一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法
专利名称：一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法
技术领域：
本发明涉及一种骨质疏松症治疗药物，尤其是一种以天然中药材制成的纯中药制剂，本发明还涉及该制剂的生产方法。
背景技术：
骨质疏松症是以骨量减少为特征，骨组织显微结构改变和骨折危险频度增加的疾病，是一种多因多果的老年性常见疾病。目前，在治疗方面，临床使用的无论是中药，还是西药，均存在难以使骨质疏松症患者的骨量恢复正常的缺点。相对于中药制剂，西药治疗更具有服药时间长，副作用大，费用高等问题。
发明内容本发明的目的是为了克服目前治疗骨质疏松症药物的骨量恢复效果差的缺点，提供一种见效快、临床症状缓解彻底、骨量恢复明显、副作用小、费用低的药物。
本发明的目的还在于提供该制剂的生产方法。
本发明是这样实现的采用天然中药材补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参为原料制成的口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊等。其中黄芪应选用北黄芪，淫羊藿应选用制淫羊藿。
本发明的中药复方制剂包括下列组分制成的(用量为重量比)补骨脂100～180份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各120～200份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊机剂等。
本发明的中药复方制剂各组分的优先重量比为补骨脂120～150份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各130～170份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂等。
本发明的中药复方制剂各组分的最佳配比为补骨脂130份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂等。
本发明中的口服液制备方法是取上述方中各药全量，加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料(如果葡糖、山梨酸钾)及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
口服液剂量与服法口服，10ml/支/次，1.43g生药/ml/支，每天服二次，早晚饭后各服一次。
本发明中的口服散剂制备方法是取上述方中各药全量，经粉碎加工成口服散剂。
本发明中的冲剂制备方法是取上述方中各药全量，加水浸没后提取1～3次，合并提取液，浓缩，进一步添加辅料(如糖粉)制粒，制成冲剂。
本发明中的片剂制备方法是将上述冲剂添加常规片剂辅料(如淀粉、糖粉、糊精、硫酸镁、滑石粉)，并通过压片机，制成片剂。
本发明中的胶囊剂制备方法是取各药全量，加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加辅料，烘干成药粉，分装，制成胶囊。
本发明的解决方案基于中国传统医学理论，诸药合用，相辅相成，相得益彰，共达补中寓通，补而不滞之目的。该方补肾壮阳，滋阴益精，同时培补后天生化之源以充肾精。肾阳得充，脾得健运，气机得调，气血运行通畅，从而达到缓解症状，提高骨量之功效。
本发明的药物主治骨质疏松症，能缓解症状及提高骨量和改善骨的生物力学性能，使骨的质量有不同程度的恢复，其具有见效快、服用方便、骨量提高明显、副作用小等优点。
具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成口服液。其生产方法是全部药材加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料(如果葡糖、山梨酸钾)及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
实施例2补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成口服散剂。其生产方法是全部药材经粉碎加工成口服散剂。
实施例3补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成冲剂。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加糖粉制粒，制成冲剂，分装。
实施例4补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成片剂。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加淀粉制粒，进一步添加硫酸镁，滑石粉，经压片机压成片剂。
实施例5补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成胶囊。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加辅料，烘干成药粉，分装，制成胶囊。
取实施例1进行有关药效学试验及毒理学实验。
实施例1有关药效学试验实验1防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雌性SD大鼠90只，4月龄，体重200-220g。随机分为6组，每组15只。
1.2 实验药物实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、尼尔雌醇、3％戊巴比要钠、盐酸四环素、Calcein(USA)、甲基丙烯酸甲酯。
2.方法2.1 造模方法均采用背侧入路双侧卵巢摘除手术造模。
2.2 给药方法术后第3天开始给药，连续给药至术后3个月时处死全部实验动物。
3.结果3.1 实施例1对去势大白鼠骨面密度(BMD)(表1)、骨矿含量(BMC)(表2)变化的影响。
表1 实施例1对去卵巢大鼠BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 N 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组110.23±0.03*0.22±0.02*模型组100.17±0.05# 0.17±0.04#实施例1高剂量组 100.23±0.02*0.22±0.02*实施例1中剂量组 110.18±0.05# 0.19±0.02#实施例1低剂量组 100.21±0.02*0.20±0.02*#尼尔雌醇组100.22±0.04*0.21±0.04*注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对去卵巢大鼠BMC变化的影响(x±s)(g)组别n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 110.09±0.01**0.09±0.01**模型组 100.07±0.02##0.07±0.02##实施例1高剂量组 100.09±0.01**0.09±0.01**实施例1中剂量组 110.07±0.05# 0.07±0.02#实施例1低剂量组 100.08±0.01##0.08±0.01##尼尔雌醇组 100.09±0.02**0.08±0.01*#表1、表2表明实施例1灌胃3个月时各组大鼠在左、右侧胫骨干骺端处的骨密度和骨矿含量均有显著差别，其中模型组最低；实施例1高剂量组明显高于模型组，与阳性对照组无显著差异。说明实施例1可显著提高胫骨干骺端处的BMD和BMC，二者作用相当，说明均能提高骨量。
3.2 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去卵巢大鼠左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组110.70±0.09**0.49±0.05模型组100.55±0.05##0.48±0.04实施例1高剂量组 100.71±0.08**0.51±0.08实施例1中剂量组 110.64±0.04**# 0.51±0.09实施例1低剂量组 100.55±0.06##0.48±0.07尼尔雌醇组100.57±0.05##0.49±0.07表3表明实施例1灌胃3个月时各组大鼠左侧股骨扭转实验中最大扭矩(M)有明显差异，但扭转刚度(K)差异不显著。实施例1中、高剂量组最大扭矩明显高于模型组，说明实施例1能促进骨小梁重建，提高骨的力学性能，增加骨的韧度，使骨抗扭转强度增高，其中又以实施例1高剂量组效果最好。
3.3 血CT(表4)、BGP(表5)测定表4 实施例1对去卵巢大鼠降钙素(CT)的影响(x±s)(ng/L)组别 n手术前 给药3个月空白对照组11 221.30±30.63213.70±19.42*模型组10 233.25±24.39195.07±20.83#实施例1高剂量组 10 225.69±28.18326.16±41.59**##实施例1中剂量组 11 208.46±20.41345.33±36.16**##实施例1低剂量组 10 221.54±24.94246.19±34.13**#尼尔雌醇组10 223.31±19.23405.36±24.49**##表4表明术前各组大鼠血清CT含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清CT含量有明显差异，均明显高于模型组，实施例1高、中、低剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于中药治疗组，说明实施例1能提高血中降钙素的水平。
表5 实施例1对去卵巢大鼠骨钙素(BGP)的影响(x±s)(ng/ml)组别 n手术前给药3个月空白对照组11 2.71±0.262.83±0.32**模型组10 2.72±0.362.13±0.36##实施例1高剂量 10 2.71±0.283.79±0.66**实施例1中剂量 11 2.85±0.423.40±0.25**实施例1低剂量 10 2.83±0.252.78±0.28**尼尔雌醇组10 2.94±0.344.17±0.65**
表5表明术前各组大鼠血清BGP含量无明显差别；给药3个月后各组大鼠血清BGP含量有明显差异，均明显高于模型组，实施例1高、中剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于实施例1各治疗组，说明实施例1有提高血中骨钙素含量的作用。
3.4 血清E2测定(表6)表6实施例1对去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)含量的影响(x±s)(pg/ml)组别 n手术前 给药3个月空白对照组11 14.57±3.9915.77±3.57**模型组10 14.23±3.467.78±2.28##实施例1高剂量组 10 15.63±2.0420.31±2.96**#实施例1中剂量组 11 15.17±1.9118.68±2.59**#实施例1低剂量组 10 14.07±4.1216.12±2.39**尼尔雌醇组10 14.74±3.2328.86±7.85**##表6表明术前各组大鼠血清E2含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清E2含量有显著差异，均明显高于模型组，实施例1高、中剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于中药各组，说明实施例1能有效的提高体内E2含量，其中又以高剂量组E2含量最高，且有明显量效关系。同时，我们采用放免法对高、中、低三种不同浓度的实施例1进行测定，发现各种剂量实施例1中均含有雌激素样作用物质，且呈量效关系。
3.5 子宫湿重测定表7 实施例1对大鼠子宫湿重的影响(x±s)(mg)组别 n 子宫湿重空白对照组11136.00±29.43**模型组1055.77±9.62##实施例1高剂量组 1088.75±25.89**##实施例1中剂量组 1198.64±20.44**##实施例1低剂量组 1085.38±23.41**##尼尔雌醇组10122.86±26.15**表7表明实验动物于3个月后处死时各组大鼠子宫重量有明显差异，其中模型组最低，空白对照组最高，实施例1高、中、低剂量组均明显高于模型组，但明显低于阳性对照组。说明切除卵巢后由于大鼠体内雌激素水平下降，其对子宫内膜的刺激作用下降，故模型组子宫内膜明显萎缩；实施例1有不同程度提高血内雌激素水平的作用，而使子宫内膜增生。
3.7 骨组织形态计量学测定表8 实施例1对去卵巢大鼠左侧胫骨近端骨组织形态结构的影响(x±s)骨小梁数骨小梁面积 面积百分率骨小梁宽度骨小梁间隙组别 n目(Tb.Ar)(Tb.Ar％)(Tb.Wi)(Tb.Sp)(Tb.N)空白对照组112.45±0.8122.76±3.6055.27±4.944.01±1.34313.22±48.33模型组102.24±0.7520.22±3.2954.01±5.003.88±1.28318.36±53.02实施例1高剂量组 102.41±0.9322.39±3.7755.16±5.773.98±1.30317.96±49.52实施例1中剂量组 112.36±0.4021.58±3.4254.99±4.553.89±0.74315.66±50.51实施例1低剂量组 102.33±0.5621.92±4.8854.07±5.793.97±1.06316.20±48.35尼尔雌醇组102.43±0.5622.89±4.0352.24±5.263.92±0.76317.80±52.08表8表明实验动物于3个月后处死时对各组大鼠左侧胫骨近端处的骨组织进行骨组织形态计量学测定，结果实施例1治疗组大鼠的骨小梁面积(Tb.Ar)、骨小梁面积百分率(Tb.Ar％)、骨小梁宽度(Tb.Wi)和骨小梁数目(Tb.N)较模型组相比，有增高的趋势；骨小梁间隙(Tb.Sp)较模型组相比，有减小的趋势，但均无统计学意义。说明实施例1既能促进骨形成，又能抑制骨吸收。
表9 实施例1对去卵巢大鼠尿钙(Ca)、尿羟脯氨酸(Hop)含量的影响(x±s)(mg/dl)组别n 尿钙(Ca) 尿羟脯氨酸(Hop)空白对照组 1144.56±8.54**0.35±0.07**模型组 1064.43±9.23##0.48±0.11##实施例1高剂量组 1045.36±6.04**0.37±0.12**实施例1中剂量组 1145.45±9.28**0.35±0.06**实施例1低剂量组 1044.51±7.55**0.36±2.39**尼尔雌醇组 1043.69±8.36**0.35±0.15**表9表明实验动物于3个月后处死时对各组大鼠进行尿钙(Ca)、尿羟脯氨酸(Hop)含量测定，结果实施例1高、中、低剂量组和阳性对照组的24小时尿钙、尿羟脯氨酸含量均显著低于模型组(P＜0.01)，与空白对照组无明显差异(P＞0.05)。说明实施例1能有效抑制去卵巢大鼠体内的骨丢失。
实验2防治去睾大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雄性SD大白鼠60只，六月龄，体重280～300g。随机分为6组，每组10只。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、特乐定、3％戊巴比妥钠。
2.方法2.1 造模方法[1]均采用从腹侧入路行完整双侧睾丸摘除术造模。
2.2 给药方法术后第3天开始给药，连续给药至术后3个月时处死全部实验动物。
3.结果3.1 骨密度测定(表1、2)表1 实施例1对去睾大鼠BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别n Global 右股骨下端 左股骨下端空白对照组 100.1316±0.0053**0.1702±0.0176**0.1856±0.0142**模型组 100.1200±0.0045##0.1329±0.0079##0.1438±0.0096##实施例1高剂量组 9 0.1314±0.0022**0.1828±0.0276**0.1764±0.0179**实施例1中剂量组 100.1289±0.0054**0.1629±0.0191**0.1770±0.0165**实施例1低剂量组 100.1251±0.0051*# 0.1570±0.0150**0.1697±0.0163**#特乐定组100.1294±0.0049**0.1572±0.0169**0.1763±0.0113**注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对去睾大鼠BMC变化的影响(x±s)(g)组别n Global 右股骨下端 左股骨下端空白对照组 109.0156±0.4147**0.0654±0.0063**0.0723±0.0067**模型组 107.3655±0.6638##0.0514±0.0043##0.0563±0.0039##实施例1高剂量组 9 8.3943±0.8107*# 0.0682±0.0078**0.0646±0.0065*#实施例1中剂量组 108.3523±0.9195*# 0.0641±0.0082**0.0687±0.0079**实施例1低剂量组 108.6034±0.5385**0.0615±0.0057**0.0629±0.0082*#特乐定组109.0773±0.9950**0.0646±0.0092**0.0686±0.0055**表1、2表明给药3个月时各组大鼠全身、右股骨下端及左股骨下端的骨密度和骨矿含量均有显著差别，实施例1高、中、低剂量组明显高于模型组。说明实施例1可显著提高去睾大鼠BMD和BMC，能提高去睾大鼠全身、左、右股骨下端骨量。
3.2骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去睾大鼠左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组100.66±0.091 0.096±0.01模型组100.60±0.072 0.095±0.01实施例1高剂量组 9 0.64±0.084 0.098±0.01实施例1中剂量组 100.74±0.090**#0.094±0.01实施例1低剂量组 100.62±0.085 0.097±0.01特乐定组 100.66±0.081 0.095±0.01表3表明给药3个月时实施例1中剂量能明显增加大鼠左侧股骨扭转实验中最大扭矩。说明实施例1能促进骨小梁重建，提高骨的力学性能，增加骨的韧度，增高骨抗扭转强度。
3.3血清睾酮(T)测定(表4)表4、实施例1对去睾大鼠睾酮(T)含量的影响(x±s)组别n 术前术后4个月空白对照组 103.20±1.123.49±1.13**模型组 103.26±0.830.19±0.11##实施例1高剂量组 9 3.25±0.650.67±0.49##**实施例1中剂量组 103.03±1.110.44±0.24##**实施例1低剂量组 103.33±0.670.30±0.19##特乐定组103.01±0.850.28±0.19##表4表明术前各组大鼠血清T含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清T含量有显著差异，各组均明显高于模型组，说明实施例1能有效提高体内T含量。
实验3防治维甲酸致大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雌性SD大白鼠60只，3月龄，体重200±300g。随机分为6组，每组10只。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、氟钙定。
2.方法2.1 造模方法大鼠每日灌服维甲酸造模。
2.2 饲养及给药方法用维甲酸灌胃造模2周后，开始给药，连续给药2周，处死全部实验动物。
3.结果3.1 骨密度测定(表1、2)表1 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型BMC变化的影响(x±s)(g)组别n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 100.0547±0.0067**0.0548±0.0070**模型组 100.0451±0.0068##0.0474±0.0074##实施例1高剂量组 9 0.0583±0.0066**0.0544±0.0078**实施例1中剂量组 100.0519±0.0035**0.0546±0.0055**实施例1低剂量组 100.0477±0.0072*# 0.0539±0.0056**#氟钙定组100.0522±0.0072**0.0548±0.0030**注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 100.1382±0.0105**0.1518±0.0135**模型组 100.1162±0.0179##0.1205±0.0157##实施例1高剂量组 9 0.1320±0.0111**0.1492±0.0168*#实施例1中剂量组 100.1305±0.0120**0.1458±0.0109**实施例1低剂量组 100.1299±0.0144**0.1422±0.0138**#氟钙定组 100.1359±0.0080**0.1483±0.0101**表1、2表明用维甲酸灌胃造模2周，再用实施例1灌胃2周时，实施例1高、中、低剂量组大鼠左、右侧胫骨干骺端处的BMC和BMD均明显高于模型组。说明实施例1可显著提高维甲酸致大鼠骨质疏松模型的BMD和BMC。
3.2 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组100.50±0.09 0.13±0.03模型组100.48±0.08 0.12±0.04实施例1高剂量组 9 0.48±0.07 0.12±0.03实施例1中剂量组 100.49±0.09 0.12±0.04实施例1低剂量组 100.49±0.08 0.13±0.05氟钙定组 100.50±0.07 0.13±0.04表3表明用维甲酸灌胃造模2周，再用实施例1灌胃2周时，实施例1治疗组大鼠的左侧股骨生物力学指标虽较模型组相比，有增高的趋势，但无统计学意义。这可能与实验时间较短，同时骨的类骨质增加较快、骨结构修复较慢有关。
实验4健脾作用的实验研究1.材料1.1 实验动物健康SD大白鼠，3-4月龄SD大鼠，雌雄各半，共84只，体重200±10克。随机分为六组，每组14只，雌雄各7只。
1.2 试验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、0.9％生理盐水、附子理中丸、大黄水煎液。
2.方法2.1 造模方法用100％大黄水煎液1ml/(100g·d)连续灌胃20天。
2.2 给药方法造模成功后，各组均继续灌胃15天。
3.结果3.1 血清木糖含量的测定(表1)
表1 造模20天及灌药15天时血清木糖含量测定(x±s，mg/L)组别 造模20天时 灌药15天时空白对照组2.10±0.29 2.05±0.24△△模型组1.78±0.40*1.64±0.29实施例1高剂量组 1.57±0.32**2.24±0.61△△实施例1中剂量组 1.65±0.40**2.11±0.27△实施例1低剂量组 1.60±0.49*2.13±0.41△附子理中丸组 1.61±0.43*2.21±0.46△△注*造模20天时与空白对照组比P＜0.05；**P＜0.01△灌药15天时与模型组比P＜0.05，△△P＜0.01表1说明经实施例1治疗后，血清木糖含量回升，实施例1高、中、低剂量组正常组相比，血清木糖含量差别无显著性意义(P＞0.05)，说明实施例1能促进脾虚大鼠得以康复；实施例1高、中、低剂量组与模型组相比，血清木糖含量明显升高(P＜0.05～0.01)，可说明实施例1的健脾作用。
实验5活血化瘀作用的实验研究1.材料1.1 动物与分组SD大鼠，雄性，体重180-240g，共75只，随机分为5组。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、0.9％生理盐水、复方丹参注射液。
2.方法2.1 造模方法高分子右旋糖酐大鼠血瘀模型法2.2 给药方法预先给药6天，1次/天，造模当天给药二次，末次给药一小时后，注射10％高分子右旋糖酐(NS配)10ml/kg。造模后16h眼底静脉丛取血。
3.结果3.1 血液流变学检测结果(见表1)表1 实施例1对血液流变学的影响(x±s)实施例1高剂量实施例1中剂量 实施例1低剂量丹参组 阴性对照组组别组n＝14 组n＝15 组n＝15 n＝15 n＝15低切粘度7.72±1.72**7.90±1.26**7.86±1.95*7.30±0.92**9.54±1.48高切粘度3.17±0.27**3.59±0.29 3.36±0.36*3.02±0.40***3.74±0.451.66±血浆粘度1.75±0.058**1.74±0.093**1.73±0.10**1.85±0.0870.088***血沉10.93±14.14 8.55±11.83 6.19±9.89 13.27±15.207.73±9.37RBC压积 37.36±3.25 35.18±2.18 34.33±2.47*34.87±2.47*37.26±3.59还原粘度18.02±4.48**20.18±4.34*19.18±4.38*18.19±3.12**23.42±3.67RBC聚集 2.42±0.40 2.25±0.39 2.25±0.36*2.44±0.30 2.52±0.35RBC硬化 0.57±0.08 0.72±0.08 0.67±0.08 0.60±0.15 0.68±0.1117.93±血沉K 28.43±36.70 21.45±30.0918.6±27.56 39.93±424620.65注与阴性对照组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.0013.2 血小板聚集率检测结果(见表2)表2 实施例1对血小板聚集率的影响(％，x±s)组别 例数聚集率实施例1高剂量组10 50.00±22.67实施例1中剂量组10 40.05±21.88**实施例1低剂量组12 56.54±32.76复方丹参组 936.67±22.22**阴性对照组 11 70.92±20.42注与阴性对照组比较，**P＜0.01表1、表2说明实施例1能降低血瘀模型大鼠的全血粘度、血浆粘度及还原粘度、抑制血小板聚集。
实验6镇痛作用的实验研究1.材料1.1 动物与分组NIH小鼠，雄性，体重18-22g，共75只，随机分为5组。
1.2 实验用药实施例1提取液、硫酸颅痛定注射液、0.9％生理盐水。
2.方法2.1 小鼠镇痛试验一——扭体法2.2 小鼠镇痛试验二——热辐射法3.结果3.1 对小鼠扭体反应的影响(见表1)表1说明实施例1对醋酸引发的扭体反应有显著的抑制作用，并有量效关系，其中高、中剂量组的镇痛强度与颅痛定相当。
表1 对小鼠扭体反应的影响(x±s)组别 例数 扭体次数/15分钟实施例1高剂量组1014.5±6.67***实施例1中剂量组1413.29±11.22***实施例1低剂量组1523.33±9.65**颅痛定对照组 1414.43±6.77***阴性对照组 1441.07±10.49注与阴性对照组比较**P＜0.01***P＜0.0013.2 对小鼠热辐射反应的影响(见表2)表2 实施例1对小鼠热辐射反应的影响(秒，x±s)给药前后痛阈差值组别 例数30分钟90分钟 150分钟实施例1高剂量组9 5.17±6.112.39±5.365.72±5.35**实施例1中剂量组125.29±4.984.88±6.431.96±5.37实施例1低剂量组123.50±5.241.00±3.200±3.63颅痛定对照组 126.71±4.395.88±3.46*5.46±3.38***阴性对照组 123.46±5.751.54±6.28-1.29±5.22注与阴性对照组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2说明实施例1对热辐射引起的疼痛，仅在高剂量组150分钟时点有提高痛阈的作用，而其他时点以及中低剂量组虽能一定程度提高痛阈，但未达统计学差异。
实验7治疗绝经后骨质疏松性骨折的实验研究1.材料1.1 实验动物十二月龄雌性SD大鼠40只，体重340±20g。随机分为四组。
1.2 实验药物实施例1提取药液、生理盐水、尼尔雌醇、3％戊巴比妥钠溶液。
2.方法2.1 造模方法背侧入路完整摘除双侧卵巢造模成功后切开左小腿，在胫骨中上1/3处内侧2/3造成2mm骨缺损，外侧1/3骨质保持其连续性。术后不用抗生素及作外固定。
2.2 给药方法术后二天开始各组分别灌胃给药，三个月后处死。
3.结果3.1 游离后的各组胫骨骨折端可见大量骨痂形成，骨折线均消失；经双能X线检查，得到骨康对大鼠BMD变化的数据(表1)表1 骨康对大鼠左胫骨骨折端、全段、中段、远端BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 n 左胫骨骨折端 左胫骨全段 左胫骨中段 左胫骨远端空白对照组 9 0.197±0.007**0.169±0.005*0.148±0.004△#0.161±0.007△模型组 9 0.168±0.007 0.156±0.006 0.150±0.004△0.159±0.005△实施例1治疗组 10 0.195±0.009**0.175±0.011*0.164±0.005 0.171±0.007阳性治疗组10 0.200±0.015**0.177±0.011**0.155±0.007△#0.166±0.008注各组与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01各组与实施例1治疗组比较，△P＜0.01各组与正常组比较，#P＜0.01表1表明，实验动物用实施例1灌胃三月后，各组大鼠的左胫骨骨折端(干骺端)及左胫骨全段的BMD与模型组均有显著性的差异，实施例1治疗组与正常对照组及阳性治疗组的差异不明显，说明(1)大鼠去势后骨质疏松症的造模是成功的；(2)实施例1治疗骨质疏松性骨折的疗效等同于尼尔雌醇。各组大鼠的左胫骨中段BMD与实施例1治疗组差异显著，正常对照组及模型组的左胫骨远端的BMD与实施例1治疗组有显著性差异，说明实施例1不但可以提高松质骨骨密度，而且能够提高密质骨骨密度。
3.2 大鼠体重的变化(表2)表2 各组大鼠造模术前及术后的体重变化(x±s)组别 n术前(g) 术后一月(g)术后二月(g)术后四月(g)正常对照组9323±21 349±18341±21354±20#模型组9344±27 381±35*392±39*383±39实施例1治疗组 9334±35 368±35347±27357±22阳性治疗组9335±32 367±32350±24347±25#注各组与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05表2表明，各组大鼠术前体重无差异，术后一月、二月及四月模型组大鼠体重增加明显，与正常对照组有明显的差异，而实施例1治疗组和阳性治疗组与正常对照组比较体重增加无显著性差异，术后四月阳性治疗组与模型组体重比较差异明显；说明去势后，由于雌激素缺乏，致模型组大鼠体重增加，而使用实施例1治疗后，可控制大鼠去势后的增重，其作用等同于尼尔雌醇，但随着时间推移，其抑制增重的作用可能比尼尔雌醇弱。
3.3左胫骨上端病理切片光镜检查实施例1治疗组成骨细胞肥大，增生明显，骨小梁增多、增粗，连续性好，骨皮质增宽。而模型组成骨细胞增生不明显，有较多的软骨细胞，且骨小梁稀疏，有断裂，骨痂量少。
3.4 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去势大鼠左股骨骨生物力学指标的影响(x±s)组别nF(N) σ(Mpa)正常对照组 8149.86±26.21**232.87±35.24**模型组 895.36±7.15151.63±13.22##实施例1治疗组 8124.98±19.00**203.31±17.74**阳性治疗组 8119.14±14.33**190.82±21.53**#注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01从表3中可以看出，与模型组比较，正常组的最大载荷和极限强度明显高于模型组，统计结果差别显著(P＜0.01)，表明雌性大鼠切除卵巢后，可使大鼠的生物力学性能下降，造模成功。实施例1组和阳性治疗组与模型组比较，其骨的生物力学参数最大载荷、极限强度均有明显差别(P＜0.01)；阳性治疗组与正常组比较，其极限强度明显低于正常组(P＜0.05)，而实施例1组与正常组则无显著性差异。最大载荷是骨的结构力学指标，极限强度反映的是骨的材料力学性能，由此可见，实施例1能有效地增强整体骨的结构和材料力学性能，其效果在改善大鼠骨的的材料力学性能方面优于尼尔雌醇。
2.5 放射免役学检查(表4、表5)表4 实施例1对去势大鼠血清E2的影响(x±s)组别 n 术后一月E2(pg/ml) 术后四月E2(pg/ml)正常对照组 9 96.99±26.35 11.36±4.30##模型组 9 62.58±14.36**0.30±0.03**实施例1治疗组10 60.07±13.50**1.23±0.78**#阳性治疗组 10 56.97±25.60**1.29±0.86**#注各组与正常组比较，**P＜0.01各组与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01表4显示，大鼠去卵巢一月后，与正常对照组相比，其他各组的血清E2水平明显低于正常组，差别显著(P＜0.01)，表明造模成功；术后四月，与正常组比较，其他各组仍明显低于正常组，但与模型组对比，实施例1组和阳性对照组明显高于模型组(P＜0.05)，表明实施例1能增加血清E2的含量，作用与尼尔雌醇相似，且二者之间无显著性差异。
表5 实施例1对去势大鼠血清CT、TNF的影响(x±s)组别 n CT(ng/L) TNF(ng/ml)正常对照组 9 67.32±29.84*3.35±0.30模型组 9 32.21±6.82 3.60±0.32实施例1治疗组9 58.56±22.26*3.12±0.24*阳性治疗组 9 59.70±21.56*3.36±0.39注各组与模型组比较，*P＜0.05表5显示，使用实施例1治疗三月后，各组大鼠的血清CT水平明显高于模型组(P＜0.05)，其血清TNF的含量低于模型组(P＜0.05)，表明实施例1可明显抑制卵巢切除后的骨吸收增强，减少骨丢失，其抑制破骨细胞的活性作用可能强于尼尔雌醇。
实施例1有关毒理学实验实验8急性毒性实验1.试验目的观察实施例1一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况，如药物毒性较低，测不出LD50时，则进一步测定动物一日内的最大给药量。
2.受试药物实施例1流浸膏由广州中医药大学附属骨伤科医院提供，批号971210，所含生药量为4.3g生药/ml。成人用量口服每次一支，日服二次(10ml/支)。实施例1临床用量1支/次，2次/日，10ml/支，1.43g生药/ml。以成人平均体重60kg计，则成人剂量为1×2×10×1.43÷60＝0.477g生药/kg。试验时用蒸馏水将药物稀释至所需浓度。
3.实验动物NIH系小鼠，普通级，雌雄各半，体重20～22g，由广东省卫生厅医用动物场购入，合格证号97A017。
4.试验方法与结果4.1 预试验取NIH小鼠20只，雌雄各半，体重20～22g，禁食12小时，以实施例1最大浓度(以药物刚好通过小鼠灌胃针头为最大浓度)3.9g生药/ml，最大体积30ml/kg，剂量117g生药/kg灌胃给药一次，观察小鼠毒性反应情况，连续七天。结果动物无一死亡，给药后出现蜷卧，活动减少，但于给药40分钟后逐渐恢复，其余未见异常反应。表明实施例1LD50未能测出(LD50＞117g/kg)。故只能测定最大给药量。
4.2 最大给药量的测定因受试药物的浓度和体积的限制，一次给药无法测出LD50，本实验仍按上述浓度和体积给小白鼠灌胃给药(NIH系小鼠，雌雄各半，体重20～22g，共20只，禁食12小时后给药)，连续两次，每隔6小时一次，以测定动物的最大给药量，药后连续观察7天。结果动物无一死亡，给药10分钟后，各组小鼠出现蜷卧，活动减少；40分钟后小鼠蜷卧、活动减少逐渐恢复正常。食量正常，毛发光亮，皮毛无疏松，无惊厥，无震颤，也无嗜睡，口、眼、鼻、耳无异常分泌物，大小便未见异常改变。七天后处死动物，肉眼剖检心、肝、脾、肺、肾等重要脏器，结果均未见异常改变。全天总用药量为234g/kg体重，相当于临床用药量的490.6倍。
5.结论5.1 实施例1半数致死量未能测出，其LD50＞117g/kg体重。
5.2 实施例1一日两次给药的最大给药量为234g/kg体重，相当于临床用药量的490.6倍。
实验结果表明，实施例1无急性毒性反应。
实验9长期毒性试验1.试验目的本试验主要观察实施例1连续重复给药对大白鼠所产生的毒性反应，提供毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒反应剂量。
2.受试药物同实验8。
3.动物普通级SD系大白鼠，共140只，随机分为四组，每组35只，雌雄各半，体重为90～100g。
4.主要试剂园生试剂、总胆红素测定试剂5.试验方法5.1 剂量和给药方法实施例1高、中、低剂量分别为临床剂量的80、40、20倍，按生药量计，相当于38.16g/kg体重、19.08g/kg体重、9.54g/kg体重。药物用蒸馏水稀释至所需浓度，按10ml/kg体重经口灌胃给药，每日定时给药1次，每周根据体重调整给药量1次，每周给药6天。
5.2 给药周期180天。
6.结果6.1 一般情况实施例1给药180天和停药后21天期间，各用药组和对照组大白鼠均无一死亡，外观体征无异常改变，行为活动正常，毛色有光泽且紧帖身体，口、眼、耳、鼻均无异常分泌物。各用药组大白鼠取食量与对照组比较，无明显差异。粪便无粘液，无稀烂等异常改变；尿量正常，中、高剂量组大白鼠尿的颜色较对照组和低剂量组大白鼠尿的颜色稍黄，但均澄清透明。各组大白鼠均发育良好，体重呈正常增长。说明实施例1长期给药，未见对体重增长造成不良影响。
6.2 实施例1长期给药和停药21天后均未造成大白鼠血液学指标的异常。
6.3 实施例1长期给药和停药21天后，三个剂量组大白鼠血液生化指标均未见异常改变。
6.4 大体尸解实施例1给药90天、180天和停药21天后，分别对各组大白鼠进行尸解观察，肉眼所见，各组大白鼠各主要脏器大小正常，表面光滑，无肿胀，无出血点，无异常分泌物，弹性良好，无包块，无结节等。胃肠粘膜无糜烂，无缺损等改变。
6.5 病理组织学检查实施例1长期给药(180天)和停药21天后，未造成大白鼠重要器官的病理损害。
骨质疏松症是以骨量减少为特征，骨组织显微结构改变和骨折危险频度增加的疾病。因而提高骨量，改善骨组织微结构，降低骨折率是其重要的治疗措施。
实验结果表明，实施例1具有抑制骨吸收和促进骨形成的双重作用；能提高骨密度，改善骨生物力学状态；能提高脾虚大鼠的血清木糖含量；对血瘀模型有较好的活血化瘀作用；有较好的镇痛作用；实验显示无明显毒副作用。这些作用为实施例1治疗骨质疏松症提供了实验依据。
实施例1经临床观察，表明其能显著提高骨密度，缓解腰腿痛等症状。
本发明的其它实施例经实验表明与实施例1有相类似的药效、毒性结果及临床疗效。
本发明不限于上述实施例。
权利要求
1.一种骨质疏松症治疗药物，包括以下天然药物补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参，各药物的重量比为补骨脂100～180份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各120～200份。
2.根据权利要求1所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述各天然药物的重量比为补骨脂120～150份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各130～170份。
3.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述各天然药物的配比为补骨脂130份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150份。
4.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述骨质疏松治疗药物的剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊。
5.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于黄芪选用北黄芪，淫羊藿选用制淫羊藿。
6.一种根据权利要求1所述的骨质疏松症治疗药物的制备方法，其特征在于取补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参各药全量，加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
全文摘要
本发明涉及一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法，采用补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参为主要原料，共同制成口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂型等口服剂型。本发明的药物具有补肾壮骨、活血通络、健脾益气之功效，主治骨质疏松症，能缓解症状及提高骨量和改善骨的生物力学性能，使骨的质量有不同程度的恢复，具有见效快、服用方便、骨量提高明显、副作用小等优点。其生产方法简单。
文档编号A61K9/14GK1579442SQ0314016
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月14日 优先权日2003年8月14日
发明者刘庆思, 庄洪, 黄宏兴, 邵敏 申请人:广州中医药大学附属骨伤科医院
技术领域：
本发明涉及一种骨质疏松症治疗药物，尤其是一种以天然中药材制成的纯中药制剂，本发明还涉及该制剂的生产方法。
背景技术：
骨质疏松症是以骨量减少为特征，骨组织显微结构改变和骨折危险频度增加的疾病，是一种多因多果的老年性常见疾病。目前，在治疗方面，临床使用的无论是中药，还是西药，均存在难以使骨质疏松症患者的骨量恢复正常的缺点。相对于中药制剂，西药治疗更具有服药时间长，副作用大，费用高等问题。
发明内容本发明的目的是为了克服目前治疗骨质疏松症药物的骨量恢复效果差的缺点，提供一种见效快、临床症状缓解彻底、骨量恢复明显、副作用小、费用低的药物。
本发明的目的还在于提供该制剂的生产方法。
本发明是这样实现的采用天然中药材补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参为原料制成的口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊等。其中黄芪应选用北黄芪，淫羊藿应选用制淫羊藿。
本发明的中药复方制剂包括下列组分制成的(用量为重量比)补骨脂100～180份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各120～200份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊机剂等。
本发明的中药复方制剂各组分的优先重量比为补骨脂120～150份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各130～170份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂等。
本发明的中药复方制剂各组分的最佳配比为补骨脂130份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150份，配以常规辅料，制成口服制剂，其剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂等。
本发明中的口服液制备方法是取上述方中各药全量，加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料(如果葡糖、山梨酸钾)及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
口服液剂量与服法口服，10ml/支/次，1.43g生药/ml/支，每天服二次，早晚饭后各服一次。
本发明中的口服散剂制备方法是取上述方中各药全量，经粉碎加工成口服散剂。
本发明中的冲剂制备方法是取上述方中各药全量，加水浸没后提取1～3次，合并提取液，浓缩，进一步添加辅料(如糖粉)制粒，制成冲剂。
本发明中的片剂制备方法是将上述冲剂添加常规片剂辅料(如淀粉、糖粉、糊精、硫酸镁、滑石粉)，并通过压片机，制成片剂。
本发明中的胶囊剂制备方法是取各药全量，加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加辅料，烘干成药粉，分装，制成胶囊。
本发明的解决方案基于中国传统医学理论，诸药合用，相辅相成，相得益彰，共达补中寓通，补而不滞之目的。该方补肾壮阳，滋阴益精，同时培补后天生化之源以充肾精。肾阳得充，脾得健运，气机得调，气血运行通畅，从而达到缓解症状，提高骨量之功效。
本发明的药物主治骨质疏松症，能缓解症状及提高骨量和改善骨的生物力学性能，使骨的质量有不同程度的恢复，其具有见效快、服用方便、骨量提高明显、副作用小等优点。
具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成口服液。其生产方法是全部药材加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料(如果葡糖、山梨酸钾)及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
实施例2补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成口服散剂。其生产方法是全部药材经粉碎加工成口服散剂。
实施例3补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成冲剂。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加糖粉制粒，制成冲剂，分装。
实施例4补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成片剂。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加淀粉制粒，进一步添加硫酸镁，滑石粉，经压片机压成片剂。
实施例5补骨脂130g，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150g制成胶囊。其生产方法是全部药材加水浸没后提取1～3次，合并提取液，添加辅料，烘干成药粉，分装，制成胶囊。
取实施例1进行有关药效学试验及毒理学实验。
实施例1有关药效学试验实验1防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雌性SD大鼠90只，4月龄，体重200-220g。随机分为6组，每组15只。
1.2 实验药物实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、尼尔雌醇、3％戊巴比要钠、盐酸四环素、Calcein(USA)、甲基丙烯酸甲酯。
2.方法2.1 造模方法均采用背侧入路双侧卵巢摘除手术造模。
2.2 给药方法术后第3天开始给药，连续给药至术后3个月时处死全部实验动物。
3.结果3.1 实施例1对去势大白鼠骨面密度(BMD)(表1)、骨矿含量(BMC)(表2)变化的影响。
表1 实施例1对去卵巢大鼠BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 N 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组110.23±0.03*0.22±0.02*模型组100.17±0.05# 0.17±0.04#实施例1高剂量组 100.23±0.02*0.22±0.02*实施例1中剂量组 110.18±0.05# 0.19±0.02#实施例1低剂量组 100.21±0.02*0.20±0.02*#尼尔雌醇组100.22±0.04*0.21±0.04*注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对去卵巢大鼠BMC变化的影响(x±s)(g)组别n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 110.09±0.01**0.09±0.01**模型组 100.07±0.02##0.07±0.02##实施例1高剂量组 100.09±0.01**0.09±0.01**实施例1中剂量组 110.07±0.05# 0.07±0.02#实施例1低剂量组 100.08±0.01##0.08±0.01##尼尔雌醇组 100.09±0.02**0.08±0.01*#表1、表2表明实施例1灌胃3个月时各组大鼠在左、右侧胫骨干骺端处的骨密度和骨矿含量均有显著差别，其中模型组最低；实施例1高剂量组明显高于模型组，与阳性对照组无显著差异。说明实施例1可显著提高胫骨干骺端处的BMD和BMC，二者作用相当，说明均能提高骨量。
3.2 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去卵巢大鼠左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组110.70±0.09**0.49±0.05模型组100.55±0.05##0.48±0.04实施例1高剂量组 100.71±0.08**0.51±0.08实施例1中剂量组 110.64±0.04**# 0.51±0.09实施例1低剂量组 100.55±0.06##0.48±0.07尼尔雌醇组100.57±0.05##0.49±0.07表3表明实施例1灌胃3个月时各组大鼠左侧股骨扭转实验中最大扭矩(M)有明显差异，但扭转刚度(K)差异不显著。实施例1中、高剂量组最大扭矩明显高于模型组，说明实施例1能促进骨小梁重建，提高骨的力学性能，增加骨的韧度，使骨抗扭转强度增高，其中又以实施例1高剂量组效果最好。
3.3 血CT(表4)、BGP(表5)测定表4 实施例1对去卵巢大鼠降钙素(CT)的影响(x±s)(ng/L)组别 n手术前 给药3个月空白对照组11 221.30±30.63213.70±19.42*模型组10 233.25±24.39195.07±20.83#实施例1高剂量组 10 225.69±28.18326.16±41.59**##实施例1中剂量组 11 208.46±20.41345.33±36.16**##实施例1低剂量组 10 221.54±24.94246.19±34.13**#尼尔雌醇组10 223.31±19.23405.36±24.49**##表4表明术前各组大鼠血清CT含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清CT含量有明显差异，均明显高于模型组，实施例1高、中、低剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于中药治疗组，说明实施例1能提高血中降钙素的水平。
表5 实施例1对去卵巢大鼠骨钙素(BGP)的影响(x±s)(ng/ml)组别 n手术前给药3个月空白对照组11 2.71±0.262.83±0.32**模型组10 2.72±0.362.13±0.36##实施例1高剂量 10 2.71±0.283.79±0.66**实施例1中剂量 11 2.85±0.423.40±0.25**实施例1低剂量 10 2.83±0.252.78±0.28**尼尔雌醇组10 2.94±0.344.17±0.65**
表5表明术前各组大鼠血清BGP含量无明显差别；给药3个月后各组大鼠血清BGP含量有明显差异，均明显高于模型组，实施例1高、中剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于实施例1各治疗组，说明实施例1有提高血中骨钙素含量的作用。
3.4 血清E2测定(表6)表6实施例1对去卵巢大鼠血清雌二醇(E2)含量的影响(x±s)(pg/ml)组别 n手术前 给药3个月空白对照组11 14.57±3.9915.77±3.57**模型组10 14.23±3.467.78±2.28##实施例1高剂量组 10 15.63±2.0420.31±2.96**#实施例1中剂量组 11 15.17±1.9118.68±2.59**#实施例1低剂量组 10 14.07±4.1216.12±2.39**尼尔雌醇组10 14.74±3.2328.86±7.85**##表6表明术前各组大鼠血清E2含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清E2含量有显著差异，均明显高于模型组，实施例1高、中剂量组和阳性对照组均明显高于空白对照组，阳性对照组又明显高于中药各组，说明实施例1能有效的提高体内E2含量，其中又以高剂量组E2含量最高，且有明显量效关系。同时，我们采用放免法对高、中、低三种不同浓度的实施例1进行测定，发现各种剂量实施例1中均含有雌激素样作用物质，且呈量效关系。
3.5 子宫湿重测定表7 实施例1对大鼠子宫湿重的影响(x±s)(mg)组别 n 子宫湿重空白对照组11136.00±29.43**模型组1055.77±9.62##实施例1高剂量组 1088.75±25.89**##实施例1中剂量组 1198.64±20.44**##实施例1低剂量组 1085.38±23.41**##尼尔雌醇组10122.86±26.15**表7表明实验动物于3个月后处死时各组大鼠子宫重量有明显差异，其中模型组最低，空白对照组最高，实施例1高、中、低剂量组均明显高于模型组，但明显低于阳性对照组。说明切除卵巢后由于大鼠体内雌激素水平下降，其对子宫内膜的刺激作用下降，故模型组子宫内膜明显萎缩；实施例1有不同程度提高血内雌激素水平的作用，而使子宫内膜增生。
3.7 骨组织形态计量学测定表8 实施例1对去卵巢大鼠左侧胫骨近端骨组织形态结构的影响(x±s)骨小梁数骨小梁面积 面积百分率骨小梁宽度骨小梁间隙组别 n目(Tb.Ar)(Tb.Ar％)(Tb.Wi)(Tb.Sp)(Tb.N)空白对照组112.45±0.8122.76±3.6055.27±4.944.01±1.34313.22±48.33模型组102.24±0.7520.22±3.2954.01±5.003.88±1.28318.36±53.02实施例1高剂量组 102.41±0.9322.39±3.7755.16±5.773.98±1.30317.96±49.52实施例1中剂量组 112.36±0.4021.58±3.4254.99±4.553.89±0.74315.66±50.51实施例1低剂量组 102.33±0.5621.92±4.8854.07±5.793.97±1.06316.20±48.35尼尔雌醇组102.43±0.5622.89±4.0352.24±5.263.92±0.76317.80±52.08表8表明实验动物于3个月后处死时对各组大鼠左侧胫骨近端处的骨组织进行骨组织形态计量学测定，结果实施例1治疗组大鼠的骨小梁面积(Tb.Ar)、骨小梁面积百分率(Tb.Ar％)、骨小梁宽度(Tb.Wi)和骨小梁数目(Tb.N)较模型组相比，有增高的趋势；骨小梁间隙(Tb.Sp)较模型组相比，有减小的趋势，但均无统计学意义。说明实施例1既能促进骨形成，又能抑制骨吸收。
表9 实施例1对去卵巢大鼠尿钙(Ca)、尿羟脯氨酸(Hop)含量的影响(x±s)(mg/dl)组别n 尿钙(Ca) 尿羟脯氨酸(Hop)空白对照组 1144.56±8.54**0.35±0.07**模型组 1064.43±9.23##0.48±0.11##实施例1高剂量组 1045.36±6.04**0.37±0.12**实施例1中剂量组 1145.45±9.28**0.35±0.06**实施例1低剂量组 1044.51±7.55**0.36±2.39**尼尔雌醇组 1043.69±8.36**0.35±0.15**表9表明实验动物于3个月后处死时对各组大鼠进行尿钙(Ca)、尿羟脯氨酸(Hop)含量测定，结果实施例1高、中、低剂量组和阳性对照组的24小时尿钙、尿羟脯氨酸含量均显著低于模型组(P＜0.01)，与空白对照组无明显差异(P＞0.05)。说明实施例1能有效抑制去卵巢大鼠体内的骨丢失。
实验2防治去睾大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雄性SD大白鼠60只，六月龄，体重280～300g。随机分为6组，每组10只。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、特乐定、3％戊巴比妥钠。
2.方法2.1 造模方法[1]均采用从腹侧入路行完整双侧睾丸摘除术造模。
2.2 给药方法术后第3天开始给药，连续给药至术后3个月时处死全部实验动物。
3.结果3.1 骨密度测定(表1、2)表1 实施例1对去睾大鼠BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别n Global 右股骨下端 左股骨下端空白对照组 100.1316±0.0053**0.1702±0.0176**0.1856±0.0142**模型组 100.1200±0.0045##0.1329±0.0079##0.1438±0.0096##实施例1高剂量组 9 0.1314±0.0022**0.1828±0.0276**0.1764±0.0179**实施例1中剂量组 100.1289±0.0054**0.1629±0.0191**0.1770±0.0165**实施例1低剂量组 100.1251±0.0051*# 0.1570±0.0150**0.1697±0.0163**#特乐定组100.1294±0.0049**0.1572±0.0169**0.1763±0.0113**注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对去睾大鼠BMC变化的影响(x±s)(g)组别n Global 右股骨下端 左股骨下端空白对照组 109.0156±0.4147**0.0654±0.0063**0.0723±0.0067**模型组 107.3655±0.6638##0.0514±0.0043##0.0563±0.0039##实施例1高剂量组 9 8.3943±0.8107*# 0.0682±0.0078**0.0646±0.0065*#实施例1中剂量组 108.3523±0.9195*# 0.0641±0.0082**0.0687±0.0079**实施例1低剂量组 108.6034±0.5385**0.0615±0.0057**0.0629±0.0082*#特乐定组109.0773±0.9950**0.0646±0.0092**0.0686±0.0055**表1、2表明给药3个月时各组大鼠全身、右股骨下端及左股骨下端的骨密度和骨矿含量均有显著差别，实施例1高、中、低剂量组明显高于模型组。说明实施例1可显著提高去睾大鼠BMD和BMC，能提高去睾大鼠全身、左、右股骨下端骨量。
3.2骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去睾大鼠左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组100.66±0.091 0.096±0.01模型组100.60±0.072 0.095±0.01实施例1高剂量组 9 0.64±0.084 0.098±0.01实施例1中剂量组 100.74±0.090**#0.094±0.01实施例1低剂量组 100.62±0.085 0.097±0.01特乐定组 100.66±0.081 0.095±0.01表3表明给药3个月时实施例1中剂量能明显增加大鼠左侧股骨扭转实验中最大扭矩。说明实施例1能促进骨小梁重建，提高骨的力学性能，增加骨的韧度，增高骨抗扭转强度。
3.3血清睾酮(T)测定(表4)表4、实施例1对去睾大鼠睾酮(T)含量的影响(x±s)组别n 术前术后4个月空白对照组 103.20±1.123.49±1.13**模型组 103.26±0.830.19±0.11##实施例1高剂量组 9 3.25±0.650.67±0.49##**实施例1中剂量组 103.03±1.110.44±0.24##**实施例1低剂量组 103.33±0.670.30±0.19##特乐定组103.01±0.850.28±0.19##表4表明术前各组大鼠血清T含量无明显差异；给药3个月后各组大鼠血清T含量有显著差异，各组均明显高于模型组，说明实施例1能有效提高体内T含量。
实验3防治维甲酸致大鼠骨质疏松的实验研究1.材料1.1 实验动物健康雌性SD大白鼠60只，3月龄，体重200±300g。随机分为6组，每组10只。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、蒸馏水、氟钙定。
2.方法2.1 造模方法大鼠每日灌服维甲酸造模。
2.2 饲养及给药方法用维甲酸灌胃造模2周后，开始给药，连续给药2周，处死全部实验动物。
3.结果3.1 骨密度测定(表1、2)表1 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型BMC变化的影响(x±s)(g)组别n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 100.0547±0.0067**0.0548±0.0070**模型组 100.0451±0.0068##0.0474±0.0074##实施例1高剂量组 9 0.0583±0.0066**0.0544±0.0078**实施例1中剂量组 100.0519±0.0035**0.0546±0.0055**实施例1低剂量组 100.0477±0.0072*# 0.0539±0.0056**#氟钙定组100.0522±0.0072**0.0548±0.0030**注与模型组比较，*P＜0.05**P＜0.01；与空白组比较，#P＜0.05 ##P＜0.01(下同)表2 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 n 右胫骨干骺端左胫骨干骺端空白对照组 100.1382±0.0105**0.1518±0.0135**模型组 100.1162±0.0179##0.1205±0.0157##实施例1高剂量组 9 0.1320±0.0111**0.1492±0.0168*#实施例1中剂量组 100.1305±0.0120**0.1458±0.0109**实施例1低剂量组 100.1299±0.0144**0.1422±0.0138**#氟钙定组 100.1359±0.0080**0.1483±0.0101**表1、2表明用维甲酸灌胃造模2周，再用实施例1灌胃2周时，实施例1高、中、低剂量组大鼠左、右侧胫骨干骺端处的BMC和BMD均明显高于模型组。说明实施例1可显著提高维甲酸致大鼠骨质疏松模型的BMD和BMC。
3.2 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对维甲酸致大鼠骨质疏松模型左侧股骨生物力学指标的影响(x±s)组别 n M(N.m) K(N.m/du)空白对照组100.50±0.09 0.13±0.03模型组100.48±0.08 0.12±0.04实施例1高剂量组 9 0.48±0.07 0.12±0.03实施例1中剂量组 100.49±0.09 0.12±0.04实施例1低剂量组 100.49±0.08 0.13±0.05氟钙定组 100.50±0.07 0.13±0.04表3表明用维甲酸灌胃造模2周，再用实施例1灌胃2周时，实施例1治疗组大鼠的左侧股骨生物力学指标虽较模型组相比，有增高的趋势，但无统计学意义。这可能与实验时间较短，同时骨的类骨质增加较快、骨结构修复较慢有关。
实验4健脾作用的实验研究1.材料1.1 实验动物健康SD大白鼠，3-4月龄SD大鼠，雌雄各半，共84只，体重200±10克。随机分为六组，每组14只，雌雄各7只。
1.2 试验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、0.9％生理盐水、附子理中丸、大黄水煎液。
2.方法2.1 造模方法用100％大黄水煎液1ml/(100g·d)连续灌胃20天。
2.2 给药方法造模成功后，各组均继续灌胃15天。
3.结果3.1 血清木糖含量的测定(表1)
表1 造模20天及灌药15天时血清木糖含量测定(x±s，mg/L)组别 造模20天时 灌药15天时空白对照组2.10±0.29 2.05±0.24△△模型组1.78±0.40*1.64±0.29实施例1高剂量组 1.57±0.32**2.24±0.61△△实施例1中剂量组 1.65±0.40**2.11±0.27△实施例1低剂量组 1.60±0.49*2.13±0.41△附子理中丸组 1.61±0.43*2.21±0.46△△注*造模20天时与空白对照组比P＜0.05；**P＜0.01△灌药15天时与模型组比P＜0.05，△△P＜0.01表1说明经实施例1治疗后，血清木糖含量回升，实施例1高、中、低剂量组正常组相比，血清木糖含量差别无显著性意义(P＞0.05)，说明实施例1能促进脾虚大鼠得以康复；实施例1高、中、低剂量组与模型组相比，血清木糖含量明显升高(P＜0.05～0.01)，可说明实施例1的健脾作用。
实验5活血化瘀作用的实验研究1.材料1.1 动物与分组SD大鼠，雄性，体重180-240g，共75只，随机分为5组。
1.2 实验用药实施例1以蒸馏水定容至所需浓度、0.9％生理盐水、复方丹参注射液。
2.方法2.1 造模方法高分子右旋糖酐大鼠血瘀模型法2.2 给药方法预先给药6天，1次/天，造模当天给药二次，末次给药一小时后，注射10％高分子右旋糖酐(NS配)10ml/kg。造模后16h眼底静脉丛取血。
3.结果3.1 血液流变学检测结果(见表1)表1 实施例1对血液流变学的影响(x±s)实施例1高剂量实施例1中剂量 实施例1低剂量丹参组 阴性对照组组别组n＝14 组n＝15 组n＝15 n＝15 n＝15低切粘度7.72±1.72**7.90±1.26**7.86±1.95*7.30±0.92**9.54±1.48高切粘度3.17±0.27**3.59±0.29 3.36±0.36*3.02±0.40***3.74±0.451.66±血浆粘度1.75±0.058**1.74±0.093**1.73±0.10**1.85±0.0870.088***血沉10.93±14.14 8.55±11.83 6.19±9.89 13.27±15.207.73±9.37RBC压积 37.36±3.25 35.18±2.18 34.33±2.47*34.87±2.47*37.26±3.59还原粘度18.02±4.48**20.18±4.34*19.18±4.38*18.19±3.12**23.42±3.67RBC聚集 2.42±0.40 2.25±0.39 2.25±0.36*2.44±0.30 2.52±0.35RBC硬化 0.57±0.08 0.72±0.08 0.67±0.08 0.60±0.15 0.68±0.1117.93±血沉K 28.43±36.70 21.45±30.0918.6±27.56 39.93±424620.65注与阴性对照组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.0013.2 血小板聚集率检测结果(见表2)表2 实施例1对血小板聚集率的影响(％，x±s)组别 例数聚集率实施例1高剂量组10 50.00±22.67实施例1中剂量组10 40.05±21.88**实施例1低剂量组12 56.54±32.76复方丹参组 936.67±22.22**阴性对照组 11 70.92±20.42注与阴性对照组比较，**P＜0.01表1、表2说明实施例1能降低血瘀模型大鼠的全血粘度、血浆粘度及还原粘度、抑制血小板聚集。
实验6镇痛作用的实验研究1.材料1.1 动物与分组NIH小鼠，雄性，体重18-22g，共75只，随机分为5组。
1.2 实验用药实施例1提取液、硫酸颅痛定注射液、0.9％生理盐水。
2.方法2.1 小鼠镇痛试验一——扭体法2.2 小鼠镇痛试验二——热辐射法3.结果3.1 对小鼠扭体反应的影响(见表1)表1说明实施例1对醋酸引发的扭体反应有显著的抑制作用，并有量效关系，其中高、中剂量组的镇痛强度与颅痛定相当。
表1 对小鼠扭体反应的影响(x±s)组别 例数 扭体次数/15分钟实施例1高剂量组1014.5±6.67***实施例1中剂量组1413.29±11.22***实施例1低剂量组1523.33±9.65**颅痛定对照组 1414.43±6.77***阴性对照组 1441.07±10.49注与阴性对照组比较**P＜0.01***P＜0.0013.2 对小鼠热辐射反应的影响(见表2)表2 实施例1对小鼠热辐射反应的影响(秒，x±s)给药前后痛阈差值组别 例数30分钟90分钟 150分钟实施例1高剂量组9 5.17±6.112.39±5.365.72±5.35**实施例1中剂量组125.29±4.984.88±6.431.96±5.37实施例1低剂量组123.50±5.241.00±3.200±3.63颅痛定对照组 126.71±4.395.88±3.46*5.46±3.38***阴性对照组 123.46±5.751.54±6.28-1.29±5.22注与阴性对照组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2说明实施例1对热辐射引起的疼痛，仅在高剂量组150分钟时点有提高痛阈的作用，而其他时点以及中低剂量组虽能一定程度提高痛阈，但未达统计学差异。
实验7治疗绝经后骨质疏松性骨折的实验研究1.材料1.1 实验动物十二月龄雌性SD大鼠40只，体重340±20g。随机分为四组。
1.2 实验药物实施例1提取药液、生理盐水、尼尔雌醇、3％戊巴比妥钠溶液。
2.方法2.1 造模方法背侧入路完整摘除双侧卵巢造模成功后切开左小腿，在胫骨中上1/3处内侧2/3造成2mm骨缺损，外侧1/3骨质保持其连续性。术后不用抗生素及作外固定。
2.2 给药方法术后二天开始各组分别灌胃给药，三个月后处死。
3.结果3.1 游离后的各组胫骨骨折端可见大量骨痂形成，骨折线均消失；经双能X线检查，得到骨康对大鼠BMD变化的数据(表1)表1 骨康对大鼠左胫骨骨折端、全段、中段、远端BMD变化的影响(x±s)(g/cm2)组别 n 左胫骨骨折端 左胫骨全段 左胫骨中段 左胫骨远端空白对照组 9 0.197±0.007**0.169±0.005*0.148±0.004△#0.161±0.007△模型组 9 0.168±0.007 0.156±0.006 0.150±0.004△0.159±0.005△实施例1治疗组 10 0.195±0.009**0.175±0.011*0.164±0.005 0.171±0.007阳性治疗组10 0.200±0.015**0.177±0.011**0.155±0.007△#0.166±0.008注各组与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01各组与实施例1治疗组比较，△P＜0.01各组与正常组比较，#P＜0.01表1表明，实验动物用实施例1灌胃三月后，各组大鼠的左胫骨骨折端(干骺端)及左胫骨全段的BMD与模型组均有显著性的差异，实施例1治疗组与正常对照组及阳性治疗组的差异不明显，说明(1)大鼠去势后骨质疏松症的造模是成功的；(2)实施例1治疗骨质疏松性骨折的疗效等同于尼尔雌醇。各组大鼠的左胫骨中段BMD与实施例1治疗组差异显著，正常对照组及模型组的左胫骨远端的BMD与实施例1治疗组有显著性差异，说明实施例1不但可以提高松质骨骨密度，而且能够提高密质骨骨密度。
3.2 大鼠体重的变化(表2)表2 各组大鼠造模术前及术后的体重变化(x±s)组别 n术前(g) 术后一月(g)术后二月(g)术后四月(g)正常对照组9323±21 349±18341±21354±20#模型组9344±27 381±35*392±39*383±39实施例1治疗组 9334±35 368±35347±27357±22阳性治疗组9335±32 367±32350±24347±25#注各组与正常对照组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05表2表明，各组大鼠术前体重无差异，术后一月、二月及四月模型组大鼠体重增加明显，与正常对照组有明显的差异，而实施例1治疗组和阳性治疗组与正常对照组比较体重增加无显著性差异，术后四月阳性治疗组与模型组体重比较差异明显；说明去势后，由于雌激素缺乏，致模型组大鼠体重增加，而使用实施例1治疗后，可控制大鼠去势后的增重，其作用等同于尼尔雌醇，但随着时间推移，其抑制增重的作用可能比尼尔雌醇弱。
3.3左胫骨上端病理切片光镜检查实施例1治疗组成骨细胞肥大，增生明显，骨小梁增多、增粗，连续性好，骨皮质增宽。而模型组成骨细胞增生不明显，有较多的软骨细胞，且骨小梁稀疏，有断裂，骨痂量少。
3.4 骨生物力学测定(表3)表3 实施例1对去势大鼠左股骨骨生物力学指标的影响(x±s)组别nF(N) σ(Mpa)正常对照组 8149.86±26.21**232.87±35.24**模型组 895.36±7.15151.63±13.22##实施例1治疗组 8124.98±19.00**203.31±17.74**阳性治疗组 8119.14±14.33**190.82±21.53**#注与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01从表3中可以看出，与模型组比较，正常组的最大载荷和极限强度明显高于模型组，统计结果差别显著(P＜0.01)，表明雌性大鼠切除卵巢后，可使大鼠的生物力学性能下降，造模成功。实施例1组和阳性治疗组与模型组比较，其骨的生物力学参数最大载荷、极限强度均有明显差别(P＜0.01)；阳性治疗组与正常组比较，其极限强度明显低于正常组(P＜0.05)，而实施例1组与正常组则无显著性差异。最大载荷是骨的结构力学指标，极限强度反映的是骨的材料力学性能，由此可见，实施例1能有效地增强整体骨的结构和材料力学性能，其效果在改善大鼠骨的的材料力学性能方面优于尼尔雌醇。
2.5 放射免役学检查(表4、表5)表4 实施例1对去势大鼠血清E2的影响(x±s)组别 n 术后一月E2(pg/ml) 术后四月E2(pg/ml)正常对照组 9 96.99±26.35 11.36±4.30##模型组 9 62.58±14.36**0.30±0.03**实施例1治疗组10 60.07±13.50**1.23±0.78**#阳性治疗组 10 56.97±25.60**1.29±0.86**#注各组与正常组比较，**P＜0.01各组与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01表4显示，大鼠去卵巢一月后，与正常对照组相比，其他各组的血清E2水平明显低于正常组，差别显著(P＜0.01)，表明造模成功；术后四月，与正常组比较，其他各组仍明显低于正常组，但与模型组对比，实施例1组和阳性对照组明显高于模型组(P＜0.05)，表明实施例1能增加血清E2的含量，作用与尼尔雌醇相似，且二者之间无显著性差异。
表5 实施例1对去势大鼠血清CT、TNF的影响(x±s)组别 n CT(ng/L) TNF(ng/ml)正常对照组 9 67.32±29.84*3.35±0.30模型组 9 32.21±6.82 3.60±0.32实施例1治疗组9 58.56±22.26*3.12±0.24*阳性治疗组 9 59.70±21.56*3.36±0.39注各组与模型组比较，*P＜0.05表5显示，使用实施例1治疗三月后，各组大鼠的血清CT水平明显高于模型组(P＜0.05)，其血清TNF的含量低于模型组(P＜0.05)，表明实施例1可明显抑制卵巢切除后的骨吸收增强，减少骨丢失，其抑制破骨细胞的活性作用可能强于尼尔雌醇。
实施例1有关毒理学实验实验8急性毒性实验1.试验目的观察实施例1一次给予动物后，所产生的毒性反应和死亡情况，如药物毒性较低，测不出LD50时，则进一步测定动物一日内的最大给药量。
2.受试药物实施例1流浸膏由广州中医药大学附属骨伤科医院提供，批号971210，所含生药量为4.3g生药/ml。成人用量口服每次一支，日服二次(10ml/支)。实施例1临床用量1支/次，2次/日，10ml/支，1.43g生药/ml。以成人平均体重60kg计，则成人剂量为1×2×10×1.43÷60＝0.477g生药/kg。试验时用蒸馏水将药物稀释至所需浓度。
3.实验动物NIH系小鼠，普通级，雌雄各半，体重20～22g，由广东省卫生厅医用动物场购入，合格证号97A017。
4.试验方法与结果4.1 预试验取NIH小鼠20只，雌雄各半，体重20～22g，禁食12小时，以实施例1最大浓度(以药物刚好通过小鼠灌胃针头为最大浓度)3.9g生药/ml，最大体积30ml/kg，剂量117g生药/kg灌胃给药一次，观察小鼠毒性反应情况，连续七天。结果动物无一死亡，给药后出现蜷卧，活动减少，但于给药40分钟后逐渐恢复，其余未见异常反应。表明实施例1LD50未能测出(LD50＞117g/kg)。故只能测定最大给药量。
4.2 最大给药量的测定因受试药物的浓度和体积的限制，一次给药无法测出LD50，本实验仍按上述浓度和体积给小白鼠灌胃给药(NIH系小鼠，雌雄各半，体重20～22g，共20只，禁食12小时后给药)，连续两次，每隔6小时一次，以测定动物的最大给药量，药后连续观察7天。结果动物无一死亡，给药10分钟后，各组小鼠出现蜷卧，活动减少；40分钟后小鼠蜷卧、活动减少逐渐恢复正常。食量正常，毛发光亮，皮毛无疏松，无惊厥，无震颤，也无嗜睡，口、眼、鼻、耳无异常分泌物，大小便未见异常改变。七天后处死动物，肉眼剖检心、肝、脾、肺、肾等重要脏器，结果均未见异常改变。全天总用药量为234g/kg体重，相当于临床用药量的490.6倍。
5.结论5.1 实施例1半数致死量未能测出，其LD50＞117g/kg体重。
5.2 实施例1一日两次给药的最大给药量为234g/kg体重，相当于临床用药量的490.6倍。
实验结果表明，实施例1无急性毒性反应。
实验9长期毒性试验1.试验目的本试验主要观察实施例1连续重复给药对大白鼠所产生的毒性反应，提供毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒反应剂量。
2.受试药物同实验8。
3.动物普通级SD系大白鼠，共140只，随机分为四组，每组35只，雌雄各半，体重为90～100g。
4.主要试剂园生试剂、总胆红素测定试剂5.试验方法5.1 剂量和给药方法实施例1高、中、低剂量分别为临床剂量的80、40、20倍，按生药量计，相当于38.16g/kg体重、19.08g/kg体重、9.54g/kg体重。药物用蒸馏水稀释至所需浓度，按10ml/kg体重经口灌胃给药，每日定时给药1次，每周根据体重调整给药量1次，每周给药6天。
5.2 给药周期180天。
6.结果6.1 一般情况实施例1给药180天和停药后21天期间，各用药组和对照组大白鼠均无一死亡，外观体征无异常改变，行为活动正常，毛色有光泽且紧帖身体，口、眼、耳、鼻均无异常分泌物。各用药组大白鼠取食量与对照组比较，无明显差异。粪便无粘液，无稀烂等异常改变；尿量正常，中、高剂量组大白鼠尿的颜色较对照组和低剂量组大白鼠尿的颜色稍黄，但均澄清透明。各组大白鼠均发育良好，体重呈正常增长。说明实施例1长期给药，未见对体重增长造成不良影响。
6.2 实施例1长期给药和停药21天后均未造成大白鼠血液学指标的异常。
6.3 实施例1长期给药和停药21天后，三个剂量组大白鼠血液生化指标均未见异常改变。
6.4 大体尸解实施例1给药90天、180天和停药21天后，分别对各组大白鼠进行尸解观察，肉眼所见，各组大白鼠各主要脏器大小正常，表面光滑，无肿胀，无出血点，无异常分泌物，弹性良好，无包块，无结节等。胃肠粘膜无糜烂，无缺损等改变。
6.5 病理组织学检查实施例1长期给药(180天)和停药21天后，未造成大白鼠重要器官的病理损害。
骨质疏松症是以骨量减少为特征，骨组织显微结构改变和骨折危险频度增加的疾病。因而提高骨量，改善骨组织微结构，降低骨折率是其重要的治疗措施。
实验结果表明，实施例1具有抑制骨吸收和促进骨形成的双重作用；能提高骨密度，改善骨生物力学状态；能提高脾虚大鼠的血清木糖含量；对血瘀模型有较好的活血化瘀作用；有较好的镇痛作用；实验显示无明显毒副作用。这些作用为实施例1治疗骨质疏松症提供了实验依据。
实施例1经临床观察，表明其能显著提高骨密度，缓解腰腿痛等症状。
本发明的其它实施例经实验表明与实施例1有相类似的药效、毒性结果及临床疗效。
本发明不限于上述实施例。
权利要求
1.一种骨质疏松症治疗药物，包括以下天然药物补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参，各药物的重量比为补骨脂100～180份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各120～200份。
2.根据权利要求1所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述各天然药物的重量比为补骨脂120～150份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各130～170份。
3.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述各天然药物的配比为补骨脂130份，肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、菟丝子、丹参各150份。
4.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于所述骨质疏松治疗药物的剂型为口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊。
5.根据权利要求1或2所述的骨质疏松症治疗药物，其特征在于黄芪选用北黄芪，淫羊藿选用制淫羊藿。
6.一种根据权利要求1所述的骨质疏松症治疗药物的制备方法，其特征在于取补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参各药全量，加水煎煮3次，过滤，合并三次煎液，浓缩至相对密度，再过滤，添加常规口服液辅料及蒸馏液、蒸馏水，制成口服液。
全文摘要
本发明涉及一种骨质疏松症治疗药物及其生产方法，采用补骨脂、肉苁蓉、黄芪、淫羊藿、吐丝子、丹参为主要原料，共同制成口服液、口服散剂、冲剂、片剂或胶囊剂型等口服剂型。本发明的药物具有补肾壮骨、活血通络、健脾益气之功效，主治骨质疏松症，能缓解症状及提高骨量和改善骨的生物力学性能，使骨的质量有不同程度的恢复，具有见效快、服用方便、骨量提高明显、副作用小等优点。其生产方法简单。
文档编号A61K9/14GK1579442SQ0314016
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月14日 优先权日2003年8月14日
发明者刘庆思, 庄洪, 黄宏兴, 邵敏 申请人:广州中医药大学附属骨伤科医院
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