内皮素受体三肽拮抗剂的制作方法
专利名称：内皮素受体三肽拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有内皮素受体拮抗活性的肽类和非肽类衍生物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病的用途。
背景技术：
内皮素(Endothelin，简称ET)是由血管内皮分泌的，它们是一类迄今发现的收缩血管作用最强的生物因子之一。人类或其它哺乳动物基因组存在三种分别编码内皮素的基因，形成的大内皮素在内皮素转换酶的作用下，转变为ET-1、ET-2、ET-3。它们均为二十一肽，含有两个二硫桥键。ET-1不但表达于非血管细胞，而且是唯一存在于血管内皮细胞的内皮素。ET-2和ET-3主要在脑、肾和肾上腺及小肠中。ET与靶细胞中的特异受体结合，最终产生相应的生物学效应。迄今已发现三类ET受体，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主动脉，心房，胎盘，肺、脑血管及肾脏血管的平滑肌中；ETB存在于中枢神经系统中的神经胶质细胞，脉落丛上皮细胞，肺、胎血、肾小球内皮，心室，脑中等，在血管平滑肌也有分布；ETC则主要分布于内皮细胞中。三种受体对各型ET的亲和力不同。内皮素及受体在人体内具有广泛的生理病理学反应。参与了如高血压、充血性心衰、心肌缺血、脑窒息、休克、急性肾衰、肺源性高血压、血管痉挛性疾病等过程。因此ET受体被认为是治疗心脑血管疾病的切实可行的新靶点，其受体拮抗剂有助于预防/治疗心血管疾病。
发明概述本发明的目的是寻找新的内皮素受体拮抗剂。
本发明人经研究，现已发现式(I)肽类和非肽类衍生物
R-CO-AA1-AA2-AA3-OH (I)或其立体异构体具有良好的内皮素受体拮抗活性，因此式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体可作为药物用于预防或治疗与内皮素及前列腺有关的疾病。
本发明第一方面涉及式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO；AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，PrO，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
本发明还涉及到含至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO。
AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；及药用载体或赋形剂的药物组合物。
本发明还涉及制备式(I)肽类衍生物或其立体异构体的方法，其包括1)将化合物RCO-A-OH与B-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成RCO-A-B-OP，其中R，A，B，如权利要求1中定义，P为C1-4烷基。
2)将1)中所得产物在1M碱/醇溶液中皂化，然后用酸酸化，生成RCO-A-B-OH，3)将2)中产物RCO-A-B-OH与C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成RCO-A-B-C-OP，其中P为C1-4烷基，所得产物如2)中所述进行皂化反应，生成式(I)RCO-A-B-C-OH，4)将2)中产物RCO-A-B-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应5-10分钟，再加入C-ONa，生成RCO-A-B-C-ONa，然后用酸酸化，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
本发明还涉及式(I)非肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，按本领域已知方法和改良Szelke文献方法制备，详细步骤参见实施例3。
本发明还涉及式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体在预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病或症状的药物中用途。
本发明所用术语“式(I)肽类和非肽类衍生物立体异构体”是指其相应的D-或L-立体构型。
根据该发明，式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体可选自下面的化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH
5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH
34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002根据本发明，式(I)肽类衍生物或其立体异构体可按本领域已知方法、文献方法或下面所示的反应路线1制备反应路线1 在反应路线1中式R-CO-AA1-OH化合物(其中R，AA1如上定义)与AA2-OP(其中AA2如上定义，P为C1-4烷基，其可选自甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，优选甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-OP化合物(其中R，AA1，AA2，P如上定义)。将R-CO-AA1-AA2-OP化合物在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH化合物(其中R，AA1，AA2如上定义)。将式R-CO-AA1-AA2-OH与AA3-OP(其中AA3，P如上定义)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成式R-CO-AA1-AA2-AA3-OP(其中R，AA1，AA2，AA3，P如上定义)化合物。然后将所得R-CO-AA1-AA2-AA3-OP在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。或者将化合物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应，再与AA3-ONa生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH三肽衍生物或其立体异构体。
根据该发明，式(I)肽类衍生物立体异构体是指其相应的D-或L-立体构型。
根据该发明，式(I)肽类和非肽类衍生物及其立体异构体在动物抗ET1受体模型中显示出优良效果，因此可作为心血管药用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。
本发明因此还涉及含有作为活性成分的有效剂量的至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90％的式(I)肽类和非肽类和/或其立体异构体。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式(I)肽类和非肽类衍生物和/或其立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明式(I)肽类和非肽类衍生物及其立体异构体或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子，如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸钙、氯化钠、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中制成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、在、四个剂量形式给药。
具体实施例方式
在本发明中使用的缩写具有下面的含义Ala-丙氨酸，Gly-甘氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，Ile-异亮氨酸，Leu-亮氨酸，Mob-β-胡椒基丙氨酸Phe-苯丙氨酸，Phg-苯基甘氨酸，Pro-脯氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，Trp-色氨酸，Val-缬氨酸，MeVal-甲基缬氨酸HIM-六亚甲基亚胺，HMPA-六甲基膦酰胺NMM-N-甲基吗啡啉，TEA-三乙胺，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲酰胺，DCC-二环己基碳二亚胺，HOBt-1-羟基苯并三唑，THF-四氢呋喃。
本发明中，所有氨基酸构型除注明为D-型外，均为L-型。
实施例下面的实例及生物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
实施例化合物熔点由RY-1型熔点仪测定，温度未经校正；1H NMR图谱由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁仪测定；FAB质谱由Zabspect高分辨磁质谱仪测定；元素分析由Carlo Erba1106型元素分析仪测定；紫外光谱由UV-260紫外可见分光光度计测定；红外光谱由Magna IRTM550红外仪测定。实施例制备所用反应试剂均为商品化产品。
实施例1HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制备1.1胡椒醇(3，4-methylenedioxybenzyl alcohol)的制备15.0克(0.1mol)胡椒醛溶于20毫升甲醇中，加入12毫升37％的甲醛(0.12mol)，搅拌，混合物加热至65℃，使其全部溶解。当其完全溶解后，立即停止加热，水浴冷却，迅速加入12克氢氧化钠/12毫升水(0.3mol)的溶液，温度急剧升高，加热，保持内温70℃搅拌反应40分钟，然后升温回流20分钟。冷却，加入30毫升水，用苯提取(15毫升×4)，合并提取液，水洗两次，苯层以无水硫酸钠干燥。苯层浓缩，得油状液体14.8克(97.4％)，Rf＝0.30(石油醚-乙酸乙酯＝1∶1)。
1.2胡椒基氯甲烷(3，4-methylenedioxybenzyl chloride)的制备将68.4克胡椒醇(0.45mol)与110毫升浓盐酸(1.35mol)混合，激烈搅拌，固体溶解。待全部溶解后，用苯萃取，苯层以水、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥。浓缩苯层，得淡黄色油状液体76.1克，油泵减压蒸馏，收集100-120℃/5毫米汞柱的馏份，得66.2克(86.3％)。
1.3 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯的制备将钠9.0(0.388mol)克在600毫升绝对无水乙醇中回流(98±3℃)，至钠完全溶解。冷却至室温(为白色混浊液体)后，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯84.29克(0.388mol)，搅拌溶解。加入上述制备的胡椒基氯甲烷66.2克(0.388mol)，反应液渐变浑浊，油浴回流(100℃±3)3小时。减压蒸出乙醇，得淡黄色油状物，慢慢固化，用苯溶解，苯层以10％的碳酸钠、水各洗两次后，用无水硫酸钠干燥。浓缩，冷却，得无色片状结晶107.95克(79.3％)，m.p.109-110℃。TLC检测石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)，Rf＝0.33。
1.4 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸单乙酯的制备N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯25.45克(0.0725mol)，用250毫升乙醇溶解，室温滴加6N氢氧化钠21.75毫升，TLC监测至初始反应物消失(2.5小时)。冰水浴条件下，滴加6N盐酸(约21.75毫升)调至pH3左右，得白色混悬液。浓缩，加入180毫升水，抽滤，得白色粉状固体，室温干燥。称重得22.3克(95.2％)。
1.5 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的制备N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸单乙酯22.3克(0.069mol)用210毫升二氧六环溶解，油浴回流(108℃±3)3.5小时。反应液浓缩，残余物用150毫升乙酸乙酯溶解，分别用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩至约15毫升，加入乙醚，放置，有白色结晶析出。滤集结晶，石油醚洗两次，室温干燥。称重得14.6克(76.9％)，m.p.85-87℃。TLC检测石油醚∶乙酸乙酯(1∶2)，Rf＝0.63。
1.6 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的拆分称量N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯11.16克(40.0mmol)，于研钵中研成细粉，混悬于280毫升磷酸盐缓冲溶液中，水浴(37℃±1)，溶液呈白色混悬状。加入枯草杆菌蛋白酶A约2.0毫克，pH值迅速下降，用0.5N氢氧化钠维持pH7.60左右。5.5小时后，pH值基本保持恒定，继续搅拌1.0小时。反应液用乙酸乙酯萃取至紫外灯下(λ＝254nm)无吸收为止，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶5.45克(97.7％)(D-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯)；水层于冰水浴中用浓盐酸调对pH2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶4.70克(93.6％)(L-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸)。
1.7水解对上述所得(L)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸、(D)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯用10％盐酸回流水解，得到(L)-(2-胡椒基)丙氨酸盐酸盐，m.p.235-237℃(分解)，[α]D20＝-13.4°(C＝1.45，1M HCl)(D)-(2-胡椒基)丙氨酸盐酸盐，m.p.235-237℃，[α]D20＝+13.1°(C＝1.47，1M HCl)。
IR3080-3020，2560，2480，2040(NH3+)，1600(NH3+，COO-)，1040(-O-CH2-O)；1HNMR(D2O)δ3.1-3.3(2H，-CH2Ar)，4.25(1H，-CHCOOH)，5.90(s，2H，-O-CH2-O)，7.27-6.8-6.9(m，3H，Ar-H)；1.8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制备将D-色氨酸甲酯盐酸盐127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入六亚甲基胺甲酰亮氨酸128毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得180毫克固体。将该固体溶于2毫升THF中，冰盐浴冷却，加入55微升NMM和68毫升氯甲酸异丁酯，反应5分钟后，加入预先配好的含122.75毫克D-胡椒基丙氨酸盐酸盐的10％的碳酸钠溶液(1毫升)，冰盐浴反应30分钟后，室温反应1.5小时，减压浓缩，加入10毫升水，乙醚提取不溶物，水层用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，乙酸乙酯提取(3×15毫升)，合并提取液，以无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得到白色固体290毫克(91.6％)。MS[M+H]+＝634.2，[M+Na]+＝656.4。
TLC检测氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.68。
实施例2ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH的制备将D-色氨酸甲酯盐酸盐127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入ABO-CO-Leu-OH 134毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得226毫克固体(100％)。将该固体溶于2毫升DCM中，加入134毫克D-3-氯-4-氟苯丙氨酸甲酯盐酸盐，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得310毫克固体(95.2％)。MS[M+H]+＝654.8。TLC检测氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.52。
实施例3ENP002的制备 的制备将10.24克(0.04mol)HIM-CO-Leu-OH，溶于150毫升乙醚中，加入TEA5.55毫升(0.04mol)，使其溶解，通氮气保护。冰盐浴条件下加入5.71毫升氯甲酸异丁酯，反应15分钟。在该温度下慢慢加入含3克重氮甲烷的乙醚溶液200毫升，反应3小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得固体产物A 5.03克(90％)。MS[M+H]+＝281.4。TLC检测Rf＝0.70(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.42-1.80(t，11H，HIM环上8H和亮氨酸侧链上3H)，3.20(4H，HIM环上4H)，4.20(brq，1H，-CHN2)，4.95(brd，1H，α-H)，5.48(s，1H，-NH)。 的制备将4.2克(0.015mol)上述产物A溶于45毫升THF中，冰盐浴冷却，慢慢滴加含1.34克溴化氢的二氧六环溶液20毫升，反应3小时。减压浓缩，以50毫升乙酸乙酯溶解，用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得白色固体产物B 4.6克(92.2％)。MS[M+H]+＝334.5。TLC检测Rf＝0.65(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.32-1.80(t，11H，HIM环上8H和亮氨酸侧链上3H)，3.15(4H，HIM环上4H)，4.07(s，2H，-CH2Br)，4.55(brd，1H，α-H)，5.08(s，1H，-NH)。 的制备将预处理过的氢化钠0.29克(60％)悬浮于5.0毫升DMF中，加入7.2毫升HMPA，通氮气保护，慢慢滴加含2.08克(7.2mmol)3-吲哚亚甲基取代丙二酸二乙酯的DMF溶液4毫升，室温搅拌反应40分钟，形成一混合液。在另一三口瓶中，加入2.0克(6.0mmol)上述产物B，以6毫升DMF溶解，加入1毫升HMPA，慢慢滴加上述形成的混和液，室温搅拌3小时，将反应混和液倒入400毫升冰水中，以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯层用水洗三次，无水硫酸镁干燥。滤除干燥剂，浓缩滤液，产物经皂化、脱羧后，得粗品2.9克，经柱分离，得纯品C 0.85克(31.8％)。MS[M+H]+＝442.6。TLC检测Rf＝0.59(氯仿∶甲醇＝6∶1)。
3.4 ENP002的制备将221毫克(0.5mmol)上述产物C溶于2毫升DCM中，加入117毫克(0.5mmol)D-4-氟苯丙氨酸甲酯盐酸盐，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴条件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得280毫克固体(92.4％)。MS[M+H]+＝607.5。TLC检测Rf＝0.80(氯仿∶甲醇∶冰醋酸＝16∶1∶0.5)。
按照实施例2和实施例3的方法合成了以下化合物序号 一级结构分子量 纯度(％)1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 598922 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH 612903 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 612964 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 619955 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 619956 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 619937 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH635.5 878 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH635.5 919 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH635.5 9810ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH6809011ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH 6469512ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH 6458213ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH 6458514ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH653.5 9215ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH6709416ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH 6709417ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Pbe(2-CH3-3-Cl)-OH 649.5 9718ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 6459019ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 6059220ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH 6199721ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH 6199522ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH 6199623ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH6809024ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH 6469725ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH653.5 8926ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318227ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318028ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH 649.5 97
29ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 645 9830ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 605 9731ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH 640 9532HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 633 9233HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 633 9334HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 593 9335HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 593 9836DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 651 9437DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH 685.59238DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 677 9539CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 649 8540CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH700 8741CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 675 8442ENP002 606 85其余化合物也可按照实施例2和实施例3的方法和途径合成。
生物活性实验材料Wistar大鼠 军事医学科学院实验动物中心台式自动平衡记录仪 上海大华仪器厂ET-1American peptide company10％碳酸钾自配改良Kreb’s-Ringer缓冲液自配实验方法样品溶液的配制定量称取样品(实施例1-35的化合物)2×10-6摩尔，加入120微升10％碱金属碳酸盐和80微升DMSO溶解，用改良Kreb，s-Ringer缓冲液定量稀释为5.0毫升，作为贮备液冰箱中保存。用缓冲液稀释为10-6、10-7、10-8和10-9摩尔四个浓度。
体外血管实验将大鼠断头处死，迅速开胸，摘取主动脉，置于盛有血管营养液的培养皿中，清除血污，仔细分离血管周围组织，剪成长约3毫米的动脉环，分别将两根直径为0.1毫米的不锈钢钢丝小心穿入，做成三角环状。随后置于盛有10毫升血管营养液的37℃恒温浴槽中，下端固定，上端通迁张力换能器连于台式自动平衡记录仪，持续通入95％氧气和5％二氧化碳混合气。动脉环负荷0.5克，稳定之后开始给药。
拮抗实验先用10nM量的ET-1诱发血管环收缩，约10分钟左右，达到平台后，给予10-9M样品，观察拮抗收缩效应。当低浓度没效时，逐渐升高浓度至10-6M。
结果按照上述方法，活性测定结果见下表药理活性结果序号 一级结构 拮抗活性(M)10-810-94 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH++15ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH ++18ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++31ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH +32HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++36DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH++37DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH ++38DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++39CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH ++42ENP002++++拮抗活性很强 +拮抗活性中等 -不表现拮抗活性
权利要求
1.式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO；AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代，当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
2.权利要求1的肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，其选自下面化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-C O-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002
3.权利要求1的肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，其中所述非肽类化合物为ENP002代表的下式化合物
4.药物组合物，其包括至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体及药用载体或赋形剂R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO。m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO。AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
5.权利要求4的药物组合物，其中式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体选自1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002。
6.权利要求1-3任一要求的肽类和非肽法生物或其立体异构体在制备用于预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病的药物中用途。
7.式(I)肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，其包括1)将化合物R-CO-AA1-OH与AA2-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-OP，其中R，AA1，AA2，如权利要求1中定义，P为C1-4烷基；2)将1)中所得产物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH；3)将2)中产物R-CO-AA1-AA2-OH与AA3-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-OP，其中P为C1-4烷基。所得产物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH；4)将2)中产物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应5-10分钟，再加入AA3-ONa，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。
8.式(I)非肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，按本领域已知方法和改良的Szelke文献方法制备，详细步骤参见实施例3。
全文摘要
本发明涉及具有内皮素受体拮抗活性的肽类和非肽类衍生物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在治疗与内皮素及前列腺有关疾病的用途。
文档编号A61P9/12GK1504480SQ03145929
公开日2004年6月16日 申请日期2003年7月17日 优先权日2002年11月28日
发明者刘克良, 耿波, 董俊军, 梁远军, 吴萍, 许笑宇, 李昕, 池木根 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所, 中国人民解放军军事医学科学院毒物药
技术领域：
本发明涉及具有内皮素受体拮抗活性的肽类和非肽类衍生物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病的用途。
背景技术：
内皮素(Endothelin，简称ET)是由血管内皮分泌的，它们是一类迄今发现的收缩血管作用最强的生物因子之一。人类或其它哺乳动物基因组存在三种分别编码内皮素的基因，形成的大内皮素在内皮素转换酶的作用下，转变为ET-1、ET-2、ET-3。它们均为二十一肽，含有两个二硫桥键。ET-1不但表达于非血管细胞，而且是唯一存在于血管内皮细胞的内皮素。ET-2和ET-3主要在脑、肾和肾上腺及小肠中。ET与靶细胞中的特异受体结合，最终产生相应的生物学效应。迄今已发现三类ET受体，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主动脉，心房，胎盘，肺、脑血管及肾脏血管的平滑肌中；ETB存在于中枢神经系统中的神经胶质细胞，脉落丛上皮细胞，肺、胎血、肾小球内皮，心室，脑中等，在血管平滑肌也有分布；ETC则主要分布于内皮细胞中。三种受体对各型ET的亲和力不同。内皮素及受体在人体内具有广泛的生理病理学反应。参与了如高血压、充血性心衰、心肌缺血、脑窒息、休克、急性肾衰、肺源性高血压、血管痉挛性疾病等过程。因此ET受体被认为是治疗心脑血管疾病的切实可行的新靶点，其受体拮抗剂有助于预防/治疗心血管疾病。
发明概述本发明的目的是寻找新的内皮素受体拮抗剂。
本发明人经研究，现已发现式(I)肽类和非肽类衍生物
R-CO-AA1-AA2-AA3-OH (I)或其立体异构体具有良好的内皮素受体拮抗活性，因此式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体可作为药物用于预防或治疗与内皮素及前列腺有关的疾病。
本发明第一方面涉及式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO；AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，PrO，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
本发明还涉及到含至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO。
AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；及药用载体或赋形剂的药物组合物。
本发明还涉及制备式(I)肽类衍生物或其立体异构体的方法，其包括1)将化合物RCO-A-OH与B-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成RCO-A-B-OP，其中R，A，B，如权利要求1中定义，P为C1-4烷基。
2)将1)中所得产物在1M碱/醇溶液中皂化，然后用酸酸化，生成RCO-A-B-OH，3)将2)中产物RCO-A-B-OH与C-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成RCO-A-B-C-OP，其中P为C1-4烷基，所得产物如2)中所述进行皂化反应，生成式(I)RCO-A-B-C-OH，4)将2)中产物RCO-A-B-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应5-10分钟，再加入C-ONa，生成RCO-A-B-C-ONa，然后用酸酸化，生成式(I)RCO-A-B-C-OH。
本发明还涉及式(I)非肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，按本领域已知方法和改良Szelke文献方法制备，详细步骤参见实施例3。
本发明还涉及式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体在预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病或症状的药物中用途。
本发明所用术语“式(I)肽类和非肽类衍生物立体异构体”是指其相应的D-或L-立体构型。
根据该发明，式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体可选自下面的化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH
5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH
34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002根据本发明，式(I)肽类衍生物或其立体异构体可按本领域已知方法、文献方法或下面所示的反应路线1制备反应路线1 在反应路线1中式R-CO-AA1-OH化合物(其中R，AA1如上定义)与AA2-OP(其中AA2如上定义，P为C1-4烷基，其可选自甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，叔丁基，优选甲基和乙基)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-OP化合物(其中R，AA1，AA2，P如上定义)。将R-CO-AA1-AA2-OP化合物在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH化合物(其中R，AA1，AA2如上定义)。将式R-CO-AA1-AA2-OH与AA3-OP(其中AA3，P如上定义)在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成式R-CO-AA1-AA2-AA3-OP(其中R，AA1，AA2，AA3，P如上定义)化合物。然后将所得R-CO-AA1-AA2-AA3-OP在1M NaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。或者将化合物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应，再与AA3-ONa生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH三肽衍生物或其立体异构体。
根据该发明，式(I)肽类衍生物立体异构体是指其相应的D-或L-立体构型。
根据该发明，式(I)肽类和非肽类衍生物及其立体异构体在动物抗ET1受体模型中显示出优良效果，因此可作为心血管药用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。
本发明因此还涉及含有作为活性成分的有效剂量的至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90％的式(I)肽类和非肽类和/或其立体异构体。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式(I)肽类和非肽类衍生物和/或其立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明式(I)肽类和非肽类衍生物及其立体异构体或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子，如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、硫酸钙、氯化钠、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中制成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，如水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、在、四个剂量形式给药。
具体实施例方式
在本发明中使用的缩写具有下面的含义Ala-丙氨酸，Gly-甘氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，Ile-异亮氨酸，Leu-亮氨酸，Mob-β-胡椒基丙氨酸Phe-苯丙氨酸，Phg-苯基甘氨酸，Pro-脯氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，Trp-色氨酸，Val-缬氨酸，MeVal-甲基缬氨酸HIM-六亚甲基亚胺，HMPA-六甲基膦酰胺NMM-N-甲基吗啡啉，TEA-三乙胺，DCM-二氯甲烷，DMF-二甲基甲酰胺，DCC-二环己基碳二亚胺，HOBt-1-羟基苯并三唑，THF-四氢呋喃。
本发明中，所有氨基酸构型除注明为D-型外，均为L-型。
实施例下面的实例及生物活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
实施例化合物熔点由RY-1型熔点仪测定，温度未经校正；1H NMR图谱由Bruker ARX 400型或US Varian Unity Inova 600型核磁仪测定；FAB质谱由Zabspect高分辨磁质谱仪测定；元素分析由Carlo Erba1106型元素分析仪测定；紫外光谱由UV-260紫外可见分光光度计测定；红外光谱由Magna IRTM550红外仪测定。实施例制备所用反应试剂均为商品化产品。
实施例1HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制备1.1胡椒醇(3，4-methylenedioxybenzyl alcohol)的制备15.0克(0.1mol)胡椒醛溶于20毫升甲醇中，加入12毫升37％的甲醛(0.12mol)，搅拌，混合物加热至65℃，使其全部溶解。当其完全溶解后，立即停止加热，水浴冷却，迅速加入12克氢氧化钠/12毫升水(0.3mol)的溶液，温度急剧升高，加热，保持内温70℃搅拌反应40分钟，然后升温回流20分钟。冷却，加入30毫升水，用苯提取(15毫升×4)，合并提取液，水洗两次，苯层以无水硫酸钠干燥。苯层浓缩，得油状液体14.8克(97.4％)，Rf＝0.30(石油醚-乙酸乙酯＝1∶1)。
1.2胡椒基氯甲烷(3，4-methylenedioxybenzyl chloride)的制备将68.4克胡椒醇(0.45mol)与110毫升浓盐酸(1.35mol)混合，激烈搅拌，固体溶解。待全部溶解后，用苯萃取，苯层以水、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥。浓缩苯层，得淡黄色油状液体76.1克，油泵减压蒸馏，收集100-120℃/5毫米汞柱的馏份，得66.2克(86.3％)。
1.3 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯的制备将钠9.0(0.388mol)克在600毫升绝对无水乙醇中回流(98±3℃)，至钠完全溶解。冷却至室温(为白色混浊液体)后，加入乙酰氨基丙二酸二乙酯84.29克(0.388mol)，搅拌溶解。加入上述制备的胡椒基氯甲烷66.2克(0.388mol)，反应液渐变浑浊，油浴回流(100℃±3)3小时。减压蒸出乙醇，得淡黄色油状物，慢慢固化，用苯溶解，苯层以10％的碳酸钠、水各洗两次后，用无水硫酸钠干燥。浓缩，冷却，得无色片状结晶107.95克(79.3％)，m.p.109-110℃。TLC检测石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)，Rf＝0.33。
1.4 N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸单乙酯的制备N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸二乙酯25.45克(0.0725mol)，用250毫升乙醇溶解，室温滴加6N氢氧化钠21.75毫升，TLC监测至初始反应物消失(2.5小时)。冰水浴条件下，滴加6N盐酸(约21.75毫升)调至pH3左右，得白色混悬液。浓缩，加入180毫升水，抽滤，得白色粉状固体，室温干燥。称重得22.3克(95.2％)。
1.5 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的制备N-乙酰-(2-胡椒基)丙二酸单乙酯22.3克(0.069mol)用210毫升二氧六环溶解，油浴回流(108℃±3)3.5小时。反应液浓缩，残余物用150毫升乙酸乙酯溶解，分别用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩至约15毫升，加入乙醚，放置，有白色结晶析出。滤集结晶，石油醚洗两次，室温干燥。称重得14.6克(76.9％)，m.p.85-87℃。TLC检测石油醚∶乙酸乙酯(1∶2)，Rf＝0.63。
1.6 N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯的拆分称量N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯11.16克(40.0mmol)，于研钵中研成细粉，混悬于280毫升磷酸盐缓冲溶液中，水浴(37℃±1)，溶液呈白色混悬状。加入枯草杆菌蛋白酶A约2.0毫克，pH值迅速下降，用0.5N氢氧化钠维持pH7.60左右。5.5小时后，pH值基本保持恒定，继续搅拌1.0小时。反应液用乙酸乙酯萃取至紫外灯下(λ＝254nm)无吸收为止，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶5.45克(97.7％)(D-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯)；水层于冰水浴中用浓盐酸调对pH2左右，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠洗两次，无水硫酸钠干燥。滤除干燥剂，滤液浓缩，得无色块状结晶4.70克(93.6％)(L-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸)。
1.7水解对上述所得(L)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸、(D)-N-乙酰-(2-胡椒基)丙氨酸乙酯用10％盐酸回流水解，得到(L)-(2-胡椒基)丙氨酸盐酸盐，m.p.235-237℃(分解)，[α]D20＝-13.4°(C＝1.45，1M HCl)(D)-(2-胡椒基)丙氨酸盐酸盐，m.p.235-237℃，[α]D20＝+13.1°(C＝1.47，1M HCl)。
IR3080-3020，2560，2480，2040(NH3+)，1600(NH3+，COO-)，1040(-O-CH2-O)；1HNMR(D2O)δ3.1-3.3(2H，-CH2Ar)，4.25(1H，-CHCOOH)，5.90(s，2H，-O-CH2-O)，7.27-6.8-6.9(m，3H，Ar-H)；1.8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH的制备将D-色氨酸甲酯盐酸盐127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入六亚甲基胺甲酰亮氨酸128毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得180毫克固体。将该固体溶于2毫升THF中，冰盐浴冷却，加入55微升NMM和68毫升氯甲酸异丁酯，反应5分钟后，加入预先配好的含122.75毫克D-胡椒基丙氨酸盐酸盐的10％的碳酸钠溶液(1毫升)，冰盐浴反应30分钟后，室温反应1.5小时，减压浓缩，加入10毫升水，乙醚提取不溶物，水层用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，乙酸乙酯提取(3×15毫升)，合并提取液，以无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得到白色固体290毫克(91.6％)。MS[M+H]+＝634.2，[M+Na]+＝656.4。
TLC检测氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.68。
实施例2ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH的制备将D-色氨酸甲酯盐酸盐127毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)，使其溶解，加入ABO-CO-Leu-OH 134毫克(0.5mmol)，用2毫升DCM溶解。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得226毫克固体(100％)。将该固体溶于2毫升DCM中，加入134毫克D-3-氯-4-氟苯丙氨酸甲酯盐酸盐，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴条件下加入HOBt 71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得310毫克固体(95.2％)。MS[M+H]+＝654.8。TLC检测氯仿∶甲醇∶冰醋酸(16∶1∶0.5)，Rf＝0.52。
实施例3ENP002的制备 的制备将10.24克(0.04mol)HIM-CO-Leu-OH，溶于150毫升乙醚中，加入TEA5.55毫升(0.04mol)，使其溶解，通氮气保护。冰盐浴条件下加入5.71毫升氯甲酸异丁酯，反应15分钟。在该温度下慢慢加入含3克重氮甲烷的乙醚溶液200毫升，反应3小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得固体产物A 5.03克(90％)。MS[M+H]+＝281.4。TLC检测Rf＝0.70(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.42-1.80(t，11H，HIM环上8H和亮氨酸侧链上3H)，3.20(4H，HIM环上4H)，4.20(brq，1H，-CHN2)，4.95(brd，1H，α-H)，5.48(s，1H，-NH)。 的制备将4.2克(0.015mol)上述产物A溶于45毫升THF中，冰盐浴冷却，慢慢滴加含1.34克溴化氢的二氧六环溶液20毫升，反应3小时。减压浓缩，以50毫升乙酸乙酯溶解，用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得白色固体产物B 4.6克(92.2％)。MS[M+H]+＝334.5。TLC检测Rf＝0.65(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5)。1HNMR(CDCl3)δ0.93(t，6H，-CH(CH3)2)，1.32-1.80(t，11H，HIM环上8H和亮氨酸侧链上3H)，3.15(4H，HIM环上4H)，4.07(s，2H，-CH2Br)，4.55(brd，1H，α-H)，5.08(s，1H，-NH)。 的制备将预处理过的氢化钠0.29克(60％)悬浮于5.0毫升DMF中，加入7.2毫升HMPA，通氮气保护，慢慢滴加含2.08克(7.2mmol)3-吲哚亚甲基取代丙二酸二乙酯的DMF溶液4毫升，室温搅拌反应40分钟，形成一混合液。在另一三口瓶中，加入2.0克(6.0mmol)上述产物B，以6毫升DMF溶解，加入1毫升HMPA，慢慢滴加上述形成的混和液，室温搅拌3小时，将反应混和液倒入400毫升冰水中，以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯层用水洗三次，无水硫酸镁干燥。滤除干燥剂，浓缩滤液，产物经皂化、脱羧后，得粗品2.9克，经柱分离，得纯品C 0.85克(31.8％)。MS[M+H]+＝442.6。TLC检测Rf＝0.59(氯仿∶甲醇＝6∶1)。
3.4 ENP002的制备将221毫克(0.5mmol)上述产物C溶于2毫升DCM中，加入117毫克(0.5mmol)D-4-氟苯丙氨酸甲酯盐酸盐，用2毫升DMF溶解，再加入N-甲基吗啡啉55微升(0.5mmol)。冰浴条件下加入HOBt71毫克(0.525mmol)和DCC 108毫克(0.525mmol)。继续保持冰浴0.5小时后，室温反应6小时。浓缩，加入乙酸乙酯，水洗一次后，分别用10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠和饱和氯化钠各洗三次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。将该油状物用2毫升甲醇溶解，于冰水浴中加入1.25毫升1M氢氧化钠，室温下搅拌，TLC检测，待反应完全后，用10％柠檬酸酸化至pH3.0左右，析出固体，乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤后，用无水硫酸钠干燥5小时。滤除干燥剂，浓缩滤液，得无色油状物。冰浴下加入石油醚，析出固体，滤集干燥得280毫克固体(92.4％)。MS[M+H]+＝607.5。TLC检测Rf＝0.80(氯仿∶甲醇∶冰醋酸＝16∶1∶0.5)。
按照实施例2和实施例3的方法合成了以下化合物序号 一级结构分子量 纯度(％)1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 598922 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH 612903 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 612964 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 619955 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 619956 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 619937 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH635.5 878 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH635.5 919 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH635.5 9810ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH6809011ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH 6469512ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH 6458213ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH 6458514ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH653.5 9215ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH6709416ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH 6709417ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Pbe(2-CH3-3-Cl)-OH 649.5 9718ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 6459019ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 6059220ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH 6199721ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH 6199522ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH 6199623ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH6809024ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH 6469725ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH653.5 8926ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318227ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH 8318028ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH 649.5 97
29ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 645 9830ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 605 9731ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH 640 9532HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 633 9233HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH 633 9334HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH 593 9335HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH 593 9836DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 651 9437DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH 685.59238DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 677 9539CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 649 8540CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH700 8741CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH 675 8442ENP002 606 85其余化合物也可按照实施例2和实施例3的方法和途径合成。
生物活性实验材料Wistar大鼠 军事医学科学院实验动物中心台式自动平衡记录仪 上海大华仪器厂ET-1American peptide company10％碳酸钾自配改良Kreb’s-Ringer缓冲液自配实验方法样品溶液的配制定量称取样品(实施例1-35的化合物)2×10-6摩尔，加入120微升10％碱金属碳酸盐和80微升DMSO溶解，用改良Kreb，s-Ringer缓冲液定量稀释为5.0毫升，作为贮备液冰箱中保存。用缓冲液稀释为10-6、10-7、10-8和10-9摩尔四个浓度。
体外血管实验将大鼠断头处死，迅速开胸，摘取主动脉，置于盛有血管营养液的培养皿中，清除血污，仔细分离血管周围组织，剪成长约3毫米的动脉环，分别将两根直径为0.1毫米的不锈钢钢丝小心穿入，做成三角环状。随后置于盛有10毫升血管营养液的37℃恒温浴槽中，下端固定，上端通迁张力换能器连于台式自动平衡记录仪，持续通入95％氧气和5％二氧化碳混合气。动脉环负荷0.5克，稳定之后开始给药。
拮抗实验先用10nM量的ET-1诱发血管环收缩，约10分钟左右，达到平台后，给予10-9M样品，观察拮抗收缩效应。当低浓度没效时，逐渐升高浓度至10-6M。
结果按照上述方法，活性测定结果见下表药理活性结果序号 一级结构 拮抗活性(M)10-810-94 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH++15ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH ++18ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++31ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH +32HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++36DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH++37DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH ++38DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH ++39CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH ++42ENP002++++拮抗活性很强 +拮抗活性中等 -不表现拮抗活性
权利要求
1.式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO；m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO；AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代，当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
2.权利要求1的肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，其选自下面化合物1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-C O-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002
3.权利要求1的肽类和非肽类衍生物或其立体异构体，其中所述非肽类化合物为ENP002代表的下式化合物
4.药物组合物，其包括至少一种式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体及药用载体或赋形剂R-CO-AA1-AA2-AA3-OH 式(I)其中，R为双取代链烃亚胺基、六亚甲基亚胺基或以下基团 式中n1、n2、n3为0，1，2，3整数，n3≠0，0≤n1+n2≤4；X1为NH、O、S、CH2；X2为N、CH；当n1＝n2＝1，n3＝2，X1为CH2，X2为N原子时，R缩写为ABO。m1、m2、m3和m4为0，1，2整数，0≤m1+m2≤4，0≤m3+m4≤4；y1、y2和y3为CH2、O、S和NH，当它们为NH或CH2时，可作为N端结构R，形式为N或CH；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y1、y2为O原子，y3为N原子时，R缩写为DAD；当m1＝m2＝1，m3＝m4＝2，y3为CH2，y1为O原子，y2为N原子时，R缩写为CSO。AA1为L或D型Ala，Ile，Leu，MeVal，Pro，Val或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基异丁酸；AA2为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA2为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体；AA3为非天然芳香性氨基酸、苯基甘氨酸或非氨基酸，其中芳香环中的苯基可在2、3、4或5位上被选自卤素，硝基，脲基，甲氧基，羧基或C1-C4烷基单取代或二取代。当AA3为非氨基酸，特别是连接氨基酸残基的-CONH-中的-NH被-CH2-，-S-，-O-等取代时，式(1)为非肽类衍生物或其立体异构体。
5.权利要求4的药物组合物，其中式(I)肽类和非肽类衍生物或其立体异构体选自1 ABO-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 ABO-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 ABO-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl2)-OH16 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl2)-OH17 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH19 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH20 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH22 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH23 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH24 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH25 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH26 ABO-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH27 ABO-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH28 ABO-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH29 ABO-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH30 ABO-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH31 ABO-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-OH32 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH33 HIM-CO-Leu-D-Mob-D-Trp-OH34 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phg(4-F)-OH35 HIM-CO-Leu-D-Phg(4-F)-D-Trp-OH36 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH37 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH38 DAD-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH39 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH40 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3，4-Cl2)-OH41 CSO-CO-Leu-D-Trp-D-Mob-OH42 ENP002。
6.权利要求1-3任一要求的肽类和非肽法生物或其立体异构体在制备用于预防或治疗与内皮素及前列腺有关疾病的药物中用途。
7.式(I)肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，其包括1)将化合物R-CO-AA1-OH与AA2-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-OP，其中R，AA1，AA2，如权利要求1中定义，P为C1-4烷基；2)将1)中所得产物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成R-CO-AA1-AA2-OH；3)将2)中产物R-CO-AA1-AA2-OH与AA3-OP在DMF-DCM，NMM，DCC-HOBt中反应，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-OP，其中P为C1-4烷基。所得产物在1MNaOH/甲醇溶液中皂化，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH；4)将2)中产物R-CO-AA1-AA2-OH在THF、NMM中与氯甲酸异丁酯反应5-10分钟，再加入AA3-ONa，生成R-CO-AA1-AA2-AA3-ONa，然后用盐酸酸化，生成式(I)R-CO-AA1-AA2-AA3-OH。
8.式(I)非肽类衍生物或其立体异构体衍生物的制备方法，按本领域已知方法和改良的Szelke文献方法制备，详细步骤参见实施例3。
全文摘要
本发明涉及具有内皮素受体拮抗活性的肽类和非肽类衍生物，其制备方法，含它们的药物组合物及它们在治疗与内皮素及前列腺有关疾病的用途。
文档编号A61P9/12GK1504480SQ03145929
公开日2004年6月16日 申请日期2003年7月17日 优先权日2002年11月28日
发明者刘克良, 耿波, 董俊军, 梁远军, 吴萍, 许笑宇, 李昕, 池木根 申请人:中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所, 中国人民解放军军事医学科学院毒物药
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