一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂及其制备方法
专利名称：一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，具体地说是涉及用中草药为原料而制备的一种治疗小儿病毒性肺炎的复方制剂及制备方法。
背景技术：
小儿肺炎是儿科常见的疾病，世界卫生组织已将本病列为全球三种重要的儿科疾病之一，我国政府也将其列为儿科重点防治的四种疾病之一。据报道，目前城市医院儿科病区住院病例的1/4～1/2为肺炎患儿，而县级医院则占1/2以上。据世界卫生组织统计，全世界每年5岁以下儿童约400万死于肺炎，其中绝大多数是发展中国家儿童，有2/3是婴幼儿。在我国，每年约有30万左右5岁以下儿童死于肺炎，病死率占婴儿死亡原因的第一位，说明本病是目前严重危害儿童健康的疾病之一。因此，积极预防和治疗小儿肺炎，研究新的治疗方法，具有十分重要的意义。
目前，在我国小儿肺炎的致病因素中，病毒性感染约占50％左右。而现代医学用于治疗病毒感染的药物如利巴韦林等，疗效并不理想，近年来有报道使用干扰素(张兴全.小剂量干扰素治疗小儿病毒性肺炎.河南医药信息，2002；10(22)50)、三氮唑核苷(邱银萍，卞广波，马金海，等.干扰素、病毒唑、双黄连治疗小儿病毒性肺炎疗效观察.儿科药学杂志，1999；5(1)28～30)治疗小儿病毒性肺炎，取得较好的疗效，各种文献报道也很多。而这些研究大多缺乏病原学诊断依据和系统的实验研究资料，有些研究虽较为全面，但大多是对某种单一治法的研究总结，以辨证论治为主治疗小儿病毒性肺炎的有效疗法和方药尚缺乏系统深入的研究。目前临床上常用的中药如莪术油葡萄糖注射液(贾静伟，胡佳辉.莪术油葡萄糖注射液治疗小儿病毒性肺炎21例观察.黑龙江医药科学，1999；22(1)92、穿琥宁(怀有为，宋学枋，张公惠，等.比较穿琥宁利巴韦林治疗小儿病毒性肺炎的疗效.中国新药与临床杂志，1999；8(1)55～56)等，其作用机理主要是活血化瘀，促进肺部的血液循环，有利于炎症的吸收消散，但无明显的抗病毒等治疗作用；另外如扶正抗毒糖浆(朱莉娜，李秋英.扶正抗毒糖浆治疗小儿病毒性肺炎69例.北京中医药大学学报，1995；8(3)50～51)、清肺饮(陈玉琴，沈红霞.清肺饮治疗小儿病毒性肺炎263例临床观察.河南中医药学刊，2000；15(5)56～57)、苇茎五虎颗粒剂(熊继柏.苇茎五虎颗粒剂治疗病毒性肺炎的临床研究.吉林中医药，1995；(3)6)对病毒性肺炎的治疗作用虽有一些研究，但尚未形成新药和广泛应用于临床；而中药鱼腥草注射液等的治疗作用仅限于清热解毒。临床上中医中药治疗小儿病毒性肺炎还是以汤剂为主。我们经过几十年的临床观察研究，认为小儿病毒性肺炎的病因内因为正气虚弱，卫外不固；外因为外感风温邪毒。虽可分为多个证型，但我们统计了南京中医药大学第一附属医院儿科肺炎住院病例后表明，约80％属于痰热壅肺证，即痰热壅阻、肺气闭塞是本病的主要病机。因此，其主要治法应为清化痰热、宣肺开闭，同时根据本病的病因(风温邪毒)及在本病程中多兼有瘀血征象，应佐以解毒活血之法。由于小儿服用中药汤剂较为困难，所以尽快研制适合儿童特点的，治疗小儿病毒性肺炎的中成药剂，是儿科工作者面临的重要课题。
发明内容
1、发明目的本发明目的是采用宣肺开闭、清热化痰及解毒活血中药配伍、制剂，提供对病毒性肺炎患儿有明显的抗病毒、抗菌消炎、解痉止咳平喘、改善肺部血液循环，提高机体免疫力等作用的复方中药制剂。该药是一种不仅可用于病毒性肺炎痰热壅肺证患儿，亦可用于急性支气管炎痰热咳嗽证患儿的纯天然中药制剂。本发明的另一个目的是提供该药物的制备方法。
2、技术方案(1)清肺口服液原料药组成及重量配比一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂，其特征是由下列原料药和重量配比所组成麻黄(蜜炙)3～5g，苦杏仁8～12g，生石膏20～40g，葶苈子5～10g，桑白皮(蜜炙)8～12g，前胡8～12g，僵蚕(制)5～8g，丹参5～8g，虎杖10～15g，拳参10～15g。
若在患儿肺热证较重，痰瘀证象较轻的情况下，可在原料药中加黄芩6～10g，再加辅料甜菊糖、庶糖、山梨酸钾。即麻黄(蜜炙)3～5g，苦杏仁8～12g，生石膏20～40g，葶苈子5～10g，桑白皮(蜜炙)8～12g，前胡8～12g，虎杖10～15g，黄芩6～10g。
(2)方解方中麻黄，辛、温，发汗解表，宣肺平喘，《神农本草经》说“主中风伤寒头痛，温疟，发表出汗，去邪气，止咳逆上气，除寒热”，可谓解表平喘之要药；杏仁，苦、寒，止咳平喘，《本草纲目》说“杏仁能散能降，故解肌散风降气”，《证治秘诀》载“止咳嗽，消痰润肺”；石膏，甘寒、清热泻火，除烦止咳，《神农本草经》谓之主治“中风寒热，心下逆气惊喘，口干舌焦”，《名医别录》又补充了功能“解肌发汗”以及主治“时气头痛身热，三焦大热，皮肤热”。三药共用为主药，合之为著名古方《伤寒论》麻杏石甘汤之意。前胡，苦辛、微寒，功能降气化痰，宣散风热，《本草纲目》谓其“清肺热，化痰热，散风邪”。桑白皮，甘、寒，功能泻肺平喘，《药性论》谓“治肺气喘满”，《本草纲目》又提出“泻肺、降气、散血”。葶苈子，苦辛、寒，功能泻肺平喘，《开宝本草》谓其“疗肺壅上气咳嗽，定喘促，除胸中痰饮”。虎杖，苦寒，功能解毒，活血祛瘀，化痰止咳，《药性论》谓“治大热烦渴…压一切热毒”。前胡、桑白皮、葶苈子、虎杖合用为臣药，具有降气化痰，解毒活血之功。再加僵蚕化痰、丹参活血、拳参清肺止咳平喘，为佐使药。总之，清肺口服液是在传统处方麻杏石甘汤的基础上，精选方药，并针对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证的病机特点，加用开宣肺气、涤痰解毒活血之品，组成具有宣肺开闭，清热化痰，解毒活血作用的方剂。
我们采用宣肺开闭，清热化痰，解毒活血的新方法，根据小儿病毒性肺炎的特点辨证大多为痰热壅肺证，且兼有瘀血和热毒之证，故在宣肺化痰的基础上加重开宣肺气，佐以解毒活血的药物。一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取苦杏仁8～12g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将所述重量配比的麻黄(蜜炙)、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、僵蚕(制)、丹参、虎杖、拳参9味药与苦杏仁药渣合并，水煎二次，第一次加水5～10倍量，冷浸30～60分钟后，煎煮1～1.5小时，第二次加水8～10倍量，煎煮0.5～1小时，水煎二次后，二次药液合并，在60～80℃下浓缩至相对密度1.05～1.15，加乙醇至含醇量达60％～70％，静置沉淀24～36小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加水适量，煮沸，冷藏24～48小时，把药物提取液过滤备用；(3)取蔗糖6～8g，加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液、蔗糖溶液，加水调至90ml，灌装，流通蒸气灭菌30分钟而制成。
如果在原料药中还加入黄芩，再加辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾，则本发明的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)将所述重量配比的炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖8味药加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并后滤过，药液浓缩至1.0g/ml，选用分子量为10000的聚砜中空纤维膜组件以错流方式进行循环超滤，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65～70℃)至相对密度为1.05～1.08(50～60℃测)，放置冷却至40℃以下。
(2)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时。
(3)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时。
(4)滤过，滤液加入甜菊糖为1-2g、蔗糖5-15g、山梨酸钾0.1-0.3g，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液。
在制剂前通过正交试验选用乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
3、有益效果本发明清肺口服液与现有中药相比，具有显著的开宣肺气、涤痰解毒活血作用，对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证患儿有明显的抗病毒、抗菌消炎、解痉平喘，改善肺部血液循环，调节免疫功能等作用，动物实验也提示有明显的镇咳、解热、祛痰作用，对常见呼吸道病毒有明显的抑制作用。清肺口服液不仅适用于小儿病毒性肺炎急性期患儿，亦可用于小儿支气管炎证属痰热者。中成药剂更适合于小儿服用，且清肺口服液的制备工艺较为先进。
以下可以结合实施例和动物试验及临床试验进一步说明本发明的有益效果。
具体实施例方式
实施例1，清肺口服液原料药的组成及重量配比清肺口服液制剂原料药和重量配比的组成麻黄(蜜炙)3g，苦杏仁10g，生石膏20g，葶苈子5g，桑白皮(蜜炙)10g，前胡10g，僵蚕(制)5g，丹参5g，虎杖12g，拳参12g。
若患儿肺热证较重，痰瘀证象较轻，可在原料药中加黄芩6g，和辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾即得清肺口服液。
实施例2，清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)苦杏仁10g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将麻黄(蜜炙)3g，生石膏20g，葶苈子5g，桑白皮(蜜炙)10g，前胡10g，僵蚕(制)5g，丹参5g，虎杖12g，拳参12g等药合并苦杏仁药渣后用水煎煮，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并，80℃浓缩至相对密度1.10，加乙醇至含醇量达60％，静置沉淀36小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味加水适量，煮沸，冷藏48小时，把药物提取液过滤备用；(3)取蔗糖7g加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、炙麻黄等药物提取液和蔗糖溶液，加水调至90ml，灌装，在流通蒸气下灭菌30分钟而制成。
如果在原料药中加入黄芩6g和辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾则本发明清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并后滤过，药液浓缩至1.0g/ml，选用分子量为10000的聚砜中空纤维膜组件以错流方式进行循环超滤，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65℃)至相对密度1.05(50℃测)，放冷至38℃；(2)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时；(3)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时；(4)滤过，滤液加入甜菊糖1.5g、蔗糖10g、山梨酸钾0.2g，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液；在制剂前通过正交试验选用了乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
实施例3，药效学动物实验(一)清肺口服液止咳实验研究1、材料1.1器材 铁架台、螺旋夹、水检压计、氨水容器(500ml广口瓶)、动物容器、废酸容器、电动吸引器、带孔塑料管、恒温水浴。
1.2试剂 12.5％-25％的氨水200ml(江苏宝应化学试剂厂生产，批号970615)1.3受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成浓度为100％的口服液90ml。(由南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)，磷酸可待因15mg/片(用注射用水溶解成2mg/ml)1.4动物 昆明种小鼠(体重18-22g，雌雄各半。由南京中医药大学实验动物中心提供)。
2、实验方法与结果2.1将小鼠48只，按体重随机分为4组，每组12只。第一组为空白对照组，第二组为清肺口服液低剂量组(20g/Kg bw)，第三组为清肺口服液高剂量组(40g/Kg bw)第四组为磷酸可待因组(30mg/Kg bw)。
2.2第一组给生理盐水，第二组、第三组分别给清肺口服液低、高剂量，前三组采取灌胃给药，第四组腹腔注射可待因，灌胃给药后1小时，腹腔注射后半小时，开始接受气雾刺激。
2.3将待测小鼠放入小鼠固定器内，置于动物容器中开动吸引器，使小鼠接受氨水刺激至预定时间，关闭吸引器，立即取出小鼠，观察1分钟内咳嗽次数(出现3次以上典型咳嗽动作算作咳嗽)。
2.4按统计学上下法求半数有效的原理，改变每只小鼠接受喷雾的时间，观察咳嗽出现与否并记录之。
2.5实验结果见下表表1 清肺口服液对小鼠的止咳作用组别 剂量(g/Kg bw)动物数 给药途径 EDT50 R值空白 对照组 20ml12 ig 18.84s清肺低剂量组 20 12 ig 25.12s133.3％清肺高剂量组 40 12 ig 27.12s143.9％磷酸可待因组 0.0312 ip 36.87s196％从表1可以看出，用药组与生理盐水组比较其R值大于130％，说明清肺口服液具有止咳作用。清肺口服液高剂量组与低剂量组相比，由氨水引起小鼠咳嗽的时间有所延长，但与可特因组比较，用药组由氨水引起小鼠咳嗽的时间比可待因组要短。由此可见，清肺口服液不仅有止咳效果，而且还存在一定的量效关系。
(二)清肺口服液解热实验研究1、材料1.1器材 体温计、三角烧瓶、试管、滴管、注射器、五号注射针头、人导尿管。
1.2试剂 大肠杆菌内毒素(O111B4)(上海生物制品所生产，批号970615)。
1.3受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成浓度为100％的口服液90ml(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)，生理盐水。
1.4动物 家兔(体重1.5～2.5Kg，雌雄不限，健康无病。由南京中医药大学实验动物中心提供)。
2、实验方法与结果2.1对所选择的家兔每日测体温1～2次，连续3天以上，使家兔适应测体温操作，选择体温范围在38.6～39.5℃，高低波动在0.3℃以内者，随机分配于实验各组，每组5只，共5组。
2.2将所选择家兔按基础体温分层随机分为5组，第一组为空白对照组，第二组为清肺低剂量组(12.5g/Kg bw)，第三组为清肺中剂量组(25g/Kg bw)，第四组为清肺高剂量组(50g/Kg.bw)，第五组为阿斯匹林组(100mg/Kg bw)。
2.3内毒素溶液的配制 取定量内毒素标准管一支，用注射用生理盐水稀释成若干个发热剂量浓度，本实验用5ug/ml。
2.4第二、三、四组分别用人导尿管向兔胃内灌入清肺口服液12.5g/Kg bw、25g/Kg bw、50g/Kg bw，第一组给同体积生理盐水，第五组灌胃阿斯匹林100mg/Kg bw。于给药后1小时每兔均从耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素1ml/Kg。于内毒素攻击后1.2.3.4.5.6小时各测体温一次，计算各测定时间体温的变化，以此为纵坐标，以时间为横坐标，以各测定点体温变化作综合统计制定温度变化曲线(每只兔的体温测定点和体温变化值见下表)。所得结果如下表表2每只兔的体温测定和体温变化值组别 各兔基础体温(℃) 平均体温上升值(Δ℃)各组兔标号 时间(小时)1 2 3 45 12 3456空白对照39.1 38.9 38.9 39 39.2 0.9 0.95 1.1 1.2 1.1 0.9清肺低 39.2 3938.9 39 38.9 0.85 0.9 1.05 1.1 0.8 0.6清肺中 38.8 38.7 38.6 38.7 38.9 0.8 0.85 0.9 0.95 0.75 0.55清肺高 38.9 38.8 38.9 38.7 38.8 0.9 0.95 11.05 0.9 0.7阿斯匹林38.6 38.8 38.9 38.7 38.8 0.65 0.8 0.9 0.85 0.65 0.55从表2可以看出，静注内毒素后家兔体温开始上升，至第4小时左右体温升高达到高峰，此后逐渐下降，本实验中生理盐水组体温曲线呈内毒素发热之热型，清肺口服液低剂量组和清肺口服液高剂量组其体温变化不如清肺口服液中剂量组和阿斯匹林组明显。而清肺口服液中剂量组比阿斯匹林组稍差。清肺口服液有一定的解热作用。
(三)清肺口服液化痰实验研究1.材料1.1动物 成年昆明种小鼠(体重18～22g，由南京中医药大学实验动物中心提供)。
1.2仪器 722分光光度计(上海第三分析仪器厂生产)，普通手术器械一套。
1.3试剂 酚红溶液5g/ml(溶于生理盐水中)(市售)，生理盐水(取自南京中医药大学第一附属医院药房)，氢氧化钠1mol/L(市售)，氯化铵(市售)。
1.4受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成为100％的口服液90ml。
(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)。
2.方法与结果2.1小鼠按体重随机均分为四组，每组10只。第一组灌服同体积生理盐水，第二组灌服清肺口服液20g/Kg bw，第三组灌服清肺口服液40g/Kg bw，第四组灌服氯化铵1g/Kg bw。
2.2灌胃给药后半小时，腹腔注射酚红0.1ml(5mg)/10g bw，注射酚红后半小时处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处气管，放入装有2ml生理盐水的试管中，再加0.1ml氢氧化钠，用722分光光度计波长为546nm测OD值，用酚红作一标准曲线，根据曲线计算酚红含量，与对照组比较，所得结果如下表表3清肺口服液对小鼠气管段酚红排泌量的影响组别剂量(g/kg bw) 动物数给药途径酚红排泌量(ug/ml)空白对照20ml10 ig 0.176±0.026清肺低 20 10 ig 0.766±0.014清肺高 40 10 ig 1.209±0.056氯化铵 1 10 ig 1.093±0.037通过以上结果可以看出清肺口服液低剂量、高剂量组与生理盐水组比较，其酚红排泌量均明显高于生理盐水组，作t检验，P＜0.05，说明有显著性差异，而与氯化铵组比较无显著性差异P＞0.05，证明清肺口服液有增加气管段酚红排泌量，促进排痰的作用。实施例4，对免疫功能的影响研究(一)诱生白细胞介素-2作用的研究1.1主要材料1.1.1受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)。每剂制成浓度为100％的口服液90ml，(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)。
1.1.2细胞因子及依赖性细胞株 rIL-2、CTLL-2(由南京军事医学研究所提供)。
1.1.3试剂 PHA，MTT(美国FCAG公司产品)、二甲基亚砜、淋巴细胞分离液。
1.1.4方法与结果取新鲜血白细胞2个单位，加入淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，用培养液调细胞至2×106个/ml。MTT比色分析法检测IL-2的活性单位，采用二甲基亚砜溶解甲月替，IL-2活性单位计算参考Gillis介绍的方法。
不同剂量清肺口服液协同PHA诱生和单独诱生IL-2的观察将清肺口服液用加入含6％AB血清的1640液稀释成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml 5个不同浓度(下同)，PHA的终浓度为0.2mg/ml。
取24孔培养板，加入调好浓度的淋巴细胞悬液及不同浓度的清肺口服液和PHA，另一培养板加入不同浓度清肺口服液及PHA的混合液，混匀后置37℃5％CO2培养箱内培养48小时，收集上清液，分别检测IL-2的活性单位。结果见下表表4 清肺口服液诱生IL-2的作用受试药物 清肺口服液 清肺口服液+PHA PHA浓度(mg/ml) 0.625 1.25 2.5 5100.625 1.25 2.5 510 0.2IL-2含量(IU/L) 0.236 1.76 1.54 2.76 4.69 8.59.7 64.6 95.9 17.4 30.95从表4可以看出不同剂量清肺口服液协同PHA诱生IL-2的结果，尤以2.5mg/ml～5mg/ml浓度协同PHA诱生IL-2的效价最高。且比PHA单独诱生的IL-2含量30.95IU/L要高。不同剂量清肺口服液单独诱生IL-2的结果，尤以5mg/ml浓度诱生IL-2的效价为高。总体来说清肺口服液单独诱生IL-2是有作用的，但所诱生IL-2的效价明显低于与PHA协同诱生者。(二)诱生干扰素作用的研究2.1主要材料2.1.1细胞与病毒 小鼠成纤维(L929)细胞、新城鸡瘟病毒(NDV，血凝效价1280u/ml)口腔炎病毒(VSV，TCID30为10-6)(由南京医科大学提供)2.1.2培养液 细胞培养液90％RPM-1640液含10％小牛血清加多抗，细胞维持液95％RPM-1640液含5％小牛血清加多抗。2.1.3动物ICR小鼠(由南京中医药大学实验动物中心提供)2.2方法与结果2.2.1测定方法 采用微量细胞病变抑制法。2.2.2清肺口服液在小鼠体内诱生干扰素的作用与干扰素的型别取ICR小鼠18只，随机分为3组，每组6只，分别腹腔注射清肺口服液(2g/ml)、NDV和生理盐水各0.5ml。24小时后无菌取血，分离血清后检测干扰素效价，结果见表5。表5 清肺口服液诱在小鼠体内诱生干扰素的作用组别 例数剂量 干扰素效价(log4u/ml)清肺口服液6 0.5 3.50NDV 6 0.5 7.35生理盐水 6 0.5 1.67将腹腔注射24小时后所取的小鼠血清分别用胰酶(Trypsin 0.25mg/ml)或56℃水浴作用1小时，或pH2.0、4℃处理24小时后再测定其效价，结果见表6。
表6清肺口服液诱生干扰素的型别Treatment IFNtiter(log2u/ml)Nnne 7.0Trypsin1hr3.456℃Water 1hr4.7pH2.0 4℃ 24hr 4.4从表5可以看出清肺口服液诱生干扰素的效价为3.50log4u/ml，而生理盐水组诱生效价为1.67log4u/ml，两组相比，有显著差异(P＜0.05)，说明清肺口服液有诱生干扰素的作用，但清肺口服液诱生的干扰素效价与NDV诱生的相比则较低，说明清肺口服液诱生干扰素的能力较NDV弱。从表6可以看出清肺口服液诱生的干扰素经胰酶作用1小时后其效价明显下降，而经56℃水浴作用1小时或pH2.0 4℃作用24小时后其效价也下降明显，表明清肺口服液诱生的干扰素对56℃水浴和pH2.0作用敏感，说明符合γ-干扰素(INF-γ)的性质。实施例5，临床研究及研究结果我们在南京中医药大学第一附属医院、常州市中医院、盐城市中医院进行了相关的临床病例观察。我们用清肺口服液(4～12个月每次20ml，1+～3岁每次30ml，3+～6岁每次40ml，均1日3次，口服)治疗小儿病毒性肺炎痰热壅肺证104例，同时用利巴韦林注射液(按每日10mg/kg，加入10％葡萄糖液体中，静脉滴注，1日1次)作对照(共观察了43例)，进行临床对照试验研究，10天为1个疗程。结果表明，总疗效比较试验组104例中，痊愈83例，显效13例，有效6例，无效2例，痊愈显效率为92.3％；对照组43例中，痊愈26例，显效7例，有效6例，无效4例。痊愈显效率为76.7％。试验组疗效明显优于对照组(P＜0.05)。试验组在体温恢复正常时间、气喘消失例数和消失时间、肺部罗音消失例数方面均明显优于对照组。试验组104例在治疗期间均未发现患儿有任何不良反应，治疗后复查血常规、尿常规、大便常规、心电图、肝肾功能均未见异常改变。
清肺口服液临床试验典型病例例1 张××，男，8月。1998年6月16日就诊。因咳嗽发热2天收住入院。住院号94308。入院时患儿发热，时高时低，咳嗽较剧，阵咳，喉有痰鸣，痰稠难咯，稍有气喘，唇甲不绀，无呕吐，口渴不显，小便色黄，大便正常，食欲欠振，舌质红，苔薄黄，指纹紫滞，位于风关。查体T38.3℃，P130次/分，R35次/分，咽充血，听诊；两肺可闻及哮鸣音和中小水泡音。查血白分WBC12.6×109/L，N0.26，L0.60，M0.14。CRP＜10mg/L。咽拭子培养(-)，呼吸道病毒检测呼吸道合胞病毒阳性。全胸片右下肺斑点状阴影。诊断病毒性肺炎。辨证痰热壅肺证。入院后即给予清肺口服液20ml/次，口服，每日3次。经治疗2天后发热退，气喘消失，5天后咳嗽减轻，9天后喉中痰鸣消失，11天后咳嗽咯痰消失。肺部听诊11天后罗音消失，复查血白分WBC8.7×109/L，L0.62，N0.33，M0.05。全胸片肺部病灶已吸收，痊愈出院。
例2陈××，男，2岁。1998年3月8日就诊。因发热咳嗽气喘2天收住入院。住院号90891。入院时患儿发热、咳嗽阵作，其咳较剧，喉中痰鸣，气喘鼻煽明显，唇甲不绀，不吐，大便调，小便色黄，胃纳欠振，舌质红，苔黄腻，指纹紫滞，见于风关。查体T 39.5℃，P 120次/分，R 40次/分，咽充血，听诊两肺可闻及干罗音和中小水泡音。实验室检查血白分WBC4.7×109/L，N0.29，L0.65，M0.06。尿常规(-)。大便常规(-)。CRP＜10mg/L。全胸片示两下肺纹理增多，见斑点状阴影。咽拭子培养(-)，呼吸道病毒检测腺病毒3、7型。诊断病毒性肺炎。辨证痰热壅肺证。入院后即予以清肺口服液30ml/次，每日3次口服。治疗2天后发热退，3天后气喘紫绀消失，4天后咳嗽痰鸣减轻、8天后消失，肺部罗音在治疗6天后消失，继续服清肺口服液治疗9天后所有症状全部消失。复查全胸片示；两肺纹理稍多，病灶已吸收。血白分WBC8.4×109/L，N0.21，L0.75，M0.04。共住院9天痊愈出院。
权利要求
1.一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液，其特征在于它是由下列重量配比的原料药制成麻黄(蜜炙)3～5g、苦杏仁8～12g、生石膏20-40g、葶苈子5～10g、桑白皮(蜜炙)8～12g、前胡8～12g、僵蚕(制)5～8g、丹参5～8g、虎杖10～15g、拳参10～15g。
2.根据权利要求1所述的清肺口服液制剂，其特征在于还加有辅料蔗糖6～8g。
3.一种制备权利要求1清肺口服液的方法，其制备步骤为(1)秤取苦杏仁8～12g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将所述重量配比的炙麻黄、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖9味药与苦杏仁药渣合并后水煎二次，二次药液合并后，进行浓缩，加乙醇后，静置沉淀，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加水适量，煮沸后冷藏，将提取液过滤后备用；(3)取蔗糖6～8g加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液和蔗糖溶液，加水调至90ml，分装，在流通蒸气下灭菌30分钟而制得口服液。
4.根据权利要求3所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在步骤(2)水煎二次，第一次加水5-10倍量，冷浸30～60分钟后，煎煮1～1.5小时，第二次加水8-10倍量，煎煮0.5～1小时，二次药液合并后在60～80℃下浓缩至相对密度1.02-1.15，加乙醇至含醇量达60～70％，沉淀24～36小时，煮沸后冷藏时间为24～48小时。
5.根据权利要求1所述的清肺口服液制剂，其特征是在原料药中还可加黄芩6～10g，再加辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾。
6.根据权利要求5所述的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取炙麻黄、生石膏、杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖，加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时；(2)将两次煎液合并后滤过，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65～70℃)至相对密度为1.05～1.08(50～60℃测)，放冷至40℃以下；(3)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时；(4)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时；(5)滤过，滤液加入甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液。
7.根据权利要求6所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在步骤(5)中加入的甜菊糖为1-2g、蔗糖5-15g、山梨酸钾0.1-0.3g。
8.根据权利要求6所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在制剂前通过正交试验选用了乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
全文摘要
本发明公开了一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂，它是由炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、桑白皮、前胡、僵蚕、丹参、虎杖、拳参等中草药组成，其制备方法是苦杏仁碾碎后蒸馏，收取蒸馏液，余药合并苦杏仁渣，水煎二次后浓缩加乙醇静置沉淀，滤取上清，回收乙醇后加水适量，煮沸，过滤备用，蔗糖溶液合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液，加水调至90ml，分装，灭菌而成。该方具有宣肺开闭，清热化痰、解毒活血的作用。对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证有明显的疗效。实验表明本方具有解热、镇咳、化痰、抗病毒、减轻病毒性肺炎肺部病变，调节机体免疫功能(如诱生白细胞介素－2、γ干扰素)等作用，是治疗小儿病毒性肺炎痰热壅肺证有效的药物。
文档编号A61P33/00GK1456341SQ0313164
公开日2003年11月19日 申请日期2003年6月3日 优先权日2003年6月3日
发明者汪受传, 韩新民, 李江全, 任现志, 达庆国, 郭立玮, 刘陶世 申请人:南京中医药大学
技术领域：
本发明涉及中药领域，具体地说是涉及用中草药为原料而制备的一种治疗小儿病毒性肺炎的复方制剂及制备方法。
背景技术：
小儿肺炎是儿科常见的疾病，世界卫生组织已将本病列为全球三种重要的儿科疾病之一，我国政府也将其列为儿科重点防治的四种疾病之一。据报道，目前城市医院儿科病区住院病例的1/4～1/2为肺炎患儿，而县级医院则占1/2以上。据世界卫生组织统计，全世界每年5岁以下儿童约400万死于肺炎，其中绝大多数是发展中国家儿童，有2/3是婴幼儿。在我国，每年约有30万左右5岁以下儿童死于肺炎，病死率占婴儿死亡原因的第一位，说明本病是目前严重危害儿童健康的疾病之一。因此，积极预防和治疗小儿肺炎，研究新的治疗方法，具有十分重要的意义。
目前，在我国小儿肺炎的致病因素中，病毒性感染约占50％左右。而现代医学用于治疗病毒感染的药物如利巴韦林等，疗效并不理想，近年来有报道使用干扰素(张兴全.小剂量干扰素治疗小儿病毒性肺炎.河南医药信息，2002；10(22)50)、三氮唑核苷(邱银萍，卞广波，马金海，等.干扰素、病毒唑、双黄连治疗小儿病毒性肺炎疗效观察.儿科药学杂志，1999；5(1)28～30)治疗小儿病毒性肺炎，取得较好的疗效，各种文献报道也很多。而这些研究大多缺乏病原学诊断依据和系统的实验研究资料，有些研究虽较为全面，但大多是对某种单一治法的研究总结，以辨证论治为主治疗小儿病毒性肺炎的有效疗法和方药尚缺乏系统深入的研究。目前临床上常用的中药如莪术油葡萄糖注射液(贾静伟，胡佳辉.莪术油葡萄糖注射液治疗小儿病毒性肺炎21例观察.黑龙江医药科学，1999；22(1)92、穿琥宁(怀有为，宋学枋，张公惠，等.比较穿琥宁利巴韦林治疗小儿病毒性肺炎的疗效.中国新药与临床杂志，1999；8(1)55～56)等，其作用机理主要是活血化瘀，促进肺部的血液循环，有利于炎症的吸收消散，但无明显的抗病毒等治疗作用；另外如扶正抗毒糖浆(朱莉娜，李秋英.扶正抗毒糖浆治疗小儿病毒性肺炎69例.北京中医药大学学报，1995；8(3)50～51)、清肺饮(陈玉琴，沈红霞.清肺饮治疗小儿病毒性肺炎263例临床观察.河南中医药学刊，2000；15(5)56～57)、苇茎五虎颗粒剂(熊继柏.苇茎五虎颗粒剂治疗病毒性肺炎的临床研究.吉林中医药，1995；(3)6)对病毒性肺炎的治疗作用虽有一些研究，但尚未形成新药和广泛应用于临床；而中药鱼腥草注射液等的治疗作用仅限于清热解毒。临床上中医中药治疗小儿病毒性肺炎还是以汤剂为主。我们经过几十年的临床观察研究，认为小儿病毒性肺炎的病因内因为正气虚弱，卫外不固；外因为外感风温邪毒。虽可分为多个证型，但我们统计了南京中医药大学第一附属医院儿科肺炎住院病例后表明，约80％属于痰热壅肺证，即痰热壅阻、肺气闭塞是本病的主要病机。因此，其主要治法应为清化痰热、宣肺开闭，同时根据本病的病因(风温邪毒)及在本病程中多兼有瘀血征象，应佐以解毒活血之法。由于小儿服用中药汤剂较为困难，所以尽快研制适合儿童特点的，治疗小儿病毒性肺炎的中成药剂，是儿科工作者面临的重要课题。
发明内容
1、发明目的本发明目的是采用宣肺开闭、清热化痰及解毒活血中药配伍、制剂，提供对病毒性肺炎患儿有明显的抗病毒、抗菌消炎、解痉止咳平喘、改善肺部血液循环，提高机体免疫力等作用的复方中药制剂。该药是一种不仅可用于病毒性肺炎痰热壅肺证患儿，亦可用于急性支气管炎痰热咳嗽证患儿的纯天然中药制剂。本发明的另一个目的是提供该药物的制备方法。
2、技术方案(1)清肺口服液原料药组成及重量配比一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂，其特征是由下列原料药和重量配比所组成麻黄(蜜炙)3～5g，苦杏仁8～12g，生石膏20～40g，葶苈子5～10g，桑白皮(蜜炙)8～12g，前胡8～12g，僵蚕(制)5～8g，丹参5～8g，虎杖10～15g，拳参10～15g。
若在患儿肺热证较重，痰瘀证象较轻的情况下，可在原料药中加黄芩6～10g，再加辅料甜菊糖、庶糖、山梨酸钾。即麻黄(蜜炙)3～5g，苦杏仁8～12g，生石膏20～40g，葶苈子5～10g，桑白皮(蜜炙)8～12g，前胡8～12g，虎杖10～15g，黄芩6～10g。
(2)方解方中麻黄，辛、温，发汗解表，宣肺平喘，《神农本草经》说“主中风伤寒头痛，温疟，发表出汗，去邪气，止咳逆上气，除寒热”，可谓解表平喘之要药；杏仁，苦、寒，止咳平喘，《本草纲目》说“杏仁能散能降，故解肌散风降气”，《证治秘诀》载“止咳嗽，消痰润肺”；石膏，甘寒、清热泻火，除烦止咳，《神农本草经》谓之主治“中风寒热，心下逆气惊喘，口干舌焦”，《名医别录》又补充了功能“解肌发汗”以及主治“时气头痛身热，三焦大热，皮肤热”。三药共用为主药，合之为著名古方《伤寒论》麻杏石甘汤之意。前胡，苦辛、微寒，功能降气化痰，宣散风热，《本草纲目》谓其“清肺热，化痰热，散风邪”。桑白皮，甘、寒，功能泻肺平喘，《药性论》谓“治肺气喘满”，《本草纲目》又提出“泻肺、降气、散血”。葶苈子，苦辛、寒，功能泻肺平喘，《开宝本草》谓其“疗肺壅上气咳嗽，定喘促，除胸中痰饮”。虎杖，苦寒，功能解毒，活血祛瘀，化痰止咳，《药性论》谓“治大热烦渴…压一切热毒”。前胡、桑白皮、葶苈子、虎杖合用为臣药，具有降气化痰，解毒活血之功。再加僵蚕化痰、丹参活血、拳参清肺止咳平喘，为佐使药。总之，清肺口服液是在传统处方麻杏石甘汤的基础上，精选方药，并针对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证的病机特点，加用开宣肺气、涤痰解毒活血之品，组成具有宣肺开闭，清热化痰，解毒活血作用的方剂。
我们采用宣肺开闭，清热化痰，解毒活血的新方法，根据小儿病毒性肺炎的特点辨证大多为痰热壅肺证，且兼有瘀血和热毒之证，故在宣肺化痰的基础上加重开宣肺气，佐以解毒活血的药物。一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取苦杏仁8～12g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将所述重量配比的麻黄(蜜炙)、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、僵蚕(制)、丹参、虎杖、拳参9味药与苦杏仁药渣合并，水煎二次，第一次加水5～10倍量，冷浸30～60分钟后，煎煮1～1.5小时，第二次加水8～10倍量，煎煮0.5～1小时，水煎二次后，二次药液合并，在60～80℃下浓缩至相对密度1.05～1.15，加乙醇至含醇量达60％～70％，静置沉淀24～36小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加水适量，煮沸，冷藏24～48小时，把药物提取液过滤备用；(3)取蔗糖6～8g，加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液、蔗糖溶液，加水调至90ml，灌装，流通蒸气灭菌30分钟而制成。
如果在原料药中还加入黄芩，再加辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾，则本发明的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)将所述重量配比的炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖8味药加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并后滤过，药液浓缩至1.0g/ml，选用分子量为10000的聚砜中空纤维膜组件以错流方式进行循环超滤，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65～70℃)至相对密度为1.05～1.08(50～60℃测)，放置冷却至40℃以下。
(2)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时。
(3)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时。
(4)滤过，滤液加入甜菊糖为1-2g、蔗糖5-15g、山梨酸钾0.1-0.3g，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液。
在制剂前通过正交试验选用乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
3、有益效果本发明清肺口服液与现有中药相比，具有显著的开宣肺气、涤痰解毒活血作用，对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证患儿有明显的抗病毒、抗菌消炎、解痉平喘，改善肺部血液循环，调节免疫功能等作用，动物实验也提示有明显的镇咳、解热、祛痰作用，对常见呼吸道病毒有明显的抑制作用。清肺口服液不仅适用于小儿病毒性肺炎急性期患儿，亦可用于小儿支气管炎证属痰热者。中成药剂更适合于小儿服用，且清肺口服液的制备工艺较为先进。
以下可以结合实施例和动物试验及临床试验进一步说明本发明的有益效果。
具体实施例方式
实施例1，清肺口服液原料药的组成及重量配比清肺口服液制剂原料药和重量配比的组成麻黄(蜜炙)3g，苦杏仁10g，生石膏20g，葶苈子5g，桑白皮(蜜炙)10g，前胡10g，僵蚕(制)5g，丹参5g，虎杖12g，拳参12g。
若患儿肺热证较重，痰瘀证象较轻，可在原料药中加黄芩6g，和辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾即得清肺口服液。
实施例2，清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)苦杏仁10g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将麻黄(蜜炙)3g，生石膏20g，葶苈子5g，桑白皮(蜜炙)10g，前胡10g，僵蚕(制)5g，丹参5g，虎杖12g，拳参12g等药合并苦杏仁药渣后用水煎煮，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并，80℃浓缩至相对密度1.10，加乙醇至含醇量达60％，静置沉淀36小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味加水适量，煮沸，冷藏48小时，把药物提取液过滤备用；(3)取蔗糖7g加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、炙麻黄等药物提取液和蔗糖溶液，加水调至90ml，灌装，在流通蒸气下灭菌30分钟而制成。
如果在原料药中加入黄芩6g和辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾则本发明清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时，二次药液合并后滤过，药液浓缩至1.0g/ml，选用分子量为10000的聚砜中空纤维膜组件以错流方式进行循环超滤，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65℃)至相对密度1.05(50℃测)，放冷至38℃；(2)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时；(3)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时；(4)滤过，滤液加入甜菊糖1.5g、蔗糖10g、山梨酸钾0.2g，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液；在制剂前通过正交试验选用了乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
实施例3，药效学动物实验(一)清肺口服液止咳实验研究1、材料1.1器材 铁架台、螺旋夹、水检压计、氨水容器(500ml广口瓶)、动物容器、废酸容器、电动吸引器、带孔塑料管、恒温水浴。
1.2试剂 12.5％-25％的氨水200ml(江苏宝应化学试剂厂生产，批号970615)1.3受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成浓度为100％的口服液90ml。(由南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)，磷酸可待因15mg/片(用注射用水溶解成2mg/ml)1.4动物 昆明种小鼠(体重18-22g，雌雄各半。由南京中医药大学实验动物中心提供)。
2、实验方法与结果2.1将小鼠48只，按体重随机分为4组，每组12只。第一组为空白对照组，第二组为清肺口服液低剂量组(20g/Kg bw)，第三组为清肺口服液高剂量组(40g/Kg bw)第四组为磷酸可待因组(30mg/Kg bw)。
2.2第一组给生理盐水，第二组、第三组分别给清肺口服液低、高剂量，前三组采取灌胃给药，第四组腹腔注射可待因，灌胃给药后1小时，腹腔注射后半小时，开始接受气雾刺激。
2.3将待测小鼠放入小鼠固定器内，置于动物容器中开动吸引器，使小鼠接受氨水刺激至预定时间，关闭吸引器，立即取出小鼠，观察1分钟内咳嗽次数(出现3次以上典型咳嗽动作算作咳嗽)。
2.4按统计学上下法求半数有效的原理，改变每只小鼠接受喷雾的时间，观察咳嗽出现与否并记录之。
2.5实验结果见下表表1 清肺口服液对小鼠的止咳作用组别 剂量(g/Kg bw)动物数 给药途径 EDT50 R值空白 对照组 20ml12 ig 18.84s清肺低剂量组 20 12 ig 25.12s133.3％清肺高剂量组 40 12 ig 27.12s143.9％磷酸可待因组 0.0312 ip 36.87s196％从表1可以看出，用药组与生理盐水组比较其R值大于130％，说明清肺口服液具有止咳作用。清肺口服液高剂量组与低剂量组相比，由氨水引起小鼠咳嗽的时间有所延长，但与可特因组比较，用药组由氨水引起小鼠咳嗽的时间比可待因组要短。由此可见，清肺口服液不仅有止咳效果，而且还存在一定的量效关系。
(二)清肺口服液解热实验研究1、材料1.1器材 体温计、三角烧瓶、试管、滴管、注射器、五号注射针头、人导尿管。
1.2试剂 大肠杆菌内毒素(O111B4)(上海生物制品所生产，批号970615)。
1.3受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成浓度为100％的口服液90ml(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)，生理盐水。
1.4动物 家兔(体重1.5～2.5Kg，雌雄不限，健康无病。由南京中医药大学实验动物中心提供)。
2、实验方法与结果2.1对所选择的家兔每日测体温1～2次，连续3天以上，使家兔适应测体温操作，选择体温范围在38.6～39.5℃，高低波动在0.3℃以内者，随机分配于实验各组，每组5只，共5组。
2.2将所选择家兔按基础体温分层随机分为5组，第一组为空白对照组，第二组为清肺低剂量组(12.5g/Kg bw)，第三组为清肺中剂量组(25g/Kg bw)，第四组为清肺高剂量组(50g/Kg.bw)，第五组为阿斯匹林组(100mg/Kg bw)。
2.3内毒素溶液的配制 取定量内毒素标准管一支，用注射用生理盐水稀释成若干个发热剂量浓度，本实验用5ug/ml。
2.4第二、三、四组分别用人导尿管向兔胃内灌入清肺口服液12.5g/Kg bw、25g/Kg bw、50g/Kg bw，第一组给同体积生理盐水，第五组灌胃阿斯匹林100mg/Kg bw。于给药后1小时每兔均从耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素1ml/Kg。于内毒素攻击后1.2.3.4.5.6小时各测体温一次，计算各测定时间体温的变化，以此为纵坐标，以时间为横坐标，以各测定点体温变化作综合统计制定温度变化曲线(每只兔的体温测定点和体温变化值见下表)。所得结果如下表表2每只兔的体温测定和体温变化值组别 各兔基础体温(℃) 平均体温上升值(Δ℃)各组兔标号 时间(小时)1 2 3 45 12 3456空白对照39.1 38.9 38.9 39 39.2 0.9 0.95 1.1 1.2 1.1 0.9清肺低 39.2 3938.9 39 38.9 0.85 0.9 1.05 1.1 0.8 0.6清肺中 38.8 38.7 38.6 38.7 38.9 0.8 0.85 0.9 0.95 0.75 0.55清肺高 38.9 38.8 38.9 38.7 38.8 0.9 0.95 11.05 0.9 0.7阿斯匹林38.6 38.8 38.9 38.7 38.8 0.65 0.8 0.9 0.85 0.65 0.55从表2可以看出，静注内毒素后家兔体温开始上升，至第4小时左右体温升高达到高峰，此后逐渐下降，本实验中生理盐水组体温曲线呈内毒素发热之热型，清肺口服液低剂量组和清肺口服液高剂量组其体温变化不如清肺口服液中剂量组和阿斯匹林组明显。而清肺口服液中剂量组比阿斯匹林组稍差。清肺口服液有一定的解热作用。
(三)清肺口服液化痰实验研究1.材料1.1动物 成年昆明种小鼠(体重18～22g，由南京中医药大学实验动物中心提供)。
1.2仪器 722分光光度计(上海第三分析仪器厂生产)，普通手术器械一套。
1.3试剂 酚红溶液5g/ml(溶于生理盐水中)(市售)，生理盐水(取自南京中医药大学第一附属医院药房)，氢氧化钠1mol/L(市售)，氯化铵(市售)。
1.4受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)，每剂制成为100％的口服液90ml。
(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)。
2.方法与结果2.1小鼠按体重随机均分为四组，每组10只。第一组灌服同体积生理盐水，第二组灌服清肺口服液20g/Kg bw，第三组灌服清肺口服液40g/Kg bw，第四组灌服氯化铵1g/Kg bw。
2.2灌胃给药后半小时，腹腔注射酚红0.1ml(5mg)/10g bw，注射酚红后半小时处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处气管，放入装有2ml生理盐水的试管中，再加0.1ml氢氧化钠，用722分光光度计波长为546nm测OD值，用酚红作一标准曲线，根据曲线计算酚红含量，与对照组比较，所得结果如下表表3清肺口服液对小鼠气管段酚红排泌量的影响组别剂量(g/kg bw) 动物数给药途径酚红排泌量(ug/ml)空白对照20ml10 ig 0.176±0.026清肺低 20 10 ig 0.766±0.014清肺高 40 10 ig 1.209±0.056氯化铵 1 10 ig 1.093±0.037通过以上结果可以看出清肺口服液低剂量、高剂量组与生理盐水组比较，其酚红排泌量均明显高于生理盐水组，作t检验，P＜0.05，说明有显著性差异，而与氯化铵组比较无显著性差异P＞0.05，证明清肺口服液有增加气管段酚红排泌量，促进排痰的作用。实施例4，对免疫功能的影响研究(一)诱生白细胞介素-2作用的研究1.1主要材料1.1.1受试药物 清肺口服液(药由炙麻黄、苦杏仁、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖组成)。每剂制成浓度为100％的口服液90ml，(南京中医药大学第一附属医院药剂科提供)。
1.1.2细胞因子及依赖性细胞株 rIL-2、CTLL-2(由南京军事医学研究所提供)。
1.1.3试剂 PHA，MTT(美国FCAG公司产品)、二甲基亚砜、淋巴细胞分离液。
1.1.4方法与结果取新鲜血白细胞2个单位，加入淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，用培养液调细胞至2×106个/ml。MTT比色分析法检测IL-2的活性单位，采用二甲基亚砜溶解甲月替，IL-2活性单位计算参考Gillis介绍的方法。
不同剂量清肺口服液协同PHA诱生和单独诱生IL-2的观察将清肺口服液用加入含6％AB血清的1640液稀释成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml 5个不同浓度(下同)，PHA的终浓度为0.2mg/ml。
取24孔培养板，加入调好浓度的淋巴细胞悬液及不同浓度的清肺口服液和PHA，另一培养板加入不同浓度清肺口服液及PHA的混合液，混匀后置37℃5％CO2培养箱内培养48小时，收集上清液，分别检测IL-2的活性单位。结果见下表表4 清肺口服液诱生IL-2的作用受试药物 清肺口服液 清肺口服液+PHA PHA浓度(mg/ml) 0.625 1.25 2.5 5100.625 1.25 2.5 510 0.2IL-2含量(IU/L) 0.236 1.76 1.54 2.76 4.69 8.59.7 64.6 95.9 17.4 30.95从表4可以看出不同剂量清肺口服液协同PHA诱生IL-2的结果，尤以2.5mg/ml～5mg/ml浓度协同PHA诱生IL-2的效价最高。且比PHA单独诱生的IL-2含量30.95IU/L要高。不同剂量清肺口服液单独诱生IL-2的结果，尤以5mg/ml浓度诱生IL-2的效价为高。总体来说清肺口服液单独诱生IL-2是有作用的，但所诱生IL-2的效价明显低于与PHA协同诱生者。(二)诱生干扰素作用的研究2.1主要材料2.1.1细胞与病毒 小鼠成纤维(L929)细胞、新城鸡瘟病毒(NDV，血凝效价1280u/ml)口腔炎病毒(VSV，TCID30为10-6)(由南京医科大学提供)2.1.2培养液 细胞培养液90％RPM-1640液含10％小牛血清加多抗，细胞维持液95％RPM-1640液含5％小牛血清加多抗。2.1.3动物ICR小鼠(由南京中医药大学实验动物中心提供)2.2方法与结果2.2.1测定方法 采用微量细胞病变抑制法。2.2.2清肺口服液在小鼠体内诱生干扰素的作用与干扰素的型别取ICR小鼠18只，随机分为3组，每组6只，分别腹腔注射清肺口服液(2g/ml)、NDV和生理盐水各0.5ml。24小时后无菌取血，分离血清后检测干扰素效价，结果见表5。表5 清肺口服液诱在小鼠体内诱生干扰素的作用组别 例数剂量 干扰素效价(log4u/ml)清肺口服液6 0.5 3.50NDV 6 0.5 7.35生理盐水 6 0.5 1.67将腹腔注射24小时后所取的小鼠血清分别用胰酶(Trypsin 0.25mg/ml)或56℃水浴作用1小时，或pH2.0、4℃处理24小时后再测定其效价，结果见表6。
表6清肺口服液诱生干扰素的型别Treatment IFNtiter(log2u/ml)Nnne 7.0Trypsin1hr3.456℃Water 1hr4.7pH2.0 4℃ 24hr 4.4从表5可以看出清肺口服液诱生干扰素的效价为3.50log4u/ml，而生理盐水组诱生效价为1.67log4u/ml，两组相比，有显著差异(P＜0.05)，说明清肺口服液有诱生干扰素的作用，但清肺口服液诱生的干扰素效价与NDV诱生的相比则较低，说明清肺口服液诱生干扰素的能力较NDV弱。从表6可以看出清肺口服液诱生的干扰素经胰酶作用1小时后其效价明显下降，而经56℃水浴作用1小时或pH2.0 4℃作用24小时后其效价也下降明显，表明清肺口服液诱生的干扰素对56℃水浴和pH2.0作用敏感，说明符合γ-干扰素(INF-γ)的性质。实施例5，临床研究及研究结果我们在南京中医药大学第一附属医院、常州市中医院、盐城市中医院进行了相关的临床病例观察。我们用清肺口服液(4～12个月每次20ml，1+～3岁每次30ml，3+～6岁每次40ml，均1日3次，口服)治疗小儿病毒性肺炎痰热壅肺证104例，同时用利巴韦林注射液(按每日10mg/kg，加入10％葡萄糖液体中，静脉滴注，1日1次)作对照(共观察了43例)，进行临床对照试验研究，10天为1个疗程。结果表明，总疗效比较试验组104例中，痊愈83例，显效13例，有效6例，无效2例，痊愈显效率为92.3％；对照组43例中，痊愈26例，显效7例，有效6例，无效4例。痊愈显效率为76.7％。试验组疗效明显优于对照组(P＜0.05)。试验组在体温恢复正常时间、气喘消失例数和消失时间、肺部罗音消失例数方面均明显优于对照组。试验组104例在治疗期间均未发现患儿有任何不良反应，治疗后复查血常规、尿常规、大便常规、心电图、肝肾功能均未见异常改变。
清肺口服液临床试验典型病例例1 张××，男，8月。1998年6月16日就诊。因咳嗽发热2天收住入院。住院号94308。入院时患儿发热，时高时低，咳嗽较剧，阵咳，喉有痰鸣，痰稠难咯，稍有气喘，唇甲不绀，无呕吐，口渴不显，小便色黄，大便正常，食欲欠振，舌质红，苔薄黄，指纹紫滞，位于风关。查体T38.3℃，P130次/分，R35次/分，咽充血，听诊；两肺可闻及哮鸣音和中小水泡音。查血白分WBC12.6×109/L，N0.26，L0.60，M0.14。CRP＜10mg/L。咽拭子培养(-)，呼吸道病毒检测呼吸道合胞病毒阳性。全胸片右下肺斑点状阴影。诊断病毒性肺炎。辨证痰热壅肺证。入院后即给予清肺口服液20ml/次，口服，每日3次。经治疗2天后发热退，气喘消失，5天后咳嗽减轻，9天后喉中痰鸣消失，11天后咳嗽咯痰消失。肺部听诊11天后罗音消失，复查血白分WBC8.7×109/L，L0.62，N0.33，M0.05。全胸片肺部病灶已吸收，痊愈出院。
例2陈××，男，2岁。1998年3月8日就诊。因发热咳嗽气喘2天收住入院。住院号90891。入院时患儿发热、咳嗽阵作，其咳较剧，喉中痰鸣，气喘鼻煽明显，唇甲不绀，不吐，大便调，小便色黄，胃纳欠振，舌质红，苔黄腻，指纹紫滞，见于风关。查体T 39.5℃，P 120次/分，R 40次/分，咽充血，听诊两肺可闻及干罗音和中小水泡音。实验室检查血白分WBC4.7×109/L，N0.29，L0.65，M0.06。尿常规(-)。大便常规(-)。CRP＜10mg/L。全胸片示两下肺纹理增多，见斑点状阴影。咽拭子培养(-)，呼吸道病毒检测腺病毒3、7型。诊断病毒性肺炎。辨证痰热壅肺证。入院后即予以清肺口服液30ml/次，每日3次口服。治疗2天后发热退，3天后气喘紫绀消失，4天后咳嗽痰鸣减轻、8天后消失，肺部罗音在治疗6天后消失，继续服清肺口服液治疗9天后所有症状全部消失。复查全胸片示；两肺纹理稍多，病灶已吸收。血白分WBC8.4×109/L，N0.21，L0.75，M0.04。共住院9天痊愈出院。
权利要求
1.一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液，其特征在于它是由下列重量配比的原料药制成麻黄(蜜炙)3～5g、苦杏仁8～12g、生石膏20-40g、葶苈子5～10g、桑白皮(蜜炙)8～12g、前胡8～12g、僵蚕(制)5～8g、丹参5～8g、虎杖10～15g、拳参10～15g。
2.根据权利要求1所述的清肺口服液制剂，其特征在于还加有辅料蔗糖6～8g。
3.一种制备权利要求1清肺口服液的方法，其制备步骤为(1)秤取苦杏仁8～12g碾碎后进行蒸馏，收取其蒸馏液，备用；(2)将所述重量配比的炙麻黄、生石膏、葶苈子、桑白皮、前胡、丹参、拳参、僵蚕、虎杖9味药与苦杏仁药渣合并后水煎二次，二次药液合并后，进行浓缩，加乙醇后，静置沉淀，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加水适量，煮沸后冷藏，将提取液过滤后备用；(3)取蔗糖6～8g加水适量，加热溶解，制备成蔗糖溶液，过滤，备用；(4)合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液和蔗糖溶液，加水调至90ml，分装，在流通蒸气下灭菌30分钟而制得口服液。
4.根据权利要求3所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在步骤(2)水煎二次，第一次加水5-10倍量，冷浸30～60分钟后，煎煮1～1.5小时，第二次加水8-10倍量，煎煮0.5～1小时，二次药液合并后在60～80℃下浓缩至相对密度1.02-1.15，加乙醇至含醇量达60～70％，沉淀24～36小时，煮沸后冷藏时间为24～48小时。
5.根据权利要求1所述的清肺口服液制剂，其特征是在原料药中还可加黄芩6～10g，再加辅料甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾。
6.根据权利要求5所述的清肺口服液的制备方法，其制备步骤为(1)秤取炙麻黄、生石膏、杏仁、葶苈子、黄芩、桑白皮、前胡、虎杖，加水煎煮二次，第一次10倍量水，煎煮1.5小时，第二次8倍量水，煎煮1.0小时；(2)将两次煎液合并后滤过，滤液减压浓缩(0.85Mpa，65～70℃)至相对密度为1.05～1.08(50～60℃测)，放冷至40℃以下；(3)缓缓加入乙醇使含醇量达到70％，充分搅拌，静置12小时；(4)滤过，滤液减压回收乙醇至无醇味，加水至85ml，煮沸10分钟，静置12小时；(5)滤过，滤液加入甜菊糖、蔗糖、山梨酸钾，并加水至90ml，搅匀、滤过、灌封，灭菌，制得清肺口服液。
7.根据权利要求6所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在步骤(5)中加入的甜菊糖为1-2g、蔗糖5-15g、山梨酸钾0.1-0.3g。
8.根据权利要求6所述的清肺口服液的制备方法，其特征是在制剂前通过正交试验选用了乙醇沉淀、高速离心和絮凝澄清工艺精制清肺口服液。
全文摘要
本发明公开了一种治疗小儿病毒性肺炎的清肺口服液制剂，它是由炙麻黄、生石膏、苦杏仁、葶苈子、桑白皮、前胡、僵蚕、丹参、虎杖、拳参等中草药组成，其制备方法是苦杏仁碾碎后蒸馏，收取蒸馏液，余药合并苦杏仁渣，水煎二次后浓缩加乙醇静置沉淀，滤取上清，回收乙醇后加水适量，煮沸，过滤备用，蔗糖溶液合并苦杏仁蒸馏液、麻黄等药物提取液，加水调至90ml，分装，灭菌而成。该方具有宣肺开闭，清热化痰、解毒活血的作用。对小儿病毒性肺炎痰热壅肺证有明显的疗效。实验表明本方具有解热、镇咳、化痰、抗病毒、减轻病毒性肺炎肺部病变，调节机体免疫功能(如诱生白细胞介素－2、γ干扰素)等作用，是治疗小儿病毒性肺炎痰热壅肺证有效的药物。
文档编号A61P33/00GK1456341SQ0313164
公开日2003年11月19日 申请日期2003年6月3日 优先权日2003年6月3日
发明者汪受传, 韩新民, 李江全, 任现志, 达庆国, 郭立玮, 刘陶世 申请人:南京中医药大学
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