一种蝉夜安神胶囊的制作方法
专利名称：一种蝉夜安神胶囊的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蝉夜安神胶囊及其制备方法。
背景技术：
失眠是一种持续相当长时间的睡眠的质和/或量令人不满意的状况，常表现为难以入眠、不能入睡、维持睡眠困难、过早或间歇性醒来而引致睡眠不足。失眠是一种最常见的睡眠紊乱，它给患者带来巨大的身体和精神上的痛苦。随着社会的发展，生活节奏的加快，失眠症的发生率有上升趋势，据统计，约有30％的成人患有失眠。
目前，国内外治疗的失眠方法多为采用西药镇静剂治疗。西药镇静剂只能消极地控制或强制病人睡眠，不能提高睡眠质量，且随着病程的延长，用药量要不断增加。西药镇静剂还对人的神经等系统有很大的毒副作用。现有的用于治疗痰热内扰型失眠的中成药，其治疗效果差。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于治疗痰热内扰型失眠的中成药--蝉夜安神胶囊及其制备方法，该胶囊疗效好、毒性作用小。
本发明所采用的技术方案是一种蝉夜安神胶囊，它的内容物主要是由下列重量份的原料药制成，天竺黄267份蝉蜕500份僵蚕 267份地龙 667份钩藤833份法半夏333份首乌藤833份白芍500份酸枣仁500份远志400份其制备方法包括下列步骤(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量配比的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量配比的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量配比的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量配比的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊。
本发明的有益效果是本发明的蝉夜安神胶囊的内容物主要是由天竺黄、蝉蜕、僵蚕、地龙、钩藤、法半夏、首乌藤、白芍、酸枣仁、远志作原料药制成，它具有清热化痰、镇静安神的功能，对失眠治疗效果好、毒性作用小，特别适于治疗痰热内扰型失眠。
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述的蝉夜安神胶囊的有益效果试验例一、蝉夜安神胶囊主要药效学试验摘要通过动物实验研究，观察了蝉夜安神胶囊给予动物灌胃后出现明显的解热、抗炎、抑菌、镇静、催眠、抗惊厥、提高动物机体免疫功能的作用。蝉夜安神胶囊各剂量给药组均能使发热家兔体温降低；小鼠耳肿胀度及大鼠足肿胀度减轻，并有抑菌作用；小鼠自主活动(记数法及走动时间及举前肢法)减少；小鼠入睡潜伏期缩短，睡眠时间延长；睡眠动物数增多，提高睡眠百分率；对抗中枢兴奋药—士的宁致小鼠惊厥作用；使小鼠碳廓清率提高，使幼龄小鼠免疫器官增重，使小鼠迟发型超敏反应增强，使血清溶血素生成增多。以上结果表明蝉夜安神胶囊对痰热内扰型失眠症具有良好的防治作用，因此该药可以提供临床试用，进一步观察该药的疗效。
目的观察蝉夜安神胶囊给予动物灌胃给药后所产生的解热、抑菌、抗炎、镇静、催眠、抗惊厥，及对小鼠机体免疫功能影响的作用，为中医临床试用治疗痰热内扰型失眠提供实验依据。
1 实验材料1.1 药物受试药蝉夜安神胶囊，功能清热化痰，镇静安神；主治痰热内扰型失眠症。该药由珠海星光制药有限公司提供，批号20020329，口服胶囊剂型，内容物呈棕色粉末，每粒装0.4g，合生药5.10g，每1g胶囊内容物合生药12.75g，成人日用剂量为(每日2次，每次5粒，成人体重按60kg计算)0.067g/kg，合生药0.854g/kg。实验时用蒸馏水配制成不同浓度的混悬液，置冰箱内保存备用；阳性对照药——舒眠胶囊由贵州大隆制药有限公司提供[国药准字(1999)z-33号]，批号20010103，口服胶囊剂型，内容物呈棕色粉末，装量为0.4g/粒，成人日用剂量为0.04g/kg，实验时用蒸馏水配制成混悬液置冰箱保存备用；戊巴比妥由上海医药进出口销售部提供，批号20010908，实验时用生理盐水配制成4.5％及3％戊巴比妥钠水溶液；硝酸士的宁注射液由上海禾丰制药有限公司提供，批号010901，安瓿剂型，2mg/毫升，实验时用生理盐水配制成0.015％士的宁溶液；印度墨汁由长江日用粘合材料厂提供，批号98112，实验时用生理盐水配制成50％印度墨汁水溶液；2，4二硝基氯苯(DNCB)由中国上海试剂一厂提供，批号981201。
1.2 动物昆明种小鼠，体重20～22g；wistar大鼠，体重210~230g；家兔，体重2.5±1.0kg；豚鼠，体重300±50g；以上动物♀♂兼用，均由贵阳医学院实验动物中心提供，清洁级，合格证号200200018；公鸡，市售(健康)。
1.3 主要仪器TMP-1上皿式电子天平(由湖南仪器仪表总厂天平厂提供)，721型分光光度计(由上海第三分析仪器厂提供)，LD5-2A离心机(由北京医用离心机厂提供)。
2 实验方法与结果2.1 蝉夜安神胶囊对致热家兔解热作用取家兔30只，分别称重，编号；在室温20℃条件下测正常体温，选择体温在38~39℃的家兔供实验用，随机分为五组，每组6只，逐只向各组每只家兔耳静脉注射伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗0.5ml/kg体重，5h后家兔体温升高造成高热模型家兔；按表1所示药物、剂量灌胃给药，于药后1h，3h，5h，7h测定各家兔体温。结果见表1。
从表1可见蝉夜安神胶囊于灌胃给药后1h就出现明显的解热作用，并可延续7h之久，与发热模型家兔比较差异显著(P＜0.05～P＜0.01)，而舒眠胶囊组及空白对照组对高热家兔无解热作用。
表1蝉夜安神胶囊对高热模型家兔解热作用(℃ x±s n＝6)组别剂量 正常时 发热时致热后解热体温(g/kg) 体温体温 1h3h5h 7h空白对照组 -38.3±0.3 39.4±0.4 39.9±0.3 40.1±0.3 39.7±0.20 39.5±0.3大剂量组0.67038.7±0.3 39.3±0.2 39.0±0.18*38.7±0.27**38.8±0.13**38.9±0.2*中剂量组0.33538.9±0.2 39.4±0.4 39.2±0.4*38.9±0.25*39.1±0.15**38.9±0.2*小剂量组0.17038.8±0.2 39.4±0.3 39.5±0.3*39.0±0.3*39.0±0.20*38.9±0.2*舒眠胶囊组 0.20 38.7±0.2 39.3±0.4 40.0±0.3 40.0±0.3 39.8±0.30 39.2±0.3注药后体温与药前发热体温比较*P＜0.05 **P＜0.012.2 蝉夜安神胶囊抑菌作用2.2.1 实验菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌，均由贵阳中医学院微生物教研室提供，批号20020601。
2.2.2 培养基普通肉汤培养基、普通营养琼脂、血琼脂平板(提供单位贵阳中医学院微生物教研室)2.2.3 预先处理细菌及药物将上述菌株分别常规培养24h增菌后，再分别转种培养6h，然后作1∶1000稀释即用；将供试药物(蝉夜安神胶囊内容物)配制成每1ml含1g的浓度。
2.2.4 采用抗菌谱初筛试验；抗菌强度定性试验；抗菌强度定量试验。
2.2.5 结果①抗菌谱供试药物蝉夜安神胶囊对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌等实验菌均有一定的抗菌作用。
②抗菌强度定性结果见表2表2蝉夜安神胶囊抗菌强度定性结果金黄色葡 白色葡 柠檬色葡 乙型溶血性 大肠 伤寒 副氏痢 枯草 绿脓菌种萄球菌萄球菌 萄球菌 链球菌 杆菌 杆菌 疾杆菌 杆菌 杆菌抑菌圈直2.0 1.9 1.7 1.9 1.4 1.31.11.2 1.3径(cm)
③抗菌强度定量试验结果见表3表3蝉夜安神胶囊抗菌强度定量结果金黄色白色葡萄 柠檬色葡 乙型溶血 副氏痢疾杆药浓葡 大肠杆菌 伤寒杆菌 枯草杆菌 绿脓杆菌试药 球菌 萄球菌 性链球菌 菌％ 萄球菌号MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC------------------150.0225.0---------+-----+-+312.50 -----+---+-+-+-+-+46.25---+++--++++++++++53.13-+-+++-+++++++++++61.56-+++++-+++++++++++70.78++++++++++++++++++80.39++++++++++++++++++注最小抑菌浓度(MIC)，最小杀菌浓度(MBC)，(-)表示有抑制作用；(+)表示无抑制作用。
2.2.6 结论蝉夜安神胶囊对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌等实验菌均有一定抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌抗菌作用较强，对大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌抗菌作用较弱，以上抗菌作用与该制剂清热化痰功能相吻合。
2.3 蝉夜安神胶囊抗炎作用2.3.1 蝉夜安神胶囊对二甲苯致小鼠耳肿的影响取昆明种小鼠50只，♀♂各半，体重20±2g，随机分为五组，每组10只，分别按表4所述药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续5天；末次药后1小时，以二甲苯0.03ml涂于各组每只小鼠右耳前后两面，15min时剪取双耳，以直径为8mm的打孔器于同一部位取下左右两耳片，分别称重(mg)，计算每只鼠耳肿胀度(右耳重减去左耳重之差，mg)，进行组间t检验，比较组间肿胀度差异性。结果见表4。
由表4可见蝉夜安神胶囊各剂量对二甲苯所致急性炎症均有不同程度对抗作用，即表明蝉夜安神胶囊化痰功能的机理。舒眠胶囊对二甲苯诱发的炎症无对抗作用。
表4蝉夜安神胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x±s，n＝10)剂量体重 耳肿胀度肿胀抑制率组别(g/kg)(g) (mg)(％)空白对照组- 21.0±0.85 6.0±1.21 -大剂量组 1.34 21.1±0.88 3.7±1.16***38中剂量组 0.67 20.8±0.86 4.0±1.20**33小剂量组 0.34 20.9±0.94 4.4±0.70*27舒眠胶囊组0.40 20.5±0.76 6.1±1.11-注各给药组与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012.4 蝉夜安神胶囊对小鼠镇静作用
2.4.1 对小鼠自主活动的影响(活动记数法)取♀性小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组——给予蒸馏水0.2ml/10g体重灌胃；蝉夜安神胶囊大、中、小剂量组——剂量分别是1.34g、0.67g、0.34g/kg(合生药17.1g、8.5g、4.3g/kg)，各为成人日用剂量0.067g/kg(合生药0.85g/kg)的20倍、10倍、5倍，实验时用蒸馏水配制成6.7％、3.4％、1.7％蝉夜安神胶囊内容物混悬液按0.2ml/10g体重灌胃；阳性药对照组——舒眠胶囊组，以舒眠胶囊内容物，用蒸馏水配制成2.0％混悬液按0.2ml/10g体重灌胃。于上午8时～11时室温20℃±1℃进行实验，各组小鼠分别按体重灌胃给药后20min，将小鼠放在小鼠活动记录仪内，先适应5min后，再记录5min内各鼠自发活动次数，计算各组小鼠自发活动抑制百分率(％)。结果见表5。
由表5可见蝉夜安神胶囊各剂量组对小鼠自发活动均有明显的抑制作用，与空白对照组相比差异显著；并能提高自发活动抑制率，比舒眠胶囊作用优。
表5蝉夜安神胶囊对小鼠自发活动的影响——活动记数法(x±s n＝10)剂量 5min内自发活动次数 抑制率组别(g/kg)(次) (％)空白对照组- 11778±3179-大剂量组 1.34 8017±957***32中剂量组 0.67 8419±1059**29小剂量组 0.34 8367±1814**29舒眠胶囊组0.40 10149±230014注与空白对照组比较**P＜0.01***＜0.0012.4.2 蝉夜安神胶囊对小鼠走动时间及举双前肢的影响取♂性小鼠50只，体重18～22g，随机分组同上述实验项目2.4.1；将各组小鼠分别放在实验箱内适应5min后，测定各鼠5min内走动时间及前肢向上抬举次数，作为给药前各鼠正常状态时小鼠自主活动。次日同样时间按表6所示药物、剂量分别给药；给药后15min时用上述相同方法将小鼠放入实验箱内适应5min后，测定各鼠5min内的自主活动，所得结果进行组间及给药前、后小鼠自主活动变化的比较，结果见表6。
由表6可见，给药前各组小鼠走动时间及前肢向上抬举次数无明显差异，给药后给药组与空白对照组比较，走动时间及前肢向上抬举次数差异显著，给药组小鼠自主活动明显减少，各给药组给药后与给药前小鼠走动时间及前肢向上抬举次数明显减少，比阳性对照药舒眠胶囊作用优。
以上结果表明蝉夜安神胶囊对小鼠自主活动具有明显的镇静作用。
表6蝉夜安神胶囊对小鼠自主活动抑制作用(x±s n＝10)给药前给药后剂量组别(g/kg)走动时间(s) 前肢向上抬举次数走动时间(s) 前肢向上抬举次数空白对照组 -106.0±9.75 24.8±4.37108.9±11.3224.1±5.20大剂量组 1.34 109.3±13.91 26.1±5.3841.4±12.12***ΔΔΔ15.2±1.80***ΔΔΔ中剂量组 0.67 113.4±17.96 26.2±5.7351.2±10.1***ΔΔΔ17.7±2.58**ΔΔΔ小剂量组 0.34 108.9±15.63 24.7±6.7850.3±10.1***ΔΔΔ17.3±2.91**ΔΔ舒眠胶囊 0.40 113.8±13.25 22.3±5.5956.3±9.42***ΔΔΔ17.2±4.10**△注与空白对照组比较**P＜0.01 ***P＜0.001；药前与药后比较ΔP＜0.05ΔΔP＜0.01ΔΔΔP＜0.001。
2.4.3 蝉夜安神胶囊对戊巴比妥钠催眠量致小鼠睡眠的影响取小鼠100只，随机分组同上实验项目2.4.1，每组20只，♀♂各半；按表7所示药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续三日；末次药后30min及60min分别取出♀♂各半10只小鼠，以4.5％戊巴比妥钠(45mg/kg)0.1ml/10g体重腹腔注射(ip)，立即观察并记录小鼠翻正反射消失的时间和小鼠翻正反射恢复的时间，该时间分别为该小鼠入睡潜伏期(出现睡眠时间)及睡眠持续时间。结果见表7。
由表7可见蝉夜安神胶囊具有协同戊巴比妥钠中枢抑制作用，表现为二药合用小鼠入睡潜伏期缩短，睡眠时间延长，与空白对照组相比差异显著(P＜0.01、P＜0.001)。与舒眠胶囊催眠作用近似。
表7蝉夜安神胶囊对戊巴比妥钠催眠作用的影响(x±s n＝10)给药后30min药后60min剂量组别(g/kg)入睡潜伏期 睡眠持续时间 入睡潜伏期 睡眠持续时间(min)(min) (min) (min)空白对照组 - 8.60±2.26 17.88±2.89.60±3.13 17.1±4.51大剂量组1.344.89±1.79***88.56±33.23***5.70±1.89**38.3±12.11***中剂量组0.674.78±1.10***56.00±15.30***6.10±1.66**38.1±13.91***小剂量组0.344.17±1.85***34.75±15.90***6.20±1.99**27.1±6.77**舒眠胶囊组 0.404.90±1.85***48.40±19.10***6.40±2.07**30.6±7.37***注各给药组与空白对照组比较**P＜0.01***P＜0.0012.4.4 蝉夜安神胶囊对小鼠阈下催眠剂量戊巴比妥钠作用的影响仿文献取小鼠120只，♀♂各半，体重20～22g，随机分组同上述实验项目2.4.1，按表8所示药物、剂量给予各组小鼠30min及60min后，逐只小鼠分别ip 3％戊巴比妥钠溶液30mg/kg，观察并记录各组小鼠翻正反射消失(即入睡)的动物只数，计算其睡眠百分率。结果见表8。由表8可见，蝉夜安神胶囊各组及舒眠胶囊组睡眠动物数明显增加，睡眠百分率明显升高。可见蝉夜安神胶囊给药后30min与药后60min催眠作用均强，呈量一效正相关关系，表明蝉夜安神胶囊与戊巴比妥钠合用对中枢抑制作用明显加强。
表8蝉夜安神胶囊对阈下催眠剂量戊巴比妥钠协同作用的影响(x±s n＝12)药后30min 药后60min剂量组别(g/kg)入睡动物数入睡百分率入睡动物数入睡百分率(只) (％) (只) (％)空白对照组- 1 8 0 0大剂量组1.34 7*588*66中剂量组0.67 4 337*58小剂量组0.34 3 255 42舒眠胶囊组 0.40 3 255 42注x2检验，与空白对照组比较，*P＜0.052.4.5 蝉夜安神胶囊对抗士的宁致小鼠惊厥作用取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，♀♂各半，按表9所示药物、剂量分别灌胃给药，每日一次，连续3日；末次药后30min，以0.015％硝酸士的宁溶液0.1ml/10g体重腹腔注射，立即记录士的宁致惊潜伏期(s)及小鼠小鼠死亡时间(s)，观察惊厥以兴奋、躁动、竖尾到阵挛性惊厥死亡为指标，其结果经统计学处理进行组间t检验。结果见表9。
由表9可见，蝉夜安神胶囊大、中、小剂量对士的宁致惊厥均有明显的对抗作用，使致惊潜伏期明显延长，死亡时间明显延长。
表9蝉夜安神胶囊对小鼠致惊剂量士的宁引起惊厥的影响组别剂量 动物数 惊厥动物潜伏期 死亡时间(g/kg) (只) (s) (s)空白对照组 - 10 173.4±32.53 146.6±17.48大剂量组1.3410 237.3±52.92**172.6±16.65**中剂量组0.6710 225.7±32.51**178.9±19.20**小剂量组0.3410 214.0±28.69**168.7±12.73*△舒眠胶囊组 0.4010 188.8±14.16 161. 0±15.36注与空白对照组比较，**P＜0.012.5 蝉夜安神胶囊对小鼠免疫功能的影响2.5.1 对小鼠碳廓清率——网状内皮细胞吞噬作用的影响取昆明种小鼠50只，随机分组，每组10只，♀♂各半，按表10所示药物、剂量给药，每日一次，连续8天，末次药后1h，以50％印度墨汁0.1ml/10g体重尾静脉注射，于注射后2min、12min分别从眼眶取血0.02ml，加入盛有0.1％Na2CO3溶液2ml的试管内，静置10min后用721型分光光度计比色(λ＝680nm)，读取光密度，计算吞噬指数(K值)。取血后处死小鼠，取肝、脾称重，计算校正吞噬指数(α值)。结果见表10。
由表10可见除蝉夜安神胶囊小剂量组K值外，其余各组K值、α值均有明显的增加，与空白对照组相比差异显著(P＜0.05～P＜0.001)。蝉夜安神胶囊中剂量组与舒眠胶囊作用相近，表明蝉夜安神胶囊具有提高小鼠非特异性免疫功能作用。
表10蝉夜安神胶囊对小鼠网状内皮系统吞噬作用的影响(x±s n＝10)剂量组别 K值 α值(g/kg)空白对照组-0.0305±0.0182 5.359±1.216大剂量组 1.34 0.0575±0.0336*6.567±1.056*中剂量组 0.67 0.0536±0.0169**6.600±0.654**小剂量组 0.34 0.0436±0.0138 6.717±1.217*舒眠胶囊组0.40 0.0550±0.0181**6.922±1.060**注与空白对照组比较，*＜0.05 **P＜0.012.5.2 蝉夜安神胶囊对幼龄小鼠免疫器官重量的影响取幼龄小鼠50只，体重14~16g，随机分为5组，每组10只，♀♂各半，按表11所示药物及剂量灌胃给药，每日一次，连续13天；第14天将各组小鼠脱颈椎处死，剖取脾脏及胸腺分别称重，并计算脾脏及胸腺脏器指数。结果见表11。
由表11可见，除蝉夜安神胶囊小剂量组外，所有给药组对小鼠脾脏、胸腺重量及指数均有增加的趋势，无统计学意义(P＞0.05)，但也可以表明蝉夜安神胶囊有一定程度的能够提高小鼠非特异性免疫的功能。
表11 蝉夜安神胶囊对幼龄小鼠免疫器官重量及指数影响(x±s n＝10)组别 剂量 脏器重量(g) 脏器指数(g/10g体重)(g/kg) 脾胸腺体重脾 胸腺空白对照组 - 0.106±0.035 0.069±0.03022.14±6.12 0.048±0.01220.0305±0.0092大剂量组1.340.101±0.028 0.079±0.04720.02±2.66 0.0514±0.0164 0.0340±0.0139中剂量组0.670.107±0.016 0.075±0.02219.83±0.81 0.0548±0.0112 0.0377±0.0098小剂量组0.340.096±0.024 0.063±0.02218.31±4.73 0.0536±0.0121 0.0339±0.0056舒眠胶囊0.400.096±0.024 0.071±0.03818.90±2.80 0.0517±0.0155 0.0360±0.0148注各给药组与空白对照组比较P均＞0.052.5.3 蝉夜安神胶囊对小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响取昆明种小鼠50只，随机分组同上述实验项目2.5.1；按表12所示药物、剂量灌胃给药，每天一次，连续8天；于第3天和第5天用2.5％DNCB丙酮液0.02ml/只背部皮下注射致敏，第8天药后1h用1％DNCB丙酮液0.02ml/只涂小鼠右耳(攻击)。次日处死小鼠剪下双耳，用直径为8mm的打孔器取下左右两耳同一部位之耳片，分别称重，计算两耳片重量之差(肿胀度)。结果见表12。
从表中可见，蝉夜安神胶囊大、中剂量及阳性药舒眠胶囊均可使小鼠耳肿胀度明显增加，表明以上两种药物均可明显提高小鼠特异性免疫功能。
表12蝉夜安神胶囊对小鼠迟发型超敏反应的影响(x±s n＝10)剂量 耳肿胀度组别(g/kg) (mg)空白对照组 - 3.25±1.41大剂量组 1.34 5.44±2.13*中剂量组 0.67 5.15±2.76*小剂量组 0.34 3.97±1.72舒眠胶囊组 0.40 5.04±1.24**注与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
2.5.4 蝉夜安神胶囊对小鼠血清溶血素含量的影响取昆明种小鼠50只，随机分组，按表13所示药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续9次。给药的第2天以5％鸡红细胞(CRBC)混悬液0.2ml/只腹腔注射(ip)进行免疫，第9天药后1h，摘眼球取血静置30min，取血清10μ1，加入生理盐水(NS)1ml，再加入5％CRBC混悬液及10％补体各0.5ml，混匀，置37℃的恒温水浴箱孵育30min后，再移入冰箱冷却5min，用分光度计测定光密度(OD)值，观察溶血素生成情况。另设不加血清空白对照管上清液作调“0”基准，以光密度(OD)读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组差异。结果见表13。
由表13可见蝉夜安神胶囊各剂量组测得光密度值均明显增加，与空白组比较，P＜0.001~P＜0.05，并呈量一效正相关。阳性药舒眠胶囊与小剂量组近似，表明给药组均可使小鼠血清溶血素生成增多，即抗体产生量增多；说明蝉夜安神胶囊能提高小鼠机体体液免疫功能，即提高小鼠机体特异性免疫功能。
表13蝉夜安神胶囊对小鼠溶血素生成影响(x±s n＝10)组别剂量 溶血素(g/kg)空白对照组 - 0.0812±0.014大剂量组1.34 0.1272±0.026***中剂量组0.67 0.1151±0.026**小剂量组0.34 0.1115±0.028*舒眠胶囊组 0.40 0.1186±0.036*注给药组与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0013 结束语经主要药效学动物实验结果表明，蝉夜安神胶囊具有明显的解热、抑制细菌、消炎化痰、镇静、催眠、抗惊厥及提高小鼠免疫功能的作用，与临床中医治疗痰热内扰型失眠症机理相吻合。该制剂对高热家兔具有解热作用，对多种细菌具有对抗作用；对二甲苯所致小鼠耳肿有明显的抑制作用；对小鼠自主活动有明显的抑制作用，对戊巴比妥钠催眠量及阈下催眠剂量催眠作用均有协同作用；使小鼠网状内皮吞噬功能增强，免疫器官增重，迟发型趋敏反应提高，使小鼠血清溶血素生成增加。
以上结果表明该制剂具有清热、消炎、镇静、催眠、抗惊厥及提高机体免疫功能的作用；因此，蝉夜安神胶囊有良好的治疗痰热内扰型失眠的药理基础，可以提供临床试用。
试验例二、蝉夜安神胶囊急性毒性试验摘要观察口服给药途径，测定蝉夜安神胶囊最大给药量试验。结果表明小鼠口服蝉夜安神胶囊内容物水混悬液，最大给药量为28g/kg，合生药357g/kg，相当于成年人每日用药量418倍。所以，可以认为临床拟定成人口服给药剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)是安全的，因此本品可以提供临床试用。
目的观察蝉夜安神胶囊短期口服给予动物后，所产生的毒性反应及死亡情况，或最大给药剂量，或推算临床成人用量安全倍数，综合评价该药物的安全性。
1 实验材料1.1 药物受试药物蝉夜安神胶囊由广东珠海星光制药有限公司提供，批号20020329，口服胶囊剂型，每1g胶囊内容物合生药12.75g，拟定临床成人日用剂量为每日2次，每次5粒，0.4g/粒，该剂量按kg体重(成人体重按60kg计)计算为0.067g/kg，合生药0.854g/kg。实验时用蒸馏水配制成蝉夜安神胶囊内容物混悬液置冰箱内保存备用。
1.2 动物昆明种小鼠，体重20±2g，♀♂各半，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号0200015。先予饲养3天适应环境，第4天进行实验。
2 实验方法2.1 预试实验取小鼠6只，以蝉夜安神胶囊内容物混悬液最大浓度0.35g/ml(合生药4.4625g/ml)、最大容积0.4ml/10g体重，给予小鼠一次灌胃，此剂量14g/kg(合生药178.5g/kg)相当于成年人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的209倍；观察7天，不引起小鼠死亡。因不能测出药物的半数致死量(LD50)，故进行本品最大给药量的正式实验。
2.2 正式实验昆明种小鼠20只，♀♂各半，禁食不禁水12小时，给予小鼠0.35g/ml蝉夜安神胶囊内容物混悬液0.4ml/10g体重，一日内2次，药量共计28g/kg，合生药357g/kg。按体重计算此剂量相当于成年人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的418倍。给药后常规饲养小鼠7天，逐日观察小鼠表现。
3 实验结果小鼠给药后7天内，除给药后小鼠出现短暂的活动减少，不喜啃咬、摄食外，未见小鼠出现毒性反应及死亡现象。此结果表明1日内给予小鼠2次灌胃蝉夜安神胶囊混悬液最大浓度(0.35g/ml)、最大容量(0.4ml/10g体重)，其剂量共计为28g/kg，合生药357g/kg，相当于成人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的418倍，而不致动物死亡。据文献报道“一般认为按体重计算小鼠最大耐受量相当于人用量100倍以上则较为安全，可以提供临床试用”。
根据上述实验结果可以认为，蝉夜安神胶囊口服给药对动物的急性毒性甚小，临床拟定成人每日服用该制剂0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重是安全的，可以提供临床试用。
4 结语受药物浓度和容积的限制，对小鼠1次灌胃给药测不出LD50，经最大给药量测定，1日内2次给予小鼠灌胃给药，最大给药量相当于临床用药量的418倍，故可认为本品的急性毒性低，口服安全。
试验例三、蝉夜安神胶囊长期毒性试验试验摘要大鼠连续8周灌胃(po)给予蝉夜安神胶囊内容物3.35g、2.01g、1.005g/kg，合生药42.71g、25.63g、12.81g/kg体重——三个剂量组剂量分别为拟用临床成人日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重(成人体重按60kg计)的50倍、30倍、15倍，及停药2周。除去各组大鼠体重、摄食逐日增加外，未观察到各组大鼠行为、活动、皮毛、大小便等明显异常变化，未观察到各组大鼠血液细胞学、血液生化学指标(肝功能、肾功能)明显变化，未观察到各组大鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺系数异常变化，同时上述脏器病理组织检查未见明显异常。
1 目的观察较大剂量、较长时间、连续给予大鼠重复灌胃蝉夜安神胶囊8周，对大鼠所产生毒性反应，严重程度及首先出现的症状；观察毒性反应的靶器官及恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据。
2 实验材料2.1 药物蝉夜安神胶囊为口服胶囊剂，每粒装0.4g，合生药5.1g，每1g胶囊内容物合生药12.75g，由珠海星光制药有限公司提供，批号20020329。蝉夜安神胶囊内容物为棕色粉末，实验时用蒸馏水配制成不同浓度混悬液，冰箱保存备用。
2.2 动物wistar大鼠80只，♀♂各半，体重100~120g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号0200015。
2.3 主要仪器SC-970全自动血细胞分析仪，瑞士贝肯公司；日立7170A全自动生化分析仪，美国柯达。
2.4 实验数据统计以X±S表示，进行组间t检验。
3 实验方法3.1 实验条件 给药前后的大鼠均每笼单性别群养，每笼同性别5只大鼠，饲以全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20~25℃，湿度55％~65％。给药前先观察7天大鼠一般状况，无异常变化，再开始给药进行试验。
3.2 分组和剂量取wistar大鼠80只，随机分为4组，每组20只，♀♂各半，分别作为蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量组及空白对照组(对照组)。给药组剂量分别为3.35g、2.01g、1.005g/kg(合生药42.71g、25.63g、12.81g/kg)，各为拟定临床成人日用剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重的50倍、30倍、15倍。实验前将蝉夜安神胶囊内容物用蒸馏水配制成33.5％、20.1％、10.05％的蝉夜安神胶囊混悬液，置于冰箱内保存备用。给药容积为10ml/kg体重。
3.3 给药途径及方法因为蝉夜安神胶囊临床用药途径是口服给药，所以各组均灌胃给药，每日上午8时动物空腹时灌胃一次，连续8周；每周称动物体重一次，根据动物体重增长变化，调整给药剂量。
3.4 试验周期实验总周期为10周，前8周为给药时间，后2周为停药恢复时间；首先观察给药8周期间动物有无毒性反应，每组取半数动物处死，测定各项指标，其余半数动物停药饲养2周后，同上述方法检测各项指标。
4 检查项目4.1 一般观察 进食量、体重、外观形态体征、行为活动、大便性状等；发现中毒动物立即隔离，重点观察；发现死亡或濒死动物，即刻尸检。
4.2 检测项目 连续给药8周，末次药后24小时，称大鼠体重后，每组动物半数♀♂各半，股静脉取血进行测试血液细胞学、血液生化学指标后将动物处死，立即剖取各鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺，分别称重，计算器官系数；再于同一部位取材浸泡于10％甲醛溶液固定，进行石蜡包埋，切片，HE染色；置光学显微镜观察并与对照组比较，首先对比检查高剂量组与对照组动物组织切片，观察器官组织形态变化。
血液学检查指标红细胞(RBC)计数、红细胞体积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、血红蛋白(Hgb)、血红蛋白平均量(MCH)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LY)、粒细胞(GR)、单核细胞(MO)。
血液生化学(肝、肾功能)检查指标尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(AKP)含量。
4.3 指标观察时间 每天全面观察所有实验动物的一般状况，动物活动行为，大便性状，外观体征，饲料夜耗量；每周称体重一次；给药8周末次药后24小时，及停药2周恢复期末，各进行一次各项指标的全面检查。
5 实验结果5.1 蝉夜安神胶囊对大鼠一般情况及进食的影响 在连续给药8周及停药2周内，将各给药组与对照组比较，观察动物活动、行为、饮食、大便、毛发光泽等，观察到两组动物情况相似，未见明显异常变化。在同一时间内大鼠摄食量雄性鼠比雌性鼠稍有增加，但无明显差异。结果见表1-1、表1-2。
5.2 蝉夜安神胶囊对大鼠体重的影响实验结果见表2-1、表2-2。
从表内可见，蝉夜安神胶囊高、中、低三种剂量对大鼠连续给药不同时间后的体重与对照组比较，其差异无统计学意义(P＞0.05)；但雄鼠体重比雌鼠体重增长略高。即实验结果表明在较大蝉夜安神胶囊剂量、较长疗程(8周)用药及停药2周对大鼠生长发育(体重增长)无毒性影响。
5.3 蝉夜安神胶囊对大鼠血液细胞学影响 实验结果见表3-1、表3-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，对大鼠的血常规均未见显著影响；各给药组动物RBC、Hgb、PCT、WBC等数值与对照组的数值接近；与对照组相比，经统计学处理，P＞0.05；因此，可以认为蝉夜安神胶囊较大剂量、较长时间(8周)给药，及停药2周，对大鼠的造血功能无显著的毒性影响。
5.4 蝉夜安神胶囊对大鼠血液生化学(肝功、肾功)的影响 实验结果见表4-1、表4-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，大鼠的肝功能及肾功能各项生化指标数值分别与对照组相应数值相比较，未见明显差异，P＞0.05；故表明蝉夜安神胶囊较大剂量连续用药8周及停药2周对大鼠肝功能、肾功能均无显著毒性作用。
5.5 蝉夜安神胶囊对大鼠主要器官系数的影响 实验结果见表5-1、表5-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，大鼠重要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺重量系数的数值与对照组均相近；经统计学处理，各给药组各项指标数值与对照组比较，其差异均无显著性，P均＞0.05。表明蝉夜安神胶囊较大剂量长期(8周)灌胃及停药2周，对大鼠器官重量系数无明显影响。
5.6 蝉夜安神胶囊对大鼠重要脏器组织病理形态的影响对蝉夜安神胶囊连续给药为8周，以及停药2周的两批次，杀取大鼠并解剖出各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺；在相同部位取材，用10％甲醛溶液固定。将高剂量组及空白对照组大鼠脏器标本抽样进行组织切片，进行病理学检查。
结果经对两组动物脏器标本抽样检查，各种器官结构基本正常，细胞染色均匀，无明显改变。由于高剂量组动物被检查的器官未出现药物致病理改变，故对中剂量组及低剂量组未进行器官组织切片。
表1-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♀大鼠日平均进食量的影响(x±s)周次 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组1 77.07±08.10 75.29±09.98 75.64±08.64 77.21±08.592 107.86±10.80108.86±11.89105.86±08.82103.50±08.363 135.71±10.90139.71±15.00126.33±13.84126.36±13.484 189.93±22.11185.79±24.72187.79±16.78186.14±25.745 231.71±15.25231.36±20.53222.36±16.35226.93±20.426 279.36±17.36275.43±18.90271.64±19.00281.57±15.207 336.64±23.56344.86±29.45340.64±37.62345.07±36.548 368.14±38.57420.50±51.18397.29±42.94387.50±39.239 226.22±6.48 217.07±10.44222.29±5.28 216.57±5.0510237.07±04.92335.15±5.19 234.65±7.57 237.86±6.17注各给药组与对照组比较，P＞0.05；1～8周为给药期进食量，g/10只/天，n＝10；9～10周为停药期进食量，g/5只/天，n＝5。
表1-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♂大鼠日平均进食量的影响(x±s)周次对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组177.57±04.48 80.14±06.25 78.00±07.30 80.79±06.822120.00±16.60110.43±10.31112.79±13.28111.14±16.113146.07±16.03141.57±15.34138.43±12.95132.92±12.094190.57±27.91189.14±27.08196.79±24.18191.43±20.685242.14±14.87240.64±20.41235.86±15.11241.29±19.876292.86±18.56287.43±16.97284.00±19.09288.14±19.907365.29±37.90361.29±33.39353.21±31.51367.71±35.668417.93±27.38424.79±37.96414.29±49.26369.79±39.909223.57±9.19 221.72±8.32 225.15±5.70 223.36±04.8210 241.22±5.68 239.50±7.87 239.15±04.38243.57±13.45注各给药组与对照组比较，P＞0.05；1～8周为给药期进食量，g/10只/天，n＝10；9～10周为停药期进食量，g/5只/天，n＝5。
表2-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♀大鼠体重(g)的影响(x±s)
周次 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组1119.30±7.40 118.30±06.68 120.60±08.11120.40±08.632133.70±10.01131.1±07.17134.00±06.50130.70±05.773151.10±08.76151.8±07.44151.70±07.29149.20±6.704160.00±17.66169.2±21.70164.1±22.46 165.00±19.805182.70±18.03182.2±15.08183.8±17.06 187.10±23.886198.70±17.31200.50±22.86 198.50±15.11207.00±09.107229.10±22.03220.00±22.85 217.40±24.71210.50±12.918256.50±18.04254.4±22.07243.90±17.69240.50±14.329264.80±06.42272.00±21.97 269.80±11.30269.00±15.5910 270.70±12.94277.00±20.80 275.80±20.51277.40±23.56注各给药组与对照组比较，P＞0.05，1～8周为给药期，n＝10；9～10周为停药期，n＝5。
表2-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♂大鼠体重(g)影响(x±s)周次 对照组 大剂量组 中剂量组 小剂量组1121.00±09.30118.10±13.95121.80±14.94123.40±12.042138.70±07.89138.80±13.34138.50±10.30141.70±11.273157.70±09.32160.40±09.47160.60±09.43161.20±10.734168..30±20.33 166.00±20.61167.00±22.36167.80±21.265184.40±20.44183.30±14.02184.90±20.28195.70±06.866202.40±21.4022.00±31.18 205.50±21.66210.00±26.147217.00±25.30223.10±30.83227.00±20.03225.10±22.418252.70±23.90253.40±24.73255.70±17.53254.10±17.379280.60±12.52279.00±19.85282.80±21.75274.20±19.5810 286.00±21.91281.00±21.62289.00±20.43282.00±19.24注各给药组与对照组比较，P＞0.05，1～8周为给药期，n＝10；9～10周为停药期，n＝5。
表3-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠血液细胞学指标的影响(X±S n＝10)组别剂量RBCHCT MCV HgbMCHPLT WBC WDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg)(×109/L)(×109/L)LYMO GR对照组 - 7.04±0.61 39.92±5.78 55.80±4.10 135.60±10.86 19.00±0.82 495.20±253.44 5.63±1.10 67.60±9.523.70±0.95 28.70±9.12蝉夜安 3.35 7.62±0.45 41.71±2.58 54.90±2.85 142.00±9.0418.80±0.92 561.70±244.30 5.48±1.67 70.20±14.00 3.80±0.75 26.00±13.86神胶囊2.01 7.18±0.33 39.73±2.68 55.00±2.36 138.60±7.6018.8±0.79 616.60±116.47 5.60±1.69 74.50±3.783.90±0.88 22.50±4.551.01 6.87±0.47 38.04±2.93 55.60±2.12 128.00±6.3918.80±0.42 506.80±127.88 5.17±1.31 69.10±4.613.40±0.84 24.50±3.98注各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与对照组相应指标数值比较P＞0.05表3-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周后停药2周对大鼠血液细胞学指标的影响(X±S n＝10)组别剂量RBC HCT MCV Hgb MCH PLT WBCWDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg) (×109/L)(×109/L) LY MO GR对照组 -7.13±0.42 38.25±3.17 53.50±1.96 136.20±7.80 19.1±0.88 496.0±166.98 4.08±1.68 86.2±3.33 2.7±0.82 11.3±2.87蝉夜安 3.35 7.24±0.52 39.89±4.53 54.80±2.49 131.3±6.0418.2±0.92 444.8±117.66 5.30±1.91 85.1±3.81 3.0±0.82 12.1±3.48神胶囊2.01 7.09±0.69 38.73±4.17 54.60±2.32 131.4±11.40 18.6±0.84 426.4±134.68 4.85±2.56 86.3±2.56 3.4±0.97 10.3±4.671.01 6.84±0.60 37.84±4.88 54.70±2.68 128.8±8.9019.0±0.94 498.4±157.68 5.33±1.59 85.9±1.59 3.3±0.82 10.8±5.07注各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与对照组相应指标数值比较P＞0.05
表4-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠血液生化指标影响(x±s，n＝10)组别 剂量 BUN CreaALT AST TP ALBAKPg/kg mmol/Lμmol/L u/L u/L g/L g/L u/L对照组- 7.68±3.8731.2±14.971.0±17.13336.1±89.6373.67±9.8433.80±3.01301.2±13.60蝉夜安3.358.04±1.0628.5±3.8971.5±11.77296.9±61.5177.91±4.2035.07±1.50350.2±11.05神胶囊2.018.05±0.9028.0±2.4960.2±26.90322.9±80.3976.11±4.1233.86±2.09348.6±99.881.017.81±1.1126.9±4.5168.7±15.41301.6±74.2175.15±3.8732.83±3.04362.2±96.17注各给药组动物血液生化指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较P＞0.05表4-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周的停药2周对大鼠血液生化指标影响(x±s，n＝10)组别 剂量BUN CreaALTAST TP ALB AKPg/kg mmol/Lμmol/L u/Lu/L g/L G/L u/L对照组- 7.03±1.9860.20±10.1450.5±15.20221.3±50.2067.68±6.6034.20±3.00309.0±83.3蝉夜安3.358.28±0.6965.43±10.5053.7±14.98186.6±33.4874.27±5.9036.74±3.98280.6±50.0神胶囊2.018.16±1.2165.52±6.37 50.5±10.41180.7±38.5875.18±4.4336.36±3.51293.4±66.21.017.56±0.9459.23±8.50 56.0±11.96188.7±25.9075.24±6.4338.24±5.30243.8±48.9注各给药组动物血液生化指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较P＞0.05
表5-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠主要脏器指数的影响(g/100g体重)(s±x，n＝10)组别 剂量心肝 脾肺肾肾上腺 胸腺g/kg对照组- 0.33±0.053.22±0.660.30±0.020.81±0.090.70±0.100.024±0.0050.018±0.003蝉夜安3.350.32±0.053.33±0.270.31±0.030.87±0.120.67±0.100.024±0.0040.017±0.003神胶囊2.010.34±0.043.36±0.320.32±0.070.87±0.060.63±0.100.025±0.0070.017±0.0041.010.33±0.043.32±0.090.29±0.030.79±0.050.70±0.060.025±0.0050.018±0.002注各给药组动物主要脏器系数指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P＞0.05.
表5-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周后停药2周对大鼠主要脏器指数的影响(g/100g体重)(s±x，n＝10)组别 剂量 心 肝 脾 肺 肾 肾上腺 胸腺g/kg对照组 -0.33±0.0263.58±0.69 0.29±0.085 0.981±0.1650.646±0.068 0.022±0.0040.0174±0.002蝉夜安 3.35 0.34±0.0323.27±0.43 0.306±0.0910.842±0.1040.691±0.0110.022±0.005 0.0181±0.004神胶囊2.01 0.35±0.0383.09±0.21 0.285±0.0670.968±0.2740.671±0.066 0.023±0.0070.0151±0.0041.01 0.34±0.0503.04±0.42 0.29±0.051 0.795±0.1410.635±0.011 0.027±0.0080.0168±0.005注各给药组动物主要脏器系数指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P＞0.05.
6 结语经大鼠长期毒性试验结果表明，以蝉夜安神胶囊内容物3.35g、2.01g、1.005g/kg体重(合生药为42.71g、25.63g、12.81g/kg体重)三种剂量——分别为拟定临床成人日用量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重的50倍、30倍、15倍——每日一次，连续8周对大鼠灌胃给药以及停药后2周，与灌胃蒸馏水的对照组比较；各种剂量给药对大鼠的一般状态(外观形态、活动、大便形状等)，生长发育(体重增长)，造血功能(血液学检查)，肝、肾功能(血液生化学)，重要器官重量系数，均未发现有明显的毒性作用；经病理学检查证明，高剂量组与对照组比较观察，对大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺组织，均未发现有明显的毒性损伤变化。
所以可以认为较大剂量、较长疗程服用蝉夜安神胶囊的毒性较低，服用较安全，可提供临床试用。
具体实施例方式
实施例本发明的蝉夜安神胶囊，其内容物主要是由下列重量的原料药制成天竺黄267g蝉蜕500g僵蚕 267g地龙 667g钩藤833g法半夏333g首乌藤833g白芍500g酸枣仁500g远志400g以上原料药制成胶囊1000粒。
其制备方法包括下列步骤(1)取所述重量的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊1000粒。
权利要求
1.一种蝉夜安神胶囊，其特征在于，它的内容物主要是由下列重量份的原料药制成天竺黄267份蝉蜕500份僵蚕 267份地龙 667份钩藤833份法半夏333份首乌藤833份白芍500份酸枣仁500份远志 400份
2.一种权利要求1所述的蝉夜安神胶囊的制备方法，其特征在于，它包括下列步骤(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量配比的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量配比的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量配比的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量配比的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊。
全文摘要
本发明公开了一种蝉夜安神胶囊及其制备方法，旨在提供一种疗效好、毒性作用小的治疗失眠的胶囊。该胶囊的内容物主要是天竺黄、蝉蜕、僵蚕、地龙、钩藤、法半夏、首乌藤、白芍、酸枣仁、远志由作原料药制成，它具有清热化痰、镇静安神的功能。本发明适于治疗痰热内扰型失眠。
文档编号A61P25/00GK1600349SQ03146949
公开日2005年3月30日 申请日期2003年9月26日 优先权日2003年9月26日
发明者陈和亮 申请人:珠海星光制药有限公司
技术领域：
本发明涉及一种蝉夜安神胶囊及其制备方法。
背景技术：
失眠是一种持续相当长时间的睡眠的质和/或量令人不满意的状况，常表现为难以入眠、不能入睡、维持睡眠困难、过早或间歇性醒来而引致睡眠不足。失眠是一种最常见的睡眠紊乱，它给患者带来巨大的身体和精神上的痛苦。随着社会的发展，生活节奏的加快，失眠症的发生率有上升趋势，据统计，约有30％的成人患有失眠。
目前，国内外治疗的失眠方法多为采用西药镇静剂治疗。西药镇静剂只能消极地控制或强制病人睡眠，不能提高睡眠质量，且随着病程的延长，用药量要不断增加。西药镇静剂还对人的神经等系统有很大的毒副作用。现有的用于治疗痰热内扰型失眠的中成药，其治疗效果差。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种用于治疗痰热内扰型失眠的中成药--蝉夜安神胶囊及其制备方法，该胶囊疗效好、毒性作用小。
本发明所采用的技术方案是一种蝉夜安神胶囊，它的内容物主要是由下列重量份的原料药制成，天竺黄267份蝉蜕500份僵蚕 267份地龙 667份钩藤833份法半夏333份首乌藤833份白芍500份酸枣仁500份远志400份其制备方法包括下列步骤(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量配比的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量配比的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量配比的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量配比的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊。
本发明的有益效果是本发明的蝉夜安神胶囊的内容物主要是由天竺黄、蝉蜕、僵蚕、地龙、钩藤、法半夏、首乌藤、白芍、酸枣仁、远志作原料药制成，它具有清热化痰、镇静安神的功能，对失眠治疗效果好、毒性作用小，特别适于治疗痰热内扰型失眠。
以下通过试验例来进一步阐述本发明所述的蝉夜安神胶囊的有益效果试验例一、蝉夜安神胶囊主要药效学试验摘要通过动物实验研究，观察了蝉夜安神胶囊给予动物灌胃后出现明显的解热、抗炎、抑菌、镇静、催眠、抗惊厥、提高动物机体免疫功能的作用。蝉夜安神胶囊各剂量给药组均能使发热家兔体温降低；小鼠耳肿胀度及大鼠足肿胀度减轻，并有抑菌作用；小鼠自主活动(记数法及走动时间及举前肢法)减少；小鼠入睡潜伏期缩短，睡眠时间延长；睡眠动物数增多，提高睡眠百分率；对抗中枢兴奋药—士的宁致小鼠惊厥作用；使小鼠碳廓清率提高，使幼龄小鼠免疫器官增重，使小鼠迟发型超敏反应增强，使血清溶血素生成增多。以上结果表明蝉夜安神胶囊对痰热内扰型失眠症具有良好的防治作用，因此该药可以提供临床试用，进一步观察该药的疗效。
目的观察蝉夜安神胶囊给予动物灌胃给药后所产生的解热、抑菌、抗炎、镇静、催眠、抗惊厥，及对小鼠机体免疫功能影响的作用，为中医临床试用治疗痰热内扰型失眠提供实验依据。
1 实验材料1.1 药物受试药蝉夜安神胶囊，功能清热化痰，镇静安神；主治痰热内扰型失眠症。该药由珠海星光制药有限公司提供，批号20020329，口服胶囊剂型，内容物呈棕色粉末，每粒装0.4g，合生药5.10g，每1g胶囊内容物合生药12.75g，成人日用剂量为(每日2次，每次5粒，成人体重按60kg计算)0.067g/kg，合生药0.854g/kg。实验时用蒸馏水配制成不同浓度的混悬液，置冰箱内保存备用；阳性对照药——舒眠胶囊由贵州大隆制药有限公司提供[国药准字(1999)z-33号]，批号20010103，口服胶囊剂型，内容物呈棕色粉末，装量为0.4g/粒，成人日用剂量为0.04g/kg，实验时用蒸馏水配制成混悬液置冰箱保存备用；戊巴比妥由上海医药进出口销售部提供，批号20010908，实验时用生理盐水配制成4.5％及3％戊巴比妥钠水溶液；硝酸士的宁注射液由上海禾丰制药有限公司提供，批号010901，安瓿剂型，2mg/毫升，实验时用生理盐水配制成0.015％士的宁溶液；印度墨汁由长江日用粘合材料厂提供，批号98112，实验时用生理盐水配制成50％印度墨汁水溶液；2，4二硝基氯苯(DNCB)由中国上海试剂一厂提供，批号981201。
1.2 动物昆明种小鼠，体重20～22g；wistar大鼠，体重210~230g；家兔，体重2.5±1.0kg；豚鼠，体重300±50g；以上动物♀♂兼用，均由贵阳医学院实验动物中心提供，清洁级，合格证号200200018；公鸡，市售(健康)。
1.3 主要仪器TMP-1上皿式电子天平(由湖南仪器仪表总厂天平厂提供)，721型分光光度计(由上海第三分析仪器厂提供)，LD5-2A离心机(由北京医用离心机厂提供)。
2 实验方法与结果2.1 蝉夜安神胶囊对致热家兔解热作用取家兔30只，分别称重，编号；在室温20℃条件下测正常体温，选择体温在38~39℃的家兔供实验用，随机分为五组，每组6只，逐只向各组每只家兔耳静脉注射伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗0.5ml/kg体重，5h后家兔体温升高造成高热模型家兔；按表1所示药物、剂量灌胃给药，于药后1h，3h，5h，7h测定各家兔体温。结果见表1。
从表1可见蝉夜安神胶囊于灌胃给药后1h就出现明显的解热作用，并可延续7h之久，与发热模型家兔比较差异显著(P＜0.05～P＜0.01)，而舒眠胶囊组及空白对照组对高热家兔无解热作用。
表1蝉夜安神胶囊对高热模型家兔解热作用(℃ x±s n＝6)组别剂量 正常时 发热时致热后解热体温(g/kg) 体温体温 1h3h5h 7h空白对照组 -38.3±0.3 39.4±0.4 39.9±0.3 40.1±0.3 39.7±0.20 39.5±0.3大剂量组0.67038.7±0.3 39.3±0.2 39.0±0.18*38.7±0.27**38.8±0.13**38.9±0.2*中剂量组0.33538.9±0.2 39.4±0.4 39.2±0.4*38.9±0.25*39.1±0.15**38.9±0.2*小剂量组0.17038.8±0.2 39.4±0.3 39.5±0.3*39.0±0.3*39.0±0.20*38.9±0.2*舒眠胶囊组 0.20 38.7±0.2 39.3±0.4 40.0±0.3 40.0±0.3 39.8±0.30 39.2±0.3注药后体温与药前发热体温比较*P＜0.05 **P＜0.012.2 蝉夜安神胶囊抑菌作用2.2.1 实验菌种金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌，均由贵阳中医学院微生物教研室提供，批号20020601。
2.2.2 培养基普通肉汤培养基、普通营养琼脂、血琼脂平板(提供单位贵阳中医学院微生物教研室)2.2.3 预先处理细菌及药物将上述菌株分别常规培养24h增菌后，再分别转种培养6h，然后作1∶1000稀释即用；将供试药物(蝉夜安神胶囊内容物)配制成每1ml含1g的浓度。
2.2.4 采用抗菌谱初筛试验；抗菌强度定性试验；抗菌强度定量试验。
2.2.5 结果①抗菌谱供试药物蝉夜安神胶囊对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌等实验菌均有一定的抗菌作用。
②抗菌强度定性结果见表2表2蝉夜安神胶囊抗菌强度定性结果金黄色葡 白色葡 柠檬色葡 乙型溶血性 大肠 伤寒 副氏痢 枯草 绿脓菌种萄球菌萄球菌 萄球菌 链球菌 杆菌 杆菌 疾杆菌 杆菌 杆菌抑菌圈直2.0 1.9 1.7 1.9 1.4 1.31.11.2 1.3径(cm)
③抗菌强度定量试验结果见表3表3蝉夜安神胶囊抗菌强度定量结果金黄色白色葡萄 柠檬色葡 乙型溶血 副氏痢疾杆药浓葡 大肠杆菌 伤寒杆菌 枯草杆菌 绿脓杆菌试药 球菌 萄球菌 性链球菌 菌％ 萄球菌号MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC MIC MBC------------------150.0225.0---------+-----+-+312.50 -----+---+-+-+-+-+46.25---+++--++++++++++53.13-+-+++-+++++++++++61.56-+++++-+++++++++++70.78++++++++++++++++++80.39++++++++++++++++++注最小抑菌浓度(MIC)，最小杀菌浓度(MBC)，(-)表示有抑制作用；(+)表示无抑制作用。
2.2.6 结论蝉夜安神胶囊对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌等实验菌均有一定抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌抗菌作用较强，对大肠杆菌、伤寒杆菌、副氏痢疾杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌抗菌作用较弱，以上抗菌作用与该制剂清热化痰功能相吻合。
2.3 蝉夜安神胶囊抗炎作用2.3.1 蝉夜安神胶囊对二甲苯致小鼠耳肿的影响取昆明种小鼠50只，♀♂各半，体重20±2g，随机分为五组，每组10只，分别按表4所述药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续5天；末次药后1小时，以二甲苯0.03ml涂于各组每只小鼠右耳前后两面，15min时剪取双耳，以直径为8mm的打孔器于同一部位取下左右两耳片，分别称重(mg)，计算每只鼠耳肿胀度(右耳重减去左耳重之差，mg)，进行组间t检验，比较组间肿胀度差异性。结果见表4。
由表4可见蝉夜安神胶囊各剂量对二甲苯所致急性炎症均有不同程度对抗作用，即表明蝉夜安神胶囊化痰功能的机理。舒眠胶囊对二甲苯诱发的炎症无对抗作用。
表4蝉夜安神胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x±s，n＝10)剂量体重 耳肿胀度肿胀抑制率组别(g/kg)(g) (mg)(％)空白对照组- 21.0±0.85 6.0±1.21 -大剂量组 1.34 21.1±0.88 3.7±1.16***38中剂量组 0.67 20.8±0.86 4.0±1.20**33小剂量组 0.34 20.9±0.94 4.4±0.70*27舒眠胶囊组0.40 20.5±0.76 6.1±1.11-注各给药组与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0012.4 蝉夜安神胶囊对小鼠镇静作用
2.4.1 对小鼠自主活动的影响(活动记数法)取♀性小鼠50只，随机分为5组，即空白对照组——给予蒸馏水0.2ml/10g体重灌胃；蝉夜安神胶囊大、中、小剂量组——剂量分别是1.34g、0.67g、0.34g/kg(合生药17.1g、8.5g、4.3g/kg)，各为成人日用剂量0.067g/kg(合生药0.85g/kg)的20倍、10倍、5倍，实验时用蒸馏水配制成6.7％、3.4％、1.7％蝉夜安神胶囊内容物混悬液按0.2ml/10g体重灌胃；阳性药对照组——舒眠胶囊组，以舒眠胶囊内容物，用蒸馏水配制成2.0％混悬液按0.2ml/10g体重灌胃。于上午8时～11时室温20℃±1℃进行实验，各组小鼠分别按体重灌胃给药后20min，将小鼠放在小鼠活动记录仪内，先适应5min后，再记录5min内各鼠自发活动次数，计算各组小鼠自发活动抑制百分率(％)。结果见表5。
由表5可见蝉夜安神胶囊各剂量组对小鼠自发活动均有明显的抑制作用，与空白对照组相比差异显著；并能提高自发活动抑制率，比舒眠胶囊作用优。
表5蝉夜安神胶囊对小鼠自发活动的影响——活动记数法(x±s n＝10)剂量 5min内自发活动次数 抑制率组别(g/kg)(次) (％)空白对照组- 11778±3179-大剂量组 1.34 8017±957***32中剂量组 0.67 8419±1059**29小剂量组 0.34 8367±1814**29舒眠胶囊组0.40 10149±230014注与空白对照组比较**P＜0.01***＜0.0012.4.2 蝉夜安神胶囊对小鼠走动时间及举双前肢的影响取♂性小鼠50只，体重18～22g，随机分组同上述实验项目2.4.1；将各组小鼠分别放在实验箱内适应5min后，测定各鼠5min内走动时间及前肢向上抬举次数，作为给药前各鼠正常状态时小鼠自主活动。次日同样时间按表6所示药物、剂量分别给药；给药后15min时用上述相同方法将小鼠放入实验箱内适应5min后，测定各鼠5min内的自主活动，所得结果进行组间及给药前、后小鼠自主活动变化的比较，结果见表6。
由表6可见，给药前各组小鼠走动时间及前肢向上抬举次数无明显差异，给药后给药组与空白对照组比较，走动时间及前肢向上抬举次数差异显著，给药组小鼠自主活动明显减少，各给药组给药后与给药前小鼠走动时间及前肢向上抬举次数明显减少，比阳性对照药舒眠胶囊作用优。
以上结果表明蝉夜安神胶囊对小鼠自主活动具有明显的镇静作用。
表6蝉夜安神胶囊对小鼠自主活动抑制作用(x±s n＝10)给药前给药后剂量组别(g/kg)走动时间(s) 前肢向上抬举次数走动时间(s) 前肢向上抬举次数空白对照组 -106.0±9.75 24.8±4.37108.9±11.3224.1±5.20大剂量组 1.34 109.3±13.91 26.1±5.3841.4±12.12***ΔΔΔ15.2±1.80***ΔΔΔ中剂量组 0.67 113.4±17.96 26.2±5.7351.2±10.1***ΔΔΔ17.7±2.58**ΔΔΔ小剂量组 0.34 108.9±15.63 24.7±6.7850.3±10.1***ΔΔΔ17.3±2.91**ΔΔ舒眠胶囊 0.40 113.8±13.25 22.3±5.5956.3±9.42***ΔΔΔ17.2±4.10**△注与空白对照组比较**P＜0.01 ***P＜0.001；药前与药后比较ΔP＜0.05ΔΔP＜0.01ΔΔΔP＜0.001。
2.4.3 蝉夜安神胶囊对戊巴比妥钠催眠量致小鼠睡眠的影响取小鼠100只，随机分组同上实验项目2.4.1，每组20只，♀♂各半；按表7所示药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续三日；末次药后30min及60min分别取出♀♂各半10只小鼠，以4.5％戊巴比妥钠(45mg/kg)0.1ml/10g体重腹腔注射(ip)，立即观察并记录小鼠翻正反射消失的时间和小鼠翻正反射恢复的时间，该时间分别为该小鼠入睡潜伏期(出现睡眠时间)及睡眠持续时间。结果见表7。
由表7可见蝉夜安神胶囊具有协同戊巴比妥钠中枢抑制作用，表现为二药合用小鼠入睡潜伏期缩短，睡眠时间延长，与空白对照组相比差异显著(P＜0.01、P＜0.001)。与舒眠胶囊催眠作用近似。
表7蝉夜安神胶囊对戊巴比妥钠催眠作用的影响(x±s n＝10)给药后30min药后60min剂量组别(g/kg)入睡潜伏期 睡眠持续时间 入睡潜伏期 睡眠持续时间(min)(min) (min) (min)空白对照组 - 8.60±2.26 17.88±2.89.60±3.13 17.1±4.51大剂量组1.344.89±1.79***88.56±33.23***5.70±1.89**38.3±12.11***中剂量组0.674.78±1.10***56.00±15.30***6.10±1.66**38.1±13.91***小剂量组0.344.17±1.85***34.75±15.90***6.20±1.99**27.1±6.77**舒眠胶囊组 0.404.90±1.85***48.40±19.10***6.40±2.07**30.6±7.37***注各给药组与空白对照组比较**P＜0.01***P＜0.0012.4.4 蝉夜安神胶囊对小鼠阈下催眠剂量戊巴比妥钠作用的影响仿文献取小鼠120只，♀♂各半，体重20～22g，随机分组同上述实验项目2.4.1，按表8所示药物、剂量给予各组小鼠30min及60min后，逐只小鼠分别ip 3％戊巴比妥钠溶液30mg/kg，观察并记录各组小鼠翻正反射消失(即入睡)的动物只数，计算其睡眠百分率。结果见表8。由表8可见，蝉夜安神胶囊各组及舒眠胶囊组睡眠动物数明显增加，睡眠百分率明显升高。可见蝉夜安神胶囊给药后30min与药后60min催眠作用均强，呈量一效正相关关系，表明蝉夜安神胶囊与戊巴比妥钠合用对中枢抑制作用明显加强。
表8蝉夜安神胶囊对阈下催眠剂量戊巴比妥钠协同作用的影响(x±s n＝12)药后30min 药后60min剂量组别(g/kg)入睡动物数入睡百分率入睡动物数入睡百分率(只) (％) (只) (％)空白对照组- 1 8 0 0大剂量组1.34 7*588*66中剂量组0.67 4 337*58小剂量组0.34 3 255 42舒眠胶囊组 0.40 3 255 42注x2检验，与空白对照组比较，*P＜0.052.4.5 蝉夜安神胶囊对抗士的宁致小鼠惊厥作用取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，♀♂各半，按表9所示药物、剂量分别灌胃给药，每日一次，连续3日；末次药后30min，以0.015％硝酸士的宁溶液0.1ml/10g体重腹腔注射，立即记录士的宁致惊潜伏期(s)及小鼠小鼠死亡时间(s)，观察惊厥以兴奋、躁动、竖尾到阵挛性惊厥死亡为指标，其结果经统计学处理进行组间t检验。结果见表9。
由表9可见，蝉夜安神胶囊大、中、小剂量对士的宁致惊厥均有明显的对抗作用，使致惊潜伏期明显延长，死亡时间明显延长。
表9蝉夜安神胶囊对小鼠致惊剂量士的宁引起惊厥的影响组别剂量 动物数 惊厥动物潜伏期 死亡时间(g/kg) (只) (s) (s)空白对照组 - 10 173.4±32.53 146.6±17.48大剂量组1.3410 237.3±52.92**172.6±16.65**中剂量组0.6710 225.7±32.51**178.9±19.20**小剂量组0.3410 214.0±28.69**168.7±12.73*△舒眠胶囊组 0.4010 188.8±14.16 161. 0±15.36注与空白对照组比较，**P＜0.012.5 蝉夜安神胶囊对小鼠免疫功能的影响2.5.1 对小鼠碳廓清率——网状内皮细胞吞噬作用的影响取昆明种小鼠50只，随机分组，每组10只，♀♂各半，按表10所示药物、剂量给药，每日一次，连续8天，末次药后1h，以50％印度墨汁0.1ml/10g体重尾静脉注射，于注射后2min、12min分别从眼眶取血0.02ml，加入盛有0.1％Na2CO3溶液2ml的试管内，静置10min后用721型分光光度计比色(λ＝680nm)，读取光密度，计算吞噬指数(K值)。取血后处死小鼠，取肝、脾称重，计算校正吞噬指数(α值)。结果见表10。
由表10可见除蝉夜安神胶囊小剂量组K值外，其余各组K值、α值均有明显的增加，与空白对照组相比差异显著(P＜0.05～P＜0.001)。蝉夜安神胶囊中剂量组与舒眠胶囊作用相近，表明蝉夜安神胶囊具有提高小鼠非特异性免疫功能作用。
表10蝉夜安神胶囊对小鼠网状内皮系统吞噬作用的影响(x±s n＝10)剂量组别 K值 α值(g/kg)空白对照组-0.0305±0.0182 5.359±1.216大剂量组 1.34 0.0575±0.0336*6.567±1.056*中剂量组 0.67 0.0536±0.0169**6.600±0.654**小剂量组 0.34 0.0436±0.0138 6.717±1.217*舒眠胶囊组0.40 0.0550±0.0181**6.922±1.060**注与空白对照组比较，*＜0.05 **P＜0.012.5.2 蝉夜安神胶囊对幼龄小鼠免疫器官重量的影响取幼龄小鼠50只，体重14~16g，随机分为5组，每组10只，♀♂各半，按表11所示药物及剂量灌胃给药，每日一次，连续13天；第14天将各组小鼠脱颈椎处死，剖取脾脏及胸腺分别称重，并计算脾脏及胸腺脏器指数。结果见表11。
由表11可见，除蝉夜安神胶囊小剂量组外，所有给药组对小鼠脾脏、胸腺重量及指数均有增加的趋势，无统计学意义(P＞0.05)，但也可以表明蝉夜安神胶囊有一定程度的能够提高小鼠非特异性免疫的功能。
表11 蝉夜安神胶囊对幼龄小鼠免疫器官重量及指数影响(x±s n＝10)组别 剂量 脏器重量(g) 脏器指数(g/10g体重)(g/kg) 脾胸腺体重脾 胸腺空白对照组 - 0.106±0.035 0.069±0.03022.14±6.12 0.048±0.01220.0305±0.0092大剂量组1.340.101±0.028 0.079±0.04720.02±2.66 0.0514±0.0164 0.0340±0.0139中剂量组0.670.107±0.016 0.075±0.02219.83±0.81 0.0548±0.0112 0.0377±0.0098小剂量组0.340.096±0.024 0.063±0.02218.31±4.73 0.0536±0.0121 0.0339±0.0056舒眠胶囊0.400.096±0.024 0.071±0.03818.90±2.80 0.0517±0.0155 0.0360±0.0148注各给药组与空白对照组比较P均＞0.052.5.3 蝉夜安神胶囊对小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响取昆明种小鼠50只，随机分组同上述实验项目2.5.1；按表12所示药物、剂量灌胃给药，每天一次，连续8天；于第3天和第5天用2.5％DNCB丙酮液0.02ml/只背部皮下注射致敏，第8天药后1h用1％DNCB丙酮液0.02ml/只涂小鼠右耳(攻击)。次日处死小鼠剪下双耳，用直径为8mm的打孔器取下左右两耳同一部位之耳片，分别称重，计算两耳片重量之差(肿胀度)。结果见表12。
从表中可见，蝉夜安神胶囊大、中剂量及阳性药舒眠胶囊均可使小鼠耳肿胀度明显增加，表明以上两种药物均可明显提高小鼠特异性免疫功能。
表12蝉夜安神胶囊对小鼠迟发型超敏反应的影响(x±s n＝10)剂量 耳肿胀度组别(g/kg) (mg)空白对照组 - 3.25±1.41大剂量组 1.34 5.44±2.13*中剂量组 0.67 5.15±2.76*小剂量组 0.34 3.97±1.72舒眠胶囊组 0.40 5.04±1.24**注与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01
2.5.4 蝉夜安神胶囊对小鼠血清溶血素含量的影响取昆明种小鼠50只，随机分组，按表13所示药物、剂量灌胃给药，每日一次，连续9次。给药的第2天以5％鸡红细胞(CRBC)混悬液0.2ml/只腹腔注射(ip)进行免疫，第9天药后1h，摘眼球取血静置30min，取血清10μ1，加入生理盐水(NS)1ml，再加入5％CRBC混悬液及10％补体各0.5ml，混匀，置37℃的恒温水浴箱孵育30min后，再移入冰箱冷却5min，用分光度计测定光密度(OD)值，观察溶血素生成情况。另设不加血清空白对照管上清液作调“0”基准，以光密度(OD)读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组差异。结果见表13。
由表13可见蝉夜安神胶囊各剂量组测得光密度值均明显增加，与空白组比较，P＜0.001~P＜0.05，并呈量一效正相关。阳性药舒眠胶囊与小剂量组近似，表明给药组均可使小鼠血清溶血素生成增多，即抗体产生量增多；说明蝉夜安神胶囊能提高小鼠机体体液免疫功能，即提高小鼠机体特异性免疫功能。
表13蝉夜安神胶囊对小鼠溶血素生成影响(x±s n＝10)组别剂量 溶血素(g/kg)空白对照组 - 0.0812±0.014大剂量组1.34 0.1272±0.026***中剂量组0.67 0.1151±0.026**小剂量组0.34 0.1115±0.028*舒眠胶囊组 0.40 0.1186±0.036*注给药组与空白对照组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.0013 结束语经主要药效学动物实验结果表明，蝉夜安神胶囊具有明显的解热、抑制细菌、消炎化痰、镇静、催眠、抗惊厥及提高小鼠免疫功能的作用，与临床中医治疗痰热内扰型失眠症机理相吻合。该制剂对高热家兔具有解热作用，对多种细菌具有对抗作用；对二甲苯所致小鼠耳肿有明显的抑制作用；对小鼠自主活动有明显的抑制作用，对戊巴比妥钠催眠量及阈下催眠剂量催眠作用均有协同作用；使小鼠网状内皮吞噬功能增强，免疫器官增重，迟发型趋敏反应提高，使小鼠血清溶血素生成增加。
以上结果表明该制剂具有清热、消炎、镇静、催眠、抗惊厥及提高机体免疫功能的作用；因此，蝉夜安神胶囊有良好的治疗痰热内扰型失眠的药理基础，可以提供临床试用。
试验例二、蝉夜安神胶囊急性毒性试验摘要观察口服给药途径，测定蝉夜安神胶囊最大给药量试验。结果表明小鼠口服蝉夜安神胶囊内容物水混悬液，最大给药量为28g/kg，合生药357g/kg，相当于成年人每日用药量418倍。所以，可以认为临床拟定成人口服给药剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)是安全的，因此本品可以提供临床试用。
目的观察蝉夜安神胶囊短期口服给予动物后，所产生的毒性反应及死亡情况，或最大给药剂量，或推算临床成人用量安全倍数，综合评价该药物的安全性。
1 实验材料1.1 药物受试药物蝉夜安神胶囊由广东珠海星光制药有限公司提供，批号20020329，口服胶囊剂型，每1g胶囊内容物合生药12.75g，拟定临床成人日用剂量为每日2次，每次5粒，0.4g/粒，该剂量按kg体重(成人体重按60kg计)计算为0.067g/kg，合生药0.854g/kg。实验时用蒸馏水配制成蝉夜安神胶囊内容物混悬液置冰箱内保存备用。
1.2 动物昆明种小鼠，体重20±2g，♀♂各半，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号0200015。先予饲养3天适应环境，第4天进行实验。
2 实验方法2.1 预试实验取小鼠6只，以蝉夜安神胶囊内容物混悬液最大浓度0.35g/ml(合生药4.4625g/ml)、最大容积0.4ml/10g体重，给予小鼠一次灌胃，此剂量14g/kg(合生药178.5g/kg)相当于成年人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的209倍；观察7天，不引起小鼠死亡。因不能测出药物的半数致死量(LD50)，故进行本品最大给药量的正式实验。
2.2 正式实验昆明种小鼠20只，♀♂各半，禁食不禁水12小时，给予小鼠0.35g/ml蝉夜安神胶囊内容物混悬液0.4ml/10g体重，一日内2次，药量共计28g/kg，合生药357g/kg。按体重计算此剂量相当于成年人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的418倍。给药后常规饲养小鼠7天，逐日观察小鼠表现。
3 实验结果小鼠给药后7天内，除给药后小鼠出现短暂的活动减少，不喜啃咬、摄食外，未见小鼠出现毒性反应及死亡现象。此结果表明1日内给予小鼠2次灌胃蝉夜安神胶囊混悬液最大浓度(0.35g/ml)、最大容量(0.4ml/10g体重)，其剂量共计为28g/kg，合生药357g/kg，相当于成人每日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)的418倍，而不致动物死亡。据文献报道“一般认为按体重计算小鼠最大耐受量相当于人用量100倍以上则较为安全，可以提供临床试用”。
根据上述实验结果可以认为，蝉夜安神胶囊口服给药对动物的急性毒性甚小，临床拟定成人每日服用该制剂0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重是安全的，可以提供临床试用。
4 结语受药物浓度和容积的限制，对小鼠1次灌胃给药测不出LD50，经最大给药量测定，1日内2次给予小鼠灌胃给药，最大给药量相当于临床用药量的418倍，故可认为本品的急性毒性低，口服安全。
试验例三、蝉夜安神胶囊长期毒性试验试验摘要大鼠连续8周灌胃(po)给予蝉夜安神胶囊内容物3.35g、2.01g、1.005g/kg，合生药42.71g、25.63g、12.81g/kg体重——三个剂量组剂量分别为拟用临床成人日剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重(成人体重按60kg计)的50倍、30倍、15倍，及停药2周。除去各组大鼠体重、摄食逐日增加外，未观察到各组大鼠行为、活动、皮毛、大小便等明显异常变化，未观察到各组大鼠血液细胞学、血液生化学指标(肝功能、肾功能)明显变化，未观察到各组大鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺系数异常变化，同时上述脏器病理组织检查未见明显异常。
1 目的观察较大剂量、较长时间、连续给予大鼠重复灌胃蝉夜安神胶囊8周，对大鼠所产生毒性反应，严重程度及首先出现的症状；观察毒性反应的靶器官及恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据。
2 实验材料2.1 药物蝉夜安神胶囊为口服胶囊剂，每粒装0.4g，合生药5.1g，每1g胶囊内容物合生药12.75g，由珠海星光制药有限公司提供，批号20020329。蝉夜安神胶囊内容物为棕色粉末，实验时用蒸馏水配制成不同浓度混悬液，冰箱保存备用。
2.2 动物wistar大鼠80只，♀♂各半，体重100~120g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号0200015。
2.3 主要仪器SC-970全自动血细胞分析仪，瑞士贝肯公司；日立7170A全自动生化分析仪，美国柯达。
2.4 实验数据统计以X±S表示，进行组间t检验。
3 实验方法3.1 实验条件 给药前后的大鼠均每笼单性别群养，每笼同性别5只大鼠，饲以全价颗粒饲料喂养，自由饮水，室温20~25℃，湿度55％~65％。给药前先观察7天大鼠一般状况，无异常变化，再开始给药进行试验。
3.2 分组和剂量取wistar大鼠80只，随机分为4组，每组20只，♀♂各半，分别作为蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量组及空白对照组(对照组)。给药组剂量分别为3.35g、2.01g、1.005g/kg(合生药42.71g、25.63g、12.81g/kg)，各为拟定临床成人日用剂量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重的50倍、30倍、15倍。实验前将蝉夜安神胶囊内容物用蒸馏水配制成33.5％、20.1％、10.05％的蝉夜安神胶囊混悬液，置于冰箱内保存备用。给药容积为10ml/kg体重。
3.3 给药途径及方法因为蝉夜安神胶囊临床用药途径是口服给药，所以各组均灌胃给药，每日上午8时动物空腹时灌胃一次，连续8周；每周称动物体重一次，根据动物体重增长变化，调整给药剂量。
3.4 试验周期实验总周期为10周，前8周为给药时间，后2周为停药恢复时间；首先观察给药8周期间动物有无毒性反应，每组取半数动物处死，测定各项指标，其余半数动物停药饲养2周后，同上述方法检测各项指标。
4 检查项目4.1 一般观察 进食量、体重、外观形态体征、行为活动、大便性状等；发现中毒动物立即隔离，重点观察；发现死亡或濒死动物，即刻尸检。
4.2 检测项目 连续给药8周，末次药后24小时，称大鼠体重后，每组动物半数♀♂各半，股静脉取血进行测试血液细胞学、血液生化学指标后将动物处死，立即剖取各鼠主要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺，分别称重，计算器官系数；再于同一部位取材浸泡于10％甲醛溶液固定，进行石蜡包埋，切片，HE染色；置光学显微镜观察并与对照组比较，首先对比检查高剂量组与对照组动物组织切片，观察器官组织形态变化。
血液学检查指标红细胞(RBC)计数、红细胞体积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、血红蛋白(Hgb)、血红蛋白平均量(MCH)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LY)、粒细胞(GR)、单核细胞(MO)。
血液生化学(肝、肾功能)检查指标尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(AKP)含量。
4.3 指标观察时间 每天全面观察所有实验动物的一般状况，动物活动行为，大便性状，外观体征，饲料夜耗量；每周称体重一次；给药8周末次药后24小时，及停药2周恢复期末，各进行一次各项指标的全面检查。
5 实验结果5.1 蝉夜安神胶囊对大鼠一般情况及进食的影响 在连续给药8周及停药2周内，将各给药组与对照组比较，观察动物活动、行为、饮食、大便、毛发光泽等，观察到两组动物情况相似，未见明显异常变化。在同一时间内大鼠摄食量雄性鼠比雌性鼠稍有增加，但无明显差异。结果见表1-1、表1-2。
5.2 蝉夜安神胶囊对大鼠体重的影响实验结果见表2-1、表2-2。
从表内可见，蝉夜安神胶囊高、中、低三种剂量对大鼠连续给药不同时间后的体重与对照组比较，其差异无统计学意义(P＞0.05)；但雄鼠体重比雌鼠体重增长略高。即实验结果表明在较大蝉夜安神胶囊剂量、较长疗程(8周)用药及停药2周对大鼠生长发育(体重增长)无毒性影响。
5.3 蝉夜安神胶囊对大鼠血液细胞学影响 实验结果见表3-1、表3-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，对大鼠的血常规均未见显著影响；各给药组动物RBC、Hgb、PCT、WBC等数值与对照组的数值接近；与对照组相比，经统计学处理，P＞0.05；因此，可以认为蝉夜安神胶囊较大剂量、较长时间(8周)给药，及停药2周，对大鼠的造血功能无显著的毒性影响。
5.4 蝉夜安神胶囊对大鼠血液生化学(肝功、肾功)的影响 实验结果见表4-1、表4-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，大鼠的肝功能及肾功能各项生化指标数值分别与对照组相应数值相比较，未见明显差异，P＞0.05；故表明蝉夜安神胶囊较大剂量连续用药8周及停药2周对大鼠肝功能、肾功能均无显著毒性作用。
5.5 蝉夜安神胶囊对大鼠主要器官系数的影响 实验结果见表5-1、表5-2。
从表中可见，蝉夜安神胶囊高、中、低3种剂量对大鼠连续给药8周及停药2周，大鼠重要器官心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺重量系数的数值与对照组均相近；经统计学处理，各给药组各项指标数值与对照组比较，其差异均无显著性，P均＞0.05。表明蝉夜安神胶囊较大剂量长期(8周)灌胃及停药2周，对大鼠器官重量系数无明显影响。
5.6 蝉夜安神胶囊对大鼠重要脏器组织病理形态的影响对蝉夜安神胶囊连续给药为8周，以及停药2周的两批次，杀取大鼠并解剖出各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺；在相同部位取材，用10％甲醛溶液固定。将高剂量组及空白对照组大鼠脏器标本抽样进行组织切片，进行病理学检查。
结果经对两组动物脏器标本抽样检查，各种器官结构基本正常，细胞染色均匀，无明显改变。由于高剂量组动物被检查的器官未出现药物致病理改变，故对中剂量组及低剂量组未进行器官组织切片。
表1-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♀大鼠日平均进食量的影响(x±s)周次 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组1 77.07±08.10 75.29±09.98 75.64±08.64 77.21±08.592 107.86±10.80108.86±11.89105.86±08.82103.50±08.363 135.71±10.90139.71±15.00126.33±13.84126.36±13.484 189.93±22.11185.79±24.72187.79±16.78186.14±25.745 231.71±15.25231.36±20.53222.36±16.35226.93±20.426 279.36±17.36275.43±18.90271.64±19.00281.57±15.207 336.64±23.56344.86±29.45340.64±37.62345.07±36.548 368.14±38.57420.50±51.18397.29±42.94387.50±39.239 226.22±6.48 217.07±10.44222.29±5.28 216.57±5.0510237.07±04.92335.15±5.19 234.65±7.57 237.86±6.17注各给药组与对照组比较，P＞0.05；1～8周为给药期进食量，g/10只/天，n＝10；9～10周为停药期进食量，g/5只/天，n＝5。
表1-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♂大鼠日平均进食量的影响(x±s)周次对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组177.57±04.48 80.14±06.25 78.00±07.30 80.79±06.822120.00±16.60110.43±10.31112.79±13.28111.14±16.113146.07±16.03141.57±15.34138.43±12.95132.92±12.094190.57±27.91189.14±27.08196.79±24.18191.43±20.685242.14±14.87240.64±20.41235.86±15.11241.29±19.876292.86±18.56287.43±16.97284.00±19.09288.14±19.907365.29±37.90361.29±33.39353.21±31.51367.71±35.668417.93±27.38424.79±37.96414.29±49.26369.79±39.909223.57±9.19 221.72±8.32 225.15±5.70 223.36±04.8210 241.22±5.68 239.50±7.87 239.15±04.38243.57±13.45注各给药组与对照组比较，P＞0.05；1～8周为给药期进食量，g/10只/天，n＝10；9～10周为停药期进食量，g/5只/天，n＝5。
表2-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♀大鼠体重(g)的影响(x±s)
周次 空白对照组 高剂量组 中剂量组 低剂量组1119.30±7.40 118.30±06.68 120.60±08.11120.40±08.632133.70±10.01131.1±07.17134.00±06.50130.70±05.773151.10±08.76151.8±07.44151.70±07.29149.20±6.704160.00±17.66169.2±21.70164.1±22.46 165.00±19.805182.70±18.03182.2±15.08183.8±17.06 187.10±23.886198.70±17.31200.50±22.86 198.50±15.11207.00±09.107229.10±22.03220.00±22.85 217.40±24.71210.50±12.918256.50±18.04254.4±22.07243.90±17.69240.50±14.329264.80±06.42272.00±21.97 269.80±11.30269.00±15.5910 270.70±12.94277.00±20.80 275.80±20.51277.40±23.56注各给药组与对照组比较，P＞0.05，1～8周为给药期，n＝10；9～10周为停药期，n＝5。
表2-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周及停药2周期间对♂大鼠体重(g)影响(x±s)周次 对照组 大剂量组 中剂量组 小剂量组1121.00±09.30118.10±13.95121.80±14.94123.40±12.042138.70±07.89138.80±13.34138.50±10.30141.70±11.273157.70±09.32160.40±09.47160.60±09.43161.20±10.734168..30±20.33 166.00±20.61167.00±22.36167.80±21.265184.40±20.44183.30±14.02184.90±20.28195.70±06.866202.40±21.4022.00±31.18 205.50±21.66210.00±26.147217.00±25.30223.10±30.83227.00±20.03225.10±22.418252.70±23.90253.40±24.73255.70±17.53254.10±17.379280.60±12.52279.00±19.85282.80±21.75274.20±19.5810 286.00±21.91281.00±21.62289.00±20.43282.00±19.24注各给药组与对照组比较，P＞0.05，1～8周为给药期，n＝10；9～10周为停药期，n＝5。
表3-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠血液细胞学指标的影响(X±S n＝10)组别剂量RBCHCT MCV HgbMCHPLT WBC WDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg)(×109/L)(×109/L)LYMO GR对照组 - 7.04±0.61 39.92±5.78 55.80±4.10 135.60±10.86 19.00±0.82 495.20±253.44 5.63±1.10 67.60±9.523.70±0.95 28.70±9.12蝉夜安 3.35 7.62±0.45 41.71±2.58 54.90±2.85 142.00±9.0418.80±0.92 561.70±244.30 5.48±1.67 70.20±14.00 3.80±0.75 26.00±13.86神胶囊2.01 7.18±0.33 39.73±2.68 55.00±2.36 138.60±7.6018.8±0.79 616.60±116.47 5.60±1.69 74.50±3.783.90±0.88 22.50±4.551.01 6.87±0.47 38.04±2.93 55.60±2.12 128.00±6.3918.80±0.42 506.80±127.88 5.17±1.31 69.10±4.613.40±0.84 24.50±3.98注各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与对照组相应指标数值比较P＞0.05表3-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周后停药2周对大鼠血液细胞学指标的影响(X±S n＝10)组别剂量RBC HCT MCV Hgb MCH PLT WBCWDC％g/kg (×1012/L)(％) (fl) (g/L) (pg) (×109/L)(×109/L) LY MO GR对照组 -7.13±0.42 38.25±3.17 53.50±1.96 136.20±7.80 19.1±0.88 496.0±166.98 4.08±1.68 86.2±3.33 2.7±0.82 11.3±2.87蝉夜安 3.35 7.24±0.52 39.89±4.53 54.80±2.49 131.3±6.0418.2±0.92 444.8±117.66 5.30±1.91 85.1±3.81 3.0±0.82 12.1±3.48神胶囊2.01 7.09±0.69 38.73±4.17 54.60±2.32 131.4±11.40 18.6±0.84 426.4±134.68 4.85±2.56 86.3±2.56 3.4±0.97 10.3±4.671.01 6.84±0.60 37.84±4.88 54.70±2.68 128.8±8.9019.0±0.94 498.4±157.68 5.33±1.59 85.9±1.59 3.3±0.82 10.8±5.07注各给药组动物血液细胞学各项指标数值分别与对照组相应指标数值比较P＞0.05
表4-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠血液生化指标影响(x±s，n＝10)组别 剂量 BUN CreaALT AST TP ALBAKPg/kg mmol/Lμmol/L u/L u/L g/L g/L u/L对照组- 7.68±3.8731.2±14.971.0±17.13336.1±89.6373.67±9.8433.80±3.01301.2±13.60蝉夜安3.358.04±1.0628.5±3.8971.5±11.77296.9±61.5177.91±4.2035.07±1.50350.2±11.05神胶囊2.018.05±0.9028.0±2.4960.2±26.90322.9±80.3976.11±4.1233.86±2.09348.6±99.881.017.81±1.1126.9±4.5168.7±15.41301.6±74.2175.15±3.8732.83±3.04362.2±96.17注各给药组动物血液生化指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较P＞0.05表4-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周的停药2周对大鼠血液生化指标影响(x±s，n＝10)组别 剂量BUN CreaALTAST TP ALB AKPg/kg mmol/Lμmol/L u/Lu/L g/L G/L u/L对照组- 7.03±1.9860.20±10.1450.5±15.20221.3±50.2067.68±6.6034.20±3.00309.0±83.3蝉夜安3.358.28±0.6965.43±10.5053.7±14.98186.6±33.4874.27±5.9036.74±3.98280.6±50.0神胶囊2.018.16±1.2165.52±6.37 50.5±10.41180.7±38.5875.18±4.4336.36±3.51293.4±66.21.017.56±0.9459.23±8.50 56.0±11.96188.7±25.9075.24±6.4338.24±5.30243.8±48.9注各给药组动物血液生化指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较P＞0.05
表5-1蝉夜安神胶囊长期连续给药8周对大鼠主要脏器指数的影响(g/100g体重)(s±x，n＝10)组别 剂量心肝 脾肺肾肾上腺 胸腺g/kg对照组- 0.33±0.053.22±0.660.30±0.020.81±0.090.70±0.100.024±0.0050.018±0.003蝉夜安3.350.32±0.053.33±0.270.31±0.030.87±0.120.67±0.100.024±0.0040.017±0.003神胶囊2.010.34±0.043.36±0.320.32±0.070.87±0.060.63±0.100.025±0.0070.017±0.0041.010.33±0.043.32±0.090.29±0.030.79±0.050.70±0.060.025±0.0050.018±0.002注各给药组动物主要脏器系数指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P＞0.05.
表5-2蝉夜安神胶囊长期连续给药8周后停药2周对大鼠主要脏器指数的影响(g/100g体重)(s±x，n＝10)组别 剂量 心 肝 脾 肺 肾 肾上腺 胸腺g/kg对照组 -0.33±0.0263.58±0.69 0.29±0.085 0.981±0.1650.646±0.068 0.022±0.0040.0174±0.002蝉夜安 3.35 0.34±0.0323.27±0.43 0.306±0.0910.842±0.1040.691±0.0110.022±0.005 0.0181±0.004神胶囊2.01 0.35±0.0383.09±0.21 0.285±0.0670.968±0.2740.671±0.066 0.023±0.0070.0151±0.0041.01 0.34±0.0503.04±0.42 0.29±0.051 0.795±0.1410.635±0.011 0.027±0.0080.0168±0.005注各给药组动物主要脏器系数指标数值分别与空白对照组相应指标数值比较，P＞0.05.
6 结语经大鼠长期毒性试验结果表明，以蝉夜安神胶囊内容物3.35g、2.01g、1.005g/kg体重(合生药为42.71g、25.63g、12.81g/kg体重)三种剂量——分别为拟定临床成人日用量0.067g/kg(合生药0.854g/kg)体重的50倍、30倍、15倍——每日一次，连续8周对大鼠灌胃给药以及停药后2周，与灌胃蒸馏水的对照组比较；各种剂量给药对大鼠的一般状态(外观形态、活动、大便形状等)，生长发育(体重增长)，造血功能(血液学检查)，肝、肾功能(血液生化学)，重要器官重量系数，均未发现有明显的毒性作用；经病理学检查证明，高剂量组与对照组比较观察，对大鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺组织，均未发现有明显的毒性损伤变化。
所以可以认为较大剂量、较长疗程服用蝉夜安神胶囊的毒性较低，服用较安全，可提供临床试用。
具体实施例方式
实施例本发明的蝉夜安神胶囊，其内容物主要是由下列重量的原料药制成天竺黄267g蝉蜕500g僵蚕 267g地龙 667g钩藤833g法半夏333g首乌藤833g白芍500g酸枣仁500g远志400g以上原料药制成胶囊1000粒。
其制备方法包括下列步骤(1)取所述重量的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊1000粒。
权利要求
1.一种蝉夜安神胶囊，其特征在于，它的内容物主要是由下列重量份的原料药制成天竺黄267份蝉蜕500份僵蚕 267份地龙 667份钩藤833份法半夏333份首乌藤833份白芍500份酸枣仁500份远志 400份
2.一种权利要求1所述的蝉夜安神胶囊的制备方法，其特征在于，它包括下列步骤(1)取所述重量配比的1/3量的天竺黄，在80℃下干燥4小时，粉碎成细粉，备用；(2)取所述重量配比的首乌藤加8倍量70％乙醇回流提取2小时，滤过，药渣再加6倍量70％乙醇回流提取1.5小时，合并回流提取液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(3)取所述重量配比的僵蚕加10倍量水煎煮提取1.5小时，滤过，药渣再加8倍量水煎煮提取1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(4)取所述重量配比的蝉蜕、地龙、法半夏、白芍、酸枣仁、远志及2/3量天竺黄分别加10倍、8倍量水煎煮提取二次，第一次2小时，第二次1小时，于第二次提取时加入所述重量配比的钩藤药材，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.10～1.15(70℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量达70％，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.30～1.35(70℃)的稠膏，备用；(5)合并所述步骤(2)、(3)、(4)制得的稠膏，加入所述步骤(1)制得的天竺黄细粉，混匀，在80℃下干燥，粉碎成细粉，过筛，加入适量淀粉，混匀，分装成胶囊。
全文摘要
本发明公开了一种蝉夜安神胶囊及其制备方法，旨在提供一种疗效好、毒性作用小的治疗失眠的胶囊。该胶囊的内容物主要是天竺黄、蝉蜕、僵蚕、地龙、钩藤、法半夏、首乌藤、白芍、酸枣仁、远志由作原料药制成，它具有清热化痰、镇静安神的功能。本发明适于治疗痰热内扰型失眠。
文档编号A61P25/00GK1600349SQ03146949
公开日2005年3月30日 申请日期2003年9月26日 优先权日2003年9月26日
发明者陈和亮 申请人:珠海星光制药有限公司
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