用于选择性增强心房收缩力以及治疗心功能不全的kv1.5－阻滞剂的制作方法
专利名称：用于选择性增强心房收缩力以及治疗心功能不全的kv1.5－阻滞剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及Kv1.5阻滞剂、特别是式Ia和/或Ib的苯甲酰胺和/或其可药用盐的心房收缩力增强作用， 用于治疗心房收缩力降低和心力衰竭，特别是舒张功能障碍引起的心力衰竭。
心房纤维性颤动(AF)和心房扑动是最常见的持续性心率失常。发病率随着年龄的增长而增加并且经常引起致命性后遗症如中风。心房纤维性颤动每年影响约一百万美国人并且每年在美国导致多于80,000例的中风。在老年人群和作为心房纤维性颤动的后果会出现心房收缩损伤，即心房功能丧失。在这种情况下，有效的心房收缩减弱，心房增大以及心室充盈降低。心室充盈的减少导致心射血的减少，从而降低体育锻炼的耐受力。
心房功能衰退引起综合的血液动力学作用、血栓形成前作用和致心律失常作用。它削弱心脏工作能力，特别是在体育锻炼时。心房收缩力不足可导致心房血液的淤积，引起血栓形成和并发栓塞(中风)。心房功能丧失导致心房扩张，这相当大地增加了心房心律失常的趋势。因此，通过增加心房收缩力来减小心房大小减小了心律失常的易感性，因此为避免心房纤维性颤动的再次引发提供了保护。
增强心房收缩力除了对于心房本身的益处之外，选择性增强心房收缩力对治疗心力衰竭而言、特别是对基于舒张功能障碍的心力衰竭而言也有治疗上的益处。这是因为在这种情况下会出现基于心室伸展性和弹性降低的左心室充盈损伤。此种损伤经常伴有心脏肥大或心肌疾病，其中心脏壁可能增厚或纤维化。伸展性受损还称为心室顺应性降低。该术语的含义为心室的伸展性除适当的伸展之外原则上保持不变，因此心室的充盈能够仅仅通过应用较大的压力(高充盈压)而实现。有效的心房收缩产生心室所需的充盈压。可能通过增强心房的收缩力高于正常水平以改善受损的心室功能。增强收缩力的物质如强心甙不适于此，因为特别是它们直接增强了心室的收缩，并因此减小了心室的大小，以至于心室的充盈再次削弱，尽管可能同时发生心房收缩力增强作用。选择性地增加心房收缩力对此而言是必要的。
从麻醉的猪的实验中已经发现Kv1.5阻滞剂选择性地增强心房收缩力而不直接影响心室收缩力。在猪身上同样可能证明当采用实验方法阻滞心室充盈(舒张功能障碍模型)时，心房收缩力增强作用导致循环状况改善。用Kv1.5阻滞剂显著改善心输出量(心脏工作能力的一个重要参数)的减少是可能的。这些实验证明了Kv1.5阻滞剂对心房收缩力的选择性增强以及其对心力衰竭、特别是舒张性心力衰竭的有益作用。
本发明涉及式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用，其中各符号的含义为R(1)具有3、4或5个碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4个碳原子的烷基或环丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；A-CnH2n-；n为0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相独立地代表氢，F，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3个碳原子的烷基，具有1、2或3个碳原子的烷氧基；
B-CmH2m-；m为1或2；R(8)具有2或3个碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；R(9)C(O)OR(10)或COR(10)；R(10)-CxH2x-R(11)；x为0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基和具有1、2或3个碳原子的烷氧基。
优选是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用，其中式Ia和/或Ib化合物选自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的盐。
特别优选是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防舒张性心力衰竭的药物中的应用。
烷基和亚烷基可以是直链或支链的。同样适用于式CnH2n、CmH2m和CxH2x的亚烷基。如果它们是被取代的或出现在其它基如烷氧基中，烷基和亚烷基同样可以是直链或支链的。烷基的实例为甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基或正-戊基。衍生子这些基团的二价基团，如亚甲基、1，1-亚乙基、1，2-亚乙基、1，1-亚丙基、1，2-亚丙基等等，是亚烷基的实例。
吡啶基是2-、3-或者4-吡啶基。
喹啉基包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，优选为8-喹啉基。
被单取代的苯基可以在2、3或4位被取代，被二取代的苯基可以在2，3、2，4、2，5、2，6、3，4或3，5位被取代。相应的说明也类似地用于吡啶基。
如果基团被二取代，取代基可以是相同的或不同的。
如果式Ia或Ib化合物包含一个或多个酸性或碱性基团或者一个或多个碱性杂环，则本发明还包括相应的生理或毒理可接受的盐，特别是可药用盐。因此，式Ia化合物可以在磺酰氨基上被脱质子，用作例如碱金属盐，优选是钠盐或钾盐，或者用作铵盐，如与氨或有机胺或氨基酸的盐。包含吡啶或喹啉取代基的式Ia或Ib化合物也可以以与无机或有机酸的生理耐受的酸加成盐的形式应用，例如盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、乳酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、葡糖酸盐等等。
当被适当取代时，式Ia或Ib化合物可以以立体异构形式存在。如果式Ia或Ib化合物包含一个或多个不对称中心，则它们可以相互独立地具有S构型或R构型。本发明包括所有可能的立体异构体，例如对映异构体或非对映异构体，以及两种或更多种立体异构形式如对映异构体和/或非对映异构体的任何比例的混合物。因此本发明包括例如纯对映异构体形式(左旋或右旋对映体)以及两种对映异构体的各种比例的混合物形式或外消旋物形式的对映异构体。单一立体异构体可以通过对混和物进行常规的级分或例如采用同分异构纯的合成子按照预期进行制备。
式Ia或Ib化合物可以依照WO 0125189、WO 02088073或WO02100825中描述的制备方法进行制备。
根据本发明，式Ia或Ib化合物可以以本身、相互混合或药物制剂的形式用于人或动物来治疗心力衰竭。
除常规的可药用载体和赋形剂外，药物制剂还包含有效量的至少一种式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐作为活性成分，并且还酌情包含一种或多种其它的药理活性物质。药物制剂通常包含0.1-90％重量的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐。
药物制剂可采用已知的方法生产。对于此目的，活性物质和/或其生理可耐受的盐可以与一种或多种固体或液体药用载体和/或赋形剂一起转化成适宜的形式或剂型，这些形式或剂型然后可作为人类医学或兽医学的药物应用。
包含本发明的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受盐的药物可以通过如口服、胃肠道外、静脉内、直肠、吸入或局部给药，优选依据个体情形给药。
技术人员根据其专业知识熟悉哪些赋形剂适于预期的药物制剂。除溶剂、胶凝剂、栓剂基质、片剂赋形剂和其它活性物质载体外，还可能使用例如抗氧化剂、分散剂、乳化剂、消泡剂、掩味剂、防腐剂、增溶剂、实现储库作用的物质、缓冲物质或着色剂。
对于口服应用形式，将活性化合物与适于此目的的添加剂如载体、稳定剂或惰性稀释剂混合，通过常规方法转化成适宜的形式，例如片剂、包衣片剂、两节套合式胶囊以及水性、醇性或油性溶液。可以应用的惰性载体的实例为阿拉伯胶、氧化镁、碳酸镁、磷酸钾、乳糖、葡萄糖或淀粉，特别是玉米淀粉。制备可通过干颗粒或湿颗粒法进行。适宜作为油性载体或溶剂的例如是植物油或动物油，如葵花油或鱼肝油。适用于水性或醇性溶液的溶剂是例如水、乙醇或糖溶液或它们的混合物。其它给药形式的其它赋形剂的实例为聚乙二醇和聚丙二醇。
对于皮下、肌内或静脉内给药，活性化合物可酌情与惯用于此目的的物质如增溶剂、乳化剂或其它赋形剂一起转化成溶液、混悬液或乳剂。适宜溶剂的实例为水、生理盐水或醇，例如乙醇、丙醇、丙三醇，以及糖溶液如葡萄糖或甘露醇溶液，或者上述各种溶剂的混合物。
适于以气雾剂或喷雾剂形式给药的药物制剂例如是活性物质或其生理可耐受盐在可药用溶剂中的溶液、混悬液或乳剂，所述溶剂例如具体是乙醇或水或者所述溶剂的混合物。如果需要的话，制剂也可以包含其它药用赋形剂如表面活性剂、乳化剂和稳定剂，以及抛射气体。这样的制剂包含浓度通常为约0.1-10％重量、特别是约0.3-3％重量的活性物质。
根据本发明所施用的活性化合物或其生理可耐受盐的剂量取决于个体情形，并且通常应当适应个体条件以达到最佳效果。因此，这自然取决于给药频率和用于治疗或预防的具体化合物作用的效力和持续时间，但也取决于所治疗疾病的类型和严重程度，取决于所治疗的人或动物的性别、年龄、体重和个体响应，以及取决于治疗是急性还是慢性的或者是为了预防。
式Ia和/或Ib Kv1.5阻滞剂的剂量通常在1mg-1g/天/人(体重约75kg)、优选5-750mg/天/人之间变化。但是更高的剂量也可以是适合的。活性物质的日剂量可以一次性给药或将其分为多次给药，例如两次、三次或四次。
实验部分缩略词表DMAP4-二甲基氨基吡啶EDACN-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐HOBT1-羟基-1H-苯并三唑RT 室温THF 四氢呋喃实施例1N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺 将15.5g(0.115mol)HOBT和21.9g(0.115mol)EDAC加入到37.8g(0.11mol)2’-(叔丁氧羰基氨基甲基)-联苯基-2-甲酸(Brandmeier，V.；Sauer，W.H.B.；Feigel，M.；Helv.Chim.Acta 1994，77(1)，70-85)在550mL THF中的溶液中，反应混合物在室温下搅拌45分钟。然后加入14.0g(0.115mol)3-(2-氨基乙基)吡啶，混合物在室温下搅拌过夜。加入400mL水和500mL乙酸乙酯并剧烈搅拌后，两相分开。有机相用400mL饱和氯化钠溶液洗涤一次以及用每次各400mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。在活性炭存在下经硫酸镁干燥，然后过滤并经旋转蒸发仪浓缩。
将所得中间体(40.7g)溶于600mL二氯甲烷中，缓慢滴加100mL三氟乙酸。搅拌过夜后，将反应混合物真空浓缩。残留物与250mL乙酸乙酯混合并再次浓缩以蒸出过量的三氟乙酸。将所得粗产物溶于170mL二氯甲烷中，滴加72.8mL(530mmol)三乙胺，并加入1g DMAP。然后，在5-10℃下，历经30分钟滴加18.7g(100mmol)4-甲氧基苯乙酰氯，混合物在室温下搅拌过夜。加入150mL水并剧烈搅拌后，两相分开，有机相用100mL氯化钠溶液洗涤一次，用25mL 1M盐酸洗涤一次以及用每次各100mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。经硫酸镁和活性炭干燥，然后真空浓缩。将所得的油溶于热乙腈中并放置使其缓慢析出结晶。
获得21.5g N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，熔点116℃。
实施例2N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例3N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例4N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例52-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺 a)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸将20g(188mmol)碳酸钠加入到20g(146mmol)2-氨基苯甲酸在250mL水中的混悬液中。然后滴加11.4g(72.8mmol)丁基磺酰氯，反应混合物在室温下搅拌2天。用浓盐酸进行酸化并在室温下搅拌3小时，沉淀的产物进行抽滤。真空干燥后得到9.6g2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸。
b)1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在-70℃下，将3mL(23.2mmol)5-溴-2-甲氧基吡啶加入到10.2mL丁基锂(2.5M己烷溶液；25.5mmol)在50mL乙醚中溶液中。10分钟后，加入1.4mL(19.5mmol)丙腈。于-70℃2小时后，使反应混合物缓慢升至室温。然后加入2.2g十水合硫酸钠，将混合物搅拌1小时。随后加入5g硫酸镁和简短搅拌后，滤出盐，滤液浓缩。残留物溶于70mL甲醇中，于0℃加入1.1g(28mmol)硼氢化钠。搅拌过夜后，将反应混合物用浓盐酸调节至pH2，在旋转蒸发仪上浓缩。将残留物与10mL水混合并用乙醚萃取一次。然后，水相用碳酸氢钠饱和并在真空下浓缩，残留物用乙酸乙酯萃取。干燥并浓缩乙酸乙酯萃取液，获得1.4g外消旋的1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺。
c)2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺将4.4g(32.7mmol)1-羟基-1H-苯并三唑和6.3g(32.7mmol)N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入到8.0g(31.1mmol)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸在250mL四氢呋喃中的溶液中，反应混合物搅拌90分钟。然后滴加5.4g(32.7mmol)外消旋1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在20mL四氢呋喃中的溶液，混合物搅拌过夜。反应混合物与250mL水混合并用300mL乙酸乙酯萃取。有机相用每次各100mL饱和碳酸氢钠溶液萃取5次，然后用硫酸镁干燥。获得9.0g2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺。
对映异构体的分离在Chiralpak ADH柱(250×4.6mm)上通过制备型HPLC进行；洗脱液己烷/乙醇/甲醇10∶1∶1；温度30℃；流速1mL/min。在保留时间5.9分钟时首先被洗脱的是4.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。一段混合级分后，在保留时间7.2分钟时洗脱出3.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(S)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。
将2g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺溶于9mL热的异丙醇中，之后加入8mL热水，反应混合物缓慢冷却过夜。在0℃抽滤后，获得1.5g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，为无色针状结晶，熔点97℃。
实施例62-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺 该化合物通过WO 02088073中描述的合成方法获得。
实施例7(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺 a)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸将10.0g(64mmol)5-氟-2-氨基苯甲酸、16.3g(193mmol)碳酸氢钠和16.3g 8-喹啉磺酰氯在325mL水和325mL乙酸乙酯中的反应混合物在室温下搅拌过夜。水相分离，用50mL乙酸乙酯萃取一次。然后水相用浓盐酸酸化并搅拌2小时。分离出的沉淀进行抽滤并真空干燥，获得19.5g 5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸。
b)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺采用WO 02100825的方法，由5.5g(15.9mmol)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸和2.3g(16.7mmol)(S)-苯基丙基胺获得5.7g标题化合物。熔点163℃。
实施例8(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺钠盐将2mL 30％的甲醇钠溶液加入到5g实施例7的化合物在120mL乙酸乙酯中的溶液中。沉淀的钠盐进行抽滤并用25mL乙醇重结晶，获得3.3g标题化合物。
药理学研究对Kv1.5通道的活性的鉴定将人Kv1.5通道在爪蟾卵母细胞中表达。对于此目的，首先从非洲爪蟾中分离出卵母细胞并脱卵泡。然后，将体外合成的Kv1.5-编码的RNA注射到卵母细胞中。在Kv1.5蛋白表达1-7天后，应用双微电极电压钳技术在卵母细胞上测定Kv1.5电流。在此种情况下，Kv1.5通道在电压跳至0mV和40mV持续500ms时被激活。具有以下组成的溶液流动穿过浴NaCl 96mM，KCl 2mM，CaCl21.8mM，MgCl21mM，HEPES 5mM(用NaOH滴定至pH7.4)。这些实验在室温下进行。下述用于数据采集和分析基因钳放大器(Axon Instruments，Foster City，USA)和MacLab D/A转换器和软件(ADInstruments，Castle Hill，澳大利亚)。通过将本发明的物质以多种浓度加入到浴溶液中对其进行检测。该物质的作用以占Kv1.5空白电流抑制(当溶液中未加入物质时获得)的百分比计算。然后，采用Hill等式外推数据，以确定各物质的抑制浓度IC50。
用这种方法确定的以下所列化合物的IC50值如下
Kv1.5阻滞剂对猪左心房收缩力的直接作用如下文(A)所示。在第二个实验设计(B)中，证明了心房收缩力改善对受阻的心室充盈的作用。
A)Kv1.5阻滞剂对麻醉猪的心室收缩力的作用测定材料和方法德国长白猪术前肌内注射包含赛拉嗪、替来他明和唑拉西泮各2.5-3.5mg/kg的混合注射液。麻醉由戊巴比妥(约30mg/kg静注)产生并且通过连续输注戊巴比妥(12-17mg/kg/h)来维持。
在产生麻醉和气管切开之后，动物被插管并用含有40％氧气的环境空气混合物通气。通气率和体积由常规测定的血气水平和pH水平决定。连续记录体温，并通过加热垫和/或红光灯和/或呼吸气的加热来控制，使其保持恒定(约37-38℃)。
猪的下述血管被暴露和插管颈外静脉(麻醉输注)、颈动脉(引入测压导管探针于左心室以记录此处的血压)、外侧隐静脉(施用检测物质)、上腹部颅侧浅表静脉(液体输注)、股动脉(外周血压记录)和股静脉(引入MAP导管于右心房)。
收缩力的相应参数通过置于左心房的两个超声传感器测定(P/N JP5-2，Triton Technology)[参考文献1和2]。这两个压电传感器以头尾方向值入穿过心房极边缘的点切口。切口各用U形针(2-0 Vicryl)封住。然后，两个超声传感器被连接到评价装置上。另外，压力测定导管被值入到心房前侧边缘以记录左心房压力。
左心房收缩期缩短(LASS)通过有效心房压力曲线起始时的心房直径和最小直径来测定。因为心房收缩力取决于初始的伸展，所以将左心房收缩期缩短除以有效心房收缩的起始值(LASS指数)。收缩曲线的最大斜率通过将原始数据点输入Microsoft Excel以计算曲线的最大斜率。为了排除呼吸相关的变异，至少分析10个心脏循环。该参数(同样表明收缩力改善)称为LASS斜率。
记录初始值，然后输注稍后所用的溶媒10分钟，所述溶媒由0.5mLDMSO、2.5mLPEG和2.0mL葡萄糖G20组成。随后，在窦性节律时，静脉内施用(i.v.)1mg/kg溶于上述溶媒中的检测物质。
在进一步的一系列实验中，检测物质仅在右心房连续高频刺激(1200击/分钟)诱导的心房纤维性颤动一小时之后给药。在这种情况下，在纤维性颤动之前/之后以及在施用检测物质后记录心房收缩力的参数，并与施用溶媒对照后进行比较。
实施例1化合物在猪中对正常窦性节律中(表1)和心房纤维性颤动后1小时(表2)的心房功能有统计学显著意义的改善。心房功能改善同样由参数——LASS指数和LACC斜率来看也是显然的。应当特别强调实施例1化合物在心房纤维性颤动1小时后的作用，因为收缩力降至初始值的57-69％。在这种情况下，实施例1化合物能够改善收缩力至高于基线水平(心房纤维性颤动之前)。
实施例1化合物能相当大程度地改善窦性节律中和心房纤维性颤动后的心房收缩力，其中心房收缩力通过称为电重塑的方法以病理生理上显著的程度被降低。
表1实施例1化合物(1mg/kg静注)对窦性节律中心房收缩力的参数的作用。
*p＜0.05；**p＜0.01。
表2实施例1化合物(1mg/kg静注)在心房纤维性颤动(AF)1小时后对心房收缩力的参数的作用。*p＜0.05；**p＜0.01。
在窦性节律时的同样实验设计中，实施例5同样显示出左心房收缩力改善。静注1mg/kg后，心房收缩力(LASS)在窦性节律时改善68％(表3)。
表3实施例5化合物(1mg/kg静注)对窦性节律中心房收缩力的参数的作用。*p＜0.05；n＝8。
B)在舒张功能障碍模型中施用Kv1.5阻滞剂后左心室射血的改善方法将猪如A)中所述进行麻醉，并进行开胸术。将流速传感器放于大动脉以测定心输出量。在稳定的血液动力学条件下，采用套管将空气(约30mL)灌输到心包中。心包灌输空气的目的是阻止心室充盈，这最终将导致心输出量降低(舒张性心力衰竭)。实验的目的是证明减少的心输出量可通过增强心房收缩力而增加，通过Kv1.5阻滞剂增强的心房收缩力使受阻的心室充盈改善。
心包空气灌输导致心输出量明显减少(表3)。有可能通过施用实施例1化合物(3mg/kg)、输注30分钟(n＝11)来相当大程度地增加心输出量。实施例1化合物使减少的心输出量最大增加25％。
实施例1化合物阻滞Kv1.5在心室充盈受阻时增加心输出量。该结果说明Kv1.5阻滞对舒张性心力衰竭特别有效。
表3实施例1化合物给药(3mg/kg，i.v.30min)前后，心包灌输空气以阻止心室充盈(舒张性功能障碍或心力衰竭)的猪(n＝11)的心输出量(L/min)。
参考文献Leistad E，Aksnes G，Verburg E，Christensen G.短期心房纤维性颤动后的心房收缩功能障碍可被维拉帕米减少但被BAY K8644增加，Circulation 1996；931747-1754。
Recordati G，Lombardi F，Malliani A，Brown AM.猫右心房的瞬时大小改变，J Appl Physiol 1974；36686-692。
权利要求
1.式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用， 其中各符号的含义为R(1)具有3、4或5个碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4个碳原子的烷基或环丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；A -CnH2n-；n为0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相独立地代表氢，F，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3个碳原子的烷基，具有1、2或3个碳原子的烷氧基；B -CmH2m-；m为1或2；R(8)具有2或3个碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；R(9) C(O)OR(10)或COR(10)；R(10) -CxH2x-R(11)；x为0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基和具有1、2或3个碳原子的烷氧基。
2.如权利要求1中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐的应用，用于生产治疗或预防心力衰竭的药物，其中式Ia和/或Ib化合物选自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的盐。
3.如权利要求1或2中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐的应用，用于生产治疗或预防舒张性心力衰竭的药物。
全文摘要
本发明涉及Kv1.5阻滞剂、特别是式Ia和/或Ib(I，II)的苯甲酰胺和/或其可药用盐的收缩力增强作用，用于治疗心房收缩力降低和心功能不全，特别是舒张功能障碍引起的心功能不全。
文档编号A61K31/44GK1921855SQ200580005486
公开日2007年2月28日 申请日期2005年2月12日 优先权日2004年2月26日
发明者K·维尔特 申请人:塞诺菲-安万特德国有限公司
技术领域：
本发明涉及Kv1.5阻滞剂、特别是式Ia和/或Ib的苯甲酰胺和/或其可药用盐的心房收缩力增强作用， 用于治疗心房收缩力降低和心力衰竭，特别是舒张功能障碍引起的心力衰竭。
心房纤维性颤动(AF)和心房扑动是最常见的持续性心率失常。发病率随着年龄的增长而增加并且经常引起致命性后遗症如中风。心房纤维性颤动每年影响约一百万美国人并且每年在美国导致多于80,000例的中风。在老年人群和作为心房纤维性颤动的后果会出现心房收缩损伤，即心房功能丧失。在这种情况下，有效的心房收缩减弱，心房增大以及心室充盈降低。心室充盈的减少导致心射血的减少，从而降低体育锻炼的耐受力。
心房功能衰退引起综合的血液动力学作用、血栓形成前作用和致心律失常作用。它削弱心脏工作能力，特别是在体育锻炼时。心房收缩力不足可导致心房血液的淤积，引起血栓形成和并发栓塞(中风)。心房功能丧失导致心房扩张，这相当大地增加了心房心律失常的趋势。因此，通过增加心房收缩力来减小心房大小减小了心律失常的易感性，因此为避免心房纤维性颤动的再次引发提供了保护。
增强心房收缩力除了对于心房本身的益处之外，选择性增强心房收缩力对治疗心力衰竭而言、特别是对基于舒张功能障碍的心力衰竭而言也有治疗上的益处。这是因为在这种情况下会出现基于心室伸展性和弹性降低的左心室充盈损伤。此种损伤经常伴有心脏肥大或心肌疾病，其中心脏壁可能增厚或纤维化。伸展性受损还称为心室顺应性降低。该术语的含义为心室的伸展性除适当的伸展之外原则上保持不变，因此心室的充盈能够仅仅通过应用较大的压力(高充盈压)而实现。有效的心房收缩产生心室所需的充盈压。可能通过增强心房的收缩力高于正常水平以改善受损的心室功能。增强收缩力的物质如强心甙不适于此，因为特别是它们直接增强了心室的收缩，并因此减小了心室的大小，以至于心室的充盈再次削弱，尽管可能同时发生心房收缩力增强作用。选择性地增加心房收缩力对此而言是必要的。
从麻醉的猪的实验中已经发现Kv1.5阻滞剂选择性地增强心房收缩力而不直接影响心室收缩力。在猪身上同样可能证明当采用实验方法阻滞心室充盈(舒张功能障碍模型)时，心房收缩力增强作用导致循环状况改善。用Kv1.5阻滞剂显著改善心输出量(心脏工作能力的一个重要参数)的减少是可能的。这些实验证明了Kv1.5阻滞剂对心房收缩力的选择性增强以及其对心力衰竭、特别是舒张性心力衰竭的有益作用。
本发明涉及式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用，其中各符号的含义为R(1)具有3、4或5个碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4个碳原子的烷基或环丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；A-CnH2n-；n为0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相独立地代表氢，F，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3个碳原子的烷基，具有1、2或3个碳原子的烷氧基；
B-CmH2m-；m为1或2；R(8)具有2或3个碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；R(9)C(O)OR(10)或COR(10)；R(10)-CxH2x-R(11)；x为0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基和具有1、2或3个碳原子的烷氧基。
优选是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用，其中式Ia和/或Ib化合物选自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的盐。
特别优选是式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防舒张性心力衰竭的药物中的应用。
烷基和亚烷基可以是直链或支链的。同样适用于式CnH2n、CmH2m和CxH2x的亚烷基。如果它们是被取代的或出现在其它基如烷氧基中，烷基和亚烷基同样可以是直链或支链的。烷基的实例为甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基或正-戊基。衍生子这些基团的二价基团，如亚甲基、1，1-亚乙基、1，2-亚乙基、1，1-亚丙基、1，2-亚丙基等等，是亚烷基的实例。
吡啶基是2-、3-或者4-吡啶基。
喹啉基包括2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，优选为8-喹啉基。
被单取代的苯基可以在2、3或4位被取代，被二取代的苯基可以在2，3、2，4、2，5、2，6、3，4或3，5位被取代。相应的说明也类似地用于吡啶基。
如果基团被二取代，取代基可以是相同的或不同的。
如果式Ia或Ib化合物包含一个或多个酸性或碱性基团或者一个或多个碱性杂环，则本发明还包括相应的生理或毒理可接受的盐，特别是可药用盐。因此，式Ia化合物可以在磺酰氨基上被脱质子，用作例如碱金属盐，优选是钠盐或钾盐，或者用作铵盐，如与氨或有机胺或氨基酸的盐。包含吡啶或喹啉取代基的式Ia或Ib化合物也可以以与无机或有机酸的生理耐受的酸加成盐的形式应用，例如盐酸盐、磷酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、乳酸盐、马来酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、葡糖酸盐等等。
当被适当取代时，式Ia或Ib化合物可以以立体异构形式存在。如果式Ia或Ib化合物包含一个或多个不对称中心，则它们可以相互独立地具有S构型或R构型。本发明包括所有可能的立体异构体，例如对映异构体或非对映异构体，以及两种或更多种立体异构形式如对映异构体和/或非对映异构体的任何比例的混合物。因此本发明包括例如纯对映异构体形式(左旋或右旋对映体)以及两种对映异构体的各种比例的混合物形式或外消旋物形式的对映异构体。单一立体异构体可以通过对混和物进行常规的级分或例如采用同分异构纯的合成子按照预期进行制备。
式Ia或Ib化合物可以依照WO 0125189、WO 02088073或WO02100825中描述的制备方法进行制备。
根据本发明，式Ia或Ib化合物可以以本身、相互混合或药物制剂的形式用于人或动物来治疗心力衰竭。
除常规的可药用载体和赋形剂外，药物制剂还包含有效量的至少一种式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐作为活性成分，并且还酌情包含一种或多种其它的药理活性物质。药物制剂通常包含0.1-90％重量的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐。
药物制剂可采用已知的方法生产。对于此目的，活性物质和/或其生理可耐受的盐可以与一种或多种固体或液体药用载体和/或赋形剂一起转化成适宜的形式或剂型，这些形式或剂型然后可作为人类医学或兽医学的药物应用。
包含本发明的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受盐的药物可以通过如口服、胃肠道外、静脉内、直肠、吸入或局部给药，优选依据个体情形给药。
技术人员根据其专业知识熟悉哪些赋形剂适于预期的药物制剂。除溶剂、胶凝剂、栓剂基质、片剂赋形剂和其它活性物质载体外，还可能使用例如抗氧化剂、分散剂、乳化剂、消泡剂、掩味剂、防腐剂、增溶剂、实现储库作用的物质、缓冲物质或着色剂。
对于口服应用形式，将活性化合物与适于此目的的添加剂如载体、稳定剂或惰性稀释剂混合，通过常规方法转化成适宜的形式，例如片剂、包衣片剂、两节套合式胶囊以及水性、醇性或油性溶液。可以应用的惰性载体的实例为阿拉伯胶、氧化镁、碳酸镁、磷酸钾、乳糖、葡萄糖或淀粉，特别是玉米淀粉。制备可通过干颗粒或湿颗粒法进行。适宜作为油性载体或溶剂的例如是植物油或动物油，如葵花油或鱼肝油。适用于水性或醇性溶液的溶剂是例如水、乙醇或糖溶液或它们的混合物。其它给药形式的其它赋形剂的实例为聚乙二醇和聚丙二醇。
对于皮下、肌内或静脉内给药，活性化合物可酌情与惯用于此目的的物质如增溶剂、乳化剂或其它赋形剂一起转化成溶液、混悬液或乳剂。适宜溶剂的实例为水、生理盐水或醇，例如乙醇、丙醇、丙三醇，以及糖溶液如葡萄糖或甘露醇溶液，或者上述各种溶剂的混合物。
适于以气雾剂或喷雾剂形式给药的药物制剂例如是活性物质或其生理可耐受盐在可药用溶剂中的溶液、混悬液或乳剂，所述溶剂例如具体是乙醇或水或者所述溶剂的混合物。如果需要的话，制剂也可以包含其它药用赋形剂如表面活性剂、乳化剂和稳定剂，以及抛射气体。这样的制剂包含浓度通常为约0.1-10％重量、特别是约0.3-3％重量的活性物质。
根据本发明所施用的活性化合物或其生理可耐受盐的剂量取决于个体情形，并且通常应当适应个体条件以达到最佳效果。因此，这自然取决于给药频率和用于治疗或预防的具体化合物作用的效力和持续时间，但也取决于所治疗疾病的类型和严重程度，取决于所治疗的人或动物的性别、年龄、体重和个体响应，以及取决于治疗是急性还是慢性的或者是为了预防。
式Ia和/或Ib Kv1.5阻滞剂的剂量通常在1mg-1g/天/人(体重约75kg)、优选5-750mg/天/人之间变化。但是更高的剂量也可以是适合的。活性物质的日剂量可以一次性给药或将其分为多次给药，例如两次、三次或四次。
实验部分缩略词表DMAP4-二甲基氨基吡啶EDACN-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐HOBT1-羟基-1H-苯并三唑RT 室温THF 四氢呋喃实施例1N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺 将15.5g(0.115mol)HOBT和21.9g(0.115mol)EDAC加入到37.8g(0.11mol)2’-(叔丁氧羰基氨基甲基)-联苯基-2-甲酸(Brandmeier，V.；Sauer，W.H.B.；Feigel，M.；Helv.Chim.Acta 1994，77(1)，70-85)在550mL THF中的溶液中，反应混合物在室温下搅拌45分钟。然后加入14.0g(0.115mol)3-(2-氨基乙基)吡啶，混合物在室温下搅拌过夜。加入400mL水和500mL乙酸乙酯并剧烈搅拌后，两相分开。有机相用400mL饱和氯化钠溶液洗涤一次以及用每次各400mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。在活性炭存在下经硫酸镁干燥，然后过滤并经旋转蒸发仪浓缩。
将所得中间体(40.7g)溶于600mL二氯甲烷中，缓慢滴加100mL三氟乙酸。搅拌过夜后，将反应混合物真空浓缩。残留物与250mL乙酸乙酯混合并再次浓缩以蒸出过量的三氟乙酸。将所得粗产物溶于170mL二氯甲烷中，滴加72.8mL(530mmol)三乙胺，并加入1g DMAP。然后，在5-10℃下，历经30分钟滴加18.7g(100mmol)4-甲氧基苯乙酰氯，混合物在室温下搅拌过夜。加入150mL水并剧烈搅拌后，两相分开，有机相用100mL氯化钠溶液洗涤一次，用25mL 1M盐酸洗涤一次以及用每次各100mL饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次。经硫酸镁和活性炭干燥，然后真空浓缩。将所得的油溶于热乙腈中并放置使其缓慢析出结晶。
获得21.5g N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，熔点116℃。
实施例2N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例3N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例4N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺 该化合物通过WO 0125189中描述的合成方法获得。
实施例52-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺 a)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸将20g(188mmol)碳酸钠加入到20g(146mmol)2-氨基苯甲酸在250mL水中的混悬液中。然后滴加11.4g(72.8mmol)丁基磺酰氯，反应混合物在室温下搅拌2天。用浓盐酸进行酸化并在室温下搅拌3小时，沉淀的产物进行抽滤。真空干燥后得到9.6g2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸。
b)1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在-70℃下，将3mL(23.2mmol)5-溴-2-甲氧基吡啶加入到10.2mL丁基锂(2.5M己烷溶液；25.5mmol)在50mL乙醚中溶液中。10分钟后，加入1.4mL(19.5mmol)丙腈。于-70℃2小时后，使反应混合物缓慢升至室温。然后加入2.2g十水合硫酸钠，将混合物搅拌1小时。随后加入5g硫酸镁和简短搅拌后，滤出盐，滤液浓缩。残留物溶于70mL甲醇中，于0℃加入1.1g(28mmol)硼氢化钠。搅拌过夜后，将反应混合物用浓盐酸调节至pH2，在旋转蒸发仪上浓缩。将残留物与10mL水混合并用乙醚萃取一次。然后，水相用碳酸氢钠饱和并在真空下浓缩，残留物用乙酸乙酯萃取。干燥并浓缩乙酸乙酯萃取液，获得1.4g外消旋的1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺。
c)2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺将4.4g(32.7mmol)1-羟基-1H-苯并三唑和6.3g(32.7mmol)N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐加入到8.0g(31.1mmol)2-(丁基-1-磺酰氨基)苯甲酸在250mL四氢呋喃中的溶液中，反应混合物搅拌90分钟。然后滴加5.4g(32.7mmol)外消旋1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基胺在20mL四氢呋喃中的溶液，混合物搅拌过夜。反应混合物与250mL水混合并用300mL乙酸乙酯萃取。有机相用每次各100mL饱和碳酸氢钠溶液萃取5次，然后用硫酸镁干燥。获得9.0g2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]-苯甲酰胺。
对映异构体的分离在Chiralpak ADH柱(250×4.6mm)上通过制备型HPLC进行；洗脱液己烷/乙醇/甲醇10∶1∶1；温度30℃；流速1mL/min。在保留时间5.9分钟时首先被洗脱的是4.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。一段混合级分后，在保留时间7.2分钟时洗脱出3.0g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(S)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺。
将2g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺溶于9mL热的异丙醇中，之后加入8mL热水，反应混合物缓慢冷却过夜。在0℃抽滤后，获得1.5g 2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，为无色针状结晶，熔点97℃。
实施例62-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺 该化合物通过WO 02088073中描述的合成方法获得。
实施例7(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺 a)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸将10.0g(64mmol)5-氟-2-氨基苯甲酸、16.3g(193mmol)碳酸氢钠和16.3g 8-喹啉磺酰氯在325mL水和325mL乙酸乙酯中的反应混合物在室温下搅拌过夜。水相分离，用50mL乙酸乙酯萃取一次。然后水相用浓盐酸酸化并搅拌2小时。分离出的沉淀进行抽滤并真空干燥，获得19.5g 5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸。
b)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺采用WO 02100825的方法，由5.5g(15.9mmol)5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)苯甲酸和2.3g(16.7mmol)(S)-苯基丙基胺获得5.7g标题化合物。熔点163℃。
实施例8(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺钠盐将2mL 30％的甲醇钠溶液加入到5g实施例7的化合物在120mL乙酸乙酯中的溶液中。沉淀的钠盐进行抽滤并用25mL乙醇重结晶，获得3.3g标题化合物。
药理学研究对Kv1.5通道的活性的鉴定将人Kv1.5通道在爪蟾卵母细胞中表达。对于此目的，首先从非洲爪蟾中分离出卵母细胞并脱卵泡。然后，将体外合成的Kv1.5-编码的RNA注射到卵母细胞中。在Kv1.5蛋白表达1-7天后，应用双微电极电压钳技术在卵母细胞上测定Kv1.5电流。在此种情况下，Kv1.5通道在电压跳至0mV和40mV持续500ms时被激活。具有以下组成的溶液流动穿过浴NaCl 96mM，KCl 2mM，CaCl21.8mM，MgCl21mM，HEPES 5mM(用NaOH滴定至pH7.4)。这些实验在室温下进行。下述用于数据采集和分析基因钳放大器(Axon Instruments，Foster City，USA)和MacLab D/A转换器和软件(ADInstruments，Castle Hill，澳大利亚)。通过将本发明的物质以多种浓度加入到浴溶液中对其进行检测。该物质的作用以占Kv1.5空白电流抑制(当溶液中未加入物质时获得)的百分比计算。然后，采用Hill等式外推数据，以确定各物质的抑制浓度IC50。
用这种方法确定的以下所列化合物的IC50值如下
Kv1.5阻滞剂对猪左心房收缩力的直接作用如下文(A)所示。在第二个实验设计(B)中，证明了心房收缩力改善对受阻的心室充盈的作用。
A)Kv1.5阻滞剂对麻醉猪的心室收缩力的作用测定材料和方法德国长白猪术前肌内注射包含赛拉嗪、替来他明和唑拉西泮各2.5-3.5mg/kg的混合注射液。麻醉由戊巴比妥(约30mg/kg静注)产生并且通过连续输注戊巴比妥(12-17mg/kg/h)来维持。
在产生麻醉和气管切开之后，动物被插管并用含有40％氧气的环境空气混合物通气。通气率和体积由常规测定的血气水平和pH水平决定。连续记录体温，并通过加热垫和/或红光灯和/或呼吸气的加热来控制，使其保持恒定(约37-38℃)。
猪的下述血管被暴露和插管颈外静脉(麻醉输注)、颈动脉(引入测压导管探针于左心室以记录此处的血压)、外侧隐静脉(施用检测物质)、上腹部颅侧浅表静脉(液体输注)、股动脉(外周血压记录)和股静脉(引入MAP导管于右心房)。
收缩力的相应参数通过置于左心房的两个超声传感器测定(P/N JP5-2，Triton Technology)[参考文献1和2]。这两个压电传感器以头尾方向值入穿过心房极边缘的点切口。切口各用U形针(2-0 Vicryl)封住。然后，两个超声传感器被连接到评价装置上。另外，压力测定导管被值入到心房前侧边缘以记录左心房压力。
左心房收缩期缩短(LASS)通过有效心房压力曲线起始时的心房直径和最小直径来测定。因为心房收缩力取决于初始的伸展，所以将左心房收缩期缩短除以有效心房收缩的起始值(LASS指数)。收缩曲线的最大斜率通过将原始数据点输入Microsoft Excel以计算曲线的最大斜率。为了排除呼吸相关的变异，至少分析10个心脏循环。该参数(同样表明收缩力改善)称为LASS斜率。
记录初始值，然后输注稍后所用的溶媒10分钟，所述溶媒由0.5mLDMSO、2.5mLPEG和2.0mL葡萄糖G20组成。随后，在窦性节律时，静脉内施用(i.v.)1mg/kg溶于上述溶媒中的检测物质。
在进一步的一系列实验中，检测物质仅在右心房连续高频刺激(1200击/分钟)诱导的心房纤维性颤动一小时之后给药。在这种情况下，在纤维性颤动之前/之后以及在施用检测物质后记录心房收缩力的参数，并与施用溶媒对照后进行比较。
实施例1化合物在猪中对正常窦性节律中(表1)和心房纤维性颤动后1小时(表2)的心房功能有统计学显著意义的改善。心房功能改善同样由参数——LASS指数和LACC斜率来看也是显然的。应当特别强调实施例1化合物在心房纤维性颤动1小时后的作用，因为收缩力降至初始值的57-69％。在这种情况下，实施例1化合物能够改善收缩力至高于基线水平(心房纤维性颤动之前)。
实施例1化合物能相当大程度地改善窦性节律中和心房纤维性颤动后的心房收缩力，其中心房收缩力通过称为电重塑的方法以病理生理上显著的程度被降低。
表1实施例1化合物(1mg/kg静注)对窦性节律中心房收缩力的参数的作用。
*p＜0.05；**p＜0.01。
表2实施例1化合物(1mg/kg静注)在心房纤维性颤动(AF)1小时后对心房收缩力的参数的作用。*p＜0.05；**p＜0.01。
在窦性节律时的同样实验设计中，实施例5同样显示出左心房收缩力改善。静注1mg/kg后，心房收缩力(LASS)在窦性节律时改善68％(表3)。
表3实施例5化合物(1mg/kg静注)对窦性节律中心房收缩力的参数的作用。*p＜0.05；n＝8。
B)在舒张功能障碍模型中施用Kv1.5阻滞剂后左心室射血的改善方法将猪如A)中所述进行麻醉，并进行开胸术。将流速传感器放于大动脉以测定心输出量。在稳定的血液动力学条件下，采用套管将空气(约30mL)灌输到心包中。心包灌输空气的目的是阻止心室充盈，这最终将导致心输出量降低(舒张性心力衰竭)。实验的目的是证明减少的心输出量可通过增强心房收缩力而增加，通过Kv1.5阻滞剂增强的心房收缩力使受阻的心室充盈改善。
心包空气灌输导致心输出量明显减少(表3)。有可能通过施用实施例1化合物(3mg/kg)、输注30分钟(n＝11)来相当大程度地增加心输出量。实施例1化合物使减少的心输出量最大增加25％。
实施例1化合物阻滞Kv1.5在心室充盈受阻时增加心输出量。该结果说明Kv1.5阻滞对舒张性心力衰竭特别有效。
表3实施例1化合物给药(3mg/kg，i.v.30min)前后，心包灌输空气以阻止心室充盈(舒张性功能障碍或心力衰竭)的猪(n＝11)的心输出量(L/min)。
参考文献Leistad E，Aksnes G，Verburg E，Christensen G.短期心房纤维性颤动后的心房收缩功能障碍可被维拉帕米减少但被BAY K8644增加，Circulation 1996；931747-1754。
Recordati G，Lombardi F，Malliani A，Brown AM.猫右心房的瞬时大小改变，J Appl Physiol 1974；36686-692。
权利要求
1.式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐在生产治疗或预防心力衰竭的药物中的应用， 其中各符号的含义为R(1)具有3、4或5个碳原子的烷基或喹啉基，R(2)具有1、2、3或4个碳原子的烷基或环丙基，R(3)苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；A -CnH2n-；n为0、1或2；R(4)、R(5)、R(6)和R(7)互相独立地代表氢，F，Cl，CF3，OCF3，CN，具有1、2或3个碳原子的烷基，具有1、2或3个碳原子的烷氧基；B -CmH2m-；m为1或2；R(8)具有2或3个碳原子的烷基、苯基或吡啶基，其中苯基和吡啶基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基，和具有1、2或3个碳原子的烷氧基；R(9) C(O)OR(10)或COR(10)；R(10) -CxH2x-R(11)；x为0、1或2；R(11)苯基，其中苯基未被取代或被1或2个选自如下基团的取代基取代F，Cl，CF3，OCF3，具有1、2或3个碳原子的烷基和具有1、2或3个碳原子的烷氧基。
2.如权利要求1中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐的应用，用于生产治疗或预防心力衰竭的药物，其中式Ia和/或Ib化合物选自N-(2-吡啶-3-基乙基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-2’-(苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，N-(2，4-二氟苄基)-2’-{[2-(4-甲氧苯基)乙酰氨基]甲基}联苯基-2-甲酰胺，N-(2-(2-吡啶基)乙基)-(S)-2’-(α-甲基苄氧羰基氨基甲基)联苯基-2-甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[1(R)-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙基]苯甲酰胺，2-(丁基-1-磺酰氨基)-N-[环丙基吡啶-3-基甲基]-5-甲基苯甲酰胺，(S)-5-氟-2-(喹啉-8-磺酰氨基)-N-(1-苯丙基)苯甲酰胺，和/或其生理可耐受的盐。
3.如权利要求1或2中所要求的式Ia和/或Ib化合物和/或其生理可耐受的盐的应用，用于生产治疗或预防舒张性心力衰竭的药物。
全文摘要
本发明涉及Kv1.5阻滞剂、特别是式Ia和/或Ib(I，II)的苯甲酰胺和/或其可药用盐的收缩力增强作用，用于治疗心房收缩力降低和心功能不全，特别是舒张功能障碍引起的心功能不全。
文档编号A61K31/44GK1921855SQ200580005486
公开日2007年2月28日 申请日期2005年2月12日 优先权日2004年2月26日
发明者K·维尔特 申请人:塞诺菲-安万特德国有限公司
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