抗性病特异性复合卵黄抗体及其在性病治疗上的应用的制作方法
专利名称：抗性病特异性复合卵黄抗体及其在性病治疗上的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗性病特异性抗体，尤其涉及一种用于防治梅毒、淋病、尖锐湿疣及生殖器疱疹的特异性复合抗体。本发明还涉及这种复合抗体在性病治疗上的应用。
本发明的另一目的是提供这种复合卵黄抗体在性病治疗上的应用。
本发明的抗性病特异性复合卵黄抗体可由下述方法制备(A)优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的几种主要的单一致性病的病原体；(B)制备免疫蛋；(C)制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；(D)将单一的特异性卵黄抗体按一定比例制备抗性病特异性复合卵黄抗体。
其中，步骤A根据流行病学调查情况，筛选导致性病的病原体，分别制备单一致性病的病原体作为抗原，进行大量繁殖，收集培养物，提纯，稀释分装；将各种单一的致性病病原体加入福氏佐剂，粉碎并制成乳状浆液，制得单一的性病致病原体抗原。
步骤B选择具有高免疫应答能力的临开产或正在产蛋的健康无特定病原体携带的产蛋母鸡，胸肌或皮下注射单一的性病抗原。
步骤C将不同抗原分别免疫的母鸡所产鸡蛋分类收集，用0.5％新洁尔灭溶液或0.1％KMnO4溶液或同类消毒液将免疫蛋浸泡15～30分钟消毒，置打蛋机中，滤除蛋清留下蛋黄加入4～8倍蒸馏水稀释，调PH至5.5～6.0，4℃下静置过夜，离心，并浓缩干燥得到抗性病特异性卵黄抗体粗品。将粗品用离子交换柱和凝胶交换柱纯化。
步骤D是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
抗性病特异性复合卵黄抗体应用于性病的治疗上时，把上述抗性病特异性复合卵黄抗体制成洗液；也可制成抗性病喷雾剂；还可制成抗性病乳膏剂；也可制成抗性病泡腾片。
本发明的抗性病特异性复合卵黄抗体属IgG类免疫球蛋白，主要用导致梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的四种病原体免疫良种母鸡，使之产生大量相应的免疫球蛋白，制得。这种复合抗体对引起梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的病原体有特异性结合和抑制作用。由于它只对病灶病原体起治疗和抑制作用而对共生有益菌秋毫无犯，不会破坏病灶部位的微生态平衡，这在国内外防治性病方面是一项开创性的先例。特异性复合抗体配以一定辅料制成各种抗性病洗液、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂等。将以上剂型直接施于外阴、阴道、子宫颈、龟头等病原体最集中的部位，可将致病病原体直接杀灭，效果好、见效快，解决了常规口服或注射使药物进入人体循环后所产生的各种不良反应和毒副作用。同时，也可解除因手术切除、激光治疗等外科治疗带给患者的痛苦。由于本发明为一种特异性、纯天然的生物制剂，其作用机理系人体被动免疫，安全环保，不会像使用抗生素或化学消毒药那样将致病菌和有益菌一起灭杀而破坏微生态平衡，或造成病原体抗药性，达到既治病又预防保健的双重作用。
根据流行病学调查结果选择苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)作为有代表性的性病病原体。2、抗原制备。
选取市售苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)标准株，分别按其培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、计数、稀释分装。3、选择具有高免疫应答能力的健康无特定病原体携带的产蛋禽类(包括产蛋母鸡、母鸭、母鹅、火鸡和鸵鸟等)进行强化免疫。
对每只健康产蛋禽类在胸肌或皮下注射上述制得的抗原，在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7天以相同剂量注射第三次。第一次注射后从第20天开始拣取高免疫蛋。
分别以苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒各10亿计数制成病原体液，置高速匀浆机中，以10000～30000rpm高速匀化，即制得苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)四种抗原，再分别以1∶1比例加福氏佐剂充分混匀，各制得1ml。4、免疫蛋收集和特异性卵黄抗体粗提物制备。
用0.5％新洁尔灭溶液或0.1％KMnO4溶液或其它同类消毒液将免疫蛋浸泡15～30分钟消毒，无菌蒸馏水冲洗、晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入4～8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1mol/L浓度的NaOH或1mol/L浓度的HCL溶液调节pH至5.5～6.0，4℃下静置过夜，稀释以10000～30000rpm高速离心30分钟，取上清液超滤，超滤膜选用的截留分子量为18万DW左右，超滤浓缩10～20倍。浓缩液用冷冻干燥法喷干即得四种抗性病的特异性卵黄抗体免疫球蛋白粗品。
特异性卵黄抗体纯品制备采用离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，即制得卵黄抗体球蛋白精白，经用SDS-PAGE电泳测得卵黄抗体的含量超过50％。
以苍白密螺旋体为检测抗原，用酶联免疫法测得抗梅毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗苍白密螺旋体特异性卵黄抗体对梅毒致病病原体有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以淋病双球菌为检测抗原，用酶联免疫法测得抗淋病双球菌特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗淋病双球菌特异性卵黄抗体对引起淋病的致病菌有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以人乳头瘤病毒为检测抗原，用酶联免疫法测得抗人乳头瘤病毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗人乳头瘤病毒特异性卵黄抗体对引起尖锐湿疣的致病病原体有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以单纯疱疹病毒为检测抗原，用酶联免疫法测得抗单纯疱疹病毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗单纯疱疹病毒特异性卵黄抗体对作为抗原免疫的HSV-2有很高的抗体结合效价，提示有很好的抑制作用；对没有直接作为抗原免疫的同种不同型的HSV-1也有一定的抑制作用。故本实验加大了HSV-2作为免疫原的可行性。5、制备抗性病复合卵黄抗体。
分别取上述抗苍白密螺旋体卵黄抗体冻干粉250克、抗淋病双球菌卵黄抗体冻干粉250克、抗人类乳头瘤病毒卵黄抗体冻干粉250克和抗单纯疱疹病毒卵黄抗体冻干粉250克充分混合，过80目筛，包装，即得抗性病特异性复合卵黄抗体冻干粉1000克。
以苍白密螺旋体、淋病双球菌、人乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒(HSV-2)作为检测抗原，用酶联免疫法测得抗性病特异性复合卵黄抗体的抗体结合效价，结果如下表
从以上结果看出，以上述抗性病特异性复合卵黄抗体对作为抗原直接导致性病的致病病原体具有相当高抗体结合效价，达到理想的效果。
香橙香精 0.1％冰片 0.1％乙醇 0.75％蒸馏水加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合卵黄抗体搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5～7.0之间，最后补加蒸馏水至100升，过滤即得。
抗性病特异性复合卵黄抗体冻干粉 2％甘油11％十八烷酸6.0％薄荷醇 0.2％液体石蜡9.0％白凡士林6.0％Span-80 0.85％山梨醇钾0.1％吐温-80 4.5％蒸馏水 加至100升油相和水相分别加热至80℃，将水相缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合卵黄抗体溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
权利要求
1.抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于该抗体可由下述方法制备(A)优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的两种或两种以上的单一致性病的病原体；(B)分别用步骤(A)的病原体制备免疫蛋；(C)制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；(D)将单一的特异性卵黄抗体按比例混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
2.根据权利要求1所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(A)中所述的抗原由单一致性病的病原体制备而得，所述病原有四种，分别为苍白密螺旋体、淋病双球菌、人乳头瘤病毒及单纯疱疹病毒。
3.根据权利要求2所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(D)是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
4.根据权利要求3所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(D)是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1∶1∶1∶1的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
5.权利要求1～4任一权利要求的抗性病特异性复合卵黄抗体在制备治疗性病的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于将所制备的复合卵黄抗体按0.02～80％的质量百分含量配以99.98～20％的辅料制成抗性病组合制剂。
7.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病洗液。
8.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病喷雾剂。
9.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病乳膏剂。
10.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病泡腾片。
全文摘要
本发明公开了一种抗性病特异性复合卵黄抗体，该抗体可由下述方法制备优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的两种或两种以上的单一致性病的病原体；制备免疫蛋；制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；将单一的特异性卵黄抗体按比例混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。本发明还公开了这种复合卵黄抗体在性病治疗上的应用。本发明能直接对常见性病病原体起治疗和抑制作用，不会破坏微生态平衡，也不会产生耐药性，对性病的治疗效果显著。
文档编号A61K9/12GK1477127SQ0313968
公开日2004年2月25日 申请日期2003年7月3日 优先权日2003年7月3日
发明者许承杰, 严维 申请人:广州新崴生物医药科技有限公司
技术领域：
本发明涉及一种抗性病特异性抗体，尤其涉及一种用于防治梅毒、淋病、尖锐湿疣及生殖器疱疹的特异性复合抗体。本发明还涉及这种复合抗体在性病治疗上的应用。
本发明的另一目的是提供这种复合卵黄抗体在性病治疗上的应用。
本发明的抗性病特异性复合卵黄抗体可由下述方法制备(A)优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的几种主要的单一致性病的病原体；(B)制备免疫蛋；(C)制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；(D)将单一的特异性卵黄抗体按一定比例制备抗性病特异性复合卵黄抗体。
其中，步骤A根据流行病学调查情况，筛选导致性病的病原体，分别制备单一致性病的病原体作为抗原，进行大量繁殖，收集培养物，提纯，稀释分装；将各种单一的致性病病原体加入福氏佐剂，粉碎并制成乳状浆液，制得单一的性病致病原体抗原。
步骤B选择具有高免疫应答能力的临开产或正在产蛋的健康无特定病原体携带的产蛋母鸡，胸肌或皮下注射单一的性病抗原。
步骤C将不同抗原分别免疫的母鸡所产鸡蛋分类收集，用0.5％新洁尔灭溶液或0.1％KMnO4溶液或同类消毒液将免疫蛋浸泡15～30分钟消毒，置打蛋机中，滤除蛋清留下蛋黄加入4～8倍蒸馏水稀释，调PH至5.5～6.0，4℃下静置过夜，离心，并浓缩干燥得到抗性病特异性卵黄抗体粗品。将粗品用离子交换柱和凝胶交换柱纯化。
步骤D是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
抗性病特异性复合卵黄抗体应用于性病的治疗上时，把上述抗性病特异性复合卵黄抗体制成洗液；也可制成抗性病喷雾剂；还可制成抗性病乳膏剂；也可制成抗性病泡腾片。
本发明的抗性病特异性复合卵黄抗体属IgG类免疫球蛋白，主要用导致梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的四种病原体免疫良种母鸡，使之产生大量相应的免疫球蛋白，制得。这种复合抗体对引起梅毒、淋病、尖锐湿疣和生殖器疱疹的病原体有特异性结合和抑制作用。由于它只对病灶病原体起治疗和抑制作用而对共生有益菌秋毫无犯，不会破坏病灶部位的微生态平衡，这在国内外防治性病方面是一项开创性的先例。特异性复合抗体配以一定辅料制成各种抗性病洗液、喷雾剂、凝胶剂、乳膏剂等。将以上剂型直接施于外阴、阴道、子宫颈、龟头等病原体最集中的部位，可将致病病原体直接杀灭，效果好、见效快，解决了常规口服或注射使药物进入人体循环后所产生的各种不良反应和毒副作用。同时，也可解除因手术切除、激光治疗等外科治疗带给患者的痛苦。由于本发明为一种特异性、纯天然的生物制剂，其作用机理系人体被动免疫，安全环保，不会像使用抗生素或化学消毒药那样将致病菌和有益菌一起灭杀而破坏微生态平衡，或造成病原体抗药性，达到既治病又预防保健的双重作用。
根据流行病学调查结果选择苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)作为有代表性的性病病原体。2、抗原制备。
选取市售苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)标准株，分别按其培养特性和最适培养条件，选择适宜的培养基以常规方法进行大量培养与繁殖，收集培养物，然后提纯、计数、稀释分装。3、选择具有高免疫应答能力的健康无特定病原体携带的产蛋禽类(包括产蛋母鸡、母鸭、母鹅、火鸡和鸵鸟等)进行强化免疫。
对每只健康产蛋禽类在胸肌或皮下注射上述制得的抗原，在第一次注射后间隔7天，再以同样剂量、方法注射第二次，第二次注射后再间隔7天以相同剂量注射第三次。第一次注射后从第20天开始拣取高免疫蛋。
分别以苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒各10亿计数制成病原体液，置高速匀浆机中，以10000～30000rpm高速匀化，即制得苍白密螺旋体、淋病双球菌、人类乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒(HSV-2)四种抗原，再分别以1∶1比例加福氏佐剂充分混匀，各制得1ml。4、免疫蛋收集和特异性卵黄抗体粗提物制备。
用0.5％新洁尔灭溶液或0.1％KMnO4溶液或其它同类消毒液将免疫蛋浸泡15～30分钟消毒，无菌蒸馏水冲洗、晾干，置打蛋机中将蛋壳打碎，用蛋黄筛滤除蛋清留下蛋黄，加入4～8倍蒸馏水稀释搅拌均匀，用1mol/L浓度的NaOH或1mol/L浓度的HCL溶液调节pH至5.5～6.0，4℃下静置过夜，稀释以10000～30000rpm高速离心30分钟，取上清液超滤，超滤膜选用的截留分子量为18万DW左右，超滤浓缩10～20倍。浓缩液用冷冻干燥法喷干即得四种抗性病的特异性卵黄抗体免疫球蛋白粗品。
特异性卵黄抗体纯品制备采用离子交换柱和凝胶交换柱进行纯化，即制得卵黄抗体球蛋白精白，经用SDS-PAGE电泳测得卵黄抗体的含量超过50％。
以苍白密螺旋体为检测抗原，用酶联免疫法测得抗梅毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗苍白密螺旋体特异性卵黄抗体对梅毒致病病原体有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以淋病双球菌为检测抗原，用酶联免疫法测得抗淋病双球菌特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗淋病双球菌特异性卵黄抗体对引起淋病的致病菌有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以人乳头瘤病毒为检测抗原，用酶联免疫法测得抗人乳头瘤病毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗人乳头瘤病毒特异性卵黄抗体对引起尖锐湿疣的致病病原体有很强的结合和抵制作用，所检测到的抗体结合效价十分理想。
以单纯疱疹病毒为检测抗原，用酶联免疫法测得抗单纯疱疹病毒特异性卵黄抗体结合效价，结果如下表
从以上检测结果看出，本发明所制备的抗单纯疱疹病毒特异性卵黄抗体对作为抗原免疫的HSV-2有很高的抗体结合效价，提示有很好的抑制作用；对没有直接作为抗原免疫的同种不同型的HSV-1也有一定的抑制作用。故本实验加大了HSV-2作为免疫原的可行性。5、制备抗性病复合卵黄抗体。
分别取上述抗苍白密螺旋体卵黄抗体冻干粉250克、抗淋病双球菌卵黄抗体冻干粉250克、抗人类乳头瘤病毒卵黄抗体冻干粉250克和抗单纯疱疹病毒卵黄抗体冻干粉250克充分混合，过80目筛，包装，即得抗性病特异性复合卵黄抗体冻干粉1000克。
以苍白密螺旋体、淋病双球菌、人乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒(HSV-2)作为检测抗原，用酶联免疫法测得抗性病特异性复合卵黄抗体的抗体结合效价，结果如下表
从以上结果看出，以上述抗性病特异性复合卵黄抗体对作为抗原直接导致性病的致病病原体具有相当高抗体结合效价，达到理想的效果。
香橙香精 0.1％冰片 0.1％乙醇 0.75％蒸馏水加至100升先取蒸馏水80升，然后分别加入甘油、复合卵黄抗体搅拌溶解；再取配方量的桉叶油、薄荷香精、香橙香精、冰片加入配方量的乙醇溶解，并在搅拌下缓缓加入前述溶液中；充分搅拌均匀，调整溶液pH值至6.5～7.0之间，最后补加蒸馏水至100升，过滤即得。
抗性病特异性复合卵黄抗体冻干粉 2％甘油11％十八烷酸6.0％薄荷醇 0.2％液体石蜡9.0％白凡士林6.0％Span-80 0.85％山梨醇钾0.1％吐温-80 4.5％蒸馏水 加至100升油相和水相分别加热至80℃，将水相缓缓加入油相中，搅拌冷凝至40℃左右，加入复合卵黄抗体溶液，充分研磨搅拌均匀制成水色油乳膏，即得。
权利要求
1.抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于该抗体可由下述方法制备(A)优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的两种或两种以上的单一致性病的病原体；(B)分别用步骤(A)的病原体制备免疫蛋；(C)制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；(D)将单一的特异性卵黄抗体按比例混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
2.根据权利要求1所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(A)中所述的抗原由单一致性病的病原体制备而得，所述病原有四种，分别为苍白密螺旋体、淋病双球菌、人乳头瘤病毒及单纯疱疹病毒。
3.根据权利要求2所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(D)是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1～10∶1～10∶1～10∶1～10的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
4.根据权利要求3所述的抗性病特异性复合卵黄抗体，其特征在于步骤(D)是将多种单一的特异性的卵黄抗体按1∶1∶1∶1的比例均匀混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。
5.权利要求1～4任一权利要求的抗性病特异性复合卵黄抗体在制备治疗性病的药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于将所制备的复合卵黄抗体按0.02～80％的质量百分含量配以99.98～20％的辅料制成抗性病组合制剂。
7.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病洗液。
8.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病喷雾剂。
9.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病乳膏剂。
10.根据权利要求6所述的抗性病特异性复合卵黄抗体在治疗性病上的应用，其特征在于所述组合制剂为抗性病泡腾片。
全文摘要
本发明公开了一种抗性病特异性复合卵黄抗体，该抗体可由下述方法制备优选引致性病的主要致病菌，制备引起性病的两种或两种以上的单一致性病的病原体；制备免疫蛋；制备抗性病病原体特异性卵黄抗体粗品，并对粗品进行纯化；将单一的特异性卵黄抗体按比例混合，制成抗性病特异性复合卵黄抗体。本发明还公开了这种复合卵黄抗体在性病治疗上的应用。本发明能直接对常见性病病原体起治疗和抑制作用，不会破坏微生态平衡，也不会产生耐药性，对性病的治疗效果显著。
文档编号A61K9/12GK1477127SQ0313968
公开日2004年2月25日 申请日期2003年7月3日 优先权日2003年7月3日
发明者许承杰, 严维 申请人:广州新崴生物医药科技有限公司
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