猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用的制作方法
专利名称：猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂领域。具体涉及猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用。
背景技术：
肺表面活性物质(Pulmonary surfactant，PS)是维持正常肺功能不可缺少的物质。肺表面活性物质由多种成份组成，DPPC(Dipalmitoylphosphatidylcholine)主要提供肺泡的稳定性，减小肺泡的表面张力，而PG(Phosphati5dylglycerol)则帮助表面活性物质在呼气和吸气时在肺泡内的重分布。在呼气时，表面活性物质呈二聚体，其亲水区向外，疏水区相互重叠在一起，这时表面活性物质功能下降，肺泡张力增加形成肺泡回缩力；而在吸气时，聚集的二聚体表面活性物质重新变成单聚体，其疏水区吸附于肺泡细胞的表面，亲水区面向肺泡的气相，以减小肺泡的表面张力，有利于肺泡表面积的增加，扩大气体交换面积。
表面活性物质在二型细胞的细胞浆内合成，而蛋白质则在粗面内质网进行合成，经高尔基体糖基化加工后，和表面活性物质相连接，形成Lamellars氏小体，与肺泡膜融合分泌入肺泡，表面活性物质内的蛋白一般被巨噬细胞吸收，磷脂又可被重吸收入二型细胞形成磷脂合成的再循环。肺泡表面活性物质平均5-10小时更新代谢一次，形成一次循环。
肺表面活性物质中的蛋白质有着各种不同的功能，SP-A是亲水性蛋白，根据其糖基化的程度，分子量从28-30KD不等。其功能是在钙的存在下结合DPPC，聚集成脂质小体，同时还具有抑制二型细胞分泌Lamellar小体，增加摄入DPPC的作用。最新发现证明SP-A有调理素的作用，帮助巨噬细胞吞噬侵入肺泡的细菌。SP-B是疏水蛋白，有79个氨基酸组成的多肽，SP-B可由二型细胞和支气管上皮细胞产生，最初产生的SP-B是40KD的蛋白质，然后经酶切修饰去除20-23个氨基酸的信号肽，N段的176个氨基酸及C端的106-107个氨基酸形成SP-B，但目前对其功能还不太清楚。SP-C是疏水性的多肽，由二型细胞产生，经翻译后修饰从21KD的前体蛋白形成4KD含23个氨基酸的多肽，其疏水性可和表面活性物质的疏水区的脂质相结合，将表面活性物质连接在一起使其能在肺泡表面均相分布。SP-D和SP-A相类似，是一个糖基化的亲水性蛋白，大小约43KD，可发挥调理，抗感染的作用。
早产新生儿由于肺泡II型细胞发育不全，肺泡表面活性物质产生不足，可引起呼吸困难，危及生命，死亡率较高。成人呼吸窘迫症往往是继发于许多严重疾病后的并发症，如严重感染，外伤，外科手术等，一旦发现病人有进行性呼吸困难，缺氧和肺水肿，检查往往发现这些病人伴有表面活性物质减少，采用减低肺表面张力的措施可改善病人的症状。
目前治疗用的肺表面活性物质主要有人工合成的和动物源性的表面活性物质及从胎儿羊水中分离的表面活性物质。在这三种表面活性物质中，人工合成的由于不含有表面活性蛋白，其效果不理想，而且成本太高；而来自猪或牛的动物源性的表面活性物质含有表面活性物质蛋白SP-B和SP-C，其治疗效果较好。
1980年日本人首次用牛肺PS治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)取得成功，以后美、欧、日本等国相继采用多种来源的PS制剂治疗该病，取得肯定疗效，迄今已经超过万例的临床试用，使NRDS病死亡率从原来的50-70％降至10-20％。美国学者将八十年代美国新生儿死亡率的下降归功于PS的临床应用。此外，成人型呼吸窘迫综合症(ARDS)、重型肺炎、肺出血、哮喘等急慢性肺病也有PS缺乏，用外源性PS治疗也有一定疗效，因此PS具有广阔的临床应用前景。
我国目前对NRDS和ARDS尚无特效治疗方法，病死率均在50-70％以上，严重影响我国优生优育工作及NRDS和ARDS的抢救，临床医师迫切需要肺表面活性物质制剂。国外PS制剂价格昂贵，治疗一个NRDS患儿需1000多美元，治疗一个ARDS病人则需数千美元，因此靠进口PS病家无法承受。
此外目前市场上现有的PS制剂为混悬剂，给产品的储存、运输带来不便，且水的存在使产品的稳定性受到影响。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有制剂的缺陷，采用从来源丰富的猪肺中提取的表面活性物质制成质量稳定、使用、储存方便的冻干粉制剂。
本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉是由下述百分比配方组成的溶液冻干后获得的制剂配方5～10％w/v猪肺表面活性物质2～5％v/v浓度为5％的聚山梨酯8085～93％v/v浓度为0.9％氯化钠注射液本发明所述的猪肺表面活性物质是采用国际上通用的磷脂经典制备方法从猪肺中提取的一种磷脂蛋白复合物。所述制剂中总磷脂含量为56-75％，最底表面张力γmin＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％。
由于本发明制剂使用时需制成混悬液经气管插管注入肺内，因此处方中加入少量聚山梨酯80可保持混悬液粒子均匀分散。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备方法。
本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备包括下列步骤1.猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒(FMDV)和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆。
(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液低温离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在低温条件下离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质；2.冻干粉制剂的制备按处方量称取猪肺表面活性物质，加入0.9％氯化钠注射液，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯80，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至总量，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
产品经薄层层析与对照标准品卵磷脂比较所显斑点一致，最低表面张力γmin＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％之间，总磷脂大于56.0％。
本发明所要解决的再一技术问题是公开上述猪肺表面活性物质冻干粉制剂在制备治疗新生儿及成人呼吸窘迫综合症药物中的应用，特别适用于制备治疗非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症药物中的应用。
非典型肺炎在国际上称为严重急性呼吸道综合症(Severe acuterespiratory syndrome，简称SARS)。根据中华人民共和国卫生部发表的非典型肺炎病例的临床诊断标准(试行)，非典的症状与体征为“有发热(＞38℃)和下列一项或一项以上；咳嗽，呼吸加速，气促，呼吸窘迫综合症，肺部罗音，肺实变体症”。这个标准也是符合世界卫生组织(WHO)所发表的“非典”标准。重症“非典”主要表现为呼吸窘迫症，临床表现为肺泡水肿，呼吸困难。根据我国“非典”病人的临床特点，病毒感染后导致急性肺损伤，多数重症病人发生急性呼吸窘迫综合症(ARDS)，出现进行性呼吸困难，而导致死亡，实际上抢救“非典”病人关键是如何治疗ARDS。如患者能渡过ARDS，病死率就会大为降低。
“非典”的冠状病毒就是肺部急性感染的一种，它可降低肺泡细胞表面活性物质，引起肺泡间质水肿和呼吸困难，导致血氧水平降低，肺的呼吸功能丧失等一系列的严重后果。
现在的临床研究表明，“非典”死亡的原因主要是发生呼吸窘迫综合症引起的呼吸功能衰竭。病毒损伤了肺胞细胞和其产生表面活性物质的功能，肺泡内充满了水分，肺泡不再有呼吸功能。肺表面活性物质的替代疗法可以适用于非典型肺炎的治疗。在卫生部所发表的非典型肺炎病例或疑似病例的推荐治疗方案和出院诊断参考标准(试行)中，对重症病人的处理和治疗目前所采取的方法主要是使用呼吸机帮助患者呼吸。在国外有临床研究表明，使用肺表面活性物质可使肺泡氧分压升高，肺泡和动脉血氧分压增加，减轻二氧化碳的储留，及减低需氧量和不再使用辅助通气装置。由于不使用辅助通气装置，减少了由辅助通气装置引起的继发性肺损失，如呼吸道出血，气胸等疾病。因此，将肺表面活性物质物替代疗法应用于“非典”的治疗不仅可改善病人的呼吸功能，降低死亡率，还可以减少由于病人使用呼吸机而出现的多种“非典”病毒交叉感染，同时又可为国家节约购买进口呼吸机的外汇。
用本发明猪肺表面活性物质冻干粉制剂进行急性毒性试验及药效试验1.急性毒性试验小鼠口服灌胃猪肺表面活性物质，LD50大于5g/kg，小鼠经腹腔注射，LD50大于3g/kg。
2.药效学试验以胎龄27天早产兔作NRDS模型。用猪肺表面活性物质经气管插管注入肺内，150mg/kg，给药一次，结果治疗组存活时间延长。用生理盐水给成年兔肺灌洗，经7次灌洗，使肺内PS减少86.7％，致使成年兔发生ARDS表现，然后用猪肺表面活性物质治疗，经气管插管注入肺内，分3个剂量组100、150和200mg/kg，观察8小时，结果治疗组呼吸困难改善，PaO2升高，PaCO2下降，酸中毒纠正，动态肺顺应性和肺病理变化均明显改善。
上述结果表明，本发明制剂安全，毒性低，对早产兔NRDS模型能显著延长存活时间，改善肺静态顺应性；对成年兔ARDS模型显示能快速而显著地改善缺氧、高碳酸血症和酸中毒，改善肺动态顺应性两个模型均显示能减轻肺病理变化，结果与文献报道一致。
用本发明猪肺表面活性物质冻干粉制剂进行稳定性试验，按不同贮存条件进行考察。
一、影响因素试验1.高温试验40℃恒温箱中取本品，置40℃恒温箱中，放置5天、10天后，取样分析测定，结果如下
2.高湿度试验温度25℃，相对湿度75％取本品置相对湿度为75％的密闭器皿中，温度25℃的条件下，放置5天、10天后，取样分析测定，结果如下
3.强光照射试验取本品，置以4200Lux光照度下于5天、10天后，取样分析测定，结果如下
二、加速试验温度25℃，相对湿度60％取本品三个批号，置相对湿度为60％的密闭器皿中，温度25℃的条件下，放置1、2、3、6个月后，取样分析测定，结果如下
三、长期试验(2-8℃)取本品三个批号，置于2-8℃冰箱中，放置3、6、9、12、24个月后，取样分析测定，结果如下
上述稳定性试验显示，本发明产品对热不稳定除高温试验40℃外观颜色加深外，未见有其它变化。本品在2-8℃条件下保存，二年内使用稳定。
本发明采用冷冻干燥法制成的猪肺表面活性物质冻干制剂较现有的混悬剂有下述优点1.产品中含有大量磷脂蛋白，因无水可避免环境温度的变化而受热分解变质。
2.产品质地疏松加水后迅速溶解恢复药液原有的特性。
3.本品不易氧化，有利于长期储存。
4.用冷冻干燥法制成的产品中微粒物质比用其他方法生产少，污染机会相对减少。
具体实施例方式
实施例11.猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺100kg，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒(FMDV)和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆。
(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水1000ml/kg搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液4℃离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在4℃条件下，离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质。
2.冻干粉制剂的制备称取猪肺表面活性物质75g，加入0.9％氯化钠注射液500ml，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯8036ml，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至1000ml，过滤，分装，冷冻干燥，即得500瓶，每瓶2g，总磷脂含量≥56.0％，最底表面张力＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％。
实施例2 冻干粉制剂的制备配方猪肺表面活性物质 80g浓度为5％的聚山梨酯80 39ml浓度为0.9％氯化钠注射液1000ml制备方法同实施例1。
权利要求
1.一种猪肺表面活性物质冻干粉制剂，其特征在于该制剂是由下述百分比配方组成的溶液冻干后获得的制剂配方5～10％w/v猪肺表面活性物质2～5％v/v浓度为5％的聚山梨酯8085～93％v/v浓度为0.9％氯化钠注射液
2.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂，其特征在于所述的制剂总磷脂含量为56-75％，蛋白质含量在0.15-2.5％。
3.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备方法，其特征在于所述的冻干粉制剂的制备包括下列步骤1)猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆；(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液低温离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在低温条件下离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质；2)冻干粉制剂的制备按处方量称取猪肺表面活性物质，加入0.9％氯化钠注射液，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯80，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至总量，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂在制备治疗新生儿及成人呼吸窘迫症药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于其中所述的药物可用于非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症的治疗。
全文摘要
本发明涉及猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用。本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉是由5～10％猪肺表面活性物质、2～5％聚山梨酯80和85～93％氯化钠注射液组成的溶液冻干后获得的制剂。该制剂原料来源丰富，质量稳定，使用、储存方便。适用于新生儿及成人呼吸窘迫综合症，特别适用于非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症。
文档编号A61K35/42GK1579421SQ0314206
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月5日 优先权日2003年8月5日
发明者严伟民, 朱泽龙, 刘德林, 戴振, 张菊红 申请人:上海复旦复华药业有限公司
技术领域：
本发明涉及药物制剂领域。具体涉及猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用。
背景技术：
肺表面活性物质(Pulmonary surfactant，PS)是维持正常肺功能不可缺少的物质。肺表面活性物质由多种成份组成，DPPC(Dipalmitoylphosphatidylcholine)主要提供肺泡的稳定性，减小肺泡的表面张力，而PG(Phosphati5dylglycerol)则帮助表面活性物质在呼气和吸气时在肺泡内的重分布。在呼气时，表面活性物质呈二聚体，其亲水区向外，疏水区相互重叠在一起，这时表面活性物质功能下降，肺泡张力增加形成肺泡回缩力；而在吸气时，聚集的二聚体表面活性物质重新变成单聚体，其疏水区吸附于肺泡细胞的表面，亲水区面向肺泡的气相，以减小肺泡的表面张力，有利于肺泡表面积的增加，扩大气体交换面积。
表面活性物质在二型细胞的细胞浆内合成，而蛋白质则在粗面内质网进行合成，经高尔基体糖基化加工后，和表面活性物质相连接，形成Lamellars氏小体，与肺泡膜融合分泌入肺泡，表面活性物质内的蛋白一般被巨噬细胞吸收，磷脂又可被重吸收入二型细胞形成磷脂合成的再循环。肺泡表面活性物质平均5-10小时更新代谢一次，形成一次循环。
肺表面活性物质中的蛋白质有着各种不同的功能，SP-A是亲水性蛋白，根据其糖基化的程度，分子量从28-30KD不等。其功能是在钙的存在下结合DPPC，聚集成脂质小体，同时还具有抑制二型细胞分泌Lamellar小体，增加摄入DPPC的作用。最新发现证明SP-A有调理素的作用，帮助巨噬细胞吞噬侵入肺泡的细菌。SP-B是疏水蛋白，有79个氨基酸组成的多肽，SP-B可由二型细胞和支气管上皮细胞产生，最初产生的SP-B是40KD的蛋白质，然后经酶切修饰去除20-23个氨基酸的信号肽，N段的176个氨基酸及C端的106-107个氨基酸形成SP-B，但目前对其功能还不太清楚。SP-C是疏水性的多肽，由二型细胞产生，经翻译后修饰从21KD的前体蛋白形成4KD含23个氨基酸的多肽，其疏水性可和表面活性物质的疏水区的脂质相结合，将表面活性物质连接在一起使其能在肺泡表面均相分布。SP-D和SP-A相类似，是一个糖基化的亲水性蛋白，大小约43KD，可发挥调理，抗感染的作用。
早产新生儿由于肺泡II型细胞发育不全，肺泡表面活性物质产生不足，可引起呼吸困难，危及生命，死亡率较高。成人呼吸窘迫症往往是继发于许多严重疾病后的并发症，如严重感染，外伤，外科手术等，一旦发现病人有进行性呼吸困难，缺氧和肺水肿，检查往往发现这些病人伴有表面活性物质减少，采用减低肺表面张力的措施可改善病人的症状。
目前治疗用的肺表面活性物质主要有人工合成的和动物源性的表面活性物质及从胎儿羊水中分离的表面活性物质。在这三种表面活性物质中，人工合成的由于不含有表面活性蛋白，其效果不理想，而且成本太高；而来自猪或牛的动物源性的表面活性物质含有表面活性物质蛋白SP-B和SP-C，其治疗效果较好。
1980年日本人首次用牛肺PS治疗新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)取得成功，以后美、欧、日本等国相继采用多种来源的PS制剂治疗该病，取得肯定疗效，迄今已经超过万例的临床试用，使NRDS病死亡率从原来的50-70％降至10-20％。美国学者将八十年代美国新生儿死亡率的下降归功于PS的临床应用。此外，成人型呼吸窘迫综合症(ARDS)、重型肺炎、肺出血、哮喘等急慢性肺病也有PS缺乏，用外源性PS治疗也有一定疗效，因此PS具有广阔的临床应用前景。
我国目前对NRDS和ARDS尚无特效治疗方法，病死率均在50-70％以上，严重影响我国优生优育工作及NRDS和ARDS的抢救，临床医师迫切需要肺表面活性物质制剂。国外PS制剂价格昂贵，治疗一个NRDS患儿需1000多美元，治疗一个ARDS病人则需数千美元，因此靠进口PS病家无法承受。
此外目前市场上现有的PS制剂为混悬剂，给产品的储存、运输带来不便，且水的存在使产品的稳定性受到影响。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有制剂的缺陷，采用从来源丰富的猪肺中提取的表面活性物质制成质量稳定、使用、储存方便的冻干粉制剂。
本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉是由下述百分比配方组成的溶液冻干后获得的制剂配方5～10％w/v猪肺表面活性物质2～5％v/v浓度为5％的聚山梨酯8085～93％v/v浓度为0.9％氯化钠注射液本发明所述的猪肺表面活性物质是采用国际上通用的磷脂经典制备方法从猪肺中提取的一种磷脂蛋白复合物。所述制剂中总磷脂含量为56-75％，最底表面张力γmin＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％。
由于本发明制剂使用时需制成混悬液经气管插管注入肺内，因此处方中加入少量聚山梨酯80可保持混悬液粒子均匀分散。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备方法。
本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备包括下列步骤1.猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒(FMDV)和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆。
(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液低温离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在低温条件下离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质；2.冻干粉制剂的制备按处方量称取猪肺表面活性物质，加入0.9％氯化钠注射液，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯80，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至总量，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
产品经薄层层析与对照标准品卵磷脂比较所显斑点一致，最低表面张力γmin＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％之间，总磷脂大于56.0％。
本发明所要解决的再一技术问题是公开上述猪肺表面活性物质冻干粉制剂在制备治疗新生儿及成人呼吸窘迫综合症药物中的应用，特别适用于制备治疗非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症药物中的应用。
非典型肺炎在国际上称为严重急性呼吸道综合症(Severe acuterespiratory syndrome，简称SARS)。根据中华人民共和国卫生部发表的非典型肺炎病例的临床诊断标准(试行)，非典的症状与体征为“有发热(＞38℃)和下列一项或一项以上；咳嗽，呼吸加速，气促，呼吸窘迫综合症，肺部罗音，肺实变体症”。这个标准也是符合世界卫生组织(WHO)所发表的“非典”标准。重症“非典”主要表现为呼吸窘迫症，临床表现为肺泡水肿，呼吸困难。根据我国“非典”病人的临床特点，病毒感染后导致急性肺损伤，多数重症病人发生急性呼吸窘迫综合症(ARDS)，出现进行性呼吸困难，而导致死亡，实际上抢救“非典”病人关键是如何治疗ARDS。如患者能渡过ARDS，病死率就会大为降低。
“非典”的冠状病毒就是肺部急性感染的一种，它可降低肺泡细胞表面活性物质，引起肺泡间质水肿和呼吸困难，导致血氧水平降低，肺的呼吸功能丧失等一系列的严重后果。
现在的临床研究表明，“非典”死亡的原因主要是发生呼吸窘迫综合症引起的呼吸功能衰竭。病毒损伤了肺胞细胞和其产生表面活性物质的功能，肺泡内充满了水分，肺泡不再有呼吸功能。肺表面活性物质的替代疗法可以适用于非典型肺炎的治疗。在卫生部所发表的非典型肺炎病例或疑似病例的推荐治疗方案和出院诊断参考标准(试行)中，对重症病人的处理和治疗目前所采取的方法主要是使用呼吸机帮助患者呼吸。在国外有临床研究表明，使用肺表面活性物质可使肺泡氧分压升高，肺泡和动脉血氧分压增加，减轻二氧化碳的储留，及减低需氧量和不再使用辅助通气装置。由于不使用辅助通气装置，减少了由辅助通气装置引起的继发性肺损失，如呼吸道出血，气胸等疾病。因此，将肺表面活性物质物替代疗法应用于“非典”的治疗不仅可改善病人的呼吸功能，降低死亡率，还可以减少由于病人使用呼吸机而出现的多种“非典”病毒交叉感染，同时又可为国家节约购买进口呼吸机的外汇。
用本发明猪肺表面活性物质冻干粉制剂进行急性毒性试验及药效试验1.急性毒性试验小鼠口服灌胃猪肺表面活性物质，LD50大于5g/kg，小鼠经腹腔注射，LD50大于3g/kg。
2.药效学试验以胎龄27天早产兔作NRDS模型。用猪肺表面活性物质经气管插管注入肺内，150mg/kg，给药一次，结果治疗组存活时间延长。用生理盐水给成年兔肺灌洗，经7次灌洗，使肺内PS减少86.7％，致使成年兔发生ARDS表现，然后用猪肺表面活性物质治疗，经气管插管注入肺内，分3个剂量组100、150和200mg/kg，观察8小时，结果治疗组呼吸困难改善，PaO2升高，PaCO2下降，酸中毒纠正，动态肺顺应性和肺病理变化均明显改善。
上述结果表明，本发明制剂安全，毒性低，对早产兔NRDS模型能显著延长存活时间，改善肺静态顺应性；对成年兔ARDS模型显示能快速而显著地改善缺氧、高碳酸血症和酸中毒，改善肺动态顺应性两个模型均显示能减轻肺病理变化，结果与文献报道一致。
用本发明猪肺表面活性物质冻干粉制剂进行稳定性试验，按不同贮存条件进行考察。
一、影响因素试验1.高温试验40℃恒温箱中取本品，置40℃恒温箱中，放置5天、10天后，取样分析测定，结果如下
2.高湿度试验温度25℃，相对湿度75％取本品置相对湿度为75％的密闭器皿中，温度25℃的条件下，放置5天、10天后，取样分析测定，结果如下
3.强光照射试验取本品，置以4200Lux光照度下于5天、10天后，取样分析测定，结果如下
二、加速试验温度25℃，相对湿度60％取本品三个批号，置相对湿度为60％的密闭器皿中，温度25℃的条件下，放置1、2、3、6个月后，取样分析测定，结果如下
三、长期试验(2-8℃)取本品三个批号，置于2-8℃冰箱中，放置3、6、9、12、24个月后，取样分析测定，结果如下
上述稳定性试验显示，本发明产品对热不稳定除高温试验40℃外观颜色加深外，未见有其它变化。本品在2-8℃条件下保存，二年内使用稳定。
本发明采用冷冻干燥法制成的猪肺表面活性物质冻干制剂较现有的混悬剂有下述优点1.产品中含有大量磷脂蛋白，因无水可避免环境温度的变化而受热分解变质。
2.产品质地疏松加水后迅速溶解恢复药液原有的特性。
3.本品不易氧化，有利于长期储存。
4.用冷冻干燥法制成的产品中微粒物质比用其他方法生产少，污染机会相对减少。
具体实施例方式
实施例11.猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺100kg，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒(FMDV)和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆。
(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水1000ml/kg搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液4℃离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在4℃条件下，离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质。
2.冻干粉制剂的制备称取猪肺表面活性物质75g，加入0.9％氯化钠注射液500ml，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯8036ml，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至1000ml，过滤，分装，冷冻干燥，即得500瓶，每瓶2g，总磷脂含量≥56.0％，最底表面张力＜10mN/m，蛋白质含量在0.15-2.5％。
实施例2 冻干粉制剂的制备配方猪肺表面活性物质 80g浓度为5％的聚山梨酯80 39ml浓度为0.9％氯化钠注射液1000ml制备方法同实施例1。
权利要求
1.一种猪肺表面活性物质冻干粉制剂，其特征在于该制剂是由下述百分比配方组成的溶液冻干后获得的制剂配方5～10％w/v猪肺表面活性物质2～5％v/v浓度为5％的聚山梨酯8085～93％v/v浓度为0.9％氯化钠注射液
2.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂，其特征在于所述的制剂总磷脂含量为56-75％，蛋白质含量在0.15-2.5％。
3.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂的制备方法，其特征在于所述的冻干粉制剂的制备包括下列步骤1)猪肺表面活性物质的提取(1)原料处理取经检疫的新鲜猪肺，用清水冲洗，去除表面污物，切成小块，抽样复检猪口蹄疫病毒和猪布氏杆菌，将切块的猪肺用电动绞肉机绞碎，再用粉碎机粉碎制成匀浆；(2)提取将猪肺匀浆加生理盐水搅拌均匀，经10目筛网过滤去除组织杂质。滤液低温离心10分钟，弃去沉淀，取上清液，再在低温条件下离心60分钟，得肉红色沉淀，将该沉淀用生理盐水混悬，同法离心洗涤3次，得浅红色沉淀，此即含磷脂蛋白的猪肺表面活性物质；2)冻干粉制剂的制备按处方量称取猪肺表面活性物质，加入0.9％氯化钠注射液，高速粉碎混悬液至乳白色，加入聚山梨酯80，搅匀，高压灭菌后，再加0.9％氯化钠注射液，超声波粉碎，用氯化钠注射液稀释至总量，过滤，分装，冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求1所述的猪肺表面活性物质冻干粉制剂在制备治疗新生儿及成人呼吸窘迫症药物中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于其中所述的药物可用于非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症的治疗。
全文摘要
本发明涉及猪肺表面活性物质冻干粉及制备方法和应用。本发明公开的猪肺表面活性物质冻干粉是由5～10％猪肺表面活性物质、2～5％聚山梨酯80和85～93％氯化钠注射液组成的溶液冻干后获得的制剂。该制剂原料来源丰富，质量稳定，使用、储存方便。适用于新生儿及成人呼吸窘迫综合症，特别适用于非典型肺炎引起的呼吸窘迫综合症。
文档编号A61K35/42GK1579421SQ0314206
公开日2005年2月16日 申请日期2003年8月5日 优先权日2003年8月5日
发明者严伟民, 朱泽龙, 刘德林, 戴振, 张菊红 申请人:上海复旦复华药业有限公司
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