一种治疗癌症、慢性乙型肝炎的药物及其制备方法
专利名称：一种治疗癌症、慢性乙型肝炎的药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，具体涉及一种以中药为原料制备的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术：
尽管医学研究有很大的进展，癌症仍然为人类主要死因。根据发病的部位不同有肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤等，癌症治疗的常规方法如手术、化疗、放疗和介入疗法，只是治标不治本，对病人带来很大的痛苦，在杀死癌细胞的同时也将正常细胞杀死，造成人们的免疫功能下降，治疗效果不太好，治愈率低，而且许多肿瘤对这些常规的治疗方法具有抗性和较大的副作用。
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，简称HBV)引起的一种传染性病。中国是乙型肝炎的高流行区，有超过40％的人群受过HBV感染，有1亿多人口为慢性HbsAg携带者。据调查，中国现患慢性乙型肝炎的病人超过3000万人，受HBV慢性感染的人群易罹患原发性肝癌。慢性乙型肝炎的发病机理是由于患者免疫调节功能紊乱，不能很好地调节机对HBV得不到清除，肝细胞受到不同程度的损害，HBV复制。近年来国内外出现治疗慢性乙型肝炎的医药，临床疗效不一，得到国内外公认的是INF-α，但HbeAg及HBV DNA的阴转率亦只为40％左右，疗效远非理想，且由于有一定的副作用及价格昂贵而使临床受到限制。目前市场上缺少抗HBV疗效确切，又无副作用的药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，提供一种以中药为原料制成的治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤和慢性乙型肝炎的药物，其有效成分明确，质量可控，使用本发明的药物抗癌和抗HBV疗效确切，无副作用和抗性；本发明所要解决的另一个技术问题是提供这种药物的制备方法，该制备方法以充分提取各味药中的有效成分，并采用先进的药剂剂型。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案
一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，是由下述重量配比的中药原料制成的药剂黄芪270-330、人参90-110、苦参素6-12。
上述治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂所含有效成分组成及其重量比例为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg1+Re 0.12～0.65、总多糖2.1～20、苦参素6～12。
上述用于治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如注射液、大输液、冻干粉针剂、口服液、胶囊或片剂。
将上述重量配比的原料制成本发明药物的方法，包括以下步骤(1)取人参，用70～90％乙醇加热回流提取1～4次，每次1～3小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1～2倍量水，搅匀，冷藏12～48小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和50～70％的乙醇洗脱，收集50～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得人参提取物。
(2)取黄芪和人参药渣，加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12～48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加1～2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加2～6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置12～48小时，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液、粉针剂，即制得本发明注射剂。
本发明所述的药用辅料为氯化钠、甘露醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖中的一种或几种。
本发明所使用的原料——黄芪和人参，要求分别符合《中国药典》2000年版一部项下黄芪和人参项下有关的各项规定；苦参素则要求其氧化苦参碱的含量高于85％。
本发明药物的有效成分黄芪甲苷和氧化苦参碱的含量检测采用了薄层扫描法，总多糖的检测采用比色法，人参皂苷Rg1+Re的含量检测则采用高效液相法。本发明的有益效果1、本发明由黄芪、人参、苦参素三味药物制成，其中黄芪中含有黄芪皂苷、多糖类、黄酮类、胆碱、甜菜碱等，黄芪皂苷和黄芪多糖为黄芪中最重要生理活性成分；人参含人参皂苷和人参多糖等化学成分，为人参中最重要生理活性成分；苦参素即氧化苦参碱(C15H24N2O2)。因此本发明的制备方法根据各中药所含有效成分的性质和药理作用，选用水和乙醇作为提取溶剂，并以大孔吸附树脂和超滤法进行纯化处理提取液，以充分提取精制各味药中的有效成分，因而本发明的药物具有有效成份明确、质量可控的特点。
2、本发明剂型为注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂，可直接用于静脉注射，因而起效迅速、生物利用度高、效果确切可靠。
3、本发明药物经稳定性试验研究表明，有效期长达2.5年，澄明度、溶血性、色泽、pH值、热源、刺激性等指标均符合《中国药典》有关注射剂的规定。
4、本发明冻干粉针剂除具有注射液特点外，尚有贮存方便、便于携带和使用的优点。
5、经临床初步试验表明，本发明药物具有益气扶正，增强机体免疫功能，能杀死癌细胞，对HBV有清除或抑制其复制作用，升高白细胞疗效显著，尚未发现明显毒副作用。
下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。实施例1冻干粉针剂的制备(1)取人参100g，用75％乙醇加热回流提取4次，每次1小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1.5倍量水，搅匀，冷藏42小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和60％的乙醇洗脱，收集600％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.18(60℃)，干燥，得人参提取物。
(2)取黄芪315g和人参药渣，加水煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.12(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏40小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.16(60℃)，加2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用65％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.17(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加5倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素11g，加入注射用水500ml和氯化钠1g、甘露醇7g、聚维酮K30 2g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置38小时，滤过，滤液分装于已灭菌的西林瓶中，冷冻干燥，压塞、压盖，即制得本发明冻干粉针剂。
(2)取黄芪300g和人参药渣，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.18(60℃)，加2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.15(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素10g，加入注射用水995ml和氯化钠2g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置48小时，滤过，滤液再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于10ml的安瓿中，灭菌、质检，即制得本发明注射液。
(2)取上述人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素11g，加入注射用水2000ml和氯化钠15g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置40小时，滤过，滤液再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于100ml输液瓶中，灭菌、质检，即制得本发明大输液剂。主要药效试验第一部分本发明冻干粉针抗肿瘤药理作用实验研究一、试验材料1药物与试剂本发明冻干粉由广东天之骄公司提供，规格0.3g/瓶。
康莱特注射液，规格10g/100ml，批号0001212-2，浙江康莱特注射液药业有限公司生产。白细胞介素2(IL-2)注射液，规格20万U/支，深圳科兴生物技术公司生产。IL-2及α-肿瘤坏死因子(TNF-α)试剂盒、刀豆素A(Con-A，1g/瓶)购自晶美生物工程公司。2.试验动物清洁级昆明小鼠，体重20±2g，8周龄，雌雄各半，由第一军医大学实验动物中心提供(粤检证字第2000A058号)。小鼠雌雄分笼饲养，5只/笼，自由饮水，室温25±1℃，相对湿度50％-70％。饲养3天后，取外观、食欲、大小便无异常的小鼠进行试验。3.其它小鼠SRS-82细胞株购自上海细胞生物所；二、实验方法与结果1本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤试验1.1实验方法小鼠分组小鼠分为空白对照组、模型组、本发明冻干粉50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组、康莱特注射液注射组共6组，每组小鼠20只，重复2次。
肿瘤接种分别将培养的SRS-82细胞接种昆明小鼠后第8天，自4只小鼠腹腔中抽取腹水约15ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml后(共30ml)，每只小鼠左腹股沟皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。
给药方式及时间每只小鼠腹腔注射(ip)给药0.1ml/10g，康莱特注射液不稀释直接ip给药，于接种肿瘤后的第2天开始给药，1次/天，共10天。
抑瘤率于接种后的第12天，脱颈椎处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤重量，并按以下公式计算抑瘤率抑瘤率＝(模型组平均肿瘤重量-给药组平均肿瘤重量)/模型组平均肿瘤重量×100％1.2实验结果1.2对肿瘤的抑制作用与模型组比较，本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠肿瘤有明显的抑制作用，并呈量效关系，三次试验本发明高剂量组的平均抑瘤率约55％，优于中剂量组的33％及低剂量组的21％，略高于康莱特注射液47％，明显低于本发明高剂量组的抑瘤率，见表1表1 本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠肿瘤的平均抑瘤率比较(％)组别试验1 试验2 试验3 平均本发明冻干粉高剂量注射 50.0 53.9 59.6 54.5±6.7▲本发明冻干粉中剂量注射 31.6 49.2 19.2 33.3±15.0☆本发明冻干粉低剂量注射 28.9 20.3 13.5 20.9±7.6康莱特注射液注射46.5 35.9 51.9 44.8±8.2★与高剂量组比较，★P＜0.01；☆P＜0.05.2.本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠免疫功能的影响2.1方法2.1.1本发明冻干粉对肝、脾、胸腺重量的影响于接种肿瘤后的第12天，断颈处死各组小鼠，分别称取每只小鼠的体重及肝、脾、胸腺重量，计算肝、脾、胸腺系数。2.1.2本发明白细胞数量变化实体瘤小鼠于接种肿瘤后的第11天，眼眶后静脉丛采血约100μl，用日本F-800血细胞自动分析仪检测各组小鼠的白细胞数。2.1.3体外巨噬细胞吞噬功能检测各组小白鼠于实验第11天分别腹腔内注射冷DMEM培养基5ml，轻柔腹腔，10min后抽出腹腔液，1000r/min离心10min，弃部分上清，留约2ml。然后混匀后加入1％鸡血球2ml。放恒温培养箱内60min后，混匀涂片，瑞氏染色，计算100个巨噬细胞吞噬百分率(多少个细胞吞噬了红细胞)及吞噬指数(共吞噬了多少个红细胞)。2.1.4 NK细胞活性测定效应细胞的制备同方法5.4。将传代一天的HepG2细胞，用DMEM工作培养基洗一次，制备成终悬液细胞浓度为5.0×105/ml，即为靶细胞。效靶比为50∶1。取96孔培养板，每管设3个复孔，同时设DMEM工作培养基对照组及HepG2细胞/工作培养基对照组，除这两组外，其余各组每孔加入100μl效应细胞及100μl靶细胞，置37℃ 5％CO2培养箱内孵育48h取出，1000r/min离心10min，每孔吸取上清100μl弃去，再加入MTT液10μl，继续培养4h取出，每孔加入100μl 0.1％SDS溶液，再孵育2h，取出，室温放置30min，用Model 450酶标仪测定各孔A570nm值，按下式计算NK细胞活性。
NK细胞活性(％)＝(1-实验孔A570nm/对照孔A570nm)×100％2.1.5荷瘤小鼠血清IL-2及TNF含量的测定于肿瘤接种后第12天，通过眼眶后静脉丛采血，3000r/min离心10min分离血清，用晶美生物工程公司的小鼠IL-2及TNF-α试剂盒测定血清IL-2及TNF-α水平。2.2结果2.2.1本发明冻干粉对肝、脾、胸腺的影响本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠肝、脾、胸腺系数的影响见表2。与模型组比较，本发明冻干粉给药后，脾系数明显降低(p＜0.05)，肝、胸腺系数变化不明显(低剂量组肝脏小于模型组，P＜0.01)。
表2 本发明冻干粉对SRS-82实体瘤小鼠部分脏器系数的影响(x+S)组 别 小鼠数 肝系数 脾系数 胸腺系数空白对照 20 7.55±2.56 1.93±1.34 2.07±1.58模型 16 9.24±1.69#2.61±1.49#2.66±0.79本发明冻干粉高剂量 18 9.70±2.66*2.01±0.51△2.77±1.17本发明冻干粉中剂量 19 7.97±1.62 1.86±0.47△2.27±0.78#本发明冻干粉低剂量 20 7.38±1.24▲1.87±0.62△2.38±0.93#康莱特注射液 16 8.35±2.01 1.85±0.76△2.65±1.55与空白对照组比较，*P＜0.01，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.2.2.2本发明冻干粉对荷瘤小鼠血白细胞的影响本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血白细胞数的影响见表3，可见荷瘤小鼠的血白细胞数升高，以本发明冻干粉高、中剂量组鼠最为明显。
表3 本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血白细胞的影响(第12天，x+S)组别 小鼠数量 白细胞数(×109/L)空白对照 20 7.05±0.83模型 16 8.91±1.43本发明冻干粉高剂量 18 11.59±4.07*△本发明冻干粉中剂量 19 10.91±5.36#本发明冻干粉低剂量 18 7.50±3.75康莱特注射液 16 7.54±0.77与空白对照组比较，*P＜0.01，#P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05.2.2.3体外巨噬细胞吞噬功能检测本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响见表4，可见高剂量组的吞噬率及吞噬指数均高于中、低剂量组。
表4 本发明冻干粉对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(n＝8，x±s)组 别吞噬率 吞噬指数空白对照0.43±0.18 0.58±0.20模型0.43±0.15 0.60±0.18本发明冻干粉高剂量 0.58±0.14 0.80±0.21#△本发明冻干粉中剂量 0.48±0.11 0.70±0.13本发明冻干粉低剂量 0.32±0.08 0.70±0.17康莱特注射液0.48±0.08 0.85±0.20*▲与空白对照组比较，*P＜0.01，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.2.2.3 NK细胞活性测定结果本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠NK细胞活性试验结果见表5(每组11-12只小鼠)，除模型组及本发明低剂量组较低外(约25％)，其余各组的NK细胞活性相似(约35％)。
表5 本发明冻干粉对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响组别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112 x±S空白对照0.33 0.32 0.37 0.37 0.21 0.25 0.19 0.32 0.38 0.33 0.33 0.46 0.32±0.08模型0.32 0.20 0.31 0.27 0.21 0.26 0.25 0.32 0.19 0.31 0.15 0.22 0.25±0.06#本发明冻干粉高剂量 0.45 0.38 0.30 0.43 0.37 0.43 0.35 0.41 0.34 0.34 0.34 0.24 0.37±0.06▲本发明冻干粉中剂量 0.47 0.37 0.26 0.31 0.31 0.30 0.26 0.34 0.30 0.35 0.44 0.45 0.35±0.07▲本发明冻干粉低剂量 0.33 0.28 0.30 0.31 0.09 0.19 0.18 0.26 0.27 0.32 0.31 0.20 0.25±0.07#康莱特注射液0.36 0.38 0.29 0.36 0.40 0.36 0.33 0.35 0.46 0.41 0.500.38±0.06#▲与空白对照组比较，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01.(表中数值为每个样品3孔的平均值)2.2.4荷瘤小鼠血清IL-2及TNF含量的测定结果本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血清TNF及IL-2水平的影响见表6，结果各组小鼠的TNF水平相似，但本发明高剂量组及康莱特注射液注射组的血清IL-2水平升高，高于本发明中剂量、低剂量组。
表6 本发明冻干粉对荷瘤小鼠血清TNF、IL-2水平的影响(n＝11，x±s)组 别TNF-α IL-2空白对照 0.030±0.0160.068±0.020模型0.025±0.0150.043±0.015*本发明高剂量 0.025±0.0200.107±0.025*▲本发明中剂量 0.024±0.0180.085±0.023▲本发明低剂量 0.024±0.0160.065±0.030△康莱特注射液 0.024±0.0140.101±0.029*▲与空白对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.
第二部分本发明冻干粉抗乙肝病毒的实验研究1. 实验材料1.1药物本发明冻干粉0.3g/瓶，由广东天之骄公司提供。
拉咪呋定(3TC)由葛兰素威康(苏州)制药有限公司生产，批号0112005。1.2动物雄性一日龄龙岩麻鸭，购自广州石井潮阳村孵化场，实验时体重约100克/只，常规饲养。1.3主要试剂及仪器NC膜，购自Amersham公司。DHBV质粒由广州中医药大学热带病研究所中医药室技术人员提取。
缺口翻译药盒，购自promega公司。α-32p-dCTP，购自北京亚辉公司。
Sephadex G-50，购自Pharmacia公司。
96孔杂交点样器美国Bio-rad公司产品。
盖革氏计数器美国S.E.International公司产品。1.4阳性药选择选择抗HBV作用较强的拉咪呋定作为阳性对照药。1.5结果处理用单因素方差分析进行统计学处理。2实验方法与结果2.1抗先天性感染鸭乙肝病毒作用的实验一日龄龙岩麻鸭购回当天于胫静脉取血，分离血清后，用斑点杂交的方法检测DHBV，选出先天感染的鸭子进行实验，鸭子平均体重约100g。给药组本发明分40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg三个剂量组；静脉注射体积为0.4ml/只，每天1次；另设病毒对照组，静脉注射NS；阳性药选用拉咪呋定(3TC)20mg/kg，口服1ml/只，每天1次；均为10天一疗程。于用药前(T0)、用药第5天(T5)、第10天(T10)及停药后第3天(P3)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70℃冻存待检。
DHBV-DNA检测方法取上述鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的变化，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪上测定OD值(滤光片波长为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度。结果采取药物组的给药不同时间(T5、T10、P3)与给药前(T0)进行比较，以及药物组与对照组相同时间进行比较。结果见表1。
表1本发明在鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用(x±s)鸭数 OD490值组别 剂量(n) T0T5T10P3病毒对照 - 7 2.12±0.52 2.08±0.47 1.94±0.51 1.53±0.47*3TC 20mg/kg8 1.88±0.66 0.62±0.63**△△0.39±0.47**△△2.22±0.70本发明40mg/kg5 2.15±0.21 1.95±0.41 1.51±0.52 1.44±0.20*80mg/kg7 1.89±0.18 1.22±0.55** 1.01±0.58*1.42±0.38**160mg/kg 6 2.21±0.54 0.78±0.47** 0.58±0.12** 1.05±0.26**药物组给药不同时间与给药前(T0)比较*P＜0.05 **P＜0.01药物组与对照组相同时间比较△△P＜0.01由表1表明，本发明冻干粉三个剂量组10天疗程对鸭乙型肝炎病毒有明显抑制作用。3TC也作用显著(P＜0.01)。
权利要求
1.一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的药剂黄芪270-330、人参90-110、苦参素6-12。
2.根据权利要求1所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂所含有效成分及其重量份为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg1+Re 0.12～0.65、总多糖2.1～20、苦参素6～12。
3.根据权利要求1或2所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
4.根据权利要求3所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂是注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂。
5.权利要求4任一项所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物的制备方法，包括以下步骤(1)取人参，用70～90％乙醇加热回流提取1～4次，每次1～3小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1～2倍量水，搅匀，冷藏12～48小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和50～70％的乙醇洗脱，收集50～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得人参提取物。(2)取黄芪和人参药渣，加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12～48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加1～2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得黄芪提取物。(3)取上述(2)项下的沉淀，加2～6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置12～48小时，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂。
6.根据权利要求5所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物制备方法，其特征在于所述的药用辅料为氯化钠、甘露醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖中的一种或几种。
全文摘要
本发明公开了一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，它是以黄芪、人参、苦参素为原料制成的中药药剂，其所含有效成分组成及比例(重量)为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg
文档编号A61K9/19GK1480192SQ0313979
公开日2004年3月10日 申请日期2003年7月11日 优先权日2003年7月11日
发明者王习著 申请人:广东天之骄药物开发有限公司
技术领域：
本发明涉及一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，具体涉及一种以中药为原料制备的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术：
尽管医学研究有很大的进展，癌症仍然为人类主要死因。根据发病的部位不同有肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤等，癌症治疗的常规方法如手术、化疗、放疗和介入疗法，只是治标不治本，对病人带来很大的痛苦，在杀死癌细胞的同时也将正常细胞杀死，造成人们的免疫功能下降，治疗效果不太好，治愈率低，而且许多肿瘤对这些常规的治疗方法具有抗性和较大的副作用。
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，简称HBV)引起的一种传染性病。中国是乙型肝炎的高流行区，有超过40％的人群受过HBV感染，有1亿多人口为慢性HbsAg携带者。据调查，中国现患慢性乙型肝炎的病人超过3000万人，受HBV慢性感染的人群易罹患原发性肝癌。慢性乙型肝炎的发病机理是由于患者免疫调节功能紊乱，不能很好地调节机对HBV得不到清除，肝细胞受到不同程度的损害，HBV复制。近年来国内外出现治疗慢性乙型肝炎的医药，临床疗效不一，得到国内外公认的是INF-α，但HbeAg及HBV DNA的阴转率亦只为40％左右，疗效远非理想，且由于有一定的副作用及价格昂贵而使临床受到限制。目前市场上缺少抗HBV疗效确切，又无副作用的药物。
发明内容
本发明所要解决的技术问题，提供一种以中药为原料制成的治疗原发性肝癌、肺癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤和慢性乙型肝炎的药物，其有效成分明确，质量可控，使用本发明的药物抗癌和抗HBV疗效确切，无副作用和抗性；本发明所要解决的另一个技术问题是提供这种药物的制备方法，该制备方法以充分提取各味药中的有效成分，并采用先进的药剂剂型。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案
一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，是由下述重量配比的中药原料制成的药剂黄芪270-330、人参90-110、苦参素6-12。
上述治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂所含有效成分组成及其重量比例为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg1+Re 0.12～0.65、总多糖2.1～20、苦参素6～12。
上述用于治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如注射液、大输液、冻干粉针剂、口服液、胶囊或片剂。
将上述重量配比的原料制成本发明药物的方法，包括以下步骤(1)取人参，用70～90％乙醇加热回流提取1～4次，每次1～3小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1～2倍量水，搅匀，冷藏12～48小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和50～70％的乙醇洗脱，收集50～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得人参提取物。
(2)取黄芪和人参药渣，加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12～48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加1～2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加2～6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置12～48小时，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液、粉针剂，即制得本发明注射剂。
本发明所述的药用辅料为氯化钠、甘露醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖中的一种或几种。
本发明所使用的原料——黄芪和人参，要求分别符合《中国药典》2000年版一部项下黄芪和人参项下有关的各项规定；苦参素则要求其氧化苦参碱的含量高于85％。
本发明药物的有效成分黄芪甲苷和氧化苦参碱的含量检测采用了薄层扫描法，总多糖的检测采用比色法，人参皂苷Rg1+Re的含量检测则采用高效液相法。本发明的有益效果1、本发明由黄芪、人参、苦参素三味药物制成，其中黄芪中含有黄芪皂苷、多糖类、黄酮类、胆碱、甜菜碱等，黄芪皂苷和黄芪多糖为黄芪中最重要生理活性成分；人参含人参皂苷和人参多糖等化学成分，为人参中最重要生理活性成分；苦参素即氧化苦参碱(C15H24N2O2)。因此本发明的制备方法根据各中药所含有效成分的性质和药理作用，选用水和乙醇作为提取溶剂，并以大孔吸附树脂和超滤法进行纯化处理提取液，以充分提取精制各味药中的有效成分，因而本发明的药物具有有效成份明确、质量可控的特点。
2、本发明剂型为注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂，可直接用于静脉注射，因而起效迅速、生物利用度高、效果确切可靠。
3、本发明药物经稳定性试验研究表明，有效期长达2.5年，澄明度、溶血性、色泽、pH值、热源、刺激性等指标均符合《中国药典》有关注射剂的规定。
4、本发明冻干粉针剂除具有注射液特点外，尚有贮存方便、便于携带和使用的优点。
5、经临床初步试验表明，本发明药物具有益气扶正，增强机体免疫功能，能杀死癌细胞，对HBV有清除或抑制其复制作用，升高白细胞疗效显著，尚未发现明显毒副作用。
下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。实施例1冻干粉针剂的制备(1)取人参100g，用75％乙醇加热回流提取4次，每次1小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1.5倍量水，搅匀，冷藏42小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和60％的乙醇洗脱，收集600％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.18(60℃)，干燥，得人参提取物。
(2)取黄芪315g和人参药渣，加水煎煮3次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.12(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏40小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.16(60℃)，加2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用65％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.17(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加5倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素11g，加入注射用水500ml和氯化钠1g、甘露醇7g、聚维酮K30 2g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置38小时，滤过，滤液分装于已灭菌的西林瓶中，冷冻干燥，压塞、压盖，即制得本发明冻干粉针剂。
(2)取黄芪300g和人参药渣，加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.18(60℃)，加2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.15(60℃)，干燥，得黄芪提取物。
(3)取上述(2)项下的沉淀，加6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。
(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素10g，加入注射用水995ml和氯化钠2g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置48小时，滤过，滤液再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于10ml的安瓿中，灭菌、质检，即制得本发明注射液。
(2)取上述人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素11g，加入注射用水2000ml和氯化钠15g，搅拌溶解，用40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置40小时，滤过，滤液再分别用0.45um和0.22um的滤膜滤过，滤液灌封于100ml输液瓶中，灭菌、质检，即制得本发明大输液剂。主要药效试验第一部分本发明冻干粉针抗肿瘤药理作用实验研究一、试验材料1药物与试剂本发明冻干粉由广东天之骄公司提供，规格0.3g/瓶。
康莱特注射液，规格10g/100ml，批号0001212-2，浙江康莱特注射液药业有限公司生产。白细胞介素2(IL-2)注射液，规格20万U/支，深圳科兴生物技术公司生产。IL-2及α-肿瘤坏死因子(TNF-α)试剂盒、刀豆素A(Con-A，1g/瓶)购自晶美生物工程公司。2.试验动物清洁级昆明小鼠，体重20±2g，8周龄，雌雄各半，由第一军医大学实验动物中心提供(粤检证字第2000A058号)。小鼠雌雄分笼饲养，5只/笼，自由饮水，室温25±1℃，相对湿度50％-70％。饲养3天后，取外观、食欲、大小便无异常的小鼠进行试验。3.其它小鼠SRS-82细胞株购自上海细胞生物所；二、实验方法与结果1本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤试验1.1实验方法小鼠分组小鼠分为空白对照组、模型组、本发明冻干粉50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组、康莱特注射液注射组共6组，每组小鼠20只，重复2次。
肿瘤接种分别将培养的SRS-82细胞接种昆明小鼠后第8天，自4只小鼠腹腔中抽取腹水约15ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml后(共30ml)，每只小鼠左腹股沟皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。
给药方式及时间每只小鼠腹腔注射(ip)给药0.1ml/10g，康莱特注射液不稀释直接ip给药，于接种肿瘤后的第2天开始给药，1次/天，共10天。
抑瘤率于接种后的第12天，脱颈椎处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤重量，并按以下公式计算抑瘤率抑瘤率＝(模型组平均肿瘤重量-给药组平均肿瘤重量)/模型组平均肿瘤重量×100％1.2实验结果1.2对肿瘤的抑制作用与模型组比较，本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠肿瘤有明显的抑制作用，并呈量效关系，三次试验本发明高剂量组的平均抑瘤率约55％，优于中剂量组的33％及低剂量组的21％，略高于康莱特注射液47％，明显低于本发明高剂量组的抑瘤率，见表1表1 本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠肿瘤的平均抑瘤率比较(％)组别试验1 试验2 试验3 平均本发明冻干粉高剂量注射 50.0 53.9 59.6 54.5±6.7▲本发明冻干粉中剂量注射 31.6 49.2 19.2 33.3±15.0☆本发明冻干粉低剂量注射 28.9 20.3 13.5 20.9±7.6康莱特注射液注射46.5 35.9 51.9 44.8±8.2★与高剂量组比较，★P＜0.01；☆P＜0.05.2.本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠免疫功能的影响2.1方法2.1.1本发明冻干粉对肝、脾、胸腺重量的影响于接种肿瘤后的第12天，断颈处死各组小鼠，分别称取每只小鼠的体重及肝、脾、胸腺重量，计算肝、脾、胸腺系数。2.1.2本发明白细胞数量变化实体瘤小鼠于接种肿瘤后的第11天，眼眶后静脉丛采血约100μl，用日本F-800血细胞自动分析仪检测各组小鼠的白细胞数。2.1.3体外巨噬细胞吞噬功能检测各组小白鼠于实验第11天分别腹腔内注射冷DMEM培养基5ml，轻柔腹腔，10min后抽出腹腔液，1000r/min离心10min，弃部分上清，留约2ml。然后混匀后加入1％鸡血球2ml。放恒温培养箱内60min后，混匀涂片，瑞氏染色，计算100个巨噬细胞吞噬百分率(多少个细胞吞噬了红细胞)及吞噬指数(共吞噬了多少个红细胞)。2.1.4 NK细胞活性测定效应细胞的制备同方法5.4。将传代一天的HepG2细胞，用DMEM工作培养基洗一次，制备成终悬液细胞浓度为5.0×105/ml，即为靶细胞。效靶比为50∶1。取96孔培养板，每管设3个复孔，同时设DMEM工作培养基对照组及HepG2细胞/工作培养基对照组，除这两组外，其余各组每孔加入100μl效应细胞及100μl靶细胞，置37℃ 5％CO2培养箱内孵育48h取出，1000r/min离心10min，每孔吸取上清100μl弃去，再加入MTT液10μl，继续培养4h取出，每孔加入100μl 0.1％SDS溶液，再孵育2h，取出，室温放置30min，用Model 450酶标仪测定各孔A570nm值，按下式计算NK细胞活性。
NK细胞活性(％)＝(1-实验孔A570nm/对照孔A570nm)×100％2.1.5荷瘤小鼠血清IL-2及TNF含量的测定于肿瘤接种后第12天，通过眼眶后静脉丛采血，3000r/min离心10min分离血清，用晶美生物工程公司的小鼠IL-2及TNF-α试剂盒测定血清IL-2及TNF-α水平。2.2结果2.2.1本发明冻干粉对肝、脾、胸腺的影响本发明冻干粉对荷SRS-82肉瘤小鼠肝、脾、胸腺系数的影响见表2。与模型组比较，本发明冻干粉给药后，脾系数明显降低(p＜0.05)，肝、胸腺系数变化不明显(低剂量组肝脏小于模型组，P＜0.01)。
表2 本发明冻干粉对SRS-82实体瘤小鼠部分脏器系数的影响(x+S)组 别 小鼠数 肝系数 脾系数 胸腺系数空白对照 20 7.55±2.56 1.93±1.34 2.07±1.58模型 16 9.24±1.69#2.61±1.49#2.66±0.79本发明冻干粉高剂量 18 9.70±2.66*2.01±0.51△2.77±1.17本发明冻干粉中剂量 19 7.97±1.62 1.86±0.47△2.27±0.78#本发明冻干粉低剂量 20 7.38±1.24▲1.87±0.62△2.38±0.93#康莱特注射液 16 8.35±2.01 1.85±0.76△2.65±1.55与空白对照组比较，*P＜0.01，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.2.2.2本发明冻干粉对荷瘤小鼠血白细胞的影响本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血白细胞数的影响见表3，可见荷瘤小鼠的血白细胞数升高，以本发明冻干粉高、中剂量组鼠最为明显。
表3 本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血白细胞的影响(第12天，x+S)组别 小鼠数量 白细胞数(×109/L)空白对照 20 7.05±0.83模型 16 8.91±1.43本发明冻干粉高剂量 18 11.59±4.07*△本发明冻干粉中剂量 19 10.91±5.36#本发明冻干粉低剂量 18 7.50±3.75康莱特注射液 16 7.54±0.77与空白对照组比较，*P＜0.01，#P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05.2.2.3体外巨噬细胞吞噬功能检测本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响见表4，可见高剂量组的吞噬率及吞噬指数均高于中、低剂量组。
表4 本发明冻干粉对荷瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响(n＝8，x±s)组 别吞噬率 吞噬指数空白对照0.43±0.18 0.58±0.20模型0.43±0.15 0.60±0.18本发明冻干粉高剂量 0.58±0.14 0.80±0.21#△本发明冻干粉中剂量 0.48±0.11 0.70±0.13本发明冻干粉低剂量 0.32±0.08 0.70±0.17康莱特注射液0.48±0.08 0.85±0.20*▲与空白对照组比较，*P＜0.01，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.2.2.3 NK细胞活性测定结果本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠NK细胞活性试验结果见表5(每组11-12只小鼠)，除模型组及本发明低剂量组较低外(约25％)，其余各组的NK细胞活性相似(约35％)。
表5 本发明冻干粉对荷瘤小鼠NK细胞活性的影响组别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112 x±S空白对照0.33 0.32 0.37 0.37 0.21 0.25 0.19 0.32 0.38 0.33 0.33 0.46 0.32±0.08模型0.32 0.20 0.31 0.27 0.21 0.26 0.25 0.32 0.19 0.31 0.15 0.22 0.25±0.06#本发明冻干粉高剂量 0.45 0.38 0.30 0.43 0.37 0.43 0.35 0.41 0.34 0.34 0.34 0.24 0.37±0.06▲本发明冻干粉中剂量 0.47 0.37 0.26 0.31 0.31 0.30 0.26 0.34 0.30 0.35 0.44 0.45 0.35±0.07▲本发明冻干粉低剂量 0.33 0.28 0.30 0.31 0.09 0.19 0.18 0.26 0.27 0.32 0.31 0.20 0.25±0.07#康莱特注射液0.36 0.38 0.29 0.36 0.40 0.36 0.33 0.35 0.46 0.41 0.500.38±0.06#▲与空白对照组比较，#p＜0.05；与模型组比较，▲P＜0.01.(表中数值为每个样品3孔的平均值)2.2.4荷瘤小鼠血清IL-2及TNF含量的测定结果本发明冻干粉对荷SRS-82瘤小鼠血清TNF及IL-2水平的影响见表6，结果各组小鼠的TNF水平相似，但本发明高剂量组及康莱特注射液注射组的血清IL-2水平升高，高于本发明中剂量、低剂量组。
表6 本发明冻干粉对荷瘤小鼠血清TNF、IL-2水平的影响(n＝11，x±s)组 别TNF-α IL-2空白对照 0.030±0.0160.068±0.020模型0.025±0.0150.043±0.015*本发明高剂量 0.025±0.0200.107±0.025*▲本发明中剂量 0.024±0.0180.085±0.023▲本发明低剂量 0.024±0.0160.065±0.030△康莱特注射液 0.024±0.0140.101±0.029*▲与空白对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，▲P＜0.01，△p＜0.05.
第二部分本发明冻干粉抗乙肝病毒的实验研究1. 实验材料1.1药物本发明冻干粉0.3g/瓶，由广东天之骄公司提供。
拉咪呋定(3TC)由葛兰素威康(苏州)制药有限公司生产，批号0112005。1.2动物雄性一日龄龙岩麻鸭，购自广州石井潮阳村孵化场，实验时体重约100克/只，常规饲养。1.3主要试剂及仪器NC膜，购自Amersham公司。DHBV质粒由广州中医药大学热带病研究所中医药室技术人员提取。
缺口翻译药盒，购自promega公司。α-32p-dCTP，购自北京亚辉公司。
Sephadex G-50，购自Pharmacia公司。
96孔杂交点样器美国Bio-rad公司产品。
盖革氏计数器美国S.E.International公司产品。1.4阳性药选择选择抗HBV作用较强的拉咪呋定作为阳性对照药。1.5结果处理用单因素方差分析进行统计学处理。2实验方法与结果2.1抗先天性感染鸭乙肝病毒作用的实验一日龄龙岩麻鸭购回当天于胫静脉取血，分离血清后，用斑点杂交的方法检测DHBV，选出先天感染的鸭子进行实验，鸭子平均体重约100g。给药组本发明分40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg三个剂量组；静脉注射体积为0.4ml/只，每天1次；另设病毒对照组，静脉注射NS；阳性药选用拉咪呋定(3TC)20mg/kg，口服1ml/只，每天1次；均为10天一疗程。于用药前(T0)、用药第5天(T5)、第10天(T10)及停药后第3天(P3)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70℃冻存待检。
DHBV-DNA检测方法取上述鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的变化，按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪上测定OD值(滤光片波长为490nm)，计算血清DHBV-DNA密度。结果采取药物组的给药不同时间(T5、T10、P3)与给药前(T0)进行比较，以及药物组与对照组相同时间进行比较。结果见表1。
表1本发明在鸭体内对DHBV-DNA的抑制作用(x±s)鸭数 OD490值组别 剂量(n) T0T5T10P3病毒对照 - 7 2.12±0.52 2.08±0.47 1.94±0.51 1.53±0.47*3TC 20mg/kg8 1.88±0.66 0.62±0.63**△△0.39±0.47**△△2.22±0.70本发明40mg/kg5 2.15±0.21 1.95±0.41 1.51±0.52 1.44±0.20*80mg/kg7 1.89±0.18 1.22±0.55** 1.01±0.58*1.42±0.38**160mg/kg 6 2.21±0.54 0.78±0.47** 0.58±0.12** 1.05±0.26**药物组给药不同时间与给药前(T0)比较*P＜0.05 **P＜0.01药物组与对照组相同时间比较△△P＜0.01由表1表明，本发明冻干粉三个剂量组10天疗程对鸭乙型肝炎病毒有明显抑制作用。3TC也作用显著(P＜0.01)。
权利要求
1.一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成的药剂黄芪270-330、人参90-110、苦参素6-12。
2.根据权利要求1所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂所含有效成分及其重量份为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg1+Re 0.12～0.65、总多糖2.1～20、苦参素6～12。
3.根据权利要求1或2所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。
4.根据权利要求3所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，其特征在于所述的药剂是注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂。
5.权利要求4任一项所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物的制备方法，包括以下步骤(1)取人参，用70～90％乙醇加热回流提取1～4次，每次1～3小时，人参药渣备用；提取液合并，减压回收尽乙醇后，加1～2倍量水，搅匀，冷藏12～48小时，滤过，滤液上大孔吸附树脂层析柱，依次用水和50～70％的乙醇洗脱，收集50～70％的乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得人参提取物。(2)取黄芪和人参药渣，加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加乙醇使含醇量达75％，冷藏12～48小时，沉淀备用；上清液减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，加1～2倍量水，搅匀，过滤，滤液上大孔吸附树脂层析柱，先用水洗至洗脱液无色为止，再用60～80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收并浓缩至相对密度为1.10～1.20(60℃)，干燥，得黄芪提取物。(3)取上述(2)项下的沉淀，加2～6倍量的水溶解，滤过，滤液用分子量为10万的膜超滤，超滤液再用分子量为3000的膜超滤浓缩，浓缩液加乙醇使含醇量达80％，冷藏，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后真空干燥，粉碎，得总多糖。(4)取人参提取物、黄芪提取物、总多糖和苦参素，加入注射用水和药用辅料，搅拌溶解，用10～40％的氢氧化钠溶液调pH6～7，静置12～48小时，滤过，滤液按制剂常规工艺制成注射剂，包括注射液、大输液、冻干粉针剂。
6.根据权利要求5所述的治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物制备方法，其特征在于所述的药用辅料为氯化钠、甘露醇、聚维酮K30、葡萄糖、乳糖中的一种或几种。
全文摘要
本发明公开了一种治疗癌症和慢性乙型肝炎的药物，它是以黄芪、人参、苦参素为原料制成的中药药剂，其所含有效成分组成及比例(重量)为黄芪甲苷0.05～0.32、人参皂苷Rg
文档编号A61K9/19GK1480192SQ0313979
公开日2004年3月10日 申请日期2003年7月11日 优先权日2003年7月11日
发明者王习著 申请人:广东天之骄药物开发有限公司
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