Sars病毒抗原抗体复合疫苗及实验动物模型与方法
专利名称：Sars病毒抗原抗体复合疫苗及实验动物模型与方法
技术领域：
本发明涉及了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
背景技术：
传统灭活疫苗与现代亚单位抗原蛋白疫苗需要经过多次接种、比较长的体液免疫机制诱导激发反应时间才能在人体产生比较牢固的免疫力，因此当今研制的SARS病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗，不利于未来预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种。在人类群体中存在有针对病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗无反应、或低反应人群，在此次发生的SARS疫情中存在有无症状SARS病毒感染者，接种SARS病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗将不能为无反应、或低反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护。
发明内容
本发明公开了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
本发明的目的是，提供一种能够将SARS病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的SARS病毒抗原抗体复合疫苗。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。病毒抗原的特异性抗体已经被现代科学证实对许多种人类病毒性疾病有预防和治疗作用，是能够有效抑制病毒感染者发病，有效阻断病毒感染传播链、有实用价值的短期抗病毒感染免疫防御疫苗，并且针对病毒感染具有特异针对性治疗作用；而且它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间。并且抗SARS临床治疗医学已经证实，应用SARS病患康复者的血清抗体确实能够有效治疗SARS重症患者，它证实在SARS病毒的分子生物结构物质中，存在有能够在被感染者机体诱导激发出有效抗SARS病毒感染致病机制的、某些种体液免疫保护应答反应机制的保护抗原，可以使SARS病毒感染者淋巴免疫系统产生出某些种能够有效中和阻断SARS病毒感染致病机制的抗体；它为现代科学研究今后将能够利用SARS病毒的保护抗原，研究、设计、开发、生产制造具有实用价值的SARS疫苗，提供了极重要的确切的临床治疗医学科学依据。因此，将SARS病毒抗原的特异性抗体作为生物佐剂，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对ARS疫苗无反应、或低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应；将SARS病毒抗原的特异性抗体作为能够有效阻断SARS病毒感染致病机制的生物药，它能够为针对ARS疫苗无反应、或低反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。因此将SARS病毒抗原与特异性抗体相组合，能够提高SARS病毒灭活疫苗和亚单位抗原蛋白疫苗与特异性抗体构成的复合疫苗实际使用价值。例如，可通过应用Vero细胞培养SARS病毒在经过收获病毒、冻融、超声波处理、过滤、提纯、甲醛灭活方法而获得SARS全病毒灭活抗原，与从SARS恢复期病人获取的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS全病毒的特异性多克隆IgG抗体相结合，构成SARS全病毒灭活抗原与特异性多克隆IgG抗体复合疫苗。例如，可通过将SARS病毒的亚单位保护抗原S蛋白的表达基因、通过现代基因工程克隆移植到酵母菌的染色体上、表达生产出的SARS病毒的亚单位保护抗原S蛋白，与被SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白所免疫的志愿者身体中获取的血清、经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体相结合，构成SARS病毒基因工程亚单位S蛋白抗原与特异性多克隆IgG抗体复合疫苗。例如，可通过上述现代基因工程方法将SARS病毒的亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位3CL抗原蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽的表达基因克隆移植到酵母菌的染色体上，表达生产出的SARS病毒亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位3CL抗原蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽，与相应的人血源特异性多克隆抗体、相应的人血源特异性单克隆抗体、相应的生物工程人源特异性多克隆抗体、相应的生物工程人源特异性单克隆抗体、相应的生物工程噬菌体人源特异性单克隆抗体相结合，构成SARS病毒的各种亚单位蛋白抗原与特异性抗体复合疫苗。例如，可通过生物化学方法将SARS全病毒抗原分解为多种不同的亚单位抗原蛋白、而获得的亚单位抗原S蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原3CL蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽，与相应的人血源特异性多克隆抗体、相应的人血源特异性单克隆抗体、相应的生物工程人源特异性多克隆抗体、相应的生物工程人源特异性单克隆抗体、相应的生物工程噬菌体人源特异性单克隆抗体相结合，构成SARS病毒的各种亚单位蛋白抗原与特异性抗体复合疫苗。
具体实施例方式
为达到上述目的，实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS全病毒灭活抗原，与(2).5～30倍重量的人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).5ug～50ug的SARS全病毒灭活抗原，与(2).1g人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种1g～2g此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS全病毒灭活抗原，与(2).1～5倍重量的生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).20ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原，与(2).1g生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种0.2g～1g此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).5～30倍重量的人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).5ug～50ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1g人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种1g～2g此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1～5倍重量的生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).20ug～100ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1g生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种0.2g～1g此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
例如，应用乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白模拟SARS病毒抗原S蛋白、模拟SARS病毒抗原M蛋白，与小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体模拟特异性抗体，构成的模拟复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被模拟SARS病毒亚单位抗原蛋白、模拟SARS病毒亚单位抗原蛋白与模拟特异性抗体的模拟复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的模拟对比预备实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白，与5mg小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗，另取5mg乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白，另取5mg小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、抗原HBsAg蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、抗原HBsAg蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠被诱导激发体液免疫应答反应所表达的抗HBsAg抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的抗HBsAg抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析模拟预备实验应用模拟特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强模拟SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度，减去针对第2组仅注射单克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原HBsAg蛋白的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度作比较，即可获得到模拟特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强模拟SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。它能够为以下要做的SARS病毒抗原S蛋白、SARS病毒抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗的，实验动物小鼠被诱导激发免疫应答反应对比实验，积累试验经验。
例如，应用SARS病毒亚单抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被SARS病毒亚单位抗原S蛋白、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的对比实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与10mg从几十只被SARS病毒亚单抗原S蛋白多次免疫过的BALB/c小鼠心脏取血、获得的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗，另取5mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，另取10mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠，被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析实验应用SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度，减去针对第2组仅注射SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原SARS病毒亚单位抗原S蛋白的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度作比较，即可获得到SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。
例如，应用SARS病毒亚单抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被SARS病毒亚单位抗原M蛋白、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的对比实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白，与10mg从几十只被SARS病毒亚单抗原M蛋白多次免疫过的BALB/c小鼠心脏取血、获得的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗，另取5mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白，另取10mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠，被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析实验应用SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度，减去针对第2组仅注射SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原SARS病毒亚单位抗原M蛋白的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度作比较，即可获得到SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。
权利要求
1.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗，其特征在于它由SARS病毒抗原(1)，与SARS病毒抗原的特异性抗体(2)复合构成。
2.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与方法，其特征在于它由普通实验动物(3)分组，分别注射SARS病毒抗原(1)、SARS病毒抗原抗体复合疫苗，分别采血检测各自编号实验动物被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，对比分析实验应用SARS病毒抗原的特异性抗体(2)作为生物佐剂，能够改变实验动物针对SARS病毒候选疫苗免疫应答机制的生物佐剂作用。
3.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于它由普通实验动物(3)、免疫缺陷实验动物(4)分组，分别注射SARS病毒抗原(1)、SARS病毒抗原抗体复合疫苗，分别采血检测各自编号实验动物被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，对比分析实验应用SARS病毒抗原的特异性抗体(2)作为生物佐剂，能够改变普通实验动物、免疫缺陷实验动物针对SARS病毒候选疫苗免疫应答机制的生物佐剂作用。
4.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS全病毒灭活抗原。
5.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原蛋白。
6.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原S蛋白。
7.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原M蛋白。
8.根据权利要求1至7中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽。
9.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是人血源多克隆特异性抗体。
10.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是人血源单克隆特异性抗体。
11.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程人源多克隆特异性抗体。
12.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程人源单克隆特异性抗体。
13.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程噬菌体人源单克隆特异性抗体。
14.根据权利要求2、3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于普通实验动物(3)是实验动物小鼠。
15.根据权利要求3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于普通实验动物(3)是实验动物小鼠，免疫缺陷实验动物(4)是实验动物裸小鼠。
全文摘要
本发明公开了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。
文档编号A61K39/215GK1480215SQ0314623
公开日2004年3月10日 申请日期2003年7月7日 优先权日2003年7月7日
发明者叶新新 申请人:叶新新
技术领域：
本发明涉及了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
背景技术：
传统灭活疫苗与现代亚单位抗原蛋白疫苗需要经过多次接种、比较长的体液免疫机制诱导激发反应时间才能在人体产生比较牢固的免疫力，因此当今研制的SARS病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗，不利于未来预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种。在人类群体中存在有针对病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗无反应、或低反应人群，在此次发生的SARS疫情中存在有无症状SARS病毒感染者，接种SARS病毒灭活疫苗与亚单位抗原蛋白疫苗将不能为无反应、或低反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护。
发明内容
本发明公开了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
本发明的目的是，提供一种能够将SARS病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的SARS病毒抗原抗体复合疫苗。及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。病毒抗原的特异性抗体已经被现代科学证实对许多种人类病毒性疾病有预防和治疗作用，是能够有效抑制病毒感染者发病，有效阻断病毒感染传播链、有实用价值的短期抗病毒感染免疫防御疫苗，并且针对病毒感染具有特异针对性治疗作用；而且它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间。并且抗SARS临床治疗医学已经证实，应用SARS病患康复者的血清抗体确实能够有效治疗SARS重症患者，它证实在SARS病毒的分子生物结构物质中，存在有能够在被感染者机体诱导激发出有效抗SARS病毒感染致病机制的、某些种体液免疫保护应答反应机制的保护抗原，可以使SARS病毒感染者淋巴免疫系统产生出某些种能够有效中和阻断SARS病毒感染致病机制的抗体；它为现代科学研究今后将能够利用SARS病毒的保护抗原，研究、设计、开发、生产制造具有实用价值的SARS疫苗，提供了极重要的确切的临床治疗医学科学依据。因此，将SARS病毒抗原的特异性抗体作为生物佐剂，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对ARS疫苗无反应、或低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应；将SARS病毒抗原的特异性抗体作为能够有效阻断SARS病毒感染致病机制的生物药，它能够为针对ARS疫苗无反应、或低反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。因此将SARS病毒抗原与特异性抗体相组合，能够提高SARS病毒灭活疫苗和亚单位抗原蛋白疫苗与特异性抗体构成的复合疫苗实际使用价值。例如，可通过应用Vero细胞培养SARS病毒在经过收获病毒、冻融、超声波处理、过滤、提纯、甲醛灭活方法而获得SARS全病毒灭活抗原，与从SARS恢复期病人获取的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS全病毒的特异性多克隆IgG抗体相结合，构成SARS全病毒灭活抗原与特异性多克隆IgG抗体复合疫苗。例如，可通过将SARS病毒的亚单位保护抗原S蛋白的表达基因、通过现代基因工程克隆移植到酵母菌的染色体上、表达生产出的SARS病毒的亚单位保护抗原S蛋白，与被SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白所免疫的志愿者身体中获取的血清、经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体相结合，构成SARS病毒基因工程亚单位S蛋白抗原与特异性多克隆IgG抗体复合疫苗。例如，可通过上述现代基因工程方法将SARS病毒的亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位3CL抗原蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽的表达基因克隆移植到酵母菌的染色体上，表达生产出的SARS病毒亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位3CL抗原蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽，与相应的人血源特异性多克隆抗体、相应的人血源特异性单克隆抗体、相应的生物工程人源特异性多克隆抗体、相应的生物工程人源特异性单克隆抗体、相应的生物工程噬菌体人源特异性单克隆抗体相结合，构成SARS病毒的各种亚单位蛋白抗原与特异性抗体复合疫苗。例如，可通过生物化学方法将SARS全病毒抗原分解为多种不同的亚单位抗原蛋白、而获得的亚单位抗原S蛋白、亚单位抗原M蛋白、亚单位抗原N蛋白、亚单位抗原3CL蛋白、或SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽，与相应的人血源特异性多克隆抗体、相应的人血源特异性单克隆抗体、相应的生物工程人源特异性多克隆抗体、相应的生物工程人源特异性单克隆抗体、相应的生物工程噬菌体人源特异性单克隆抗体相结合，构成SARS病毒的各种亚单位蛋白抗原与特异性抗体复合疫苗。
具体实施例方式
为达到上述目的，实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS全病毒灭活抗原，与(2).5～30倍重量的人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).5ug～50ug的SARS全病毒灭活抗原，与(2).1g人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种1g～2g此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS全病毒灭活抗原，与(2).1～5倍重量的生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).20ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原，与(2).1g生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种0.2g～1g此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).5～30倍重量的人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS全病毒灭活抗原的，此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).5ug～50ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1g人血源特异性多克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种1g～2g此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1～5倍重量的生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应的，SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种含有5ug～100ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白的，此类SARS全病毒灭活抗原与特异性抗体的复合疫苗，2～4周后再重复接种1次。
实施本发明采用的方案将所获得的(1).20ug～100ug的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与(2).1g生物工程人源特异性单克隆抗体充分混合构成的，能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用的，SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗。应用于预防可能会在全世界再次发生的SARS新疫情的紧急应急预防接种，成人一次接种0.2g～1g此类SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，1个月后再重复接种1次。
SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法。
例如，应用乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白模拟SARS病毒抗原S蛋白、模拟SARS病毒抗原M蛋白，与小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体模拟特异性抗体，构成的模拟复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被模拟SARS病毒亚单位抗原蛋白、模拟SARS病毒亚单位抗原蛋白与模拟特异性抗体的模拟复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的模拟对比预备实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白，与5mg小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗，另取5mg乙肝病毒表面抗原HBsAg蛋白，另取5mg小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、抗原HBsAg蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、抗原HBsAg蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、小鼠抗HBsAg单克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠被诱导激发体液免疫应答反应所表达的抗HBsAg抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的抗HBsAg抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析模拟预备实验应用模拟特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强模拟SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射抗原HBsAg蛋白与单克隆IgG抗体的模拟复合疫苗的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度，减去针对第2组仅注射单克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原HBsAg蛋白的、实验动物所检测到的抗HBsAg抗体浓度作比较，即可获得到模拟特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强模拟SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。它能够为以下要做的SARS病毒抗原S蛋白、SARS病毒抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗的，实验动物小鼠被诱导激发免疫应答反应对比实验，积累试验经验。
例如，应用SARS病毒亚单抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被SARS病毒亚单位抗原S蛋白、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性抗体的复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的对比实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，与10mg从几十只被SARS病毒亚单抗原S蛋白多次免疫过的BALB/c小鼠心脏取血、获得的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗，另取5mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白，另取10mg的SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠，被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析实验应用SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射SARS病毒亚单位抗原S蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度，减去针对第2组仅注射SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性多克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原SARS病毒亚单位抗原S蛋白的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原S蛋白抗体浓度作比较，即可获得到SARS病毒亚单位抗原S蛋白的特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。
例如，应用SARS病毒亚单抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗所做的，普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，各自分别被SARS病毒亚单位抗原M蛋白、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性抗体的复合疫苗，能够诱导激发出不同免疫应答反应的对比实验应用30只6～8周龄雄性BALB/c小鼠、30只6～8周龄雄性BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠，各自分为1、2、3组，每组各10只编号实验小鼠；取5mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白，与10mg从几十只被SARS病毒亚单抗原M蛋白多次免疫过的BALB/c小鼠心脏取血、获得的血清经过离心提取丙种免疫球蛋白、再经过DE52离子交换层析纯化而获得的、SARS病毒亚单位保护抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体，放入无菌乳钵中常温下轻经研磨5分钟充分混合、制备成SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗，另取5mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白，另取10mg的SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体；分别在0、7、14天，给1组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液，给1组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射3ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白100ul生理盐水注射液，给2组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射6ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体100ul生理盐水注射液，给3组10只编号实验BALB/c-nu/nu免疫缺陷裸小鼠皮下各自注射9ug的、SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗100ul生理盐水注射液；分别在第10、15、20、30、40天，对所有BALB/c编号小鼠、BALB/c-nu/nu编号免疫缺陷裸小鼠尾部采血，应用ELISA方法分别检测各自编号实验小鼠，被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体IgM和IgG的浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体IgG2的浓度及发生规律。对比分析实验应用SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。将针对第3组注射SARS病毒亚单位抗原M蛋白与特异性多克隆IgG抗体的复合疫苗的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度，减去针对第2组仅注射SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性多克隆IgG抗体的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度，与针对第1组仅注射抗原SARS病毒亚单位抗原M蛋白的、实验动物所检测到的抗SARS病毒亚单位抗原M蛋白抗体浓度作比较，即可获得到SARS病毒亚单位抗原M蛋白的特异性抗体作为生物佐剂，对普通实验动物小鼠、免疫缺陷实验动物裸小鼠，能够增强SARS候选疫苗的免疫原性、与缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间的生物佐剂作用。
权利要求
1.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗，其特征在于它由SARS病毒抗原(1)，与SARS病毒抗原的特异性抗体(2)复合构成。
2.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与方法，其特征在于它由普通实验动物(3)分组，分别注射SARS病毒抗原(1)、SARS病毒抗原抗体复合疫苗，分别采血检测各自编号实验动物被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，对比分析实验应用SARS病毒抗原的特异性抗体(2)作为生物佐剂，能够改变实验动物针对SARS病毒候选疫苗免疫应答机制的生物佐剂作用。
3.一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于它由普通实验动物(3)、免疫缺陷实验动物(4)分组，分别注射SARS病毒抗原(1)、SARS病毒抗原抗体复合疫苗，分别采血检测各自编号实验动物被诱导激发体液免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，被诱导激发由补体介导细胞毒的、细胞免疫应答反应所表达的、抗SARS病毒抗原的抗体浓度及发生规律，对比分析实验应用SARS病毒抗原的特异性抗体(2)作为生物佐剂，能够改变普通实验动物、免疫缺陷实验动物针对SARS病毒候选疫苗免疫应答机制的生物佐剂作用。
4.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS全病毒灭活抗原。
5.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原蛋白。
6.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原S蛋白。
7.根据权利要求1至3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原M蛋白。
8.根据权利要求1至7中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原(1)是SARS病毒亚单位抗原蛋白的部分片段多肽。
9.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是人血源多克隆特异性抗体。
10.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是人血源单克隆特异性抗体。
11.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程人源多克隆特异性抗体。
12.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程人源单克隆特异性抗体。
13.根据权利要求1至8中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗、及SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于SARS病毒抗原的特异性抗体(2)是生物工程噬菌体人源单克隆特异性抗体。
14.根据权利要求2、3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于普通实验动物(3)是实验动物小鼠。
15.根据权利要求3中所述的SARS病毒抗原抗体复合疫苗的实验动物免疫应答对比实验模型与实验方法，其特征在于普通实验动物(3)是实验动物小鼠，免疫缺陷实验动物(4)是实验动物裸小鼠。
全文摘要
本发明公开了一种SARS病毒抗原抗体复合疫苗与实验方法。是SARS病毒抗原与特异性抗体的复合疫苗，它能够将病毒抗原直接呈递给抗原呈递APC细胞单核/巨噬细胞，激发淋巴免疫系统的免疫应答机制，缩短免疫防御保护机制诱导激发反应时间，改善针对SARS疫苗无反应、低反应人群针对SARS疫苗的诱导激发免疫应答反应，能够为针对SARS疫苗无反应、低免疫反应人群、与无症状SARS病毒感染者，提供有效的抗SARS病毒感染免疫防御保护，并具有抗SARS病毒感染的特异针对性治疗作用。
文档编号A61K39/215GK1480215SQ0314623
公开日2004年3月10日 申请日期2003年7月7日 优先权日2003年7月7日
发明者叶新新 申请人:叶新新
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