积雪草总苷及其相关成分在预防和/或治疗白癜风药中的应用的制作方法
专利名称：积雪草总苷及其相关成分在预防和/或治疗白癜风药中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及积雪草总苷及其相关成分在制药领域中的应用。
背景技术：
白癜风(vitiligo)是一种常见的原发性、局限性或泛发性色素脱失性皮肤病，是由于皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶系统的功能减退、丧失引起的，病理上则主要表现为黑素细胞的减少或消失。白癜风的发病率随地区和人种肤色而有不同，一般肤色越浅的人发病率越高，如丹麦人为O. 38%，美国白人约为I %，黄种人的发病率介于白种人与黑种人之间，国内患病率为O. 09%-2. 7%。患病人群上千万。受遗传因素影响，大部分患者发病年龄小于30岁，且男女没有显著性差异。白癜风的损害可发生于全身任何部位的皮肤、粘膜，包括口腔粘膜、鼻腔粘膜、生殖器及肛门部位的粘膜以及视网膜等，生长于白斑区的毛发通常也呈现为灰白色。由于白癜风的皮损，特别是位于体表暴露部位的白斑，往往会影响到患者的容貌、形象及自我评价，进而在很大程度上改变了患者正常的精神状态、社会交往以及生活和学习。因此，开展对白癜·风的研究，寻求有价值的治疗手段和药物，是医学的一大难题。白癜风发病原因复杂，目前存在几种假说认为主要与自身免疫有关，神经化学因子作用，黑素细胞自身破坏，黑素细胞生长因子缺乏，遗传因素等，但其真正的病因尚不清楚，治疗方法多种多样，疗效亦不确切。而祖国医学对此病有独特认识多数学者认为白癜风的发生是由于七情内伤，肝气郁结，气血不畅，复感风寒，风邪搏于肌肤，气血失和，血不养肤所致。近几年采用中医中药治疗也取得了一定进展，但是机理不清，基础研究的薄弱已成为制约中医药治疗白癜风研究发展的"瓶颈"，只有"瓶颈"突破，疗效才能提高。同时，一些能够有效治疗白癜风的单味中药及有效单体方面的开发，也成为一条有价值的途径，得到医药工作者的重视。白癜风在临床上分进展期白癜风和成熟期白癜风两大类来治疗。进展期白癜风分为寻常型和节段型；其临床治疗也是按照不同的分型，采取不同的治疗方法。寻常型①局限型主要是外用糖皮质激素或其他免疫抑制剂，免疫调节剂(转移因子，胸腺肽等)或者局部光疗窄谱中波紫外线、准分子激光、准分子光等，中医中药。②散在型、泛发型和肢端型则主要采用中医中药，免疫调节剂(转移因子，胸腺肽等)，系统用糖皮质激素，光疗窄谱中波紫外线、准分子激光、准分子光等，局部外用药治疗(参考进展期局限型)。节段型白癜风的治疗方法也主要参考进展期局限型治疗。成熟期白癜风也是按照寻常型和节段型来治疗的，寻常型①局限型主要是外用补骨脂素类药物、糖皮质激素、氮芥等，自体表皮移植，局部光疗或光化学疗法窄谱中波紫外线、准分子激光及准分子光等，中医中药。②散在型、泛发型和肢端型中医中药，光疗或光化学疗法窄谱中波紫外线，准分子激光、准分子光、PUVA等.自体表皮移植(暴露部位或患者要求的部位)，局部外用药治疗(参考稳定期局限型)。节段型自体表皮移植；其他参考稳定期局限型治疗。目前白癜风的临床治疗方法虽很多，但临床疗效由于个体的不同存在很大的差异。西药治疗方法虽然简单，多采用手术疗法，但是由于不良反应多见或者难于完全康复等；有些患者采用传统疗法，时间虽然长，但是药物的不良反应少。本专利所说的积雪草总苷或其相关各单体成分，如积雪草苷、羟基积雪草苷及积雪草苷B等为积雪草提取物，采用制药领域中提取工艺方法制备。所说的积雪草，拉丁名Centella asiatica(L. )Urban,别名崩大碗、缺碗草、马蹄草、连线草、地线草、崩口碗等，药用部位干燥全草或带根全草。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B在现有的文献资料中，有记载其具有较好的抗氧化、创伤愈合功效。积雪草总苷有用作外科用药，用于治疗瘢痕及硬皮病。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种积雪草总苷或其相关各单体成分的新用途，同时克服了现有预防或治疗白癜风药物的不足之处。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或积雪草苷B在制备预防或治疗白癜风药物中的应用。在制备预防和/或治疗白癜风的药物时加入积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B或其任意混合物，对于治疗寻常型白癜风效果明显。在制备预防和/或治疗白癜风的药物时，积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B或其任意的组合物可与药学上可接受的任何载体，以任意的重量比混合，制成任何一种药学上可接受的 剂型。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、润滑剂、表面活性剂等，如淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、硬脂酸镁、纤维素类及其衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆等。所述制剂，如乳膏、软膏剂、乳液、凝胶、片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、注射液、口服液等。也可制成注射剂，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本发明的有益效果积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B，在现有的文献资料中，有记载其具有较好的抗氧化、创伤愈合功效。本申请人在实际研究中发现，积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B对于白癜风也有着独特的功效，其有着良好的免疫抑制作用及促进黑色素细胞修复、增殖、移行，对黑色素代谢调控系统如黑色素细胞刺激素、角朊细胞等细胞因子等作用有关。通过实际应用，本申请人利用积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或者积雪草苷B制作的积雪苷霜软膏对白癜风的治疗中疗效独特，对白癜风患者病情能够得到控制或痊愈。本发明为日后的市场产品开发、制剂开发、临床研究等奠定了基础。突破了中医药治疗白癜风机理不清，基础研究薄弱的“瓶颈”。
具体实施方式
为了更好证明本发明对预防和/或治疗白癜风的作用，下面通过体内、体外药效试验及临床观察实施例解释和验证本发明的药效机理及临床治疗作用。实施例1按照药学常用方法，制备积雪苷霜软膏剂(以积雪草总苷计，IOg O. 25g)和积雪苷凝胶(以积雪草总苷计，IOg O. 25g)。(一 )化学脱色剂制备豚鼠白癜风模型制备白癜风动物模型取黑色或黑花毛(黑色皮肤)豚鼠70只，用硫化钠脱去背部黑毛约4 X 4cm2。随机分成7组，(I)正常对照组赋形剂(2)模型对照组赋形剂(3)阳性药对照组(4)药物高I剂量组(中剂量组的I倍)(5)药物高2剂量组(中剂量组的1/2倍)
(6)药物中剂量组(7)药物低剂量组用8%的硫化钠脱毛，每4天I次，除正常组涂蒸馏水外，其余各组在脱毛区每天涂5%的氢醌O. 5ml两次，第Ild开始各组分别每天在涂抹氢醌过后I小时按剂量分别涂药，其中(I)、⑵组涂相同剂量的赋形剂，每天一次，连续40d，共50d。末次药后2h，取血，测酪氨酸酶、单胺氧化酶、胆碱酯酶。并采用组织病理学观察，表皮基底细胞黑素分布及黑色素毛囊数等。试验结果本发明药物对于白癜风豚鼠表皮损伤区黑素细胞有明显的修复作用，同时本发明药物两个高剂量组和中剂量组可使白癜风豚鼠血液中酪氨酸酶含量增加，单胺氧化酶活力降低，与正常组豚鼠相比无显著性差别。实施例2准备积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B溶液。(一 )本发明药物对于体外表皮黑色素细胞的迁移和粘附作用将传代(第二代)人表皮黑色素细胞计数接种于培养瓶中，确保每瓶细胞数相同，药物试验浓度分别为10、50、100、150、200μ g/ml、及空白对照组，培养3d。采用氢氧化钠裂解法，测定黑素含量，黑素细胞增值率，微孔滤膜法测定细胞迁移情况，黑素细胞迁移率。试验结果表明，本发明药物对于黑素细胞增殖没有太大影响，但是其对于黑素细胞迁移率相对于对照组存在一定差异。药物浓度在10、50μ g/ml时,无显著性差异,其余各组浓度下检验，有显著性差异。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B在150 μ g/ml与200 μ g/ml组相比较，均有明显的作用，但是也存在显著性差异，表明药物浓度越高对黑素细胞迁移促进作用越明显，有量效关系。(二)本发明药物对角质形成细胞的作用购买人永生化角质形成细胞株，复苏后用含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37V,5% CO2培养箱中培养、传代，选择对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度药物作用后的角质形成细胞的培养上清液，检测角质形成细胞的培养上清液中细胞因子SCF、bFGF的分泌量，并检测角质形成细胞的增殖情况。试验结果=ELISA法检测不同浓度的本发明药物对于角质细胞增殖存在一定的剂量效应关系，且随着剂量增加，角质细胞增殖率也增加，同时相应的细胞因子也增加，也说明本发明药物对于角质细胞分泌细胞因子功能有明显的促进作用，可改善白癜风患者皮肤微环境，从而间接改善黑素细胞的增殖和增加其黑素的转运功能。实施例3按照药学常用方法，本发明药物制备成常用外用制剂软膏。本实施例中的软膏分别采用积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B作为药用成分。筛选泛发型进行期白癜风病例，随机选取三部位(同时选取曝光或非曝光部位)，采用随机、对照、双盲法进行60例的临床观察，分别使用本发明药物积雪草总苷软膏、积雪草苷软膏、羟基积雪草苷软膏和积雪草苷B软膏、激素及基质对照，平均2周观察一次，每次照相，共观察3个月。疗效标准痊愈皮损完全消退。显效白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积是原皮损面积的50%以上，含50%。好转白斑部分消退或缩小。无效白斑元色素再生或范围扩大。统计方法有效率计算痊愈数+显效数/治疗数X 100%。治疗效果本发明药物积雪草总苷软膏、积雪草苷软膏、羟基积雪草苷软膏、积雪草苷B软膏激素显示出较明显的治疗效果，无不良反应出现。但激素对照组4例于皮损涂药区出现轻度刺激症状，停药后刺 激症状逐渐消失。3个月后随访无异常。本发明药物对于损伤性黑素细胞存在一定的修复作用，另外其可增加角质细胞的增殖和相关细胞因子的作用，说明其对于白癜风患者体内微环境等也有一定的调节作用。本发明药物能有效减轻白癜风患者的痛苦甚至达到治愈的效果，对于传统中医药的发展及顽症白癜风的治愈都是一大突破。
权利要求
1.积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或积雪草苷B在制备预防或治疗白癜风药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及积雪草提取物的应用领域。本发明所说的积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B对于白癜风的治疗有着独特的功效，其有着良好的免疫抑制作用及促进黑色素细胞修复、增殖、移行，对黑色素代谢调控系统如黑色素细胞刺激素、角朊细胞等细胞因子等作用有关。本发明提供的新的白癜风药对白癜风的治疗疗效独特，使白癜风患者病情能够得到控制或痊愈。
文档编号A61P17/00GK103040884SQ20111030690
公开日2013年4月17日 申请日期2011年10月11日 优先权日2011年10月11日
发明者杨国红, 王曙光, 杨婷婷, 陈解春, 林梦感 申请人:上海现代制药股份有限公司
技术领域：
本发明涉及积雪草总苷及其相关成分在制药领域中的应用。
背景技术：
白癜风(vitiligo)是一种常见的原发性、局限性或泛发性色素脱失性皮肤病，是由于皮肤和毛囊的黑素细胞内酪氨酸酶系统的功能减退、丧失引起的，病理上则主要表现为黑素细胞的减少或消失。白癜风的发病率随地区和人种肤色而有不同，一般肤色越浅的人发病率越高，如丹麦人为O. 38%，美国白人约为I %，黄种人的发病率介于白种人与黑种人之间，国内患病率为O. 09%-2. 7%。患病人群上千万。受遗传因素影响，大部分患者发病年龄小于30岁，且男女没有显著性差异。白癜风的损害可发生于全身任何部位的皮肤、粘膜，包括口腔粘膜、鼻腔粘膜、生殖器及肛门部位的粘膜以及视网膜等，生长于白斑区的毛发通常也呈现为灰白色。由于白癜风的皮损，特别是位于体表暴露部位的白斑，往往会影响到患者的容貌、形象及自我评价，进而在很大程度上改变了患者正常的精神状态、社会交往以及生活和学习。因此，开展对白癜·风的研究，寻求有价值的治疗手段和药物，是医学的一大难题。白癜风发病原因复杂，目前存在几种假说认为主要与自身免疫有关，神经化学因子作用，黑素细胞自身破坏，黑素细胞生长因子缺乏，遗传因素等，但其真正的病因尚不清楚，治疗方法多种多样，疗效亦不确切。而祖国医学对此病有独特认识多数学者认为白癜风的发生是由于七情内伤，肝气郁结，气血不畅，复感风寒，风邪搏于肌肤，气血失和，血不养肤所致。近几年采用中医中药治疗也取得了一定进展，但是机理不清，基础研究的薄弱已成为制约中医药治疗白癜风研究发展的"瓶颈"，只有"瓶颈"突破，疗效才能提高。同时，一些能够有效治疗白癜风的单味中药及有效单体方面的开发，也成为一条有价值的途径，得到医药工作者的重视。白癜风在临床上分进展期白癜风和成熟期白癜风两大类来治疗。进展期白癜风分为寻常型和节段型；其临床治疗也是按照不同的分型，采取不同的治疗方法。寻常型①局限型主要是外用糖皮质激素或其他免疫抑制剂，免疫调节剂(转移因子，胸腺肽等)或者局部光疗窄谱中波紫外线、准分子激光、准分子光等，中医中药。②散在型、泛发型和肢端型则主要采用中医中药，免疫调节剂(转移因子，胸腺肽等)，系统用糖皮质激素，光疗窄谱中波紫外线、准分子激光、准分子光等，局部外用药治疗(参考进展期局限型)。节段型白癜风的治疗方法也主要参考进展期局限型治疗。成熟期白癜风也是按照寻常型和节段型来治疗的，寻常型①局限型主要是外用补骨脂素类药物、糖皮质激素、氮芥等，自体表皮移植，局部光疗或光化学疗法窄谱中波紫外线、准分子激光及准分子光等，中医中药。②散在型、泛发型和肢端型中医中药，光疗或光化学疗法窄谱中波紫外线，准分子激光、准分子光、PUVA等.自体表皮移植(暴露部位或患者要求的部位)，局部外用药治疗(参考稳定期局限型)。节段型自体表皮移植；其他参考稳定期局限型治疗。目前白癜风的临床治疗方法虽很多，但临床疗效由于个体的不同存在很大的差异。西药治疗方法虽然简单，多采用手术疗法，但是由于不良反应多见或者难于完全康复等；有些患者采用传统疗法，时间虽然长，但是药物的不良反应少。本专利所说的积雪草总苷或其相关各单体成分，如积雪草苷、羟基积雪草苷及积雪草苷B等为积雪草提取物，采用制药领域中提取工艺方法制备。所说的积雪草，拉丁名Centella asiatica(L. )Urban,别名崩大碗、缺碗草、马蹄草、连线草、地线草、崩口碗等，药用部位干燥全草或带根全草。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B在现有的文献资料中，有记载其具有较好的抗氧化、创伤愈合功效。积雪草总苷有用作外科用药，用于治疗瘢痕及硬皮病。
发明内容
本发明的目的就在于提供一种积雪草总苷或其相关各单体成分的新用途，同时克服了现有预防或治疗白癜风药物的不足之处。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或积雪草苷B在制备预防或治疗白癜风药物中的应用。在制备预防和/或治疗白癜风的药物时加入积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B或其任意混合物，对于治疗寻常型白癜风效果明显。在制备预防和/或治疗白癜风的药物时，积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B或其任意的组合物可与药学上可接受的任何载体，以任意的重量比混合，制成任何一种药学上可接受的 剂型。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、湿润剂、润滑剂、表面活性剂等，如淀粉、蔗糖、糊精、乳糖、硬脂酸镁、纤维素类及其衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆等。所述制剂，如乳膏、软膏剂、乳液、凝胶、片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、注射液、口服液等。也可制成注射剂，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本发明的有益效果积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B，在现有的文献资料中，有记载其具有较好的抗氧化、创伤愈合功效。本申请人在实际研究中发现，积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B对于白癜风也有着独特的功效，其有着良好的免疫抑制作用及促进黑色素细胞修复、增殖、移行，对黑色素代谢调控系统如黑色素细胞刺激素、角朊细胞等细胞因子等作用有关。通过实际应用，本申请人利用积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或者积雪草苷B制作的积雪苷霜软膏对白癜风的治疗中疗效独特，对白癜风患者病情能够得到控制或痊愈。本发明为日后的市场产品开发、制剂开发、临床研究等奠定了基础。突破了中医药治疗白癜风机理不清，基础研究薄弱的“瓶颈”。
具体实施方式
为了更好证明本发明对预防和/或治疗白癜风的作用，下面通过体内、体外药效试验及临床观察实施例解释和验证本发明的药效机理及临床治疗作用。实施例1按照药学常用方法，制备积雪苷霜软膏剂(以积雪草总苷计，IOg O. 25g)和积雪苷凝胶(以积雪草总苷计，IOg O. 25g)。(一 )化学脱色剂制备豚鼠白癜风模型制备白癜风动物模型取黑色或黑花毛(黑色皮肤)豚鼠70只，用硫化钠脱去背部黑毛约4 X 4cm2。随机分成7组，(I)正常对照组赋形剂(2)模型对照组赋形剂(3)阳性药对照组(4)药物高I剂量组(中剂量组的I倍)(5)药物高2剂量组(中剂量组的1/2倍)
(6)药物中剂量组(7)药物低剂量组用8%的硫化钠脱毛，每4天I次，除正常组涂蒸馏水外，其余各组在脱毛区每天涂5%的氢醌O. 5ml两次，第Ild开始各组分别每天在涂抹氢醌过后I小时按剂量分别涂药，其中(I)、⑵组涂相同剂量的赋形剂，每天一次，连续40d，共50d。末次药后2h，取血，测酪氨酸酶、单胺氧化酶、胆碱酯酶。并采用组织病理学观察，表皮基底细胞黑素分布及黑色素毛囊数等。试验结果本发明药物对于白癜风豚鼠表皮损伤区黑素细胞有明显的修复作用，同时本发明药物两个高剂量组和中剂量组可使白癜风豚鼠血液中酪氨酸酶含量增加，单胺氧化酶活力降低，与正常组豚鼠相比无显著性差别。实施例2准备积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B溶液。(一 )本发明药物对于体外表皮黑色素细胞的迁移和粘附作用将传代(第二代)人表皮黑色素细胞计数接种于培养瓶中，确保每瓶细胞数相同，药物试验浓度分别为10、50、100、150、200μ g/ml、及空白对照组，培养3d。采用氢氧化钠裂解法，测定黑素含量，黑素细胞增值率，微孔滤膜法测定细胞迁移情况，黑素细胞迁移率。试验结果表明，本发明药物对于黑素细胞增殖没有太大影响，但是其对于黑素细胞迁移率相对于对照组存在一定差异。药物浓度在10、50μ g/ml时,无显著性差异,其余各组浓度下检验，有显著性差异。积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B在150 μ g/ml与200 μ g/ml组相比较，均有明显的作用，但是也存在显著性差异，表明药物浓度越高对黑素细胞迁移促进作用越明显，有量效关系。(二)本发明药物对角质形成细胞的作用购买人永生化角质形成细胞株，复苏后用含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37V,5% CO2培养箱中培养、传代，选择对数生长期的细胞进行实验。用不同浓度药物作用后的角质形成细胞的培养上清液，检测角质形成细胞的培养上清液中细胞因子SCF、bFGF的分泌量，并检测角质形成细胞的增殖情况。试验结果=ELISA法检测不同浓度的本发明药物对于角质细胞增殖存在一定的剂量效应关系，且随着剂量增加，角质细胞增殖率也增加，同时相应的细胞因子也增加，也说明本发明药物对于角质细胞分泌细胞因子功能有明显的促进作用，可改善白癜风患者皮肤微环境，从而间接改善黑素细胞的增殖和增加其黑素的转运功能。实施例3按照药学常用方法，本发明药物制备成常用外用制剂软膏。本实施例中的软膏分别采用积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B作为药用成分。筛选泛发型进行期白癜风病例，随机选取三部位(同时选取曝光或非曝光部位)，采用随机、对照、双盲法进行60例的临床观察，分别使用本发明药物积雪草总苷软膏、积雪草苷软膏、羟基积雪草苷软膏和积雪草苷B软膏、激素及基质对照，平均2周观察一次，每次照相，共观察3个月。疗效标准痊愈皮损完全消退。显效白斑部分消退或缩小，恢复正常肤色的面积是原皮损面积的50%以上，含50%。好转白斑部分消退或缩小。无效白斑元色素再生或范围扩大。统计方法有效率计算痊愈数+显效数/治疗数X 100%。治疗效果本发明药物积雪草总苷软膏、积雪草苷软膏、羟基积雪草苷软膏、积雪草苷B软膏激素显示出较明显的治疗效果，无不良反应出现。但激素对照组4例于皮损涂药区出现轻度刺激症状，停药后刺 激症状逐渐消失。3个月后随访无异常。本发明药物对于损伤性黑素细胞存在一定的修复作用，另外其可增加角质细胞的增殖和相关细胞因子的作用，说明其对于白癜风患者体内微环境等也有一定的调节作用。本发明药物能有效减轻白癜风患者的痛苦甚至达到治愈的效果，对于传统中医药的发展及顽症白癜风的治愈都是一大突破。
权利要求
1.积雪草总苷、积雪草苷、羟基积雪草苷或积雪草苷B在制备预防或治疗白癜风药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及积雪草提取物的应用领域。本发明所说的积雪草总苷或者积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草苷B对于白癜风的治疗有着独特的功效，其有着良好的免疫抑制作用及促进黑色素细胞修复、增殖、移行，对黑色素代谢调控系统如黑色素细胞刺激素、角朊细胞等细胞因子等作用有关。本发明提供的新的白癜风药对白癜风的治疗疗效独特，使白癜风患者病情能够得到控制或痊愈。
文档编号A61P17/00GK103040884SQ20111030690
公开日2013年4月17日 申请日期2011年10月11日 优先权日2011年10月11日
发明者杨国红, 王曙光, 杨婷婷, 陈解春, 林梦感 申请人:上海现代制药股份有限公司
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