具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法

专利名称：具有抑制癌细胞生长功能的新的人蛋白及其编码序列的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及新的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。
人基因组学研究目前是国际上的热点，除人染色体DNA大规模测序，表达序列测序(EST)的方法外，还缺少从功能开始的筛选具有功能基因的高通量的方法。
癌症是危害人类健康的主要疾病之一。为了有效地治疗和预防肿瘤，目前人们已越来越关注肿瘤的基因治疗。因此，本领域迫切需要开发研究具有抑癌功能的人蛋白及其激动剂/抑制剂。
本发明的目的是提供一类新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、类似物和衍生物。
本发明的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。
本发明的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。
在本发明的第一方面，提供新颖的分离出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ ID NO8、SEQ IDNO11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
较佳地，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ ID NO8、SEQ ID NO11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO20、SEQ IDNO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29。
在本发明的第二方面，提供了一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ D NO8、SEQ IDNO11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29。更佳地，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO3、SEQ ID NO6、SEQID NO9、SEQ ID NO12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO27、SEQ ID NO30的编码区序列或全长序列。
在本发明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。
在本发明的第四方面，提供了制备具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制备方法，该方法包含(a)在适合表达具有抑癌功能的蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本发明的第五方面，提供了与上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续10个核苷酸至全长核苷酸，较佳地它含有连续的约10-800个核苷酸。
在本发明的第六方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗癌症以及细胞异常增殖等病症。
本发明的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
本发明采用大规模cDNA克隆转染癌细胞，在获得具有抑癌作用的基础上，经测序证明为新的基因，进一步得到全长cDNA克隆。DNA转染试验证明，本发明的具有抑癌功能的蛋白对癌细胞(肝癌细胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。
如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
如本文所用，“分离的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化具有抑癌功能的蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。具有抑癌功能的蛋白多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
本发明的多肽可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基。
本发明还包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
本发明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因组DNA或人工合成的DNA。DNA可以是单链的或是双链的。DNA可以是编码链或非编码链。以PP7027蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO3所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO2的蛋白质，但与SEQ IDNO3所示的编码区序列有差另的核酸序列。以PP7059蛋白(在本申请中，蛋白质的命名采用其克隆编号)为例，编码成熟多肽的编码区序列可以与SEQ ID NO6所示的编码区序列相同或者是简并的变异体。如本文所用，“简并的变异体”在本发明中是指编码具有SEQ ID NO5的蛋白质，但与SEQ ID NO6所示的编码区序列有差别的核酸序列。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。对于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此类推。
编码成熟多肽的多核苷酸包括只编码成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和各种附加编码序列；成熟多肽的编码序列(和任选的附加编码序列)以及非编码序列。
术语“编码多肽的多核苷酸”可以是包括编码此多肽的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。
本发明还涉及上述多核苷酸的变异体，其编码与本发明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、类似物和衍生物。此多核苷酸的变异体可以是天然发生的等位变异体或非天然发生的变异体。这些核苷酸变异体包括取代变异体、缺失变异体和插入变异体。如本领域所知的，等位变异体是一个多核苷酸的替换形式，它可能是一个或多个核苷酸的取代、缺失或插入，但不会从实质上改变其编码的多肽的功能。
本发明还涉及与上述的序列杂交且两个序列之间具有至少50％，较佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本发明特别涉及在严格条件下与本发明所述多核苷酸可杂交的多核苷酸。在本发明中，“严格条件”是指(1)在较低离子强度和较高温度下的杂交和洗脱，如0.2×SSC，0.1％SDS，60℃；或(2)杂交时加有变性剂，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll，42℃等；或(3)仅在两条序列之间的相同性至少在95％以上，更好是97％以上时才发生杂交。并且，可杂交的多核苷酸编码的多肽与SEQ IDNO2所示的成熟多肽有相同的生物学功能(以PP7027蛋白为例)和活性。
本发明还涉及与上述的序列杂交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的长度至少含15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的扩增技术(如PCR)以确定和/或分离编码具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本发明中的多肽和多核苷酸优选以分离的形式提供，更佳地被纯化至均质。
本发明的DNA序列能用几种方法获得。例如，用本领域熟知的杂交技术分离DNA。这些技术包括但不局限于1)用探针与基因组或cDNA文库杂交以检出同源性核苷酸序列，和2)表达文库的抗体筛选以检出具有共同结构特征的克隆的DNA片段。
编码具有抑癌功能的蛋白的特异DNA片段序列产生也能用下列方法获得1)从基因组DNA分离双链DNA序列；2)化学合成DNA序列以获得所需多肽的双链DNA。
上述提到的方法中，分离基因组DNA最不常用。当需要的多肽产物的整个氨基酸序列已知时，DNA序列的直接化学合成是经常选用的方法。如果所需的氨基酸的整个序列不清楚时，DNA序列的直接化学合成是不可能的，选用的方法是cDNA序列的分离。分离感兴趣的cDNA的标准方法是从高表达该基因的供体细胞分离mRNA并进行逆转录，形成质粒或噬菌体cDNA文库。提取mRNA的方法已有多种成熟的技术，试剂盒也可从商业途径获得(Qiagene)。而构建cDNA文库也是通常的方法(Sambrook，et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory.New York，1989)。还可得到商业供应的cDNA文库，如Clontech公司的不同cDNA文库。当结合使用聚合酶反应技术时，即使极少的表达产物也能克隆。
可用常规方法从这些cDNA文库中筛选本发明的基因。这些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA杂交；(2)标志基因的功能出现或丧失；(3)测定具有抑癌功能的蛋白的转录本的水平；(4)通过免疫学技术或测定生物学活性，来检测基因表达的蛋白产物。上述方法可单用，也可多种方法联合应用。
在第(1)种方法中，杂交所用的探针是与本发明的多核苷酸的任何一部分同源，其长度至少15个核苷酸，较好是至少30个核苷酸，更好是至少50个核苷酸，最好是至少100个核苷酸。此外，探针的长度通常在2kb之内，较佳地为1kb之内。此处所用的探针通常是在本发明的基因DNA序列信息的基础上化学合成的DNA序列。本发明的基因本身或者片段当然可以用作探针。DNA探针的标记可用放射性同位素，荧光素或酶(如碱性磷酸酶)等。
在第(4)种方法中，检测具有抑癌功能的蛋白基因表达的蛋白产物可用免疫学技术如Western印迹法，放射免疫沉淀法，酶联免疫吸附法(ELISA)等。
应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法(Saiki，et al.Science 1985；2301350-1354)被优选用于获得本发明的基因。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本发明的基因，或者各种DNA片段等的核苷酸序列的测定可用常规方法如双脱氧链终止法(Sanger et al.PNAS，1977，745463-5467)。这类核苷酸序列测定也可用商业测序试剂盒等。为了获得全长的cDNA序列，测序需反复进行。有时需要测定多个克隆的cDNA序列，才能拼接成全长的cDNA序列。
本发明也涉及包含本发明的多核苷酸的载体，以及用本发明的载体或具有抑癌功能的蛋白编码序列经基因工程产生的宿主细胞，以及经重组技术产生本发明所述多肽的方法。
通过常规的重组DNA技术(Science，1984；2241431)，可利用本发明的多聚核苷酸序列可用来表达或生产重组的具有抑癌功能的蛋白多肽。一般来说有以下步骤(1).用本发明的编码具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；(2).在合适的培养基中培养的宿主细胞；(3).从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。
本发明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。术语“重组表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。在本发明中适用的载体包括但不限于在细菌中表达的基于T7的表达载体(Rosenberg，et al.Gene，1987，56125)；在哺乳动物细胞中表达的pMSXND表达载体(Lee and Nathans，J Bio Chem.2633521，1988)和在昆虫细胞中表达的来源于杆状病毒的载体。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。
本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含具有抑癌功能的人蛋白编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等(Sambroook，et al.Molecular Cloning，a Laboratory Manual，coldSpring Harbor Laboratory.New York，1989)。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。这些启动子的代表性例子有大肠杆菌的lac或trp启动子；λ噬菌体PL启动子；真核启动子包括CMV立即早期启动子、HSV胸苷激酶启动子、早期和晚期SV40启动子、反转录病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核细胞或其病毒中表达的启动子。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。
此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。
包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。
宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
本发明的多核苷酸在高等真核细胞中表达时，如果在载体中插入增强子序列时将会使转录得到增强。增强子是DNA的顺式作用因子，通常大约有10到300个碱基对，作用于启动子以增强基因的转录。可举的例子包括在复制起始点晚期一侧的100到270个碱基对的SV40增强子、在复制起始点晚期一侧的多瘤增强子以及腺病毒增强子等。
本领域一般技术人员都清楚如何选择适当的载体、启动子、增强子和宿主细胞。
用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl2法处理，所用的步骤在本领域众所周知。可供选择的是用MgCl2。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。
获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。
在上面的方法中的重组多肽可包被于细胞内、细胞外或在细胞膜上表达或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。
重组的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。这些用途包括(但不限于)直接做为药物治疗具有抑癌功能的蛋白功能低下或丧失所致的疾病，和用于筛选促进或对抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗体、多肽或其它配体。例如，抗体可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表达的重组具有抑癌功能的人蛋白筛选多肽库可用于寻找有治疗价值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本发明也提供了筛选药物以鉴定提高(激动剂)或阻遏(拮抗剂)具有抑癌功能的人蛋白的药剂的方法。激动剂提高具有抑癌功能的人蛋白刺激细胞增殖等生物功能，而拮抗剂阻止和治疗与细胞过度增殖有关的紊乱如各种癌症。例如，能在药物的存在下，将哺乳动物细胞或表达具有抑癌功能的人蛋白的膜制剂与标记的具有抑癌功能的人蛋白一起培养。然后测定药物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂包括筛选出的抗体、化合物、受体缺失物和类似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可以与具有抑癌功能的人蛋白结合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的产生，或是与多肽的活性位点结合使多肽不能发挥生物学功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗剂可用于治疗用途。
在筛选作为拮抗剂的化合物时，可以将具有抑癌功能的蛋白加入生物分析测定中，通过测定化合物影响具有抑癌功能的蛋白和其受体之间的相互作用来确定化合物是否是拮抗剂。用上述筛选化合物的同样方法，可以筛选出起拮抗剂作用的受体缺失物和类似物。
本发明的多肽可直接用于疾病治疗，例如，各种恶性肿瘤、和细胞异常增殖等。
本发明的多肽，及其片段、衍生物、类似物或它们的细胞可以用来作为抗原以生产抗体。这些抗体可以是多克隆或单克隆抗体。多克隆抗体可以通过将此多肽直接注射动物的方法得到。制备单克隆抗体的技术包括杂交瘤技术，三瘤技术，人B-细胞杂交瘤技术，EBV-杂交瘤技术等。
可以将本发明的多肽和拮抗剂与合适的药物载体组合后使用。这些载体可以是水、葡萄糖、乙醇、盐类、缓冲液、甘油以及它们的组合。组合物包含安全有效量的多肽或拮抗剂以及不影响药物效果的载体和赋形剂。这些组合物可以作为药物用于疾病治疗。
本发明还提供含有一种或多种容器的药盒或试剂盒，容器中装有一种或多种本发明的药用组合物成分。与这些容器一起，可以有由制造、使用或销售药品或生物制品的政府管理机构所给出的指示性提示，该提示反映出生产、使用或销售的政府管理机构许可其在人体上施用。此外，本发明的多肽可以与其它的治疗化合物结合使用。
药物组合物可以以方便的方式给药，如通过局部、静脉内、腹膜内、肌内、皮下、鼻内或皮内的给药途径。具有抑癌功能的蛋白以有效地治疗和/或预防具体的适应症的量来给药。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和剂量范围将取决于许多因素，如给药方式、待治疗者的健康条件和诊断医生的判断。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多种治疗目的。基因治疗技术可用于治疗由于具有抑癌功能的蛋白的无表达或异常/无活性的具有抑癌功能的蛋白的表达所致的细胞增殖、发育或代谢异常。重组的基因治疗载体(如病毒载体)可设计成表达变异的具有抑癌功能的蛋白，以抑制内源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一种变异的具有抑癌功能的蛋白可以是缩短的、缺失了信号传导功能域的具有抑癌功能的蛋白，虽可与下游的底物结合，但缺乏信号传导活性。因此重组的基因治疗载体可用于治疗具有抑癌功能的蛋白表达或活性异常所致的疾病。来源于病毒的表达载体如逆转录病毒、腺病毒、腺病毒相关病毒、单纯疱疹病毒、细小病毒等可用于将具有抑癌功能的蛋白基因转移至细胞内。构建携带具有抑癌功能的蛋白基因的重组病毒载体的方法可见于已有文献(Sambrooket al.)。另外重组具有抑癌功能的人蛋白基因可包装到脂质体中转移至细胞内。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反义RNA和DNA)以及核酶也在本发明的范围之内。核酶是一种能特异性分解特定RNA的酶样RNA分子，其作用机制是核酶分子与互补的靶RNA特异性杂交后进行核酸内切作用。反义的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技术获得，如固相磷酸酰胺化学合成法合成寡核苷酸的技术已广泛应用。反义RNA分子可通过编码该RNA的DNA序列在体外或体内转录获得。这种DNA序列已整合到载体的RNA聚合酶启动子的下游。为了增加核酸分子的稳定性，可用多种方法对其进行修饰，如增加两侧的序列长度，核糖核苷之间的连接应用磷酸硫酯键或肽键而非磷酸二酯键。
多聚核苷酸导入组织或细胞内的方法包括将多聚核苷酸直接注入到体内组织中；或在体外通过载体(如病毒、噬菌体或质粒等)先将多聚核苷酸导入细胞中，再将细胞移植到体内等。
本发明的多肽还可用作肽谱分析，例如，多肽可用物理的、化学或酶进行特异性切割，并进行一维或二维或三维的凝胶电泳分析。
本发明还提供了针对具有抑癌功能的人蛋白抗原决定簇的抗体。这些抗体包括(但不限于)多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段和Fab表达文库产生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测活检标本中的具有抑癌功能的人蛋白。
与具有抑癌功能的人蛋白结合的单克隆抗体也可用放射性同位素标记，注入体内可跟踪其位置和分布。这种放射性标记的抗体可作为一种非创伤性诊断方法用于肿瘤细胞的定位和判断是否有转移。
本发明中的抗体可用于治疗或预防与具有抑癌功能的人蛋白相关的疾病。给予适当剂量的抗体可以刺激或阻断具有抑癌功能的人蛋白的产生或活性。
抗体也可用于设计针对体内某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高亲和性的单克隆抗体可与细菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，红豆碱等)共价结合。一种通常的方法是用巯基交联剂如SPDP，攻击抗体的氨基，通过二硫键的交换，将毒素结合于抗体上，这种杂交抗体可用于杀灭具有抑癌功能的人蛋白阳性的细胞。
多克隆抗体的生产可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫动物，如家兔，小鼠，大鼠等。多种佐剂可用于增强免疫反应，包括但不限于弗氏佐剂等。
具有抑癌功能的人蛋白单克隆抗体可用杂交瘤技术生产(Kohler and Milstein.Nature，1975，256495-497)。将人恒定区和非人源的可变区结合的嵌合抗体可用已有的技术生产(Morrison et al，PNAS，1985，816851)。而已有的生产单链抗体的技术(U.S.PatNo.4946778)也可用于生产抗具有抑癌功能的人蛋白的单链抗体。
能与具有抑癌功能的人蛋白结合的多肽分子可通过筛选由各种可能组合的氨基酸结合于固相物组成的随机多肽库而获得。筛选时，必须对具有抑癌功能的人蛋白分子进行标记。
本发明还涉及定量和定位检测具有抑癌功能的人蛋白水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的，且包括FISH测定和放射免疫测定。试验中所检测的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解释具有抑癌功能的人蛋白在各种疾病中的重要性和用于诊断具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相关疾病的诊断和治疗。在诊断方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于检测具有抑癌功能的蛋白的表达与否或在疾病状态下具有抑癌功能的蛋白的异常表达。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于对活检标本的杂交以判断具有抑癌功能的蛋白的表达异常。杂交技术包括Southern印迹法，Northern印迹法、原位杂交等。这些技术方法都是公开的成熟技术，相关的试剂盒都可从商业途径得到。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列(Microarray)或DNA芯片(又称为“基因芯片”)上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。用具有抑癌功能的蛋白特异的引物进行RNA-聚合酶链反应(RT-PCR)体外扩增也可检测具有抑癌功能的蛋白的转录产物。
检测具有抑癌功能的蛋白基因的突变也可用于诊断具有抑癌功能的蛋白相关的疾病。具有抑癌功能的蛋白突变的形式包括与正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的点突变、易位、缺失、重组和其它任何异常等。可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。另外，突变有可能影响蛋白的表达，因此用Northern印迹法、Western印迹法可间接判断基因有无突变。
本发明的序列对染色体鉴定也是有价值的。该序列会特异性地针对某条人染色体具体位置且并可以与其杂交。目前，需要鉴定染色体上的各基因的具体位点。现在，只有很少的基于实际序列数据(重复多态性)的染色体标记物可用于标记染色体位置。根据本发明，为了将这些序列与疾病相关基因相关联，其重要的第一步就是将这些DNA序列定位于染色体上。
简而言之，根据cDNA制备PCR引物(优选15-35bp)，可以将序列定位于染色体上。然后，将这些引物用于PCR筛选含各条人染色体的体细胞杂合细胞。只有那些含有相应于引物的人基因的杂合细胞会产生扩增的片段。
体细胞杂合细胞的PCR定位法，是将DNA定位到具体染色体的快捷方法。使用本发明的的寡核苷酸引物，通过类似方法，可利用一组来自特定染色体的片段或大量基因组克隆而实现亚定位。可用于染色体定位的其它类似策略包括原位杂交、用标记的流式分选的染色体预筛选和杂交预选，从而构建染色体特异的cDNA库。
将cDNA克隆与中期染色体进行荧光原位杂交(FISH)，可以在一个步骤中精确地进行染色体定位。此技术的综述，参见Verma等，Human Chromosomesa Manual of BasicTechniques，Pergamon Press，New York(1988)。
一旦序列被定位到准确的染色体位置，此序列在染色体上的物理位置就可以与基因图数据相关联。这些数据可见于例如，V.Mckusick，Mendelian Inheritance in Man(可通过与Johns Hopkins University Welch Medical Library联机获得)。然后可通过连锁分析，确定基因与业已定位到染色体区域上的疾病之间的关系。
接着，需要测定患病和未患病个体间的cDNA或基因组序列差异。如果在一些或所有的患病个体中观察到某突变，而该突变在任何正常个体中未观察到，则该突变可能是疾病的病因。比较患病和未患病个体，通常涉及首先寻找染色体中结构的变化，如从染色体水平可见的或用基于cDNA序列的PCR可检测的缺失或易位。根据目前的物理作图和基因定位技术的分辨能力，被精确定位至与疾病有关的染色体区域的cDNA，可以是50至500个潜在致病基因间之一种(假定1兆碱基作图分辨能力和每20kb对应于一个基因)。
本发明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。
目前，已经可以完全通过化学合成来编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
此外，由于本发明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，与来源于其他物种的同族蛋白相比，预计在施用于人时将具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人体内的免疫原性更低或没有)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1cDNA基因的获得及对癌细胞克隆形成的抑制作用PP7027、PP7059、PP7130、PP7298、PP7425、PP7651、PP7664、PP7827、PP7882和PP8038是通过用常规方法构建人胎盘cDNA文库获得的。取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文库构建试剂盒(Stratagene公司)构建上述mRNA的cDNA文库。其中反转录酶改用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录反应在42℃进行。转化XL 10-Gold感受细胞，获得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文库。第一轮随机挑取cDNA克隆，其后以高丰度cDNA克隆和已证明有抑癌细胞生长功能的cDNA克隆为探针，杂交筛选cDNA文库，挑取弱阳性及阴性克隆。用Qiagen 96孔板质粒抽提试剂盒，按厂家说明书进行质粒DNA的提取。质粒DNA和空载体同时转染肝癌细胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待转染。每份DNA样品中加0.74μl脂质体及9.3μl无血清培液，混匀后，室温放置10分钟。每管中加150μl无血清培液，均分加入3孔生长于96孔板的7721细胞中，37℃放置2小时，每孔再加50μl无血清培液，37℃24小时。每孔换100μl全培液，37℃24小时，换含G418的全培液100μl，37℃24～48小时，边观察，边换G418浓度不等的培液。约2～3次后，直到镜检细胞有克隆形成，计数。发现以上克隆有抑制细胞克隆形成作用，结果如下表所示。
cDNA克隆转染细胞(7721)克隆形成情况
对上述cDNA克隆采用双脱氧终止法，在ABI377 DNA自动测序仪上测定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，确定为新基因克隆，进行另一端测序，仍未获得全长cDNA序列，设计引物，再次进行测序，直到获得全长序列(SEQ ID NO1、4、7、10、13、16、19、22、25、28)。
实施例2从胎盘cDNA中PCR获得全长基因取3、6、10月龄的胎盘组织，用Trizol试剂(GIBCO BRL公司)按厂方说明书提取总RNA，用mRNA提纯试剂盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-Superscript II(GIBCO BRL)，反转录酶在42℃进行反转录反应，获得胎盘cDNA。利用各个基因的转异引物(如下表所示)，按97℃3分钟、1个循环；94℃30秒→60℃30秒→72℃1分钟，共35个循环；72℃10分钟，1个循环，进行PCR扩增，获得含有完整开放阅读框序列的各蛋白基因的扩增产物。扩增产物经测序验证，与实施例1测得的序列相符，随后用常规技术将扩增产物转入宿主细胞，从而获得重组蛋白。
基因特异引物
实施例3cDNA克隆序列分析1.PP7027A核苷酸序列(SEQ ID NO1) 长度2770bp1GTTTGAAGAC AAACTTGGAG TTCACTATAT TTAACACTTA GGACCCCTAG TATCTGCCAC61TGGGCTGCGG GGGCAGCTGC AGGGACACAC ACCTGTTGGG TGCCTGCTGG TTCCACCCAG121GAGCACAGCC AGCAGCCTCA TGCCTCCTGC CCCCTGGCAG TCGGGTGCAC GTGGAGCAGG181TGGCCTTGGC CTCGACAGGG TTCCCAGGGT CCCACTGGAA GCCCCACATG GAACTGTGCC241TCTGGGACAT TGCTCCAGGG ACCTCGGGTG CGGGCTGGCC CCATCCTGTG GGGAGGTCCT301GGGAGGGTCA GTCTGGCCCG CCTGCCTGCT GACTTGGGTG TGGCCTGAGC AGGTAAAGGC361GACACAGGAG GAGAACCGGG AGCTGAGGAG CAGGTGTGAG GAGCTCCACG GGAAGAACCT421GGAACTGGGG TAAGGAGGCC CCGTCTCCTG TCCTCCCGTC CCCATCCCCC TCGCCATCCT481TGTCCCCATC CCCCTCGCCA TCCTTGTCCC CATCCCCCTC GCCATCCCTG TCCCCGTCCC541CATCCCCACC TGGCCTGGGA CCGCTGGGCA CCCGAGGCAA TGGCTGTGTG TCTGTTCTCC601TCCCACAGGA AGATCATGGA CAGGTTCGAA GAGGTTGTGT ACCAGGCCAT GGGTGAGTGC661CCGGGCCACC GAGGCCACGT GCCTCCACGA GGGGCTGCCT ATGCCCCACC CTGGCCCTGC721CCTGCACCCT GCCTAGGACC CCACCCTCCT GAGGCCCCTT TTCCTAACAC ACGAGTCCCT781TCAACATGGG CCCGGCCGTG GAAGCACTGA GGCGAGTTGC GGGGAAGCTG GTGGTAGTGA841GGCTGGTGGC TCCCACGGAG CCAGGGCTTG GCAGGCCCCA CAGTTGTGCA GATGCTGAGC901TAGCAGTGGG GCTGTGGTGG GAGCAGAGTC TGTCCCGCCG TGGCCTACCC CACTCCACCC961TGCCCTCGCC GTGCGGCTAT GTCTAGCAGC AGCCTCTGTA GGTGTCTGGC AGGACGGGAA1021CACCAGGCCT CATCTGGCCT CCCAAAAGCT TGGGCTCCTG GAGGTGCTAC TGTGGGGATC1081TGTCTTAGGC TGAGTGTCAG CCGGCGGCAG GTGACCGCCT GGCCCTTGCA GTCCCTCCAG1141GACCACCACG AAGCACGACG CACATCCTGG AGCTCGCCAT ACCGGCTCCC AGGCCTCACC1201CTAGGCTCTA GGGTGTTGGG CGCCGCCTCT TCAGGGACCT CTGGCCCAGG CTCCAGTTCC1261CTGCGGATCT GATGTGGAGG AAACAGCTGT TTCCTGGGCT TTGCATCCGG CCTAGAAGAT1321CCCGGGTGGA GGGACCCATC ACCCTCCGAG GCTCACACCC ACTGCCCACC TCTCCTCCTG1381GCGCTCGAGT CCCTTGCCTC ATTCCTTGGG CTGTCTCTGG CACCCATCGT TTCGGTTGCC1441TCCTCATCCT GAACGTTTGC TTTTCTTTTC TCAAGAGGAA GTTCAGAAGC AGAAGGAACT1501TTCCAAAGCT GAAATCCAGA AAGTTCTAAA AGAAAAAGAC CAACTTACCA CAGATCTGAA1561CTCCATGGAG AAGTCCTTCT CCGACCTCTT CAAGCGTTTT GAGAAACAGA AAGAGGTGAT1621CGAGGGCTAC CGCAAGTATG TCTCCGCCAC CCTGGTGTCC TCACCTCGGA GGCTGATGGA1681CTCATGGTCA AGCCAGCGGA CGTAGCAACT GCTGTCTTTG CACCTTGGTC CTTGGCCAAG1741CCTCCCCTTG CCACGGGGGC ATGGGATGAC CTGTGAACGA GACAGGGTGC AGGAGTCACA1801GCATATGCTG GTTTGCGAGG CAGCTGAGGG CGGCAGGAGG CAGAGTGAGC AGGGAGGCCA1861TCTGAGCCGT CCGCTGTTGT GTGACAGACG ACTCGGCTAT GATCAGGCAT CTGTGAGATT1921TCAGACAGCG CTGGTGCACC GGGGCCTGGG GCACCTCGGA AAGGTGTCTG GGCTGTCCGA1981GCGCTTGGGT CCCAAGGGTT GGGGACCCAG GGCATGCAGT ATCCAAGGCG GGAGGCCCAC2041TGAAAGGTGG TCACGGCTGT GCAAGGCCAC CCTGGTGTCC TCCTGGCCAC AGGACTCTGA2101GCGCCCCCCA CCTTCTGTGC TGGGCAAGGC CCACATGCTT GCTGGAAGGA GGGATGTCTG2161GGCCATCCAT CTGCCCAGAG CAGGCCTGGA AGGTGCCTGC GAGGCCGCCA GAGGGTTCTG2221CCCACAGCAG CAATGTTGGA GCGGAGGTGC TCAACGCCTC CTGTAGAGGA GCTGGACCTG2281CAGGTGCAGC TGGAAGAGGG GCTGTCACTG TTGGTGCAAG GGGGTTGGGG ACACCAGATG2341GGTCCCCTGG GAGTCAGACT AAACTGGAAA AGCGGCCCTT GCAGGGCCTG CTGAGCCACA2401CCTCATCTGA GTCCTGAAGT CAGGTGGGTG TCAGTGGCTG GGGCCCAGCT GCCTAACAGA2461AGCAAGCCTG AATACTCTAG GGAAGAAGGT ATCTTATGCT TTAAATTGCT GCTGCAGTTT2521TAAATTAGTG TCTGGCACAG AATAACCAAG TGTGAAAGGA ACAGGAAACA TGAGTGAAAA2581TCAGACCCGT TATTAGAGTG AGGCATGGTG ATGTACACCT GTGGTCCCAG CTACTAGGGA2641GGCTGAGGTG GGAGGATCAT TTGAGCCCGG GAGGTTGAAG CTGCAGTGAG CCATGATTGT2701ATCACTGCAC CCCCAGCCTG GGCAATAGAC CAAGACCCCC ATCTCTAAAA TTAAAAAAAA2761AAAAAAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO2) 长度166个氨基酸1MTCERDRVQE SQHMLVCEAA EGGRRQSEQG GHLSRPLLCD RRLGYDQASV RFQTALVHRG61LGHLGKVSGL SERLGPKGWG PRACSIQGGR PTERWSRLCK ATLVSSWPQD SERPPPSVLG121KAHMLAGRRD VWAIHLPRAG LEGACEAARG FCPQQQCWSG GAQRLLC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO3)克隆号PP7027起始编码子1766 ATG终止编码子2264 TAG蛋白质分子量18244.881 G TTT GAA GAC AAA CTT GGA GTT CAC TAT ATT TAA CAC TTA GGA CCC 4647 CTA GTA TCT GCC ACT GGG CTG CGC GGG CAG CTG CAG GGA CAC ACA CCT 9495 GTT GGG TGC CTG CTG GTT GCA CCC AGG AGC ACA GCC AGC AGC CTC ATG 142143 CCT CCT GCC CCC TGG CAG TCG GGT GCA CGT GGA GCA GGT GGC CTT GGC 190191 CTC GAC AGG GTT GCC AGG GTC CCA CTG GAA GCC CCA CAT GGA ACT GTG 238239 CCT CTG GGA CAT TGC TCC AGG GAC CTC GGG TGC GGG CTG GCC CCA TCC 286287 TGT GGG GAG GTC CTG GGA GGG TCA GTC TGG CCC GCC TGC CTG CTG ACT 334335 TGG GTG TGG CCT GAG CAG GTA AAG GCG ACA CAG GAG GAG AAC CGG GAG 382383 CTG AGG AGC AGG TGT GAG GAG CTC CAC GGG AAG AAC CTG GAA CTG GGG 430431 TAA GGA GGC CCC GTC TCC TGT CCT CCC GTC CCC ATC CCC CTC GCC ATC 478479 CTT GTC CCC ATC CCC CTC GCC ATC CTT GTC CCC ATC CCC CTC GCC ATC 526527 CCT GTC CCC GTC CCC ATC CCC ACC TGG CCT GGG ACC GCT GGG CAC CCG 574575 AGG CAA TGG CTG TGT GTC TGT TCT CCT CCC ACA GGA AGA TCA TGG ACA 622623 GGT TCG AAG AGG TTG TGT ACC AGG CCA TGG GTG AGT GCC CGG GCC ACC 670671 GAG GCC ACG TGC CTC CAC GAG GGG CTG CCT ATG CCC CAC CCT GGC CCT 718719 GCC CTG CAC CCT GCC TAG GAC CCC ACC CTC CTG AGG CCC CTT TTC CTA 766767 ACA CAC GAG TCC CTT CAA CAT GGG CCC GGC CGT GGA AGC ACT GAG GCG 814815 AGT TGC GGG GAA GCT GGT GGT AGT GAG GCT GGT GGC TCC CAC GGA GCC 862863 AGG GCT TGG CAG GCC CCA CAG TTG TGC AGA TGC TGA GCT AGC AGT GGG 910911 GCT GTG GTG GGA GCA GAG TCT GTC CCG CCG TGG CCT ACC CCA CTC CAC 958959 CCT GCC CTC GCC GTG CGG CTA TGT CTA GCA GCA GCC TCT GTA GGT GTC 10061007 TGG CAG GAC GGG AAC ACC AGG CCT CAT CTG GCC TCC CAA AAG CTT GGG 10541055 CTC CTG GAG GTG CTA CTG TGG GGA TCT GTC TTA GGC TGA GTG TCA GCC 11021103 GGC GGC AGG TGA CCG CCT GGC CCT TGC AGT CCC TCC AGG ACC ACC ACG 11501151 AAG CAC GAC GCA CAT CCT GGA GCT CGC CAT ACC GGC TCC CAG GCC TCA 11981199 CCC TAG GCT CTA GGG TGT TGG GCG CCG CCT CTT CAG GGA CCT CTG GCC 12461247 CAG GCT CCA GTT CCC TGC GGA TCT GAT GTG GAG GAA ACA GCT GTT TCC 12941295 TGG GCT TTG CAT CCG GCC TAG AAG ATC CCG GGT GGA GGG ACC CAT CAC 13421343 CCT CCG AGG CCC ACA CCC ACT GCC CAC CTC TCC TCC TGG CGC TCG AGT 13901391 CCC TTG CCT CAT TCC TTG GGC TGT CTC TGG CAC CCA TCG TTT CGG TTG 14381439 CCT CCT CAT CCT GAA CGT TTG CTT TTC TTT TCT CAA GAG GAA GTT CAG 14861487 AAG CAG AAG GAA CTT TCC AAA GCT GAA ATC CAG AAA GTT CTA AAA GAA 15341535 AAA GAC CAA CTT ACC ACA GAT CTG AAC TCC ATG GAG AAG TCC TTC TCC 15821583 GAC CTC TTC AAG CGT TTT GAG AAA CAG AAA GAG GTG ATC GAG GGC TAC 16301631 CGC AAG TAT GTC TCC GCC ACC CTG GTG TCC TCA CCT CGG AGG CTG ATG 16781679 GAC TCA TGG TCA AGC CAG CGG ACG TAG CAA CTG CTG TCT TTG CAC CTT 17261727 GGT CCT TGG CCA AGC CTC CCC TTG CCA CGG GGG CAT GGG ATG ACC TGT 17741 Met Thr Cys31775 GAA CGA GAC AGG GTG CAG GAG TCA CAG CAT ATG CTG GTT TGC GAG GCA 18224 Glu Arg Asp Arg Val Gln Glu Ser Gln His Met Leu Val Cys Glu Ala 191823 GCT GAG GGC GGC AGG AGG CAG AGT GAG CAG GGA GGC CAT CTG AGC CGT 187020 Ala Glu Gly Gly Arg Arg Gln Ser Glu Gln Gly Gly His Leu Ser Arg 351871 CCG CTG TTG TGT GAC AGA CGA CTC GGC TAT GAT CAG GCA TCT GTG AGA 191836 Pro Leu Leu Cys Asp Arg Arg Leu Gly Tyr Asp Gln Ala Ser Val Arg 511919 TTT CAG ACA GCG CTG GTG CAC CGG GGC CTG GGG CAC CCC GGA AAG GTG 196652 Phe Gln Thr Ala Leu Val His Arg Gly Leu Gly His Leu Gly Lys Val 671967 TCT GGG CTG TCC GAG CGC TTG GGT CCC AAG GGT TGG GGA CCC AGG GCA 201468 Ser Gly Leu Ser Glu Arg Leu Gly Pro Lys Gly Trp Gly Pro Arg Ala 832015 TGC AGT ATC CAA GGC GGG AGG CCC ACT GAA AGG TGG TCA CGG CTG TGC 206284 Cys Ser Ile Gln Gly Gly Arg Pro Thr Glu Arg Trp Ser Arg Leu Cys 992063 AAG GCC ACC CTG GTG TCC TCC TGG CCA CAG GAC TCT GAG CGC CCC CCA 2110100 Lys Ala Thr Leu Val Ser Ser Trp Pro Gln Asp Ser Glu Arg Pro Pro 1152111 CCT TCT GTG CTG GGC AAG GCC CAC ATG CTT GCT GGA AGG AGG GAT GTC2158116 Pro Ser Val Leu Gly Lys Ala His Met Leu Ala Gly Arg Arg Asp Val 1312159 TGG GCC ATC CAT CTG CCC AGA GCA GGC CTG GAA GGT GCC TGC GAG GCC2206132 Trp Ala Ile His Leu Pro Arg Ala Gly Leu Glu Gly Ala Cys Glu Ala 1472207 GCC AGA GGG TTC TGC CCA CAG CAG CAA TGT TGG AGC GGA GGT GCT CAA2254148 Ala Arg Gly Phe Cys Pro Gln Gln Gln Cys Trp Ser Gly Gly Ala Gln 1632255 CGC CTC CTG TAG AGG AGC TGG ACC TGC AGG TGC AGC TGG AAG AGG GGC2302164 Arg Leu Leu *** 1672303 TGT CAC TGT TGG TGC AAG GGG GTT GGG GAC ACC AGA TGG GTC CCC TGG23502351 GAG TCA GAC TAA ACT GGA AAA GCG GCC CTT GCA GGG CCT GCT GAG CCA23982399 CAC CTC ATC TGA GTC CTG AAG TCA GGT GGG TGT CAG TGG CTG GGG CCC24462447 AGC TGC CTA ACA GAA GCA AGC CTG AAT ACT CTA GGG AAG AAG GTA TCT24942495 TAT GCT TTA AAT TGC TGC TGC AGT TTT AAA TTA GTG TCT GGC ACA GAA25422543 TAA CCA AGT GTG AAA GGA ACA GGA AAC ATG AGT GAA AAT CAG ACC CGT25902591 TAT TAG AGT GAG GCA TGG TGA TGT ACA CCT GTG GTC CCA GCT ACT AGG26382639 GAG GCT GAG GTG GGA GGA TCA TTT GAG CCC GGG AGG TTG AAG CTG CAG26862687 TGA GCC ATG ATT GTA TCA CTG CAC CCC CAG CCT GGG CAA TAG ACC AAG27342735 ACC CCC ATC TCT AAA ATT AAA AAA AAA AAA AAA AAA27702.PP7059A核苷酸序列(SEQ ID NO4) 长度2585bp1PPCONGCAGC AAGGCTGATG TGGTGGACAG TGAGACTGTG GTACGGGCTC GTGGGTTGCC61GTGGCAGTCA TCAGACCAGG ACGTGGCTCG CTTCTTCAAA GGGCTCAACG TGGCCAGGGG121TGGTGTAGCA CTCTGCCTCA ACGCCCAGGG CCGCAGAAAT GGCGAGGCCC TCATCCGCTT181TGTGGACAGC GAGCAGCGGG ACCTAGCGCT GCAGAGACAC AAGCACCACA TGGGCGTCCG241CTATATTGAG GTGTATAAAG CGACAGGGGA GGAGTTTGTA AAGATTGCAG GGGGCACATC301ACTAGAGGTG GCTCGTTTCT TGTCACGGGA AGACCAAGTG ATCCTGCGGC TGCGGGGACT361GCCCTTCTCG GCTGGCCAAC GGACGTGCTT GGCTTCCTGG GGCCAGAGTG CCCAGTGACT421GGGGGTACCG AGGGGCTGCT CTTTGTGCGC CATCCTGATG GCCGGCCGAC TGGTGATGCC481TTCGCCCTCT TTGCTTGTGA GGAGCTGGCA CAGGCTGCAC TGCGCAGGCA CAAGGGCATG541CTGGGTAAGC GATACATTGA ACTCTTCCGG AGCACTGCAG CCGAAGTGCA GCAGGTCTTG601AACCGCTATG CATCCGGCCC ACTCCTTCCT ACACTGACTG CCCCACTGCT GCCCATCCCC661TTCCCACTGG CACCTGGGAC TGGGAGGGAC TGTGTACGCC TCCGAGGCCT GCCCTACACG721GCCACCATTG AAGACATCCT GAGCTTTCTG GGGGAGGCAG CAGCTGACAT TCGGCCCCAC781GGTGTACACA TGGTGCTCAA CCAGCAGGGC CGGCCATCGG GCGATGCCTT CATTCAGATG841ACATCAGCAG AGCGAGCCCT AGCTGCTGCT CAGCGTTGCC ATAAGAAGGT GATGAAGGAG901CGCTACGTGG AGGTGGTCCC CTGTTCCACA GAGGAGATGA GCCGAGTGCT GATGGGGGGC961ACCTTGGGCC GCAGTGGCAT GTCCCCTCCA CCCTGCAAGC TGCCCTGCCT CTCACCACCT1021ACCTACACCA CCTTCCAAGC CACCCCAACG CTCATTCCCA CGGAGACGGC ACCTCTATAC1081CCCTCTTCAG CACTGCTCCC AGCTGCCAGG GTGCCTGCTG CCCCCACCCC TGTTGCCTAC1141TATCCAGGGC CAGCCACTCA ACTCTACCTG AACTACACAG CCTACTACCC AAGCCCCCCA1201GTCTCCCCCA CCACTGTGGG CTACCTCACT ACACCCACTG CTGCCCTGGC CTCTGCTCCC1261ACCTCAGTGT TGTCCCAGTC AGGAGCCTTG GTCCGCATGC AGGGTGTCCC ATACACGGCT1321GGTATCAAGG ATCTGCTCAG CGTCTTCCAG GCCTACCAGC TACCCGCTGA TGACTACACC1381AGTCTGATGC CTGTTGGTGA CCCACCTCGC ACTGTGTTAC AAGCCCCCAA GGAATGGGTG1441TGTTTGTAGG AGAGAAAGCC AGGAGGTAAG AGCCAGCTGA TATCCTCGGC GAACATGTCT1501CTCCTGAGTC CAGAAGACCA GCACCCTCAA CCTGGTAGCT TctttctGGC TTGTCAAAGC1561TCTCAGAAGG TACCTAGAGG AGCCCAAGCC CCAGCTCCAT CCTCCACTTA TTCTGCCTGT1621TTCCCCCAAA GACAATGGCT GGACCCTGCA TGCAGGGCTG GGGGTGGAAT GGGGCTAACC1681AGCTCCTGAT GGCCTGAGCC AGGCATCTTG ACTGGCACCT GGAGAGCCCT TAAGTCTGTC1741CTGGCTGTGG CCCATGCCGA CAGATATCGT GGGGCTGACA GGTCCACGGC AGGCTTGCTT1801TCTTTTATAA AATGGAAGCT CTGGTACCTT CAATGTATGA CTCCTGGGAG AATCAAGGGT1861CCATCTGAGC CTCTGAGTAA AGATCCCAAT GTTCTACCTC TCCCTGTCCC TCTTGTAGGG1921GATAGGGAGG CAGAGAGAGC CAGCCCCTAC CCTCAGAGTA TCTGGACCTC AGAGACCATG1981TTGTGCCAGG GGTGGTCCCA CCTAAAGATG CTAGCCCCTC TCCAGGTGGG CATAAGGAGT2041AACAGATGGC AAAACCACAA ACTATTTTGA TGGACTGTGC TGCAGTATCA CCAGAAGACA2101TTAGGGGGCA GTAGGCCCCC ACACAAAACC TTCAGGCTTG AATTTTAAAG GGGAGGACTT2161TCTGCCAACT TTTCTTGTAT GCCTTGGGAA AGCCAGTTGC CCTGAACCCA GCAGACACCA2221TGGAATGTCC TTTGCACGCA TTAAATGGTA CAGAACTGAA GCCTCGGAAG CAATTTGGAA2281CTCGATCTTC TCTTCCTTAA ATGAAAAGTT ATTGACCAAA TGGACTTTTT AAAAGACACA2341GGACCCTTAA CTTTGCCCCA AAGTGAGGGG CTCCACACCA ACCCCAGGCG GAGGAACACT2401CAGACAGATT AAGGATACTG TTGACCTGTC ACTGTTTATT ATTTCAGCAC TAAAACTGAG2461GAGCCTCAAC TGCTGGCTCT TCTTCCCTTT GTATTTGTGT AAGGAGCACT GCACTCCCAT2521AAAAGGTTTT AAAATACAAA ATGTACAAGA CCTCTCAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2581AAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO5) 长度303个氨基酸1MLGKRYIELF RSTAAEVQQV LNRYASGPLL PTLTAPLLPI PFPLAPGTGR DCVRLRGLPY61TATIEDILSF LGEAAADIRP HGVHMVLNQQ GRPSGDAFIQ MTSAERALAA AQRCHKKVMK121ERYVEVVPCS TEEMSRVLMG GTLGRSGMSP PPCKLPCLSP PTYTTFQATP TLIPTETAAL181YPSSALLPAA RVPAAPTPVA YYPGPATQLY LNYTAYYPSP PVSPTTVGYL TTPTAALASA241PTSVLSQSGA LVRMQGVPYT AGMKDLLSVF QAYQLPADDY TSLMPVGDPP RTVLQAPKEW301VCLC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO6)克隆号PP7059起始编码子533 ATG终止编码子1442 TAG蛋白质分子量32452.841G CAG CAA GGC TGA TGT GGT GGA CAG TGA GAC TGT GGT ACG GGC TCG 4647 TGG GTT GCC GTG GCA GTC ATC AGA CCA GGA CGT GGC TCG CTT CTT CAA 9495 AGG GCT CAA CGT GGC CAG GGG TGG TGT AGC ACT CTG CCT CAA CGC CCA 142143 GGG CCG CAG AAA TGG CGA GGC CCT CAT CCG CTT TGT GGA CAG CGA GCA 190191 GCG GGA CCT AGC GCT GCA GAG ACA CAA GCA CCA CAT GGG CGT CCG CTA 238239 TAT TGA GGT GTA TAA AGC GAC AGG GGA GGA GTT TGT AAA GAT TGC AGG 286287 GGG CAC ATC ACT AGA GGT GGC TCG TTT CTT GTC ACG GGA AGA CCA AGT 334335 GAT CCT GCG GCT GCG GGG ACT GCC CTT CTC GGC TGG CCA ACG GAC GTG 382383 CTT GGC TTC CTC GGG CCA GAG TGC CCA GTG ACT GGG GGT ACC GAG GGG 430431 CTG CTC TTT GTG CGC CAT CCT GAT GGC CGG CCG ACT GGT GAT GCC TTC 478479 GCC CTC TTT GCT TGT GAG GAG CTG GCA CAG GCT GCA CTG CGC AGG CAC 526527 AAG GGC ATG CTG GGT AAG CGA TAC ATT GAA CTC TTC CGG AGC ACT GCA 5741 Met Leu Gly Lys Arg Tyr Ile Glu Leu Phe Arg Ser Thr Ala 14575 GCC GAA GTG CAG CAG GTC TTG AAC CGC TAT GCA TCC GGC CCA CTC CTT 62215 Ala Glu Val Gln Gln Val Leu Asn Arg Tyr Ala Ser Gly Pro Leu Leu 30623 CCT ACA CTG ACT GCC CCA CTG CTG CCC ATC CCC TTC CCA CTG GCA CCT 67031 Pro Thr Leu Thr Ala Pro Leu Leu Pro Ile Pro Phe Pro Leu Ala Pro 46671 GGG ACT GGG AGG GAC TGT GTA CGC CTC CGA GGC CTG CCC TAC ACG GCC 71847 Gly Thr Gly Arg Asp Cys Val Arg Leu Arg Gly Leu Pro Tyr Thr Ala 62719 ACC ATT GAA GAC ATC CTG AGC TTT CTG GGG GAG GCA GCA GCT GAC ATT 76663 Thr Ile Glu Asp Ile Leu Ser Phe Leu Gly Glu Ala Ala Ala Asp Ile 78767 CGG CCC CAC GGT GTA CAC ATG GTG CTC AAC CAG CAG GGC CGG CCA TCG 81479 Arg Pro His Gly Val His Met Val Leu Asn Gln Gln Gly Arg Pro Ser 94815 GGC GAT GCC TTC ATT CAG ATG ACA TCA GCA GAG CGA GCC CTA GCT GCT 86295 Gly Asp Ala Phe Ile Gln Met Thr Ser Ala Glu Arg Ala Leu Ala Ala 110863 GCT CAG CGT TGC CAT AAG AAG GTG ATG AAG GAG CGC TAC GTG GAG GTG 910111 Ala Gln Arg Cys His Lys Lys Val Met Lys Glu Arg Tyr Val Glu Val 126911 GTC CCC TGT TCC ACA GAG GAG ATG AGC CGA GTG CTG ATG GGG GGC ACC 958127 Val Pro Cys Ser Thr Glu Glu Met Ser Arg Val Leu Met Gly Gly Thr 142959 TTG GGC CGC AGT GGC ATG TCC CCT CCA CCC TGC AAG CTG CCC TGC CTC1006143 Leu Gly Arg Ser Gly Met Ser Pro Pro Pro Cys Lys Leu Pro Cys Leu 1581007 TCA CCA CCT ACC TAC ACC ACC TTC CAA GCC ACC CCA ACG CTC ATT CCC1054159 Ser Pro Pro Thr Tyr Thr Thr Phe Gln Ala Thr Pro Thr Leu Ile Pro 1741055 ACG GAG ACG GCA GCT CTA TAC CCC TCT TCA GCA CTG CTC CCA GCT GCC1102175 Thr Glu Thr Ala Ala Leu Tyr Pro Ser Ser Ala Leu Leu Pro Ala Ala 1901103 AGG GTG CCT GCT GCC CCC ACC CCT GTT GCC TAC TAT CCA GGG CCA GCC1150191 Arg Val Pro Ala Ala Pro Thr Pro Val Ala Tyr Tyr Pro Gly Pro Ala 2061151 ACT CAA CTC TAC CTG AAC TAC ACA GCC TAC TAC CCA AGC CCC CCA GTC1198207 Thr Gln Leu Tyr Leu Asn Tyr Thr Ala Tyr Tyr Pro Ser Pro Pro Val 2221199 TCC CCC ACC ACT GTG GGC TAC CTC ACT ACA CCC ACT GCT GCC CTG GCC1246223 Ser Pro Thr Thr Val Gly Tyr Leu Thr Thr Pro Thr Ala Ala Leu Ala 2381247 TCT GCT CCC ACC TCA GTG TTG TCC CAG TCA GGA GCC TTG GTC CGC ATG1294239 Ser Ala Pro Thr Ser Val Leu Ser Gln Ser Gly Ala Leu Val Arg Met 2541295 CAG GGT GTC CCA TAC ACG GCT GGT ATG AAG GAT CTG CTC AGC GTC TTC1342255 Gln Gly Val Pro Tyr Thr Ala Gly Met Lys Asp Leu Leu Ser Val Phe 2701343 CAG GCC TAC CAG CTA CCC GCT GAT GAC TAC ACC AGT CTG ATG CCT GTT1390271 Gln Ala Tyr Gln Leu Pro Ala Asp Asp Tyr Thr Ser Leu Met Pro Val 2861391 GGT GAC CCA CCT CGC ACT GTG TTA CAA GCC CCC AAG GAA TGG GTG TGT1438287 Gly Asp Pro Pro Arg Thr Val Leu Gln Ala Pro Lys Glu Trp Val Cys 3021439 TTG TAG GAG AGA AAG CCA GGA GGT AAG AGC CAG CTG ATA TCC TCG GCG1486303 Leu *** 3041487 AAC ATG TCT CTC CTG AGT CCA GAA GAC CAG CAC CCT CAA CCT GGT AGC15341535 TTC TTT CTG GCT TGT CAA AGC TCT CAG AAG GTA CCT AGA GGA GCC CAA15821583 GCC CCA GCT CCA TCC TCC ACT TAT TCT GCC TGT TTC CCC CAA AGA CAA16301631 TGG CTG GAC CCT GCA TGC AGG GCT GGG GGT GGA ATG GGG CTA ACC AGC16781679 TCC TGA TGG CCT GAG CCA GGC ATC TTG ACT GGC ACC TGG AGA GCC CTT17261727 AAG TCT GTC CTG GCT GTG GCC CAT GCC GAC AGA TAT CGT GGG GCT GAC17741775 AGG TCC ACG GCA GGC TTG CTT TCT TTT ATA AAA TGG AAG CTC TGG TAC18221823 CTT CAA TGT ATG ACT CCT GGG AGA ATC AAG GGT CCA TCT GAG CCT CTG18701871 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69529 CTG GGA GGC TGG ACG GCC CGC TAC TTC CAG AGC CGG GGC CCG CGG CAG 57670 Leu Gly Gly Trp Thr Ala Arg Tyr Phe Gln Ser Arg Gly Pro Arg Gln 85577 GAG GCT GCC CTC AAG ACC CAC GTC TAT CGC TAC CTC CGT GCC TTC CTG 62486 Glu Ala Ala Leu Lys Thr His Val Tyr Arg Tyr Leu Arg Ala Phe Leu 101625 CCG GAA AGT GGC TTT ACC ATC CTG CCC TGC ACG CGC TAC TCC ATG GAG 672102 Pro Glu Ser Gly Phe Thr Ile Leu Pro Cys Thr Arg Tyr Ser Met Glu 117673 ACC AAC GGG GCC AAG ATC GTG TCC ACT CGT GCT TGG TAA GAG GGC AGG 720118 Thr Asn Gly Ala Lys Ile Val Ser Thr Arg Ala Trp *** 130721 ACT CCC TGC AGG TAT CCT TGG AGG AGA CAG AGC TCA GAG GGG ACA AGA 768769 GAG ACC CTC TGT TCA TGG ACT GGC CAA CCG GGG AAA AGC GAG GGG CCT 816817 GGT CTC CGG GCA TCC TAG GAA GGT GGT GGG GCT AAT CCC GGA AGA CCT 864865 TTG TGG CTA CCA TGG TGC CGC TGG AGC AGG AGA CCC CGG ATG TGA CCC 912913 CAG GGT TCC TGG GGC TTC CAG GAA AGA ACT AGG CTT CTG GTC AGG GCC 960961 GTG CTG TCC TTA CCT CCT TGT GAC CTG AGC CCC CAC CAC ATG TTA AAC10081009 ACC CCT GAG 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CGC CAC TTC CGC CAC CGC CGG GGA CTC GTC CCG CCA GGC18241825 CGA CGG CGC CAG TGC AGA CGA GCC CCA CTC GGG CTG AGC TCC TCC GCG18721873 CGT CGC CGG CGC TCC ACC GTG GCT ACC CAT CCG TGG TCC CGA CAA CCT19201921 CCC TGT CCC TTG CCC GCC CCC AGG AAG GGG GAA ATG GGG CAT TTG GGG19681969 CCC AGA CCT ACA CTT GGA GCC CAG GTC CAG CGT TCC CCC GAC CGC TTT20162017 CCC CTA CCT CCC GGC CCC CGC TCC CGC CCC AGC ACT TTT GGC TCT GTT20642065 GCG CGT GGG GAT GCG GGG AGA TTT GAG AGG GGA AAA CCC CGC CAG GAG21122113 GGA GAG AGA GGC ACC CCT CTG GGA TGC GGG TGA GGG AAG GTT GGC TGA21602161 AGT TCC TAG TCT CAG GCC GTA GGT GCC TGG CCA GTT TCC TGT TTG TGG22082209 GGC AGC TGG GGC CTG AGG AGG AGG GGT TCA CTT CCT CCT CCC ACC CCC22562257 TGG GAG CGG CCC TGC GCT GTC ACT GAC ATC TCA TTA AAA AAA AAA AAA23042305 AAA AAA23105.PP7425A核苷酸序列(SEQ ID NO13) 长度1954bp1GTGACGCCCG AGGACCCAGA GGAAACCCAG CCGCTTCTGG GGCCTCCTGG CGGCAGCGCG61CCCCGCGGCC GCCGCGTCTT CCTCGCCGCC TTCGCCGCTG CCCTGGGCCC ACTCAGCTTC121GGCTTCGCGC TCGGCTACAG CTCCCCGGCC ATCCCTAGCC TGCAGCGCGC CGCGCCCCCG181GCCCCGCGCC TGGACGACGC CGCCGCCTCC TGGTTCGGGG CTGTCGTGAC CCTGGGTGCC241GCGGCGGGGG GAGTGCTGGG CGGCTGGCTG GTGGACCGCG CCGGGCGCAA GCTGAGCCTC301TTGCTGTGCT CCGTGCCCTT CGTGGCCGGC TTTGCCGTCA TCACCGCGGC CCAGGACGTG361TGGATGCTGC TGGGGGGCCG CCTCCTCACC GGCCTGGCCT GCGGTGTTGC CTCCCTAGTG421GCCCCGGTCT ACATCTCCGA AATCGCCTAC CCAGCAGTCC CGGGGGTTGC TCGGCTCCTG481TGTGCAGCTA ATGGTCGTCG TCGGCATCCT CCTGGCCTAC CTGGCAGGCT GGGTGCTGGA541GTGGCGCTGG CTGGCTGTGC TGGGCTGCGT GCCCCCCTCC CTCATGCTGC TTCTCATGTG601CTTCATGCCC GAGACCCCGC GCTTCCTGCT GACTCAGCAC AGGCGCCAGG AGGCCATGGC661CGCCCTGCGG TTCCTGTGGG GCTCCGAGCA GGGCTGGGAA GACCCCCCCA TCGGGGCTGA721CCAGAGCTTT CACCTGGCCC TGCTGCGGCA GCCCGGCATC TACAAGCCCT TCATCATCGG781CGTCTCCCTG ATGGCCTTCC AGCAGCTGTC GGGGGTCAAC GCCGTCATGT TCTATGCAGA841GACCATCTTT GAAGAGGCCA AGTTCAAGGA CAGCAGCCTG GCCTCGGTCG TCGTGGGTGT901CATCCAGGTG CTGTTCACAG CTGTGGCGGC TCTCATCATG GACAGAGCAG GGCGGAGGCT961GCTCCTGGTC TTGTCAGGTG TGGTCATGGT GTTCAGCACG AGTGCCTTCG GCGCCTACTT1021CAAGCTGACC CAGGGTGGCC CTGGCAACTC CTCGCACGTG GCCATCTCGG CGCCTGTCTC1081TGCACAGCCT GTTGATGCCA GCGTGGGGCT GGCCTGGCTG GCCGTGGGCA GCATGTGCCT1141CTTCATCGCC GGAGGTCCTC AGGCCCTATG GAGCCTTCTG GCTTGCCTCC GCTTTCTGCA1201TCTTCAGTGT CCTTTTCACT TTGTTCTGTG TCCCTGAAAC TAAAGGAAAG ACTCTGGAAC1261AAATCACAGC CCATTTTGAG GGGCGATGAC AGCCACTCAC TAGGGGATGG AGCAAGCCTG1321TGACTCCAAG CTGGGCCCAA GCCCAGAGCC CCTGCCTGCC CCAGGGGAGC CAGAATCCAG1381CCCCTTGCAG CCTTGGTCTG CAGGGTCCCT CCTTCCTGTC ATGCTCCCTC CAGCCCATGA1441CCCGGGGCTA GGAGGCTCAC TGCCTCCTGT TCCAGCTCCT GCTGCTGCTC TGAGGACTCA1501GGAACACCTT CGAGCTTTGC AGACCTGCGG TCAGCCCTCC ATGCGCAAGA CTAAAGCAGC1561GGAAGAGGAG GTGGGCCTCT AGGATCTTTG TCTTCTGGCT GGAGGTGCTT TTGGAGGTTG1621GGTGCTGGGC ATTCAGTCGC TCCTCTCACG CGGCTGCCTT ATCGGGAAGG AAATTTGTTT1681GCCAAATAAA GACTGACACA GAAAATCAGG TCAGTGTCTC TGGGCTTTGT GCAAGCTCAG1741TTTGAAAAGG GTTTATTCCC ATCACTGCCC AGGACACCCT GTGGCTTTAC TTGCTCATGG1801TCAGCCAAGC TTACCCTTCA CACTGAGAAG TCATTTCTGG CTACTTCCTT GGGCTCAGTT1861CCCTGGGTCA TCAGCCATCA AATCTTGTTG AGTTTAAAAA ATAAACAGCA AAAAAAAACA1921AACAAAACAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO14) 长度248个氨基酸1MVVVGILLAY LAGWVLEWRW LAVLGCVPPS LMLLLMCFMP ETPRFLLTQH RRQEAMAALR61FLWGSEQGWE DPPIGAEQSF HLALLRQPGI YKPFIIGVSL MAFQQLSGVN AVMFYAETIF121EEAKFKDSSL ASVVVGVIQV LFTAVAALIM DRAGRRLLLV LSGVVMVFST SAFGAYFKLT181QGGPGNSSHV AISAPVSAQP VDASVGLAWL AVGSMCLFIA GGPQALWSLL ACLRFLHLQC241PFHFVLCPC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO15)克隆号PP7425起始编码子491 ATG终止编码子1235 TGA蛋白质分子量27015.641G TGA CGC CCG AGG ACC CAG AGG AAA CCC AGC CGC TTC TGG GGC CTC 4647 CTG GCG GCA GCG CGC CCC GCG GCC GCC GCG TCT TCC TCG CCG CCT TCG 9495 CCG CTG CCC TGG GCC CAC TCA GCT TCG GCT TCG CGC TCG GCT ACA GCT 142143 CCC CGG CCA TCC CTA GCC TGC AGC GCG CCG CGC CCC CGG CCC CGC GCC 190191 TGG ACG ACG CCG CCG CCT CCT GGT TCG GGG CTG TCG TGA CCC TGG GTG 238239 CCG CGG CGG GGG GAG TGC TGG GCG GCT GGC TGG TGG ACC GCG CCG GGC 286287 GCA AGC TGA GCC TCT TGC TGT GCT CCG TGC CCT TCG TGG CCG GCT TTG 334335 CCG TCA TCA CCG CGG CCC AGG ACG TGT GGA TGC TGC TGG GGG GCC GCC 382383 TCC TCA CCG GCC TGG CCT GCG GTG TTG CCT CCC TAG TGG CCC CGG TCT 430431 ACA TCT CCG AAA TCG CCT ACC CAG CAG TCC CGG GGG TTG CTC GGC TCC 478479 TGT GTG CAG CTA ATG GTC GTC GTC GGC ATC CTC CTG GCC TAC CTG GCA 5261 Met Val Val Val Gly Ile Leu Leu Ala Tyr Leu Ala 12527 GGC TGG GTG CTG GAG TGG CGC TGG CTG GCT GTG CTG GGC TGC GTG CCC 57413 Gly Trp Val Leu Glu Trp Arg Trp Leu Ala Val Leu Gly Cys Val Pro 28575 CCC TCC CTC ATG CTG CTT CTC ATG TGC TTC ATG CCC GAG ACC CCG CGC 62229 Pro Ser Leu Met Leu Leu Leu Met Cys Phe Met Pro Glu Thr Pro Arg 44623 TTC CTG CTG ACT CAG CAC AGG CGC CAG GAG GCC ATG GCC GCC CTG CGG 67045 Phe Leu Leu Thr Gln His Arg Arg Gln Glu Ala Met Ala Ala Leu Arg 60671 TTC CTG TGG GGC TCC GAG CAG GGC TGG GAA GAC CCC CCC ATC GGG GCT 71861 Phe Leu Trp Gly Ser Glu Gln Gly Trp Glu Asp Pro Pro Ile Gly Ala 76719 GAG CAG AGC TTT CAC CTG GCC CTG CTG CGG CAG CCC GGC ATC TAC AAG 76677 Glu Gln Ser Phe His Leu Ala Leu Leu Arg Gln Pro Gly Ile Tyr Lys 92767 CCC TTC ATC ATC GGC GTC TCC CTG ATG GCC TTC CAG CAG CTG TCG GGG 81493 Pro Phe Ile Ile Gly Val Ser Leu Met Ala Phe Gln Gln Leu Ser Gly 108815 GTC AAC GCC GTC ATG TTC TAT GCA GAG ACC ATC TTT GAA GAG GCC AAG 862109 Val Asn Ala Val Met Phe Tyr Ala Glu Thr Ile Phe Glu Glu Ala Lys 124863 TTC AAG GAC AGC AGC CTG GCC TCG GTC GTC GTG GGT GTC ATC CAG GTG 910125 Phe Lys Asp Ser Ser Leu Ala Ser Val Val Val Gly Val Ile Gln Val 140911 CTG TTC ACA GCT GTG GCG GCT CTC ATC ATG GAC AGA GCA GGG CGG AGG 958141 Leu Phe Thr Ala Val Ala Ala Leu Ile Met Asp Arg Ala Gly Arg Arg 156959 CTG CTC CTG GTC TTG TCA GGT GTG GTC ATG GTG TTC AGC ACG AGT GCC1006157 Leu Leu Leu Val Leu Ser Gly Val Val Met Val Phe Ser Thr Ser Ala 1721007 TTC GGC GCC TAC TTC AAG CTG ACC CAG GGT GGC CCT GGC AAC TCC TCG1054173 Phe Gly Ala Tyr Phe Lys Leu Thr Gln Gly Gly Pro Gly Asn Ser Ser 1881055 CAC GTG GCC ATC TCG GCG CCT GTC TCT GCA CAG CCT GTT GAT GCC AGC1102189 His Val Ala Ile Ser Ala Pro Val Ser Ala Gln Pro Val Asp Ala Ser 2041103 GTG GGG CTG GCC TGG CTG GCC GTG GGC AGC ATG TGC CTC TTC ATC GCC1150205 Val Gly Leu Ala Trp Leu Ala Val Gly Ser Met Cys Leu Phe Ile Ala 2201151 GGA GGT CCT CAG GCC CTA TGG AGC CTT CTG GCT TGC CTC CGC TTT CTG1198221 Gly Gly Pro Gln Ala Leu Trp Ser Leu Leu Ala Cys Leu Arg Phe Leu 2361199 CAT CTT CAG TGT CCT TTT CAC TTT GTT CTG TGT CCC TGA AAC TAA AGG1246237 His Leu Gln Cys Pro Phe His Phe Val Leu Cys Pro *** 2491247 AAA GAC TCT GGA ACA AAT CAC AGC CCA TTT TGA GGG GCG ATG ACA GCC12941295 ACT CAC TAG GGG ATG GAG CAA GCC TGT GAC TCC AAG CTG GGC CCA AGC13421343 CCA GAG CCC CTG CCT GCC CCA GGG GAG CCA GAA TCC AGC CCC TTG CAG13901391 CCT TGG TCT GCA GGG TCC CTC CTT CCT GTC ATG CTC CCT CCA GCC CAT14381439 GAC CCG GGG CTA GGA GGC TCA CTG CCT CCT GTT CCA GCT CCT GCT GCT14861487 GCT CTG AGG ACT CAG GAA CAC CTT CGA GCT TTG CAG ACC TGC GGT CAG15341535 CCC TCC ATG CGC AAG ACT AAA GCA GCG GAA GAG GAG GTG GGC CTC TAG15821583 GAT CTT TGT CTT CTG GCT GGA GGT GCT TTT GGA GGT TGG GTG CTG GGC16301631 ATT CAG TCG CTC CTC TCA CGC GGC TGC CTT ATC GGG AAG GAA ATT TGT16781679 TTG CCA AAT AAA GAC TGA CAC AGA AAA TCA GGT CAG TGT CTC TGG GCT17261727 TTG TGC AAG CTC AGT TTG AAA AGG GTT TAT TCC CAT CAC TGC CCA GGA17741775 CAC CCT GTG GCT TTA CTT GCT CAT GGT CAG CCA AGC TTA CCC TTC ACA18221823 CTG AGA AGT CAT TTC TGG CTA CTT CCT TGG GCT CAG TTC CCT GGG TCA18701871 TCA GCC ATC AAA TCT TGT TGA GTT TAA AAA ATA AAC AGC AAA AAA AAA19181919 CAA ACA AAA CAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA1954
6.PP7651A核苷酸序列(SEQ ID NO16) 长度2463bp1GTTTGTCTCA CACAAGTGCA TCCCTGTCCA TTTCTAAGTG CGCCCTTGTC CTTTGGGGAG61TGTGGCCTGT GAAACATGGT GCATGCCTGC AGTTATGTGT GTGTTTGAAA ACACAAGATC121CTGCACGGGG AAGTGGTTGA GTGTGTGTTT GTGCATATGC GTGGGTGTGT CGCTGCCTTG181TAGGCAAGCA TGTTCACCTG TGATCGGTCT TCCTGAGTAC ATGCAGGCAT GGAGGCAAAC241ATGCACCTCT GCAGAAGTGT TCACATGTGA TGAAGTCCAT CCACATGTTT GCAGGGGTTT301GAGTGTGTCA TCCCCCAGCT AGAAGCTTGC GTTTGTGCAG TGGGACATGC ATCAGTCCTG361CACATATAGC CTTGGGGCTC ATTACACCAG CCAGCCTCCT CTCCCCACTT CCCCAGAAGG421GGAGGCCTTG CCATGCCCTG GGGGAGGAGA CGGTGGAGTC CAGAGGTTGA CCTGAAAGAG481TGAGATTCTT CCCAGGCACA AGCACACAGA TGGGCTCAGC CACAGTGCTC CTGGCAGGTT541TACAGCTGGA AAACAACACA AAAAATTTTT ATCTTGTGTT GAAAATAACT ACTACCCTGA601CCGTGACCCC AGGGCTTCCT CTGAGTAAGG AGAGACCTCC TAGACTCCTT AGCATCCAGA661TTCCCTCGCT TCCCAGAGGG CAACCCAAAA GCACAGAGCC CCAAGGCCCA GCTCCTGCCC721CTAAGCTCTC CTGCCCATCT CTCTCTCCCA CCCCCACTTG GTTCCACGCA TTCTTCAGCC781ATGACATCCT CACTCCAGGA GCTCAGCAGC CAGGGCCATG CCCTGCCCTG CCTTGCACTT841GCTCTGCCCT GGTTCTACAC TGGCCCTGGA CCCGCAGGCC AGCACAGTTC TGTGGCCTCT901GCACCAGGGT TTCACTCAAG GAGGAGTGGG GGCAGAGAGT GTGGGTGAGC CAGCGTTCCC961TGAGGAGGTC TAGAGCTGAC TTTGAGCTTA CGGGTTGTGT TGGGATAATA TTAAAGTGGC1021TGGTGGGTGC GTACCGTGTT GCATGCTCTG TGCTGGGGGT TCGTGTATAT GTCTTATTTC1081ATGCAGTAAT CCTAGGAGAC AGATTCTGTT ATGTAGGAGA ACACTGAGGC TTAGAAGAGT1141TTACATGACT TGTCAGCTAA TAGTAGCCAA CCTGGATTCC AAGACAGGTC TGTCTGACTC1201CAAAGACCTT GCCCTTTGCT CTATGTCCAA AGGTGAGTCT AAATGTCCAG CCACACCTGT1261ATGCGGTGAT GCCTGTGGGT TTGGGTGTGG GAGCCTGCAG GTACAATGCC TGTGAAAGGT1321ATAATATGTG TGTACGGGCA CAGTAGCTTA TGCCTGTAAT CCCAGCACTT TGGGAGGCCA1381AGGCAGGAGG ATCACCTGTG GTCAGGAGTT CAAGAACAGC CTGATCAACA AGGTGAAACC1441TCGTCTCTAC TAAAAAAAAA AATACAAAAA TTAGCTGGGC GAGGCTGAGA CAGGAGAATT1501GCTTGAACCC AGGAGGCAGA GGTTGCAGTG AGCTGAGATT GCACCACTGC ACTCCAGCCT1561GGGTGACAGA GTGAGACTCC ATTTCAAAAA AAAAAGAAAG AAAGGTATAA CACAAGCCTA1621AGTGTGGAGG CATTCGTGTG GCAGATGCAC ATCTACGTGA ACTTTGGTGA GTATGAACCC1681ACTGCTTCTT CCTTGGAGTG TACCTCCCAT CCCATGTCCT TGTTAAGGCC ACTCTGCATG1741TCACCTGGGA AGCATCTTCT GTTGCCGTCC CATCAGTTGC TGAGCCAAGG CCACCTGCCG1801AGGATGGCGA TTCAAGTAAG AGTAGCTTTC TCATGGGTTG GAAGAGATTT GGGGTCACTT1861ACTGGCTGGT GACCTTGAGT GAGTTATCGC CCTTCATAGG CTCAAGTGTT CTGATGTCTA1921AAGTCAGGGA GGTGGGCTGG AACCTAAACC TAGCCACTTA GGTTATCTCT CTCTGAGAGT1981TTCTAATGCT CTGCAAGAGC ATGGTGTGGA GTGTGGCTTA CTGGGCATGT TGTGGGCAGG2041CCAGGATTAA ATTAATTAAT GGGAAAGCAC TTTGCCAATT GGAAAGCACC ACAAAAATTT2101CAACATTTAC ATAAGGTGTC ATTATCACGA CTATTATTTG CTTAATGGGT CCAGAGCTTG2161CAGCTGGTTT GTGTATGTTG GAGCTTGTGC ATGTGTGTTT TTTAAAAACC GTGTGTGACT2221GTGTGTGTAT TTTGTTGTGG ATGTGTCCGT CTGAGTATCT ATTTTGATAT ATGTATTTAC2281AGTAGGGGTT CTAGAGAGTG CAAGTGGGTG CTGCACTGGG AATGGGGAAG GCCTGAGTTA2341TACGTCCAGT TTTCCAGTGA CTAGCAATTA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2401AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2461AAAB氨基酸序列(SEQ ID NO17) 长度205个氨基酸1MGSATVLLAG LQLENNTKNF YLVLKITTTL TVTPGLPLSK ERPPRLLSIQ IPSLPRGQPK61STEPQGPAPA PKLSCPSLSP TPTWFHAFFS HDILTPGAQQ PGPCPALPCT CSALVLHWPW121TRRPAQFCGL CTRVSLKEEW GQRVWVSQRS LRRSRADFEL TGCVGIILKW LVGAYRVACS181VLGVRVYVLF HAVILGDRFC YVGEH
C.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO18)克隆号PP7651起始编码子510 ATG终止编码子1125 TGA蛋白质分子量22613.301 GT TTG TCT CAC ACA AGT GCA TCC CTG TCC ATT TCT AAG TGC GCC CTT 4748 GTC CTT TGG GGA GTG TGG CCT GTG AAA CAT GGT GCA TGC CTG CAG TTA 9596 TGT GTG TGT TTG AAA ACA CAA GAT CCT GCA CGG GGA AGT GGT TGA GTG 143144 TGT GTT TGT GCA TAT GCG TGG GTG TGT CGC TGC CTT GTA GGC AAG CAT 191192 GTT CAC CTG TGA TCG GTC TTC CTG AGT ACA TGC AGG CAT GGA GGC AAA 239240 CAT GCA CCT CTG CAG AAG TGT TCA CAT GTG ATG AAG TCC ATC CAC ATG 287288 TTT GCA GGG GTT TGA GTG TGT CAT CCC CCA GCT AGA AGC TTG CGT TTG 335336 TGC AGT GGG ACA TGC ATC AGT CCT GCA CAT ATA GCC TTG GGG CTC ATT 383384 ACA CCA GCC AGC CTC CTC TCC CCA CTT CCC CAG AAG GGG AGG CCT TGC 431432 CAT GCC CTG GGG GAG GAG ACG GTG GAG TCC AGA GGT TGA CCT GAA AGA 479480 GTG AGA TTC TTC CCA GGC ACA AGC ACA CAG ATG GGC TCA GCC ACA GTG 5271 Met Gly Ser Ala Thr Val 6528 CTC CTG GCA GGT TTA CAG CTG GAA AAC AAC ACA AAA AAT TTT TAT CTT 5757 Leu Leu Ala Gly Leu Gln Leu Glu Asn Asn Thr Lys Asn Phe Tyr Leu 22576 GTG TTG AAA ATA ACT ACT ACC CTG ACC GTG ACC CCA GGG CTT CCT CTG 62323 Val Leu Lys Ile Thr Thr Thr Leu Thr Val Thr Pro Gly Leu Pro Leu 38624 AGT AAG GAG AGA CCT CCT AGA CTC CTT AGC ATC CAG ATT CCC TCG CTT 67139 Ser Lys Glu Arg Pro Pro Arg Leu Leu Ser Ile Gln Ile Pro Ser Leu 54672 CCC AGA GGG CAA CCC AAA AGC ACA GAG CCC CAA GGC CCA GCT CCT GCC 71955 Pro Arg Gly Gln Pro Lys Ser Thr Glu Pro Gln Gly Pro Ala Pro Ala 70720 CCT AAG CTC TCC TGC CCA TCT CTC TCT CCC ACC CCC ACT TGG TTC CAC 76771 Pro Lys Leu Ser Cys Pro Ser Leu Ser Pro Thr Pro Thr Trp Phe His 86768 GCA TTC TTC AGC CAT GAC ATC CTC ACT CCA GGA GCT CAG CAG CCA GGG 81587 Ala Phe Phe Ser His Asp Ile Leu Thr Pro Gly Ala Gln Gln Pro Gly 102816 CCA TGC CCT GCC CTG CCT TGC ACT TGC TCT GCC CTG GTT CTA CAC TGG 863103 Pro Cys Pro Ala Leu Pro Cys Thr Cys Ser Ala Leu Val Leu His Trp 118864 CCC TGG ACC CGC AGG CCA GCA CAG TTC TGT GGC CTC TGC ACC AGG GTT 911119 Pro Trp Thr Arg Arg Pro Ala Gln Phe Cys Gly Leu Cys Thr Arg Val 134912 TCA CTC AAG GAG GAG TGG GGG CAG AGA GTG TGG GTG AGC CAG CGT TCC 959135 Ser Leu Lys Glu Glu Trp Gly Gln Arg Val Trp Val Ser Gln Arg Ser 150960 CTG AGG AGG TCT AGA GCT GAC TTT GAG CTT ACG GGT TGT GTT GGG ATA1007151 Leu Arg Arg Ser Arg Ala Asp Phe Glu Leu Thr Gly Cys Val Gly Ile 1661008 ATA TTA AAG TGG CTG GTG GGT GCG TAC CGT GTT GCA TGC TCT GTG CTG1055167 Ile Leu Lys Trp Leu Val Gly Ala Tyr Arg Val Ala Cys Ser Val Leu 1821056 GGG GTT CGT GTA TAT GTC TTA TTT CAT GCA GTA ATC CTA GGA GAC AGA1103183 Gly Val Arg Val Tyr Val Leu Phe His Ala Val Ile Leu Gly Asp Arg 1981104 TTC TGT TAT GTA GGA GAA CAC TGA GGC TTA GAA GAG TTT ACA TGA CTT1151199 Phe Cys Tyr Val Gly Glu His *** 2061152 GTC AGC TAA TAG TAG CCA ACC TGG ATT CCA AGA CAG GTC TGT CTG ACT11991200 CCA AAG ACC TTG CCC TTT GCT CTA TGT CCA AAG GTG AGT CTA AAT GTC12471248 CAG CCA CAC CTG TAT GCG GTG ATG CCT GTG GGT TTG GGT GTG GGA GCC12951296 TGC AGG TAC AAT GCC TGT GAA AGG TAT AAT ATG TGT GTA CGG GCA CAG13431344 TAG CTT ATG CCT GTA ATC CCA GCA CTT TGG GAG GCC AAG GCA GGA GGA13911392 TCA CCT GTG GTC AGG AGT TCA AGA ACA GCC TGA TCA ACA AGG TGA AAC14391440 CTC GTC TCT ACT AAA AAA AAA AAT ACA AAA ATT AGC TGG GCG AGG CTG14871488 AGA CAG GAG AAT TGC TTG AAC CCA GGA GGC AGA GGT TGC AGT GAG CTG15351536 AGA TTG CAC CAC TGC ACT CCA GCC TGG GTG ACA GAG TGA GAC TCC ATT15831584 TCA AAA AAA AAA GAA AGA AAG GTA TAA CAC AAG CCT AAG TGT AAA GGC16311632 ATT CGT GTG GCA GAT GCA CAT CTA CGT GAA CTT TGG TGA GTA TGA ACC16791680 CAC TGC TTC TTC CTT GGA GTG TAC CTC CCA TCC CAT GTC CTT GTT AAG17271728 GCC ACT CTG CAT GTC ACC TGG GAA GCA TCT TCT GTT GCC GTC CCA TCA17751776 GTT GCT GAG CCA AAA CCA CCT GCC GAG GAT GGC GAT TCA AGT AAG AGT18231824 ACG TTT CTC ATG GGT TGG AAG AGA TTT GGG GTC ACT TAC TGG CTG GTG18711872 ACC TTG AGT GAG TTA TCG CCC TTC ATA GGC TCA AGT GTT CTG ATG TCT19191920 AAA GTC AGG GAG GTG GGC TGG AAC CTA AAC CTA GCC ACT TAG GTT ATC19671968 TCT CTC TGA GAG TTT CTA ATG CTC TGC AAG AGC ATG GTG TGG AGT GTG20152016 GCT TAC TGG GCA TGT TGT GGG CAG GCC AGG ATT AAA TTA ATT AAT GGG20632064 AAA GCA CTT TGC CAA TTG GAA AGC ACC ACA AAA ATT TCA ACA TTT ACA21112112 TAA GGT GTC ATT ATC ACG ACT ATT ATT TGC TTA ATG GGT CCA GAG CTT21592160 GCA GCT GGT TTG TGT ATG TTG GAG CTT GTG CAT GTG TGT TTT TTA AAA22072208 ACC GTG TGT GAC TGT GTG TGT ATT TTG TTG TGG ATG TGT CCG TCT GAG22552256 TAT CTA TTT TGA TAT ATG TAT TTA CAG TAG GGG TTC TAG AGA GTG CAA23032304 GTG GGT GCT GCA CTG GGA ATG GGG AAG GCC TGA GTT ATA CGT CCA GTT23512352 TTC CAG TGA CTA GCA ATT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA23992400 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA24472448 AAA AAA AAA AAA AAA A 24637.PP7664A核苷酸序列(SEQ ID NO19) 长度2078bp1GGCAGGCCAG GACTAGTTCC ACGGCCCTGA GCATGCGTTA GCCCCTTCTT GCCTCCATGC61ATCAGTTTAC CTCGGAGTGA GCTGCGGGAG ACGTCTCCCT GCCTGGCCGG GGCGGCTCTG121TCGTAGCGGA GGGCAGCGGT GGTGCAGATC CGGAGCCGGA GCCGGAGCCG CGCCGCGCCG181CACCATGGCG CCCACCCTGG CCACTGCCCA TCGGCGCCGC TGGTGGATGG CCTGCACGCC241CGTGCTGGAG AACCTCCTCT TCTCGGCAGT CCTCCTGGGC TGGGGCTCGC TGCTCATCAT301GCTCAAGTCA GAGGGCTTTT ACTCCTACCT GTGTACCGAG CCAGAGAATG TCACCAATGG361CACAGTGGGC GGCACAGCAG AGCCGGGGCA CGAGGAGGTG AGCTGGATGA ACGGCTGGCT421CAGCTGCCAG GCCCAGGACG AGATGCTAAA TTTGGCCTTC ACTGTGGGCT CCTTTCTGCT481CAGTGCCATC ACCCTGCCCC TGGGTATCGT CATGGACAAG TATGGCCCGA GGAAGCTCAG541GCTGCTGGGC AGCGCCTGCT TCGCGGTTTC CTGCTTGCTG ATTGCGTACG GAGCAAGTAA601ACCAAACGCT CTCTCCGTGC TCATCTTCAT CGCCCTGGCT CTGAATGGCT TTGGTGGGAT661GTGTATGACC TTCACCTCAT TAACACTGCC CAACATGTTC GGCGACCTTC GGTCCACGTT721TATTGCCTTG ATGATTGGGT CCTACGCCTC CTCGGCAGTC ACCTTTCCAG GAATCAAGCT781CATCTATGAT GCTGGTGTCT CCTTCATCGT CGTCCTCGTG GTCTGGGCCG GCTGCTCCGG841GCTGGTTTTC CTCAACTGCT TCTTTAACTG GCCCCTTGAG CCCTTCCCGG GGCCGGAGGA901CATGGACTAC TCGGTGAAGA TCAAGTTCAG CTGGCTGGGC TTTGACCACA AGATCACAGG961GAAGCAGRTTC TACAAGCAGG TGACCACGGT GGGCCGGCGC CTGAGTGTGG GCAGCTCCAT1021GAGGAGTGCC AAGGAGCAGG TGGCGCTGCA GGAGGGCCAC AAGCTGTGCC TGTCCACCGT1081CGACCTGGAG GTGAAGTGCC AGCCGGATGC CGCAGTGGCC CCCTCCTTCA TGCACAGCGT1141GTTCAGCCCC ATCCTGCTGC TCAGCCTGGT CACCATGTGC GTCACGCAGC TGCGGCTCAT1201CTTCTACATG GGGGCTATGA ACAACATCCT CAAGTTCCTC GTCAGCGGCG ACCAGAAGAC1261AGTTGGCCTC TACACCTCCA TCTTCGGCGT GCTCCAGCTG CTGTGCCTGC TGACGGCCCC1321CGTCATTGGC TACATCATGG ACTGGAGGCT GAAGGAGTGT GAAGACGCCT CCGAGGAGCC1381CGAGGAGAAA GACGCCAACC AGTGCGTAGG CAGGGCCGGT GCCCCGGCTC CCAGCCCGCA1441GCCCCTGCAG AAAGACCCCA GAGCTGCATG TCAGGCACAG GGTGGGTGGG ACAGAGGGAG1501AGAGCAATGC ACTCCAGCTC CTCCCGGAGC CCTTAGAGAG GCTCACTCAT TCAGCTCAGC1561ATGCGTTTCA ACTGCTCCCC TCTTTATGGA AATTGTTTGG AATGCAATGG AAATGCTAGA1621GTTTGAGGCC AGGTGCGGTG ACTCATGCCT GTAATCCCAA GCACTTTGAA AGGTTGGGGT1681AGGAAGATCA CTTGAGGCCA GGAGTTGGAG ACCAGCCTGG GAAACATGGC CAGCCCCCAC1741TCCCCGTCTC TACAAAAAAT TTAAAAATTG GCCAGGGAGG GTGGTTCATG CCTATAATAC1801CAACACTTTG GAAGGTTGAG GTGAGTGAAT TGCTTGAGCC CAGGAGTTAG TGACCAGCCT1861GGCCAATGTG GTAAAACCCG GTCTTTACTA AAAATACAAA AAATTAGCCA GGTGCGGTGT1921CGGCGCGCGC CTGTAATCCC AGCTACTCAG GAGGCTGAGG CGCGAGAATT GCTTGAACCC1981GGGAGGTGGA 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Gln Leu Arg Leu 3381199 ATC TTC TAC ATG GGG GCT ATG AAC AAC ATC CTC AAG TTC CTG GTC AGC1246339 Ile Phe Tyr Met Gly Ala Met Asn Asn Ile Leu Lys Phe Leu Val Ser 3541247 GGC GAC CAG AAG ACA GTT GGC CTC TAC ACC TCC ATC TTC GGC GTG CTC1294355 Gly Asp Gln Lys Thr Val Gly Leu Tyr Thr Ser Ile Phe Gly Val Leu 3701295 CAG CTG CTG TGC CTG CTG ACG GCC CCC GTC ATT GGC TAC ATC ATG GAC1342371 Gln Leu Leu Cys Leu Leu Thr Ala Pro Val Ile Gly Tyr Ile Met Asp 3861343 TGG AGG CTG AAG GAG TGT GAA GAC GCC TCC GAG GAG CCC GAG GAG AAA1390387 Trp Arg Leu Lys Glu Cys Glu Asp Ala Ser Glu Glu Pro Glu Glu Lys 4021391 GAC GCC AAC CAG TGC GTA GGC AGG GCC GGT GCC CCG GCT CCC AGC CCG1438403 Asp Ala Asn Gln Cys Val Gly Arg Ala Gly Ala Pro Ala Pro Ser Pro 4181439 CAG CCC CTG CAG AAA GAC CCC AGA GCT GCA TGT CAG GCA CAG GGT GGG1486419 Gln Pro Leu Gln Lys Asp Pro Arg Ala Ala Cys Gln Ala Gln Gly Gly 4341487 TGG GAC AGA GGG AGA GAG CAA TGC ACT CCA GCT CCT CCC GGA GCC CTT1534435 Trp Asp Arg Gly Arg Glu Gln Cys Thr Pro Ala Pro 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AAA AAA AAA AAA A 20788.PP7827A核苷酸序列(SEQ ID NO22) 长度2498bp1GTTTTATTGC CACAACTAAC CTCCTCGGAC TCCTGCCTCA CTCATTTACA CCAACCACCC61AACTATCTAT AAACCTAGCC ATGGCCATCC CCTTATGAGC GGGCGCAGTG ATTATAGGCT121TTCGCTCTAA GATTAAAAAT GCCCTAGCCC ACTTCTTACC ACAAGGCACA CCTACACCCC181TTATCCCCAT ACTAGTTATT ATCGAAACCA TCAGCCTACT CATTCAACCA ATAGCCCTGG241CCGTACGCCT AACCGTAACA TTACTGCAGG CCACCTACTC ATGCACCTAA TTGGAAGCGC301CACCCTAGCA ATATCAACCA TTAACCTTCC CTCTACACTT ATCATCTTGA CAATTCTAAT361TCTACTGACT ATCCTAGAAA TCGCTGTCGC TTAATCCAAG CCTACGTTTT CACACTTCTA421GTAAGCCTCT ACCTGCACGA CAACACATAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA481AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAACCT TCCCCGCGCC GGCCGGGTCC CGCCCGTTCC541CCGGCACCAG AAGTTCCTTT GCGCGTCCGA CGGCGACATG GGCGTCCCCA CGGCCCTGGA601GGCCGGCAGC TGGCGCTGGG GATCCCTGCT CTTCGCTCTT TTCCTGGCTG CGTCCCTAGG661TCCGGTGGCA GCCTTAAAGG TCGCCACGCC GTATTCCCTG TATGTCTGTC CCGAGGGGCA721AAACGTCACC CTCACCTGCA GGCTTTTGGG CCCTGTGGAC AAAGGGCACG ATGTGACCTT781CTACAAGACG TGGTACCGCA GCTCGAGGGG CGAGGTGCAA ACCTGTTAAA 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526527 GTC CCG CCC GTT CCC CGG CAC CAG AAG TTC CTT TGC GCG TCC GAC GGC 574575 GAC ATG GGC GTC CCC ACG GCC CTG GAG GCC GGC AGC TGG CGC TGG GGA 622623 TCC CTG CTC TTC GCT CTT TTC CTG GCT GCG TCC CTA GGT CCG GTG GCA 670671 GCC TTA AAG GTC GCC ACG CCG TAT TCC CTG TAT GTC TGT CCC GAG GGG 718719 CAA AAC GTC ACC CTC ACC TGC AGG CTT TTG GGC CCT GTG GAC AAA GGG 766767 CAC GAT GTG ACC TTC TAC AAG ACG TGG TAC CGC AGC TCG AGG GGC GAG 814815 GTG CAA ACC TGT TAA AAG CGC CGG CCC ATC CGA AAC CTA ACG TTC CAG 862863 GAC CTT CAC CTG CAC CAT GGA GGC CAC CAG GCT GCC AAC ACC AGC CAC 910911 GAC CTG GCT CAG CGC CAC GGG CTG GAG TCG GCC TCC GAC CAC CAT GGC 958959 AAC TTC TCC ATC ACC ATG CGC AAC CTG ACC CTG CTG GAT AGC GGC CTC10061 Met Arg Asn Leu Thr Leu Leu Asp Ser Gly Leu 111007 TAC TGC TGC CTG GTG GTG GAG ATC AGG CAC CAC CAC TCG GAG CAC AGG105412 Tyr Cys Cys Leu Val Val Glu Ile Arg His His His Ser Glu His Arg 271055 GTC CAT GGT GCC ATG GAG CTG CAG GTG CAG ACA GGC AAA GAT GCA CCA110228 Val His Gly Ala Met Glu 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CGTGTGCACG CCCAATCAGA CCGAGCACTT GTGACACTAC CCCAACACCT1981CTCCCAGGGC TGAATGAGGA ACGCGCCACT GGACACATGA GGAAGAGGCT GCCCTGGGAG2041CTACTGATGC TGTGACCTCA CCTCTCTGGC TTTGGGCGGC AGGTCCCTGC ACCTAGGATG2101CCTGCCTGGA AATGTCCTTG CATTCGTGGC CTCCTTCACA GCCTCCTCCT CAGAGAAGCC2161TCTGCGAGTG CACAGGGAGT GTGTGCAGCC TTGTGAAGGG CTGGGACCAC TTGCCCAGAC2221TGGGGCCCCT CAGGCACAGG CGTGGGGTCC TACTGACCTG TCTCCCCAGC TCCCACACAG2281AAAGCATCTA AAATAAACAC ACGTGGATGG AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2341AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAB氨基酸序列(SEQ ID NO26) 长度153个氨基酸1 MVTEGDSQHP SVPVRALALT APWSMPHAPT LGLAPGPDGT WPLESAGGPQ SWWSHSLPSW61 VSTSCLDRTL WPVRALASPA AAPPILIPHP IPCQHPKAPG GHPLCSKLLT CLPATPAVPS121 QPGHHHPLFI MSGLMGAWPS PEAGPGVLPS WTTC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO27)克隆号 PP7882起始编码子1431 ATG终止编码子1890 TAG蛋白质分子量15965.481 GT CAG TCT CCG CCT GCC CTG ACT GCG CCC TCC CAC GCA GAC ACG GGA 4748CTC AAT CCG CGC CTC GGC CGT CGG GCT CCT TGG GAC TCT GGT GCG CCG 9596GGG CCG GGG CGG GCT CCG GCT GGG GCT CCG CGG CCC CCT GCG GAA GCT 143144GGT GCT GCA GAG TCT CGT GCC GCT GCT GCT GCG CCT GCA TGA CCC CAG 191192CAG GGA CGC TGC TGA GGT CAG CAG CCC CCG ACA CCA TCC CAC CCC TAT 239240GCC ATC CAA CAC TCA CCA CTC CCA CCG TGC CTC CCC TCC GAC AAT TAC 287288AGG TCA GGG ACT CAC CCA TCC CAA GGA CCT CAG TGG CAG GTG TGA CGG 335336GCG GCC AGG TTA CTA CTG CTC TTC CCT TGA GCA GAA TCA ATC CGG TTT 383384CCT GCC CTG GGC TCT TCT GCC CCT CAC CCG ATG CCT TTG CTC CCC CTC 431432TTC CCA CCC CAA CTT TTG CCT TTT TAC TTC CTG GAC CCC TGA CCC GGC 479480TCA CTT CCC CTA TCC CAG AGC TCA GAG TGG ACC CTG GCC CGC TGT GAC 527528CAC GCC TTT TGC TGG CTG CTG CTG GAG GAG TTG GTC ACC GTG GCC CAC 575576TAT GAC AGC CCC GAG GCC CTG AGC CAC CTC TGC TGC CGC CTG GTC AGT 623624AGG GGA AGC AAG GTG ACC GCA AGG GGG TAT GAT CAG CAG CCC ACT TGT 671672TCC AGG GTT CAC CGG GGC CCC CAA CCG TTT CTA CTG CAG CCA AAC CAG 719720ATA GGC TAC TGG TGG GGC AAG TCC AAG GTC TCC GAC CAT GCC ACC TGC 767768CCT GGG GGC TCC CCT GGA ACC CCG GCC CCT GGA TTC AGC TCT GCA GCC 815816TCC TCC GCA CTC AGG ATC AGC CCT CCT GTC CTG CCA CTA GCC CTT TTG 863864TCC CCA GGT TCA GCG ATA CCC AGG CCA CGT GCC CAA CTT CCT GAG CCA 911912GAC CCA GGG CTA CCT GCG GAG TCC ACA GGA CCC CCT GCG CCG GGC AGC 959960CAC CGT GCT TAT AGG CTT CCT TCT CCA CCA CGC CAG CCC CGG CTG TGT 10071008CAA CCA GGA CCT GCT GGA CTC CCT GTT CCA GGA CCT AGG GCG GCT GCA 10551056GAG CGA CCC CAA GCC GGC CGT GGC CGC GGC AGC GCA CGT GTC CGC TCA 11031104GCA GGT GGC GAT GCT GGC CCG CGC CCG GGG CTG CCC CCG CGG GCC CCG 11511152CCT TCT CCG CAT CGC CCC GCG CCC CGC CCG GCC CCC ACC AGT CTT CGC 11991200CGA CAG CCC CTT CCA GCG CCG GAG CGT CGC GGG CCG CTG GGG CTG CTC 12471248 CGG ACC CCG CCG AGC CTG AGG CTC GGG GCT GGG GCC CGA GGG CCA GGG 12951296 TCC GAC TCG GGC ACC CCA CGC GCA TAG CAG CCT GTC CCC GCC CTG ACG 13431344 GAG GGG CTC CCT GGG CCT GGT GCT GGA CGC CAA TGC CCT CCC CCA CCC 13911392 CCC ACC CCC GTG ACC CCT GTT CAG GCA CCC GCC ACC CTG ATG GTG ACA 14391 Met Val Thr31440 GAG GGG GAC AGC CAG CAC CCA TCT GTC CCC GTC AGG GCT CTT GCT CTC 14874 Glu Gly Asp Ser Gln His Pro Ser Val Pro Val Arg Ala Leu Ala Leu 191488 ACA GCC CCC TGG ACC ATG CCC CAT GCC CCA ACC TTG GGC CTGG GCT CCT153520 Thr Ala Pro Trp Ser Met Pro His Ala Pro Thr Leu Gly Leu Ala Pro 351536 GGC CCA GAT GGC ACC TGG CCT CTT GAG TCT CCT GGG GGA CCC CAA AGT 158336 Gly Pro Asp Gly Thr Trp Pro Leu Glu Ser Ala Gly Gly Pro Gln Ser 511584 TGG TGG TCC CAT AGC CTG CCC TCC TGG GTC TCC ACC TCA TGC CTG GAC 163152 Trp Trp Ser His Ser Leu Pro Ser Trp Val Ser Thr Ser Cys Leu Asp 671632 AGG ACG CTG TGG CCT GTC CGG GCC TTG GCC AGC CCT GCA GCT GCA CCC 167968 Arg Thr Leu Trp Pro Val Arg Ala Leu Ala Ser Pro Ala Ala Ala Pro 831680 CCG ATC CTC ATC CCT CAC CCC ATT CCC TGC CAG CAT CCT AAG GCT CCT 172784 Pro Ile Leu Ile Pro His Pro Ile Pro Cys Gln His Pro Lys Ala Pro 991728 GGC GGG CAT CCT CTC TGC TCA AAA TTA TTG ACC TGT CTC CCG GCC ACA 1775100 Gly Gly His Pro Leu Cys Ser Lys Leu Leu Thr Cys Leu Pro Ala Thr 1151776 CCT GCT GTG CCC TCT CAG CCA GGC CAT CAT CAC CCC CTG TTC ATT ATG 1823116 Pro Ala Val Pro Ser Gln Pro Gly His His His Pro Leu Phe Ile Met 1311824 TCA GGC CTC ATG GGA GCC TGG CCT TCT CCA GAA GCT GGC CCC GGC GTC 1871132 Ser Gly Leu Met Gly Ala Trp Pro Ser Pro Glu Ala Gly Pro Gly Val 1471872 CTC CCA AGC TGG ACC ACG TAG GCC CCA GAT CAC ACC TGG GGG TCC AGA 1919148 Leu Pro Ser Trp Thr Thr *** 1541920 TGT AGG GGT CCC GTG TGC ACG CCC AAT CAG ACC GAG CAC TTG TGA CAC 19671968 TAC CCC AAC ACC TCT CCC AGG GCT GAA TGA GGA ACG CGC CAC TGG ACA 20152016 CAT GAG GAA GAG GCT GCC CTG GGA GCT ACT GAT GCT GTG ACC TCA CCT 20632064 CTC TGG CTT TGG GCG GCA GGT CCC TGC ACC TAG GAT GCC TGC CTG GAA 21112112 ATG TCC TTG CAT TCG TGG CCT CCT TCA CAG CCT CCT CCT CAG AGA AGC 21592160 CTC TGC GAG TGC ACA GGG AGT GTG TGC AGC CTT GTG AAG GGC TGG GAC 22072208 CAC TTG CCC AGA CTG GGG CCC CTC AGG CAC AGG CGT GGG GTC CTA CTG 22552256 ACC TGT CTC CCC AGC TCC CAC ACA GAA AGC ATC TAA AAT AAA CAC ACG 23032304 TGG ATG GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 23512352 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 238310.PP8038A核苷酸序列(SEQ ID NO28) 长度1828bp1GAGACAAGAA CCTGGCTGAA GAAAACTTGG TCCAAACTGC ATCAGAGGTG GGGGTGGTCG61CTGTTCCCAA GGGAAAGGTC CTGCTTAAAC AGGTGCTTTG TGAGTGGAAA CGTGGCCAGA121GTGCGGCGGG TGCTTTGTGA GTGGAAATGT GGCCAGAGTG CGGCGGATGC TTTGTGAGTG181GAAACGTGGC CTTCTCTGGA AGCCCTGGGG AGGGGCTTTC CGACTGAGAG GAAGGCCTCG241CATCTGCCCA CCGCCCAGTC CTGGGCCTCA CAGTGAGGAT GCAGGTCACG CTGCACAGAT301GAGGCCCGTG TGGCAGGTGG TCCCAGGAAC GAACTCGCCT CCCGCCAGCC CCCTGGGCCT361TCCATGGCCC CAGCCCCTTC CTATGCAGAC ACCCCTCACC CCTCTCTGGC CCTGCTTCAA421GCCCCCCTTC CCCGCCGTGT GGGCTTCTCG CTGTCCCCTA AGCCTTCGAT GTCCCCTCTG481AGCCACCGCG GCCACGGCCA ACAGGGATGC CTCCCTCACC AGCGCCTCCT GATAGCTCTG541GGCCTGAGCT CGGTAGAGAA ATGGAAGAGG AAGGTATATG CAGTGTTTGA CTGTCTCTGT601TTCTTGTCTC ACGTCACAAA ACAAGACTGA ATTTGGATTT CTGAACGCGA CTGTGTTTTC661CTCGGGAGGA TCTCTTGATC CCAGGAGGTA GAGGTTGCAG TGAGCCCAGA TCGCGCCACT721GCACTCCAGC CTGGGTGACA AAGCAGACTC TGTCTCGAAA AAACATACAT TGAAAAAGGC781AGAAGATTTG AACAGATACA TCAAAAAAAA GATAGACAAA TAGCAAATAA GCACTTGAAC841AGGTGCTCAG CATCGTTCGT TGTCAGAGGA ATGCACACGA AAACCGCAGC GACAGCGACT901AGAACAGCCA GGTGCTGAGG AGGGTGCGGA GCCCCTGGAA CTCACCCGTG CTGCTGAGAA961CACAAATGCT GCATCCGCTT TGGAAAGCAG CTTGGGAGTT GCATGTGAAA TTCAGCATTT1021ACCACACGGC CAGCAGTTCT GCTTTGGTTA TTCTACTCCA GAGTTTCCAC TGGGGGTCCT1081TTATGATTTC GTCTCTTCTA TCATTTTTTT GGTATAGATG GGGGTCTCGC TATTTGGATT1141ATTGTTGCAG GCGTGTTTGG GGTTTTTGAG TAGTGGTAGT GTCTGAGGTC AGTCAGGGTT1201GTTCTGGCCC CAGCAGGGCT CTTCGTAGCT TTTCCTGTGC AGGTGAACAA GCCTGCGGTT1261TCACTTGTTT CTCTTAACTT AAAGGAACTG TTGTTCCCAA GAGCAGTCTT GGGCTGAACT1321TTCAAATAAA ATGAGTTTCC TCAGGGAGCT TCAGAGCTCT TTCCTTATGG ACGGCCTCTC1381TCCCCAGGCT GATTTCTCTG CACCACCCTT CTGGGCACTG GGTAAGACAG CAGCCTCTGA1441TCTTCTTGGC CTGGCTTTCC CAGCATGGGT GCTCTACCCT ACTGTTTTAA CCTAGAAAGC1501CTGAACTGTA TTTAAAACTT GTGGTTTTTA AGGCCAGGCA CAGTGGCTCA TGCCTGTAAT1561CCCAGCACCT TGGGAAGCCA AGGTGGGTGG ATCACTTATG GTCAGGAGTT CAAGACCAGC1621CTGACCAACC TGGTGAAAGC CTGTCTCTAC TAAAAATATA AAAATAAGCC GGGCGTGGTG1681GCACATGCCT GTAATACCAG CTACCCAGGA AGCTGAGGCA GGAGAATTGC TTGAACCCAG1741GAGGCGGAGG TTGCAGTGAG CCAAGATGGC ACCACTGCAC TCCAGCCTGG GCGACAGCGA1801GACTCCATAT AAAAAAAAAA AAAAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO29) 长度104个氨基酸1 MLCEWKRGLL WKPWGGAFRL RGRPRICPPP SPGPHSEDAG HAAQMRPVWQ VVPGTNSPPA61 SPLGLPWPQP LPMQTPLTPL WPCFKPPFPA VWASRCPLSL RCPLC.核苷酸及氨基酸组合序列(SEQ ID NO30)克隆号PP8038起始编码子167 ATG终止编码子479 TGA蛋白质分子量11558.071G AGA CAA GAA CCT GGC TGA AGA AAA CTT GGT CCA AAC TGC ATC AGA 4647 GGT GGG GGT GGT CGC TGT TCC CAA GGG AAA GGT CCT GCT TAA ACA GGT 9495 GCT TTG TGA GTG GAA ACG TGG CCA GAG TGC GGC GGG TGC TTT GTG AGT 142143 GGA AAT GTG GCC AGA GTG CGG CGG ATG CTT TGT GAG TGG AAA CGT GGC 1901 Met Leu Cys Glu Trp Lys Arg Gly 8191 CTT CTC TGG AAG CCC TGG GGA GGG GCT TTC CGA CTG AGA GGA AGG CCT 2389 Leu Leu Trp Lys Pro Trp Gly Gly Ala Phe Arg Leu Arg Gly Arg Pro 24239 CGC ATC TGC CCA CCG CCC AGT CCT GGG CCT CAC AGT GAG GAT GCA GGT 28625 Arg Ile Cys Pro Pro Pro Ser Pro Gly Pro His Ser Glu Asp Ala Gly 40287 CAC GCT GCA CAG ATG AGG CCC GTG TGG CAG GTG GTC CCA GGA ACG AAC 33441 His Ala Ala Gln Met Arg Pro Val Trp Gln Val Val Pro Gly Thr Asn 56335 TCG CCT CCC GCC AGC CCC CTG GGC CTT CCA TGG CCC CAG CCC CTT CCT 38257 Ser Pro Pro Ala Ser Pro Leu Gly Leu Pro Trp Pro Gln Pro Leu Pro 72383 ATG CAG ACA CCC CTC ACC CCT CTC TGG CCC TGC TTC AAG CCC CCC TTC 43073 Met Gln Thr Pro Leu Thr Pro Leu Trp Pro Cys Phe Lys Pro Pro Phe 88431 CCC GCC GTG TGG GCT TCT CGC TGT CCC CTA AGC CTT CGA TGT CCC CTC 47889 Pro Ala Val Trp Ala Ser Arg Cys Pro Leu Ser Leu Arg Cys Pro Leu 104479 TGA GCC ACC GCG GCC ACG GCC AAC AGG GAT GCC TCC CTC ACC AGC GCC 526105 *** 105527 TCC TGA TAG CTC TGG GCC TGA GCT CGG TAG AGA AAT GGA AGA GGA AGG 574575 TAT ATG CAG TGT TTG ACT GTC TCT GTT TCT TGT CTC ACG TCA CAA AAC 622623 AAG ACT GAA TTT GGA TTT CTG AAC GCG ACT GTG TTT TCC TCG GGA GGA 670671 TCT CTT GAT CCC AGG AGG TAG AGG TTG CAG TGA GCC CAG ATC GCG CCA 718719 CTG CAC TCC AGC CTG GGT GAC AAA GCA GAC TCT GTC TCG AAA AAA CAT 766767 ACA TTG AAA AAG GCA GAA GAT TTG AAC AGA TAC ATC AAA AAA AAG ATA 814815 GAC AAA TAG CAA ATA AGC ACT TGA ACA GGT GCT CAG CAT CGT TCG TTG 862863 TCA GAG GAA TGC ACA CGA AAA CCG CAG CGA CAG CGA CTA GAA CAG CCA 910911 GGT GCT GAG GAG GGT GCG GAG CCC CTG GAA CTC ACC CGT GCT GCT GAG 958959 AAC ACA AAT GCT GCA TCC GCT TTG GAA AGC AGC TTG GGA GTT GCA TGT10061007 GAA ATT CAG CAT TTA CCA CAC GGC CAG CAG TTC TGC TTT GGT TAT TCT10541055 ACT CCA GAG TTT CCA CTG GGG GTC CTT TAT GAT TTC GTC TCT TCT ATC11021103 ATT TTT TTG GTA TAG ATG GGG GTC TCG CTA TTT GGA TTA TTG TTG CAG11501151 GCG TGT TTG GGG TTT TTG AGT AGT GGT AGT GTC TGA GGT CAG TCA GGG11981199 TTG TTC TGG CCC CAG CAG GGC TCT TCG TAG CTT TTC CTG TGC AGG TGA12461247 ACA AGC CTG CGG TTT CAC TTG TTT CTC TTA ACT TAA AGG AAC TGT TGT12941295 TCC CAA GAG CAG TCT TGG GCT GAA CTT TCA AAT AAA ATG AGT TTC CTC13421343 AGG GAG CTT CAG AGC TCT TTC CTT ATG GAC GGC CTC TCT CCC CAG GCT13901391 GAT TTC TCT GCA CCA CCC TTC TGG GCA CTG GGT AAG ACA GCA GCC TCT14381439 GAT CTT CTT GGC CTG GCT TTC CCA GCA TGG GTG CTC TAC CCT ACT GTT14861487 TTA ACC TAG AAA GCC TGA ACT GTA TTT AAA ACT TGT GGT TTT TAA GGC15341535 CAG GCA CAG TGG CTC ATG CCT GTA ATC CCA GCA CCT TGG GAA GCC AAG15821583 GTG GGT GGA TCA CTT ATG GTC AGG AGT TCA AGA CCA GCC TGA CCA ACC16301631 TGG TGA AAG CCT GTC TCT ACT AAA AAT ATA AAA ATA AGC CGG GCG TGG16781679 TGG CAC ATG CCT GTA ATA CCA GCT ACC CAG GAA GCT GAG GCA GGA GAA17261727 TTG CTT GAA CCC AGG AGG CGG AGG TTG CAG TGA GCC AAG ATG GCA CCA17741775 CTG CAC TCC AGC CTG GGC GAC AGC GAG ACT CCA TAT AAA AAA AAA AAA18221823 AAA AAA1828在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.一种分离的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ ID NO8、SEQ ID NO11、SEQ ID NO14、SEQID NO17、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29；或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，该多肽是具有选自下组的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ ID NO8、SEQ ID NO11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29。
3.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少85％相同性(a)编码如权利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码的多肽具有选自下组的氨基酸序列SEQ ID NO2、SEQ ID NO5、SEQ ID NO8、SEQ ID NO11、SEQ ID NO14、SEQ ID NO17、SEQ ID NO20、SEQ ID NO23、SEQ ID NO26、SEQ ID NO29。
5.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸的序列选自下组SEQ ID NO3、SEQ ID NO6、SEQ ID NO9、SEQ ID NO12、SEQ ID NO15、SEQ ID NO18、SEQ ID NO21、SEQ ID NO24、SEQ ID NO27、SEQ ID NO30的编码区序列或全长序列。
6.一种载体，其特征在于，它含有权利要求3所述的多核苷酸。
7.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它是选自下组的一种宿主细胞(a)用权利要求6所述的载体转化或转导的宿主细胞；(b)用权利要求3所述的多核苷酸转化或转导的宿主细胞。
8.一种具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制备方法，其特征在于，该方法包含(a)在适合表达具有抑癌功能的人蛋白的条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一种能与权利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特异性结合的抗体。
10.一种药物组合物，其特征在于，它含有安全有效量的权利要求1所述的多肽以及药学上可接受的载体。
全文摘要
本发明公开了一类新的具有抑癌功能的人蛋白,编码此多肽的多核苷酸和经重组技术产生该多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病如癌症等的方法。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这类新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文档编号A61K38/17GK1351081SQ0012710
公开日2002年5月29日 申请日期2000年10月31日 优先权日2000年10月31日
发明者顾健人 申请人:上海市肿瘤研究所