一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法
专利名称：一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及保健药品，具体涉及一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法。
背景技术：
人体的衰老是一种自然规律，其免疫调节功能也相对减弱，人们为实现延缓衰老和延长寿命的目的，采取了各种办法，除经常运动外，采用最多的方法是服用各种具有长寿作用的药物来延缓身体衰老，提高免疫功能，但是，目前市场上提供的各种抗衰老长寿药品或保健品均达不到很好的延缓衰老和提高免疫功能的效果，有的只是一时的强壮功能，不能标本兼治，有的药品还采用化学合成的方法制备，长期服用有副作用，不同程度损害身体。
发明内容
本发明的目的就是提供一种可延缓衰老和免疫功能的胶囊，采用中草药为原材料制成，具有有效的抗衰老和提高免疫功能，同时可保证在长期服用下也不会对人体产生副作用。
本发明的另一目的就是提供一种用于制备上述胶囊的工艺。
本发明的胶囊由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。
上述原料的优先重量份比为1-3∶1上述原料的最佳重量份比为2.5∶1所述蝙蝠蛾拟青霉菌粉，也叫发酵虫草菌粉(Cs-4)，系从新鲜冬虫夏草分离所得的虫草菌经深层发酵培养，将发酵产物过滤、干燥制成。现代医学研究表明，蝙蝠蛾拟青霉菌粉，含有腺嘌呤核苷，脲嘧啶核苷、甘露醇、麦角甾醇以及天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等19种氨基酸，此外，还含有锌、钾、锰、磷、硒、铜、铁、钙和维生素E等，与天然虫草有类似的化学成份和药理功能，具有温和平补之性，为虚疟、虚痞、虚胀、虚痛之圣药，功胜九香虫，凡阴虚阳亢，而为喘逆痰咳者，投之悉效，为君药。
所述西洋参，其味甘微苦，性寒，亦入肺、肾经，功能补气养阴，清火生津，故可为臣佐助君药。现代医学研究表明，西洋参，主含三萜皂苷，以齐墩果烷为苷元的有人参皂苷-Ro；以20(S)原人参二醇为苷元的有人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rb3、Rc，-Rd、-RAo、-F2，丙二酰基人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rd，西洋参皂苷-R1，绞股蓝苷XI、X、XII；以20(S)原人参三醇为苷元的有人参皂苷-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh、-F3等皂苷，还含有多种氨基酸多，多糖、微量元素及维生素等，西洋参与蝙蝠蛾拟青霉菌粉合用，可以相互协同共奏补益肺肾，益气养阴，生精养血、益气健脾、延缓衰老的功效。
本发明的制造工艺如下取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌蛾粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
本发明的另一制造工艺如下取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
本发明具有延缓衰老、免疫调节等保健功能，可长期服用，无副作用。
本发明经江西省食品卫生监督检验所进行毒理学试验，其报告如下1、材料和方法1.1样品由申请人提供的胶囊产品为土黄色粉末，人体推荐量2.1g/60kgBW/d。
1.2试验动物选用江西医学院实验动物中心提供的健康昆明种小鼠(批准文号为动许字第021-9602号)及江西省动物中心提供的清结级SD大鼠(批准文号为医动字第021-9704号)。
1.3小鼠急性毒性试验选用健康昆明种小白鼠20只，雌雄各10只，禁食16小时后试验，小鼠体重为18-22克。取粉碎后的样品10g加蒸馏水至20ml，按0.4ml/20gBW的动物体重比例灌胃，2次/日，剂量达20g/kgBW，连续观察7天。记录中毒表现及死亡情况。
1.4遗传毒性试验1.4.1Ames试验1.4.1.1样品处理称取1g样品，用蒸馏水溶解至10ml，以下用蒸馏水稀释成各浓度，按100ul/皿计，分别为10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，高压灭菌备用。
1.4.1.2采用经监定符合要求的鼠伤寒门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株进行试验，采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统。试验设10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，同时设阴性对照和阳性对照。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5mlS-9混合液(当需要代谢活化时)，混均后倒入底层培养基平板上。在37℃培养48h，计算每皿落回变数。如果受试物的回变菌落数是阴性对照菌落数2倍以上，并具有剂量一反应关系者，则定为阳性。整套试验在相同条件下重复做一次。
1.4.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40ml/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。取粉碎后的样品10.00g、5.00g、2.50g/kgBW，末次给样品后6h，颈椎脱臼处死动物，取股骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PRC)，微核发生率以含微核的PRC千分率计，并进行统计处理(X2检验)。
1.4.3小鼠精子畸形试验用体重25-35克的性成熟雄性小白鼠25只，按体重随机分为5组，每组5只。以40mg/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。称取样品5.00g溶于蒸馏水中，过滤，取滤液浓缩至20ml，为灌胃的最高浓度，以0.4ml/20g.BW灌胃，剂量为5.00g/KgBW。以下设2.50、1.25g/kgBW两剂量。连续灌胃五天，每日一次于末次灌胃后30天处死动物，取两侧附睾制片，伊红染色，每组计数5只动物，每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率(以百分率计)，并进行统计处理(X2检验)。
1.5 30天喂养试验1.5.1仪器全自动生化分析仪，日立7060全自动血球计数仪，Couter-JTIR1.5.2用体重70克左右清洁级断乳大鼠80只，雌雄各半随机分为4组，即对照组，3个受试物组。每100克基础饲料分别加入样品3.50g、1.75g、0.87g给予各剂量组大鼠喂饲，剂量达到3.50g、1.75g、0.87g/Kg.BW(相当于人体推荐量的100、50、25倍)，对照组给予基础饲料。连续30天，单笼喂养，自由饮食，记录大鼠进食量、体重，连续观察30天。
1.5.3观察指标1.5.3.1动物的一般表现、体重、食物利用率。
1.5.3.2血常规及生化指标白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。
1.5.3.3病理解剖脏体比、大体观察及病理组织检查(肝、心、肾、胃及十二指肠)。
2结果2.1小鼠急性毒性试验由表1.可见，以20g/kgBW的剂量灌胃两种性别的小鼠，观察7天后，未见明显中毒症状，也无死亡。受试物对两种性别小鼠的急性毒性LD50均大于20g/kgBW。根据急性毒性分级，属无毒物表1表1本胶囊样品对小鼠的急性毒性动物 剂量 LD50性别 数量 途径 死亡数 结论品种(g/kgBW) (g/kgBW)雄10 经口 20 0 ＞20无毒小鼠雌10 经口 20 0 ＞20无毒2.2遗传毒性试验2.2.1Ames试验由表2-3可见，本发明胶囊各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照菌落数2倍，亦无剂量反应关系，对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株在加与不加S-9时，均未呈现遗传毒性。
表2本发明胶囊Ames试验第1次结果TA97TA98 TA100TA102剂量(mg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S910.094±4 105±827±4 26±1170±44185±53 281±24 278±15受5.0 125±8 116±12 27±2 30±6220±26183±37 266±32 311±32试 2.593±5 84±13 29±4 28±1224±16127±15 265±37 227±12物1.0 107±19 97±328±3 28±4172±44168±29 285±71 263±340.5 116±12 92±327±3 25±3201±26187±65 278±10 274±49自发回变151±22142±25 31±4 27±7190±4 141±15 285±68 242±38阳 性 TA97TA98TA100 TA102剂量对 照(μg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9物SA 1.0 908±422-AF 10.0 803±49 718±25 855±50 1020±702，7-AF 100.0 775±80MMS 4.01009±259A50.0823±22注以上结果为平均值表3本发明胶囊Ames试验第2次结果TA97TA98TA100 TA102剂量(mg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S910.0 124±8151±4336±5 29±2151±21141±3265±19 254±18受5.0 145±19 156±4135±5 30±3150±34163±21 263±3308±13试 2.5 170±48 128±1337±4 33±1135±25144±20 308±58 299±2物1.0 160±33 128±1736±4 35±4152±26154±5289±22 308±120.5 142±14 161±3140±1 32±2156±21162±21 293±36 294±14自发回变121±5130±5736±4 34±9145±11147±32 320±19 287±34阳 性TA97 TA98TA100 TA102剂量对 照(μg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9物SA 1.0 952±892-AF10.0 936±96 861±115 1035±1001090±832，7-100.0 723±96AFMMS 4.0 1170±779A 50.0856±66注以上结果为平均值2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验见表4，本发明胶囊各剂量组微核率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。未见本发明胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核产生影响。
表4 本发明胶囊对小鼠骨髓微核发生率的影响性别 剂量 动物数 检查细胞数 微核数微核率(g/kgBW) (只) (个) (个) (‰)10.005 50007 1.45.00 5 50006 1.2雄 2.50 5 50006 1.20.00 5 50006 1.240mg/kgBW(CP)5 5000 118 23.6*10.005 50006 1.25.00 5 50005 1.0雌 2.50 5 50006 1.20.00 5 50006 1.240mg/kgBW(CP)5 5000 117 23.4**与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)2.2.3小鼠精子畸形试验由表5可见，本发明胶囊各剂量组小鼠精子畸形发生率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。
表5 本发明胶囊对小鼠精子畸形发生率的影响剂量 动物数 受检精子数精子畸形数 精子畸形率(g/kg.bw) (只) (个) (个) (％)5.00 55000 911.822.50 55000 103 2.061.25 55000 841.68055000 921.8440mg/kgBW(CP) 55000 480 9.602.3 30天喂养试验2.3.1生长状况及食物利用率由表6-7可见，以3.50g、1.75g、0.87g/kgBW剂量的本发明胶囊给予大鼠30天，动物未出现拒食现象，动物活动生长正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)。
表6本发明胶囊对大鼠体重影响性别剂量动物数始重 第1周 第2周 第3周 第4周(g/kgBW) (只) (g) (g) (g)(g) (g)0P值3.50 10 56.32±9.20 95.5±13.16 143.6±16.89 206.7±19.21 260.4±25.65 ＞0.05雄 1.75 10 56.64±8.36 96.2±8.21146.5±12.10 209.2±16.07 263.1±19.19 ＞0.050.87 10 56.14±8.46 95.9±11.32 141.6±15.25 211.4±17.96 264.7±18.43 ＞0.05010 56.98±8.89 93.8±12.09 139.4±16.97 205.2±21.39 261.4±27.2 -3.50 10 58.45±8.18 90.8±8.91127.0±11.62 133.9±13.57 195.6±14.56 ＞0.05雌 1.75 10 58.64±8.28 90.9±8.07120.8±11.24 148.6±14.01 194.6±13.35 ＞0.050.87 10 58.81±8.34 95.2±9.70131.0±10.56 149.3±10.92 202.2±14.1＞0.05010 58.59±7.73 94.7±9.53121.6±9.34140.4±5.31194.0±10.94 -表7本发明胶囊对大鼠食物利用率的影响性别剂量动物数体重增重 进食量 食物利用率(g/kgBW) (只) (g)(g) (％)P值3.50 10 204.08±21 668.18±3630.8±2.8 P＞0.05雄 1.75 10 206.46±26 664.28±4032.7±3.3 P＞0.050.87 10 208.50±28 674.62±4131.9±3.6 P＞0.05010 204.42±20 646.86±4931.1±2.9 -3.50 10 137.15±17 542.51±3725.28±2.7 P＞0.05雌 1.75 10 135.96±19 527.17±4025.41±3.0 P＞0.050.87 10 143.39±15 553.13±3725.01±2.9 P＞0.05010 135.41±16 541.46±3524.34±2.8 -2.2血常规及血生化指标由表8-11可见，该受试物以3.50、1.75、0.87g/kgBW剂量给予大鼠30天，对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室历史性对照范围内。
表8 本发明胶囊.30天喂养试验血液学检查结果性别剂量动物数 白细胞计数 红细胞计数 血红蛋白(g/kgBW) (只) (×109/L) (×1012/L) (g/L)3.50 10 20.65±3.15 6.66±0.42 142.0±3.85雄 1.75 10 20.15±2.94 6.77±0.40 144.6±5.100.87 10 21.02±4.04 6.65±0.46 143.4±6.8010 20.97±4.60 6.82±0.42 144.0±3.853.50 10 18.08±2.61 6.96±0.31 143.1±5.52雌 1.75 10 18.96±3.26 6.74±0.26 138.4±5.910.87 10 19.19±3.56 6.81±0.31 142.2±5.75010 17.43±3.01 6.69±0.46 139.9±4.7
表9本发明胶囊对大鼠WBC的影响性别剂量动物数 淋巴细胞 单核与嗜酸细胞 中性细胞(g/kgBW) (只)(％) (％) (％)3.50 10 77.3±3.24 8.32±2.91 14.38±1.99雄 1.75 10 76.3±2.13 10.37±1.65 13.36±1.740.87 10 79.4±2.94 8.05±2.57 13.2±1.92010 78.9±4.13 8.25±3.19 12.84±2.753.50 10 80.98±5.01 6.41±1.54 12.61±3.78雌 1.75 10 79.12±3.66 7.53±1.55 13.35±1.440.87 10 80.30±5.12 8.23±4.34 12.30±3.02010 80.37±3.24 6.05±2.12 13.57±3.27表10 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(1)性别剂量动物数谷丙转氨酶谷草转氨酶 尿素氮 肌酐g/kgBW(只)(U/L) (U/L) (mmol/L) (umol/L)3.50 10 30.2±4.2112.4±9.34 5.97±0.6 43.7±3.4雄 1.75 10 38.1±4.3114.5±8.60 5.92±0.7 44.2±2.90.87 10 38.2±3.6112.8±13.9 5.84±0.6 43.2±2.9010 30.0±4.3113.1±11.3 5.77±0.7 45.9±2.93.50 10 31.1±5.6116.2±15.7 5.91±0.8 44.5±2.5雌 1.75 10 39.3±5.1107.8±15.0 5.82±1.0 42.9±2.60.87 10 38.8±5.3106.4±14.7 5.81±1.1 42.7±2.4010 39.2±3.2118.7±13.9 5.84±0.7 43.7±3.0表11 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(2)性别剂量动物数 胆固醇 甘油三脂 血糖 总蛋白 白蛋白(g/kgBW) (只) (mmol/L) (mmol/L) (mmol/L) (g/L)g/L)3.50 10 1.57±0.18 1.33±0.24 8.35±0.91 51.35±4.7 29.6±1.6雄 1.75 10 1.60±0.26 1.28±0.43 8.46±0.46 53.83±4.6 30.5±2.60.87 10 1.56±0.13 1.23±0.26 8.56±0.65 51.99±3.0 30.1±0.7010 1.62±0.21 1.46±0.3 8.56±0.99 54.43±5.1 30.8±1.93.50 10 1.48±0.22 1.35±0.43 8.91±0.68 50.68±1.8 28.45±1.3雌 1.75 10 1.48±0.21 1.43±0.23 8.48±0.59 50.04±3.9 28.22±1.30.87 10 1.53±0.13 1.30±0.36 8.82±0.59 50.31±3.4 28.36±1.4010 1.54±0.21 1.34±0.43 8.95±0.42 53.62±4.6 29.55±1.42.3大体解剖及组织学检查大体解剖观察未发现异常，该受试物各剂量组的脏体比与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)见表12。对肝，肾，心，胃，十二指肠病理组织学镜下检查，各剂量组受检脏器均未见有意义的病理变化。
表12本发明胶囊对大鼠脏体比的影响性别剂量动物数 肝/体脾/体 肾/体 睾丸(卵巢)/体(g/kgBW) (只) ％ ％ ％ ％3.50 10 4.38±0.97 0.33±0.04 1.07±0.15 1.15±0.14雄 1.75 10 4.05±1.32 0.38±0.07 1.01±0.09 1.10±0.090.87 10 4.08±1.43 0.36±0.04 0.91±0.21 1.09±0.09010 4.53±0.60 0.37±0.06 1.01±0.14 1.07±0.143.50 10 4.52±0.49 0.27±0.05 1.08±0.10 0.07±0.009雌 1.75 10 4.44±0.55 0.25±0.03 1.09±0.15 0.07±0.0110.87 10 4.87±1.28 0.28±0.08 1.06±0.077 0.07±0.010010 4.81±0.55 0.25±0.02 1.01±0.12 0.06±0.0083小结3.1急性毒性试验本发明胶囊对两种性别的小鼠LD50均大于20g/kgBW。
3.2三项遗传毒性试验Ames、骨髓微核和精子畸形试验均阴性。
3.3 30天喂养试验本发明胶囊分别按3.50、1.75、0.87g/KgBW/d剂量掺入饲料给予各剂量组大鼠30天，结果显示试验期间动物未出现拒食现象，动物生长活动正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率、主要脏体比与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室正常值范围内。大体解剖与主要脏器病理组织检查各组动物均未见明显病理变化。
本发明具有的延缓衰老功能由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下样品来源及处理受试物由申请人提供，为塑料袋装胶囊，去掉胶囊内容为土黄色固体粉沫。实验时用蒸馏水配成不同浓度供实验用。
1、果蝇生存实验1.1实验动物Oregon K野生型黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)1.2饲养方法采用平底培养指管培养，每管20只，置25±1℃，相对湿度为45-75％的恒温培养室中，每四天换一次培养基。基础培养基配方如下(以100ml培养基为例)组份玉米粉 蔗糖 琼脂 丙酸 干酵母粉水(g) (g)(g) (ml)(g) (ml)用量 85 65 7.5 5 7.5 10001.3剂量设1个空白对照组和0.008％、0.023％、0.07％、0.21％四个剂量组。
1.4实验方法收集八小时内新羽化的果蝇成虫，乙醚麻醉下区分雌雄随机分组、分别称重后进行试验。每组用果蝇400只，雌雄各半。对照组给予普通玉米粉培养基；常规饲养25天后试验组分别给予含本发明胶囊0.008％、0.023％、0.07％、0.21％的培养基。每天观察记录果蝇生存数和死亡数，直到果蝇全部死亡为止。计算出半数死亡天数、平均寿命和平均最高寿命等三个指标。
1.5结果见表1，从表1可见，本发明胶囊0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)，0.023％、0.07％、0.21％剂量组可明显延长雌果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的最高寿命，与对照组相比，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)。0.21％剂量组雄果蝇半数死亡天数大于对照组5天，0.07％、0.21％剂量组雌果蝇半数死亡天数分别大于对照组8天、6天。
表1. 本发明胶囊对果蝇生存实验的影响(x±s)样本数(只) 平均体重(ug) 半数死亡时间(天)平均寿命(天) 平均最高寿命(天)a试物浓度(％) 雄 雌 雄雌 雄 雌 雄 雌 雄雌0.0 200 217 818 998 45 46 46.5±9.8 49.1±15.0 64.3±5.6 81.7±3.10.008 200 223 825 1012 48 46 47.2±9.5 49.7±15.5 64.5±4.9 82.5±5.60.023 200 200 834 996 49 50 48.2±8.3 53.2±15.8* 63.3±2.9 81.4±4.30.07 209 216 789 997 49 54 50.6±11.6* 55.5±14.4* 76.6±8.4* 82.6±2.50.21 203 201 796 1008 50 52 51.1±10.0* 54.6±14.4* 74.6±7.7* 80.9±4.2与老龄对照组比较*p＜0.05a平均最高寿命由寿命最长的20只果蝇计算得出。
2、生化指标检测2.1动物SPF级12月龄昆明种雌性小鼠，共40只，2月龄雌性小鼠10只.湖北省预防医学科学院实验动物中心提供，批准号为鄂动管字19-082号。
2.2剂量分组设置对照组和低、中、高剂量组。对照组灌胃蒸馏水；低、中、高剂量组，分别以0.35、0.70、1.05g/kg.bw剂量的本发明胶囊蒸馏水配制液经口灌胃；低、中、高剂量组分别相当于本发明推荐人体摄入量(2.1g/60kg.bw)的10、20、30倍。连续喂养一个月。
2.3实验方法实验结束时，动物眼球取血，分离血清，测定LPO含量和SOD活性处死动物，取肝脏作匀浆，制备1％的肝匀浆作SOD活力测定；制备10％的肝匀浆作LPO含量的测定。SOD测定采用羟胺法，LPO测定采用共轭双键法(试剂盒购自南京建成生物工程公司)。
结果见表3，本发明胶囊中、高剂量组可明显减少老龄小鼠10％肝匀浆LPO含量，与老龄对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)；低、中、高剂量组明显升高老龄小鼠1％肝匀浆SOD活性，与老龄对照组比较，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05 P＜0.05)。
表2本发明胶囊对老龄小鼠体重的影响(x±s)组别剂量 动物数 初 重终 重(g/kg.bw) (只)g g老龄对照0.0 10 56.4±8.955.9±8.3低剂量组0.35 10 55.0±8.154.9±7.1中剂量组0.70 10 52.9±6.454.4±5.2高剂量组1.05 10 53.0±7.255.1±6.8
表3 本发明胶囊对老龄小鼠血清、肝匀浆SOD、LPO的影响(x±s)组别 剂量动物数 SOD(NU/ml) LPO(nmol.MDA/ml)(g/kg.bw) (只)1％肝匀浆 血 清 10％肝匀浆老龄对照 0.010 370.3±32.8 302.5±52.422.8±2.7低剂量组 0.35 10 429.8±35.4*302.5±18.723.6±2.3中剂量组 0.70 10 412.2±39.7*306.3±28.920.3±3.0*高剂量组 1.05 10 406.9±23.6*290.3±38.320.3±2.0*少龄对照 0.010 442.7±28.2*360.4±26.9* 19.9±2.8*与老龄对照组比较 *p＜0.05本发明具有免疫调节功能，由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下1.样品给予途径将本发明胶囊里的土黄色固体粉沫用水配成相应浓度，各组小鼠每天经口灌服相应剂量，连续给予一个月进行以下试验工作。空白对照组灌服普通自来水。
2.动物昆明种雌性小鼠，20g左右。湖北省医学院实验动物中心提供。动物批准号为鄂动医管字19-007。
3.分组按本发明推荐人群日饮用2.1g/60kg.bw，扩大10、20、30倍，设计低、中、高三个剂量组，即0.35、0.7、1.05g/kg.bw。
4.试验方法与结果4.1试验前后动物体重记录见表1.各组动物间体重无明显差异。
表1 试验前后动物体重记录(x±S)组别 剂量动物数 体重(克) 增 重(g/kg.bw) (只) 试验前 试验后 (克)空白组 0 10 19.99±0.7 36.80±0.4 16.81±0.4低剂量组 0.35 10 19.93±0.5 36.72±0.5 16.79±0.4中剂量组 0.70 10 19.98±0.7 36.91±0.7 16.94±0.4高剂量组 1.05 10 19.95±0.7 36.91±0.6 16.96±0.44.2对动物淋巴器官/体重比值的影响见表2.各组动物间胸腺/体重比值和脾脏/体重值无明显差异。
表2 对动物淋巴器官/体重比值的影响(x±S)
组别剂量动物数 胸腺/体重比值 脾脏/体重比值(g/kg.bw) (只)(×10-3) (×10-3)空白组0 102.83±0.10 4.46±0.10低剂量组 0.35 102.83±0.10 4.47±0.09中剂量组 0.70 102.82±0.09 4.47±0.10高剂量组 1.05 102.84±0.09 4.47±0.074.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验方法MTT法(步骤同功能实验程序规定)结果见表3.从表3可见，与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力。
表3 本发明胶囊对小鼠细胞免疫功能影响组别剂量注ConA导脾淋巴细胞增殖 DNFB诱导DTH(g/kg.bw) N OD差值 N 左右耳重量差(mg)空白组 0 10 0.039±0.003 10 16.46±0.6低剂量组 0.35 10 0.043±0.003# 10 17.15±0.4#中剂量组 0.70 10 0.049±0.003*10 18.27±0.4*高剂量组 1.05 10 0.056±0.004*10 19.49±0.4*与空白组比较*P＜0.01 #0.05＞P＞0.01注取0.1ml测定OD570值4.4二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)方法耳肿胀法。用DNFB致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。
结果见表3.从表3可见与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应。
4.5血清溶血素的测定方法血凝法。按照功能实验程序操作，根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。
结果从表4可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性升高血清溶血素含量。
表4 本发明胶囊对小鼠体液免疫功能的影响组别 剂量 动物数血清溶血素(g/kg.bw) (只) (抗体积数)空白组 0 10 67.8±14.9低剂量组0.35 10 87.0±13.0*中剂量组0.70 10 100.8±17.7*高剂量组1.05 10 115.0±15.0*与空白组比较*P＜0.014.6腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验方法半体内法。制备20％的鸡红细胞悬液；每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min；育毕用生理盐水漂洗，凉干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数 结果见表5.从表5可见，本发明胶囊低、中、高剂量组吞噬百分数、吞噬指数均明显高于空白对照组。
表5 本发明胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响组别 剂量 动物数 吞噬百分率 吞噬指数(g/kg.bw) (只)(％)空白组 0 10 37.2±2.8 0.42±0.02低剂量组 0.35 10 42.4±2.6*0.47±0.03*中剂量组 0.70 10 46.1±1.6*0.51±0.02*高剂量组 1.05 10 48.3±2.7*0.54±0.03*与空白组比较*P＜0.014.7小鼠碳廓清试验方法依程序规定的方法。根据注入墨汁2min、10min后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。
结果见表6.从表6可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数。
表6本发明胶囊对小鼠碳廓清功能的影响组别剂量 动物数吞噬指数(g/kg.bw) (只)空白组 0 10 6.753±0.2低剂量组0.35 10 6.067±0.2*中剂量组0.70 10 5.606±0.2*高剂量组1.05 10 5.345±0.2*与空白组比较*P＜0.014.8抗体生成细胞检测方法改良Jerne玻片法(略)。
结果见表7.从表7可见，本发明胶囊低、中、高剂量组均明显高于正常对照组，经统计学分析差异有显著性(p＜0.01)。
表7 本发明胶囊对抗体生成细胞功能的影响组别 剂量 动物数 溶血空斑数(g/kg.bw) (只) (个/106脾细胞)空白组 0 10 484±28.7低剂量组 0.35 10 519±11.4*中剂量组 0.70 10 569±26.2*高剂量组 1.05 10 590±30.6*与空白组比较*P＜0.0权利要求
1.一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊，其特征是由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原材料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。
2.根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原材料的重量份比为1-3∶1
3.根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原材料的重量份比为2.5∶1
4.一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
5.一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
全文摘要
本发明提供一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法，由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1－4∶1的比例配制而成。取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy
文档编号A61K9/48GK1569082SQ0314162
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月14日 优先权日2003年7月14日
发明者吴朝阳, 徐发红, 黄经球, 于肖辉 申请人:江西天施康科技开发有限公司
技术领域：
本发明涉及保健药品，具体涉及一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法。
背景技术：
人体的衰老是一种自然规律，其免疫调节功能也相对减弱，人们为实现延缓衰老和延长寿命的目的，采取了各种办法，除经常运动外，采用最多的方法是服用各种具有长寿作用的药物来延缓身体衰老，提高免疫功能，但是，目前市场上提供的各种抗衰老长寿药品或保健品均达不到很好的延缓衰老和提高免疫功能的效果，有的只是一时的强壮功能，不能标本兼治，有的药品还采用化学合成的方法制备，长期服用有副作用，不同程度损害身体。
发明内容
本发明的目的就是提供一种可延缓衰老和免疫功能的胶囊，采用中草药为原材料制成，具有有效的抗衰老和提高免疫功能，同时可保证在长期服用下也不会对人体产生副作用。
本发明的另一目的就是提供一种用于制备上述胶囊的工艺。
本发明的胶囊由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。
上述原料的优先重量份比为1-3∶1上述原料的最佳重量份比为2.5∶1所述蝙蝠蛾拟青霉菌粉，也叫发酵虫草菌粉(Cs-4)，系从新鲜冬虫夏草分离所得的虫草菌经深层发酵培养，将发酵产物过滤、干燥制成。现代医学研究表明，蝙蝠蛾拟青霉菌粉，含有腺嘌呤核苷，脲嘧啶核苷、甘露醇、麦角甾醇以及天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等19种氨基酸，此外，还含有锌、钾、锰、磷、硒、铜、铁、钙和维生素E等，与天然虫草有类似的化学成份和药理功能，具有温和平补之性，为虚疟、虚痞、虚胀、虚痛之圣药，功胜九香虫，凡阴虚阳亢，而为喘逆痰咳者，投之悉效，为君药。
所述西洋参，其味甘微苦，性寒，亦入肺、肾经，功能补气养阴，清火生津，故可为臣佐助君药。现代医学研究表明，西洋参，主含三萜皂苷，以齐墩果烷为苷元的有人参皂苷-Ro；以20(S)原人参二醇为苷元的有人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rb3、Rc，-Rd、-RAo、-F2，丙二酰基人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rd，西洋参皂苷-R1，绞股蓝苷XI、X、XII；以20(S)原人参三醇为苷元的有人参皂苷-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh、-F3等皂苷，还含有多种氨基酸多，多糖、微量元素及维生素等，西洋参与蝙蝠蛾拟青霉菌粉合用，可以相互协同共奏补益肺肾，益气养阴，生精养血、益气健脾、延缓衰老的功效。
本发明的制造工艺如下取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌蛾粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
本发明的另一制造工艺如下取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
本发明具有延缓衰老、免疫调节等保健功能，可长期服用，无副作用。
本发明经江西省食品卫生监督检验所进行毒理学试验，其报告如下1、材料和方法1.1样品由申请人提供的胶囊产品为土黄色粉末，人体推荐量2.1g/60kgBW/d。
1.2试验动物选用江西医学院实验动物中心提供的健康昆明种小鼠(批准文号为动许字第021-9602号)及江西省动物中心提供的清结级SD大鼠(批准文号为医动字第021-9704号)。
1.3小鼠急性毒性试验选用健康昆明种小白鼠20只，雌雄各10只，禁食16小时后试验，小鼠体重为18-22克。取粉碎后的样品10g加蒸馏水至20ml，按0.4ml/20gBW的动物体重比例灌胃，2次/日，剂量达20g/kgBW，连续观察7天。记录中毒表现及死亡情况。
1.4遗传毒性试验1.4.1Ames试验1.4.1.1样品处理称取1g样品，用蒸馏水溶解至10ml，以下用蒸馏水稀释成各浓度，按100ul/皿计，分别为10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，高压灭菌备用。
1.4.1.2采用经监定符合要求的鼠伤寒门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株进行试验，采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统。试验设10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，同时设阴性对照和阳性对照。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5mlS-9混合液(当需要代谢活化时)，混均后倒入底层培养基平板上。在37℃培养48h，计算每皿落回变数。如果受试物的回变菌落数是阴性对照菌落数2倍以上，并具有剂量一反应关系者，则定为阳性。整套试验在相同条件下重复做一次。
1.4.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40ml/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。取粉碎后的样品10.00g、5.00g、2.50g/kgBW，末次给样品后6h，颈椎脱臼处死动物，取股骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PRC)，微核发生率以含微核的PRC千分率计，并进行统计处理(X2检验)。
1.4.3小鼠精子畸形试验用体重25-35克的性成熟雄性小白鼠25只，按体重随机分为5组，每组5只。以40mg/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。称取样品5.00g溶于蒸馏水中，过滤，取滤液浓缩至20ml，为灌胃的最高浓度，以0.4ml/20g.BW灌胃，剂量为5.00g/KgBW。以下设2.50、1.25g/kgBW两剂量。连续灌胃五天，每日一次于末次灌胃后30天处死动物，取两侧附睾制片，伊红染色，每组计数5只动物，每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率(以百分率计)，并进行统计处理(X2检验)。
1.5 30天喂养试验1.5.1仪器全自动生化分析仪，日立7060全自动血球计数仪，Couter-JTIR1.5.2用体重70克左右清洁级断乳大鼠80只，雌雄各半随机分为4组，即对照组，3个受试物组。每100克基础饲料分别加入样品3.50g、1.75g、0.87g给予各剂量组大鼠喂饲，剂量达到3.50g、1.75g、0.87g/Kg.BW(相当于人体推荐量的100、50、25倍)，对照组给予基础饲料。连续30天，单笼喂养，自由饮食，记录大鼠进食量、体重，连续观察30天。
1.5.3观察指标1.5.3.1动物的一般表现、体重、食物利用率。
1.5.3.2血常规及生化指标白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。
1.5.3.3病理解剖脏体比、大体观察及病理组织检查(肝、心、肾、胃及十二指肠)。
2结果2.1小鼠急性毒性试验由表1.可见，以20g/kgBW的剂量灌胃两种性别的小鼠，观察7天后，未见明显中毒症状，也无死亡。受试物对两种性别小鼠的急性毒性LD50均大于20g/kgBW。根据急性毒性分级，属无毒物表1表1本胶囊样品对小鼠的急性毒性动物 剂量 LD50性别 数量 途径 死亡数 结论品种(g/kgBW) (g/kgBW)雄10 经口 20 0 ＞20无毒小鼠雌10 经口 20 0 ＞20无毒2.2遗传毒性试验2.2.1Ames试验由表2-3可见，本发明胶囊各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照菌落数2倍，亦无剂量反应关系，对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株在加与不加S-9时，均未呈现遗传毒性。
表2本发明胶囊Ames试验第1次结果TA97TA98 TA100TA102剂量(mg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S910.094±4 105±827±4 26±1170±44185±53 281±24 278±15受5.0 125±8 116±12 27±2 30±6220±26183±37 266±32 311±32试 2.593±5 84±13 29±4 28±1224±16127±15 265±37 227±12物1.0 107±19 97±328±3 28±4172±44168±29 285±71 263±340.5 116±12 92±327±3 25±3201±26187±65 278±10 274±49自发回变151±22142±25 31±4 27±7190±4 141±15 285±68 242±38阳 性 TA97TA98TA100 TA102剂量对 照(μg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9物SA 1.0 908±422-AF 10.0 803±49 718±25 855±50 1020±702，7-AF 100.0 775±80MMS 4.01009±259A50.0823±22注以上结果为平均值表3本发明胶囊Ames试验第2次结果TA97TA98TA100 TA102剂量(mg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S910.0 124±8151±4336±5 29±2151±21141±3265±19 254±18受5.0 145±19 156±4135±5 30±3150±34163±21 263±3308±13试 2.5 170±48 128±1337±4 33±1135±25144±20 308±58 299±2物1.0 160±33 128±1736±4 35±4152±26154±5289±22 308±120.5 142±14 161±3140±1 32±2156±21162±21 293±36 294±14自发回变121±5130±5736±4 34±9145±11147±32 320±19 287±34阳 性TA97 TA98TA100 TA102剂量对 照(μg/皿)-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9物SA 1.0 952±892-AF10.0 936±96 861±115 1035±1001090±832，7-100.0 723±96AFMMS 4.0 1170±779A 50.0856±66注以上结果为平均值2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验见表4，本发明胶囊各剂量组微核率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。未见本发明胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核产生影响。
表4 本发明胶囊对小鼠骨髓微核发生率的影响性别 剂量 动物数 检查细胞数 微核数微核率(g/kgBW) (只) (个) (个) (‰)10.005 50007 1.45.00 5 50006 1.2雄 2.50 5 50006 1.20.00 5 50006 1.240mg/kgBW(CP)5 5000 118 23.6*10.005 50006 1.25.00 5 50005 1.0雌 2.50 5 50006 1.20.00 5 50006 1.240mg/kgBW(CP)5 5000 117 23.4**与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)2.2.3小鼠精子畸形试验由表5可见，本发明胶囊各剂量组小鼠精子畸形发生率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。
表5 本发明胶囊对小鼠精子畸形发生率的影响剂量 动物数 受检精子数精子畸形数 精子畸形率(g/kg.bw) (只) (个) (个) (％)5.00 55000 911.822.50 55000 103 2.061.25 55000 841.68055000 921.8440mg/kgBW(CP) 55000 480 9.602.3 30天喂养试验2.3.1生长状况及食物利用率由表6-7可见，以3.50g、1.75g、0.87g/kgBW剂量的本发明胶囊给予大鼠30天，动物未出现拒食现象，动物活动生长正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)。
表6本发明胶囊对大鼠体重影响性别剂量动物数始重 第1周 第2周 第3周 第4周(g/kgBW) (只) (g) (g) (g)(g) (g)0P值3.50 10 56.32±9.20 95.5±13.16 143.6±16.89 206.7±19.21 260.4±25.65 ＞0.05雄 1.75 10 56.64±8.36 96.2±8.21146.5±12.10 209.2±16.07 263.1±19.19 ＞0.050.87 10 56.14±8.46 95.9±11.32 141.6±15.25 211.4±17.96 264.7±18.43 ＞0.05010 56.98±8.89 93.8±12.09 139.4±16.97 205.2±21.39 261.4±27.2 -3.50 10 58.45±8.18 90.8±8.91127.0±11.62 133.9±13.57 195.6±14.56 ＞0.05雌 1.75 10 58.64±8.28 90.9±8.07120.8±11.24 148.6±14.01 194.6±13.35 ＞0.050.87 10 58.81±8.34 95.2±9.70131.0±10.56 149.3±10.92 202.2±14.1＞0.05010 58.59±7.73 94.7±9.53121.6±9.34140.4±5.31194.0±10.94 -表7本发明胶囊对大鼠食物利用率的影响性别剂量动物数体重增重 进食量 食物利用率(g/kgBW) (只) (g)(g) (％)P值3.50 10 204.08±21 668.18±3630.8±2.8 P＞0.05雄 1.75 10 206.46±26 664.28±4032.7±3.3 P＞0.050.87 10 208.50±28 674.62±4131.9±3.6 P＞0.05010 204.42±20 646.86±4931.1±2.9 -3.50 10 137.15±17 542.51±3725.28±2.7 P＞0.05雌 1.75 10 135.96±19 527.17±4025.41±3.0 P＞0.050.87 10 143.39±15 553.13±3725.01±2.9 P＞0.05010 135.41±16 541.46±3524.34±2.8 -2.2血常规及血生化指标由表8-11可见，该受试物以3.50、1.75、0.87g/kgBW剂量给予大鼠30天，对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室历史性对照范围内。
表8 本发明胶囊.30天喂养试验血液学检查结果性别剂量动物数 白细胞计数 红细胞计数 血红蛋白(g/kgBW) (只) (×109/L) (×1012/L) (g/L)3.50 10 20.65±3.15 6.66±0.42 142.0±3.85雄 1.75 10 20.15±2.94 6.77±0.40 144.6±5.100.87 10 21.02±4.04 6.65±0.46 143.4±6.8010 20.97±4.60 6.82±0.42 144.0±3.853.50 10 18.08±2.61 6.96±0.31 143.1±5.52雌 1.75 10 18.96±3.26 6.74±0.26 138.4±5.910.87 10 19.19±3.56 6.81±0.31 142.2±5.75010 17.43±3.01 6.69±0.46 139.9±4.7
表9本发明胶囊对大鼠WBC的影响性别剂量动物数 淋巴细胞 单核与嗜酸细胞 中性细胞(g/kgBW) (只)(％) (％) (％)3.50 10 77.3±3.24 8.32±2.91 14.38±1.99雄 1.75 10 76.3±2.13 10.37±1.65 13.36±1.740.87 10 79.4±2.94 8.05±2.57 13.2±1.92010 78.9±4.13 8.25±3.19 12.84±2.753.50 10 80.98±5.01 6.41±1.54 12.61±3.78雌 1.75 10 79.12±3.66 7.53±1.55 13.35±1.440.87 10 80.30±5.12 8.23±4.34 12.30±3.02010 80.37±3.24 6.05±2.12 13.57±3.27表10 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(1)性别剂量动物数谷丙转氨酶谷草转氨酶 尿素氮 肌酐g/kgBW(只)(U/L) (U/L) (mmol/L) (umol/L)3.50 10 30.2±4.2112.4±9.34 5.97±0.6 43.7±3.4雄 1.75 10 38.1±4.3114.5±8.60 5.92±0.7 44.2±2.90.87 10 38.2±3.6112.8±13.9 5.84±0.6 43.2±2.9010 30.0±4.3113.1±11.3 5.77±0.7 45.9±2.93.50 10 31.1±5.6116.2±15.7 5.91±0.8 44.5±2.5雌 1.75 10 39.3±5.1107.8±15.0 5.82±1.0 42.9±2.60.87 10 38.8±5.3106.4±14.7 5.81±1.1 42.7±2.4010 39.2±3.2118.7±13.9 5.84±0.7 43.7±3.0表11 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(2)性别剂量动物数 胆固醇 甘油三脂 血糖 总蛋白 白蛋白(g/kgBW) (只) (mmol/L) (mmol/L) (mmol/L) (g/L)g/L)3.50 10 1.57±0.18 1.33±0.24 8.35±0.91 51.35±4.7 29.6±1.6雄 1.75 10 1.60±0.26 1.28±0.43 8.46±0.46 53.83±4.6 30.5±2.60.87 10 1.56±0.13 1.23±0.26 8.56±0.65 51.99±3.0 30.1±0.7010 1.62±0.21 1.46±0.3 8.56±0.99 54.43±5.1 30.8±1.93.50 10 1.48±0.22 1.35±0.43 8.91±0.68 50.68±1.8 28.45±1.3雌 1.75 10 1.48±0.21 1.43±0.23 8.48±0.59 50.04±3.9 28.22±1.30.87 10 1.53±0.13 1.30±0.36 8.82±0.59 50.31±3.4 28.36±1.4010 1.54±0.21 1.34±0.43 8.95±0.42 53.62±4.6 29.55±1.42.3大体解剖及组织学检查大体解剖观察未发现异常，该受试物各剂量组的脏体比与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)见表12。对肝，肾，心，胃，十二指肠病理组织学镜下检查，各剂量组受检脏器均未见有意义的病理变化。
表12本发明胶囊对大鼠脏体比的影响性别剂量动物数 肝/体脾/体 肾/体 睾丸(卵巢)/体(g/kgBW) (只) ％ ％ ％ ％3.50 10 4.38±0.97 0.33±0.04 1.07±0.15 1.15±0.14雄 1.75 10 4.05±1.32 0.38±0.07 1.01±0.09 1.10±0.090.87 10 4.08±1.43 0.36±0.04 0.91±0.21 1.09±0.09010 4.53±0.60 0.37±0.06 1.01±0.14 1.07±0.143.50 10 4.52±0.49 0.27±0.05 1.08±0.10 0.07±0.009雌 1.75 10 4.44±0.55 0.25±0.03 1.09±0.15 0.07±0.0110.87 10 4.87±1.28 0.28±0.08 1.06±0.077 0.07±0.010010 4.81±0.55 0.25±0.02 1.01±0.12 0.06±0.0083小结3.1急性毒性试验本发明胶囊对两种性别的小鼠LD50均大于20g/kgBW。
3.2三项遗传毒性试验Ames、骨髓微核和精子畸形试验均阴性。
3.3 30天喂养试验本发明胶囊分别按3.50、1.75、0.87g/KgBW/d剂量掺入饲料给予各剂量组大鼠30天，结果显示试验期间动物未出现拒食现象，动物生长活动正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率、主要脏体比与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室正常值范围内。大体解剖与主要脏器病理组织检查各组动物均未见明显病理变化。
本发明具有的延缓衰老功能由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下样品来源及处理受试物由申请人提供，为塑料袋装胶囊，去掉胶囊内容为土黄色固体粉沫。实验时用蒸馏水配成不同浓度供实验用。
1、果蝇生存实验1.1实验动物Oregon K野生型黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)1.2饲养方法采用平底培养指管培养，每管20只，置25±1℃，相对湿度为45-75％的恒温培养室中，每四天换一次培养基。基础培养基配方如下(以100ml培养基为例)组份玉米粉 蔗糖 琼脂 丙酸 干酵母粉水(g) (g)(g) (ml)(g) (ml)用量 85 65 7.5 5 7.5 10001.3剂量设1个空白对照组和0.008％、0.023％、0.07％、0.21％四个剂量组。
1.4实验方法收集八小时内新羽化的果蝇成虫，乙醚麻醉下区分雌雄随机分组、分别称重后进行试验。每组用果蝇400只，雌雄各半。对照组给予普通玉米粉培养基；常规饲养25天后试验组分别给予含本发明胶囊0.008％、0.023％、0.07％、0.21％的培养基。每天观察记录果蝇生存数和死亡数，直到果蝇全部死亡为止。计算出半数死亡天数、平均寿命和平均最高寿命等三个指标。
1.5结果见表1，从表1可见，本发明胶囊0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)，0.023％、0.07％、0.21％剂量组可明显延长雌果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的最高寿命，与对照组相比，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)。0.21％剂量组雄果蝇半数死亡天数大于对照组5天，0.07％、0.21％剂量组雌果蝇半数死亡天数分别大于对照组8天、6天。
表1. 本发明胶囊对果蝇生存实验的影响(x±s)样本数(只) 平均体重(ug) 半数死亡时间(天)平均寿命(天) 平均最高寿命(天)a试物浓度(％) 雄 雌 雄雌 雄 雌 雄 雌 雄雌0.0 200 217 818 998 45 46 46.5±9.8 49.1±15.0 64.3±5.6 81.7±3.10.008 200 223 825 1012 48 46 47.2±9.5 49.7±15.5 64.5±4.9 82.5±5.60.023 200 200 834 996 49 50 48.2±8.3 53.2±15.8* 63.3±2.9 81.4±4.30.07 209 216 789 997 49 54 50.6±11.6* 55.5±14.4* 76.6±8.4* 82.6±2.50.21 203 201 796 1008 50 52 51.1±10.0* 54.6±14.4* 74.6±7.7* 80.9±4.2与老龄对照组比较*p＜0.05a平均最高寿命由寿命最长的20只果蝇计算得出。
2、生化指标检测2.1动物SPF级12月龄昆明种雌性小鼠，共40只，2月龄雌性小鼠10只.湖北省预防医学科学院实验动物中心提供，批准号为鄂动管字19-082号。
2.2剂量分组设置对照组和低、中、高剂量组。对照组灌胃蒸馏水；低、中、高剂量组，分别以0.35、0.70、1.05g/kg.bw剂量的本发明胶囊蒸馏水配制液经口灌胃；低、中、高剂量组分别相当于本发明推荐人体摄入量(2.1g/60kg.bw)的10、20、30倍。连续喂养一个月。
2.3实验方法实验结束时，动物眼球取血，分离血清，测定LPO含量和SOD活性处死动物，取肝脏作匀浆，制备1％的肝匀浆作SOD活力测定；制备10％的肝匀浆作LPO含量的测定。SOD测定采用羟胺法，LPO测定采用共轭双键法(试剂盒购自南京建成生物工程公司)。
结果见表3，本发明胶囊中、高剂量组可明显减少老龄小鼠10％肝匀浆LPO含量，与老龄对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)；低、中、高剂量组明显升高老龄小鼠1％肝匀浆SOD活性，与老龄对照组比较，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05 P＜0.05)。
表2本发明胶囊对老龄小鼠体重的影响(x±s)组别剂量 动物数 初 重终 重(g/kg.bw) (只)g g老龄对照0.0 10 56.4±8.955.9±8.3低剂量组0.35 10 55.0±8.154.9±7.1中剂量组0.70 10 52.9±6.454.4±5.2高剂量组1.05 10 53.0±7.255.1±6.8
表3 本发明胶囊对老龄小鼠血清、肝匀浆SOD、LPO的影响(x±s)组别 剂量动物数 SOD(NU/ml) LPO(nmol.MDA/ml)(g/kg.bw) (只)1％肝匀浆 血 清 10％肝匀浆老龄对照 0.010 370.3±32.8 302.5±52.422.8±2.7低剂量组 0.35 10 429.8±35.4*302.5±18.723.6±2.3中剂量组 0.70 10 412.2±39.7*306.3±28.920.3±3.0*高剂量组 1.05 10 406.9±23.6*290.3±38.320.3±2.0*少龄对照 0.010 442.7±28.2*360.4±26.9* 19.9±2.8*与老龄对照组比较 *p＜0.05本发明具有免疫调节功能，由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下1.样品给予途径将本发明胶囊里的土黄色固体粉沫用水配成相应浓度，各组小鼠每天经口灌服相应剂量，连续给予一个月进行以下试验工作。空白对照组灌服普通自来水。
2.动物昆明种雌性小鼠，20g左右。湖北省医学院实验动物中心提供。动物批准号为鄂动医管字19-007。
3.分组按本发明推荐人群日饮用2.1g/60kg.bw，扩大10、20、30倍，设计低、中、高三个剂量组，即0.35、0.7、1.05g/kg.bw。
4.试验方法与结果4.1试验前后动物体重记录见表1.各组动物间体重无明显差异。
表1 试验前后动物体重记录(x±S)组别 剂量动物数 体重(克) 增 重(g/kg.bw) (只) 试验前 试验后 (克)空白组 0 10 19.99±0.7 36.80±0.4 16.81±0.4低剂量组 0.35 10 19.93±0.5 36.72±0.5 16.79±0.4中剂量组 0.70 10 19.98±0.7 36.91±0.7 16.94±0.4高剂量组 1.05 10 19.95±0.7 36.91±0.6 16.96±0.44.2对动物淋巴器官/体重比值的影响见表2.各组动物间胸腺/体重比值和脾脏/体重值无明显差异。
表2 对动物淋巴器官/体重比值的影响(x±S)
组别剂量动物数 胸腺/体重比值 脾脏/体重比值(g/kg.bw) (只)(×10-3) (×10-3)空白组0 102.83±0.10 4.46±0.10低剂量组 0.35 102.83±0.10 4.47±0.09中剂量组 0.70 102.82±0.09 4.47±0.10高剂量组 1.05 102.84±0.09 4.47±0.074.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验方法MTT法(步骤同功能实验程序规定)结果见表3.从表3可见，与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力。
表3 本发明胶囊对小鼠细胞免疫功能影响组别剂量注ConA导脾淋巴细胞增殖 DNFB诱导DTH(g/kg.bw) N OD差值 N 左右耳重量差(mg)空白组 0 10 0.039±0.003 10 16.46±0.6低剂量组 0.35 10 0.043±0.003# 10 17.15±0.4#中剂量组 0.70 10 0.049±0.003*10 18.27±0.4*高剂量组 1.05 10 0.056±0.004*10 19.49±0.4*与空白组比较*P＜0.01 #0.05＞P＞0.01注取0.1ml测定OD570值4.4二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)方法耳肿胀法。用DNFB致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。
结果见表3.从表3可见与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应。
4.5血清溶血素的测定方法血凝法。按照功能实验程序操作，根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。
结果从表4可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性升高血清溶血素含量。
表4 本发明胶囊对小鼠体液免疫功能的影响组别 剂量 动物数血清溶血素(g/kg.bw) (只) (抗体积数)空白组 0 10 67.8±14.9低剂量组0.35 10 87.0±13.0*中剂量组0.70 10 100.8±17.7*高剂量组1.05 10 115.0±15.0*与空白组比较*P＜0.014.6腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验方法半体内法。制备20％的鸡红细胞悬液；每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min；育毕用生理盐水漂洗，凉干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数 结果见表5.从表5可见，本发明胶囊低、中、高剂量组吞噬百分数、吞噬指数均明显高于空白对照组。
表5 本发明胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响组别 剂量 动物数 吞噬百分率 吞噬指数(g/kg.bw) (只)(％)空白组 0 10 37.2±2.8 0.42±0.02低剂量组 0.35 10 42.4±2.6*0.47±0.03*中剂量组 0.70 10 46.1±1.6*0.51±0.02*高剂量组 1.05 10 48.3±2.7*0.54±0.03*与空白组比较*P＜0.014.7小鼠碳廓清试验方法依程序规定的方法。根据注入墨汁2min、10min后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。
结果见表6.从表6可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数。
表6本发明胶囊对小鼠碳廓清功能的影响组别剂量 动物数吞噬指数(g/kg.bw) (只)空白组 0 10 6.753±0.2低剂量组0.35 10 6.067±0.2*中剂量组0.70 10 5.606±0.2*高剂量组1.05 10 5.345±0.2*与空白组比较*P＜0.014.8抗体生成细胞检测方法改良Jerne玻片法(略)。
结果见表7.从表7可见，本发明胶囊低、中、高剂量组均明显高于正常对照组，经统计学分析差异有显著性(p＜0.01)。
表7 本发明胶囊对抗体生成细胞功能的影响组别 剂量 动物数 溶血空斑数(g/kg.bw) (只) (个/106脾细胞)空白组 0 10 484±28.7低剂量组 0.35 10 519±11.4*中剂量组 0.70 10 569±26.2*高剂量组 1.05 10 590±30.6*与空白组比较*P＜0.0权利要求
1.一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊，其特征是由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原材料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。
2.根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原材料的重量份比为1-3∶1
3.根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原材料的重量份比为2.5∶1
4.一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
5.一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
全文摘要
本发明提供一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法，由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1－4∶1的比例配制而成。取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy
文档编号A61K9/48GK1569082SQ0314162
公开日2005年1月26日 申请日期2003年7月14日 优先权日2003年7月14日
发明者吴朝阳, 徐发红, 黄经球, 于肖辉 申请人:江西天施康科技开发有限公司
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