大豆异黄酮软胶囊及其制备工艺的制作方法
专利名称：大豆异黄酮软胶囊及其制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及保健品或药品及其生产方法，是一种大豆异黄酮软胶囊及其制备工艺，特别用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生、抗衰老。
背景技术：
大豆异黄酮是一类具有广泛营养学价值，健康保护和治疗学意义地非固醇类物质。它由金雀异黄素、大豆苷元、金雀异黄苷、大豆苷、染料木素等组成。由于它能与雌激素受体结合，具有雌激素样作用，故称之为植物雌激素。大豆异黄酮的生物作用近来受到人们的普遍关注，对体内雌激素水平具有双向调节作用，对于低雌激素水平者，它表现为弱的雌激素样作用，有望用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；对于高雌激素水平者，大豆异黄酮表现抗雌激素样作用，有望用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；它的抗氧化作用，可延缓老年通行性疾病的发生，预防肿瘤放化疗引起的毒副作用(其中一些被认为和引起过氧化损伤有关)。国外已有专利报道，利用混合异黄酮作为健康食品，用于降低胆固醇，预防或治疗经前综合征，绝经后的一些症状及癌症的预防。大豆异黄酮除具有上述作用外，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生、抗真菌，从而可抑制真菌活性的功能。最近，日本科学家正在研究通过大豆异黄酮的植物雌激素功效，改善妇女皮肤，增强美容效果；同时开始研究大豆异黄酮对糖尿病及其它并发症、肾脏病、牙周病等疾病的预防和治疗功效。
发明内容
本发明提供了一种大豆异黄酮软胶囊，其特别用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，其质量稳定，安全，使用方便。本发明还提供了一种大豆异黄酮软胶囊制备工艺。
本发明的技术方案之一是这样来实现的一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
上述囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、25～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0.1～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
上述稀释剂为花生油、豆油、红花油、沙棘油、茶油、色拉油、聚乙二醇400、玉米油中的一种或一种以上。
上述抗氧剂为茶多酚、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)、二丁基羟基甲苯(BHT)中的一种或一种以上。
上述囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上。
上述维生素是维生素A、维生素C、维生素D、维生素E中的一种或一种以上。
上述囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
上述增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上。
上述防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上。
上述遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上。
上述色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上。
上述矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
本发明的技术方案之二是这样来实现的上述大豆异黄酮软胶囊的制备工艺，其包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其中
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
本发明大豆异黄酮软胶囊，产品质量稳定，相对其它剂型其生物利用度更高、吸收更好，在临床剂量条件下是安全的，具有弱的雌激素样作用，能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；同时，具有一定的抗衰老活性，还可用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；其抗氧化作用，可延缓老年通行性疾病的发生，预防肿瘤放化疗引起的毒副作用，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生。
具体实施例方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施方式。
实施例1，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为35％，甘油为18％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，水为46.92％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为10％，碳酸钙为10％，聚乙二醇400为79.92％，特丁基对苯二酚为0.08％。
实施例2，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为45％，甘油为22％，对羟基苯甲酸乙酯为0.11％，二氧化钛为1％，柠檬黄为0.35％，乙基香兰醛为0.07％，水为31.47％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为50％，维生素A为1％，维生素C为3％，维生素D为0.9％，维生素E为2％，茶油为35％，茶多酚为0.1％，大豆磷脂为5％，聚乙二醇4000为3％。
实施例3，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为40％，甘油为12％，山梨醇为8％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，对羟基苯甲酸丙酯为0.02％，硫酸钡为0.5％，苋菜红为0.1％，香精油为0.05％，水为39.77％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为30％，碳酸钙为10％，维生素D为1％，维生素E为6％，红花油为46.87％，特丁基对苯二酚为0.1％，二丁基羟基甲苯为0.03％，蜂蜡为4％，吐温-80为3％。
实施例4，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为42％，山梨醇为19％，对羟基苯甲酸乙酯为0.09％，氧化铁为0.68％，可可棕为0.28％，蔗糖为0.06％，水为37.89％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为15％，碳酸钙为35％，维生素D为1.5％，豆油为35.42％，二丁基羟基甲苯为0.08％，羊脂为5％，大豆磷脂为8％。
实施例5，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为39％，甘油为20％，对羟基苯甲酸丁酯为0.1％，沉降碳酸钙为0.78％，胭脂红为0.12％，香精油为0.01％，水为39.99％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为30％，维生素E为12％，玉米油为48.5％，大豆磷脂为2.5％，甲基纤维素为4％，聚乙二醇单硬脂酸脂为3％。
实施例6，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为40％，甘油为18％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，对羟基苯甲酸丙酯为0.02％，二氧化钛为0.8％，炭黑为0.28％，水为40.82％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为34％，维生素A为1.2％，维生素C为5.8％，维生素D为1.5％，沙棘油为51.96％，没食子酸丙酯为0.14％，蜂蜡为5.4％。
实施例7，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为45％，甘油为18％，对羟基苯甲酸乙酯为0.1％，硫酸钡为0.75％，果绿为0.2％，水为35.95％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为20％，碳酸钙为10％，维生素C为5.6％，红花油为17.52％，豆油为16％，色拉油为28％，特丁基对苯二酚为0.08％，聚乙二醇单硬脂酸脂为2.8％。
实施例8，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为44％，甘油为20％，对羟基苯甲酸丁酯为0.08％，二氧化钛为0.65％，炭黑为0.18％，水为 35.09％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为25％，维生素A为1％，红花油为35％，茶油为26.38％，茶多酚为0.12％，乙基纤维素为2.5％。
上述实施例中的大豆异黄酮软胶囊可通过以下制备工艺得到该制备工艺包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其中
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50℃或60℃或70℃或80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30分钟或50分钟或70分钟或90分钟或110分钟或120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25℃或35℃或45℃或55℃或65℃或75℃或85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25℃或30℃或35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
下面对上述实施例所得产品即大豆异黄酮软胶囊进行药效学试验、毒理学实验和稳定性实验如下
一、药效学试验1、子宫增重试验
选取健康雌性NIH小鼠100只，体重为11～13g，随机分组后灌胃给药，给药量分别为6.25、12.5、25.0g/公斤体重(以大豆异黄酮计)，每日1次，连续14天，阳性药给予尼尔雌醇，给药量为1g/公斤体重，对照组给予等量大豆油。末次给药后第2天，小鼠称重，颈椎脱臼处死动物，剖取子宫，精密称重，计算子宫系数，比较各组的差异。结果见表1。表1结果可见，与空白组相比，大豆异黄酮提取物的大、中剂量和阳性对照药均能促进未成熟雌性小鼠子宫的发育，增重作用的差异有统计学意义(P＜0.05)，小剂量组增重作用不明显(P＞0.05)。
表1子宫增重试验
剂量 子宫重量 子宫系数
组别 N(只)
(g/Kg)(g)(X±SD)(g/10g)
空白对照组18 - 0.02284 0.0111±0.0037
尼尔雌醇 18 1.00 0.04187 0.0212±0.0050*
高剂量组 18 25.0 0.03215 0.0156±0.0061*
中剂量组 18 12.5 0.03571 0.0180±0.0048*
低剂量组 18 6.25 0.02944 0.0146±0.0028
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.012、脑功能试验
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后2h将小鼠放入跳台仪中，训练后将5只小鼠放入反应箱中，适应3分钟后通电，记录小鼠在跳台上的停留时间(潜伏期)和3分钟内跳下受刺激的次数(错误次数)。将大豆异黄酮提取物的大、中、小剂量和空白组相比，各组间差异采用统计方法进行检验。结果见表2。由表2可见，与空白组相比，该软胶囊具有增加小鼠脑功能的作用。
表2脑功能试验
剂量
组别N(只) 潜伏期(s) 错误次数(次)
(g/Kg)
空白对照组 15 - 49±18 5.20±2.57
试药高剂量组1525.0 79±28 3.00±1.33*
试药中剂量组1512.5 74±25 2.00±1.05*
试药低剂量组156.25 77±21 2.20±1.20*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.013、对小鼠免疫器官重量的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后6h拉颈处死小鼠，分别称取胸腺和脾脏的重量(用器官重量/10g体重表示)。结果见表3。由表3可见，与空白组相比，该软胶囊并不能显著增加免疫器官的重量。
表3对小鼠免疫器官重量的影响
剂量 胸腺重量 脾脏重量
组别 N(只)
(g/Kg) (mg/10g体重) (mg/10g体重)
对照组 15 -26.49±7.41 56.38±8.72
试药高剂量组 15 25.0 22.77±5.68 50.52±9.57
试药中剂量组 15 12.5 27.22±6.85 48.91±11.5
试药低剂量组 15 6.25 28.86±8.53 53.12±9.72
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.014、对小鼠耐常压缺氧能力的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后1h，将小鼠放于盛有10g钠石灰的125ml广口瓶中，密封。记录个小鼠在各缺氧条件下的存活时间。结果见表4。由表4可见，与空白组相比，该软胶囊可以增加小鼠的耐缺氧能力。
表4对小鼠耐常压缺氧能力的影响
组别N(只)剂量(g/kg) 存活时间(min)
空白对照组 15 - 35.15±2.42
试药高剂量组1525.0 38.55±2.81*
试药中剂量组1512.5 39.11±3.18*
试药低剂量组156.25 38.63±2.54*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.015、对小鼠游泳耐力的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后1h，将小鼠放入水深19cm和水温(29±1)℃的水中，使之不停的游泳。记录每只小鼠自放入水中至沉入水底死亡的时间即游泳时间，以此反映小鼠的游泳耐力。结果见表5。由表5可见，与空白组相比，该软胶囊可以增加小鼠的游泳耐力。
表5对小鼠游泳耐力的影响
组别 N(只) 剂量(g/Kg)游泳时间(min)
空白对照组15 - 160±53
试药高剂量组 1525.0 185±29
试药中剂量组 1512.5 217±57*
试药低剂量组 156.25 209±38*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
结论通过以上实验结果表明，子宫增重试验表明大豆异黄酮软胶囊具有弱的雌激素样作用，有可能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，而这恰恰是植物雌激素所具有的优点；跳台试验表明该软胶囊可改善实验动物的记忆力，具有一定抗衰老的功能；游泳试验与耐高温试验表明该软胶囊能延长小鼠的生存时间，提示该胶囊具有一定的抗衰老活性；但药效试验同时也表明该软胶囊不能增加免疫器官的重量，说明其对免疫系统的作用不显著。
二、毒理学实验1、剂量设计样品对人体最大推荐剂量为每日0.8g/60kg·bw，除急性经口毒性试验外，其他各项动物毒性试验均按人体推荐量的25、50、100倍即0.335、0.670、1.34g/60kg·bw给予。分别称取样品6.7、13.4、26.8g加葵花籽色拉油定容至100ml，配制成6.7％、13.4％、26.85％的油溶液，葵花籽色拉油作溶剂对照，各剂量组动物均按5ml/kg·bw等容积灌胃。2、急性经口毒性试验
选用ICR小白鼠20只，体重18-22g，Wistar大鼠20只，体重181-238g，雌雄各半。采用最大限量法，大、小鼠剂量均为10.0g/60kg·bw。去受试动物按10ml/kg·bw灌胃，动物灌胃后有轻度腹泻，无其他不良症状，观察2周，无一死亡。大、小鼠急性经口毒性LD50均大于10.0g/60kg·bw。3、微核试验
选用ICR小白鼠50只，体重25-30g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各剂量组均按5ml/kg·bw给予6.7％、13.4％、26.85％的油溶液等容积灌胃，阳性对照组(环磷酰胺)40mg/kg·bw两次腹腔注射。试验采用二次给样法，于末次给药后6h，按常规取材、制片、镜检，每只动物计数1000个骨髓嗜多染红细胞并计算其微核率，结果见表6。由表6可见，样品各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组相比，经泊松分布检验(P＞0.05)，差异无统计学意义，而阳性组与阴性组比较(P＜0.01)，差异有统计学意义，即样品微核试验结果为阴性。
表6微核试验结果
受检含微核
组别N(只) 微核率(‰)P值 PCE/NCE
PCE PCE
阴性对照 5 5×10004 0.8±1.30 0.90±0.10
低剂量组 5 5×10004 0.8±1.301.0000.86±0.16雌
中剂量组 5 5×10004 0.8±1.301.0000.96±0.34性
高剂量组 5 5×10006 1.2±1.300.5260.94±0.18
阳性对照 5 5×1000489.6±6.310.0000.99±0.13
阴性对照 5 5×10004 0.8±0.84 1.01±0.33
低剂量组 5 5×10005 1.0±1.410.7351.03±0.27雄
中剂量组 5 5×10005 1.0±0.710.7380.97±0.32性
高剂量组 5 5×10006 1.2±0.450.5260.92±0.18
阳性对照 5 5×10005210±4.67 0.0000.96±0.12
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.014、精子畸形试验
选用ICR雄性小鼠25只(25-33g)，随机分为5组，每组5只。各试验组剂量及阴性对照组均同于微核试验，阳性对照组给予环磷酰胺，按40mg/kg·bw腹腔注射。动物连续灌胃5天，与第一次灌胃后35天按常规取材、制片、镜检。每只动物计数1000个精子并计算其畸变率。结果见表7。
表7精子畸形试验
畸变精子数
组别 N(只)畸变率(％) P值
(个)
阴性对照 5 1312.62
低剂量组 5 1152.30 0.307
中剂量组 5 1442.88 0.432
高剂量组 5 1563.12 0.140
阳性对照 5 4909.80 0.000
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01由表7可见，样品各剂量组小鼠的精子畸形率与阴性对照组相比，经泊松分布检验(P＞0.05)，差异无统计学意义，而阳性组与阴性组比较(P＜0.01)，差异有统计学意义，即精子畸形试验结果为阴性。5、Ames试验5.1试验菌种组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102及大鼠肝匀浆均由中国预防医学科学院劳卫所分子毒理室提供，其生物学性状经鉴定合格。5.2阳性剂
-S9TA97、TA98均为2，4，7-三硝基芴酮(0.4μg/皿)；TA100为叠氮钠(1.5μg/皿)；TA102为丝裂霉素(1.0μg/皿)。
+S9TA97、TA98、TA100均为2，-氨基芴(20μg/皿)；TA102为1，8-二羟基蒽醌(50μg/皿)。5.3方法
采用标准平皿掺入法，在加与不加S9活化系统的情况下剂量以样品胶囊内容物计，设0.016、0.08、0.40、2.00、10.0mg/皿、自发回变、溶剂对照(葵花籽色拉油)及阳性对照8个组进行致突变试验。在实验条件和试验菌种完全相同的情况下重复做两次试验。结果见表8、9。
表8 Ames试验结果(一)
剂量(mg/皿) TA97 TA98 TA100TA102
自发回变-S9193±13.035±9.5 193±24.3 247±38.6
+S9209±6.2049.5±13.4 143±38.0 239±17.1
溶剂对照-S9190±11.547±11.6 168±42.3 273±19.0
+S9190±14.238±15.4 162±29.1 289±11.6
0.016 -S9184±17.642±8.00 172±17.9 278±19.0
+S9185±8.6042±13.3 161±30.8 289±11.6
0.08-S9176±12.945±14.8 181±11.5 284±18.9
+S9179±17.745±12.2 181±13.0 282±10.0
0.4 -S9194±9.1037±0.6 187±24.2 250±20.0
+S9207±7.2047±15.0 179±20.7 242±32.0
2.0 -S9204±14.544±5.9 187±23.6 248±13.0
+S9172±31.241±2.0 150±26.6 267±64.5
10.0-S9195±12.230±6.1 142±12.5 236±33.5
+S9158±49.537±12.1 170±30.9 267±64.5
阳性对照-S93723±466.5 3941±220.1 971±76.2 1022±123.1
+S91077±66.20 2954±487.0 4042±1157822±98.9
表9 Ames试验结果(二)
剂量(mg/皿) TA97 TA98TA100 TA102
自发回变 -S9181±25.038±14.0197±23.2274±21.1
+S9184±19.547±14.1160±20.2246±25.1
溶剂对照 -S9179±16.543±13.4179±47.6292±10.6
+S9190±14.645±10.7177±30.7278±18.7
0.016-S9180±13.641±16.8185±8.50288±16.6
+S9192±12.447±9.30186±7.50269±13.7
0.08 -S9173±24.945±13.3169±12.1282±30.3
+S9175±16.741±16.6156±12.5277±18.3
0.4 -S9190±14.740±14.9168±23.4285±11.1
+S9174±14.044±10.0174±33.6295±13.8
2.0 -S9184±9.1045±11.7163±20.7286±15.4
+S9181±13.139±15.4173±17.0270±16.4
10.0 -S9186±8.5 40±17.7183±8.50287±15.0
+S9179±20.543±15.0179±39.7289±19.7
阳性对照 -S93797±259.4 3869±273.4 978±58.71016±152.9
+S91051±56.0 2838±296.5 4051±1131 827±114.0
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01由表8、9可见，样品各剂量组回变菌落数均未超过菌种本身自发回变菌落数的两倍，而阳性组明显大于自发回变菌落数，表明样品Ames试验结果为阴性。6、30天喂养试验
选用Wistar大鼠80只，雄性体重66-94g，雌性体重66-95g，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。各剂量组均按5ml/kg·bw给予6.7％、13.4％、26.85％的油溶液等容积灌胃，溶剂对照组以等容积量的葵花籽油灌胃。每周称一次体重和剩食，计算其食物摄入量及食物利用率，连续喂养30天后禁食12-16h，摘除眼球取血，进行血液学、生化学检查，解剖取肝、肾、脾、睾丸等称重，计算脏体比，并对主要脏器进行病理组织学检查。试验数据采用《中国医学百科全书—医学统计学》统计软件包进行统计分析。6.1生长情况及食物利用率
生长情况见表10。食物利用率结果见表11。
表10各实验组动物体重增长情况(g)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表11各实验组动物食物利用率结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
由表10结果可见，各实验组与对照组比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。表11结果表明，各实验组与对照组比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。6.2血液学检查
血常规测定结果见表12。表12结果表明，各实验组与对照组大鼠的各项指标比较，经方差分析，差异无统计学意义(p＞0.05)。白细胞分类结果见表13。表13结果表明，各实验组与对照组大鼠的白细胞分类指标比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。
表12血常规测定结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表13白细胞分类结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.3生化检查
生化检查结果见表14、15。生化检测结果表明，除雄性大鼠低、中、高剂量组血糖值高于对照组，经方差分析组间差异有统计学意义(P＜0.05)，但各剂量组的血糖值与正常大鼠血糖值相比无统计学差异(P＞0.05，正常大鼠血糖值范围为3.75-8.19)。各实验组其余各项生化指标与对照组相比，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)
表14 生化检查结果(一)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表15生化检查结果(二)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.4脏体比结果
脏体比结果见表16。结果表明，各实验组的是主要脏体比与对照组相比，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。
表36各剂量组大鼠脏体比结果
组别N(只) 肝体比(％)肾体比(％) 脾体比(％) 睾体比(％)
对照组10 3.47±0.37 0.75±0.05 0.26±0.02 1.05±0.11雄 低剂量10 3.53±0.13 0.76±0.05 0.24±0.03 1.08±0.06性 中剂量10 3.52±0.20 0.77±0.05 0.24±0.03 1.12±0.10
高剂量10 3.51±0.18 0.78±0.04 0.24±0.02 1.08±0.06
对照组10 3.45±0.25 0.74±0.03 0.28±0.02雌 低剂量10 3.42±0.19 0.76±0.03 0.27±0.02性 中剂量10 3.33±0.12 0.76±0.03 0.26±0.02
高剂量10 3.46±0.34 0.73±0.04 0.25±0.04
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.5病理组织学检查
各组动物大体检查未见异常，肝、肾、脾、胃、肠、睾丸等脏器的病理组织学检查结果未见到与实验因素有关的病变。各组大鼠肝脏少部分胆管数量轻度增生，肝小叶周边带肝细胞浆内可将多个细小圆形空泡(脂肪浸润)，上述所见在程度和范围上组间无明显差异。
结论大豆异黄酮软胶囊对雌雄大小白鼠的急性经口LD50均大于10g/kg；微核试验、精子畸形试验和Ames实验结果均为阴性，无致突变作用；30天喂养试验结果表明，试验动物生长情况良好，血液学检查、生化检查、主要脏体比及组织病理学检查结果与对照组相比均无差异，说明在按以上试验剂量给予动物大豆异黄酮软胶囊，并未产生明显毒副作用。毒理实验结果表明大豆异黄酮软胶囊在临床剂量条件下是安全的。
三、稳定性实验
三批大豆异黄酮软胶囊供试样品，在30±2℃，相对湿度60％±5％条件下，在保存时间为零月、一月、二月、三月时分别抽样，做零月批次、一月批次、二月批次、三月批次的稳定性实验。实验结果表明大豆异黄酮、碳酸钙、各种维生素、酸价、过氧化值、羰基价、黄曲霉素B1、菌落总数、大肠杆菌、霉菌、酵母菌、致病菌均符合质量标准要求。
权利要求
1、一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其特征在于囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
2、根据权利要求1所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、25～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0.1～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
3、根据权利要求1或2所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于稀释剂为花生油、豆油、红花油、沙棘油、茶油、色拉油、聚乙二醇400、玉米油中的一种或一种以上；或/和，抗氧剂为茶多酚、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)、二丁基羟基甲苯(BHT)中的一种或一种以上；或/和，囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上；或/和，囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上；或/和，维生素是维生素A、维生素C、维生素D、维生素E中的一种或一种以上。
4、据权利要求1或2所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
5、根据权利要求3所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
6、根据权利要求4所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上；或/和，防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上；或/和，遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上；或/和，色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上；或/和，矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
7、根据权利要求5所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上；或/和，防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上；或/和，遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上；或/和，色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上；或/和，矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
8、一种根据权利要求1或2或5或6或7所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
9、一种根据权利要求3所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
10、一种根据权利要求4所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
全文摘要
一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂；其制备工艺包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制；其产品质量稳定，相对其它剂型其生物利用度更高、吸收更好，在临床剂量条件下是安全的，具有弱的雌激素样作用，能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；同时，具有一定的抗衰老活性，还可用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生。
文档编号A61P15/00GK1475213SQ0314551
公开日2004年2月18日 申请日期2003年6月26日 优先权日2003年6月26日
发明者高晓黎, 马桂芝, 冯崴 申请人:新疆特丰药业股份有限公司
技术领域：
本发明涉及保健品或药品及其生产方法，是一种大豆异黄酮软胶囊及其制备工艺，特别用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生、抗衰老。
背景技术：
大豆异黄酮是一类具有广泛营养学价值，健康保护和治疗学意义地非固醇类物质。它由金雀异黄素、大豆苷元、金雀异黄苷、大豆苷、染料木素等组成。由于它能与雌激素受体结合，具有雌激素样作用，故称之为植物雌激素。大豆异黄酮的生物作用近来受到人们的普遍关注，对体内雌激素水平具有双向调节作用，对于低雌激素水平者，它表现为弱的雌激素样作用，有望用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；对于高雌激素水平者，大豆异黄酮表现抗雌激素样作用，有望用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；它的抗氧化作用，可延缓老年通行性疾病的发生，预防肿瘤放化疗引起的毒副作用(其中一些被认为和引起过氧化损伤有关)。国外已有专利报道，利用混合异黄酮作为健康食品，用于降低胆固醇，预防或治疗经前综合征，绝经后的一些症状及癌症的预防。大豆异黄酮除具有上述作用外，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生、抗真菌，从而可抑制真菌活性的功能。最近，日本科学家正在研究通过大豆异黄酮的植物雌激素功效，改善妇女皮肤，增强美容效果；同时开始研究大豆异黄酮对糖尿病及其它并发症、肾脏病、牙周病等疾病的预防和治疗功效。
发明内容
本发明提供了一种大豆异黄酮软胶囊，其特别用于防治与妇女更年期后一些和激素低下有关的疾病和症状，其质量稳定，安全，使用方便。本发明还提供了一种大豆异黄酮软胶囊制备工艺。
本发明的技术方案之一是这样来实现的一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
上述囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、25～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0.1～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
上述稀释剂为花生油、豆油、红花油、沙棘油、茶油、色拉油、聚乙二醇400、玉米油中的一种或一种以上。
上述抗氧剂为茶多酚、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)、二丁基羟基甲苯(BHT)中的一种或一种以上。
上述囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上。
上述维生素是维生素A、维生素C、维生素D、维生素E中的一种或一种以上。
上述囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
上述增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上。
上述防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上。
上述遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上。
上述色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上。
上述矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
本发明的技术方案之二是这样来实现的上述大豆异黄酮软胶囊的制备工艺，其包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其中
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
本发明大豆异黄酮软胶囊，产品质量稳定，相对其它剂型其生物利用度更高、吸收更好，在临床剂量条件下是安全的，具有弱的雌激素样作用，能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；同时，具有一定的抗衰老活性，还可用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；其抗氧化作用，可延缓老年通行性疾病的发生，预防肿瘤放化疗引起的毒副作用，还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生。
具体实施例方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据上述本发明的技术方案和实际情况来确定具体的实施方式。
实施例1，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为35％，甘油为18％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，水为46.92％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为10％，碳酸钙为10％，聚乙二醇400为79.92％，特丁基对苯二酚为0.08％。
实施例2，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为45％，甘油为22％，对羟基苯甲酸乙酯为0.11％，二氧化钛为1％，柠檬黄为0.35％，乙基香兰醛为0.07％，水为31.47％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为50％，维生素A为1％，维生素C为3％，维生素D为0.9％，维生素E为2％，茶油为35％，茶多酚为0.1％，大豆磷脂为5％，聚乙二醇4000为3％。
实施例3，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳按重量百分比含有明胶为40％，甘油为12％，山梨醇为8％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，对羟基苯甲酸丙酯为0.02％，硫酸钡为0.5％，苋菜红为0.1％，香精油为0.05％，水为39.77％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为30％，碳酸钙为10％，维生素D为1％，维生素E为6％，红花油为46.87％，特丁基对苯二酚为0.1％，二丁基羟基甲苯为0.03％，蜂蜡为4％，吐温-80为3％。
实施例4，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为42％，山梨醇为19％，对羟基苯甲酸乙酯为0.09％，氧化铁为0.68％，可可棕为0.28％，蔗糖为0.06％，水为37.89％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为15％，碳酸钙为35％，维生素D为1.5％，豆油为35.42％，二丁基羟基甲苯为0.08％，羊脂为5％，大豆磷脂为8％。
实施例5，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为39％，甘油为20％，对羟基苯甲酸丁酯为0.1％，沉降碳酸钙为0.78％，胭脂红为0.12％，香精油为0.01％，水为39.99％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为30％，维生素E为12％，玉米油为48.5％，大豆磷脂为2.5％，甲基纤维素为4％，聚乙二醇单硬脂酸脂为3％。
实施例6，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为40％，甘油为18％，对羟基苯甲酸甲酯为0.08％，对羟基苯甲酸丙酯为0.02％，二氧化钛为0.8％，炭黑为0.28％，水为40.82％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为34％，维生素A为1.2％，维生素C为5.8％，维生素D为1.5％，沙棘油为51.96％，没食子酸丙酯为0.14％，蜂蜡为5.4％。
实施例7，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为45％，甘油为18％，对羟基苯甲酸乙酯为0.1％，硫酸钡为0.75％，果绿为0.2％，水为35.95％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为20％，碳酸钙为10％，维生素C为5.6％，红花油为17.52％，豆油为16％，色拉油为28％，特丁基对苯二酚为0.08％，聚乙二醇单硬脂酸脂为2.8％。
实施例8，该大豆异黄酮软胶囊的囊壳中按重量百分比含有明胶为44％，甘油为20％，对羟基苯甲酸丁酯为0.08％，二氧化钛为0.65％，炭黑为0.18％，水为 35.09％；该大豆异黄酮软胶囊的囊心物按原料重量百分比含有大豆异黄酮为25％，维生素A为1％，红花油为35％，茶油为26.38％，茶多酚为0.12％，乙基纤维素为2.5％。
上述实施例中的大豆异黄酮软胶囊可通过以下制备工艺得到该制备工艺包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其中
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50℃或60℃或70℃或80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30分钟或50分钟或70分钟或90分钟或110分钟或120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25℃或35℃或45℃或55℃或65℃或75℃或85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25℃或30℃或35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
下面对上述实施例所得产品即大豆异黄酮软胶囊进行药效学试验、毒理学实验和稳定性实验如下
一、药效学试验1、子宫增重试验
选取健康雌性NIH小鼠100只，体重为11～13g，随机分组后灌胃给药，给药量分别为6.25、12.5、25.0g/公斤体重(以大豆异黄酮计)，每日1次，连续14天，阳性药给予尼尔雌醇，给药量为1g/公斤体重，对照组给予等量大豆油。末次给药后第2天，小鼠称重，颈椎脱臼处死动物，剖取子宫，精密称重，计算子宫系数，比较各组的差异。结果见表1。表1结果可见，与空白组相比，大豆异黄酮提取物的大、中剂量和阳性对照药均能促进未成熟雌性小鼠子宫的发育，增重作用的差异有统计学意义(P＜0.05)，小剂量组增重作用不明显(P＞0.05)。
表1子宫增重试验
剂量 子宫重量 子宫系数
组别 N(只)
(g/Kg)(g)(X±SD)(g/10g)
空白对照组18 - 0.02284 0.0111±0.0037
尼尔雌醇 18 1.00 0.04187 0.0212±0.0050*
高剂量组 18 25.0 0.03215 0.0156±0.0061*
中剂量组 18 12.5 0.03571 0.0180±0.0048*
低剂量组 18 6.25 0.02944 0.0146±0.0028
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.012、脑功能试验
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后2h将小鼠放入跳台仪中，训练后将5只小鼠放入反应箱中，适应3分钟后通电，记录小鼠在跳台上的停留时间(潜伏期)和3分钟内跳下受刺激的次数(错误次数)。将大豆异黄酮提取物的大、中、小剂量和空白组相比，各组间差异采用统计方法进行检验。结果见表2。由表2可见，与空白组相比，该软胶囊具有增加小鼠脑功能的作用。
表2脑功能试验
剂量
组别N(只) 潜伏期(s) 错误次数(次)
(g/Kg)
空白对照组 15 - 49±18 5.20±2.57
试药高剂量组1525.0 79±28 3.00±1.33*
试药中剂量组1512.5 74±25 2.00±1.05*
试药低剂量组156.25 77±21 2.20±1.20*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.013、对小鼠免疫器官重量的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后6h拉颈处死小鼠，分别称取胸腺和脾脏的重量(用器官重量/10g体重表示)。结果见表3。由表3可见，与空白组相比，该软胶囊并不能显著增加免疫器官的重量。
表3对小鼠免疫器官重量的影响
剂量 胸腺重量 脾脏重量
组别 N(只)
(g/Kg) (mg/10g体重) (mg/10g体重)
对照组 15 -26.49±7.41 56.38±8.72
试药高剂量组 15 25.0 22.77±5.68 50.52±9.57
试药中剂量组 15 12.5 27.22±6.85 48.91±11.5
试药低剂量组 15 6.25 28.86±8.53 53.12±9.72
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.014、对小鼠耐常压缺氧能力的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后1h，将小鼠放于盛有10g钠石灰的125ml广口瓶中，密封。记录个小鼠在各缺氧条件下的存活时间。结果见表4。由表4可见，与空白组相比，该软胶囊可以增加小鼠的耐缺氧能力。
表4对小鼠耐常压缺氧能力的影响
组别N(只)剂量(g/kg) 存活时间(min)
空白对照组 15 - 35.15±2.42
试药高剂量组1525.0 38.55±2.81*
试药中剂量组1512.5 39.11±3.18*
试药低剂量组156.25 38.63±2.54*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.015、对小鼠游泳耐力的影响
选取健康小鼠60只，体重为19～21g，随机分组后按高、中、低剂量及空白对照灌胃给药，连续给药15天，末次给药后1h，将小鼠放入水深19cm和水温(29±1)℃的水中，使之不停的游泳。记录每只小鼠自放入水中至沉入水底死亡的时间即游泳时间，以此反映小鼠的游泳耐力。结果见表5。由表5可见，与空白组相比，该软胶囊可以增加小鼠的游泳耐力。
表5对小鼠游泳耐力的影响
组别 N(只) 剂量(g/Kg)游泳时间(min)
空白对照组15 - 160±53
试药高剂量组 1525.0 185±29
试药中剂量组 1512.5 217±57*
试药低剂量组 156.25 209±38*
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
结论通过以上实验结果表明，子宫增重试验表明大豆异黄酮软胶囊具有弱的雌激素样作用，有可能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，而这恰恰是植物雌激素所具有的优点；跳台试验表明该软胶囊可改善实验动物的记忆力，具有一定抗衰老的功能；游泳试验与耐高温试验表明该软胶囊能延长小鼠的生存时间，提示该胶囊具有一定的抗衰老活性；但药效试验同时也表明该软胶囊不能增加免疫器官的重量，说明其对免疫系统的作用不显著。
二、毒理学实验1、剂量设计样品对人体最大推荐剂量为每日0.8g/60kg·bw，除急性经口毒性试验外，其他各项动物毒性试验均按人体推荐量的25、50、100倍即0.335、0.670、1.34g/60kg·bw给予。分别称取样品6.7、13.4、26.8g加葵花籽色拉油定容至100ml，配制成6.7％、13.4％、26.85％的油溶液，葵花籽色拉油作溶剂对照，各剂量组动物均按5ml/kg·bw等容积灌胃。2、急性经口毒性试验
选用ICR小白鼠20只，体重18-22g，Wistar大鼠20只，体重181-238g，雌雄各半。采用最大限量法，大、小鼠剂量均为10.0g/60kg·bw。去受试动物按10ml/kg·bw灌胃，动物灌胃后有轻度腹泻，无其他不良症状，观察2周，无一死亡。大、小鼠急性经口毒性LD50均大于10.0g/60kg·bw。3、微核试验
选用ICR小白鼠50只，体重25-30g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各剂量组均按5ml/kg·bw给予6.7％、13.4％、26.85％的油溶液等容积灌胃，阳性对照组(环磷酰胺)40mg/kg·bw两次腹腔注射。试验采用二次给样法，于末次给药后6h，按常规取材、制片、镜检，每只动物计数1000个骨髓嗜多染红细胞并计算其微核率，结果见表6。由表6可见，样品各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组相比，经泊松分布检验(P＞0.05)，差异无统计学意义，而阳性组与阴性组比较(P＜0.01)，差异有统计学意义，即样品微核试验结果为阴性。
表6微核试验结果
受检含微核
组别N(只) 微核率(‰)P值 PCE/NCE
PCE PCE
阴性对照 5 5×10004 0.8±1.30 0.90±0.10
低剂量组 5 5×10004 0.8±1.301.0000.86±0.16雌
中剂量组 5 5×10004 0.8±1.301.0000.96±0.34性
高剂量组 5 5×10006 1.2±1.300.5260.94±0.18
阳性对照 5 5×1000489.6±6.310.0000.99±0.13
阴性对照 5 5×10004 0.8±0.84 1.01±0.33
低剂量组 5 5×10005 1.0±1.410.7351.03±0.27雄
中剂量组 5 5×10005 1.0±0.710.7380.97±0.32性
高剂量组 5 5×10006 1.2±0.450.5260.92±0.18
阳性对照 5 5×10005210±4.67 0.0000.96±0.12
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.014、精子畸形试验
选用ICR雄性小鼠25只(25-33g)，随机分为5组，每组5只。各试验组剂量及阴性对照组均同于微核试验，阳性对照组给予环磷酰胺，按40mg/kg·bw腹腔注射。动物连续灌胃5天，与第一次灌胃后35天按常规取材、制片、镜检。每只动物计数1000个精子并计算其畸变率。结果见表7。
表7精子畸形试验
畸变精子数
组别 N(只)畸变率(％) P值
(个)
阴性对照 5 1312.62
低剂量组 5 1152.30 0.307
中剂量组 5 1442.88 0.432
高剂量组 5 1563.12 0.140
阳性对照 5 4909.80 0.000
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01由表7可见，样品各剂量组小鼠的精子畸形率与阴性对照组相比，经泊松分布检验(P＞0.05)，差异无统计学意义，而阳性组与阴性组比较(P＜0.01)，差异有统计学意义，即精子畸形试验结果为阴性。5、Ames试验5.1试验菌种组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102及大鼠肝匀浆均由中国预防医学科学院劳卫所分子毒理室提供，其生物学性状经鉴定合格。5.2阳性剂
-S9TA97、TA98均为2，4，7-三硝基芴酮(0.4μg/皿)；TA100为叠氮钠(1.5μg/皿)；TA102为丝裂霉素(1.0μg/皿)。
+S9TA97、TA98、TA100均为2，-氨基芴(20μg/皿)；TA102为1，8-二羟基蒽醌(50μg/皿)。5.3方法
采用标准平皿掺入法，在加与不加S9活化系统的情况下剂量以样品胶囊内容物计，设0.016、0.08、0.40、2.00、10.0mg/皿、自发回变、溶剂对照(葵花籽色拉油)及阳性对照8个组进行致突变试验。在实验条件和试验菌种完全相同的情况下重复做两次试验。结果见表8、9。
表8 Ames试验结果(一)
剂量(mg/皿) TA97 TA98 TA100TA102
自发回变-S9193±13.035±9.5 193±24.3 247±38.6
+S9209±6.2049.5±13.4 143±38.0 239±17.1
溶剂对照-S9190±11.547±11.6 168±42.3 273±19.0
+S9190±14.238±15.4 162±29.1 289±11.6
0.016 -S9184±17.642±8.00 172±17.9 278±19.0
+S9185±8.6042±13.3 161±30.8 289±11.6
0.08-S9176±12.945±14.8 181±11.5 284±18.9
+S9179±17.745±12.2 181±13.0 282±10.0
0.4 -S9194±9.1037±0.6 187±24.2 250±20.0
+S9207±7.2047±15.0 179±20.7 242±32.0
2.0 -S9204±14.544±5.9 187±23.6 248±13.0
+S9172±31.241±2.0 150±26.6 267±64.5
10.0-S9195±12.230±6.1 142±12.5 236±33.5
+S9158±49.537±12.1 170±30.9 267±64.5
阳性对照-S93723±466.5 3941±220.1 971±76.2 1022±123.1
+S91077±66.20 2954±487.0 4042±1157822±98.9
表9 Ames试验结果(二)
剂量(mg/皿) TA97 TA98TA100 TA102
自发回变 -S9181±25.038±14.0197±23.2274±21.1
+S9184±19.547±14.1160±20.2246±25.1
溶剂对照 -S9179±16.543±13.4179±47.6292±10.6
+S9190±14.645±10.7177±30.7278±18.7
0.016-S9180±13.641±16.8185±8.50288±16.6
+S9192±12.447±9.30186±7.50269±13.7
0.08 -S9173±24.945±13.3169±12.1282±30.3
+S9175±16.741±16.6156±12.5277±18.3
0.4 -S9190±14.740±14.9168±23.4285±11.1
+S9174±14.044±10.0174±33.6295±13.8
2.0 -S9184±9.1045±11.7163±20.7286±15.4
+S9181±13.139±15.4173±17.0270±16.4
10.0 -S9186±8.5 40±17.7183±8.50287±15.0
+S9179±20.543±15.0179±39.7289±19.7
阳性对照 -S93797±259.4 3869±273.4 978±58.71016±152.9
+S91051±56.0 2838±296.5 4051±1131 827±114.0
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01由表8、9可见，样品各剂量组回变菌落数均未超过菌种本身自发回变菌落数的两倍，而阳性组明显大于自发回变菌落数，表明样品Ames试验结果为阴性。6、30天喂养试验
选用Wistar大鼠80只，雄性体重66-94g，雌性体重66-95g，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。各剂量组均按5ml/kg·bw给予6.7％、13.4％、26.85％的油溶液等容积灌胃，溶剂对照组以等容积量的葵花籽油灌胃。每周称一次体重和剩食，计算其食物摄入量及食物利用率，连续喂养30天后禁食12-16h，摘除眼球取血，进行血液学、生化学检查，解剖取肝、肾、脾、睾丸等称重，计算脏体比，并对主要脏器进行病理组织学检查。试验数据采用《中国医学百科全书—医学统计学》统计软件包进行统计分析。6.1生长情况及食物利用率
生长情况见表10。食物利用率结果见表11。
表10各实验组动物体重增长情况(g)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表11各实验组动物食物利用率结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
由表10结果可见，各实验组与对照组比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。表11结果表明，各实验组与对照组比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。6.2血液学检查
血常规测定结果见表12。表12结果表明，各实验组与对照组大鼠的各项指标比较，经方差分析，差异无统计学意义(p＞0.05)。白细胞分类结果见表13。表13结果表明，各实验组与对照组大鼠的白细胞分类指标比较，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。
表12血常规测定结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表13白细胞分类结果
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.3生化检查
生化检查结果见表14、15。生化检测结果表明，除雄性大鼠低、中、高剂量组血糖值高于对照组，经方差分析组间差异有统计学意义(P＜0.05)，但各剂量组的血糖值与正常大鼠血糖值相比无统计学差异(P＞0.05，正常大鼠血糖值范围为3.75-8.19)。各实验组其余各项生化指标与对照组相比，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)
表14 生化检查结果(一)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.01
表15生化检查结果(二)
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.4脏体比结果
脏体比结果见表16。结果表明，各实验组的是主要脏体比与对照组相比，经方差分析，差异无统计学意义(P＞0.05)。
表36各剂量组大鼠脏体比结果
组别N(只) 肝体比(％)肾体比(％) 脾体比(％) 睾体比(％)
对照组10 3.47±0.37 0.75±0.05 0.26±0.02 1.05±0.11雄 低剂量10 3.53±0.13 0.76±0.05 0.24±0.03 1.08±0.06性 中剂量10 3.52±0.20 0.77±0.05 0.24±0.03 1.12±0.10
高剂量10 3.51±0.18 0.78±0.04 0.24±0.02 1.08±0.06
对照组10 3.45±0.25 0.74±0.03 0.28±0.02雌 低剂量10 3.42±0.19 0.76±0.03 0.27±0.02性 中剂量10 3.33±0.12 0.76±0.03 0.26±0.02
高剂量10 3.46±0.34 0.73±0.04 0.25±0.04
与对照组相比*P＜0.05；**P＜0.016.5病理组织学检查
各组动物大体检查未见异常，肝、肾、脾、胃、肠、睾丸等脏器的病理组织学检查结果未见到与实验因素有关的病变。各组大鼠肝脏少部分胆管数量轻度增生，肝小叶周边带肝细胞浆内可将多个细小圆形空泡(脂肪浸润)，上述所见在程度和范围上组间无明显差异。
结论大豆异黄酮软胶囊对雌雄大小白鼠的急性经口LD50均大于10g/kg；微核试验、精子畸形试验和Ames实验结果均为阴性，无致突变作用；30天喂养试验结果表明，试验动物生长情况良好，血液学检查、生化检查、主要脏体比及组织病理学检查结果与对照组相比均无差异，说明在按以上试验剂量给予动物大豆异黄酮软胶囊，并未产生明显毒副作用。毒理实验结果表明大豆异黄酮软胶囊在临床剂量条件下是安全的。
三、稳定性实验
三批大豆异黄酮软胶囊供试样品，在30±2℃，相对湿度60％±5％条件下，在保存时间为零月、一月、二月、三月时分别抽样，做零月批次、一月批次、二月批次、三月批次的稳定性实验。实验结果表明大豆异黄酮、碳酸钙、各种维生素、酸价、过氧化值、羰基价、黄曲霉素B1、菌落总数、大肠杆菌、霉菌、酵母菌、致病菌均符合质量标准要求。
权利要求
1、一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其特征在于囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
2、根据权利要求1所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、25～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0.1～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂。
3、根据权利要求1或2所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于稀释剂为花生油、豆油、红花油、沙棘油、茶油、色拉油、聚乙二醇400、玉米油中的一种或一种以上；或/和，抗氧剂为茶多酚、特丁基对苯二酚(TBHQ)、没食子酸丙酯(PG)、二丁基羟基甲苯(BHT)中的一种或一种以上；或/和，囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上；或/和，囊化稳定剂为蜂蜡、羊脂、大豆磷脂、甲基纤维素、乙基纤维素、聚乙二醇单硬脂酸脂、吐温-80、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种或一种以上；或/和，维生素是维生素A、维生素C、维生素D、维生素E中的一种或一种以上。
4、据权利要求1或2所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
5、根据权利要求3所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于囊壳按原料重量百分比含有35～45％的明胶、18～22％的增塑剂、0.08～0.11％的防腐剂、0～1％的遮蔽剂、0～0.35％的色素、0～0.07％的矫味剂和余量的水。
6、根据权利要求4所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上；或/和，防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上；或/和，遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上；或/和，色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上；或/和，矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
7、根据权利要求5所述的大豆异黄酮软胶囊，其特征在于增塑剂是甘油、山梨醇中的一种或一种以上；或/和，防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯中的一种或一种以上；或/和，遮蔽剂是二氧化钛、硫酸钡、氧化铁、沉降碳酸钙中的一种或一种以上；或/和，色素是柠檬黄、苋菜红、胭脂红、可可棕、炭黑、果绿中的一种或一种以上；或/和，矫味剂是乙基香兰醛、香精油、蔗糖中的一种或一种以上。
8、一种根据权利要求1或2或5或6或7所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
9、一种根据权利要求3所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
10、一种根据权利要求4所述的大豆异黄酮软胶囊制备工艺，包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制，其特征在于
囊壳制备将所需量的水、增塑剂、防腐剂加入具有搅拌减压装置的夹层不锈钢锅内搅拌均匀，做为第一液体；将所需量的明胶加入到盛有第一液体的不锈钢夹层锅内，温度控制在室温不断减压搅拌，待明胶粒膨胀后加热至50～80℃使明胶粒全部融溶；在搅拌状态下加入所需量的遮蔽剂、色素，继续减压搅拌30～120分钟；均匀融溶液过滤，将滤液保温静置或减速压脱气待用；
囊心物制备将稀释剂加热至25～85℃，加入稳定剂混合均匀；待温度降至25～35℃时，加入抗氧化剂及维生素搅拌均匀；将大豆异黄酮、碳酸钙(可不加)加入混合液中搅拌均匀并使降至室温，过胶体磨放置使脱气；
软胶囊压制将囊心物放入储液糟中，使用旋转模压法压制软胶囊；然后进行洗丸、干燥、包装得到大豆异黄酮软胶囊。
全文摘要
一种大豆异黄酮软胶囊，包括囊心物和囊壳，其囊心物按重量百分比含有10～50％的大豆异黄酮、0～35％的碳酸钙、0～2％的维生素、0～0.2％的抗氧剂、1～10％的囊化稳定剂和余量的稀释剂；其制备工艺包括囊壳制备、囊心物制备和软胶囊压制；其产品质量稳定，相对其它剂型其生物利用度更高、吸收更好，在临床剂量条件下是安全的，具有弱的雌激素样作用，能改善更年期妇女雌激素水平下降所导致的症状同时又避免了雌激素类化合物的副作用，如更年期综合症、骨质疏松、血脂升高等；同时，具有一定的抗衰老活性，还可用于防治乳腺癌、子宫内膜癌、前列腺和直肠肿瘤等；还具有提高机体免疫功能，抗炎、抗疲劳、降低胆固醇并能预防心血管疾病的发生。
文档编号A61P15/00GK1475213SQ0314551
公开日2004年2月18日 申请日期2003年6月26日 优先权日2003年6月26日
发明者高晓黎, 马桂芝, 冯崴 申请人:新疆特丰药业股份有限公司
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