全反式维甲酸在制备防治心肌重构药物中的应用的制作方法
专利名称：全反式维甲酸在制备防治心肌重构药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药领域，涉及全反式维甲酸在制药领域中的新用途，具体涉及全反式维甲酸在制备防治心肌重构药物中的应用。
本发明经动物实验，结果表明，口服全反式维甲酸可显著降低心肌间质及心肌血管周围纤维化，证实全反式维甲酸具有抑制心肌间质及心肌血管周围纤维化的新用途。为了说明本发明的优点，本发明通过以下动物实验证明全反式维甲酸明显降低心肌间质及心肌血管周围纤维化的药理作用。
实验动物采用清洁级自发性高血压大鼠(spontaneuslyhypertensive rat，SHR)及WKY大鼠，购自中国科学院实验动物中心。实验材料采用全反式维甲酸，由上海第六制药厂生产。
按常规方法，将上述实验材料全反式维甲酸于植物油中制成混悬剂，植物油为东海粮油工业(张家港)有限公司生产的福临门牌大豆色拉油。SHR在清洁级实验室内饲养及实验。取33只5周龄的SHR及WKY大鼠，随机分为4组，各组动物间开始给药或对照溶剂前的体重均无统计学意义上的差异。4组动物的分组及给药方案如下WKY对照组植物油，1ml/kg体重/日SHR对照组植物油，1ml/kg体重/日SHRatRA1组全反式维甲酸5mg/kg体重/日(药物浓度为5mg/ml)SHRatRA2组全反式维甲酸10mg/kg体重/日(药物浓度为10mg/ml)大鼠分组后开始按上述方案以灌胃方式给药，每日1次。动物给药期间每天称一次体重，每周测一次血压，并根据体重确定当天的给药量，连续给药3个月。喂药期结束后，处死大鼠，立即取出其心脏和肾脏，经固定、脱水和石蜡包埋后，每隔0.3mm作0.3μm厚的连续切片(心脏的切片取与心脏长轴相垂直的方向，肾脏则作冠状切片)，HE(hematoxylin和eosin)染色以及胶原染色(用溶于水饱和的苦味酸中的天狼星红染色)，分离显示包括心脏和肾脏内小动脉的形态结构以及心肌间质和血管周围的胶原纤维。
显微镜下观察HE染色切片，用KS400成像系统(德国Zeiss)和Release3.0以及Image Measure软件摄取上述直径在50~200μm之间的圆形横切面小动脉图象，并分析每根入选小动脉的血管壁面积与管腔面积的比值(wall-area-to-lumen-area-ratio，WA/LA)，每张切片上入选3~5根小动脉，每个大鼠取了3个切面，计有约10根小动脉入选，取其平均值作为每个大鼠血管壁厚度的数据。心肌间质纤维化以胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)作为指标，CVF是以心肌切片中天狼星红所染色的区域面和与所有结缔组织与心肌细胞面积之和的比值；血管周围纤维化则以血管周围胶原面积与血管腔面积之比(perivascular collagen area/luminal area，PVCA/LA)作为指标。
肾脏的切片以HE染色，在显微镜下寻找直径在50~200μm之间的圆形横切面小动脉，用于观察心肌内小动脉同样的方法检测肾脏小动脉的肥厚情况，其数据以WA/LA表示。
各组动物的数据以平均值±标准误表示，组间的差异用单因素方差分析，p＜0.05为有统计学意义。
实验结果表明，口服全反式维甲酸3个月可使SHR大鼠中心肌内小动脉壁的肥厚、心肌间质及血管周围纤维化均显著降低。表1是全反式维甲酸治疗后WA/LA、CVF(％)以及PVCA/LA等指标的变化。表2是肾脏小动脉管壁厚度数据。
表1WKY对照组 SHR对照组 SHRatRA1组 SHRatRA2组(n＝6) (n＝12) (n＝9) (n＝11)WA/LA 0.4±0.04 1.01±0.09*0.79±0.08*，#0.79±0.05*，#CVF(％)2.4±0.2 3.3±0.2*2.5±0.1#2.7±0.1#PVCA/LA0.31±0.04 0.94±0.08*0.66±0.06*，#0.74±0.06*，#其中，数据以平均值±标准误表示；*与WKY对照组相比，p＜0.05；#与SHR对照组相比，p＜0.05。
表2WKY对照组 SHR对照组 SHRatRA1组SHRatRA2组(n＝6) (n＝12)(n＝9)(n＝11)WA/LA 1.76±0.24.49±0.45*2.78±0.32*，#2.73±0.23*，#其中，数据以平均值±标准误表示；*与WKY对照组相比，p＜0.01；#与SHR对照组相比，p＜0.01。
其中A为正常血管对照组，B显示SHR大鼠的小动脉壁明显肥厚，
C显示全反式维甲酸可明显减轻所述肥厚。
图2是WKY对照组(A1，A2)、SHR对照组(B1，B2)以及SHRatRA2组(C1，C2)心肌内血管周围及心肌间质胶原染色的照片。
其中，A1，A2为正常血管周围及间质纤维，B1，B2为SHR大鼠血管周围及间质纤维化，C1，C2为全反式维甲酸显著地抑制心肌和血管周围纤维化。
上述实验结果证明全反式维甲酸对高血压所引起的心脏病变具有以下治疗作用1)通过抑制心肌内小动脉管壁的肥厚可抑制因小动脉壁肥厚而导致的心肌内小动脉管腔狭窄以至心肌血流阻力增加、心肌血供不足而缺血。
2)通过抑制心肌内血管周围纤维化，可防止因血管周围胶原大量沉积而对血管产生的压迫作用，从而防止因血管周围纤维化而引起的血管腔狭窄和心肌血供不足。
3)通过抑制心肌间质和血管周围纤维化，可防止因纤维化而造成的心肌顺应性下降、心脏收缩、舒张功能障碍以及心肌耗氧量增加。
4)通过抑制肾脏内小动脉管壁的肥厚，可防止因肾脏小动脉壁肥厚而引起的肾小球血流量下降以及继发的肾小球滤过率下降和肾功能不全。
权利要求
1.全反式维甲酸在制备抑制血管壁肥厚药物中的用途。
2.全反式维甲酸在制备抑制心肌内血管周围纤维化和/或心肌间质纤维化药物中的用途。
3.全反式维甲酸在制备抑制肾脏内血管管壁肥厚药物中的用途。
4.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁肥厚引起的心肌血供不足药物中的用途。
5.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁周围纤维化引起的心肌血供不足药物中的用途。
6.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁周围和/或间质纤维化引起的心脏顺应性下降、心脏收缩和舒张功能障碍药物中的用途。
7.全反式维甲酸在制备防治心脏纤维化造成的心肌耗氧量增多药物中的用途。
8.全反式维甲酸在制备防治肾脏小血管壁肥厚引起的肾血管不足以及肾小球滤过功能障碍药物中的用途。
9.全反式维甲酸在制备治疗高血压引起的心脏和肾脏损害的药物中的用途。
全文摘要
本发明属医药领域，涉及全反式维甲酸在制药领域中的新用途，本发明经动物实验表明，具有抑制自发性高血压引起的心肌内小动脉壁肥厚、心肌血管周围及间质纤维化等病理变化的新用途和抑制肾脏内小动脉壁肥厚的作用。结果证明全反式维甲酸可以明显地减轻因自发性高血压而引起的心肌内管壁肥厚、心肌内血管周围及心肌间质纤维化，以及肾脏内动脉管壁的增生肥厚，可用于制备防治心肌重构和高血压引起的心脏及肾脏损害的药物。
文档编号A61P9/10GK1452958SQ0312887
公开日2003年11月5日 申请日期2003年5月26日 优先权日2003年5月26日
发明者朱依纯, 吕雪, 姚泰, 丁滢泂, 陈莹 申请人:复旦大学
技术领域：
本发明属医药领域，涉及全反式维甲酸在制药领域中的新用途，具体涉及全反式维甲酸在制备防治心肌重构药物中的应用。
本发明经动物实验，结果表明，口服全反式维甲酸可显著降低心肌间质及心肌血管周围纤维化，证实全反式维甲酸具有抑制心肌间质及心肌血管周围纤维化的新用途。为了说明本发明的优点，本发明通过以下动物实验证明全反式维甲酸明显降低心肌间质及心肌血管周围纤维化的药理作用。
实验动物采用清洁级自发性高血压大鼠(spontaneuslyhypertensive rat，SHR)及WKY大鼠，购自中国科学院实验动物中心。实验材料采用全反式维甲酸，由上海第六制药厂生产。
按常规方法，将上述实验材料全反式维甲酸于植物油中制成混悬剂，植物油为东海粮油工业(张家港)有限公司生产的福临门牌大豆色拉油。SHR在清洁级实验室内饲养及实验。取33只5周龄的SHR及WKY大鼠，随机分为4组，各组动物间开始给药或对照溶剂前的体重均无统计学意义上的差异。4组动物的分组及给药方案如下WKY对照组植物油，1ml/kg体重/日SHR对照组植物油，1ml/kg体重/日SHRatRA1组全反式维甲酸5mg/kg体重/日(药物浓度为5mg/ml)SHRatRA2组全反式维甲酸10mg/kg体重/日(药物浓度为10mg/ml)大鼠分组后开始按上述方案以灌胃方式给药，每日1次。动物给药期间每天称一次体重，每周测一次血压，并根据体重确定当天的给药量，连续给药3个月。喂药期结束后，处死大鼠，立即取出其心脏和肾脏，经固定、脱水和石蜡包埋后，每隔0.3mm作0.3μm厚的连续切片(心脏的切片取与心脏长轴相垂直的方向，肾脏则作冠状切片)，HE(hematoxylin和eosin)染色以及胶原染色(用溶于水饱和的苦味酸中的天狼星红染色)，分离显示包括心脏和肾脏内小动脉的形态结构以及心肌间质和血管周围的胶原纤维。
显微镜下观察HE染色切片，用KS400成像系统(德国Zeiss)和Release3.0以及Image Measure软件摄取上述直径在50~200μm之间的圆形横切面小动脉图象，并分析每根入选小动脉的血管壁面积与管腔面积的比值(wall-area-to-lumen-area-ratio，WA/LA)，每张切片上入选3~5根小动脉，每个大鼠取了3个切面，计有约10根小动脉入选，取其平均值作为每个大鼠血管壁厚度的数据。心肌间质纤维化以胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)作为指标，CVF是以心肌切片中天狼星红所染色的区域面和与所有结缔组织与心肌细胞面积之和的比值；血管周围纤维化则以血管周围胶原面积与血管腔面积之比(perivascular collagen area/luminal area，PVCA/LA)作为指标。
肾脏的切片以HE染色，在显微镜下寻找直径在50~200μm之间的圆形横切面小动脉，用于观察心肌内小动脉同样的方法检测肾脏小动脉的肥厚情况，其数据以WA/LA表示。
各组动物的数据以平均值±标准误表示，组间的差异用单因素方差分析，p＜0.05为有统计学意义。
实验结果表明，口服全反式维甲酸3个月可使SHR大鼠中心肌内小动脉壁的肥厚、心肌间质及血管周围纤维化均显著降低。表1是全反式维甲酸治疗后WA/LA、CVF(％)以及PVCA/LA等指标的变化。表2是肾脏小动脉管壁厚度数据。
表1WKY对照组 SHR对照组 SHRatRA1组 SHRatRA2组(n＝6) (n＝12) (n＝9) (n＝11)WA/LA 0.4±0.04 1.01±0.09*0.79±0.08*，#0.79±0.05*，#CVF(％)2.4±0.2 3.3±0.2*2.5±0.1#2.7±0.1#PVCA/LA0.31±0.04 0.94±0.08*0.66±0.06*，#0.74±0.06*，#其中，数据以平均值±标准误表示；*与WKY对照组相比，p＜0.05；#与SHR对照组相比，p＜0.05。
表2WKY对照组 SHR对照组 SHRatRA1组SHRatRA2组(n＝6) (n＝12)(n＝9)(n＝11)WA/LA 1.76±0.24.49±0.45*2.78±0.32*，#2.73±0.23*，#其中，数据以平均值±标准误表示；*与WKY对照组相比，p＜0.01；#与SHR对照组相比，p＜0.01。
其中A为正常血管对照组，B显示SHR大鼠的小动脉壁明显肥厚，
C显示全反式维甲酸可明显减轻所述肥厚。
图2是WKY对照组(A1，A2)、SHR对照组(B1，B2)以及SHRatRA2组(C1，C2)心肌内血管周围及心肌间质胶原染色的照片。
其中，A1，A2为正常血管周围及间质纤维，B1，B2为SHR大鼠血管周围及间质纤维化，C1，C2为全反式维甲酸显著地抑制心肌和血管周围纤维化。
上述实验结果证明全反式维甲酸对高血压所引起的心脏病变具有以下治疗作用1)通过抑制心肌内小动脉管壁的肥厚可抑制因小动脉壁肥厚而导致的心肌内小动脉管腔狭窄以至心肌血流阻力增加、心肌血供不足而缺血。
2)通过抑制心肌内血管周围纤维化，可防止因血管周围胶原大量沉积而对血管产生的压迫作用，从而防止因血管周围纤维化而引起的血管腔狭窄和心肌血供不足。
3)通过抑制心肌间质和血管周围纤维化，可防止因纤维化而造成的心肌顺应性下降、心脏收缩、舒张功能障碍以及心肌耗氧量增加。
4)通过抑制肾脏内小动脉管壁的肥厚，可防止因肾脏小动脉壁肥厚而引起的肾小球血流量下降以及继发的肾小球滤过率下降和肾功能不全。
权利要求
1.全反式维甲酸在制备抑制血管壁肥厚药物中的用途。
2.全反式维甲酸在制备抑制心肌内血管周围纤维化和/或心肌间质纤维化药物中的用途。
3.全反式维甲酸在制备抑制肾脏内血管管壁肥厚药物中的用途。
4.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁肥厚引起的心肌血供不足药物中的用途。
5.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁周围纤维化引起的心肌血供不足药物中的用途。
6.全反式维甲酸在制备防治心肌内血管壁周围和/或间质纤维化引起的心脏顺应性下降、心脏收缩和舒张功能障碍药物中的用途。
7.全反式维甲酸在制备防治心脏纤维化造成的心肌耗氧量增多药物中的用途。
8.全反式维甲酸在制备防治肾脏小血管壁肥厚引起的肾血管不足以及肾小球滤过功能障碍药物中的用途。
9.全反式维甲酸在制备治疗高血压引起的心脏和肾脏损害的药物中的用途。
全文摘要
本发明属医药领域，涉及全反式维甲酸在制药领域中的新用途，本发明经动物实验表明，具有抑制自发性高血压引起的心肌内小动脉壁肥厚、心肌血管周围及间质纤维化等病理变化的新用途和抑制肾脏内小动脉壁肥厚的作用。结果证明全反式维甲酸可以明显地减轻因自发性高血压而引起的心肌内管壁肥厚、心肌内血管周围及心肌间质纤维化，以及肾脏内动脉管壁的增生肥厚，可用于制备防治心肌重构和高血压引起的心脏及肾脏损害的药物。
文档编号A61P9/10GK1452958SQ0312887
公开日2003年11月5日 申请日期2003年5月26日 优先权日2003年5月26日
发明者朱依纯, 吕雪, 姚泰, 丁滢泂, 陈莹 申请人:复旦大学
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