用于肾病的草药提取物的制作方法
专利名称：用于肾病的草药提取物的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗肾病的方法和组合物。更具体地，本发明涉及包含心叶青牛胆(Tinospora cordifolia)的标准化提取物的组合物和方法，用于治疗肾病例如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。
背景技术：
肾病形成人类“生活方式”和“传染性”疾病的重要部分。这两种类型的疾病可以导致慢性肾脏损伤并可以发展为末期肾病和慢性肾衰竭。并发的尿路感染和肾病综合征代表了构成慢性肾衰竭主要原因的最常见和重要的疾病类群。
与发病率和发展至末期肾衰竭相关的重要肾病是慢性复发性尿路感染，其可以导致转向慢性肾盂肾炎的肾硬化(renal scarring)。慢性复发性尿路感染通常通过使用抗菌药的疗法治疗。然而，随每次发作而产生的抗菌药抗性增加在不治愈中起重要作用，并伴随缓慢和稳定地发展为慢性状态，这是由于重复感染致使免疫受损。
尿路感染(UTI)是在当今的医学实践中遭遇的最常见传染性疾病之一。UTI包括一系列临床和病理状况，涉及尿路的多个部分。该综合征从症状性细菌尿到有脓毒病的外周脓肿。每种都有其自己独特的流行病学、自然史和诊断根据。区分与UTI相关的综合征对治疗和预防有重要意义。
并发的尿路感染指的是泌尿系感染，其发生在具有泌尿生殖道的功能性代谢或结构异常的个体中。这些异常通过影响正常排尿或通过建立病灶而促进感染，不能从病灶中根除细菌，就象糖尿病的情况和肾衰竭患者那样。
复发性感染可以是复发或再感染，复发是感染随治疗前的传染性生物再次发生并提示没有从泌尿生殖道根除该生物，再感染是新的生物建立感染。在复发性UTI中，受损的宿主防御和细菌粘附在输尿管内表面细胞壁的能力在复发中起重要作用。
大肠杆菌是大多数UTI病例的起因，治疗由抗菌药疗程组成。相关的其它生物是克雷伯氏菌、变形菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙雷氏菌和假单胞菌。喹诺酮类早期成员的合成抗微生物药例如萘啶酸对治疗UTI是有效的。然而，这些药物的治疗效用有限并且生物迅速产生抗性。
较新的药物例如氟化4-喹诺酮如环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑和其它抗菌剂如羟氨苄青霉素、呋喃妥因和氨苄青霉素对UTI同样有效。并发的UTI通常需要较长的抗菌药治疗疗程，这伴随多种副作用。
肾病综合征的标志是非常高水平的尿蛋白；低水平的血液中蛋白质；肿胀，尤其是眼、脚和手周围；和高胆固醇。其导致低白蛋白血、脂类尿、高脂血、具有升高的甘油三酯和其它脂类、和水肿。
肾病综合征可以伴随很多疾病发生，包括由原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病、系统性疾病如糖尿病和脉管炎等，但一些起因不明。肾病综合征的预防依靠通过使用抗蛋白尿剂包括使用类固醇和其它免疫抑制剂控制这些疾病和预防复发。
免疫抑制剂经常因类固醇节约效应作用(steroid-sparing effects)而用于频繁复发的肾病综合征。药物如环磷酰胺和瘤可宁(chlorambucid)初步显示对延长症状缓解有效，但它们潜在的副作用例如致癌作用和不育限制了它们的使用。
因此需要分析现有的肾病治疗并针对上述肾病开发避免有副作用的新的有效药物疗法。
在印度心叶青牛胆也被称为Guduchi/amruta，是Rasayanas的一种，其在古印度医药体系[Ayurveda]中被指定为“Ekadravya Rasayana”，即，用作其促宿主免疫刺激剂活性的单一实体并已被称为“生命的甘露”。这是被现代对抗疗法医学的知名医师们作为免疫刺激剂被广泛研究的植物产品之一。
许多多草药(polyherbal)传统和专有制剂含心叶青牛胆作为成分之一，这些制剂在印度市场可以买到并且也用于出口。例如含心叶青牛胆作为单一草药成分的ADBACTM和IMMUMODTM等产品作为天然免疫刺激剂在印度可以购买到。这些产品声称包含心叶青牛胆的水提取液。
广泛的实验和临床工作已经表明心叶青牛胆有增强免疫的作用。已经确认这是通过刺激巨噬细胞活性从而导致粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌增加而介导的。
PCT专利申请WO 9108750描述了天然植物心叶青牛胆的部分在治疗癌性疾病上的用途。
美国专利号5,529,778描述了含心叶青牛胆作为组分之一的多草药组合物，用于预防和治疗流行性感冒、结核传染、AIDS和其它免疫缺陷性疾病。然而，组合物中心叶青牛胆的作用和优点没有在专利中报道。
美国专利号6,136,316描述了使用心叶青牛胆作为成分之一的多草药组合物，用于治疗急性戊型肝炎和乙型肝炎。
美国专利号5,886,029公开了具有青牛胆属植物与表儿茶酸和匙羹藤酸的组合物，用于治疗糖尿病。印度专利号183805描述了来自青牛胆属植物的免疫调节剂的制备方法并声称多糖为活性成分。
PCT申请WO02053166公开了包含心叶青牛胆的标准草药提取物作为免疫调节剂的制剂，标准化心叶青牛胆提取物的方法、和治疗与免疫调节相关的健康状况的方法，例如骨髓炎、癌症、乳癌、糖尿病、呼吸道感染、扁桃体炎、慢性支气管炎、中耳炎、结核、肝炎、AIDS、烧伤、儿科疾病。
尽管可以得到心叶青牛胆用于多种疾病的大量数据，但在公开文献上没有指示，关于心叶青牛胆作为免疫佐剂在治疗肾病上的用途，所述肾病例如慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的，及肾病综合征。
发明内容
本发明涉及治疗肾病的方法，所述肾病例如慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的，以及肾病综合征，该方法包括施用含心叶青牛胆标准化提取物的药物组合物。
本发明的以上概述不是要描述本发明讨论的每个实施方案。这是下面的详细描述的目的。
具体实施例方式
并发的尿路感染和肾病综合征代表了构成慢性肾衰竭主要原因的最常见和最重要的疾病组。
尿路的功能或结构异常条件下的泌尿系感染不能得到有效地治疗，除非矫正促进该感染的根本性异常；这反映了患并发型UTI的个体趋向有复发性感染和多重妨碍。现有的抗菌疗法和医院内获得微生物的可能都增加在随后感染中出现更强抗性微生物的可能性。
已经观察到，在个体的泌尿生殖系异常没有矫正的情况下，复发性感染对患复杂UTI的个体是普遍的；或可以控制代谢异常；但不能治愈。感染症状通常在引起感染的细菌被彻底根除之前就消退了，因此需要长期治疗方案。
在复发性UTI的情况下，常规抗菌疗法意味着使用选自以下的抗菌剂甲氧苄胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑组合、氨苄青霉素、头孢噻吩、呋喃妥因、庆大霉素和氟喹诺酮类(例如环丙沙星、诺氟沙星)。在肾病综合征的情况下，常规抗菌疗法意味着使用氢化泼尼松和甲基氢化泼尼松。
尿中高水平蛋白质是肾病综合征疾病的指征，其是由肾小球破坏产生的慢性肾衰竭的主要原因。肾小球围绕着微小血管，其过滤来自血液的废物和过量水并将它们作为尿送入膀胱。
肾病综合征的特征在于大量蛋白尿，这是由于肾小球基底膜——肾脏的主要过滤单元引起的损伤。该损伤主要与炎症相关，该炎症是由于肾脏的原发性免疫受损或因免疫介导的系统性疾病而导致的继发性损伤。
肾病综合征由于多种由原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病而发生，所述原发性肾小球肾炎如膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。它们可以是免疫复合物介导的或细胞免疫应答。
如果已知，一旦背后原因已经治疗，那么肾病综合征患者可以实现症状缓解。由微小改变疾病引起的肾病综合征病例的80％可以成功地使用类固醇例如氢化泼尼松治疗。然而，其中某些类型的肾小球疾病，例如那些免疫复合物为特征的肾小球疾病，是背后原因的肾病综合征，不容易治愈。在这些病例中，肾脏可能逐步丢失它们过滤来自血液的废物和过量水的能力。如果发生肾衰竭，患者将需要透析或肾脏移植。
大多数类固醇具有潜在的副作用例如重量增加、体液潴留和血压升高、头疼、血糖水平升高、动脉和静脉血栓形成，一些患者有骨质疏松、皮肤变薄并易碰伤，以及严重感染如腹膜炎、系统性败血症肺炎、蜂窝织炎和UTI的风险。类固醇可以使患者产生类固醇依赖并发生类固醇毒性、频繁感染和其它并发症。
本发明人开发了一种用于治疗肾病例如慢性复发性尿路感染和肾病综合征的免疫佐剂疗法。
在一个实施方案中，本发明涉及心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂的新用途，用于治疗肾病如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。
在另一个实施方案中，通过结合常规抗菌疗法提供的免疫佐剂疗法，本发明涉及治疗肾病例如复发性尿路感染的方法，所述复发性尿路感染由于大肠杆菌、克雷伯氏菌、变形菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙雷氏菌和假单胞菌复发感染而引起。
在一个实施方案中，本发明提供有效的免疫佐剂疗法，与常规类固醇疗法结合用于治疗和预防肾病综合征的复发。
在另一个实施方案中，本发明涉及治疗肾病例如由于原发性肾小球肾炎引起的多种肾脏疾病而发生的肾病综合征的方法，所述原发性肾小球肾炎例如膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。
在另一个实施方案中，本发明提供含心叶青牛胆的标准化提取物以及其它药物载体的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明提供含心叶青牛胆的标准化提取物与至少一种其它草药成分的药物组合物。
在本发明的另一个实施方案中涉及通过混合心叶青牛胆提取物与载体或稀释剂制造用于治疗肾病的组合物的方法。
尽管不限于理论，心叶青牛胆的免疫增强作用，被认为是通过刺激巨噬细胞活性介导的，所述巨噬细胞活性导致粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌增加。作为结果，IL2和IFN-γ增加导致自然杀伤细胞活性增加，最终导致抗炎作用。
心叶青牛胆可以商业获得。举例来说，心叶青牛胆可以从Kisalaya HerbalsLimited，Indore，India商业获得。也可以制备心叶青牛胆提取物。举例来说，制备心叶青牛胆提取物的一种方法包括下列步骤1)粉末化心叶青牛胆的干燥茎干，随后用水处理，2)用热水提取，3)过滤步骤2中得到的提取物，4)在真空下部分浓缩滤液，和5)喷雾干燥步骤4中得到的物质得到细粉末状提取物。
可以通过使用多形核白细胞(PMNL)的吞噬作用测量技术标准化心叶青牛胆提取物，该技术评估提取物的免疫调节能力(Indian drugs，1998，35(7)，427-433)。心叶青牛胆的所有活性提取物的吞噬作用百分比与基础值相比不低于30％。
含心叶青牛胆标准化提取物的组合物可以与药学接受的载体混合，并配制为治疗给药形式，例如片、胶囊、口服液、鼻喷雾、膏、无菌注射制剂、栓剂等。该组合物可以通过已知技术用药，例如口服、胃肠道外(包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内(intrasternal)或输液技术)，通过吸入喷雾，局部外用，经粘膜吸收或直肠，其中给药单元制剂含常规无毒的药学接受载体或赋形剂。心叶青牛胆提取物在组合物中时，可以是液体、粉末等。
在此使用的术语“药学接受的载体”意思是指无毒、惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、胶囊材料或任何类型的制剂助剂。一些可作为药学接受的载体的物质的实例是糖例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉状的黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂例如可可脂和栓剂蜡；油例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二元醇，例如丙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲液以及其它无毒相容的润滑剂例如laryl硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、呈味剂和香味剂；防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中，这是根据配方设计师的判断。
本发明的组合物可以通过使用常规方法混合组合物的各种组分来制备。本发明优选的组合物可以根据表2中列出的成分范围制备。
在一个实施方案中，标准化提取物的剂量在20-80mg/kg体重每天之间变化。在一个具体实施方案中，剂量在20-25mg/kg体重之间变化，按等份每天给予两次或三次。在进一步的实施方案中，对于儿童，剂量在25-30mg/kg体重之间变化，按等份每天给予两次或三次。在一个实施方案中，标准化提取物的总剂量在400mg-4000mg每天之间变化。
在一个实施方案中，向患UTI的患者连续给予标准化提取物一个月至三个月，间歇性给予可长达18个月。在一个实施方案中，向患肾病综合征的患者连续或间歇性给予标准化提取物从4-6周到12个月。给予标准化提取物的时间可以根据疾病的强度和患者反应而改变。
在一个示例性实施方案中，心叶青牛胆提取物的标准化提取物的组合物制备成胶囊形式，以研究心叶青牛胆的草药提取物作为免疫佐剂对患者在治疗慢性复发性尿路感染、肾病综合征和其它肾病中的作用。
在临床研究期间已经观察到，在患慢性UTI的患者组中，在抗菌剂治疗之下，所述抗菌剂如洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲基异唑、环丙沙星等，尿培养物中的菌落数大于约105。用含心叶青牛胆的药物组合物治疗之后，或者没有生长，或者尿培养物中的菌落计数小于约103。
这指出，对于患复发性尿路感染的病例，在超过约15个月的时间内超过约20次被证实的发作，使用含心叶青牛胆的草药提取物的药物组合物进行治疗停止尿路感染的任何进一步发作，并且尿培养物在未来可以变为阴性。这指出，含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物可以通过根除系统中的生物体而对尿路感染复发的根本原因起作用。
对于肾病综合征，含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物的疗效在患原发性肾病综合征的患者中评价。患者年龄范围为约5-约70岁。
下面的实施例仅仅进一步详细地举例说明本发明，而决不意味着限制本发明的范围。
实施例1心叶青牛胆的标准化测试从Kisalaya Herbals Limited，Indore，India得到心叶青牛胆提取物。提取物是棕色易流动的苦味的细粉末。通过分析实验来表征提取物，例如堆积密度(tapped)、pH、醇溶浸出物和水溶浸出物。得到的结果是堆积密度(tapped)0.55-0.65/ml；pH.(水中1％w/v)5-6.8；醇溶浸出物以干物质计8-15％w/w；和水溶浸出物以干物质计不少于95％。
收集人血(2-3滴)在灭菌的载玻片上。在灭菌的皮氏培养皿内将载玻片放置在棉垫上。随后将其在37℃培养25分钟，除去凝块并用盐水(0.9％NaCl水溶液)清洗载玻片。通过显微镜观察载玻片确认PMNL(多形核白细胞)的存在。随后将PMNL与不同浓度的心叶青牛胆提取物或对照在37℃一起培养35-40分钟。
40分钟之后排干载玻片水分，随后使用白色念珠菌培养物浸没并在37℃培养l小时。
随后用水清洗载玻片，用甲醇固定，用吉姆萨染液染色并在油浸显微镜下观察。载玻片上被吞噬的细胞的平均数使用形态学标准对100个粒细胞进行测定。
计算对照和心叶青牛胆的吞噬百分比，如下表l所示表l
吞噬作用百分比值是免疫系统活性水平的指标。较大的吞噬作用百分比表示免疫系统活性增强。因此，数据显示，心叶青牛胆比对照更能使免疫系统活化。
实施例2具有心叶青牛胆标准化提取物的组合物心叶青牛胆标准化提取物与胶体二氧化硅和硬脂酸镁组合，形成具有下表2列出量的组合物。随后将组合物制成胶囊。
表2每个胶囊的含量
实施例3心叶青牛胆作为免疫佐剂对复发性尿路感染患者的作用复发性尿路感染患者口服实施例2中的心叶青牛胆组合物。将患者分成2组。组I由年轻的男性和女性患者组成，尽管有适当的抗菌药治疗，他们在三个月时间内继续有复发性感染，并且在他们中没有发现背后原因，例如解剖或生理(例如与怀孕有关)异常。组II由中年和老年患者组成，他们患有慢性复发性尿路感染持续超过三个月和最高达18个月，尽管早已经纠正了可治疗的原因如堵塞或背后的泌尿生殖结核病。
组I受试者由4名患者组成，在开始适当的抗菌药之前约10天和之后20天他们以20-25mg/kg体重的剂量接受心叶青牛胆组合物一个月，所述抗菌药例如洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲基异唑和环丙沙星。依据尿常规、培养和抗菌灵敏度测试结果，给予心叶青牛胆的持续时间可以减少为20-24天。
向组II中的受试者给予相同剂量的心叶青牛胆组合物；但给予3个月的更长时间。组II中的一名患者在9个月的时间内使用了两个疗程心叶青牛胆。给予心叶青牛胆之前，基于尿培养，在18个月时间中他的复发性UTI被证实发作了21次。
在给予心叶青牛胆之前和之后计算尿培养物的菌落数。结果如下表3所示。
表3
此外，所有治疗的患者在一年的观察期内完全消退，没有再发生UTI，尿培养物变成阴性并且在观察期间一直保持如此。
实施例4心叶青牛胆作为免疫佐剂对肾病综合征患者的作用在原发性肾病综合征患者中用双盲随机安慰剂对照平行组研究评估心叶青牛胆的疗效。将患者分成年龄组为5-60岁的20名患者的两组。第一组患者接受类固醇例如氢化泼尼松或甲基氢化泼尼松和安慰剂，第二组患者使用所述类固醇和心叶青牛胆治疗。作为类固醇的佐剂治疗，持续12个月时间，以25-35mg/kg体重的剂量以分剂量口服施用实施例2的心叶青牛胆组合物。
规律性时间间隔之后，检查尿样进行重复尿常规分析、晨尿尿蛋白/肌酸酐比率。分析血细胞比容、蛋白尿比率、WBC(总和分)、BUN、血清肌酸酐、胆红素、SGOT、SGPT、碱性磷酸酶、包含白蛋白和球蛋白的血清蛋白、血清脂类和胆固醇。
根据临床和生化标准例如反应时间、症状缓解持续时间、复发率和复发病例的观察来评估心叶青牛胆的疗效。在治疗前、治疗中和治疗后获得蛋白尿和蛋白质/肌酸酐比率。
临床和生化研究的结果显示以下改善所有类型的感染发作减少，因此在很多病例中减少了复发。从第二组患者得到的结果类固醇的副作用如痤疮、水牛背(颏下)、条纹和类固醇的其它副作用被很大程度降低。
实施例5心叶青牛胆作为免疫佐剂对原发性肾病综合征患者的作用在原发性肾病综合征患者中，用随机安慰剂对照平行组研究评价心叶青牛胆的疗效，所述原发性肾病综合症由膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)引起。
将患者分成两组，每组年龄为5-30岁的5个患者。第一组患者(5名患者)依据年龄以60mg/m2体表面积或1mg/kg体重的剂量口服氢化泼尼松和安慰剂，第二组患者(4名患者)使用氢化泼尼松和心叶青牛胆治疗。作为类固醇的佐剂治疗，持续12个月，以20-30mg/kg体重的剂量分2或3次剂量向患者口服施用实施例2的心叶青牛胆组合物。
规律性时间间隔以后，按固定方案在基线处和随访时检查尿样，进行重复尿常规分析、晨尿尿蛋白/肌酸酐比率。以类似模式分析血细胞比容、蛋白尿比率、WBC(总和分)、BUN、血清肌酸酐、胆红素、SGOT、SGPT、碱性磷酸酶、包含白蛋白和球蛋白的血清蛋白、血清脂类和胆固醇。
以临床和生化标准为标准，例如反应时间、症状缓解持续时间、复发率、观察复发的病例和包含感染的类固醇疗法的副作用，来评价心叶青牛胆的疗效。在治疗前、治疗期间和治疗后获得蛋白尿和蛋白质/肌酸酐比率。
根据年龄以60mg/m2体表面积或1mg/kg体重的剂量给予类固醇一个月。一个月之后以临床和生化标准为标准，对两个组慢慢减少类固醇剂量。表4a、4b、5a和5b显示了临床和生化研究的结果。9个病例完成了随访(5号病例和7号病例没有随访)。以尿蛋白/肌酸酐比率为基础计算症状缓解时间和复发数。
从第一组患者获得的结果是症状缓解时间长得多，不同程度的类固醇副作用，尽管有类固醇治疗仍有感染发作且反应很差。在一些病例中，患者显示良好的初始反应。然而，他们有严重的复发以及几种严重副作用。
表4a和4b显示，病例2和8没有反应。在病例2中，有一些初始反应。然而，在6.5个月时发生严重复发并有严重类固醇副作用。病例8也在一个月时显示了良好的初始反应，在3.5个月时发生复发并有严重副作用。尽管有治疗，其他3个病例—1、3和4—也显示了不同程度的类固醇副作用且反应很差。
从第二组患者获得的结果是在12个月的随访中实现症状缓解。心叶青牛胆降低了复发的频率和严重性，并且不管服用多少剂量的类固醇，这些复发对继续心叶青牛胆治疗有反应。在大多数病例中没有类固醇副作用如类库欣综合征、痤疮、水牛背(颏下)和条纹。
表5a和5b显示了心叶青牛胆的4个病例，即，病例6、9、10和11在12个月的随访中实现症状缓解。基于他们所患的肾小球疾病类型是FPGN、MPGN和FSGS，这些结果非常明显，尤其对病例6、10和11。已经观察到，在病例6中，在6个月的随访结束时，因减少类固醇的剂量而出现了复发。然而，在持续同样剂量的类固醇以及作为另加药物的心叶青牛胆，在12个月结束时实现了症状缓解。这个结果也是显著的，因为这是很难治疗的MPGN病例。
表4a第一组患者中类固醇副作用和感染性发作(安慰剂治疗)
表4b第一组患者中症状缓解和复发的时间(安慰剂治疗)
U尿蛋白；S血清白蛋白；P/C尿蛋白/肌酸酐比率；ab不存在表5a第二组患者中类固醇副作用和感染性发作(药物治疗)
表5b第二组患者中症状缓解和复发的时间(药物治疗)
U尿蛋白；S血清白蛋白；P/C尿蛋白/肌酸酐比率；ab不存在；Tr痕量结果显示，可以加入心叶青牛胆作为免疫佐剂治疗肾病综合征，所述肾病综合征由于具有不同组织学图象的原发性肾小球肾炎例如MPGN、FPGN、FSGS和MCNS而发生。这使类固醇可以长期安全使用，因为心叶青牛胆能抵消免疫反应，从而降低类固醇疗法的副作用、降低复发率和感染发作。
尽管本发明已经引用几个具体实施方式
来描述，那些本领域的技术人员将知道，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以对其做出很多改变。
权利要求
1.治疗肾病的方法，其包括与常规疗法结合，作为免疫佐剂向哺乳动物给予治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物。
2.权利要求1的方法，其中肾病是肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和非并发的。
3.权利要求2的方法，其中慢性复发性尿路感染是由于复发性细菌感染。
4.权利要求3的方法，其中慢性复发性尿路感染是由于复发性大肠杆菌和克雷伯氏菌感染。
5.权利要求2的方法，其中肾病综合征发生是由于原发性肾小球肾炎引起的多种肾脏疾病。
6.权利要求5的方法，其中原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病是膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。
7.权利要求1的方法，其中与常规抗菌疗法结合，心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂用于治疗慢性复发性尿路感染。
8.权利要求1的方法，其中复发性尿路感染的常规疗法包括使用至少一种抗菌药，所述抗菌药选自环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑、羟氨苄青霉素、呋喃妥因、氨苄青霉素和洛美沙星。
9.权利要求1的方法，其中与常规抗菌疗法结合，心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂用于降低肾病综合征的复发。
10.权利要求9的方法，其中心叶青牛胆的标准化提取物降低常规类固醇治疗的副作用并降低复发率。
11.权利要求9的方法，其中类固醇选自氢化泼尼松和甲基氢化泼尼松。
12.权利要求1的方法，其中心叶青牛胆的提取物通过生物测试被标准化。
13.权利要求12的方法，其中生物测试包括通过确定与基础值相比的吞噬作用百分比来评价生物活性，其中与基础值相比吞噬作用的百分比不少于30％。
14.药物组合物，其包含治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物和药学接受的载体。
15.治疗哺乳动物肾病的方法，其包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的权利要求14的药物组合物。
16.药物组合物，其包含治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物以及至少一种其它草药成分。
17.提高治疗肾病的药剂的有效性的方法，其包括向接受所述治疗肾病的药剂治疗的哺乳动物给予有效量的心叶青牛胆的标准化提取物。
全文摘要
本发明涉及心叶青牛胆(Tinosoora cordifolia)的标准化提取物作为免疫佐剂的用途，用于治疗肾病例如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。本发明也涉及包含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物。本发明进一步涉及治疗肾病例如复发性尿路感染的方法，特别是由于大肠杆菌、克雷伯氏菌和其它革兰氏阴性细菌感染而发生的肾病，并且涉及使用心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂并结合传统疗法来治疗肾病综合征的方法。
文档编号A61P13/12GK1921874SQ200580005190
公开日2007年2月28日 申请日期2005年4月4日 优先权日2004年4月9日
发明者维迪亚·纳拉扬·阿查里雅, 特里普库玛·穆霍帕德亚, 斯瓦蒂·阿贾伊·皮拉马尔 申请人:尼古拉斯皮拉马尔印度有限公司
技术领域：
本发明涉及治疗肾病的方法和组合物。更具体地，本发明涉及包含心叶青牛胆(Tinospora cordifolia)的标准化提取物的组合物和方法，用于治疗肾病例如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。
背景技术：
肾病形成人类“生活方式”和“传染性”疾病的重要部分。这两种类型的疾病可以导致慢性肾脏损伤并可以发展为末期肾病和慢性肾衰竭。并发的尿路感染和肾病综合征代表了构成慢性肾衰竭主要原因的最常见和重要的疾病类群。
与发病率和发展至末期肾衰竭相关的重要肾病是慢性复发性尿路感染，其可以导致转向慢性肾盂肾炎的肾硬化(renal scarring)。慢性复发性尿路感染通常通过使用抗菌药的疗法治疗。然而，随每次发作而产生的抗菌药抗性增加在不治愈中起重要作用，并伴随缓慢和稳定地发展为慢性状态，这是由于重复感染致使免疫受损。
尿路感染(UTI)是在当今的医学实践中遭遇的最常见传染性疾病之一。UTI包括一系列临床和病理状况，涉及尿路的多个部分。该综合征从症状性细菌尿到有脓毒病的外周脓肿。每种都有其自己独特的流行病学、自然史和诊断根据。区分与UTI相关的综合征对治疗和预防有重要意义。
并发的尿路感染指的是泌尿系感染，其发生在具有泌尿生殖道的功能性代谢或结构异常的个体中。这些异常通过影响正常排尿或通过建立病灶而促进感染，不能从病灶中根除细菌，就象糖尿病的情况和肾衰竭患者那样。
复发性感染可以是复发或再感染，复发是感染随治疗前的传染性生物再次发生并提示没有从泌尿生殖道根除该生物，再感染是新的生物建立感染。在复发性UTI中，受损的宿主防御和细菌粘附在输尿管内表面细胞壁的能力在复发中起重要作用。
大肠杆菌是大多数UTI病例的起因，治疗由抗菌药疗程组成。相关的其它生物是克雷伯氏菌、变形菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙雷氏菌和假单胞菌。喹诺酮类早期成员的合成抗微生物药例如萘啶酸对治疗UTI是有效的。然而，这些药物的治疗效用有限并且生物迅速产生抗性。
较新的药物例如氟化4-喹诺酮如环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑和其它抗菌剂如羟氨苄青霉素、呋喃妥因和氨苄青霉素对UTI同样有效。并发的UTI通常需要较长的抗菌药治疗疗程，这伴随多种副作用。
肾病综合征的标志是非常高水平的尿蛋白；低水平的血液中蛋白质；肿胀，尤其是眼、脚和手周围；和高胆固醇。其导致低白蛋白血、脂类尿、高脂血、具有升高的甘油三酯和其它脂类、和水肿。
肾病综合征可以伴随很多疾病发生，包括由原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病、系统性疾病如糖尿病和脉管炎等，但一些起因不明。肾病综合征的预防依靠通过使用抗蛋白尿剂包括使用类固醇和其它免疫抑制剂控制这些疾病和预防复发。
免疫抑制剂经常因类固醇节约效应作用(steroid-sparing effects)而用于频繁复发的肾病综合征。药物如环磷酰胺和瘤可宁(chlorambucid)初步显示对延长症状缓解有效，但它们潜在的副作用例如致癌作用和不育限制了它们的使用。
因此需要分析现有的肾病治疗并针对上述肾病开发避免有副作用的新的有效药物疗法。
在印度心叶青牛胆也被称为Guduchi/amruta，是Rasayanas的一种，其在古印度医药体系[Ayurveda]中被指定为“Ekadravya Rasayana”，即，用作其促宿主免疫刺激剂活性的单一实体并已被称为“生命的甘露”。这是被现代对抗疗法医学的知名医师们作为免疫刺激剂被广泛研究的植物产品之一。
许多多草药(polyherbal)传统和专有制剂含心叶青牛胆作为成分之一，这些制剂在印度市场可以买到并且也用于出口。例如含心叶青牛胆作为单一草药成分的ADBACTM和IMMUMODTM等产品作为天然免疫刺激剂在印度可以购买到。这些产品声称包含心叶青牛胆的水提取液。
广泛的实验和临床工作已经表明心叶青牛胆有增强免疫的作用。已经确认这是通过刺激巨噬细胞活性从而导致粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌增加而介导的。
PCT专利申请WO 9108750描述了天然植物心叶青牛胆的部分在治疗癌性疾病上的用途。
美国专利号5,529,778描述了含心叶青牛胆作为组分之一的多草药组合物，用于预防和治疗流行性感冒、结核传染、AIDS和其它免疫缺陷性疾病。然而，组合物中心叶青牛胆的作用和优点没有在专利中报道。
美国专利号6,136,316描述了使用心叶青牛胆作为成分之一的多草药组合物，用于治疗急性戊型肝炎和乙型肝炎。
美国专利号5,886,029公开了具有青牛胆属植物与表儿茶酸和匙羹藤酸的组合物，用于治疗糖尿病。印度专利号183805描述了来自青牛胆属植物的免疫调节剂的制备方法并声称多糖为活性成分。
PCT申请WO02053166公开了包含心叶青牛胆的标准草药提取物作为免疫调节剂的制剂，标准化心叶青牛胆提取物的方法、和治疗与免疫调节相关的健康状况的方法，例如骨髓炎、癌症、乳癌、糖尿病、呼吸道感染、扁桃体炎、慢性支气管炎、中耳炎、结核、肝炎、AIDS、烧伤、儿科疾病。
尽管可以得到心叶青牛胆用于多种疾病的大量数据，但在公开文献上没有指示，关于心叶青牛胆作为免疫佐剂在治疗肾病上的用途，所述肾病例如慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的，及肾病综合征。
发明内容
本发明涉及治疗肾病的方法，所述肾病例如慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的，以及肾病综合征，该方法包括施用含心叶青牛胆标准化提取物的药物组合物。
本发明的以上概述不是要描述本发明讨论的每个实施方案。这是下面的详细描述的目的。
具体实施例方式
并发的尿路感染和肾病综合征代表了构成慢性肾衰竭主要原因的最常见和最重要的疾病组。
尿路的功能或结构异常条件下的泌尿系感染不能得到有效地治疗，除非矫正促进该感染的根本性异常；这反映了患并发型UTI的个体趋向有复发性感染和多重妨碍。现有的抗菌疗法和医院内获得微生物的可能都增加在随后感染中出现更强抗性微生物的可能性。
已经观察到，在个体的泌尿生殖系异常没有矫正的情况下，复发性感染对患复杂UTI的个体是普遍的；或可以控制代谢异常；但不能治愈。感染症状通常在引起感染的细菌被彻底根除之前就消退了，因此需要长期治疗方案。
在复发性UTI的情况下，常规抗菌疗法意味着使用选自以下的抗菌剂甲氧苄胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑组合、氨苄青霉素、头孢噻吩、呋喃妥因、庆大霉素和氟喹诺酮类(例如环丙沙星、诺氟沙星)。在肾病综合征的情况下，常规抗菌疗法意味着使用氢化泼尼松和甲基氢化泼尼松。
尿中高水平蛋白质是肾病综合征疾病的指征，其是由肾小球破坏产生的慢性肾衰竭的主要原因。肾小球围绕着微小血管，其过滤来自血液的废物和过量水并将它们作为尿送入膀胱。
肾病综合征的特征在于大量蛋白尿，这是由于肾小球基底膜——肾脏的主要过滤单元引起的损伤。该损伤主要与炎症相关，该炎症是由于肾脏的原发性免疫受损或因免疫介导的系统性疾病而导致的继发性损伤。
肾病综合征由于多种由原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病而发生，所述原发性肾小球肾炎如膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。它们可以是免疫复合物介导的或细胞免疫应答。
如果已知，一旦背后原因已经治疗，那么肾病综合征患者可以实现症状缓解。由微小改变疾病引起的肾病综合征病例的80％可以成功地使用类固醇例如氢化泼尼松治疗。然而，其中某些类型的肾小球疾病，例如那些免疫复合物为特征的肾小球疾病，是背后原因的肾病综合征，不容易治愈。在这些病例中，肾脏可能逐步丢失它们过滤来自血液的废物和过量水的能力。如果发生肾衰竭，患者将需要透析或肾脏移植。
大多数类固醇具有潜在的副作用例如重量增加、体液潴留和血压升高、头疼、血糖水平升高、动脉和静脉血栓形成，一些患者有骨质疏松、皮肤变薄并易碰伤，以及严重感染如腹膜炎、系统性败血症肺炎、蜂窝织炎和UTI的风险。类固醇可以使患者产生类固醇依赖并发生类固醇毒性、频繁感染和其它并发症。
本发明人开发了一种用于治疗肾病例如慢性复发性尿路感染和肾病综合征的免疫佐剂疗法。
在一个实施方案中，本发明涉及心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂的新用途，用于治疗肾病如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。
在另一个实施方案中，通过结合常规抗菌疗法提供的免疫佐剂疗法，本发明涉及治疗肾病例如复发性尿路感染的方法，所述复发性尿路感染由于大肠杆菌、克雷伯氏菌、变形菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙雷氏菌和假单胞菌复发感染而引起。
在一个实施方案中，本发明提供有效的免疫佐剂疗法，与常规类固醇疗法结合用于治疗和预防肾病综合征的复发。
在另一个实施方案中，本发明涉及治疗肾病例如由于原发性肾小球肾炎引起的多种肾脏疾病而发生的肾病综合征的方法，所述原发性肾小球肾炎例如膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。
在另一个实施方案中，本发明提供含心叶青牛胆的标准化提取物以及其它药物载体的药物组合物。
在一个实施方案中，本发明提供含心叶青牛胆的标准化提取物与至少一种其它草药成分的药物组合物。
在本发明的另一个实施方案中涉及通过混合心叶青牛胆提取物与载体或稀释剂制造用于治疗肾病的组合物的方法。
尽管不限于理论，心叶青牛胆的免疫增强作用，被认为是通过刺激巨噬细胞活性介导的，所述巨噬细胞活性导致粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌增加。作为结果，IL2和IFN-γ增加导致自然杀伤细胞活性增加，最终导致抗炎作用。
心叶青牛胆可以商业获得。举例来说，心叶青牛胆可以从Kisalaya HerbalsLimited，Indore，India商业获得。也可以制备心叶青牛胆提取物。举例来说，制备心叶青牛胆提取物的一种方法包括下列步骤1)粉末化心叶青牛胆的干燥茎干，随后用水处理，2)用热水提取，3)过滤步骤2中得到的提取物，4)在真空下部分浓缩滤液，和5)喷雾干燥步骤4中得到的物质得到细粉末状提取物。
可以通过使用多形核白细胞(PMNL)的吞噬作用测量技术标准化心叶青牛胆提取物，该技术评估提取物的免疫调节能力(Indian drugs，1998，35(7)，427-433)。心叶青牛胆的所有活性提取物的吞噬作用百分比与基础值相比不低于30％。
含心叶青牛胆标准化提取物的组合物可以与药学接受的载体混合，并配制为治疗给药形式，例如片、胶囊、口服液、鼻喷雾、膏、无菌注射制剂、栓剂等。该组合物可以通过已知技术用药，例如口服、胃肠道外(包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内(intrasternal)或输液技术)，通过吸入喷雾，局部外用，经粘膜吸收或直肠，其中给药单元制剂含常规无毒的药学接受载体或赋形剂。心叶青牛胆提取物在组合物中时，可以是液体、粉末等。
在此使用的术语“药学接受的载体”意思是指无毒、惰性固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、胶囊材料或任何类型的制剂助剂。一些可作为药学接受的载体的物质的实例是糖例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉状的黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂例如可可脂和栓剂蜡；油例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油；二元醇，例如丙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇和磷酸盐缓冲液以及其它无毒相容的润滑剂例如laryl硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、呈味剂和香味剂；防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中，这是根据配方设计师的判断。
本发明的组合物可以通过使用常规方法混合组合物的各种组分来制备。本发明优选的组合物可以根据表2中列出的成分范围制备。
在一个实施方案中，标准化提取物的剂量在20-80mg/kg体重每天之间变化。在一个具体实施方案中，剂量在20-25mg/kg体重之间变化，按等份每天给予两次或三次。在进一步的实施方案中，对于儿童，剂量在25-30mg/kg体重之间变化，按等份每天给予两次或三次。在一个实施方案中，标准化提取物的总剂量在400mg-4000mg每天之间变化。
在一个实施方案中，向患UTI的患者连续给予标准化提取物一个月至三个月，间歇性给予可长达18个月。在一个实施方案中，向患肾病综合征的患者连续或间歇性给予标准化提取物从4-6周到12个月。给予标准化提取物的时间可以根据疾病的强度和患者反应而改变。
在一个示例性实施方案中，心叶青牛胆提取物的标准化提取物的组合物制备成胶囊形式，以研究心叶青牛胆的草药提取物作为免疫佐剂对患者在治疗慢性复发性尿路感染、肾病综合征和其它肾病中的作用。
在临床研究期间已经观察到，在患慢性UTI的患者组中，在抗菌剂治疗之下，所述抗菌剂如洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲基异唑、环丙沙星等，尿培养物中的菌落数大于约105。用含心叶青牛胆的药物组合物治疗之后，或者没有生长，或者尿培养物中的菌落计数小于约103。
这指出，对于患复发性尿路感染的病例，在超过约15个月的时间内超过约20次被证实的发作，使用含心叶青牛胆的草药提取物的药物组合物进行治疗停止尿路感染的任何进一步发作，并且尿培养物在未来可以变为阴性。这指出，含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物可以通过根除系统中的生物体而对尿路感染复发的根本原因起作用。
对于肾病综合征，含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物的疗效在患原发性肾病综合征的患者中评价。患者年龄范围为约5-约70岁。
下面的实施例仅仅进一步详细地举例说明本发明，而决不意味着限制本发明的范围。
实施例1心叶青牛胆的标准化测试从Kisalaya Herbals Limited，Indore，India得到心叶青牛胆提取物。提取物是棕色易流动的苦味的细粉末。通过分析实验来表征提取物，例如堆积密度(tapped)、pH、醇溶浸出物和水溶浸出物。得到的结果是堆积密度(tapped)0.55-0.65/ml；pH.(水中1％w/v)5-6.8；醇溶浸出物以干物质计8-15％w/w；和水溶浸出物以干物质计不少于95％。
收集人血(2-3滴)在灭菌的载玻片上。在灭菌的皮氏培养皿内将载玻片放置在棉垫上。随后将其在37℃培养25分钟，除去凝块并用盐水(0.9％NaCl水溶液)清洗载玻片。通过显微镜观察载玻片确认PMNL(多形核白细胞)的存在。随后将PMNL与不同浓度的心叶青牛胆提取物或对照在37℃一起培养35-40分钟。
40分钟之后排干载玻片水分，随后使用白色念珠菌培养物浸没并在37℃培养l小时。
随后用水清洗载玻片，用甲醇固定，用吉姆萨染液染色并在油浸显微镜下观察。载玻片上被吞噬的细胞的平均数使用形态学标准对100个粒细胞进行测定。
计算对照和心叶青牛胆的吞噬百分比，如下表l所示表l
吞噬作用百分比值是免疫系统活性水平的指标。较大的吞噬作用百分比表示免疫系统活性增强。因此，数据显示，心叶青牛胆比对照更能使免疫系统活化。
实施例2具有心叶青牛胆标准化提取物的组合物心叶青牛胆标准化提取物与胶体二氧化硅和硬脂酸镁组合，形成具有下表2列出量的组合物。随后将组合物制成胶囊。
表2每个胶囊的含量
实施例3心叶青牛胆作为免疫佐剂对复发性尿路感染患者的作用复发性尿路感染患者口服实施例2中的心叶青牛胆组合物。将患者分成2组。组I由年轻的男性和女性患者组成，尽管有适当的抗菌药治疗，他们在三个月时间内继续有复发性感染，并且在他们中没有发现背后原因，例如解剖或生理(例如与怀孕有关)异常。组II由中年和老年患者组成，他们患有慢性复发性尿路感染持续超过三个月和最高达18个月，尽管早已经纠正了可治疗的原因如堵塞或背后的泌尿生殖结核病。
组I受试者由4名患者组成，在开始适当的抗菌药之前约10天和之后20天他们以20-25mg/kg体重的剂量接受心叶青牛胆组合物一个月，所述抗菌药例如洛美沙星、甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲基异唑和环丙沙星。依据尿常规、培养和抗菌灵敏度测试结果，给予心叶青牛胆的持续时间可以减少为20-24天。
向组II中的受试者给予相同剂量的心叶青牛胆组合物；但给予3个月的更长时间。组II中的一名患者在9个月的时间内使用了两个疗程心叶青牛胆。给予心叶青牛胆之前，基于尿培养，在18个月时间中他的复发性UTI被证实发作了21次。
在给予心叶青牛胆之前和之后计算尿培养物的菌落数。结果如下表3所示。
表3
此外，所有治疗的患者在一年的观察期内完全消退，没有再发生UTI，尿培养物变成阴性并且在观察期间一直保持如此。
实施例4心叶青牛胆作为免疫佐剂对肾病综合征患者的作用在原发性肾病综合征患者中用双盲随机安慰剂对照平行组研究评估心叶青牛胆的疗效。将患者分成年龄组为5-60岁的20名患者的两组。第一组患者接受类固醇例如氢化泼尼松或甲基氢化泼尼松和安慰剂，第二组患者使用所述类固醇和心叶青牛胆治疗。作为类固醇的佐剂治疗，持续12个月时间，以25-35mg/kg体重的剂量以分剂量口服施用实施例2的心叶青牛胆组合物。
规律性时间间隔之后，检查尿样进行重复尿常规分析、晨尿尿蛋白/肌酸酐比率。分析血细胞比容、蛋白尿比率、WBC(总和分)、BUN、血清肌酸酐、胆红素、SGOT、SGPT、碱性磷酸酶、包含白蛋白和球蛋白的血清蛋白、血清脂类和胆固醇。
根据临床和生化标准例如反应时间、症状缓解持续时间、复发率和复发病例的观察来评估心叶青牛胆的疗效。在治疗前、治疗中和治疗后获得蛋白尿和蛋白质/肌酸酐比率。
临床和生化研究的结果显示以下改善所有类型的感染发作减少，因此在很多病例中减少了复发。从第二组患者得到的结果类固醇的副作用如痤疮、水牛背(颏下)、条纹和类固醇的其它副作用被很大程度降低。
实施例5心叶青牛胆作为免疫佐剂对原发性肾病综合征患者的作用在原发性肾病综合征患者中，用随机安慰剂对照平行组研究评价心叶青牛胆的疗效，所述原发性肾病综合症由膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)引起。
将患者分成两组，每组年龄为5-30岁的5个患者。第一组患者(5名患者)依据年龄以60mg/m2体表面积或1mg/kg体重的剂量口服氢化泼尼松和安慰剂，第二组患者(4名患者)使用氢化泼尼松和心叶青牛胆治疗。作为类固醇的佐剂治疗，持续12个月，以20-30mg/kg体重的剂量分2或3次剂量向患者口服施用实施例2的心叶青牛胆组合物。
规律性时间间隔以后，按固定方案在基线处和随访时检查尿样，进行重复尿常规分析、晨尿尿蛋白/肌酸酐比率。以类似模式分析血细胞比容、蛋白尿比率、WBC(总和分)、BUN、血清肌酸酐、胆红素、SGOT、SGPT、碱性磷酸酶、包含白蛋白和球蛋白的血清蛋白、血清脂类和胆固醇。
以临床和生化标准为标准，例如反应时间、症状缓解持续时间、复发率、观察复发的病例和包含感染的类固醇疗法的副作用，来评价心叶青牛胆的疗效。在治疗前、治疗期间和治疗后获得蛋白尿和蛋白质/肌酸酐比率。
根据年龄以60mg/m2体表面积或1mg/kg体重的剂量给予类固醇一个月。一个月之后以临床和生化标准为标准，对两个组慢慢减少类固醇剂量。表4a、4b、5a和5b显示了临床和生化研究的结果。9个病例完成了随访(5号病例和7号病例没有随访)。以尿蛋白/肌酸酐比率为基础计算症状缓解时间和复发数。
从第一组患者获得的结果是症状缓解时间长得多，不同程度的类固醇副作用，尽管有类固醇治疗仍有感染发作且反应很差。在一些病例中，患者显示良好的初始反应。然而，他们有严重的复发以及几种严重副作用。
表4a和4b显示，病例2和8没有反应。在病例2中，有一些初始反应。然而，在6.5个月时发生严重复发并有严重类固醇副作用。病例8也在一个月时显示了良好的初始反应，在3.5个月时发生复发并有严重副作用。尽管有治疗，其他3个病例—1、3和4—也显示了不同程度的类固醇副作用且反应很差。
从第二组患者获得的结果是在12个月的随访中实现症状缓解。心叶青牛胆降低了复发的频率和严重性，并且不管服用多少剂量的类固醇，这些复发对继续心叶青牛胆治疗有反应。在大多数病例中没有类固醇副作用如类库欣综合征、痤疮、水牛背(颏下)和条纹。
表5a和5b显示了心叶青牛胆的4个病例，即，病例6、9、10和11在12个月的随访中实现症状缓解。基于他们所患的肾小球疾病类型是FPGN、MPGN和FSGS，这些结果非常明显，尤其对病例6、10和11。已经观察到，在病例6中，在6个月的随访结束时，因减少类固醇的剂量而出现了复发。然而，在持续同样剂量的类固醇以及作为另加药物的心叶青牛胆，在12个月结束时实现了症状缓解。这个结果也是显著的，因为这是很难治疗的MPGN病例。
表4a第一组患者中类固醇副作用和感染性发作(安慰剂治疗)
表4b第一组患者中症状缓解和复发的时间(安慰剂治疗)
U尿蛋白；S血清白蛋白；P/C尿蛋白/肌酸酐比率；ab不存在表5a第二组患者中类固醇副作用和感染性发作(药物治疗)
表5b第二组患者中症状缓解和复发的时间(药物治疗)
U尿蛋白；S血清白蛋白；P/C尿蛋白/肌酸酐比率；ab不存在；Tr痕量结果显示，可以加入心叶青牛胆作为免疫佐剂治疗肾病综合征，所述肾病综合征由于具有不同组织学图象的原发性肾小球肾炎例如MPGN、FPGN、FSGS和MCNS而发生。这使类固醇可以长期安全使用，因为心叶青牛胆能抵消免疫反应，从而降低类固醇疗法的副作用、降低复发率和感染发作。
尽管本发明已经引用几个具体实施方式
来描述，那些本领域的技术人员将知道，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以对其做出很多改变。
权利要求
1.治疗肾病的方法，其包括与常规疗法结合，作为免疫佐剂向哺乳动物给予治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物。
2.权利要求1的方法，其中肾病是肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和非并发的。
3.权利要求2的方法，其中慢性复发性尿路感染是由于复发性细菌感染。
4.权利要求3的方法，其中慢性复发性尿路感染是由于复发性大肠杆菌和克雷伯氏菌感染。
5.权利要求2的方法，其中肾病综合征发生是由于原发性肾小球肾炎引起的多种肾脏疾病。
6.权利要求5的方法，其中原发性肾小球肾炎引起的肾脏疾病是膜增生性肾小球肾炎/肾小球膜毛细血管性肾小球肾炎(MPGN)、灶性节段性肾小球肾炎(FSGS)、灶性增生性肾小球肾炎(FPGN)和微小病变肾病综合征(MCNS)。
7.权利要求1的方法，其中与常规抗菌疗法结合，心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂用于治疗慢性复发性尿路感染。
8.权利要求1的方法，其中复发性尿路感染的常规疗法包括使用至少一种抗菌药，所述抗菌药选自环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、甲氧苄胺嘧啶-磺胺甲基异唑、羟氨苄青霉素、呋喃妥因、氨苄青霉素和洛美沙星。
9.权利要求1的方法，其中与常规抗菌疗法结合，心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂用于降低肾病综合征的复发。
10.权利要求9的方法，其中心叶青牛胆的标准化提取物降低常规类固醇治疗的副作用并降低复发率。
11.权利要求9的方法，其中类固醇选自氢化泼尼松和甲基氢化泼尼松。
12.权利要求1的方法，其中心叶青牛胆的提取物通过生物测试被标准化。
13.权利要求12的方法，其中生物测试包括通过确定与基础值相比的吞噬作用百分比来评价生物活性，其中与基础值相比吞噬作用的百分比不少于30％。
14.药物组合物，其包含治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物和药学接受的载体。
15.治疗哺乳动物肾病的方法，其包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的权利要求14的药物组合物。
16.药物组合物，其包含治疗有效量的心叶青牛胆的标准化提取物以及至少一种其它草药成分。
17.提高治疗肾病的药剂的有效性的方法，其包括向接受所述治疗肾病的药剂治疗的哺乳动物给予有效量的心叶青牛胆的标准化提取物。
全文摘要
本发明涉及心叶青牛胆(Tinosoora cordifolia)的标准化提取物作为免疫佐剂的用途，用于治疗肾病例如肾病综合征和慢性复发性尿路感染，包括并发的和无并发症的。本发明也涉及包含心叶青牛胆的标准化提取物的药物组合物。本发明进一步涉及治疗肾病例如复发性尿路感染的方法，特别是由于大肠杆菌、克雷伯氏菌和其它革兰氏阴性细菌感染而发生的肾病，并且涉及使用心叶青牛胆的标准化提取物作为免疫佐剂并结合传统疗法来治疗肾病综合征的方法。
文档编号A61P13/12GK1921874SQ200580005190
公开日2007年2月28日 申请日期2005年4月4日 优先权日2004年4月9日
发明者维迪亚·纳拉扬·阿查里雅, 特里普库玛·穆霍帕德亚, 斯瓦蒂·阿贾伊·皮拉马尔 申请人:尼古拉斯皮拉马尔印度有限公司
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