治疗脂肪营养不良的方法和组合物的制作方法
专利名称：治疗脂肪营养不良的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明总的涉及治疗脂肪营养不良的方法和组合物。更具体说，本发明涉及采用含有生长激素和一种或多种斯特汀药物的组合物联合疗法来治疗脂肪营养不良。
相关技术背景脂肪营养不良是由脂肪细胞缺陷和/或破坏所致的一种综合征。此病的特征是脂肪选择性丢失，伴有高甘油三脂血症、肝脏脂肪变性及常导致糖尿病的严重胰岛素抗药性(Rossini等，Metabolism.，26637-650，1977；Reitman等，Trends Endocrinol Metab.，11410-416，2000；Arioglu等，Ann Intern.Med.，133263-274，2000)。
先天性脂肪营养不良是一种常染色体隐性遗传性疾病，其特征是脂肪组织缺陷和伴有对胰岛素的严重抗药性，导致高胰岛素血症、高血糖症和脂肪性肝肿大(Seip等，Acta Paediatr.Suppl.4132-28，1996)。除此种先天性疾病外，脂肪营养不良也可以是获得性疾病。最为重要的是，已认识到高活性抗逆转录病毒治疗(HAART)的临床显著效益受到了HIV-脂肪营养不良综合征发生的阻碍。此综合征有各种命名，包括HIV-相关的脂肪营养不良综合征/代谢障碍综合征(HADDS)，此术语所指内容将在下文中描述。HIV-相关性脂肪重分配综合征(HARS)被认为是HADDS的一个亚组，其主要特征是内脏脂肪性肥大。
HADDS的特征是腹部脂肪沉积、脂肪组织萎缩、脂肪代谢并发症如高脂血症、早熟的动脉粥样硬化病变和糖尿病(Carr A等，J Acquir Defic Syndr.，33571-576，2003)，还可能伴有瘦体重损耗。此综合征目前通常占接受HIV感染治疗病人的60％以上，特别是用HIV治疗药物如蛋白酶抑制剂及采用核苷类逆转录酶抑制剂如司他夫定(stavudine)治疗的那些个体。如Kravcik(HIV ClinTrials，1(3)37-50，2000)所指出的那样，迄今HIV-脂肪营养不良综合征的致病机理仍然不能解释，大多数针对脂肪变化的治疗仍不成功。
因此，HAART有效地延长获得性免疫缺陷综合征(AIDS)个体生命的同时，将此病转变成慢性、高发病率的获得性HIV-相关性脂肪营养不良综合征，因此这种获得形式的脂肪营养不良发病率惊人地增高(Carr等，AIDS.12F51-F58；1998；Carr等，N Engl J Med.3391296，1998；Carr等，Lancet.3532093-2099，1999；Miller等，Lancet，351871-875，1998；Vigouroux等，DiabeteMetab.25225-232，1999)。此病中所见的脂肪代谢导常也可导致HIV病人动脉粥样硬化加速的发生率增长(Barbaro等，Clin Therap.25(9)2405-18，2003；Sklar等，N Engl J Med.，349(21)2065-7，2003；Friis-Moller等，N Engl J Med.349(21)1993-2003，2003)。因此，HIV-相关性脂肪营养不良是一种多因素综合征，目前对此病尚无广泛的治疗方法。
动脉粥样硬化脂肪代谢失调(AD)是脂肪营养不良综合征的中心性缺陷，也被认为是一种独立的冠心病危险因子。它还与脂肪营养不良综合征所包括的疾病的发病机理有关并在其中起作用，这类疾病包括但不限于高甘油三脂血症(HTG)、胰岛素抗药性(IR)、葡萄糖耐量受损(IGT)和II型糖尿病(DM-2)。因为AD在与HIV-相关脂肪营养不良的有关代谢异常进展中起着中心作用，因此有效治疗AD极其重要。HIV非感染人群的研究资料提示，脂肪营养不良还可能包括总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇和甘油三脂水平升高，高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平降低。由于这些已确定的危险因素，国家胆固醇教育计划(NCEP)公布了对处于危险中的(非HIV-感染)病人治疗AD的指南。
在非HIV病人中，肥胖被认为与生长激素的分泌减少有关(Veldhuis等，JClin Endocrinol Metab.803209-22，1995；Veldhuis等，J Clin Endocrinol Metab.7251-59，1991；Ghigo等，Metabolism.41560-563，1992)，其中显示生长激素浓度与超重和机体脂肪过量呈反向变化。HIV-脂肪营养不良与正常的肥胖不同，因为如上所述HIV-脂肪营养不良中脂肪的堆积发生了重分布，且脂肪营养不良的个体无超重倾向。近年证明了HIV脂肪营养不良和内脏脂肪堆积增加的个体其生长激素分泌减少(Rietschel等，JCEM.86504-510，2001)。
因此，在HAART中加入蛋白酶抑制剂和核苷逆转录酶抑制剂大大改善了AIDS病人的预期寿命。不幸的是，与预期寿命增加相伴随，这些病人发生继发性并发症也随着增加，导致异常脂质分布疾病。HAART的效力毫无疑问，因而可继续使用来延长AIDS病人的生命。然而这将导致需要提供其它治疗来处理AIDS病人长时间维持HAART治疗所产生的副作用。HAART这些副作用中最显著的是需要缓解脂肪营养不良和其它HAART-相关性的代谢异常。脂肪营养不良也见于非HIV病人。因此，需要鉴定新的有效方法来治疗性干预HIV-相关的和非HIV-相关的脂肪营养不良。
发明概述本发明涉及治疗脂肪营养不良的方法和组合物。在具体实施方式
中，本发明提供一种治疗患有脂肪分布异常疾病的病人的方法，该方法包括给予该病人一种生长激素和一种以斯特汀(statin)为基础的治疗药物。斯特汀为基础的药物(斯特汀药物)和生长激素宜以单一药物组合物形式提供。其它实施方式考虑在第一种药物组合物中提供斯特汀药物，而在第二种药物组合物中提供生长激素。所述生长激素较佳为重组生长激素。然而所述生长激素也可分离自动物。斯特汀为基础的药物可以是本领域技术人员已知的任何斯特汀药物或斯特汀的同类物。斯特汀为基础的药物优选洛伐他汀(lovastatin)或洛伐他汀同类物。在示范性实施方式中，斯特汀为基础的药物选自阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)和氟伐他汀(fluvastatin)。
在
具体实施例方式
中，脂肪异常分布疾病是非HIV-相关的脂肪营养不良。在特别优选实施方式中，本发明的方法可用于治疗HIV-相关的脂肪异常分布疾病。更具体说，HIV-相关的脂肪异常分布疾病选自动脉粥样硬化性脂质异常血症，高甘油三脂血症，胆固醇水平升高，低密度脂蛋白(LDL)胆固醇水平升高，高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平降低。在其它实施方式中，此法用于治疗伴有糖尿病相关肥胖症状的患者。更具体地说，糖尿病相关肥胖症选自胰岛素抗药性、β-细胞功能异常、第一期胰岛素分泌缺失、葡萄糖耐量受损(IGT)、内源性葡萄糖产生升高、葡萄糖异生过量。在具体实施方式
中，本发明方法用于治疗II型糖尿病患者。本发明方法可有效地用于治疗已用糖尿病传统方法治疗的个体。例如，本发明方法包括施用胰岛素促分泌剂。用作抗糖尿病药的促分泌剂是本领域技术人员熟知的，包括但不限于磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙胺、格列美脲(glimepiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、氯茴苯酸(meglitinides)、瑞格列奈(repaglinide)、普兰林肽(pramlintide)、吗啡林胍(morphilinoguanide)、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱(carbachol)、氨甲酰甲胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸醋、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。根据这些分子进行合理药物设计产生的衍生物、同类物和其它分子也可用作促分泌剂。
在
具体实施例方式
中，胰岛素促分泌剂是非葡萄糖依赖性的胰岛素促分泌剂，给予生长激素、斯特汀和胰岛素促分泌剂的联合作用可产生胰岛素释放，其模式能够获得葡萄糖依赖的双向释放特征，降低了发生低血糖的可能性。
在某些实施例中，本发明的方法还可包括用来普汀(瘦素)治疗患者。
本发明的另一方面提供了用于联合治疗异常脂肪分布疾病的治疗藥物，該组合物包含第一组合物，它含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的重组生长激素；第二组合物，它含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的斯特汀为基础的药物。生长激素和斯特汀药物可考虑配制在单一制剂中。然而优选将生长激素配制在与斯特汀药物制剂分开的制剂中。在具体实施方式
中，生长激素制剂和斯特汀制剂可配制成可注射的制剂。在优选实施方式中，斯特汀药物配制成口服给药制剂。在具体实施方式
中，可将治疗药物装在试剂盒中，该试剂盒还装有各种治疗组分给药用的器具。该试剂盒可专门装有洛伐他汀或其同类物作为斯特汀药物。在具体实施方式
中，治疗组合物中的斯特汀药物选自阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)和氟伐他汀(fluvastatin)。本发明的组合物和方法可采用一种斯特汀药物或者可采用两种或多种此类药物。
本发明的其它特征和优点可从以下详细描述了解得更清楚。然而应理解此种详述和具体实施例虽然表明了本发明的优选实施方式，但只是阐述性的，因为本领域技术人员明白，依据此详细描述所作出的各种变化和修改都在本发明的构思和范围内。
优选实施方式的描述获得性脂肪营养不良(或脂肪过度生长)是AIDS病人的重要问题，导致经受HAART抗HIV感染治疗的个体预后极差。其它形式的脂肪营养不良，如伴随糖尿病相关并发症的肥胖症相关的脂肪营养不良，也是对当前医学界的一种明显挑战。HIV和非HIV病人的所有这些脂肪营养不良和脂质分布疾病总称为“脂质分布异常疾病”。本发明提供治疗肥胖症的新方法。这些治疗方法依据生长激素和以斯特汀为基础的治疗高脂血症的药物，如LipitorTM(阿托伐他汀)、PravacholTM(普伐他汀)、ZocorTM(辛伐他汀)、MevacorTM(洛伐他汀)和LescolTM(氟伐他汀)。这两类药物(即生长激素和斯特汀类)是本领域技术人员熟知的，因此目前认为这些药物可以联用来实现脂肪营养不良症状的有效治疗缓解。本发明探索了这一新发现，阐明了用于达到这种治疗效果的新方法和组合物。本说明书下面进一步详述这类疾病、治疗方法和组合物。
A.本发明所治疗的疾病如上所述，绝大多数接受HAART治疗的HIV病人经历了HADDS，包括脂肪组织在特定贮存区域的病理性堆积。这种HADDS的病理性脂肪组织堆积也可伴有某些区域脂肪组织的异常损耗(脂肪营养不良或脂肪萎缩)，伴有或不伴有代谢异常、早熟的动脉粥样硬化病损、瘦体重损耗和/或其它生理异常。包括联合给予生长激素和斯特汀类药物的本发明方法可治疗HADDS。已证明这种治疗可减轻、缓解或纠正HADDS相关的任何症状。
因此，在某些实施方式中，考虑用本发明方法来减轻具有此症状病人的腹部(特别是内脏脂肪组织区室中)脂肪组织异常堆积(Miller等，Lancet.21，351(9106)871-875，1998；Kotler等，J Acquired Immun Defic Syndr.20228-237，1999；Kotler等，HIV/AIDS，1999Annual Update，85-92，hiv.medscape.com.1999；Engelson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Englemson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999)。HADDS病人在颈后区(“水牛肩”)、下颌下区(“马颈”)、胸部乳房区和/或锁骨上区也可存在异常的脂肪堆积，和/或皮下脂肪瘤(有包膜的良性脂肪肿瘤，单发或多发)。考虑本发明包括至少一种生长激素组合物和一种斯特汀类治疗药物(如LipitorTM、PravacholTM、ZocorTM、MevacorTM和LescolTM或洛伐他汀的其它同类物)的联合疗法，将能减少或消除异常的脂肪组织，从而减少腹部(内脏)脂肪贮存部位、颈后、下颌下、胸部乳房、锁骨上贮存部位之一个或多个区域的脂肪贮存体积或数量，和/或皮下脂肪瘤。
除了减轻以上异常肥胖外，本发明的方法还包括缓解HADDS病人的脂肪萎缩。已知HADDS病人的其它特定部位可发生异常的皮下脂肪组织损耗，称为“外周脂肪营养障碍”(或脂肪萎缩)。这种脂肪损耗通常见于面部(颊部、腮部、耳廓脂肪垫)，及肢体、躯干和/或臀部区域周围的皮下脂肪组织。因此，本发明特别考虑给予生长激素和至少一种斯特汀类药物联合治疗来减轻HADDS伴有的皮下脂肪损耗。
某些HADDS病人还存在代谢异常(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-1883，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract 11]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)，伴有脂质和/或糖代谢异常。临床表现包括空腹高甘油三脂血症、高脂血症、胰岛素/葡萄糖轴异常(空腹胰岛素升高、C-肽升高、胰岛素抗药或胰岛素敏感性降低)伴有或没有明显的糖尿病(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-83，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract11]，1999；Henry等，Lancet3511328，1998；Henry等，Lancet3521031-1032，1998；Grunfeld，Antiviral Therapy4(Sup2)7[Abstract004]，1999)。本发明方法可用于治疗一种或多种这类代谢功能障碍。
本发明可特异性治疗的另一类疾病包括HADDS相关的冠心病(CHD)。有初步研究报导提出，HADDS病人显示有患冠心病(CHD)危险增加的临床前证据。CHD的临床前指标包括用电子束计算机体层摄影术(EBCT)定量的冠状动脉钙化(CAC)增加，冠脉外指标如经超声图像术定量的颈动脉内膜中层增厚(IMT)和血流受损介导的肱动脉扩张，这意味着内皮功能障碍，可能导致动脉粥样硬化和CHD。在给予HIV蛋白酶抑制剂(PI)治疗后发生腰围异常增大伴内脏脂肪组织异常堆积的8名HADDS病人中，进行了EBCT，Kosmiski等(Antiviral Therapy4(Sup 2)49[Abstract056]，1999)报导的平均CAC评分与可鉴定到的病损斑负荷最少相一致。还有初步研究报导表明接受PI的HIV病人出现了异常的颈动脉IMT(Maggi等，Antiviral Therapy4(Sup2)39[Abstract038]，1999)和受损的肱动脉血流介导的扩张(Stein，ConferenceNews Reports，AIDS Weekly via NewsRx.com(1999，11月22日)，意味着内皮功能障碍。本发明的治疗方法可用于治疗上述HADDS相关的CHD的一种或多种症状。
某些HADDS病人还显示不随意的体重减轻伴瘦体重消耗(AIDS消瘦或恶病质)，也可能有瘦体重消耗但无体重明显减轻(隐伏性消瘦)。本发明的方法可用于使此类个体产生有用的体重增加。可用本发明方法治疗的HADDS或脂肪营养不良综合征病人的其它生理异常包括痛风和胰腺炎(推测是由于严重的高甘油三脂血症所引起)、肝脂肪变性(可能反映了慢性乳酸酸中毒)、性腺功能减退、和可能的其它激素代谢异常(Henry等.，Lancet3511328，1998；Henry等.，Lancet3521031-1032，1998；Brinkman.，Antiviral Therapy4(Sup2)15[Abstract 009]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)。HADDS和脂肪营养不良综合征可伴有或可不伴有其它异常，如皮肤异常(如头发稀疏、脱发、脆性头发、皮肤干燥、指甲异常、趾甲内生)，凝血综合征疾病可导致血友病人出血增加，髋关节骨质疏松或无血管坏死，外周神经疾病，恶心、疲劳、体重减轻，慢性腹泻，发热，痛经、月经失调，损伤性性功能障碍(性欲减退、勃起功能障碍)和类似佩罗尼病的生殖器异常(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-1883，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract 11]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)。本发明的联合治疗方案在缓解某些或所有这些HADDS相关病理上证明是有用的。
除了HIV病人所表现的脂肪营养不良外，本发明方法还可用于治疗非HIV患者的肥胖相关性脂肪营养不良。
B.用于本发明方法的组合物本发明的方法采用生长激素和斯特汀相关药物合并用药来有效治疗脂肪营养不良症。考虑用本发明的联合疗法可减轻本说明书所例举的一种或多种脂肪营养不良症状。因为曾采用生长激素和斯特汀相关药物二者来治疗其它疾病，本领域技术人员能够不难地采取现有的组合物和治疗方案用于本发明。简单地借助实施例，以下章节描述了可用于本发明的示范性生长激素和斯特汀相关组合物。
a.生长激素用于本发明治疗方法的活性药物之一是生长激素。所用的生长激素优选人生长激素。人生长激素也称为促生长激素(somatotropin)，是一种由垂体前叶促生长细胞产生和分泌的蛋白激素。其分泌受释放因子即生长激素释放激素(GHRH)和抑制因子生长抑素(somatostatin)的调节。人生长激素通过其对蛋白质、糖和脂质代谢的作用在躯体生长上起着关键作用。
人生长激素是一条191个氨基酸组成的多肽链(Bewley等，Int J Pept ProteinRes4(4)281-287，1972)，含两个二硫键，一个位于Cys-53与Cys-165之间，形成该分子中的大环，另一个位于Cys-182与Cys-189之间，形成靠近C-末端的一个小环。Martial等(Science10205(4406)602-607，1979)报导了证实该氨基酸序列的DNA序列。纯化的hGH的冻干形式是白色无定形粉末。易溶解于pH＞7.2的水性缓冲稀释液中(浓度＞10mg/L)。
在溶液中，hGH主要以单体形式存在，一小部分为二聚体和高分子量寡聚体。在某些条件下，可诱导hGH形成较大量的二聚体、三聚体和更高的寡聚体。hGH的几种衍生物是已知的，包括天然产生的衍生物、变体和代谢产物、降解产物，主要是生物合成的hGH和用遗传方法产生的经工程改造的hGH衍生物。天然产生的hGH衍生物的一个例子是GH-V，在胎盘中发现的一种生长激素变体。对该基因簇其它成员的描述见Chen等，Genomics4(4)479-497，1989。
任何hGH衍生物，包括在体内长效的衍生物都可用于实现本发明的目的，只要它保留了hGH的生物学活性。此外，考虑也可采用GH衍生物的混合群。
甲硫酰hGH是通过重组DNA技术产生的第一种形式的hGH，可用于本发明。此化合物是在其N-末端含有一个额外甲硫氨酸残基的hGH衍生物(Goeddel等，Nature281(5732)544-548，1979)。其它可采用的GH是天然产生的hGH变体，称为20-k-hGH。此hGH变体据报导发生在垂体中以及血流中(Lewis等，JBiol Chem25253(8)2679-2687，1978；Lewis等，Biochem Biophys Res Comm.2992(2)511-516，1980)。此化合物因信使核糖核酸的交替剪接而缺失了Glu-32至Gln-46的15个氨基酸残基(DeNoto等，Nucleic Acids Res9(15)3719-3730，1981)。此化合物具有hGH的许多但不是所有的生物学性能。此衍生物可用于本发明的方法和联合治疗组合物中。
垂体制造了20k-hGH并将其分泌到血液中。它占成人输出生长激素的约5％和儿童输出生长激素的约20％。它具有与22kD生长激素相同的生长促进活性，据报导具有与22kD生长激素相当或更强的脂肪分解活性。它能以22kD生长激素相同的亲和力结合生长激素受体，具有22kD激素十分之一的生乳(象催乳素那样)生物活性。与22kD不同，20-k-hGH的抗胰岛素活性弱。
一些hGH衍生物得自该分子的蛋白水解修饰。hGH的主要代谢途径涉及蛋白水解。hGH中围绕残基130-150的区域对蛋白水解极其敏感。已描述了几种在此区域中有缺口或缺失的hGH衍生物(Thorlacius-Ussing，Neuroendocrinology，45(3)233-242，1987)。此区域位于hGH的大环中，切割此区中的肽键导致产生由Cys-53与Cys-165之间二硫键相连接的两条链。据报导许多此二链形式衍生物的生物学活性提高(Singh等，Endocrinology94(3)883-891，1974)。人工方法已利用酶产生了许多人生长激素的衍生物。胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及其它酶已被用于在hGH分子的不同位点修饰hGH(Lewis等，Endocrinology101(5)1587-1603，1977；Graff等，J Biol Chem 2572365，1982)。一个称作双链合成代谢蛋白质(2-CAP)的这种衍生物，是通过用胰蛋白酶的控制性蛋白水解而形成的(Becker等，Abstract No.342，第71届年会，内分泌协会，Seattle，WA，1989年6月)。发现2-CAP具有与完全hGH分子极不同的生物学性能，即主要保留了hGH的生长促进活性，但消除了对糖代谢的大多数作用。
在适当条件下，蛋白质中的天冬酰胺和谷氨酰胺残基对脱酰胺化反应敏感。已证明垂体hGH经历此种反应，导致Asn-152转变为天冬氨酸，及较低程度的Gln-137转变为谷氨酸(Lewis等，JBiol Chem25256(22)11645-11650，1981)。脱酰胺后的hGH显示对枯草杆菌蛋白酶的蛋白水解敏感性改变，提示脱酰胺可能在引导hGH蛋白水解切割中具有生理学意义。已知生物合成的hGH在某些贮存条件下发生降解，导致在不同的天冬酰胺残基(Ans-149)上脱酰胺。这是脱酰胺的主要位点，但也观察到Asn-152上的脱酰胺(Becker等，Biotechnol Appl Biochem10(4)326-337，1988)。合成的hGH未见报导Gln-137脱酰胺。
蛋白质中的甲硫氨酸对氧化敏感，主要对亚砜敏感。垂体产生的和生物合成的hGH二者均经历Met-14和Met-125处的亚砜氧化(Becker等，BiotechnolAppl Biochem10(4)326-337，1988)。据报导垂体而非生物合成的hGH中Met-170发生氧化。发现脱酰胺的hGH和Met14亚砜化的hGH二者均显示了完全的生物学活性(Becker等，Biotechnol Appl Biochem10(4)326-337，1988)。已通过酶作用或通过遗传方法产生了截短形式的hGH。通过控制胰蛋白酶活性而产生的2-CAP含有已去除的hGHN-末端的前8个残基。通过基因修饰然后在适当宿主中表达产生了其它截短形式的hGH。去除其前13个残基产生了具有不同生物学性能的一种衍生物(Gertler等，Endocrinology72118(2)720-6，1986)，此衍生物中多肽链没切断。
本发明所用的术语“人生长激素”旨在包括上述天然产生的衍生物，包括但不限于20kD和22kD两种人生长激素、GH-V和Chen等(Genomics4(4)479-497，1989)所描述的人生长激素基因座的其它成员。该术语还包括其保留了生长激素生物学活性、即作为生长激素受体激动剂活性的功能性衍生物、片段、变体、同类物或其盐。换句话说，它们能结合生长激素受体启动该受体的信号传导活动。
本说明书所用的术语“功能性衍生物”包括可用本领域已知方法从功能基团如氨基酸残基的侧链基团或N-或C-末端基团制备的衍生物，它们包括在本发明中，只要它们在药学上是可接受的，即它们不会破坏本说明书所述的hGH的生物学活性，即能够与hGH受体结合并启动受体的信号传导和不会使含此类衍生物的组合物具有毒性。衍生物可以是化学分子，如糖或磷酸残基，只要该衍生物保留了hGH的生物学活性和在药学上是可接受的。
例如，衍生物可包括羧基的脂肪族酯、羧基与氨或伯胺或仲胺反应产生的酰胺、氨基酸残基的游离氨基与酰基分子(如烷酰基或碳环芳酰基)形成的N-酰基衍生物或游离羟基(如丝氨酰或苏氨酰残基的游离羟基)与酰基分子形成的O-酰基衍生物。这类衍生物也可包括，例如聚乙二醇侧链，其可掩蔽抗原性位点和延长分子在体液中的存留时间。
特别重要的是，生长激素经衍生或与络合剂结合而能长期存留。例如，聚乙二醇化或经基因工程改造的生长激素在体内维持长时间的活性，可用于治疗HADDS，或本发明所述的其它脂质分布异常疾病。半衰期延长的示范性hGH组合物包括，例如Alkermes/Genentech销售的Nutropin DepotTM，一种聚交酯—共乙交酯胶囊包裹的缓释型hGH，(Cook等，J Clin Endocrinol Metab.87(10)4508-4514，2002)和AlbutropinTM(HGS)，一种正在临床试验中的hGH白蛋白融合物(Osborn等，EurJPharmacol.456(1-3)149-58，2002)。
已分离并鉴定了N-末端乙酰化的hGH(Lewis等，Endocrinology104(5)1256-1265，1979)。不清楚酰化是否有调节作用或只是简单地有利于纯化，然而预期这可使该分子以类似其它hGH衍生物的方式显示抗HADDS活性。
术语“盐”，本说明书指hGH分子或其同类物的羧基盐或其氨基的酸加成盐。可用本领域已知方法形成的羧基盐包括无机盐，如钠盐、钙盐、铵盐、铁或锌盐等，及与有机碱如胺例如三乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶、普鲁卡因等形成的盐。酸加成盐包括，例如与无机酸如盐酸或硫酸形成的盐，及与有机酸如乙酸或草酸形成的盐。当然，任何这些盐必须保留hGH的与本发明相关的生物学活性，即能结合hGH受体并启动受体信号传导。
本发明的生长激素“片段”指该分子的任何亚组，即保留了所需生物学活性的较短肽。通过去除hGH分子任何一末端的氨基酸并测定所得产物的hGH受体激动剂性能不难制备这些片段。用于从多肽N-末端或C-末端一次去除一个氨基酸的蛋白酶是已知的，因此只涉及用常规实验来测定所得片段是否保留了所需的生物学活性。
此外，具有hGH受体激动剂活性的多肽，即hGH、其同类物或变体、盐、功能衍生物或片段，也可含有侧接该hGH多肽的其它氨基酸残基，只要所得分子保留了该核心多肽的hGH受体激动剂能力，即可测定这类侧接残基是否影响了该核心多肽基本的和新型的特征。术语“基本包括”，当指某特定序列时，意味着可存在不影响该特定序列基本和新型特征的其它侧接残基。
本发明所述的人生长激素“变体”指与其完整多肽或片段基本相似的分子。可用本领域熟知的变体肽直接化学合成方法常规制备变体肽。当然，变体人生长激素以具有与hGH相似的hGH受体结合和信号启动活性为佳，因此可望具有与hGH相似的抗HADDS活性。
可通过在编码合成的人生长激素衍生物的DNA中进行突变来制备人生长激素的氨基酸序列变体。这类变体包括，例如氨基酸序列中残基的缺失、或插入或取代。也可进行缺失、插入和取代的组合来获得最终构建物，只要该最终构建物具有所需活性。显然，在编码变体肽的DNA中进行的突变必须不会改变读框，优选不会产生能产生二级mRNA结构的互补区(见欧洲专利出版物No EP 75,444，其全部内容纳入本说明书作参考)。
通常在编码肽分子的DNA中进行核苷酸定点诱变，产生编码变体的DNA，然后在重组细胞培养物中表达，从而在基因水平上制备这些变体(见Adelman等，DNA2(3)183-193，1983)。变体通常应显示与非变体肽性质相同的生物学活性。
本发明的人生长激素“同类物”指与完整分子或其活性片段基本相似的非天然分子。用于本发明的人生长激素同类物优选至少与斯特汀合用时，更优选单独使用时，能显示抗HADDS活性。
在可用于获得本发明所用的hGH同类物的蛋白质中产生氨基酸取代的例子，包括任何已知的步骤，例如可参见如下美国专利授于Mark等的RE33,653；4,959,314；4,588,585和4,737,462；授于Koths等的5,116,943；授于Namen等的4,965,195；授于Lee等的5,017,691，以及美国专利4,904,584(Shaw等)描述的赖氨酸取代的蛋白质。
在可用于本发明的能与人生长激素受体结合并启动信号传导的物质中，所有那些生长激素同类物和模拟物均有文献报导，例如可参见美国专利5,851,992；5,849,704；5,849,700；5,849,535；5,843,453；5,834,598；5,688,666；5,654,010；5,635,604；5,633,352；5,597,709和5,534,617。
hGH变体或同类物优选具有一核心序列，该序列与天然序列或其生物学活性片段的序列相同，其氨基酸序列与天然的氨基酸序列至少有70％相同，并保留了其生物学活性。这种序列更优选与天然序列至少80％相同，至少90％相同，或最优选至少95％相同。
虽然人生长激素最初获自尸体垂体腺，这些制品不是电泳均一的，但用50％纯的制品治疗的病人可产生血清抗体，其免疫原性归因于无活性成分。重组DNA技术可以在各种不同系统中产生无限制提供的hGH产品。只存在少量污染的蛋白质有利于从培养基中纯化得到hGH。事实上已证明在反相HPLC柱上经一步纯化得到实验室规模纯化的hGH(Hsiung等，Biotechnology7267，1989)。
Serono S.A.生产的重组人生长激素SEROSTIM已经被FDA批准用于治疗HIV病人的体重减轻和消瘦。Genentech Inc.(South San Francisco，CA)生产的PROTROPIN结构上与hGH天然序列略有不同，其在N-末端含有一额外的甲硫氨酸残基。重组hGH一般以装有hGH和其它赋形剂如甘油和甘露醇的冻干形式的小瓶销售。伴随提供的稀释液小瓶使病人能在给药之前将该产品重建至所需浓度。重组hGH也可装在其它熟知的容器如预填装注射器等中销售。
在
具体实施例方式
中，考虑本说明书所述方法采用Serono S.A.生产的重组人生长激素SEROSTIM。此产品最近已获FDA全面批准治疗HIV伴有消瘦或恶病质病人的消瘦综合征。这类生长激素组合物在本发明的方法中将是有用的。先前曾注意到具有显著AIDS消瘦的许多病人能耐受皮下注射较高剂量(6mg/天)的重组生长激素(rhGH；Serono的SEROSTIM)不会产生副作用而不需要减少剂量或停止治疗(Schambelan等，Ann Intern Med125(11)873-882，1996)。
本领域技术人员可改变rhGH的剂量并监测病人因施用rhGH所发生的不良症状。特别考虑患者会接受日剂量1mg/天、2mg/天、3mg/天、4mg/天、5mg/天、6mg/天、7mg/天、8mg/天、9mg/天、10mg/天或更多的rhGH。可以单剂量给予这种治疗，或者分成多个剂量在一天的设定间隔内给予。还可考虑按非以天计的时间间隔给予GH组合物。例如可每隔一天或每周一次给予患者GH治疗。通过监测以下症状来评估GH的不良作用，这些症状包括但不限于组织肿胀、关节僵硬、关节疼痛和/或感觉异常。临床医师能够利用这类症状作为指导参数来评估是否应调整(上调或下调)给定的GH剂量。
近年来本领域技术人员进行了剂量试验，以研究rhGH对HADDS病人的其它效应和安全用量。因此AIDS病人所用的GH剂量是本领域技术人员熟知的。不难采纳这类研究所定的剂量用于本说明书所述的方法。
Windisch等(Ann Pharmacother 32(4)437-445，1998)报导了HIV伴有的消瘦，其特征是体重减轻、瘦体重消耗和体脂肪储存，导致肌肉虚弱和器官衰竭。虽然FDA批准了用重组生长激素治疗HIV伴有的消瘦，但其副作用情况与其它重组生长激素产品相似。用重组生长激素控制HIV/AIDS病人消瘦的试验受到鼓励。自1996年以来超过10,000位的HIV/AIDS消瘦病人接受SEROSTIM的后销售经验，表明三个月疗程对大多数AIDS消瘦病人有效。
鉴于先前SEROSTIM对AIDS消瘦疗效的发现，考虑给予rhGH至少合用一种斯特汀药物的联合治疗的本发明疗法，可定期用于控制HIV相关的或其它的脂质分布异常疾病。例如，这种周期治疗法可包括用联合疗法治疗病人1、2、3、4、5或6个月时间。或者，对HIV相关脂肪营养不良或HADDS病人，可用本发明方法联用HAART持续治疗，控制HAART产生的不良副作用(表现为脂肪营养不良、HADDS等)。还应理解，所谓有用，治疗不需要提供绝对的、而是能充分产生临床价值的作用。如果其它药物对某具体病人无效，而某药物可能提供的治疗作用虽比竞争性药物差一些，如果该药物与其它药物联用可提高总体保护水平，或如果它比竞争性药物安全，则仍具有治疗价值。
治疗期间宜监测病人的症状以确保病人不会经受GH引起的不良作用。当不出现副作用而该联合疗法也不产生足够快的疗效时，可给予更积极的疗程，此时可提高rhGH和/或斯特汀药物的剂量。当该治疗产生了副作用，如组织肿胀、关节僵硬、关节疼痛和/或感觉异常时，可降低rHGH的用量以缓解副作用。
Krentz等.(J Acquir Immune Defic Syndr6(3)245-251，1993)在10位HIV/AIDS病人中比较了隔天剂量(qod)为5.0mg与2.5mg的重组人生长激素导致的代谢和人体测量学变化。治疗期间接受5.0mg(qod)rhGH治疗组病人的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)水平显著增高，而接受2.5mg qod的rhGH组病人的IGF-I未见明显变化。用5.0mg qod rhGH治疗组完成研究的4位病人在该研究前的体重减轻均得到逆转。体重增加伴有瘦体重和机体总水分增加，伴随脂肪量和尿氮排泄减少。
在一项大的随机化、安慰剂对照研究中，Schambelan等(Intern Med125(11)873-882，1996)采用双X线吸收测定法(DXA)扫描评价了经12周疗程给予0.1mg/kg/天(或每天4-6kg，取决于病人体重)剂量的重组人生长激素所产生的机体组分变化，与安慰剂进行比较。治疗结束时，与安慰剂组比较，在rhGH组中观察到瘦体重和体重显著增加，并且这种增加与生理功能(踏车行为)改善相关。rhGH治疗伴有空腹血糖的微小增加，其临床意义可忽略不计。
Krentz等(.J Acquir Immune Defic Syndr6(3)245-251，1993)和Schambelan等(Intern Med125(11)873-882，1996)的研究结果用本发明的GH/斯特汀联合治疗法不难重复。这种确认只是常规的，显示了减轻、缓解或改善脂肪营养不良的一种或多种症状的优良效果。
b.斯特汀类药物如本说明书中所述，本发明的治疗方法除GH外采用第二种化合物。本发明联合治疗方法中的第二种活性化合物是斯特汀相关药物。关于“斯特汀相关”制剂或药物，本申请中指市场上已有的任何斯特汀药物，或从市售斯特汀药物经过改进的药物，当它们与本发明所用的生长激素联用时具有疗效。因此应理解可考虑采用现有斯特汀的同类物和变体。这些同类物和变体可通过本领域技术人员已知的合理药物设计技术来生产。具体说，斯特汀药物称为HMGCoA还原酶抑制剂。这些药物目前在临床上用作抗高胆固醇和控制心脏病发作(复发性和第一次心脏病发作)的药物。这些药物通常副作用很小，不仅能降低总胆固醇、LDL胆固醇和甘油三脂，而且能提高HDL胆固醇。
斯特汀的例子有洛伐他汀(CAS注册号No.75330-75-5；也称为mevinolin或monacolin K)，许多出版物和专利中描述了此化合物的同类物。可从市场上购买到的斯特汀组合物包括LipitorTM(阿托伐他汀)、PravacholTM(普伐他汀)、ZocorTM(辛伐他汀)、MevacorTM(洛伐他汀)和LescolTM(氟伐他汀)。制备这类化合物的方法是本领域技术人员熟知的(见例如美国专利6,521,762；4,420,491；4,342,767；4,319,039；4,294,846；4,444,784；4,582,915和4,820,850)。如以上专利所述，斯特汀传统上利用曲霉菌属、Monascus属、Pleurotus属、Coniothyrium属等微生物发酵产生(见美国专利No.6,521,762关于发酵方法的综述)。
而且斯特汀作为药物制剂在例如“医师桌面参考书(Physician's DeskReference)”中有所描述。例如，LipitorTM(阿托伐他汀钙)片剂在医师桌面参考书(第57版，2003)2547-2551页(Parke-Davis，NJ)和2610-2613页(Pfizer，NY)中有描述。这些制剂以阿托伐他汀钙片剂的形式提供，每片含10mg、20mg、40mg、50mg和80mg阿托伐他汀。给予该片剂的剂量范围是10-80mg/天。目前用于降低人胆固醇的LipitorTM组合物，可用于本发明的联合治疗方法使HADDS和相关脂肪营养不良减轻。
PravacholTM(普伐他汀钠；Bristol-Meyrs Squibb，NY)是另一种可购买到的斯特汀药物，可用于本发明的联合治疗。提供的PravacholTM片剂为10mg、20mg、40mg和80mg。这些片剂给药的每日剂量范围是10-80mg/天。在示范性治疗高胆固醇血症中，以每日单次剂量给予40mg/天，伴随或不伴随饮食。然而通常宜根据所治疗病人的肾功能和肝功能来增减剂量。给予PravacholTM的剂量和治疗指南在医师桌面参考书(第57版，2003)第1101-1105页中有进一步详述，可利用该书提供斯特汀用于本发明方法时的指南。
ZocorTM(辛伐他汀，Merck&Co.，Inc.，NJ)是另一种可用于本发明的示范性斯特汀组合物。此斯特汀制剂在医师桌面参考书(第57版，2003)第2126-2131页中有所描述。其每日剂量范围是5-80mg/天，本领域技术人员可参考医师桌面参考书进一步了解其治疗方案，这些方案可用于或经过修改用于本发明。考虑其用于降低胆固醇的剂量和治疗方案也可用于治疗本申请书所述的HADDS。
MevacorTM(洛伐他汀；Merck&Co.，Inc.NY)和LescolTM(氟伐他汀)是其它示范性的斯特汀，分别在医师桌面参考书(第57版，2003)第2036-2041和2283-2287页中有所描述。本领域技术人员有能力不难改进上述包含斯特汀相关药物的药物组合物，使之用于本发明的方法中。
对于治疗方案，技术人员可利用上述提到的斯特汀药物之一的使用指南。每日给予常规的含斯特汀片剂一次、二次、三次或多次。因此本领域技术人员可利用先前证明对于上述适应症有效的上述参比斯特汀药物之一的用量作为初步剂量，用于本发明治疗方案。
特别考虑斯特汀的口服用量。口服剂量可包括每日给予5-80mg之间的斯特汀药物。然而，也可采用较高剂量，如高达200mg/天。因此病人可口服接受5mg、10mg、20mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg或更多的斯特汀。当然应知道受治疗者可接受较多或较少的斯特汀。也应知道可通过其它常规的给药途径给予类似的剂量。可以单剂量给予斯特汀，或可分成亚剂量在给定的时间内给予多剂药物。
C.与其它治疗药物的联合治疗方案本发明的方法涉及联合使用生长激素和斯特汀相关化合物。然而，除只依据给予GH/斯特汀联合治疗外，本发明方法也考虑与专门针对治疗一种或多种脂肪营养不良症状的第三种组合物联合治疗。本发明的内容中，考虑GH/斯特汀为基础的方法可类似地用于与其它药物(如治疗肥胖、糖尿病等的药物)合用。这类外加的治疗性化合物也可包括能增强生长激素和/或斯特汀相关药物效应的组分。
在
具体实施例方式
中，考虑本发明的生长激素/斯特汀治疗，可辅以能抑制内源性生长抑素分泌而直接或间接刺激内源性生长激素产生的物质予以加强。已知人生长激素释放激素(hGHRH)能剌激hGH释放。因此给予GHRH或其保留了GHRH生物学活性即能剌激生长激素释放功能的衍生物、盐、变体、同类物或片段，可间接获得hGH的生物学活性。例如除GHRH外，可以利用依照上述定义的其功能性衍生物、其同类物或变体，它们与GHRH的序列相同性应至少70％、更优选80％或90％，或最优选95％序列相同，保留了GHRH的生物学活性，或所述变体或同类物，是由在中等严谨条件下，或优选在高严谨条件下与编码GHRH的天然DNA杂交的DNA编码的多肽，所有这些都符合上述定义。本发明可采用能剌激生长激素释放的、文献中所述和公开的刺激生长激素释放的任何GHRH或GHRH同类物或激动剂都可用于本发明，这些物质可参见美国专利5,792,747；5,776,901；5,696,089；5,137,872；5,767,085；5,612,470；5,846,936和5,847,066。也参见Thorner等，Recent Prog HormRes.(1997)；Felix等，Int J Pept Protein Res.46(3-4)253-264，1995；Aiba-Roth等，JClin Endo Metab.671186-1189，1998；Friend等，Eur J Endocrinol.137(4)377-86，1997)。
本发明可采用的其它能促进生长激素体内释放的物质包括美国专利5,807,985；5,604,578；5,795,957；5,777,112；5,767,118；5,731,317；5,726,319；5,726,307；5,721,251；5,721,250等中所述的那些物质。
根据本发明也可采用能结合垂体生长激素分泌细胞上的受体并引发该受体信号传导的其它分子。例如已开发的能结合GHRS受体引起其启动信号传导的小分子，有时称为促分泌分子，其引发的信号传导启动与天然ghrelin结合该受体所获得的相同。这类分子例如可从美国专利5,773,441；5,798,337；5,630,433；5,767,124和5,723,616中得知。也参见Bowers等，Endocrinology1282027-2035，1991；Thorner等，Recent Prog Horm Res52215-46，1997；Camanni等，Front Neuroendocrinol 19(1)47-72，1998；Ankersen等，J Med Chem41(19)3699-704，1998；Smith等，Science260(5114)1640-3，1993和Ghigo等，Horm Res 51 Suppl 39-15，1998。因此，本发明包括能结合GHRS受体引发其信号传导从而获得性质上与天然hGH最终效应相同、程度涉及治疗HADDS的任何物质。
在其它实施方式中，考虑本发明的生长激素/斯特汀为基础的联合治疗法可辅以治疗肥胖相关糖尿病的治疗方案。这类治疗方案可包括给予所述病人胰岛素促分泌剂。采用这类促分泌剂减轻糖尿病是本领域技术人员熟知的。可采用的促分泌剂类型包括但不限于磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、氯茴苯酸(见医师桌面参考书第56版，2003)2432页对示范性氯茴苯酸药物制剂的描述)、瑞格列奈、普兰林肽、吗啡林胍(morphilinoguanide)、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱、氯贝胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸酯、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。本领域技术人员可参考Goodman & Glimans The Pharmacological Basis of Therapeutics.Hardman等编著，第9版，第60章，其中描述了可用于本发明联用的胰岛素和口服降糖药物。特别优选的降糖药包括磺酰脲(Goodman&Gliman一书中1507-1519页有描述。也见医师桌面参考书第56版，第717、741、2680、2692、2693和1086页对目前使用的示范性磺酰脲药物制剂的描述)。也可考虑采用二甲双胍(见医师桌面参考书第56版第1080页对示范性二甲双胍药物制剂的描述)、苯乙双胍或其它双胍类药物。噻唑烷二酮类(如环格列酮和吡格列酮)也已证明可用于本发明方法中。本领域技术人员也可参考医师桌面参考书第56版，第3275和1490页对目前使用的示范性噻唑烷二酮类药物制剂的描述。二氮嗪，一种抗高血压药也称为强效抗高血糖药，可能象某些斯特汀化合物如LiptorTM，是HMG-CoA还原酶抑制剂，这些其它抑制剂中将鉴定到可用于本发明的这类抑制剂，对本发明所述的脂肪营养不良产生额外的治疗效果。这类额外药物可以是或不是洛伐他汀的同类物，只要它们以类似洛伐他汀同类物的方式起HMG-CoA还原酶抑制剂的作用。
来普汀(瘦素)(Zhang等，Nature372425，1994)是一种蛋白激素，具有调节体重、代谢和和生殖功能的重要作用(见例如美国专利No.5,935,810)。此蛋白的质量约16kD，由肥胖(ob)基因编码。来普汀主要由脂肪细胞表达，但胃上皮和胎盘中的细胞也分泌瘦素。已知下丘脑区域高表达的瘦素受体在调节体重及T细胞和血管内皮细胞上有重要作用。对于肥胖和不肥胖人的研究显示血清瘦素浓度与机体脂肪的百分比呈强阳性相关，肥胖者与消瘦者相比，脂肪中的ob mRNA浓度较高。看来由于甘油三脂的积累而体积增大的脂肪细胞可合成越来越多的瘦素，给ob/ob小鼠(即因突变而不能合成瘦素的肥胖小鼠)每日注射重组的鼠或人瘦素导致在数天内摄食显著减少，一月内体重大约减少了50％。然而当将瘦素给予正常小鼠时，它们体重减轻、脂肪组织深度耗竭并呈现瘦肉量增加。已证明用瘦素治疗可促进脂肪组织的脂肪溶解，但对瘦肉组织无明显作用。鉴于这些结果，考虑本发明rhGH/斯特汀为基础的治疗可优选用向病人提供瘦素的治疗方案来加强。
为了在本说明书考虑的联合治疗中获得理想的治疗结果，通常可给予病人GH和斯特汀相关组合物和至少一种其它治疗药物(第三种治疗药物)，来减少发生脂肪异常堆积区域的大小，改善机体脂肪耗竭区域的外观、减少低血糖症、提高胰岛素的分泌和产生或改善其它参数。这些组合物以能有效产生所需治疗结果的联合剂量提供。此方法可包括同时给予rGH治疗、斯特汀类治疗组合物和第三种治疗组合物。可给予包含所有活性药物的一种组合物或药物制剂，或同时给予病人三种不同的组合物或制剂，其中一种组合物包含rhGH，第二种组合物包含斯特汀相关药物，第三种组合物包含第三种治疗药物。
或者，rhGH治疗先于或后于斯特汀治疗和/或第三种药物治疗几分钟至几周。在分别给予二种或多种治疗组合物的实施方式中，通常应保证各次给药之间的时间不要过长，这样斯特汀药物和rhGH和/或第三种药物仍能对细胞发挥有利的联合作用。此时，考虑给予所有三种组合物彼此在约12-24小时内，更优选彼此在约6-12小时内，最优选延迟时间仅在约12小时内。某些情况时，可能需要显著延长分别给药治疗之间的间隔时间，从几天(2、3、4、5、6或7天)到几周(1、2、3、4、5、6、7或8周)。
D.药物组合物按本发明给药的药物组合物可包括本发明所述的至少一种药用形式的人生长激素制剂，任选地与药学上可接受的载体混合。这些组合物可以能达到治疗目的的任何方法给予。为治疗HADDS或其它脂质分布异常疾病而给予本发明组合物的剂量和方案是本领域普通技术人员不难确定的。如上所述本领域技术人员可先采用目前医疗上所用的GH剂量和方案。对于其效果，本领域技术人员可具体参考以下记载医师桌面参考书第56版，第2818-2820页(GENOTROPIN)、3215-3215页(GEREF)、1930-1934页(HUMATROPE)、2419-2421(NORDITROPIN)、1417-1425页(NUTROPIN)、3225-3226页(SAIZEN)和3229-3231(SEROSTIM)，其内容各自纳入本说明书作参考。医师桌面参考书中的这些记载提供了关于可用于GH给药的剂型、给药途径和治疗方案的示范性指南。该参考书所述的方案、剂型、给药途径等不难加以改进，用于本发明。
本发明范围内的组合物，包括含至少一种本发明所述人生长激素或其衍生物、同类物或变体的所有组合物，其含量能有效达到预期目的。类似地，因为本发明的治疗方法考虑给予斯特汀为基础的药物加上人生长激素治疗的联合疗法，故也考虑本发明的所有药物组合物也含至少一种斯特汀药物或其同类物，其量为与人生长激素联合给予时能达到缓解脂肪营养不良一种或多种症状的有效量。
虽然各个体需要不同，但确定各组分有效量的最佳范围是本领域专业技术之内的事。生长激素通常的剂量包括每日约0.01-0.1mg/kg体重，常为1-6mg/天，皮下注射例如5-12周。当然，本领域技术人员可选择持续更长的时间，例如长达48周的治疗方案。当给予AIDS病人hGH抗HADDS治疗时，可同时给予其他AIDS治疗，或设计用于减轻本说明书所述脂肪营养不良症状的其它治疗。由于每日皮下注射给予AIDS病消瘦病人超生理剂量(＞5mg/天)hGH持续2-4年已证明是安全的，故考虑采用生长激素和至少一种斯特汀药物的联合疗法也可能在此期间内有效。虽然考虑每日连续给药，但当脂肪营养不良症状减轻时停止联合治疗可能是令人满意的。当然，在脂肪组织重新异常堆积的情况下可再开始这种治疗。
应理解本发明组合物的适当剂量取决于接受者的年龄、健康状况和体重，合并治疗的类型和治疗频率，以及所需达到的效果。然而如本领域技术人员所知和可确定，无须过多实验即可确定各个体的最佳剂量。这通常包括调整标准剂量，如病人体重轻要减少剂量。
如上所述，每次治疗的总剂量可分成多剂或单剂给予。可单独给予组合物，或联合给予治疗该疾病或该病其它症状的其它治疗。
因为可从本说明书提供的内容明白在广泛方面，本申请考虑联合疗法的临床应用包括，含生长激素制剂的第一组合物，和含斯特汀类药物的第二组合物。因此应将这类组合物配制成适合的药物组合物，即适合体内应用这种联合疗法的适当形式。通常这包括制备基本上没有热原质及可能对人体或动物有害的其它杂质的组合物。
一般需要采用适当的盐和缓冲液来产生稳定的给药载体便于靶细胞摄取。当将重组细胞导入病人体内时也采用缓冲液。本发明的水性组合物包含溶于或分散于药学上可接受的载体或水性介质的有效量的各种待用治疗剂。这种组合物也称为接种物。短语“药学上或药理上可接受的”指当给予动物或人时不会产生副作用、变态反应或其它不良反应的分子和成分。本说明书所用的“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂等。用于药学活性物质的这些介质和制剂是本领域熟知的。除了与治疗组合物不相容的任何常规介质或试剂外，都可考虑用于此治疗组合物中。也可在组合物中加入补充的活性成分。
本发明的活性组合物包含如上所述及本领域技术人员已知的生长激素的经典药物制品。斯特汀，如LipitorTM等也是本领域技术人员知道的。将通过任何常规途径给予本发明的这些组合物，只要通过该途径能达到靶组织。最常见的是，这些组合物配制成口服给药的剂型。然而，当口服给药有问题时，也可采用其它的常规给药途径，如皮下、静脉内、皮内、肌肉内、乳房内、腹腔内、气管内、眼内、眼球后、肺内(如终末释放)、气溶胶、舌下、鼻内、肛门内、阴道内或透皮给药，或在特定部位经手术植入。治疗包括单次剂量或多次剂量持续一段时间。
活性化合物可配制成游离碱或药学上可接受的盐、在适当混有表面活性剂如羟丙基纤维素的水中的溶液。也可配制成在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和油中的分散液。在通常的贮存和使用条件下，这些制品含有防腐剂以防止微生物生长。
适合注射用的药剂包括无菌水溶液或分散液和无菌粉末，打开即可用的无菌注射溶液或分散液。所有的剂型必须无菌和必须充分流动易装在注射器内使用。必须在制备和贮存条件下稳定，必须防腐能抵抗微生物如细菌和真菌的污染。载体可以是溶剂或分散介质，包括例如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，它们的合适混合物和植物油。可通过以下方式来维持适当的流动性，例如采用包衣剂如卵磷脂，分散体则通过维持所需的颗粒大小，以及使用表面活性剂。防止微生物的作用可采用各种抗菌或抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在很多情况下宜包括等渗剂，如糖或氯化钠。在组合物中采用延缓吸收剂，如单硬脂酸铝和明胶，可延缓可注射组合物的吸收。
将活性化合物以所需量加入到含上述各种其它成分的合适溶剂中，然后过滤除菌来制备无菌可注射溶液。通常，将各种无菌活性成分加入到含有上述基础分散介质和所需的其它成分的无菌载体中来制备分散体。就制备无菌可注射溶液用的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，可从预先过滤除菌的溶液产生活性成分加其它所需成分的粉末。
本说明书所用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗菌和抗真菌剂、等渗和延缓吸收剂等。用于药学活性物质的这类介质和药剂是本领域熟知的。除了与所述活性成分不相容的常规介质和药剂外，都可考虑使用。也可将补充的活性成分掺入到组合物中。
对于口服给药，本发明的治疗剂可与赋形剂掺合，以不可饮食的漱口水和牙粉形式使用。可将活性成分以所需量掺入到适当的溶剂如硼酸钠液(Dobell’sSolution)中来制备漱口水。或者，可将活性成分掺入到含有硼酸钠、甘油和碳酸氢钾的防腐洗剂中。也可用牙粉分散活性成分，包括明胶、糊膏、粉末和浆液。可将活性成分以治疗有效量加入到可含有水、粘合剂、磨料、芳香剂、起泡剂和保湿剂的糊状牙粉中。
可将本发明组合物配制成中性盐形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成的盐)，和与无机酸如盐酸、磷酸，或与有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的盐。与游离羧基形成的盐也可产生自无机碱，如氢氧化钠、钾、铵、铝、钙或铁，和有机碱如异丙胺、三甲胺、组胺、普鲁卡因等。
配制后，以与剂型相容的方式和治疗有效量给予溶液剂。不难以各种剂型，如可注射溶液、药物释放胶囊等给予制剂。对于胃肠道外水溶液给药，例如，当需要时应将溶液适当缓冲，用足够的盐或葡萄糖使液体稀释液等渗。这些特制的水溶液特别适合静脉内、肌肉内、皮下和腹腔内给予。
“剂量单位”定义为分散在合适载体中的确定量的治疗组合物。上文已描述了优选剂量的生长激素和斯特汀。胃肠道外给予一种或两种所述治疗化合物可先注射较大的量，然后持续输注来维持药物的循环治疗水平。本领域普通技术人员不难根据优良的医学实践和病人个体的临床情况来确定最佳有效剂量和给药方案。
给药频率将取决于药物的药代动力学参数和给药途径。本领域技术人员可根据给药途径和所需剂量确定优化的药物配方。见例如雷明顿药物科学，第18版(1990，Mack Publ Co，Easton PA18042)1435-1712页，其内容纳入本说明书作参考。这类制剂可能影响生理状况、所给药物的稳定性、体内释放速率和体内清除速率。根据给药途径，按照体重、体表面积或器官大小可计算出合适的剂量。本领域技术人员借助本说明书所述的剂量信息和试验及在动物或人类临床试验中观察到的药代动力学数据，无须过多实验即可常规作出需要确定合适治疗剂量的精密计算。
通过已建立的测定血浓度的试验，结合相关的剂量反应资料可确定合适的剂量。主管医师通过考虑影响药物作用的诸多因素，如药物的比活性、损伤的严重性、病人的反应、年龄、身体状况、体重、性别和饮食、感染的严重性、给药的时间和其它临床因素，来确定最后的剂量方案。随着研究的进行，将得到关于具体疾病和病情的适当剂量水平和治疗持续时间的进一步信息。
在某些实施方式中，可采用基因治疗方式利用病毒递送给予生长激素或其它蛋白质，可将单位剂量计算为要给予的病毒颗粒量。病毒剂量包括病毒颗粒的具体数目或空斑形成单位(pfu)。当实施方式包括腺病毒时，具体单位剂量包括103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013或1014pfu。由于存在感染缺陷颗粒，具体剂量有时可能更高(10-100倍)。
应理解本发明的药物组合物和治疗方法可应用于人类医学和兽医学。因此待治疗的对象可以是哺乳动物。优选人或其它动物。对于兽医，对象包括例如农场动物，包括牛、绵羊、猪、马和山羊；伴侣动物如狗和猫；外来和/或动物园动物；实验动物，包括小鼠、大鼠、家兔、豚鼠和仓鼠；及家禽如鸡、火鸡、鸭和鹅。
E.实施例以下包括的实施例显示了本发明的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例所描述的技术属于本发明人所公开的良好实施本发明的代表性技术，可认为构成了实施本发明的优选方式。然而，本领域技术人员受本说明书公开内容的启发可对所公开的具体实施方式
进行许多变化仍能获得相同或相似的结果，但这些仍属于本发明的构思和范围内。
选择具有长期HAART用药史(平均12个月)的表现HADDS症状包括水牛肩、向心性肥胖和周围肌肉消瘦、伴有疲劳、血浆甘油三脂和/或胆固醇水平升高的AIDS病人进行研究。
先用rhGH(SEROSTIM)以例如4mg/天的剂量(也可采用其它浓度如6mg/天)皮下注射对所有病人进行治疗。同时以40mg/天口服的剂量给予斯特汀治疗病人。该剂量是依据抗血脂目的常用的斯特汀药物平均剂量。给病人维持此方案三个月，每隔二周监测一次脂肪分布不良有无改善。在平行治疗中，只用rhGH和只用斯特汀治疗病人。三个月后在用rhGH和斯特汀联合治疗的病人中可见脂肪分布不良有明显改善，水牛肩综合征和腹部腰围减少了25-75％，但外周脂肪营养不良无改变。只接受rhGH或斯特汀的个体未见如联合治疗所见的脂肪分布不良的显著改善。体重稳定，机体总脂肪和血脂无相一致的变化，虽然游离脂肪量增加了5-10％。
经本发明方法的有效治疗，水牛肩和躯干肥胖症的体积和硬度显著降低。水牛肩和躯干肥胖症的体积和硬度的这种降低，优先见于用rhGH/斯特汀联合治疗的HADDS病人，大于只用rhGH治疗的病人(Torres等，Abstract32164第12届世界AIDS会议，日内瓦[Abstract32164]，1998；Torres，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1999；Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999；Mauss等，Antiviral Therapy4(Sup2)27[Abstract018]，1999；Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999；Milano等，Antiviral Therapy4(Sup2)41[Abstract 042]，1999)。Torres，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1995报告，4-6m/g天剂量的rhGH，治疗4个月显著降低了水牛肩的体积和硬度，减轻了躯干肥胖症，而外周脂肪营养不良无改变，同时游离脂肪量增加了5-10％。治疗期间，体重和机体总脂肪量或血脂无显著或相一致的变化。
综合在一起，上述临床研究证明，与基线相比，皮下给予3-6mg/天剂量的rhGH(SEROSTIM)，治疗12-24周，显著减少了异常堆积的脂肪。特别是证明SEROSTIM(rhGH)能减少腹部腰围(Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999)、内脏肥胖(Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999；Mauss等，AIDS12(Sup4)145，1998)、水牛肩(Torres，Abstractp32164第12届世界AIDS会议，日内瓦〔Abstract32164〕，1998；Tores等，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1999)，和孤立的脂肪瘤(Milano等，Antiviral Therapy4(Sup2)41[Abstract042]，1999)。经生物电阻抗分析测定，用rhGH(SEROSTIM)治疗也提高了瘦体重和体细胞量(Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999；Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am JClin Nutr69(6)1162-1169，1999)。预计采用斯特汀药物和rhGH联用对减轻脂肪营养不良症状更有效。此外，斯特汀可有效减少产生治疗效果所需rhGH的给药剂量和频率。
rhGH给药的综合副作用包括由于组织肿胀而致的手脂肿胀或感觉异常，禁食时葡萄糖和甘油三脂的短暂升高。考虑采用斯特汀治疗红物可减轻rhGH治疗的这些副作用。12周时，总胆固醇和禁食时甘油三脂显著下降，同时HDL胆固醇和葡萄糖升高，但这些变化实际上无临床意义(Engleson等，AntiviralTherapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999)。未见报导高血压或胰腺酶升高等其它表现。
受本说明书公开内容的启发，无须过多实验即可制备和实施本申请公开的和要求保护的所有组合物和/或方法。虽然本发明的组合物和方法已借助优选实施方式作了描述，但本领域技术人员知道可对所述组合物和/或方法，及所述方法的步骤或各步骤的顺序实施各种改变，但这不背离本发明的构思、精神和范围。更具体说，应明白，可用某些在化学上和生理学上相关的药物替代本说明书所述的药物，仍能获得同样或类似的结果。本领域技术人员所知的所有这些类似的替代和修改都视为属于本说明书所附属权利要求书所限定的本发明的精神、范围和构思之内。
本说明书中所引用的参考文献对本说明书的描述提供示范性程序或其它补充，它们均全文纳入本说明书作参考。
权利要求
1.一种治疗患有脂肪分布异常疾病病人的方法，其特征在于，该方法包括给予所述病人生长激素和斯特汀为基础的治疗药物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物和生长激素以单一的药物组合物提供。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物以第一种药物组合物提供，所述生长激素以第二种药物组合物提供。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述生长激素是重组生长激素。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述生长激素从动物分离得到。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物是洛伐他汀或洛伐他汀同类物。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物选自阿托伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述脂肪分布异常疾病是非-HIV-相关的脂肪营养不良。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述脂肪分布异常疾病是HIV-相关的脂肪分布异常疾病。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述HIV-相关的脂肪分布异常疾病选自致动脉粥样硬化性脂质异常血症，高甘油三脂血症，胆固醇水平升高，低密度脂蛋白胆固醇水平升高，高密度脂蛋白胆固醇水平降低。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述病人表现伴有糖尿病相关的肥胖症的症状。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述症状选自胰岛素抗药性、β-细胞功能失调、第I期胰岛素分泌丧失、葡萄糖耐量受损、内源性葡萄糖产生升高、葡萄糖异生过量。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述病人患有II型糖尿病。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述病人还接受糖尿病治疗，所述方法包括给予胰岛素促分泌剂。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述胰岛素促分泌剂选自磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙胺、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、氯茴苯酸、瑞格列奈、普兰林肽、吗啡林胍、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱、氯贝胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸酯、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述胰岛素促分泌剂是葡萄糖不依赖的胰岛素促分泌剂，给予所述生长激素、斯特汀和胰岛素促分泌剂的联合效应，能达到葡萄糖依赖的双相释放特征并可减少低血糖产生的胰岛素释放模式。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述病人还接受来普汀治疗。
18.一种可用于联合治疗脂肪分布异常疾病的治疗药物，所述组合物包含A.第一组合物，其含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的重组生长激素；和B.第二组合物，其含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的斯特汀药物。
19.如权利要求18所述的治疗药物，其中所述生长激素和所述斯特汀药物配制成单一制剂。
20.如权利要求18所述的治疗药物，其中所述生长激素配制在与所述斯特汀药物制剂不同的制剂中。
21.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述生长激素制剂和所述斯特汀药物制剂均配制成可注射的剂型。
22.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物制剂配制成口服给药用剂型。
23.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物是洛伐他汀或其同类物。
24.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物选自阿托伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀。
全文摘要
本发明是关于治疗脂肪营养不良的方法和组合物。所述方法可治疗HIV和非HIV病人的脂肪营养不良。更具体说，所述方法涉及采用生长激素和斯特汀联合疗法来有效治疗脂肪营养不良。
文档编号A61K38/27GK1917871SQ200580004821
公开日2007年2月21日 申请日期2005年1月26日 优先权日2004年1月29日
发明者G·德鲁卡 申请人:应用研究系统Ars股份公司
技术领域：
本发明总的涉及治疗脂肪营养不良的方法和组合物。更具体说，本发明涉及采用含有生长激素和一种或多种斯特汀药物的组合物联合疗法来治疗脂肪营养不良。
相关技术背景脂肪营养不良是由脂肪细胞缺陷和/或破坏所致的一种综合征。此病的特征是脂肪选择性丢失，伴有高甘油三脂血症、肝脏脂肪变性及常导致糖尿病的严重胰岛素抗药性(Rossini等，Metabolism.，26637-650，1977；Reitman等，Trends Endocrinol Metab.，11410-416，2000；Arioglu等，Ann Intern.Med.，133263-274，2000)。
先天性脂肪营养不良是一种常染色体隐性遗传性疾病，其特征是脂肪组织缺陷和伴有对胰岛素的严重抗药性，导致高胰岛素血症、高血糖症和脂肪性肝肿大(Seip等，Acta Paediatr.Suppl.4132-28，1996)。除此种先天性疾病外，脂肪营养不良也可以是获得性疾病。最为重要的是，已认识到高活性抗逆转录病毒治疗(HAART)的临床显著效益受到了HIV-脂肪营养不良综合征发生的阻碍。此综合征有各种命名，包括HIV-相关的脂肪营养不良综合征/代谢障碍综合征(HADDS)，此术语所指内容将在下文中描述。HIV-相关性脂肪重分配综合征(HARS)被认为是HADDS的一个亚组，其主要特征是内脏脂肪性肥大。
HADDS的特征是腹部脂肪沉积、脂肪组织萎缩、脂肪代谢并发症如高脂血症、早熟的动脉粥样硬化病变和糖尿病(Carr A等，J Acquir Defic Syndr.，33571-576，2003)，还可能伴有瘦体重损耗。此综合征目前通常占接受HIV感染治疗病人的60％以上，特别是用HIV治疗药物如蛋白酶抑制剂及采用核苷类逆转录酶抑制剂如司他夫定(stavudine)治疗的那些个体。如Kravcik(HIV ClinTrials，1(3)37-50，2000)所指出的那样，迄今HIV-脂肪营养不良综合征的致病机理仍然不能解释，大多数针对脂肪变化的治疗仍不成功。
因此，HAART有效地延长获得性免疫缺陷综合征(AIDS)个体生命的同时，将此病转变成慢性、高发病率的获得性HIV-相关性脂肪营养不良综合征，因此这种获得形式的脂肪营养不良发病率惊人地增高(Carr等，AIDS.12F51-F58；1998；Carr等，N Engl J Med.3391296，1998；Carr等，Lancet.3532093-2099，1999；Miller等，Lancet，351871-875，1998；Vigouroux等，DiabeteMetab.25225-232，1999)。此病中所见的脂肪代谢导常也可导致HIV病人动脉粥样硬化加速的发生率增长(Barbaro等，Clin Therap.25(9)2405-18，2003；Sklar等，N Engl J Med.，349(21)2065-7，2003；Friis-Moller等，N Engl J Med.349(21)1993-2003，2003)。因此，HIV-相关性脂肪营养不良是一种多因素综合征，目前对此病尚无广泛的治疗方法。
动脉粥样硬化脂肪代谢失调(AD)是脂肪营养不良综合征的中心性缺陷，也被认为是一种独立的冠心病危险因子。它还与脂肪营养不良综合征所包括的疾病的发病机理有关并在其中起作用，这类疾病包括但不限于高甘油三脂血症(HTG)、胰岛素抗药性(IR)、葡萄糖耐量受损(IGT)和II型糖尿病(DM-2)。因为AD在与HIV-相关脂肪营养不良的有关代谢异常进展中起着中心作用，因此有效治疗AD极其重要。HIV非感染人群的研究资料提示，脂肪营养不良还可能包括总胆固醇、低密度脂蛋白(LDL)胆固醇和甘油三脂水平升高，高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平降低。由于这些已确定的危险因素，国家胆固醇教育计划(NCEP)公布了对处于危险中的(非HIV-感染)病人治疗AD的指南。
在非HIV病人中，肥胖被认为与生长激素的分泌减少有关(Veldhuis等，JClin Endocrinol Metab.803209-22，1995；Veldhuis等，J Clin Endocrinol Metab.7251-59，1991；Ghigo等，Metabolism.41560-563，1992)，其中显示生长激素浓度与超重和机体脂肪过量呈反向变化。HIV-脂肪营养不良与正常的肥胖不同，因为如上所述HIV-脂肪营养不良中脂肪的堆积发生了重分布，且脂肪营养不良的个体无超重倾向。近年证明了HIV脂肪营养不良和内脏脂肪堆积增加的个体其生长激素分泌减少(Rietschel等，JCEM.86504-510，2001)。
因此，在HAART中加入蛋白酶抑制剂和核苷逆转录酶抑制剂大大改善了AIDS病人的预期寿命。不幸的是，与预期寿命增加相伴随，这些病人发生继发性并发症也随着增加，导致异常脂质分布疾病。HAART的效力毫无疑问，因而可继续使用来延长AIDS病人的生命。然而这将导致需要提供其它治疗来处理AIDS病人长时间维持HAART治疗所产生的副作用。HAART这些副作用中最显著的是需要缓解脂肪营养不良和其它HAART-相关性的代谢异常。脂肪营养不良也见于非HIV病人。因此，需要鉴定新的有效方法来治疗性干预HIV-相关的和非HIV-相关的脂肪营养不良。
发明概述本发明涉及治疗脂肪营养不良的方法和组合物。在具体实施方式
中，本发明提供一种治疗患有脂肪分布异常疾病的病人的方法，该方法包括给予该病人一种生长激素和一种以斯特汀(statin)为基础的治疗药物。斯特汀为基础的药物(斯特汀药物)和生长激素宜以单一药物组合物形式提供。其它实施方式考虑在第一种药物组合物中提供斯特汀药物，而在第二种药物组合物中提供生长激素。所述生长激素较佳为重组生长激素。然而所述生长激素也可分离自动物。斯特汀为基础的药物可以是本领域技术人员已知的任何斯特汀药物或斯特汀的同类物。斯特汀为基础的药物优选洛伐他汀(lovastatin)或洛伐他汀同类物。在示范性实施方式中，斯特汀为基础的药物选自阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)和氟伐他汀(fluvastatin)。
在
具体实施例方式
中，脂肪异常分布疾病是非HIV-相关的脂肪营养不良。在特别优选实施方式中，本发明的方法可用于治疗HIV-相关的脂肪异常分布疾病。更具体说，HIV-相关的脂肪异常分布疾病选自动脉粥样硬化性脂质异常血症，高甘油三脂血症，胆固醇水平升高，低密度脂蛋白(LDL)胆固醇水平升高，高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平降低。在其它实施方式中，此法用于治疗伴有糖尿病相关肥胖症状的患者。更具体地说，糖尿病相关肥胖症选自胰岛素抗药性、β-细胞功能异常、第一期胰岛素分泌缺失、葡萄糖耐量受损(IGT)、内源性葡萄糖产生升高、葡萄糖异生过量。在具体实施方式
中，本发明方法用于治疗II型糖尿病患者。本发明方法可有效地用于治疗已用糖尿病传统方法治疗的个体。例如，本发明方法包括施用胰岛素促分泌剂。用作抗糖尿病药的促分泌剂是本领域技术人员熟知的，包括但不限于磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙胺、格列美脲(glimepiride)、格列吡嗪(glipizide)、格列本脲(glyburide)、氯茴苯酸(meglitinides)、瑞格列奈(repaglinide)、普兰林肽(pramlintide)、吗啡林胍(morphilinoguanide)、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱(carbachol)、氨甲酰甲胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸醋、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。根据这些分子进行合理药物设计产生的衍生物、同类物和其它分子也可用作促分泌剂。
在
具体实施例方式
中，胰岛素促分泌剂是非葡萄糖依赖性的胰岛素促分泌剂，给予生长激素、斯特汀和胰岛素促分泌剂的联合作用可产生胰岛素释放，其模式能够获得葡萄糖依赖的双向释放特征，降低了发生低血糖的可能性。
在某些实施例中，本发明的方法还可包括用来普汀(瘦素)治疗患者。
本发明的另一方面提供了用于联合治疗异常脂肪分布疾病的治疗藥物，該组合物包含第一组合物，它含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的重组生长激素；第二组合物，它含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的斯特汀为基础的药物。生长激素和斯特汀药物可考虑配制在单一制剂中。然而优选将生长激素配制在与斯特汀药物制剂分开的制剂中。在具体实施方式
中，生长激素制剂和斯特汀制剂可配制成可注射的制剂。在优选实施方式中，斯特汀药物配制成口服给药制剂。在具体实施方式
中，可将治疗药物装在试剂盒中，该试剂盒还装有各种治疗组分给药用的器具。该试剂盒可专门装有洛伐他汀或其同类物作为斯特汀药物。在具体实施方式
中，治疗组合物中的斯特汀药物选自阿托伐他汀(atorvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)和氟伐他汀(fluvastatin)。本发明的组合物和方法可采用一种斯特汀药物或者可采用两种或多种此类药物。
本发明的其它特征和优点可从以下详细描述了解得更清楚。然而应理解此种详述和具体实施例虽然表明了本发明的优选实施方式，但只是阐述性的，因为本领域技术人员明白，依据此详细描述所作出的各种变化和修改都在本发明的构思和范围内。
优选实施方式的描述获得性脂肪营养不良(或脂肪过度生长)是AIDS病人的重要问题，导致经受HAART抗HIV感染治疗的个体预后极差。其它形式的脂肪营养不良，如伴随糖尿病相关并发症的肥胖症相关的脂肪营养不良，也是对当前医学界的一种明显挑战。HIV和非HIV病人的所有这些脂肪营养不良和脂质分布疾病总称为“脂质分布异常疾病”。本发明提供治疗肥胖症的新方法。这些治疗方法依据生长激素和以斯特汀为基础的治疗高脂血症的药物，如LipitorTM(阿托伐他汀)、PravacholTM(普伐他汀)、ZocorTM(辛伐他汀)、MevacorTM(洛伐他汀)和LescolTM(氟伐他汀)。这两类药物(即生长激素和斯特汀类)是本领域技术人员熟知的，因此目前认为这些药物可以联用来实现脂肪营养不良症状的有效治疗缓解。本发明探索了这一新发现，阐明了用于达到这种治疗效果的新方法和组合物。本说明书下面进一步详述这类疾病、治疗方法和组合物。
A.本发明所治疗的疾病如上所述，绝大多数接受HAART治疗的HIV病人经历了HADDS，包括脂肪组织在特定贮存区域的病理性堆积。这种HADDS的病理性脂肪组织堆积也可伴有某些区域脂肪组织的异常损耗(脂肪营养不良或脂肪萎缩)，伴有或不伴有代谢异常、早熟的动脉粥样硬化病损、瘦体重损耗和/或其它生理异常。包括联合给予生长激素和斯特汀类药物的本发明方法可治疗HADDS。已证明这种治疗可减轻、缓解或纠正HADDS相关的任何症状。
因此，在某些实施方式中，考虑用本发明方法来减轻具有此症状病人的腹部(特别是内脏脂肪组织区室中)脂肪组织异常堆积(Miller等，Lancet.21，351(9106)871-875，1998；Kotler等，J Acquired Immun Defic Syndr.20228-237，1999；Kotler等，HIV/AIDS，1999Annual Update，85-92，hiv.medscape.com.1999；Engelson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Englemson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999)。HADDS病人在颈后区(“水牛肩”)、下颌下区(“马颈”)、胸部乳房区和/或锁骨上区也可存在异常的脂肪堆积，和/或皮下脂肪瘤(有包膜的良性脂肪肿瘤，单发或多发)。考虑本发明包括至少一种生长激素组合物和一种斯特汀类治疗药物(如LipitorTM、PravacholTM、ZocorTM、MevacorTM和LescolTM或洛伐他汀的其它同类物)的联合疗法，将能减少或消除异常的脂肪组织，从而减少腹部(内脏)脂肪贮存部位、颈后、下颌下、胸部乳房、锁骨上贮存部位之一个或多个区域的脂肪贮存体积或数量，和/或皮下脂肪瘤。
除了减轻以上异常肥胖外，本发明的方法还包括缓解HADDS病人的脂肪萎缩。已知HADDS病人的其它特定部位可发生异常的皮下脂肪组织损耗，称为“外周脂肪营养障碍”(或脂肪萎缩)。这种脂肪损耗通常见于面部(颊部、腮部、耳廓脂肪垫)，及肢体、躯干和/或臀部区域周围的皮下脂肪组织。因此，本发明特别考虑给予生长激素和至少一种斯特汀类药物联合治疗来减轻HADDS伴有的皮下脂肪损耗。
某些HADDS病人还存在代谢异常(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-1883，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract 11]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)，伴有脂质和/或糖代谢异常。临床表现包括空腹高甘油三脂血症、高脂血症、胰岛素/葡萄糖轴异常(空腹胰岛素升高、C-肽升高、胰岛素抗药或胰岛素敏感性降低)伴有或没有明显的糖尿病(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-83，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract11]，1999；Henry等，Lancet3511328，1998；Henry等，Lancet3521031-1032，1998；Grunfeld，Antiviral Therapy4(Sup2)7[Abstract004]，1999)。本发明方法可用于治疗一种或多种这类代谢功能障碍。
本发明可特异性治疗的另一类疾病包括HADDS相关的冠心病(CHD)。有初步研究报导提出，HADDS病人显示有患冠心病(CHD)危险增加的临床前证据。CHD的临床前指标包括用电子束计算机体层摄影术(EBCT)定量的冠状动脉钙化(CAC)增加，冠脉外指标如经超声图像术定量的颈动脉内膜中层增厚(IMT)和血流受损介导的肱动脉扩张，这意味着内皮功能障碍，可能导致动脉粥样硬化和CHD。在给予HIV蛋白酶抑制剂(PI)治疗后发生腰围异常增大伴内脏脂肪组织异常堆积的8名HADDS病人中，进行了EBCT，Kosmiski等(Antiviral Therapy4(Sup 2)49[Abstract056]，1999)报导的平均CAC评分与可鉴定到的病损斑负荷最少相一致。还有初步研究报导表明接受PI的HIV病人出现了异常的颈动脉IMT(Maggi等，Antiviral Therapy4(Sup2)39[Abstract038]，1999)和受损的肱动脉血流介导的扩张(Stein，ConferenceNews Reports，AIDS Weekly via NewsRx.com(1999，11月22日)，意味着内皮功能障碍。本发明的治疗方法可用于治疗上述HADDS相关的CHD的一种或多种症状。
某些HADDS病人还显示不随意的体重减轻伴瘦体重消耗(AIDS消瘦或恶病质)，也可能有瘦体重消耗但无体重明显减轻(隐伏性消瘦)。本发明的方法可用于使此类个体产生有用的体重增加。可用本发明方法治疗的HADDS或脂肪营养不良综合征病人的其它生理异常包括痛风和胰腺炎(推测是由于严重的高甘油三脂血症所引起)、肝脂肪变性(可能反映了慢性乳酸酸中毒)、性腺功能减退、和可能的其它激素代谢异常(Henry等.，Lancet3511328，1998；Henry等.，Lancet3521031-1032，1998；Brinkman.，Antiviral Therapy4(Sup2)15[Abstract 009]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)。HADDS和脂肪营养不良综合征可伴有或可不伴有其它异常，如皮肤异常(如头发稀疏、脱发、脆性头发、皮肤干燥、指甲异常、趾甲内生)，凝血综合征疾病可导致血友病人出血增加，髋关节骨质疏松或无血管坏死，外周神经疾病，恶心、疲劳、体重减轻，慢性腹泻，发热，痛经、月经失调，损伤性性功能障碍(性欲减退、勃起功能障碍)和类似佩罗尼病的生殖器异常(Carr等，AIDS.12F51-58，1998；Carr等，Lancet.1311881-1883，1998；Carr等，Lancet.353(9170)2093-2099，1999；Carr等，Antiviral Therapy4(Sup2)19[Abstract 11]，1999；Lipodystrophy Rapid Report，1999)。本发明的联合治疗方案在缓解某些或所有这些HADDS相关病理上证明是有用的。
除了HIV病人所表现的脂肪营养不良外，本发明方法还可用于治疗非HIV患者的肥胖相关性脂肪营养不良。
B.用于本发明方法的组合物本发明的方法采用生长激素和斯特汀相关药物合并用药来有效治疗脂肪营养不良症。考虑用本发明的联合疗法可减轻本说明书所例举的一种或多种脂肪营养不良症状。因为曾采用生长激素和斯特汀相关药物二者来治疗其它疾病，本领域技术人员能够不难地采取现有的组合物和治疗方案用于本发明。简单地借助实施例，以下章节描述了可用于本发明的示范性生长激素和斯特汀相关组合物。
a.生长激素用于本发明治疗方法的活性药物之一是生长激素。所用的生长激素优选人生长激素。人生长激素也称为促生长激素(somatotropin)，是一种由垂体前叶促生长细胞产生和分泌的蛋白激素。其分泌受释放因子即生长激素释放激素(GHRH)和抑制因子生长抑素(somatostatin)的调节。人生长激素通过其对蛋白质、糖和脂质代谢的作用在躯体生长上起着关键作用。
人生长激素是一条191个氨基酸组成的多肽链(Bewley等，Int J Pept ProteinRes4(4)281-287，1972)，含两个二硫键，一个位于Cys-53与Cys-165之间，形成该分子中的大环，另一个位于Cys-182与Cys-189之间，形成靠近C-末端的一个小环。Martial等(Science10205(4406)602-607，1979)报导了证实该氨基酸序列的DNA序列。纯化的hGH的冻干形式是白色无定形粉末。易溶解于pH＞7.2的水性缓冲稀释液中(浓度＞10mg/L)。
在溶液中，hGH主要以单体形式存在，一小部分为二聚体和高分子量寡聚体。在某些条件下，可诱导hGH形成较大量的二聚体、三聚体和更高的寡聚体。hGH的几种衍生物是已知的，包括天然产生的衍生物、变体和代谢产物、降解产物，主要是生物合成的hGH和用遗传方法产生的经工程改造的hGH衍生物。天然产生的hGH衍生物的一个例子是GH-V，在胎盘中发现的一种生长激素变体。对该基因簇其它成员的描述见Chen等，Genomics4(4)479-497，1989。
任何hGH衍生物，包括在体内长效的衍生物都可用于实现本发明的目的，只要它保留了hGH的生物学活性。此外，考虑也可采用GH衍生物的混合群。
甲硫酰hGH是通过重组DNA技术产生的第一种形式的hGH，可用于本发明。此化合物是在其N-末端含有一个额外甲硫氨酸残基的hGH衍生物(Goeddel等，Nature281(5732)544-548，1979)。其它可采用的GH是天然产生的hGH变体，称为20-k-hGH。此hGH变体据报导发生在垂体中以及血流中(Lewis等，JBiol Chem25253(8)2679-2687，1978；Lewis等，Biochem Biophys Res Comm.2992(2)511-516，1980)。此化合物因信使核糖核酸的交替剪接而缺失了Glu-32至Gln-46的15个氨基酸残基(DeNoto等，Nucleic Acids Res9(15)3719-3730，1981)。此化合物具有hGH的许多但不是所有的生物学性能。此衍生物可用于本发明的方法和联合治疗组合物中。
垂体制造了20k-hGH并将其分泌到血液中。它占成人输出生长激素的约5％和儿童输出生长激素的约20％。它具有与22kD生长激素相同的生长促进活性，据报导具有与22kD生长激素相当或更强的脂肪分解活性。它能以22kD生长激素相同的亲和力结合生长激素受体，具有22kD激素十分之一的生乳(象催乳素那样)生物活性。与22kD不同，20-k-hGH的抗胰岛素活性弱。
一些hGH衍生物得自该分子的蛋白水解修饰。hGH的主要代谢途径涉及蛋白水解。hGH中围绕残基130-150的区域对蛋白水解极其敏感。已描述了几种在此区域中有缺口或缺失的hGH衍生物(Thorlacius-Ussing，Neuroendocrinology，45(3)233-242，1987)。此区域位于hGH的大环中，切割此区中的肽键导致产生由Cys-53与Cys-165之间二硫键相连接的两条链。据报导许多此二链形式衍生物的生物学活性提高(Singh等，Endocrinology94(3)883-891，1974)。人工方法已利用酶产生了许多人生长激素的衍生物。胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及其它酶已被用于在hGH分子的不同位点修饰hGH(Lewis等，Endocrinology101(5)1587-1603，1977；Graff等，J Biol Chem 2572365，1982)。一个称作双链合成代谢蛋白质(2-CAP)的这种衍生物，是通过用胰蛋白酶的控制性蛋白水解而形成的(Becker等，Abstract No.342，第71届年会，内分泌协会，Seattle，WA，1989年6月)。发现2-CAP具有与完全hGH分子极不同的生物学性能，即主要保留了hGH的生长促进活性，但消除了对糖代谢的大多数作用。
在适当条件下，蛋白质中的天冬酰胺和谷氨酰胺残基对脱酰胺化反应敏感。已证明垂体hGH经历此种反应，导致Asn-152转变为天冬氨酸，及较低程度的Gln-137转变为谷氨酸(Lewis等，JBiol Chem25256(22)11645-11650，1981)。脱酰胺后的hGH显示对枯草杆菌蛋白酶的蛋白水解敏感性改变，提示脱酰胺可能在引导hGH蛋白水解切割中具有生理学意义。已知生物合成的hGH在某些贮存条件下发生降解，导致在不同的天冬酰胺残基(Ans-149)上脱酰胺。这是脱酰胺的主要位点，但也观察到Asn-152上的脱酰胺(Becker等，Biotechnol Appl Biochem10(4)326-337，1988)。合成的hGH未见报导Gln-137脱酰胺。
蛋白质中的甲硫氨酸对氧化敏感，主要对亚砜敏感。垂体产生的和生物合成的hGH二者均经历Met-14和Met-125处的亚砜氧化(Becker等，BiotechnolAppl Biochem10(4)326-337，1988)。据报导垂体而非生物合成的hGH中Met-170发生氧化。发现脱酰胺的hGH和Met14亚砜化的hGH二者均显示了完全的生物学活性(Becker等，Biotechnol Appl Biochem10(4)326-337，1988)。已通过酶作用或通过遗传方法产生了截短形式的hGH。通过控制胰蛋白酶活性而产生的2-CAP含有已去除的hGHN-末端的前8个残基。通过基因修饰然后在适当宿主中表达产生了其它截短形式的hGH。去除其前13个残基产生了具有不同生物学性能的一种衍生物(Gertler等，Endocrinology72118(2)720-6，1986)，此衍生物中多肽链没切断。
本发明所用的术语“人生长激素”旨在包括上述天然产生的衍生物，包括但不限于20kD和22kD两种人生长激素、GH-V和Chen等(Genomics4(4)479-497，1989)所描述的人生长激素基因座的其它成员。该术语还包括其保留了生长激素生物学活性、即作为生长激素受体激动剂活性的功能性衍生物、片段、变体、同类物或其盐。换句话说，它们能结合生长激素受体启动该受体的信号传导活动。
本说明书所用的术语“功能性衍生物”包括可用本领域已知方法从功能基团如氨基酸残基的侧链基团或N-或C-末端基团制备的衍生物，它们包括在本发明中，只要它们在药学上是可接受的，即它们不会破坏本说明书所述的hGH的生物学活性，即能够与hGH受体结合并启动受体的信号传导和不会使含此类衍生物的组合物具有毒性。衍生物可以是化学分子，如糖或磷酸残基，只要该衍生物保留了hGH的生物学活性和在药学上是可接受的。
例如，衍生物可包括羧基的脂肪族酯、羧基与氨或伯胺或仲胺反应产生的酰胺、氨基酸残基的游离氨基与酰基分子(如烷酰基或碳环芳酰基)形成的N-酰基衍生物或游离羟基(如丝氨酰或苏氨酰残基的游离羟基)与酰基分子形成的O-酰基衍生物。这类衍生物也可包括，例如聚乙二醇侧链，其可掩蔽抗原性位点和延长分子在体液中的存留时间。
特别重要的是，生长激素经衍生或与络合剂结合而能长期存留。例如，聚乙二醇化或经基因工程改造的生长激素在体内维持长时间的活性，可用于治疗HADDS，或本发明所述的其它脂质分布异常疾病。半衰期延长的示范性hGH组合物包括，例如Alkermes/Genentech销售的Nutropin DepotTM，一种聚交酯—共乙交酯胶囊包裹的缓释型hGH，(Cook等，J Clin Endocrinol Metab.87(10)4508-4514，2002)和AlbutropinTM(HGS)，一种正在临床试验中的hGH白蛋白融合物(Osborn等，EurJPharmacol.456(1-3)149-58，2002)。
已分离并鉴定了N-末端乙酰化的hGH(Lewis等，Endocrinology104(5)1256-1265，1979)。不清楚酰化是否有调节作用或只是简单地有利于纯化，然而预期这可使该分子以类似其它hGH衍生物的方式显示抗HADDS活性。
术语“盐”，本说明书指hGH分子或其同类物的羧基盐或其氨基的酸加成盐。可用本领域已知方法形成的羧基盐包括无机盐，如钠盐、钙盐、铵盐、铁或锌盐等，及与有机碱如胺例如三乙醇胺、精氨酸、赖氨酸、哌啶、普鲁卡因等形成的盐。酸加成盐包括，例如与无机酸如盐酸或硫酸形成的盐，及与有机酸如乙酸或草酸形成的盐。当然，任何这些盐必须保留hGH的与本发明相关的生物学活性，即能结合hGH受体并启动受体信号传导。
本发明的生长激素“片段”指该分子的任何亚组，即保留了所需生物学活性的较短肽。通过去除hGH分子任何一末端的氨基酸并测定所得产物的hGH受体激动剂性能不难制备这些片段。用于从多肽N-末端或C-末端一次去除一个氨基酸的蛋白酶是已知的，因此只涉及用常规实验来测定所得片段是否保留了所需的生物学活性。
此外，具有hGH受体激动剂活性的多肽，即hGH、其同类物或变体、盐、功能衍生物或片段，也可含有侧接该hGH多肽的其它氨基酸残基，只要所得分子保留了该核心多肽的hGH受体激动剂能力，即可测定这类侧接残基是否影响了该核心多肽基本的和新型的特征。术语“基本包括”，当指某特定序列时，意味着可存在不影响该特定序列基本和新型特征的其它侧接残基。
本发明所述的人生长激素“变体”指与其完整多肽或片段基本相似的分子。可用本领域熟知的变体肽直接化学合成方法常规制备变体肽。当然，变体人生长激素以具有与hGH相似的hGH受体结合和信号启动活性为佳，因此可望具有与hGH相似的抗HADDS活性。
可通过在编码合成的人生长激素衍生物的DNA中进行突变来制备人生长激素的氨基酸序列变体。这类变体包括，例如氨基酸序列中残基的缺失、或插入或取代。也可进行缺失、插入和取代的组合来获得最终构建物，只要该最终构建物具有所需活性。显然，在编码变体肽的DNA中进行的突变必须不会改变读框，优选不会产生能产生二级mRNA结构的互补区(见欧洲专利出版物No EP 75,444，其全部内容纳入本说明书作参考)。
通常在编码肽分子的DNA中进行核苷酸定点诱变，产生编码变体的DNA，然后在重组细胞培养物中表达，从而在基因水平上制备这些变体(见Adelman等，DNA2(3)183-193，1983)。变体通常应显示与非变体肽性质相同的生物学活性。
本发明的人生长激素“同类物”指与完整分子或其活性片段基本相似的非天然分子。用于本发明的人生长激素同类物优选至少与斯特汀合用时，更优选单独使用时，能显示抗HADDS活性。
在可用于获得本发明所用的hGH同类物的蛋白质中产生氨基酸取代的例子，包括任何已知的步骤，例如可参见如下美国专利授于Mark等的RE33,653；4,959,314；4,588,585和4,737,462；授于Koths等的5,116,943；授于Namen等的4,965,195；授于Lee等的5,017,691，以及美国专利4,904,584(Shaw等)描述的赖氨酸取代的蛋白质。
在可用于本发明的能与人生长激素受体结合并启动信号传导的物质中，所有那些生长激素同类物和模拟物均有文献报导，例如可参见美国专利5,851,992；5,849,704；5,849,700；5,849,535；5,843,453；5,834,598；5,688,666；5,654,010；5,635,604；5,633,352；5,597,709和5,534,617。
hGH变体或同类物优选具有一核心序列，该序列与天然序列或其生物学活性片段的序列相同，其氨基酸序列与天然的氨基酸序列至少有70％相同，并保留了其生物学活性。这种序列更优选与天然序列至少80％相同，至少90％相同，或最优选至少95％相同。
虽然人生长激素最初获自尸体垂体腺，这些制品不是电泳均一的，但用50％纯的制品治疗的病人可产生血清抗体，其免疫原性归因于无活性成分。重组DNA技术可以在各种不同系统中产生无限制提供的hGH产品。只存在少量污染的蛋白质有利于从培养基中纯化得到hGH。事实上已证明在反相HPLC柱上经一步纯化得到实验室规模纯化的hGH(Hsiung等，Biotechnology7267，1989)。
Serono S.A.生产的重组人生长激素SEROSTIM已经被FDA批准用于治疗HIV病人的体重减轻和消瘦。Genentech Inc.(South San Francisco，CA)生产的PROTROPIN结构上与hGH天然序列略有不同，其在N-末端含有一额外的甲硫氨酸残基。重组hGH一般以装有hGH和其它赋形剂如甘油和甘露醇的冻干形式的小瓶销售。伴随提供的稀释液小瓶使病人能在给药之前将该产品重建至所需浓度。重组hGH也可装在其它熟知的容器如预填装注射器等中销售。
在
具体实施例方式
中，考虑本说明书所述方法采用Serono S.A.生产的重组人生长激素SEROSTIM。此产品最近已获FDA全面批准治疗HIV伴有消瘦或恶病质病人的消瘦综合征。这类生长激素组合物在本发明的方法中将是有用的。先前曾注意到具有显著AIDS消瘦的许多病人能耐受皮下注射较高剂量(6mg/天)的重组生长激素(rhGH；Serono的SEROSTIM)不会产生副作用而不需要减少剂量或停止治疗(Schambelan等，Ann Intern Med125(11)873-882，1996)。
本领域技术人员可改变rhGH的剂量并监测病人因施用rhGH所发生的不良症状。特别考虑患者会接受日剂量1mg/天、2mg/天、3mg/天、4mg/天、5mg/天、6mg/天、7mg/天、8mg/天、9mg/天、10mg/天或更多的rhGH。可以单剂量给予这种治疗，或者分成多个剂量在一天的设定间隔内给予。还可考虑按非以天计的时间间隔给予GH组合物。例如可每隔一天或每周一次给予患者GH治疗。通过监测以下症状来评估GH的不良作用，这些症状包括但不限于组织肿胀、关节僵硬、关节疼痛和/或感觉异常。临床医师能够利用这类症状作为指导参数来评估是否应调整(上调或下调)给定的GH剂量。
近年来本领域技术人员进行了剂量试验，以研究rhGH对HADDS病人的其它效应和安全用量。因此AIDS病人所用的GH剂量是本领域技术人员熟知的。不难采纳这类研究所定的剂量用于本说明书所述的方法。
Windisch等(Ann Pharmacother 32(4)437-445，1998)报导了HIV伴有的消瘦，其特征是体重减轻、瘦体重消耗和体脂肪储存，导致肌肉虚弱和器官衰竭。虽然FDA批准了用重组生长激素治疗HIV伴有的消瘦，但其副作用情况与其它重组生长激素产品相似。用重组生长激素控制HIV/AIDS病人消瘦的试验受到鼓励。自1996年以来超过10,000位的HIV/AIDS消瘦病人接受SEROSTIM的后销售经验，表明三个月疗程对大多数AIDS消瘦病人有效。
鉴于先前SEROSTIM对AIDS消瘦疗效的发现，考虑给予rhGH至少合用一种斯特汀药物的联合治疗的本发明疗法，可定期用于控制HIV相关的或其它的脂质分布异常疾病。例如，这种周期治疗法可包括用联合疗法治疗病人1、2、3、4、5或6个月时间。或者，对HIV相关脂肪营养不良或HADDS病人，可用本发明方法联用HAART持续治疗，控制HAART产生的不良副作用(表现为脂肪营养不良、HADDS等)。还应理解，所谓有用，治疗不需要提供绝对的、而是能充分产生临床价值的作用。如果其它药物对某具体病人无效，而某药物可能提供的治疗作用虽比竞争性药物差一些，如果该药物与其它药物联用可提高总体保护水平，或如果它比竞争性药物安全，则仍具有治疗价值。
治疗期间宜监测病人的症状以确保病人不会经受GH引起的不良作用。当不出现副作用而该联合疗法也不产生足够快的疗效时，可给予更积极的疗程，此时可提高rhGH和/或斯特汀药物的剂量。当该治疗产生了副作用，如组织肿胀、关节僵硬、关节疼痛和/或感觉异常时，可降低rHGH的用量以缓解副作用。
Krentz等.(J Acquir Immune Defic Syndr6(3)245-251，1993)在10位HIV/AIDS病人中比较了隔天剂量(qod)为5.0mg与2.5mg的重组人生长激素导致的代谢和人体测量学变化。治疗期间接受5.0mg(qod)rhGH治疗组病人的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)水平显著增高，而接受2.5mg qod的rhGH组病人的IGF-I未见明显变化。用5.0mg qod rhGH治疗组完成研究的4位病人在该研究前的体重减轻均得到逆转。体重增加伴有瘦体重和机体总水分增加，伴随脂肪量和尿氮排泄减少。
在一项大的随机化、安慰剂对照研究中，Schambelan等(Intern Med125(11)873-882，1996)采用双X线吸收测定法(DXA)扫描评价了经12周疗程给予0.1mg/kg/天(或每天4-6kg，取决于病人体重)剂量的重组人生长激素所产生的机体组分变化，与安慰剂进行比较。治疗结束时，与安慰剂组比较，在rhGH组中观察到瘦体重和体重显著增加，并且这种增加与生理功能(踏车行为)改善相关。rhGH治疗伴有空腹血糖的微小增加，其临床意义可忽略不计。
Krentz等(.J Acquir Immune Defic Syndr6(3)245-251，1993)和Schambelan等(Intern Med125(11)873-882，1996)的研究结果用本发明的GH/斯特汀联合治疗法不难重复。这种确认只是常规的，显示了减轻、缓解或改善脂肪营养不良的一种或多种症状的优良效果。
b.斯特汀类药物如本说明书中所述，本发明的治疗方法除GH外采用第二种化合物。本发明联合治疗方法中的第二种活性化合物是斯特汀相关药物。关于“斯特汀相关”制剂或药物，本申请中指市场上已有的任何斯特汀药物，或从市售斯特汀药物经过改进的药物，当它们与本发明所用的生长激素联用时具有疗效。因此应理解可考虑采用现有斯特汀的同类物和变体。这些同类物和变体可通过本领域技术人员已知的合理药物设计技术来生产。具体说，斯特汀药物称为HMGCoA还原酶抑制剂。这些药物目前在临床上用作抗高胆固醇和控制心脏病发作(复发性和第一次心脏病发作)的药物。这些药物通常副作用很小，不仅能降低总胆固醇、LDL胆固醇和甘油三脂，而且能提高HDL胆固醇。
斯特汀的例子有洛伐他汀(CAS注册号No.75330-75-5；也称为mevinolin或monacolin K)，许多出版物和专利中描述了此化合物的同类物。可从市场上购买到的斯特汀组合物包括LipitorTM(阿托伐他汀)、PravacholTM(普伐他汀)、ZocorTM(辛伐他汀)、MevacorTM(洛伐他汀)和LescolTM(氟伐他汀)。制备这类化合物的方法是本领域技术人员熟知的(见例如美国专利6,521,762；4,420,491；4,342,767；4,319,039；4,294,846；4,444,784；4,582,915和4,820,850)。如以上专利所述，斯特汀传统上利用曲霉菌属、Monascus属、Pleurotus属、Coniothyrium属等微生物发酵产生(见美国专利No.6,521,762关于发酵方法的综述)。
而且斯特汀作为药物制剂在例如“医师桌面参考书(Physician's DeskReference)”中有所描述。例如，LipitorTM(阿托伐他汀钙)片剂在医师桌面参考书(第57版，2003)2547-2551页(Parke-Davis，NJ)和2610-2613页(Pfizer，NY)中有描述。这些制剂以阿托伐他汀钙片剂的形式提供，每片含10mg、20mg、40mg、50mg和80mg阿托伐他汀。给予该片剂的剂量范围是10-80mg/天。目前用于降低人胆固醇的LipitorTM组合物，可用于本发明的联合治疗方法使HADDS和相关脂肪营养不良减轻。
PravacholTM(普伐他汀钠；Bristol-Meyrs Squibb，NY)是另一种可购买到的斯特汀药物，可用于本发明的联合治疗。提供的PravacholTM片剂为10mg、20mg、40mg和80mg。这些片剂给药的每日剂量范围是10-80mg/天。在示范性治疗高胆固醇血症中，以每日单次剂量给予40mg/天，伴随或不伴随饮食。然而通常宜根据所治疗病人的肾功能和肝功能来增减剂量。给予PravacholTM的剂量和治疗指南在医师桌面参考书(第57版，2003)第1101-1105页中有进一步详述，可利用该书提供斯特汀用于本发明方法时的指南。
ZocorTM(辛伐他汀，Merck&Co.，Inc.，NJ)是另一种可用于本发明的示范性斯特汀组合物。此斯特汀制剂在医师桌面参考书(第57版，2003)第2126-2131页中有所描述。其每日剂量范围是5-80mg/天，本领域技术人员可参考医师桌面参考书进一步了解其治疗方案，这些方案可用于或经过修改用于本发明。考虑其用于降低胆固醇的剂量和治疗方案也可用于治疗本申请书所述的HADDS。
MevacorTM(洛伐他汀；Merck&Co.，Inc.NY)和LescolTM(氟伐他汀)是其它示范性的斯特汀，分别在医师桌面参考书(第57版，2003)第2036-2041和2283-2287页中有所描述。本领域技术人员有能力不难改进上述包含斯特汀相关药物的药物组合物，使之用于本发明的方法中。
对于治疗方案，技术人员可利用上述提到的斯特汀药物之一的使用指南。每日给予常规的含斯特汀片剂一次、二次、三次或多次。因此本领域技术人员可利用先前证明对于上述适应症有效的上述参比斯特汀药物之一的用量作为初步剂量，用于本发明治疗方案。
特别考虑斯特汀的口服用量。口服剂量可包括每日给予5-80mg之间的斯特汀药物。然而，也可采用较高剂量，如高达200mg/天。因此病人可口服接受5mg、10mg、20mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg或更多的斯特汀。当然应知道受治疗者可接受较多或较少的斯特汀。也应知道可通过其它常规的给药途径给予类似的剂量。可以单剂量给予斯特汀，或可分成亚剂量在给定的时间内给予多剂药物。
C.与其它治疗药物的联合治疗方案本发明的方法涉及联合使用生长激素和斯特汀相关化合物。然而，除只依据给予GH/斯特汀联合治疗外，本发明方法也考虑与专门针对治疗一种或多种脂肪营养不良症状的第三种组合物联合治疗。本发明的内容中，考虑GH/斯特汀为基础的方法可类似地用于与其它药物(如治疗肥胖、糖尿病等的药物)合用。这类外加的治疗性化合物也可包括能增强生长激素和/或斯特汀相关药物效应的组分。
在
具体实施例方式
中，考虑本发明的生长激素/斯特汀治疗，可辅以能抑制内源性生长抑素分泌而直接或间接刺激内源性生长激素产生的物质予以加强。已知人生长激素释放激素(hGHRH)能剌激hGH释放。因此给予GHRH或其保留了GHRH生物学活性即能剌激生长激素释放功能的衍生物、盐、变体、同类物或片段，可间接获得hGH的生物学活性。例如除GHRH外，可以利用依照上述定义的其功能性衍生物、其同类物或变体，它们与GHRH的序列相同性应至少70％、更优选80％或90％，或最优选95％序列相同，保留了GHRH的生物学活性，或所述变体或同类物，是由在中等严谨条件下，或优选在高严谨条件下与编码GHRH的天然DNA杂交的DNA编码的多肽，所有这些都符合上述定义。本发明可采用能剌激生长激素释放的、文献中所述和公开的刺激生长激素释放的任何GHRH或GHRH同类物或激动剂都可用于本发明，这些物质可参见美国专利5,792,747；5,776,901；5,696,089；5,137,872；5,767,085；5,612,470；5,846,936和5,847,066。也参见Thorner等，Recent Prog HormRes.(1997)；Felix等，Int J Pept Protein Res.46(3-4)253-264，1995；Aiba-Roth等，JClin Endo Metab.671186-1189，1998；Friend等，Eur J Endocrinol.137(4)377-86，1997)。
本发明可采用的其它能促进生长激素体内释放的物质包括美国专利5,807,985；5,604,578；5,795,957；5,777,112；5,767,118；5,731,317；5,726,319；5,726,307；5,721,251；5,721,250等中所述的那些物质。
根据本发明也可采用能结合垂体生长激素分泌细胞上的受体并引发该受体信号传导的其它分子。例如已开发的能结合GHRS受体引起其启动信号传导的小分子，有时称为促分泌分子，其引发的信号传导启动与天然ghrelin结合该受体所获得的相同。这类分子例如可从美国专利5,773,441；5,798,337；5,630,433；5,767,124和5,723,616中得知。也参见Bowers等，Endocrinology1282027-2035，1991；Thorner等，Recent Prog Horm Res52215-46，1997；Camanni等，Front Neuroendocrinol 19(1)47-72，1998；Ankersen等，J Med Chem41(19)3699-704，1998；Smith等，Science260(5114)1640-3，1993和Ghigo等，Horm Res 51 Suppl 39-15，1998。因此，本发明包括能结合GHRS受体引发其信号传导从而获得性质上与天然hGH最终效应相同、程度涉及治疗HADDS的任何物质。
在其它实施方式中，考虑本发明的生长激素/斯特汀为基础的联合治疗法可辅以治疗肥胖相关糖尿病的治疗方案。这类治疗方案可包括给予所述病人胰岛素促分泌剂。采用这类促分泌剂减轻糖尿病是本领域技术人员熟知的。可采用的促分泌剂类型包括但不限于磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、氯茴苯酸(见医师桌面参考书第56版，2003)2432页对示范性氯茴苯酸药物制剂的描述)、瑞格列奈、普兰林肽、吗啡林胍(morphilinoguanide)、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱、氯贝胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸酯、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。本领域技术人员可参考Goodman & Glimans The Pharmacological Basis of Therapeutics.Hardman等编著，第9版，第60章，其中描述了可用于本发明联用的胰岛素和口服降糖药物。特别优选的降糖药包括磺酰脲(Goodman&Gliman一书中1507-1519页有描述。也见医师桌面参考书第56版，第717、741、2680、2692、2693和1086页对目前使用的示范性磺酰脲药物制剂的描述)。也可考虑采用二甲双胍(见医师桌面参考书第56版第1080页对示范性二甲双胍药物制剂的描述)、苯乙双胍或其它双胍类药物。噻唑烷二酮类(如环格列酮和吡格列酮)也已证明可用于本发明方法中。本领域技术人员也可参考医师桌面参考书第56版，第3275和1490页对目前使用的示范性噻唑烷二酮类药物制剂的描述。二氮嗪，一种抗高血压药也称为强效抗高血糖药，可能象某些斯特汀化合物如LiptorTM，是HMG-CoA还原酶抑制剂，这些其它抑制剂中将鉴定到可用于本发明的这类抑制剂，对本发明所述的脂肪营养不良产生额外的治疗效果。这类额外药物可以是或不是洛伐他汀的同类物，只要它们以类似洛伐他汀同类物的方式起HMG-CoA还原酶抑制剂的作用。
来普汀(瘦素)(Zhang等，Nature372425，1994)是一种蛋白激素，具有调节体重、代谢和和生殖功能的重要作用(见例如美国专利No.5,935,810)。此蛋白的质量约16kD，由肥胖(ob)基因编码。来普汀主要由脂肪细胞表达，但胃上皮和胎盘中的细胞也分泌瘦素。已知下丘脑区域高表达的瘦素受体在调节体重及T细胞和血管内皮细胞上有重要作用。对于肥胖和不肥胖人的研究显示血清瘦素浓度与机体脂肪的百分比呈强阳性相关，肥胖者与消瘦者相比，脂肪中的ob mRNA浓度较高。看来由于甘油三脂的积累而体积增大的脂肪细胞可合成越来越多的瘦素，给ob/ob小鼠(即因突变而不能合成瘦素的肥胖小鼠)每日注射重组的鼠或人瘦素导致在数天内摄食显著减少，一月内体重大约减少了50％。然而当将瘦素给予正常小鼠时，它们体重减轻、脂肪组织深度耗竭并呈现瘦肉量增加。已证明用瘦素治疗可促进脂肪组织的脂肪溶解，但对瘦肉组织无明显作用。鉴于这些结果，考虑本发明rhGH/斯特汀为基础的治疗可优选用向病人提供瘦素的治疗方案来加强。
为了在本说明书考虑的联合治疗中获得理想的治疗结果，通常可给予病人GH和斯特汀相关组合物和至少一种其它治疗药物(第三种治疗药物)，来减少发生脂肪异常堆积区域的大小，改善机体脂肪耗竭区域的外观、减少低血糖症、提高胰岛素的分泌和产生或改善其它参数。这些组合物以能有效产生所需治疗结果的联合剂量提供。此方法可包括同时给予rGH治疗、斯特汀类治疗组合物和第三种治疗组合物。可给予包含所有活性药物的一种组合物或药物制剂，或同时给予病人三种不同的组合物或制剂，其中一种组合物包含rhGH，第二种组合物包含斯特汀相关药物，第三种组合物包含第三种治疗药物。
或者，rhGH治疗先于或后于斯特汀治疗和/或第三种药物治疗几分钟至几周。在分别给予二种或多种治疗组合物的实施方式中，通常应保证各次给药之间的时间不要过长，这样斯特汀药物和rhGH和/或第三种药物仍能对细胞发挥有利的联合作用。此时，考虑给予所有三种组合物彼此在约12-24小时内，更优选彼此在约6-12小时内，最优选延迟时间仅在约12小时内。某些情况时，可能需要显著延长分别给药治疗之间的间隔时间，从几天(2、3、4、5、6或7天)到几周(1、2、3、4、5、6、7或8周)。
D.药物组合物按本发明给药的药物组合物可包括本发明所述的至少一种药用形式的人生长激素制剂，任选地与药学上可接受的载体混合。这些组合物可以能达到治疗目的的任何方法给予。为治疗HADDS或其它脂质分布异常疾病而给予本发明组合物的剂量和方案是本领域普通技术人员不难确定的。如上所述本领域技术人员可先采用目前医疗上所用的GH剂量和方案。对于其效果，本领域技术人员可具体参考以下记载医师桌面参考书第56版，第2818-2820页(GENOTROPIN)、3215-3215页(GEREF)、1930-1934页(HUMATROPE)、2419-2421(NORDITROPIN)、1417-1425页(NUTROPIN)、3225-3226页(SAIZEN)和3229-3231(SEROSTIM)，其内容各自纳入本说明书作参考。医师桌面参考书中的这些记载提供了关于可用于GH给药的剂型、给药途径和治疗方案的示范性指南。该参考书所述的方案、剂型、给药途径等不难加以改进，用于本发明。
本发明范围内的组合物，包括含至少一种本发明所述人生长激素或其衍生物、同类物或变体的所有组合物，其含量能有效达到预期目的。类似地，因为本发明的治疗方法考虑给予斯特汀为基础的药物加上人生长激素治疗的联合疗法，故也考虑本发明的所有药物组合物也含至少一种斯特汀药物或其同类物，其量为与人生长激素联合给予时能达到缓解脂肪营养不良一种或多种症状的有效量。
虽然各个体需要不同，但确定各组分有效量的最佳范围是本领域专业技术之内的事。生长激素通常的剂量包括每日约0.01-0.1mg/kg体重，常为1-6mg/天，皮下注射例如5-12周。当然，本领域技术人员可选择持续更长的时间，例如长达48周的治疗方案。当给予AIDS病人hGH抗HADDS治疗时，可同时给予其他AIDS治疗，或设计用于减轻本说明书所述脂肪营养不良症状的其它治疗。由于每日皮下注射给予AIDS病消瘦病人超生理剂量(＞5mg/天)hGH持续2-4年已证明是安全的，故考虑采用生长激素和至少一种斯特汀药物的联合疗法也可能在此期间内有效。虽然考虑每日连续给药，但当脂肪营养不良症状减轻时停止联合治疗可能是令人满意的。当然，在脂肪组织重新异常堆积的情况下可再开始这种治疗。
应理解本发明组合物的适当剂量取决于接受者的年龄、健康状况和体重，合并治疗的类型和治疗频率，以及所需达到的效果。然而如本领域技术人员所知和可确定，无须过多实验即可确定各个体的最佳剂量。这通常包括调整标准剂量，如病人体重轻要减少剂量。
如上所述，每次治疗的总剂量可分成多剂或单剂给予。可单独给予组合物，或联合给予治疗该疾病或该病其它症状的其它治疗。
因为可从本说明书提供的内容明白在广泛方面，本申请考虑联合疗法的临床应用包括，含生长激素制剂的第一组合物，和含斯特汀类药物的第二组合物。因此应将这类组合物配制成适合的药物组合物，即适合体内应用这种联合疗法的适当形式。通常这包括制备基本上没有热原质及可能对人体或动物有害的其它杂质的组合物。
一般需要采用适当的盐和缓冲液来产生稳定的给药载体便于靶细胞摄取。当将重组细胞导入病人体内时也采用缓冲液。本发明的水性组合物包含溶于或分散于药学上可接受的载体或水性介质的有效量的各种待用治疗剂。这种组合物也称为接种物。短语“药学上或药理上可接受的”指当给予动物或人时不会产生副作用、变态反应或其它不良反应的分子和成分。本说明书所用的“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂等。用于药学活性物质的这些介质和制剂是本领域熟知的。除了与治疗组合物不相容的任何常规介质或试剂外，都可考虑用于此治疗组合物中。也可在组合物中加入补充的活性成分。
本发明的活性组合物包含如上所述及本领域技术人员已知的生长激素的经典药物制品。斯特汀，如LipitorTM等也是本领域技术人员知道的。将通过任何常规途径给予本发明的这些组合物，只要通过该途径能达到靶组织。最常见的是，这些组合物配制成口服给药的剂型。然而，当口服给药有问题时，也可采用其它的常规给药途径，如皮下、静脉内、皮内、肌肉内、乳房内、腹腔内、气管内、眼内、眼球后、肺内(如终末释放)、气溶胶、舌下、鼻内、肛门内、阴道内或透皮给药，或在特定部位经手术植入。治疗包括单次剂量或多次剂量持续一段时间。
活性化合物可配制成游离碱或药学上可接受的盐、在适当混有表面活性剂如羟丙基纤维素的水中的溶液。也可配制成在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和油中的分散液。在通常的贮存和使用条件下，这些制品含有防腐剂以防止微生物生长。
适合注射用的药剂包括无菌水溶液或分散液和无菌粉末，打开即可用的无菌注射溶液或分散液。所有的剂型必须无菌和必须充分流动易装在注射器内使用。必须在制备和贮存条件下稳定，必须防腐能抵抗微生物如细菌和真菌的污染。载体可以是溶剂或分散介质，包括例如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)，它们的合适混合物和植物油。可通过以下方式来维持适当的流动性，例如采用包衣剂如卵磷脂，分散体则通过维持所需的颗粒大小，以及使用表面活性剂。防止微生物的作用可采用各种抗菌或抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。在很多情况下宜包括等渗剂，如糖或氯化钠。在组合物中采用延缓吸收剂，如单硬脂酸铝和明胶，可延缓可注射组合物的吸收。
将活性化合物以所需量加入到含上述各种其它成分的合适溶剂中，然后过滤除菌来制备无菌可注射溶液。通常，将各种无菌活性成分加入到含有上述基础分散介质和所需的其它成分的无菌载体中来制备分散体。就制备无菌可注射溶液用的无菌粉末而言，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，可从预先过滤除菌的溶液产生活性成分加其它所需成分的粉末。
本说明书所用的术语“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣剂、抗菌和抗真菌剂、等渗和延缓吸收剂等。用于药学活性物质的这类介质和药剂是本领域熟知的。除了与所述活性成分不相容的常规介质和药剂外，都可考虑使用。也可将补充的活性成分掺入到组合物中。
对于口服给药，本发明的治疗剂可与赋形剂掺合，以不可饮食的漱口水和牙粉形式使用。可将活性成分以所需量掺入到适当的溶剂如硼酸钠液(Dobell’sSolution)中来制备漱口水。或者，可将活性成分掺入到含有硼酸钠、甘油和碳酸氢钾的防腐洗剂中。也可用牙粉分散活性成分，包括明胶、糊膏、粉末和浆液。可将活性成分以治疗有效量加入到可含有水、粘合剂、磨料、芳香剂、起泡剂和保湿剂的糊状牙粉中。
可将本发明组合物配制成中性盐形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成的盐)，和与无机酸如盐酸、磷酸，或与有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成的盐。与游离羧基形成的盐也可产生自无机碱，如氢氧化钠、钾、铵、铝、钙或铁，和有机碱如异丙胺、三甲胺、组胺、普鲁卡因等。
配制后，以与剂型相容的方式和治疗有效量给予溶液剂。不难以各种剂型，如可注射溶液、药物释放胶囊等给予制剂。对于胃肠道外水溶液给药，例如，当需要时应将溶液适当缓冲，用足够的盐或葡萄糖使液体稀释液等渗。这些特制的水溶液特别适合静脉内、肌肉内、皮下和腹腔内给予。
“剂量单位”定义为分散在合适载体中的确定量的治疗组合物。上文已描述了优选剂量的生长激素和斯特汀。胃肠道外给予一种或两种所述治疗化合物可先注射较大的量，然后持续输注来维持药物的循环治疗水平。本领域普通技术人员不难根据优良的医学实践和病人个体的临床情况来确定最佳有效剂量和给药方案。
给药频率将取决于药物的药代动力学参数和给药途径。本领域技术人员可根据给药途径和所需剂量确定优化的药物配方。见例如雷明顿药物科学，第18版(1990，Mack Publ Co，Easton PA18042)1435-1712页，其内容纳入本说明书作参考。这类制剂可能影响生理状况、所给药物的稳定性、体内释放速率和体内清除速率。根据给药途径，按照体重、体表面积或器官大小可计算出合适的剂量。本领域技术人员借助本说明书所述的剂量信息和试验及在动物或人类临床试验中观察到的药代动力学数据，无须过多实验即可常规作出需要确定合适治疗剂量的精密计算。
通过已建立的测定血浓度的试验，结合相关的剂量反应资料可确定合适的剂量。主管医师通过考虑影响药物作用的诸多因素，如药物的比活性、损伤的严重性、病人的反应、年龄、身体状况、体重、性别和饮食、感染的严重性、给药的时间和其它临床因素，来确定最后的剂量方案。随着研究的进行，将得到关于具体疾病和病情的适当剂量水平和治疗持续时间的进一步信息。
在某些实施方式中，可采用基因治疗方式利用病毒递送给予生长激素或其它蛋白质，可将单位剂量计算为要给予的病毒颗粒量。病毒剂量包括病毒颗粒的具体数目或空斑形成单位(pfu)。当实施方式包括腺病毒时，具体单位剂量包括103、104、105、106、107、108、109、1010、1011、1012、1013或1014pfu。由于存在感染缺陷颗粒，具体剂量有时可能更高(10-100倍)。
应理解本发明的药物组合物和治疗方法可应用于人类医学和兽医学。因此待治疗的对象可以是哺乳动物。优选人或其它动物。对于兽医，对象包括例如农场动物，包括牛、绵羊、猪、马和山羊；伴侣动物如狗和猫；外来和/或动物园动物；实验动物，包括小鼠、大鼠、家兔、豚鼠和仓鼠；及家禽如鸡、火鸡、鸭和鹅。
E.实施例以下包括的实施例显示了本发明的优选实施方式。本领域技术人员应理解，以下实施例所描述的技术属于本发明人所公开的良好实施本发明的代表性技术，可认为构成了实施本发明的优选方式。然而，本领域技术人员受本说明书公开内容的启发可对所公开的具体实施方式
进行许多变化仍能获得相同或相似的结果，但这些仍属于本发明的构思和范围内。
选择具有长期HAART用药史(平均12个月)的表现HADDS症状包括水牛肩、向心性肥胖和周围肌肉消瘦、伴有疲劳、血浆甘油三脂和/或胆固醇水平升高的AIDS病人进行研究。
先用rhGH(SEROSTIM)以例如4mg/天的剂量(也可采用其它浓度如6mg/天)皮下注射对所有病人进行治疗。同时以40mg/天口服的剂量给予斯特汀治疗病人。该剂量是依据抗血脂目的常用的斯特汀药物平均剂量。给病人维持此方案三个月，每隔二周监测一次脂肪分布不良有无改善。在平行治疗中，只用rhGH和只用斯特汀治疗病人。三个月后在用rhGH和斯特汀联合治疗的病人中可见脂肪分布不良有明显改善，水牛肩综合征和腹部腰围减少了25-75％，但外周脂肪营养不良无改变。只接受rhGH或斯特汀的个体未见如联合治疗所见的脂肪分布不良的显著改善。体重稳定，机体总脂肪和血脂无相一致的变化，虽然游离脂肪量增加了5-10％。
经本发明方法的有效治疗，水牛肩和躯干肥胖症的体积和硬度显著降低。水牛肩和躯干肥胖症的体积和硬度的这种降低，优先见于用rhGH/斯特汀联合治疗的HADDS病人，大于只用rhGH治疗的病人(Torres等，Abstract32164第12届世界AIDS会议，日内瓦[Abstract32164]，1998；Torres，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1999；Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999；Mauss等，Antiviral Therapy4(Sup2)27[Abstract018]，1999；Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999；Milano等，Antiviral Therapy4(Sup2)41[Abstract 042]，1999)。Torres，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1995报告，4-6m/g天剂量的rhGH，治疗4个月显著降低了水牛肩的体积和硬度，减轻了躯干肥胖症，而外周脂肪营养不良无改变，同时游离脂肪量增加了5-10％。治疗期间，体重和机体总脂肪量或血脂无显著或相一致的变化。
综合在一起，上述临床研究证明，与基线相比，皮下给予3-6mg/天剂量的rhGH(SEROSTIM)，治疗12-24周，显著减少了异常堆积的脂肪。特别是证明SEROSTIM(rhGH)能减少腹部腰围(Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999)、内脏肥胖(Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999；Mauss等，AIDS12(Sup4)145，1998)、水牛肩(Torres，Abstractp32164第12届世界AIDS会议，日内瓦〔Abstract32164〕，1998；Tores等，Abstract675第6届逆转录病毒和机会感染大会[Abstract675]，1999)，和孤立的脂肪瘤(Milano等，Antiviral Therapy4(Sup2)41[Abstract042]，1999)。经生物电阻抗分析测定，用rhGH(SEROSTIM)治疗也提高了瘦体重和体细胞量(Wanke等，AIDS13(15)2099-2103，1999；Engleson等，Antiviral Therapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am JClin Nutr69(6)1162-1169，1999)。预计采用斯特汀药物和rhGH联用对减轻脂肪营养不良症状更有效。此外，斯特汀可有效减少产生治疗效果所需rhGH的给药剂量和频率。
rhGH给药的综合副作用包括由于组织肿胀而致的手脂肿胀或感觉异常，禁食时葡萄糖和甘油三脂的短暂升高。考虑采用斯特汀治疗红物可减轻rhGH治疗的这些副作用。12周时，总胆固醇和禁食时甘油三脂显著下降，同时HDL胆固醇和葡萄糖升高，但这些变化实际上无临床意义(Engleson等，AntiviralTherapy4(Sup2)11[Abstract006]，1999；Engleson等，Am J Clin Nutr69(6)1162-1169，1999)。未见报导高血压或胰腺酶升高等其它表现。
受本说明书公开内容的启发，无须过多实验即可制备和实施本申请公开的和要求保护的所有组合物和/或方法。虽然本发明的组合物和方法已借助优选实施方式作了描述，但本领域技术人员知道可对所述组合物和/或方法，及所述方法的步骤或各步骤的顺序实施各种改变，但这不背离本发明的构思、精神和范围。更具体说，应明白，可用某些在化学上和生理学上相关的药物替代本说明书所述的药物，仍能获得同样或类似的结果。本领域技术人员所知的所有这些类似的替代和修改都视为属于本说明书所附属权利要求书所限定的本发明的精神、范围和构思之内。
本说明书中所引用的参考文献对本说明书的描述提供示范性程序或其它补充，它们均全文纳入本说明书作参考。
权利要求
1.一种治疗患有脂肪分布异常疾病病人的方法，其特征在于，该方法包括给予所述病人生长激素和斯特汀为基础的治疗药物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物和生长激素以单一的药物组合物提供。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物以第一种药物组合物提供，所述生长激素以第二种药物组合物提供。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述生长激素是重组生长激素。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述生长激素从动物分离得到。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物是洛伐他汀或洛伐他汀同类物。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述斯特汀药物选自阿托伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述脂肪分布异常疾病是非-HIV-相关的脂肪营养不良。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述脂肪分布异常疾病是HIV-相关的脂肪分布异常疾病。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述HIV-相关的脂肪分布异常疾病选自致动脉粥样硬化性脂质异常血症，高甘油三脂血症，胆固醇水平升高，低密度脂蛋白胆固醇水平升高，高密度脂蛋白胆固醇水平降低。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述病人表现伴有糖尿病相关的肥胖症的症状。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述症状选自胰岛素抗药性、β-细胞功能失调、第I期胰岛素分泌丧失、葡萄糖耐量受损、内源性葡萄糖产生升高、葡萄糖异生过量。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述病人患有II型糖尿病。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述病人还接受糖尿病治疗，所述方法包括给予胰岛素促分泌剂。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述胰岛素促分泌剂选自磺酰脲、甲苯磺丁脲、氯磺丙胺、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、氯茴苯酸、瑞格列奈、普兰林肽、吗啡林胍、乙酰胆碱、毒蕈碱激动剂、卡巴胆碱、氯贝胆碱、β-L-葡萄糖五乙酸酯、手性肌醇、肌醇、GIP、GLP-1、和Extendin-4。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述胰岛素促分泌剂是葡萄糖不依赖的胰岛素促分泌剂，给予所述生长激素、斯特汀和胰岛素促分泌剂的联合效应，能达到葡萄糖依赖的双相释放特征并可减少低血糖产生的胰岛素释放模式。
17.如权利要求1所述的方法，其中所述病人还接受来普汀治疗。
18.一种可用于联合治疗脂肪分布异常疾病的治疗药物，所述组合物包含A.第一组合物，其含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的重组生长激素；和B.第二组合物，其含有在药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的斯特汀药物。
19.如权利要求18所述的治疗药物，其中所述生长激素和所述斯特汀药物配制成单一制剂。
20.如权利要求18所述的治疗药物，其中所述生长激素配制在与所述斯特汀药物制剂不同的制剂中。
21.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述生长激素制剂和所述斯特汀药物制剂均配制成可注射的剂型。
22.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物制剂配制成口服给药用剂型。
23.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物是洛伐他汀或其同类物。
24.如权利要求20所述的治疗药物，其中所述斯特汀药物选自阿托伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀和氟伐他汀。
全文摘要
本发明是关于治疗脂肪营养不良的方法和组合物。所述方法可治疗HIV和非HIV病人的脂肪营养不良。更具体说，所述方法涉及采用生长激素和斯特汀联合疗法来有效治疗脂肪营养不良。
文档编号A61K38/27GK1917871SQ200580004821
公开日2007年2月21日 申请日期2005年1月26日 优先权日2004年1月29日
发明者G·德鲁卡 申请人:应用研究系统Ars股份公司
最新回复(0)