天然抗病毒物和包括其的组合物的制作方法
专利名称：天然抗病毒物和包括其的组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种天然抗病毒剂和包括其的组合物。更具体地，本发明涉及一种应 用从泡菜(Kimchi)分离的乳酸菌制备的天然抗病毒剂，其表现出针对病毒生长的高抑制 活性，而没有副作用，并且对机体是安全的，本发明还涉及其中包括所述天然抗病毒剂的组 合物，诸如饮料、饲料、食品、药物、化妆品、等等。
背景技术：
引起每年一度的流感流行的流感病毒，是一种碱性单链RNA病毒，其具有包裹所 述RNA的大小为1/10，000mm的包膜。按照抗原性，流感病毒分为A、B和C型。它们之中， 流感型A和B病毒引起流行病。叫作血细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(neuramidase) (NA) 的两种类型的糖蛋白，象突起一样从表面突出来，并且8种RNA片段存在于病毒内部。流感 病毒的两种表面糖蛋白HA和NA通常在相同亚型内经历变异，这导致每年新的抗原突变体 的出现。当咳嗽时，流感病毒与猛烈释放的空气一起从肺部喷出，并且通过鼻子或嘴进入 其它机体内。在体内，流感病毒，应用病毒的糖蛋白HA突起，附着并且穿透上呼吸道的黏膜 上皮细胞，并且随后在这里增殖。目前积累的研究结果表明病毒感染的确切机制。一般地， 在靶细胞表面上，病毒与由糖蛋白的糖链组成的受体结合，并且经历内吞作用和随后病毒 包膜与内体的融合，而进入靶细胞。在细胞内部，病毒通过转录和复制它们的基因并且从它 们的宿主的质膜产生子代病毒颗粒而进行增殖。流感病毒的感染通常伴随着发烧、头痛、关 节痛、全身虚脱、等等，以及具有呼吸症状，包括喉咙痛、流鼻涕、鼻塞、等等。所述流感在症 状和严重程度上不同于感冒，并且特征在于极恶劣的传染性，这在全世界导致短时间的爆 发型流行病。由于流感病毒具有每年都进行变异的HA结构，所以应答早先的感染而产生的 抗体不能有效地针对正在发生的流行病，这是流感为何流行的原因。为了预防流感病毒的传染，科学家们已规划了用于抑制附着到上皮细胞、穿入细 胞、转录、复制、翻译、和从细胞释放子代的方法，所有这些都是抗流感病毒药剂的目标。在 这些方法下，已经开发了抗病毒剂，诸如金刚烷胺、金刚乙胺、扎那米韦等，但是，由于据报 道它们在中枢神经系统、消化系统和自主神经系统中产生显著的不利副作用，诸如超敏性， 所以必须极端小心地应用。如上文所述，流感病毒感染呼吸道的黏膜上皮，并且在那里繁殖。如果一种疫苗的 病毒类型不同于所述流行的流感病毒，那么接种可能不会有效地预防流感病毒的感染和增 殖。事实上，没有针对流感病毒的治疗上有效的治疗或预防药剂。现在，经常刷牙，保持喉 咙湿润，并且进行充分的休息和营养，是已知为最有效的流感病毒感染的预防方法。
由于这些原因，存在对于具有针对流感病毒的高抑制活性并且通常可以没有不利 副作用地应用的抗病毒剂的紧急需求。 病毒疾病是最大地危险和破坏家禽产业的因素之一。现在，据说禽流感病毒成为 全人类以及家禽产业的威胁。最近，已经频繁地报道了 H5m高致病性禽流感(HPAI)在中 国和东南亚禽类中的爆发。从目前的情形在专家们看来，禽流感病毒高度适应进行突变，而 不是被辐射，这导致对人类的可怕的问题。在印尼，已经发现针对鸟类流感的流行不可能采取预防性措施。在中国，检测到了 许多H5m HPAI病毒，并且它们以比其控制速度更快的速度进行传播。因此，除了接种外没 有办法。事实上，接种正在许多地区进行。越南和泰国处于更加严重的情形中，具有增加数目的鸟类流感已经引起人类死亡 的报道。更坏地，在这些国家几乎没有控制流感流行的可能性。泰国，典型的禽类出口国家， 响应禽流感的爆发，坚持将处于危险的禽类宰杀的政策而不是进行接种。为了根除禽流感， 泰国政府采取了极端的措施，对未经允许而免疫了家禽的人员进行罚款。理由就是，由于接 种使得不可能在全国范围内根除禽流感，泰国不得不停止禽类出口。在几乎所有的具有禽类产业的国家，禽源传染性支气管炎(IB)是极大地破坏家 禽饲养业的代表性疾病。在实践中，即使一些国家根除了新城疫(ND)或禽流感(Al)，到目 前还没有国家终止IB。在韩国，国家兽医研究和检疫服务机构(National Veterinary Researchand Quarantine Service)的检查数据表明，IB是最流行的，在禽类疾病的发生总数上，其在 2001年包括6%和在2002年包括5. 2%。IB病毒是研究最深入的冠状病毒，并且具有令人 难以置信的简单结构。IB病毒，也叫作可移动病毒，目前正在全世界经历突变。当它们同时 感染宿主时，所述突变主要由血清型彼此不相同的IB病毒的基因重组引起。当两种或多种 类型的IB病毒同时感染宿主时，它们在相同的细胞内生长，伴随着它们的基因的重组，这 导致具有不同于起源病毒的那些特征的特征的新型病毒的出现。例如，如果基因重组在减 毒疫苗病毒和恶性野生型病毒之间发生，存在增加的可能性，即，所述两种病毒的优点，即， 高增殖性和致病性，将结合，并且因此所获得的子代病毒极可能成为快速增殖的急性疾病 引发剂。由于这种原因，疫苗，即使是减毒的，一定不能无损害地被弓丨入国内。IB病毒的典型特性包括不同血清型和变种的持续出现，比任何其它疾病更快传播 的能力(18-36小时的潜伏期)，和在禽类群体中的存活能力(在农场中的持续性)。另外， 针对所述病毒的血清抗体的防御和血清型之间的交叉免疫是有限的。并且，当两种或多种 血清型同时攻击禽类群体时，很难只用疫苗防御所述病毒。在韩国，ND，由新城疫病毒引起，已经被认定是第一种法定的传染性疾病，其每年 在家禽饲养场中发生。已经开发了基于ND病毒灭活的各种疫苗，然而，ND的发生仍然没有 降低。现在，家禽饲养场具有3条抑制鸟类疾病的防御线。第一条防御线取决于生物安 全，第二条防御线取决于接种，并且第三条防御线取决于禽类自身的免疫系统。然而，IB在 家禽饲养场的发生相反地证明IB病毒越过了生物安全的第一条防御线，使得接种无用，并 且破坏了鸡的身体，完全破坏了免疫系统。因此，对于杀死病毒的治疗剂或异常增强免疫系 统的多功能治疗剂存在紧急需求。
发明内容
技术问题因此，本发明紧记在现有技术中存在的上述问题，并且本发明的一个目的是提供 新型的天然抗病毒剂，其具有针对各种病毒感染的高度有效的抑制活性，并且是对人体高 度安全性的没有不利的副作用，所述病毒包括流感病毒、禽流感病毒、禽源传染性支气管炎
病毒等。另外，本发明的另一目的是提供含有所述天然抗病毒剂作为活性成分的组合物， 其可以被包含在各种产品中。技术方案按照本发明的一方面，本发明的目的可以这样实现，S卩，提供从选自由下列各项组 成的组的一种而制备的天然抗病毒剂在泡菜发酵过程中从泡菜分离的乳酸菌的培养液， 所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱水物，及其组合。在所述天然抗病毒剂中，乳酸菌可以选自由明串珠菌属(Leuconostocspp.)、乳杆 菌属(Lactobacillus spp.)、魏斯氏菌属(ffeissella spp.)、及其组合组成的组。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的明串珠菌属包括柠檬明串珠菌 (Leuconostoc citreum)、乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)、肠膜明串珠菌葡聚糖 亚禾中(Leuconostoc mesenteroides subsp. Dextranicum)、肠膜明串珠菌肠膜亚禾中 (Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides)、阿根廷明串珠菌(Leuconostoc argentinum)、肉色明串珠菌(Leuconostoc carnosum)、硬明串珠菌(Leuconostoc gellidum)、泡菜明串珠菌(Leuconostoc kimchii)、Leuconostoc inhae、Leuconostoc gasicomitatum、及它们的组合。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的乳杆菌属包括短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、禾直 ？L If |if (Lactobacillusplantarum) > ^ If lif (Lactobacillus kimchii)、类植物乳杆菌(Lactobacillus para-plantarum)、弯曲乳杆菌亚种 (Lactobacillus curvatussubsp. Curvatus) > Lactobacillus sakei subsp. Sakei、/S 它ff] 的组合。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的魏斯氏菌属包括Weissellakoreens, ffeissella hanii、泡菜魏斯氏菌(ffeissella kimchii), ffeissella soli、融合魏斯氏菌 (ffeissella confusa)、及它们的组合。按照本发明的另一方面，本发明的目的可以通过提供一种包括天然抗病毒剂作为 活性成分的组合物而实现，所述天然抗病毒剂从选自由下列各项组成的组的一种而制备 在泡菜发酵过程中从泡菜分离的乳酸菌的培养液，所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱 水物，及其组合。在这一点上，所述组合物优选地是饮料、饲料、食品、药物或化妆品之一的形式。有利效果泡菜乳酸菌的培养液，或它们的浓缩物或干燥物质具有针对广谱病毒的极好的抗 微生物活性，并且可以赋予食品、饲料、饮料、药物和化妆品安全有效的抗病毒活性。
实施本发明的最佳模式关于本发明，本发明人进行的关于食品和化妆品保存的深入而透彻的研究导致这 样的发现，即，从泡菜分离的乳酸菌(下文称为泡菜乳酸菌)培养物可以作用为多功能的天 然抗病毒剂，其具有针对广谱病毒的有效的抑制活性。公知地，泡菜乳酸菌在泡菜发酵过程 中增殖，其通常通过用盐腌渍萝卜属、卷心菜和黄瓜，将所述腌渍品与包含辣椒粉、蒜泥、绿 色洋葱末、盐腌的海产食品等的调味组合物混合，并且将所述腌渍蔬菜发酵来制备。发明模式本发明的更好的理解可以通过下述实例而获得，所述实例为举例说明而提出，但 不能解释为本发明的限制。
实施例制备泡菜乳酸菌培养液在泡菜乳酸菌中，泡菜明串珠菌(KCTC2386)、肠膜明串珠菌肠膜亚种(KCTC3530)、 Leuconostoc citreum(KCTC3524)、乳明串珠菌(KCTC3528)、植物乳杆菌(KCCM11322)、和 ffeissella koreensis (KCTC3746)用于制备所述培养液。首先，将100ml MRS(Difco)肉汤在121 °C高压灭菌15分钟，并且将泡菜乳酸菌接 种到肉汤中，并在30°C摇动培养16小时。在将所获得的培养物在5000 Xg离心3min后，将上层清液通过具有0. 22 口孔大 小的膜滤器过滤，以获得无菌溶液。随后，将这一无菌溶液通过具有10，OOODa截留大小的膜。将所得到的滤液用具有 1，OOODa截留大小的膜浓缩。将这样获得的浓缩物再一次通过具有0. 22 口孔大小的膜滤器 过滤，以便维持无菌状态。为了排除抗微生物活性的PH-依赖性作用，将最终的培养液调整 至IJpH 7。-检测泡菜乳酸菌培养液针对禽流感病毒的抗病毒活性_将单层生长的动物细胞系(MDCK (Madin-Darby犬肾)或CEF (鸡胚纤维原细胞)) 用禽流感病毒HK/220感染，然后培养3天。蚀斑形成证明了病毒感染。将用PBS(pH 7. 4)稀释到10_3的禽流感病毒和用相同的缓冲盐稀释的泡菜乳酸菌 培养液的混合物，添加到在平板上以单层生长汇合了 80%或更多的动物细胞系MDCK或CEF 中，随后将所述细胞系培养3天。将感染的细胞固定并且用中性红染色，以观察其中蚀斑的 形成。结果在表1中给出，如下。表 1 从表1的数据显而易见，尽管不含泡菜乳酸菌培养液的对照允许多达1. 3 1. 6 X 102个蚀斑形成，但是加入泡菜菜乳酸菌培养液显著地减少了形成的蚀斑数目。因此， 这些结果暗示所述泡菜菜乳酸菌培养液具有非常有效的针对禽流感病毒的抗病毒活性。-检测泡菜乳酸菌培养液针对流感病毒的抗病毒活性-除了应用流感病毒A1H3N2代替禽流感病毒HK/220外，重复与在针对禽流感病毒 的抗病毒活性检测中相同的步骤。所述结果在表2中给出，如下。表2 尽管其中只应用了病毒稀释物而没有所述泡菜乳酸菌培养液的对照在每个培养 板具有1. 3 1. 6X 102个蚀斑，如表2所示，但是在存在泡菜乳酸菌培养液时，流感病毒的 感染发展了显著减少数目的蚀斑，这暗示所述泡菜乳酸菌培养液具有非常有效的针对流感 病毒的抗病毒活性。-泡菜乳酸菌培养液的动物检测-将由于禽流感和新城疫的同时发生而经历显著减少的产蛋量的1，100只产蛋的 母鸡随机分成10组，每组包括110只母鸡。将上文制备的泡菜乳酸菌培养液在母鸡饮用水 中稀释10倍，并且在17天的过程中观察产蛋量的变化。结果在下述表3中给出。表3中，样品1基于泡菜明串珠菌(KCTC2386)培养液而制备，样品2基于肠膜明 串珠菌肠膜亚种(KCTC3530)培养液，样品3基于Leuconostoccitreum(KCTC3524)培养液， 样品4基于乳明串珠菌(KCTC3528)培养液，样品5基于植物乳杆菌(KCCM11322)培养液， 样品6基于WeiSSellak0reenSiS(KCTC3746)培养液，样品7基于肠膜明串珠菌肠膜亚种
7(KCTC3530)培养液和植物乳杆菌(KCCM11322)培养液的混合物，样品8基于泡菜明串珠 菌(KCTC2386)培养液和Weissella koreensis (KCTC3746)培养液的混合物，样品9基于 ffeissella koreensis (KCTC3746)培养液和植物乳杆菌(KCCM11322)培养液的混合物而制备。表 3 如表3所示，由于感染病毒而导致产蛋量减少、患有痢疾并且表现出反常的呼吸 症状的产蛋母鸡，在给它们饮用含有按照本发明的培养液的水后10天，恢复到正常状态， 这通过产蛋量恢复到正常母鸡的水平而确定。因此，按照本发明的泡菜乳酸菌培养液还具 有极好的体内抗病毒活性。另外，由于本发明的天然抗病毒剂是从在韩国传统的食物泡菜发酵期间生长旺盛 的泡菜乳酸菌培养液而制备的，因此，即使没有进行额外的安全性检测，关于所述天然抗病 毒产品对机体的安全性不存在怀疑。如同在产蛋母鸡的饮用水中一样，即使没有进行具体的检测，本发明的抗病毒活 性的培养液也可以包含在食品、饲料、饮料、化妆品、和药物中。当本发明的培养液用于化妆品、饮料、食品、饲料、药物等时，本领域的技术人员应该 理解，按照所述产物的特性和制备、分配、存储以及所述产物应用的实施方案，可以在所述培养 液中进行各种修饰、添加和取代，而不背离本发明在附上的权利要求中公开的范围和精神。工业适用性综上所述，在实施例中获得的数据表明，泡菜乳酸菌培养液具有针对广谱微生物 的极好的抗病毒活性，并且可以赋予食品、饲料、饮料、药物和化妆品安全而有效的抗病毒 活性。
权利要求
一种组合物，其包括从选自由下列各项组成的组的一种而制备的天然抗病毒剂作为活性成分在泡菜发酵过程中从泡菜分离的魏斯氏菌属(Weissella spp.)培养液，所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱水物，及它们的组合。
2.权利要求1提出的组合物，其中所述魏斯氏菌属包括Weissellakoreensi、 Weissella hanii、泡菜魏斯氏菌(Weissella kimchii)、Weissella soli、融合魏斯氏菌 (Weissella confusa)、及它们的组合。
全文摘要
本申请公开一种天然抗病毒剂和包括所述天然抗病毒剂的组合物，其中所述天然抗病毒剂具有针对广谱病毒的高抑制活性，而没有不利的副作用，可以应用从泡菜分离的乳酸菌而获得。所述天然抗病毒剂对机体是安全的，并且可以用于组合物，诸如饲料、饮料、食品、药物、和化妆品，给予它们抗微生物的活性。
文档编号A61P31/16GK101843640SQ20101018332
公开日2010年9月29日 申请日期2005年7月20日 优先权日2004年7月20日
发明者张东逸, 李正华 申请人:高台有限公司;李正华
技术领域：
本发明涉及一种天然抗病毒剂和包括其的组合物。更具体地，本发明涉及一种应 用从泡菜(Kimchi)分离的乳酸菌制备的天然抗病毒剂，其表现出针对病毒生长的高抑制 活性，而没有副作用，并且对机体是安全的，本发明还涉及其中包括所述天然抗病毒剂的组 合物，诸如饮料、饲料、食品、药物、化妆品、等等。
背景技术：
引起每年一度的流感流行的流感病毒，是一种碱性单链RNA病毒，其具有包裹所 述RNA的大小为1/10，000mm的包膜。按照抗原性，流感病毒分为A、B和C型。它们之中， 流感型A和B病毒引起流行病。叫作血细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶(neuramidase) (NA) 的两种类型的糖蛋白，象突起一样从表面突出来，并且8种RNA片段存在于病毒内部。流感 病毒的两种表面糖蛋白HA和NA通常在相同亚型内经历变异，这导致每年新的抗原突变体 的出现。当咳嗽时，流感病毒与猛烈释放的空气一起从肺部喷出，并且通过鼻子或嘴进入 其它机体内。在体内，流感病毒，应用病毒的糖蛋白HA突起，附着并且穿透上呼吸道的黏膜 上皮细胞，并且随后在这里增殖。目前积累的研究结果表明病毒感染的确切机制。一般地， 在靶细胞表面上，病毒与由糖蛋白的糖链组成的受体结合，并且经历内吞作用和随后病毒 包膜与内体的融合，而进入靶细胞。在细胞内部，病毒通过转录和复制它们的基因并且从它 们的宿主的质膜产生子代病毒颗粒而进行增殖。流感病毒的感染通常伴随着发烧、头痛、关 节痛、全身虚脱、等等，以及具有呼吸症状，包括喉咙痛、流鼻涕、鼻塞、等等。所述流感在症 状和严重程度上不同于感冒，并且特征在于极恶劣的传染性，这在全世界导致短时间的爆 发型流行病。由于流感病毒具有每年都进行变异的HA结构，所以应答早先的感染而产生的 抗体不能有效地针对正在发生的流行病，这是流感为何流行的原因。为了预防流感病毒的传染，科学家们已规划了用于抑制附着到上皮细胞、穿入细 胞、转录、复制、翻译、和从细胞释放子代的方法，所有这些都是抗流感病毒药剂的目标。在 这些方法下，已经开发了抗病毒剂，诸如金刚烷胺、金刚乙胺、扎那米韦等，但是，由于据报 道它们在中枢神经系统、消化系统和自主神经系统中产生显著的不利副作用，诸如超敏性， 所以必须极端小心地应用。如上文所述，流感病毒感染呼吸道的黏膜上皮，并且在那里繁殖。如果一种疫苗的 病毒类型不同于所述流行的流感病毒，那么接种可能不会有效地预防流感病毒的感染和增 殖。事实上，没有针对流感病毒的治疗上有效的治疗或预防药剂。现在，经常刷牙，保持喉 咙湿润，并且进行充分的休息和营养，是已知为最有效的流感病毒感染的预防方法。
由于这些原因，存在对于具有针对流感病毒的高抑制活性并且通常可以没有不利 副作用地应用的抗病毒剂的紧急需求。 病毒疾病是最大地危险和破坏家禽产业的因素之一。现在，据说禽流感病毒成为 全人类以及家禽产业的威胁。最近，已经频繁地报道了 H5m高致病性禽流感(HPAI)在中 国和东南亚禽类中的爆发。从目前的情形在专家们看来，禽流感病毒高度适应进行突变，而 不是被辐射，这导致对人类的可怕的问题。在印尼，已经发现针对鸟类流感的流行不可能采取预防性措施。在中国，检测到了 许多H5m HPAI病毒，并且它们以比其控制速度更快的速度进行传播。因此，除了接种外没 有办法。事实上，接种正在许多地区进行。越南和泰国处于更加严重的情形中，具有增加数目的鸟类流感已经引起人类死亡 的报道。更坏地，在这些国家几乎没有控制流感流行的可能性。泰国，典型的禽类出口国家， 响应禽流感的爆发，坚持将处于危险的禽类宰杀的政策而不是进行接种。为了根除禽流感， 泰国政府采取了极端的措施，对未经允许而免疫了家禽的人员进行罚款。理由就是，由于接 种使得不可能在全国范围内根除禽流感，泰国不得不停止禽类出口。在几乎所有的具有禽类产业的国家，禽源传染性支气管炎(IB)是极大地破坏家 禽饲养业的代表性疾病。在实践中，即使一些国家根除了新城疫(ND)或禽流感(Al)，到目 前还没有国家终止IB。在韩国，国家兽医研究和检疫服务机构(National Veterinary Researchand Quarantine Service)的检查数据表明，IB是最流行的，在禽类疾病的发生总数上，其在 2001年包括6%和在2002年包括5. 2%。IB病毒是研究最深入的冠状病毒，并且具有令人 难以置信的简单结构。IB病毒，也叫作可移动病毒，目前正在全世界经历突变。当它们同时 感染宿主时，所述突变主要由血清型彼此不相同的IB病毒的基因重组引起。当两种或多种 类型的IB病毒同时感染宿主时，它们在相同的细胞内生长，伴随着它们的基因的重组，这 导致具有不同于起源病毒的那些特征的特征的新型病毒的出现。例如，如果基因重组在减 毒疫苗病毒和恶性野生型病毒之间发生，存在增加的可能性，即，所述两种病毒的优点，即， 高增殖性和致病性，将结合，并且因此所获得的子代病毒极可能成为快速增殖的急性疾病 引发剂。由于这种原因，疫苗，即使是减毒的，一定不能无损害地被弓丨入国内。IB病毒的典型特性包括不同血清型和变种的持续出现，比任何其它疾病更快传播 的能力(18-36小时的潜伏期)，和在禽类群体中的存活能力(在农场中的持续性)。另外， 针对所述病毒的血清抗体的防御和血清型之间的交叉免疫是有限的。并且，当两种或多种 血清型同时攻击禽类群体时，很难只用疫苗防御所述病毒。在韩国，ND，由新城疫病毒引起，已经被认定是第一种法定的传染性疾病，其每年 在家禽饲养场中发生。已经开发了基于ND病毒灭活的各种疫苗，然而，ND的发生仍然没有 降低。现在，家禽饲养场具有3条抑制鸟类疾病的防御线。第一条防御线取决于生物安 全，第二条防御线取决于接种，并且第三条防御线取决于禽类自身的免疫系统。然而，IB在 家禽饲养场的发生相反地证明IB病毒越过了生物安全的第一条防御线，使得接种无用，并 且破坏了鸡的身体，完全破坏了免疫系统。因此，对于杀死病毒的治疗剂或异常增强免疫系 统的多功能治疗剂存在紧急需求。
发明内容
技术问题因此，本发明紧记在现有技术中存在的上述问题，并且本发明的一个目的是提供 新型的天然抗病毒剂，其具有针对各种病毒感染的高度有效的抑制活性，并且是对人体高 度安全性的没有不利的副作用，所述病毒包括流感病毒、禽流感病毒、禽源传染性支气管炎
病毒等。另外，本发明的另一目的是提供含有所述天然抗病毒剂作为活性成分的组合物， 其可以被包含在各种产品中。技术方案按照本发明的一方面，本发明的目的可以这样实现，S卩，提供从选自由下列各项组 成的组的一种而制备的天然抗病毒剂在泡菜发酵过程中从泡菜分离的乳酸菌的培养液， 所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱水物，及其组合。在所述天然抗病毒剂中，乳酸菌可以选自由明串珠菌属(Leuconostocspp.)、乳杆 菌属(Lactobacillus spp.)、魏斯氏菌属(ffeissella spp.)、及其组合组成的组。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的明串珠菌属包括柠檬明串珠菌 (Leuconostoc citreum)、乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)、肠膜明串珠菌葡聚糖 亚禾中(Leuconostoc mesenteroides subsp. Dextranicum)、肠膜明串珠菌肠膜亚禾中 (Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides)、阿根廷明串珠菌(Leuconostoc argentinum)、肉色明串珠菌(Leuconostoc carnosum)、硬明串珠菌(Leuconostoc gellidum)、泡菜明串珠菌(Leuconostoc kimchii)、Leuconostoc inhae、Leuconostoc gasicomitatum、及它们的组合。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的乳杆菌属包括短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、禾直 ？L If |if (Lactobacillusplantarum) > ^ If lif (Lactobacillus kimchii)、类植物乳杆菌(Lactobacillus para-plantarum)、弯曲乳杆菌亚种 (Lactobacillus curvatussubsp. Curvatus) > Lactobacillus sakei subsp. Sakei、/S 它ff] 的组合。优选地，用于本发明的天然抗病毒剂的魏斯氏菌属包括Weissellakoreens, ffeissella hanii、泡菜魏斯氏菌(ffeissella kimchii), ffeissella soli、融合魏斯氏菌 (ffeissella confusa)、及它们的组合。按照本发明的另一方面，本发明的目的可以通过提供一种包括天然抗病毒剂作为 活性成分的组合物而实现，所述天然抗病毒剂从选自由下列各项组成的组的一种而制备 在泡菜发酵过程中从泡菜分离的乳酸菌的培养液，所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱 水物，及其组合。在这一点上，所述组合物优选地是饮料、饲料、食品、药物或化妆品之一的形式。有利效果泡菜乳酸菌的培养液，或它们的浓缩物或干燥物质具有针对广谱病毒的极好的抗 微生物活性，并且可以赋予食品、饲料、饮料、药物和化妆品安全有效的抗病毒活性。
实施本发明的最佳模式关于本发明，本发明人进行的关于食品和化妆品保存的深入而透彻的研究导致这 样的发现，即，从泡菜分离的乳酸菌(下文称为泡菜乳酸菌)培养物可以作用为多功能的天 然抗病毒剂，其具有针对广谱病毒的有效的抑制活性。公知地，泡菜乳酸菌在泡菜发酵过程 中增殖，其通常通过用盐腌渍萝卜属、卷心菜和黄瓜，将所述腌渍品与包含辣椒粉、蒜泥、绿 色洋葱末、盐腌的海产食品等的调味组合物混合，并且将所述腌渍蔬菜发酵来制备。发明模式本发明的更好的理解可以通过下述实例而获得，所述实例为举例说明而提出，但 不能解释为本发明的限制。
实施例制备泡菜乳酸菌培养液在泡菜乳酸菌中，泡菜明串珠菌(KCTC2386)、肠膜明串珠菌肠膜亚种(KCTC3530)、 Leuconostoc citreum(KCTC3524)、乳明串珠菌(KCTC3528)、植物乳杆菌(KCCM11322)、和 ffeissella koreensis (KCTC3746)用于制备所述培养液。首先，将100ml MRS(Difco)肉汤在121 °C高压灭菌15分钟，并且将泡菜乳酸菌接 种到肉汤中，并在30°C摇动培养16小时。在将所获得的培养物在5000 Xg离心3min后，将上层清液通过具有0. 22 口孔大 小的膜滤器过滤，以获得无菌溶液。随后，将这一无菌溶液通过具有10，OOODa截留大小的膜。将所得到的滤液用具有 1，OOODa截留大小的膜浓缩。将这样获得的浓缩物再一次通过具有0. 22 口孔大小的膜滤器 过滤，以便维持无菌状态。为了排除抗微生物活性的PH-依赖性作用，将最终的培养液调整 至IJpH 7。-检测泡菜乳酸菌培养液针对禽流感病毒的抗病毒活性_将单层生长的动物细胞系(MDCK (Madin-Darby犬肾)或CEF (鸡胚纤维原细胞)) 用禽流感病毒HK/220感染，然后培养3天。蚀斑形成证明了病毒感染。将用PBS(pH 7. 4)稀释到10_3的禽流感病毒和用相同的缓冲盐稀释的泡菜乳酸菌 培养液的混合物，添加到在平板上以单层生长汇合了 80%或更多的动物细胞系MDCK或CEF 中，随后将所述细胞系培养3天。将感染的细胞固定并且用中性红染色，以观察其中蚀斑的 形成。结果在表1中给出，如下。表 1 从表1的数据显而易见，尽管不含泡菜乳酸菌培养液的对照允许多达1. 3 1. 6 X 102个蚀斑形成，但是加入泡菜菜乳酸菌培养液显著地减少了形成的蚀斑数目。因此， 这些结果暗示所述泡菜菜乳酸菌培养液具有非常有效的针对禽流感病毒的抗病毒活性。-检测泡菜乳酸菌培养液针对流感病毒的抗病毒活性-除了应用流感病毒A1H3N2代替禽流感病毒HK/220外，重复与在针对禽流感病毒 的抗病毒活性检测中相同的步骤。所述结果在表2中给出，如下。表2 尽管其中只应用了病毒稀释物而没有所述泡菜乳酸菌培养液的对照在每个培养 板具有1. 3 1. 6X 102个蚀斑，如表2所示，但是在存在泡菜乳酸菌培养液时，流感病毒的 感染发展了显著减少数目的蚀斑，这暗示所述泡菜乳酸菌培养液具有非常有效的针对流感 病毒的抗病毒活性。-泡菜乳酸菌培养液的动物检测-将由于禽流感和新城疫的同时发生而经历显著减少的产蛋量的1，100只产蛋的 母鸡随机分成10组，每组包括110只母鸡。将上文制备的泡菜乳酸菌培养液在母鸡饮用水 中稀释10倍，并且在17天的过程中观察产蛋量的变化。结果在下述表3中给出。表3中，样品1基于泡菜明串珠菌(KCTC2386)培养液而制备，样品2基于肠膜明 串珠菌肠膜亚种(KCTC3530)培养液，样品3基于Leuconostoccitreum(KCTC3524)培养液， 样品4基于乳明串珠菌(KCTC3528)培养液，样品5基于植物乳杆菌(KCCM11322)培养液， 样品6基于WeiSSellak0reenSiS(KCTC3746)培养液，样品7基于肠膜明串珠菌肠膜亚种
7(KCTC3530)培养液和植物乳杆菌(KCCM11322)培养液的混合物，样品8基于泡菜明串珠 菌(KCTC2386)培养液和Weissella koreensis (KCTC3746)培养液的混合物，样品9基于 ffeissella koreensis (KCTC3746)培养液和植物乳杆菌(KCCM11322)培养液的混合物而制备。表 3 如表3所示，由于感染病毒而导致产蛋量减少、患有痢疾并且表现出反常的呼吸 症状的产蛋母鸡，在给它们饮用含有按照本发明的培养液的水后10天，恢复到正常状态， 这通过产蛋量恢复到正常母鸡的水平而确定。因此，按照本发明的泡菜乳酸菌培养液还具 有极好的体内抗病毒活性。另外，由于本发明的天然抗病毒剂是从在韩国传统的食物泡菜发酵期间生长旺盛 的泡菜乳酸菌培养液而制备的，因此，即使没有进行额外的安全性检测，关于所述天然抗病 毒产品对机体的安全性不存在怀疑。如同在产蛋母鸡的饮用水中一样，即使没有进行具体的检测，本发明的抗病毒活 性的培养液也可以包含在食品、饲料、饮料、化妆品、和药物中。当本发明的培养液用于化妆品、饮料、食品、饲料、药物等时，本领域的技术人员应该 理解，按照所述产物的特性和制备、分配、存储以及所述产物应用的实施方案，可以在所述培养 液中进行各种修饰、添加和取代，而不背离本发明在附上的权利要求中公开的范围和精神。工业适用性综上所述，在实施例中获得的数据表明，泡菜乳酸菌培养液具有针对广谱微生物 的极好的抗病毒活性，并且可以赋予食品、饲料、饮料、药物和化妆品安全而有效的抗病毒 活性。
权利要求
一种组合物，其包括从选自由下列各项组成的组的一种而制备的天然抗病毒剂作为活性成分在泡菜发酵过程中从泡菜分离的魏斯氏菌属(Weissella spp.)培养液，所述培养液的浓缩物，所述培养液的脱水物，及它们的组合。
2.权利要求1提出的组合物，其中所述魏斯氏菌属包括Weissellakoreensi、 Weissella hanii、泡菜魏斯氏菌(Weissella kimchii)、Weissella soli、融合魏斯氏菌 (Weissella confusa)、及它们的组合。
全文摘要
本申请公开一种天然抗病毒剂和包括所述天然抗病毒剂的组合物，其中所述天然抗病毒剂具有针对广谱病毒的高抑制活性，而没有不利的副作用，可以应用从泡菜分离的乳酸菌而获得。所述天然抗病毒剂对机体是安全的，并且可以用于组合物，诸如饲料、饮料、食品、药物、和化妆品，给予它们抗微生物的活性。
文档编号A61P31/16GK101843640SQ20101018332
公开日2010年9月29日 申请日期2005年7月20日 优先权日2004年7月20日
发明者张东逸, 李正华 申请人:高台有限公司;李正华
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