辅助治疗效果贯叶连翘提取物与赖氨酸盐酸盐复配后，显示出该药物组合物不仅具有治疗疱疹病作用，抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV-1，CMV和HIV的作用，而且还有抗抑郁、抗肿瘤的效果，还可以补充人体所缺乏的部分维生素。
具体实施例方式
实施例1取贯叶连翘提取物500g，赖氨酸盐酸盐500g(其中贯叶连翘提取物中金丝桃素含量2-5％，赖氨酸盐酸盐含量为95％以上)，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合，制成颗粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5～2.0％硬脂酸镁，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
实施例2取贯叶连翘提取物750g，赖氨酸盐酸盐250g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙混合，制成颗粒，干燥，加入0.5～20％羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、润滑剂0.5～2.0％硬脂酸镁，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品。
实施例3取贯叶连翘提取物800g，赖氨酸盐酸盐200g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒，干燥，加入助流剂微分硅胶，装胶囊，即得到产品。
实施例4取贯叶连翘提取物500g，赖氨酸盐酸盐250g，与5～75％淀粉或者淀粉衍生物、糊精、磷酸氢钙制成颗粒，干燥，加入助流剂微分硅胶，装胶囊，即得到产品。
实施例5取贯叶连翘提取物700g，赖氨酸盐酸盐300g，与赋形剂蔗糖100g、乳糖100g、糊精300g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。
实施例6取贯叶连翘提取物650g，赖氨酸盐酸盐350g，30g，与赋形剂蔗糖200g、乳糖100g、糊精200g制成浓缩丸、水蜜丸、大蜜丸、即得到产品。
实施例7取贯叶连翘提取物800g，赖氨酸盐酸盐350g，加入蔗糖500g、糊精500g，制成颗粒，干燥，得到产品。
实施例8取贯叶连翘提取物750g，赖氨酸盐酸盐250g，与蔗糖10～55％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％混合，制成合剂。
实施例9取贯叶连翘提取物650g，赖氨酸盐酸盐630g，与蔗糖量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％合并，制成糖浆剂。
本发明有关临床试验、药理、药效学情况一、贯叶连翘提取物和盐酸赖氨酸体外抗疱疹病毒实验研究试验单位，北京大学医学部神经病理研究室试验时间2002年9月-2003年1月摘要目的评价贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用的细胞毒性和抗疱疹病毒活性。方法采用细胞病变效应法(CPE)，测定贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用对Vero细胞和2BS细胞的细胞毒性，以及对单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)的抗病毒活性。结果盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独或联合使用在体外对HSV-1和VZV表现不同程度的抗病毒活性，最小有效浓度(MIC)、半数有效浓度(IC50)范围分别为9.7μg/mL～39.0μg/mL，6.8μg/mL～27.5μg/mL，与阳性对照药利巴韦林MIC、IC50相近。结论贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独或联合使用在体外具有抗HSV-1和VZV作用。
关键词贯叶连翘提取物；盐酸赖氨酸；单纯疱疹病毒；水痘-带状疱疹病毒；细胞病变效应。
疱疹病毒(Herpes-virus)是在动物和人类中发现的一群中等大小、结构相似、有包膜的双股DNA病毒。现已发现100种以上。其中，单纯疱疹病毒(Herpes Simples Viruses，HSV)和水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus，VZV)是常见的传染性病原体。HSV感染与先天畸形、流产、宫颈癌、脑炎、新生儿疾病、性病等10多种疾病有关。VZV感染可此起带状疱疹。由于经典抗病毒药无环鸟苷(acyclovir，ACV)已出现耐药性，且毒副作用较大，价格昂贵。寻找开发新的安全、有效的抗病毒药成为热点。
贯叶连翘(Hypericum perforatum L)又名圣约翰草(St.John’s wort)，系藤黄科金丝桃属植物，全草入药，能清心明目，调经活血、止血生肌、解毒消炎，在我国秦巴地区广泛分布[2]。贯叶连翘还具有抗病毒、镇痛、抗炎、抗菌等多种药理作用，且安全性高。
赖氨酸是人体必需的8种氨基酸之一。文献报道，疱疹病毒感染患者口服赖氨酸(1000mg/d～3000mg/d)能防止疱疹复发或减少复发频率、缓解症状、缩短病程。Ehal M等注意到大部分具有抗疱疹病毒作用的肽类都富含赖氨酸。
对于赖氨酸能够抗HSV公认的理由是，病毒的复制必须有足够精氨酸，赖氨酸干扰精氨酸利用，从而抑制单纯疱疹及带状疱疹的复发，即使发作症状也较轻，病程较短。现临床主要用于带状疱疹和感冒疮的治疗，推荐剂量为一日三次，每次1000mg。
尽管临床报告不少，但至今缺乏贯叶连翘提取物和赖氨酸抗疱疹病毒作用的实验依据。本次实验的目的是通过评价贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独及联合使用的细胞毒性和抗疱疹病毒活性，为其临床单独或联合使用提供实验依据，为开发治疗病毒感染药物提供实验基础。1.1材料1.1.1药品与仪器盐酸赖氨酸(广西南宁邕江药业有限公司生产，批号010605)，贯叶连翘提取物(广西南宁邕江药业有限公司提供，生产批号1605795，金丝桃素含量3‰，棕色瓶避光保存)，利巴韦林注射液(0.1g/mL，苏州第六制药厂生产，批号00023)，二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO，Sigma公司生产)。96孔微量细胞培养板，CO2培养箱，超净工作台，倒置显微镜。1.1.2实验分组实验分为(1)盐酸赖氨酸组、(2)贯叶连翘提取物组、(3)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比1∶1组、(4)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比1∶2组、(5)贯叶连翘提取物+盐酸赖氨酸重量比2∶1组。将各组药物溶于Eagle’s细胞培养维持液(含10％DMSO)，配制成5mg/mL浓度，离心取上清，无菌室滤膜过滤灭菌。(6)阳性对照组利巴韦林组(不含DMSO的Eagle’s细胞培养维持液稀释至5mg/mL浓度)、(7)空白对照组Eagle’s细胞培养维持液(含10％DMSO)。1.1.3病毒株单纯疱疹病毒I型(HSV-1)批号2002320，水痘-带状疱疹病毒(VZV)批号2002216，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。1.1.4细胞株非洲绿猴肾细胞(Green monkey kidney cells，Vero cell)，人胚肺二倍体细胞(2BS cell)10-13代细胞，由中国预防医学科学院病毒学研究所提供。1.1.5Eagle’s细胞培养维持液等试验材料，由中国预防医学科学院病毒学研究提提供。1.2方法1.2.1药物对Vero细胞和2BS细胞的毒性测定采用细胞病变效应法(cytopathic effect，CPE)，Vero细胞和2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24h，分别加入验证药物和阳性对照药物5000μg/mL～39μg/mL，空白对照(含10％DMSO)1∶10～1∶160(相当于DMSO浓度1.0％～0.063％)，每浓度接种4孔，每孔100μL。同时设正常细胞对照。置37℃，5％CO2培养5～7d。每24h在倒置显微镜下观察细胞形态变化，记录细胞形态变化以25％以下变化为+，26％～50％变化为++，51％～75％为+++，76％～100％变化为++++。用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。1.2.2在Vero细胞培养内对HSV-1病毒毒力的测定采用病毒CPE法，Vero细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入原始浓度的HSV-1，1∶10～1∶106，10倍稀释6个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。设正常细胞对照。37℃、50％CO2培养5～7d。观察细胞形态，用Reed-Muench法，计算HSV-1半数感染浓度(TCID50)。1.2.3在2BS细胞培养内对VZV病毒毒力的测定采用病毒CPE法，2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入原始浓度的VZV，1∶10～1∶80，2倍稀释4个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。设正常细胞对照。37℃、50％CO2培养5～7d。观察细胞形态，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度(TDID50)。1.2.4药物在Vero细胞培养内对HSV-1的抑制试验采用病毒CPE法，Vero细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入HSV-1的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2培养1h使其吸附，然后弃掉病毒液。分别加入验证药物，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)，各给药组625μg/mL～4.88μg/mL，空白对照组(含10％DMSO)1∶40～1∶5120(相当于DMSO浓度0.25％～0.002％)，2倍稀释8个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。利巴韦林注射液为935μg/mL～7.3μg/mL，2倍稀释8个浓度，每浓度4孔，每孔100μL。同时设病毒对照和正常细胞对照，37℃、50％CO2培养5～7d，每24h倒置显微镜下观察病毒CPE，至病毒对照细胞变出现“+++～++++”时结束试验。同样试验重复三次求平均值，利用均值计算药物半数有效浓度(IC50)、最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)。1.2.5药物在2BS细胞培养内对VZV的抑制试验采用病毒CPE法，2BS细胞以4×105/mL接种96孔培养板，37℃、50％CO2培养24h，加入VZV的100TCID50的病毒液，每孔100μL，37℃、50％CO2吸附1h，弃掉病毒液。其余实验步骤同1.2.4所述，求出药物半数有效浓度(IC50)、最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)。2结果2.1药物对细胞的毒性作用正常Vero细胞和2BS细胞能耐受的药物浓度如表-1所示。TD50代表药物半数中毒浓度，TD0代表药物最大无毒浓度。由于贯叶连翘提取物不溶于水，各组药物均用含10％DMSO的Eagle’s细胞培养维持液(即空白对照)配制。DMSO具有一定细胞毒性，因此空白对照组稀释至1∶40(含0.25％DMSO)才对正常Vero细胞和2BS细胞无毒性作用。与空白对照相比，各试验组药物在稀释至1∶8(含1.25％DMSO)～1∶32(含0.31％DMSO)范围时达到TD0，所含DMSO浓度高于对细胞无毒浓度0.25％，说明药物组的有毒性作用有可能部分或全部来自于溶剂DMSO，其实际TD50、TD0应大于所测得值。而阳性对照利巴韦林需用不含DMSO的Eagle’s细胞培养维持液稀释，所以测得毒性为药物真实浓度。2.2在Vero和2BS细胞培养内对HSV-1和VZV病毒毒力测定结果(TCID50)观察CPE，计算HSV-1的半数感染量(TCID50)为1∶106，VZV的半数感染量(TCID50)1∶28。即接种每孔0.1mL滴度为1∶106的HSV-1可使50％Vero细胞发生明显病变，接种每孔0.1mL滴度为1∶28的VZV可使50％2BS细胞发生明显病变。2.3药物的讥病毒作用2.3.1药物在Vero细胞培养内对HSV-1病毒的抑制试验结果结果如表2所示，当HSV-1病毒以100TCID50浓度感染正常Vero细胞后，各组试验药物均显示有不同程度抗病毒作用。最小有效浓度(MIC)范围从9.7μg/ml～19.5μg/ml不等，半数有效浓度(IC50)范围从6.8μg/ml～27.5μg/ml不等。2.3.2药物在2BS细胞培养内对VZV病毒的抑制作用结果如表2所示，当VZV病毒以100TCID50浓度感染正常细胞后，各组试验药物均显示有不同程度抗病毒作用，最小有效浓度(MIC)范围从9.7μg/ml～39.0μg/ml不等，半数有效浓度(IC50)范围从6.8μg/ml～19.0μg/ml不等。3讨论近年来HSV感染发病率急剧增高，人群中有60％～90％HSV携带者，严重威胁人类健康[8]。带状疱疹是VZV引起的疼痛性疾病，其最常见和最令人因扰的并发症是疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia PHN)，尤其是老年患者多见，常持续数月或数年，表现为持续和/或间歇性自发刺激诱发痛，例如痛觉过敏，异常性疼痛。疼痛的后果包括疲劳、睡眠障食欲减退、抑郁、回避社交、影响日常生活降低生活质量[9]。
尽管核苷类似物如叠氮胞苷(zidovudine，AZT)、dideoxyinosine(ddI)、dideoxycytidine(ddC)、ACV作为抗病毒药已广泛应用于临床，但严重的副作用[10]和病毒抗药株[1]的出现使研制新的低毒、高效抗病毒药物刻不容缓。天然药物来源广泛，不良反应较少，其抗病毒作用日益受到重视。
贯叶连翘提取物(标准为含3‰金丝桃素)已作为抗郁药广泛使用，临床患者对其有良好的耐受性。用药后，其副作用的发生率与安慰剂相似。在美国甚至作为食品补充剂使用。贯叶连翘提取物药理作用广泛，具有镇痛、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多项药理作用。Meruelo D等研究表明贯叶连翘中所含的金丝桃素和伪金丝桃素在体内和体外均具有抗逆转录病毒(如人免疫缺陷病毒HIV)作用[12]。实验证明金丝桃素在体外还对HSV-1、HSV-2、副流感病毒、牛痘病毒、疱疹口炎病毒有抑制作用[13]。
赖氨酸是一种生理性物质，安全性高，作为食品添加剂使用。临床上已有一些用赖氨酸治疗疱疹病毒感染的报道，用量高达每天3000mg。
为了研究贯叶连翘提取物和赖氨酸这两种安全、低毒药物在体外抗疱疹病毒作用，本实验以HSV-1攻击Vero和VZV攻击2BS细胞为模型，通过CPE法研究盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独使用，及盐酸赖氨酸与贯叶连翘提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1联合使用时细胞毒性和体外抗HSV-1、VZV作用。从总体来看，最小有效浓度(MIC)、半数有效浓度(IC50)范围分别为9.7μg/ml～39.0μg/ml，6.8μg/ml～27.5μg/ml，与阳性对照药利巴韦林MIC、IC50相近。
实验中所测得的盐酸赖氨酸、贯叶连翘提取物单独使用，及盐酸赖氨酸与贯叶连翘提取物以重量比1∶1、1∶2、2∶1联合使用时细胞毒性高于利巴韦林。可能是因为验证药物用含10％DMSO的培养液配置，而利巴韦林需用不含DMSO的培养液配置。空白对照组的测定结果表明，当DMSO浓度高于0.25％时对正常Vero细胞和2BS细胞有毒性作用。所以验证药物与利巴韦林对细胞的毒性差异有可能部分或全部来自于溶剂DMSO的作用，而药物实际的安全性应较实验所示高。
综上所述，贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸单独或联合使用在体外具有抗疱疹病毒活性，贯叶连翘提取物、赖氨酸联合应用也为研究治疗病毒感染性疾病(如疱疹后遗神经痛PHN)提供了新的思路，有待进一步深入研究。
二、药理研究北京大学医学部药理学系和神经病理研究室于2002年9月-2003年1月还对本发明的药物组合物进行了药理研究，药理研究共做了以下几个项目
1、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠神经行为的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，观察灌胃给药是否对小鼠中枢神经系统有抑制作用，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠一般神经精神行为无影响。
2、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠自主活动的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，观察灌胃给药是否对小鼠中枢神经系统有抑制作用，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠有明显镇静作用。
3、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠肠蠕动的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比较，观察灌胃给药是否对小鼠肠道功能有影响，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠胃肠没有明显影响。
4、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物对大鼠LD50，种属为SD大鼠，雌雄各半，共50只，分成3组，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药后的死亡率，实验结果表明最大剂量(14000mg/kg)雌性组死亡90％，雄性20％，和中剂量(7072mg/kg)死亡率为0。
5、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对小鼠抗电惊厥的影响，种属为ICR，雌雄各半，共60只，用CMC比较，用110V交流电3秒致电惊厥，观察灌胃给药是否对小鼠抗最大电惊厥有无明显影响，实验结果表明高剂量(2000mg/kg)和中剂量(1000mg/kg)对小鼠抗最大电惊厥无。
6、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫心率和心电图的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫心率和心电图的变化，实验结果表明高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫心率和心电图没有明显变化。
7、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫呼吸的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫呼吸频率和呼吸幅度的变化，实验结果表明高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫心率和心电图没有明显变化。
8、贯叶连翘提取物、盐酸赖氨酸组合物使用对家猫血压的影响，种属为家猫，雌雄不拘，共34只，对照组用0.25％的CMC，观察灌胃给药对家猫呼吸频率和呼吸幅度的变化，实验结果表明，观察240分钟，高剂量(600mg/kg)和中剂量(300mg/kg)对家猫血压没有明显变化。
权利要求
1.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物，其特征在于它包括贯叶连翘提取物和赖氨酸盐酸盐，其成分和重量含量如下贯叶连翘提取物 50-80％赖氨酸盐酸盐20-50％
2.根据权利要求1所述的治疗疱疹病毒的药物组合物，其特征在于贯叶连翘提取物的金丝桃含量为2-5％；赖氨酸盐酸盐含量为95％以上。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的药物组合物可以做成片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂。
4.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成片剂的生产方法是将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐，与赋形剂制成颗粒干燥，加入崩解剂、润滑剂，压片，或直接包装，或包糖衣，或包薄膜衣即得到产品；所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、糊精、磷酸氢钙等；所述的崩解剂为羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等；所述的润滑剂为硬脂酸镁等；所述的包糖衣材料为蔗糖、滑石粉、明胶、色素、川蜡等；所述的薄膜包衣材料为胃溶型水、醇包衣材料等。其中赋形剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料用量的重量含量分别为5～75％、0.5～20％、0.5～2.0％、2～45％。
5.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成胶囊剂的生产方法是将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，和崩解剂并使之干燥，然后装入胶囊中，得到产品；所述的制备胶囊所述的赋形剂为淀粉及其衍生物、磷酸氢钙、硬脂酸镁、微分硅胶等。重量20～80％。
6.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成丸剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐加入赋形剂，制丸。①制成浓缩丸；②加入赋形剂重量10～100％、蜜糖，制成水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸。
7.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成颗粒剂的生产方法在上述生产得到的浓缩液中加入赋形剂，并制成颗粒，使之干燥，得到产品；所述的颗粒剂的赋形剂的成分和含量蔗糖50～95％、乳糖50～90％、糊精50～70％。
8.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成合剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与矫味剂、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品；所述的合剂的矫味剂及其含量蔗糖(或蜜糖)10～60％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
9.一种具有治疗疱疹病毒的药物组合物的生产方法，其特征在于该药物组合物做成糖浆剂的生产方法将贯叶连翘提取物、赖氨酸盐酸盐与蔗糖、防腐剂溶液混合均匀，即得到产品。所述的蔗糖加入量为60～70％、防腐剂山梨酸钾0.1～1％、尼泊金乙酯0.1～0.3％。
全文摘要
本发明涉及一种具有治疗治疗疱疹病毒的药物组合物及其生产方法，该药物组合物包括50－80％的贯叶连翘提取物和20－50％和赖氨酸盐酸盐，它能抑制疱疹病毒感染、复发，提高机体免疫功能，达到具有抗HSV－1，CMV和HIV的作用目的，无明显副作用，是一种治疗疱疹病毒感染的理想药物。
文档编号A61K31/7048GK1452981SQ0312800
公开日2003年11月5日 申请日期2003年5月17日 优先权日2003年5月17日
发明者库宝善, 罗润昌, 麻叔林, 汤萍英, 孙宜 申请人:广西化工生物技术研究所
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