抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY及其组合制剂的制作方法
专利名称：抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY及其组合制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及其制备方法，特别是涉及用于防治因病毒、致病菌、以及过敏原引致的各种鼻腔和鼻窦炎症的多种组合的复合IgY及其制备方法和新型组合制剂。
IgY(Immunoglobulin of YoIk)属IgG类免疫球蛋白，能与相应抗原发生特异性结合，从而抑制或改变了该抗原(为某些细菌或真菌或病毒)的状态或活性，并通过调理作用，促进分叶核细胞或巨噬细胞对细菌或真菌或者病毒的吞噬。由于IgY能够特异性与病原体结合并将其抑制，就可以克服抗生素和抗真菌药的一些缺点，从而达到有效治疗和预防相关病原体引发的鼻腔和鼻窦炎症的目的。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的1、优选引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病病原体A、细菌；A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等；B、真菌烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌等；C、病毒鼻病毒5型、14型、29型、冠状病毒229E型和0C43型等；2、分别制备各种病原体复合抗原A、细菌复合抗原购买市售的A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占20-5％A簇B型溶血性链球菌 占35-50％
流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原。
B、制备真菌复合抗原购买市售的烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌、毛霉菌等6种真菌菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养。
将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌占 35-15％黄曲霉菌占 20-10％黑曲霉菌占 30-15％米曲霉菌占 10-20％构巢曲霉菌 占 10-15％白色念珠菌 占 10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌菌体成分的复合抗原。
C、、制备含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原优选引致急性鼻炎的有代表性的病原体鼻病毒5型、14型、29型三种(可根据情况变更优选的鼻病毒种类和数目)，冠状病毒229E型和0C43型两种(可根据情况变更优选的冠状病毒种类和数目)，再加上引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病菌A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌，另加1-3种引致鼻腔炎症的主要真菌烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌；先将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；再将A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌分别培养好后，按1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，制成致病菌抗原混合物；然后，将烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌培养好后按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，制成真菌抗原混合物；最后，将病毒抗原混合物、致病菌抗原混合物、真菌抗原混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合搅拌均匀，再按1-10∶1-10的比例加入福氏佐剂，然后一道放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得一种含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原；3、分别用以上制备的细菌复合抗原或真菌复合抗原或含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原，免疫优选的健康产蛋禽类，检取免疫后的产蛋禽类所生的免疫蛋，并按细菌复合抗原免疫蛋和真菌复合抗原免疫蛋以及抗病毒、细菌和真菌复合抗原免疫蛋的不同分别编码标记，以便区别；4、分别提取抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物；5、采用过离子交换柱和凝胶交换柱对按以上工艺技术制取的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得到各种纯IgY。
将0.01-80％的本发明的抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及各种复合IgY配以99.99-20％的辅料，可制成临床可接受的各种剂型，包括鼻喷剂、滴鼻剂、鼻烟壶式的吸鼻剂等；将本发明的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY按1-10∶1-10比例混合，就可制成一种抗多种病原体和致敏原的特异性复合IgY；将本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY与抗感冒特异性IgY按1-10∶1-10的比例混合，可制成一种抗病毒性和细菌性感染鼻炎的复合IgY；将本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY以及抗过敏特异性IgY按1-10∶1-10∶1-10的比例混合，可制成一种多重组合的特异性复合IgY。
本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY，以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY和多种抗病毒、细菌和过敏原的特异性复合IgY，都是从免疫后的产蛋禽类(母鸡、母鸭或火鸡、鸵鸟等)所产蛋的蛋黄中提取的生物制剂，使用十分安全，无任何毒付作用。采用本发明的方法制备的各种抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY和复合IgY，配以蒸馏水或各种溶剂，加上适量香精，制成各种制剂，直接施于病原体最集中的鼻腔部位，作用直接，见效快，使用又十分简便。本发明供防治用途，即使长期大量使用，也不会对鼻腔、鼻粘膜造成任何刺激或损伤。既不会像滴鼻净或麻黄碱等化学滴鼻药那样导致药物性鼻炎，也不会像丁卡因、利多卡因等药物那样破坏鼻粘膜粘液纤毛输送功能。特别是，由于本发明的特异性IgY只对引致各种鼻腔炎症的病原体或致敏原直接产生抑制作用，对鼻腔内的各种有益菌有很好的保护作用，不会像“抗生素”和其他化学药物那样，诱发产生“抗药菌株”，也不致造成“菌群失调”。更可贵的是，应用本发明的特异性IgY，还可以在鼻腔内构建一种不产生炎症、不易被病毒和细菌以及真菌感染的正常菌群生态，从而产生特殊的长效作用。
试验例1应用SDS-PAGE电泳测定法，对采用本发明的方法制备的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗真菌性鼻窦炎特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物进行检测，测得其中纯IgY含量为50％左右。
试验例2应用常规“ELISA法”(酶联免疫实验法)分别检测按本发明的方法制备的三种特异型IgY的活性。检测结果为下表所示
从检测结果可以看出，采用本发明的方法所制得的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY对引致鼻炎和鼻窦炎的常见致病菌的抗体结合效价都很高，显示有很强的抑制作用；所制得的抗鼻真菌病特异性IgY对引致鼻真菌病的常见真菌也有很好的抑制作用；同样，采用本发明的方法制备一种包含病毒、细菌和真菌综合性复合抗原，用其免疫生蛋禽类，所制备的抗病毒、细菌和真菌的特异性IgY无论对引致鼻腔炎症的常见的病毒，还是常见的致病菌，或者常见的几种真菌都有理想的抗体结合效价，提示都有一定的抑制效果。
试验例3应用常规“ELISA法”(酶联免疫实验法)检测所制备的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY对与免疫的抗原有“共同抗原决定簇”的同种不同型、不同亚型的其他病原体的抗体结合效价。
分别以13型鼻病毒、A簇A型溶血性链球菌和黄曲霉菌作为检测用抗原，检测抗病毒、细菌和真菌特异性IgY对这些不同抗原的抗体结合效价，结果为下表
以上检测结果证明，由于13型鼻病毒和14型鼻病毒有“抗原交叉”，即具有“共同抗原决定簇”；A簇A型溶血性链球菌和A簇B型溶血性链球菌也有“抗原交叉”，具有“共同抗原决定簇”；黄曲霉菌和烟曲霉菌也有“抗原交叉”；因此，虽然本发明在制备抗病毒、细菌和真菌特异性IgY时，并没有将13型鼻病毒、A簇A型溶血性链球菌以及黄曲霉菌直接作为抗原成分免疫生蛋禽类，但是，采用本发明的综合性复合抗原制备方法和免疫激活手段以及制备方法所制得的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY，对这些有抗原交叉的同种不同型、不同亚型的病原体仍有一定的抑制作用。
试验例4把这种抗各种鼻腔炎症的特异性IgY和复合IgY制成的各种新型喷鼻剂和滴鼻剂供志愿者试用，预防鼻炎和治疗鼻炎的实际效果都十分理想。
以其中一种抗病毒和细菌感染鼻炎特异性IgY喷鼻剂为例，供任选100例急性鼻炎患者，在不配合其他任何治疗、戒烟酒及辛辣食物的前提下，使用本发明的喷鼻剂喷雾治疗，每日喷鼻8次，连续喷一周。大部分患者才喷一天，鼻塞、流清鼻水的症状就消除了；有鼻部灼热感，痒感的患者喷2-3天后，症状也明显减轻，喷4天以后，大部分鼻部有灼热感、痒感的患者症状消除。
实施例1制备100g抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种鹅用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只母鹅，每次注射3ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鹅所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的鹅100只，再用这批鹅所产的蛋孵出优良鹅种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鹅，并挑选其中20只。
(2)鼻炎和鼻窦炎致病细菌复合抗原的制备购买市售的A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养。
将培养好的细菌菌株按以下比例混合匀化A簇B型溶血性链球菌占35-50％肺炎双球菌占20-5％流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再加进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原。
(3)分别对优选的特种母鹅进行强化免疫用所制取得鼻炎和鼻窦炎致病菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鹅进行免疫，每只母鹅每次注射量达3-6ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次；第一次免疫20天后，检取母鹅所产免疫蛋500只。
(4)抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
实施例2制备200g抗鼻真菌病特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种火鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋火鸡，每次注射4ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第7个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡，并挑选其中20只。
(2)鼻真菌病致病真菌复合抗原的制备购买市售的烟曲霉菌、黑曲霉菌、黄曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌等6种真菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养。
将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌 占35-15％黄曲霉菌 占20-10％黑曲霉菌 占15-30％米曲霉菌 占10-20％构巢曲霉菌占10-15％白色念珠菌占10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌体成分混合的真菌复合抗原。
(3)分别对优选的特种产蛋火鸡进行强化免疫用所制取的真菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只火鸡每次注射量达到5-10ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次，第一次免疫20天后，检取产蛋火鸡所产免疫蛋500只。
(4)抗鼻真菌病特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻真菌病特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
实施例3制备200g抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种母鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋母鸡，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第6个月，把这些母鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批母鸡所产的蛋孵出优良鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋母鸡，并挑选其中20只。
(2)鼻炎致病病毒复合抗原的制备购买市售的鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后，将鼻病毒5型、14型和29型按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，把229E型、0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得致病病毒复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的鼻炎致病病毒复合抗原对产蛋母鸡进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋；制备抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
实施例4我们用所制备的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
配方如下(1)配方(按20升计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY200g薄荷香精 900g蒸馏水 加至20升(2)配置方法加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5，经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶灌装抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序，采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY滴鼻剂型。
实施例5我们用所制备得抗鼻真菌病特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按20升计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻真菌病特异性IgY 200g
薄荷香精 900g蒸馏水 加至20升(2)配置方法先加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶灌装抗鼻真菌病特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻真菌病特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序，采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻真菌病特异性IgY滴鼻剂型。
实施例6我们用所制备的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗病毒、细菌和真菌特异性IgY 200重量份薄荷香精900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗病毒、细菌和真菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY滴鼻剂型。
实施例7用所制备的抗鼻炎致病病毒特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻炎致病病毒特异性IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗鼻炎致病病毒特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎致病病毒特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY滴鼻剂型。
实施例8用所制备的抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)
抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配制方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经细菌过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗病毒和细菌感染特异性复合IgY溶液，每只装15ml，就制成抗病毒和细菌感染特异性复合IgY喷鼻剂。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY滴鼻剂型。
实施例9用所制备的抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
(1)抗过敏特异性IgY的制备筛选出引致过敏性疾病的过敏原包括花粉过敏原，尘螨过敏原，霉菌过敏原，蟑螂过敏原，宠物过敏原；在筛选和分类组合各种过敏原的基础上，分别制备单一或复合的过敏原抗原，将各组别单一或混合的过敏原提取液或制剂，按1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中，高速搅拌形成油包水乳液，即制成单一或复合过敏原抗原；制备免疫球蛋白IgE抗原可以从人体特别是过敏症患者的血清中提取IgE，或购买现成的IgE免疫球蛋白作为抗原原料，将IgE免疫球蛋白按1-10∶1-10比例配以福氏佐剂，置入高速匀浆机中，高速匀化，即制成IgE抗原；制备免疫蛋用各种单一或复合过敏原抗原或IgE抗原，分别对产蛋鸡进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取鸡所产免疫蛋，并对相应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记；抗各种过敏原特异性IgY粗提物的制备流动水逐个洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒；用打蛋机击破蛋，蛋黄筛取出蛋黄，搅打蛋黄均匀，按蛋黄液量加入4-6倍蒸馏水稀释，搅拌均匀，用1.0N的Hcl调pH至5.5-6.0，2-6℃静置12-24小时，虹吸得取上清液，称A液；将以上沉淀液以8000rpm离心20分种，得取上清液，称B液；将A液和B液混和均匀，超滤，得到超滤浓缩液，加入2.0％海藻酸钠液，至终浓度为1.0‰，搅拌直至浑浊沉淀，加入2.0％氯化钙液，至终浓度1.0％，搅拌均匀，2-6℃静置过夜，8000rpm离心30分种，取上清液，进而通过细菌过滤器除菌，得到无菌滤液，冷冻干燥，即为IgY粗提物，最后把所制备的抗各种不同抗原的IgY粗提物进行编码标记；抗各种过敏原特异性IgY粗提物和抗IgE特异性IgY粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗各种过敏原特异性IgY和抗IgE特异性IgY粗提物分别先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY；制备抗某一种或多种特定过敏原的特异性复合IgY不同抗原制得的纯IgY，同样按照上述各自不同的编码标记严格标记以便区分，将一种抗过敏特异性IgY或多种抗过敏特异性IgY混合物与抗IgE特异性IgY按1-10∶1-10的比例混合均匀即得。
(2)抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY的制备将抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
(3)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(4)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经细菌过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY溶液，每只装15ml，就制成抗感染和过敏性鼻炎特异性复合IgY喷鼻剂。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗感染和过敏性鼻炎特异性复合IgY滴鼻剂型。
实施例10用所制备的抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
(1)抗感冒特异性IgY的制备A.培养优选的有代表性的各种致普通感冒的病原体包括1A、2、5、14、23、29、31型等血清型鼻病毒与229E、0C43型等血清型冠状病毒及7型、3型和4型等血清型腺病毒；B.制备引致普通感冒的致病病毒的复合抗原将培养好的血清型1A型鼻病毒、2型鼻病毒、5型鼻病毒、14型鼻病毒、23型鼻病毒、29型鼻病毒、31型鼻病毒按1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成鼻病毒混合物；将培养好的血清型229E型冠状病毒和0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混合制成冠状病毒混合物；将培养好的血清型7型、3型和4型腺病毒按1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成腺病毒混合物；接着将分别制成的鼻病毒混合物和冠状病毒混合物以及腺病毒混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合，制成普通感冒病原体混合物；将制成的普通感冒病原体混合物按1-10∶1-10的比例与福氏佐剂混匀，最佳比例为1∶1。然后，加入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速进行高速粉碎匀化，高速搅拌形成油包水乳液，即制成普通感冒(Common Cold)致病病毒的复合抗原。
C.普通感冒继发感染细菌复合抗原的制备购买市售的肺炎双球菌、A型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、1型肺炎克雷伯杆菌(肺炎杆菌)、流感嗜血杆菌、绿脓杆菌等6种细菌菌株，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养。
将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占50-30％A型溶血性链球菌 占5-15％金黄色葡萄球菌 占5-5％1型肺炎克雷伯杆菌 占30-10％流感嗜血杆菌占5-15％绿脓杆菌占5-15％然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机以10000-30000rpm转速高速匀化，通过高速搅拌形成油包水溶液，好制成含全菌和菌体成分的继发感染细菌特殊复合抗原。
D.制备致病病毒免疫蛋将采用上述方法制备的普通感冒致病病毒复合抗原，分别对产蛋母鸡进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋，并对应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记。
E.制备继发感染细菌免疫蛋将采用上述方法制备的感冒继发感染细菌复合抗原，分别对产蛋母鸡进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋，并对应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记。
F.抗感冒致病病毒特异性IgY和抗继发感染细菌特异性IgY粗提物的制备首先根据被免疫的禽类不同以及免疫所用抗原不同，将免疫蛋分类并标记编码，用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒；用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用Na0H溶液调整pH值至5.5-6.0之间；将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时；将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，分别制得抗感冒致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品和抗继发感染细菌特异性IgY粗提物干粉成品，然后进行编码标记。
G.抗感冒特异性IgY的纯化分别过离子交换柱和凝胶交换柱对按以上工艺所制取的抗感冒特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
(2)抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY的制备将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
(3)配方抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(4)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原的鼻喷液或滴鼻剂。
权利要求
1.一种抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体；分别制备引致鼻炎和鼻窦炎的各种病原体抗原；制备免疫蛋；分别提取抗鼻炎和鼻窦炎各种致病病原体特异性IgY粗提物；粗提物的纯化；制备抗某一种或多种特定鼻炎和鼻窦炎致病病原体的特异性IgY。
2.如权利要求1所述的抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于所述引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体包括细菌、真菌及病毒；细菌包括A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌；真菌包括烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌；病毒包括鼻病毒5型、14型、29型、冠状病毒229E型和0C43型。
3.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病细菌A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌；制备细菌复合抗原购买市售的A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占 20-5％A簇B型溶血性链球菌 占 35-50％流感杆菌占 10-25％金黄色葡萄球菌 占 15-5％草绿色链球菌占 10-5％白色葡萄球菌占 5％左右卡他球菌占 5％左右然后加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的细菌复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
4.一种抗鼻真菌病特异性IgY，其特征在于该抗鼻真菌病特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻真菌病的主要病原体烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌；制备真菌复合抗原购买市售的烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌、毛霉菌等6种真菌菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养，将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌 占 35-15％黄曲霉菌 占 20-10％黑曲霉菌 占 30-15％米曲霉菌 占 10-20％构巢曲霉菌 占 10-15％白色念珠菌 占 10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌菌体成分的复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的真菌复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻真菌病特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻真菌病特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
5.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致急性鼻炎的病原体病毒包括鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；致病细菌包括A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌；真菌包括烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌；制备含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原先将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；再将A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌分别培养好后，按1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，制成致病菌抗原混合物；然后，将烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌培养好后按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，制成真菌抗原混合物。最后，将病毒抗原混合物、致病菌抗原混合物、真菌抗原混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合搅拌均匀，再按1-10∶1-10的比例加入福氏佐剂，然后一道放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得一种含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
6.根据权利要求3或4或5所述的特异性IgY的制备方法，其特征在于用于制备免疫蛋的产蛋禽类可以为母鸡或母鸭或母鹅或火鸡或鸵鸟。
7.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性鹅IgY，其特征在于该特异性鹅IgY的制备方法包括下列步骤(1)选具高免疫应答能力的良种鹅用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只母鹅，每次注射3ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鹅所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的鹅100只，再用这批鹅所产的蛋孵出优良鹅种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鹅，并挑选其中20只；(2)鼻炎和鼻窦炎致病细菌复合抗原的制备购买市售的A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌菌株按以下比例混合匀化A簇B型溶血性链球菌占35-50％肺炎双球菌占20-5％流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再加进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原；(3)分别对优选的特种母鹅进行强化免疫用所制取得鼻炎和鼻窦炎致病菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鹅进行免疫，每只母鹅每次注射量达3-6ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次；第一次免疫20天后，检取母鹅所产免疫蛋500只；(4)抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
8.一种抗鼻真菌病特异性火鸡IgY，其特征在于该特异性火鸡IgY的制备方法包括下列步骤(1)选具高免疫应答能力的良种火鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋火鸡，每次注射4ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第7个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡，并挑选其中20只；(2)鼻真菌病致病真菌复合抗原的制备购买市售的烟曲霉菌、黑曲霉菌、黄曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌等6种真菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养，将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌占35-15％黄曲霉菌占20-10％黑曲霉菌占15-30％米曲霉菌占10-20％构巢曲霉菌 占10-15％白色念珠菌占10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌体成分混合的真菌复合抗原。(3)分别对优选的特种产蛋火鸡进行强化免疫用所制取的真菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只火鸡每次注射量达到5-10ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次，第一次免疫20天后，检取产蛋火鸡所产免疫蛋500只。(4)抗鼻真菌病特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻真菌病特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
9.一种抗鼻炎致病病毒特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎致病病毒特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻炎的主要致病病毒鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；制备致病病毒复合抗原将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后，将鼻病毒5型、14型和29型按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，把229E型、0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得致病病毒复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的鼻炎致病病毒复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
10.一种抗鼻炎致病病毒和致病细菌特异性复合IgY的制备，其特征在于将所述抗鼻炎致病病毒特异性IgY和抗鼻炎致病菌特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
11.一种抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病病毒特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
12.一种抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
13.一种抗鼻炎多种病原体和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将本发明制备的抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
14.如权利要求1或2所述的抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY可以制成临床可接受的剂型。
15.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5，经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
16.一种抗鼻真菌病特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻真菌病特异性IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水150体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻真菌病特异性IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
17.一种抗鼻炎和鼻窦炎多种病原体特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗病毒、细菌和真菌特异性IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎多种病原体特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
18.一种抗鼻炎致病病毒和致病细菌特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒和致病菌特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗病毒和细菌感染特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病病毒和致病菌特异性复合IgY鼻喷液或滴鼻剂。
19.一种抗感染性及过敏性鼻炎和鼻窦炎的鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎多种病原体和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗感染性及过敏性鼻炎和鼻窦炎的鼻喷液或滴鼻剂。
20.一种抗鼻炎致病菌和致敏原的特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为1)配方抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和致敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
21.一种抗鼻炎致病病毒和致敏原的特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病病毒和致敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
22.一种抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
23.一种抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY以及抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉按1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
24.一种抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为1)配方抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原的鼻喷液或滴鼻剂。
25.一种抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及其组合制剂。该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体；分别制备引致鼻炎和鼻窦炎的各种病原体抗原；制备免疫蛋；分别提取抗鼻炎和鼻窦炎各种致病病原体特异性IgY粗提物；粗提物的纯化；制备抗某一种或多种特定鼻炎和鼻窦炎致病病原体的特异性IgY。本发明的特异性IgY只对引致各种鼻腔炎症的病原体或致敏原直接产生抑制作用，对鼻腔内的各种有益菌有很好的保护作用，不会诱发产生“抗药菌株”，也不致造成“菌群失调”，还可以在鼻腔内构建一种不产生炎症、不易被病毒和细菌以及真菌感染的正常菌群生态，从而产生特殊的长效作用，由于直接施于病原体最集中的鼻腔部位，作用直接，见效快，使用又十分简便。
文档编号A61P31/10GK1457885SQ0314778
公开日2003年11月26日 申请日期2003年6月26日 优先权日2003年6月26日
发明者包晟 申请人:雅臣药业集团(远东)有限公司
技术领域：
本发明涉及一种抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及其制备方法，特别是涉及用于防治因病毒、致病菌、以及过敏原引致的各种鼻腔和鼻窦炎症的多种组合的复合IgY及其制备方法和新型组合制剂。
IgY(Immunoglobulin of YoIk)属IgG类免疫球蛋白，能与相应抗原发生特异性结合，从而抑制或改变了该抗原(为某些细菌或真菌或病毒)的状态或活性，并通过调理作用，促进分叶核细胞或巨噬细胞对细菌或真菌或者病毒的吞噬。由于IgY能够特异性与病原体结合并将其抑制，就可以克服抗生素和抗真菌药的一些缺点，从而达到有效治疗和预防相关病原体引发的鼻腔和鼻窦炎症的目的。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的1、优选引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病病原体A、细菌；A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等；B、真菌烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌等；C、病毒鼻病毒5型、14型、29型、冠状病毒229E型和0C43型等；2、分别制备各种病原体复合抗原A、细菌复合抗原购买市售的A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占20-5％A簇B型溶血性链球菌 占35-50％
流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原。
B、制备真菌复合抗原购买市售的烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌、毛霉菌等6种真菌菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养。
将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌占 35-15％黄曲霉菌占 20-10％黑曲霉菌占 30-15％米曲霉菌占 10-20％构巢曲霉菌 占 10-15％白色念珠菌 占 10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌菌体成分的复合抗原。
C、、制备含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原优选引致急性鼻炎的有代表性的病原体鼻病毒5型、14型、29型三种(可根据情况变更优选的鼻病毒种类和数目)，冠状病毒229E型和0C43型两种(可根据情况变更优选的冠状病毒种类和数目)，再加上引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病菌A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌，另加1-3种引致鼻腔炎症的主要真菌烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌；先将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；再将A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌分别培养好后，按1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，制成致病菌抗原混合物；然后，将烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌培养好后按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，制成真菌抗原混合物；最后，将病毒抗原混合物、致病菌抗原混合物、真菌抗原混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合搅拌均匀，再按1-10∶1-10的比例加入福氏佐剂，然后一道放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得一种含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原；3、分别用以上制备的细菌复合抗原或真菌复合抗原或含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原，免疫优选的健康产蛋禽类，检取免疫后的产蛋禽类所生的免疫蛋，并按细菌复合抗原免疫蛋和真菌复合抗原免疫蛋以及抗病毒、细菌和真菌复合抗原免疫蛋的不同分别编码标记，以便区别；4、分别提取抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物；5、采用过离子交换柱和凝胶交换柱对按以上工艺技术制取的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得到各种纯IgY。
将0.01-80％的本发明的抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及各种复合IgY配以99.99-20％的辅料，可制成临床可接受的各种剂型，包括鼻喷剂、滴鼻剂、鼻烟壶式的吸鼻剂等；将本发明的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY按1-10∶1-10比例混合，就可制成一种抗多种病原体和致敏原的特异性复合IgY；将本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY与抗感冒特异性IgY按1-10∶1-10的比例混合，可制成一种抗病毒性和细菌性感染鼻炎的复合IgY；将本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY以及抗过敏特异性IgY按1-10∶1-10∶1-10的比例混合，可制成一种多重组合的特异性复合IgY。
本发明的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗鼻真菌病特异性IgY，以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY和多种抗病毒、细菌和过敏原的特异性复合IgY，都是从免疫后的产蛋禽类(母鸡、母鸭或火鸡、鸵鸟等)所产蛋的蛋黄中提取的生物制剂，使用十分安全，无任何毒付作用。采用本发明的方法制备的各种抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY和复合IgY，配以蒸馏水或各种溶剂，加上适量香精，制成各种制剂，直接施于病原体最集中的鼻腔部位，作用直接，见效快，使用又十分简便。本发明供防治用途，即使长期大量使用，也不会对鼻腔、鼻粘膜造成任何刺激或损伤。既不会像滴鼻净或麻黄碱等化学滴鼻药那样导致药物性鼻炎，也不会像丁卡因、利多卡因等药物那样破坏鼻粘膜粘液纤毛输送功能。特别是，由于本发明的特异性IgY只对引致各种鼻腔炎症的病原体或致敏原直接产生抑制作用，对鼻腔内的各种有益菌有很好的保护作用，不会像“抗生素”和其他化学药物那样，诱发产生“抗药菌株”，也不致造成“菌群失调”。更可贵的是，应用本发明的特异性IgY，还可以在鼻腔内构建一种不产生炎症、不易被病毒和细菌以及真菌感染的正常菌群生态，从而产生特殊的长效作用。
试验例1应用SDS-PAGE电泳测定法，对采用本发明的方法制备的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY和抗真菌性鼻窦炎特异性IgY以及抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物进行检测，测得其中纯IgY含量为50％左右。
试验例2应用常规“ELISA法”(酶联免疫实验法)分别检测按本发明的方法制备的三种特异型IgY的活性。检测结果为下表所示
从检测结果可以看出，采用本发明的方法所制得的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY对引致鼻炎和鼻窦炎的常见致病菌的抗体结合效价都很高，显示有很强的抑制作用；所制得的抗鼻真菌病特异性IgY对引致鼻真菌病的常见真菌也有很好的抑制作用；同样，采用本发明的方法制备一种包含病毒、细菌和真菌综合性复合抗原，用其免疫生蛋禽类，所制备的抗病毒、细菌和真菌的特异性IgY无论对引致鼻腔炎症的常见的病毒，还是常见的致病菌，或者常见的几种真菌都有理想的抗体结合效价，提示都有一定的抑制效果。
试验例3应用常规“ELISA法”(酶联免疫实验法)检测所制备的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY对与免疫的抗原有“共同抗原决定簇”的同种不同型、不同亚型的其他病原体的抗体结合效价。
分别以13型鼻病毒、A簇A型溶血性链球菌和黄曲霉菌作为检测用抗原，检测抗病毒、细菌和真菌特异性IgY对这些不同抗原的抗体结合效价，结果为下表
以上检测结果证明，由于13型鼻病毒和14型鼻病毒有“抗原交叉”，即具有“共同抗原决定簇”；A簇A型溶血性链球菌和A簇B型溶血性链球菌也有“抗原交叉”，具有“共同抗原决定簇”；黄曲霉菌和烟曲霉菌也有“抗原交叉”；因此，虽然本发明在制备抗病毒、细菌和真菌特异性IgY时，并没有将13型鼻病毒、A簇A型溶血性链球菌以及黄曲霉菌直接作为抗原成分免疫生蛋禽类，但是，采用本发明的综合性复合抗原制备方法和免疫激活手段以及制备方法所制得的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY，对这些有抗原交叉的同种不同型、不同亚型的病原体仍有一定的抑制作用。
试验例4把这种抗各种鼻腔炎症的特异性IgY和复合IgY制成的各种新型喷鼻剂和滴鼻剂供志愿者试用，预防鼻炎和治疗鼻炎的实际效果都十分理想。
以其中一种抗病毒和细菌感染鼻炎特异性IgY喷鼻剂为例，供任选100例急性鼻炎患者，在不配合其他任何治疗、戒烟酒及辛辣食物的前提下，使用本发明的喷鼻剂喷雾治疗，每日喷鼻8次，连续喷一周。大部分患者才喷一天，鼻塞、流清鼻水的症状就消除了；有鼻部灼热感，痒感的患者喷2-3天后，症状也明显减轻，喷4天以后，大部分鼻部有灼热感、痒感的患者症状消除。
实施例1制备100g抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种鹅用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只母鹅，每次注射3ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鹅所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的鹅100只，再用这批鹅所产的蛋孵出优良鹅种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鹅，并挑选其中20只。
(2)鼻炎和鼻窦炎致病细菌复合抗原的制备购买市售的A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养。
将培养好的细菌菌株按以下比例混合匀化A簇B型溶血性链球菌占35-50％肺炎双球菌占20-5％流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再加进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原。
(3)分别对优选的特种母鹅进行强化免疫用所制取得鼻炎和鼻窦炎致病菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鹅进行免疫，每只母鹅每次注射量达3-6ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次；第一次免疫20天后，检取母鹅所产免疫蛋500只。
(4)抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
实施例2制备200g抗鼻真菌病特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种火鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋火鸡，每次注射4ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第7个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡，并挑选其中20只。
(2)鼻真菌病致病真菌复合抗原的制备购买市售的烟曲霉菌、黑曲霉菌、黄曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌等6种真菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养。
将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌 占35-15％黄曲霉菌 占20-10％黑曲霉菌 占15-30％米曲霉菌 占10-20％构巢曲霉菌占10-15％白色念珠菌占10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌体成分混合的真菌复合抗原。
(3)分别对优选的特种产蛋火鸡进行强化免疫用所制取的真菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只火鸡每次注射量达到5-10ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次，第一次免疫20天后，检取产蛋火鸡所产免疫蛋500只。
(4)抗鼻真菌病特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻真菌病特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
实施例3制备200g抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物及纯IgY。
(1)选具高免疫应答能力的良种母鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋母鸡，每次注射1ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第6个月，把这些母鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批母鸡所产的蛋孵出优良鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋母鸡，并挑选其中20只。
(2)鼻炎致病病毒复合抗原的制备购买市售的鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后，将鼻病毒5型、14型和29型按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，把229E型、0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得致病病毒复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的鼻炎致病病毒复合抗原对产蛋母鸡进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋；制备抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
实施例4我们用所制备的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
配方如下(1)配方(按20升计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY200g薄荷香精 900g蒸馏水 加至20升(2)配置方法加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5，经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶灌装抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序，采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY滴鼻剂型。
实施例5我们用所制备得抗鼻真菌病特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按20升计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻真菌病特异性IgY 200g
薄荷香精 900g蒸馏水 加至20升(2)配置方法先加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶灌装抗鼻真菌病特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻真菌病特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序，采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻真菌病特异性IgY滴鼻剂型。
实施例6我们用所制备的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗病毒、细菌和真菌特异性IgY 200重量份薄荷香精900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗病毒、细菌和真菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY滴鼻剂型。
实施例7用所制备的抗鼻炎致病病毒特异性IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗鼻炎致病病毒特异性IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗鼻炎致病病毒特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎致病病毒特异性IgY鼻喷液。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗鼻腔炎症多种病原体特异性IgY滴鼻剂型。
实施例8用所制备的抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
配方如下(1)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)
抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配制方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经细菌过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗病毒和细菌感染特异性复合IgY溶液，每只装15ml，就制成抗病毒和细菌感染特异性复合IgY喷鼻剂。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗病毒和细菌感染鼻炎特异性复合IgY滴鼻剂型。
实施例9用所制备的抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
(1)抗过敏特异性IgY的制备筛选出引致过敏性疾病的过敏原包括花粉过敏原，尘螨过敏原，霉菌过敏原，蟑螂过敏原，宠物过敏原；在筛选和分类组合各种过敏原的基础上，分别制备单一或复合的过敏原抗原，将各组别单一或混合的过敏原提取液或制剂，按1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中，高速搅拌形成油包水乳液，即制成单一或复合过敏原抗原；制备免疫球蛋白IgE抗原可以从人体特别是过敏症患者的血清中提取IgE，或购买现成的IgE免疫球蛋白作为抗原原料，将IgE免疫球蛋白按1-10∶1-10比例配以福氏佐剂，置入高速匀浆机中，高速匀化，即制成IgE抗原；制备免疫蛋用各种单一或复合过敏原抗原或IgE抗原，分别对产蛋鸡进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取鸡所产免疫蛋，并对相应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记；抗各种过敏原特异性IgY粗提物的制备流动水逐个洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒；用打蛋机击破蛋，蛋黄筛取出蛋黄，搅打蛋黄均匀，按蛋黄液量加入4-6倍蒸馏水稀释，搅拌均匀，用1.0N的Hcl调pH至5.5-6.0，2-6℃静置12-24小时，虹吸得取上清液，称A液；将以上沉淀液以8000rpm离心20分种，得取上清液，称B液；将A液和B液混和均匀，超滤，得到超滤浓缩液，加入2.0％海藻酸钠液，至终浓度为1.0‰，搅拌直至浑浊沉淀，加入2.0％氯化钙液，至终浓度1.0％，搅拌均匀，2-6℃静置过夜，8000rpm离心30分种，取上清液，进而通过细菌过滤器除菌，得到无菌滤液，冷冻干燥，即为IgY粗提物，最后把所制备的抗各种不同抗原的IgY粗提物进行编码标记；抗各种过敏原特异性IgY粗提物和抗IgE特异性IgY粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗各种过敏原特异性IgY和抗IgE特异性IgY粗提物分别先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY；制备抗某一种或多种特定过敏原的特异性复合IgY不同抗原制得的纯IgY，同样按照上述各自不同的编码标记严格标记以便区分，将一种抗过敏特异性IgY或多种抗过敏特异性IgY混合物与抗IgE特异性IgY按1-10∶1-10的比例混合均匀即得。
(2)抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY的制备将抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
(3)配方(按200体积份计算。所有成分和比例可酌情增减)抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(4)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5；经细菌过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶灌装抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY溶液，每只装15ml，就制成抗感染和过敏性鼻炎特异性复合IgY喷鼻剂。如最后灌装工序采用滴鼻瓶灌装，则制得抗感染和过敏性鼻炎特异性复合IgY滴鼻剂型。
实施例10用所制备的抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY作为主要原料制成一种鼻喷液或滴鼻剂。
(1)抗感冒特异性IgY的制备A.培养优选的有代表性的各种致普通感冒的病原体包括1A、2、5、14、23、29、31型等血清型鼻病毒与229E、0C43型等血清型冠状病毒及7型、3型和4型等血清型腺病毒；B.制备引致普通感冒的致病病毒的复合抗原将培养好的血清型1A型鼻病毒、2型鼻病毒、5型鼻病毒、14型鼻病毒、23型鼻病毒、29型鼻病毒、31型鼻病毒按1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成鼻病毒混合物；将培养好的血清型229E型冠状病毒和0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混合制成冠状病毒混合物；将培养好的血清型7型、3型和4型腺病毒按1-10∶1-10∶1-10的比例混合制成腺病毒混合物；接着将分别制成的鼻病毒混合物和冠状病毒混合物以及腺病毒混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合，制成普通感冒病原体混合物；将制成的普通感冒病原体混合物按1-10∶1-10的比例与福氏佐剂混匀，最佳比例为1∶1。然后，加入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速进行高速粉碎匀化，高速搅拌形成油包水乳液，即制成普通感冒(Common Cold)致病病毒的复合抗原。
C.普通感冒继发感染细菌复合抗原的制备购买市售的肺炎双球菌、A型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、1型肺炎克雷伯杆菌(肺炎杆菌)、流感嗜血杆菌、绿脓杆菌等6种细菌菌株，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养。
将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占50-30％A型溶血性链球菌 占5-15％金黄色葡萄球菌 占5-5％1型肺炎克雷伯杆菌 占30-10％流感嗜血杆菌占5-15％绿脓杆菌占5-15％然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机以10000-30000rpm转速高速匀化，通过高速搅拌形成油包水溶液，好制成含全菌和菌体成分的继发感染细菌特殊复合抗原。
D.制备致病病毒免疫蛋将采用上述方法制备的普通感冒致病病毒复合抗原，分别对产蛋母鸡进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋，并对应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记。
E.制备继发感染细菌免疫蛋将采用上述方法制备的感冒继发感染细菌复合抗原，分别对产蛋母鸡进行免疫；每隔二周再强化注射一次，计免疫三次；第一次免疫20天后，检取免疫后的母鸡所产免疫蛋，并对应不同的抗原，对所检取的免疫蛋进行编码标记。
F.抗感冒致病病毒特异性IgY和抗继发感染细菌特异性IgY粗提物的制备首先根据被免疫的禽类不同以及免疫所用抗原不同，将免疫蛋分类并标记编码，用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒；用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用Na0H溶液调整pH值至5.5-6.0之间；将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时；将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟；将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌；再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白；将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌；将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，分别制得抗感冒致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品和抗继发感染细菌特异性IgY粗提物干粉成品，然后进行编码标记。
G.抗感冒特异性IgY的纯化分别过离子交换柱和凝胶交换柱对按以上工艺所制取的抗感冒特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
(2)抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY的制备将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
(3)配方抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(4)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原的鼻喷液或滴鼻剂。
权利要求
1.一种抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体；分别制备引致鼻炎和鼻窦炎的各种病原体抗原；制备免疫蛋；分别提取抗鼻炎和鼻窦炎各种致病病原体特异性IgY粗提物；粗提物的纯化；制备抗某一种或多种特定鼻炎和鼻窦炎致病病原体的特异性IgY。
2.如权利要求1所述的抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于所述引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体包括细菌、真菌及病毒；细菌包括A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌；真菌包括烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌；病毒包括鼻病毒5型、14型、29型、冠状病毒229E型和0C43型。
3.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻炎和鼻窦炎的主要致病细菌A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌；制备细菌复合抗原购买市售的A簇B型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、流感杆菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌按以下比例混合匀化肺炎双球菌 占 20-5％A簇B型溶血性链球菌 占 35-50％流感杆菌占 10-25％金黄色葡萄球菌 占 15-5％草绿色链球菌占 10-5％白色葡萄球菌占 5％左右卡他球菌占 5％左右然后加入福氏佐剂，再放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的细菌复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
4.一种抗鼻真菌病特异性IgY，其特征在于该抗鼻真菌病特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻真菌病的主要病原体烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌以及构巢曲霉菌和白色念珠菌；制备真菌复合抗原购买市售的烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌、毛霉菌等6种真菌菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养，将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌 占 35-15％黄曲霉菌 占 20-10％黑曲霉菌 占 30-15％米曲霉菌 占 10-20％构巢曲霉菌 占 10-15％白色念珠菌 占 10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌菌体成分的复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的真菌复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻真菌病特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻真菌病特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
5.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致急性鼻炎的病原体病毒包括鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；致病细菌包括A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌；真菌包括烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌；制备含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原先将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；再将A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌分别培养好后，按1-10∶1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀，制成致病菌抗原混合物；然后，将烟曲霉菌、黑曲霉菌和白色念珠菌培养好后按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，制成真菌抗原混合物。最后，将病毒抗原混合物、致病菌抗原混合物、真菌抗原混合物按1-10∶1-10∶1-10的比例混合搅拌均匀，再按1-10∶1-10的比例加入福氏佐剂，然后一道放进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得一种含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的含病毒、细菌和真菌的综合性复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1～0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗病毒、细菌和真菌特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
6.根据权利要求3或4或5所述的特异性IgY的制备方法，其特征在于用于制备免疫蛋的产蛋禽类可以为母鸡或母鸭或母鹅或火鸡或鸵鸟。
7.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性鹅IgY，其特征在于该特异性鹅IgY的制备方法包括下列步骤(1)选具高免疫应答能力的良种鹅用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只母鹅，每次注射3ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第七个月，把这些鹅所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的鹅100只，再用这批鹅所产的蛋孵出优良鹅种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种母鹅，并挑选其中20只；(2)鼻炎和鼻窦炎致病细菌复合抗原的制备购买市售的A簇B型溶血性链球菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、流感杆菌、卡他球菌、草绿色链球菌、白色葡萄球菌等7种菌种，用细菌培养基分别在细菌培养箱中常规培养，将培养好的细菌菌株按以下比例混合匀化A簇B型溶血性链球菌占35-50％肺炎双球菌占20-5％流感杆菌 占10-25％金黄色葡萄球菌占15-5％草绿色链球菌 占10-5％白色葡萄球菌 占5％左右卡他球菌 占5％左右然后加入福氏佐剂，再加进高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和菌体成分混合的细菌复合抗原；(3)分别对优选的特种母鹅进行强化免疫用所制取得鼻炎和鼻窦炎致病菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种母鹅进行免疫，每只母鹅每次注射量达3-6ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次；第一次免疫20天后，检取母鹅所产免疫蛋500只；(4)抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
8.一种抗鼻真菌病特异性火鸡IgY，其特征在于该特异性火鸡IgY的制备方法包括下列步骤(1)选具高免疫应答能力的良种火鸡用A簇B型溶血性链球菌制作抗原，分别免疫500只产蛋火鸡，每次注射4ml抗原，在第一次注射后，每隔二周再强化注射一次，共三次，于第一次注射后第7个月，把这些火鸡所产的蛋标记后按常规方法分别提取其中的IgY，以ELISA法(酶联免疫吸附试验)检测所制得的IgY的效价，选出其中能制得IgY效价≥256的免疫应答能力特别强的100只，再用这批火鸡所产的蛋孵出优良火鸡种，待其长大至2-3个月，作为优选的高免疫应答能力的特种产蛋火鸡，并挑选其中20只；(2)鼻真菌病致病真菌复合抗原的制备购买市售的烟曲霉菌、黑曲霉菌、黄曲霉菌、米曲霉菌、构巢曲霉菌以及白色念珠菌等6种真菌种，采用真菌培养基在培养箱中常规培养，将培养好的真菌按以下比例混合匀化烟曲霉菌占35-15％黄曲霉菌占20-10％黑曲霉菌占15-30％米曲霉菌占10-20％构巢曲霉菌 占10-15％白色念珠菌占10％左右然后加入福氏佐剂，置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得全菌和真菌体成分混合的真菌复合抗原。(3)分别对优选的特种产蛋火鸡进行强化免疫用所制取的真菌复合抗原，采用皮下注射和翅静脉注射相结合的强化免疫法，分别对优选的特种火鸡进行免疫，每只火鸡每次注射量达到5-10ml抗原，每隔二周再强化注射一次，一个月内共免疫三次，第一次免疫20天后，检取产蛋火鸡所产免疫蛋500只。(4)抗鼻真菌病特异性IgY的制备用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时，将稀释液加入高速离心分离机中，以8000-12000rpm转速高速离心分离20分钟，将分离所得的上清再入超滤器中进行超滤并浓缩15倍，按0.2％的比例将海藻酸加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻真菌病特异性IgY粗提物干粉成品，过离子交换柱和凝胶交换柱对抗鼻真菌病特异性IgY粗提物进行纯化，即得纯IgY。
9.一种抗鼻炎致病病毒特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎致病病毒特异性IgY的制备方法包括下列步骤优选引致鼻炎的主要致病病毒鼻病毒5型、14型、29型，冠状病毒229E型和0C43型；制备致病病毒复合抗原将5型、14型和29型鼻病毒和229E型、0C43型冠状病毒各自培养并灭活后，将鼻病毒5型、14型和29型按1-10∶1-10∶1-10的比例混匀，把229E型、0C43型冠状病毒按1-10∶1-10的比例混匀，然后把鼻病毒和冠状病毒按1-10∶1-10比例混合均匀，制成病毒抗原混合物；然后以1-10∶1-10比例加入福氏佐剂，再置入高速匀浆机中以10000-30000rpm转速高速粉碎匀化，则制得致病病毒复合抗原；制备免疫蛋用以上制备的鼻炎致病病毒复合抗原对产蛋禽类进行免疫，每隔二周再强化注射一次，一个月计免疫三次，第一次免疫20天后，检取免疫后的禽类所产免疫蛋；制备抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物用流动水洗净免疫蛋，再用酒精擦洗消毒，用打蛋机将检取的免疫蛋打碎，用蛋黄筛筛滤去蛋清，留下蛋黄，搅拌均匀，测量所得的蛋黄的体积，按此体积的4-6倍加入蒸馏水，进行稀释并混合均匀，用NaOH溶液调整pH至5.5-6.0之间，将调整好pH值的稀释液进一步充分搅拌均匀，然后将其冷却至2-6℃，静置12小时-24小时，将稀释液加入高速离心分离机中，离心分离20分钟，将分离所得的上清再加入超滤器中进行超滤并浓缩10-20倍，按0.1-0.3％的比例将海藻酸钠加入浓缩后的浆料中，充分搅拌，再加入高速离心机中离心，取上清，去除脂蛋白，将离心分离后的浆料加入超滤机，过超微膜，进行过滤除菌，将过滤除菌后的产品用冷冻干燥机进行冷冻干燥，即制得抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物干粉成品；粗提物的纯化将以上工艺所制取的抗鼻炎致病病毒特异性IgY粗提物先后过离子交换柱和凝胶层析柱，即得纯IgY。
10.一种抗鼻炎致病病毒和致病细菌特异性复合IgY的制备，其特征在于将所述抗鼻炎致病病毒特异性IgY和抗鼻炎致病菌特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
11.一种抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病病毒特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
12.一种抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
13.一种抗鼻炎多种病原体和致敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将本发明制备的抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY和抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
14.如权利要求1或2所述的抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY，其特征在于该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY可以制成临床可接受的剂型。
15.一种抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法加入蒸馏水15升，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至20升，充分搅拌均匀，测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH至6.5-7.5，经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎和鼻窦炎致病菌特异性IgY溶液，每只装15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
16.一种抗鼻真菌病特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻真菌病特异性IgY200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水150体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻真菌病特异性IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
17.一种抗鼻炎和鼻窦炎多种病原体特异性IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒、细菌和真菌特异性IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷雾瓶或滴鼻瓶灌装抗病毒、细菌和真菌特异性IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎和鼻窦炎多种病原体特异性IgY鼻喷液或滴鼻剂。
18.一种抗鼻炎致病病毒和致病细菌特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒和致病菌特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗病毒和细菌感染特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病病毒和致病菌特异性复合IgY鼻喷液或滴鼻剂。
19.一种抗感染性及过敏性鼻炎和鼻窦炎的鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎多种病原体和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗多种病原体和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗感染性及过敏性鼻炎和鼻窦炎的鼻喷液或滴鼻剂。
20.一种抗鼻炎致病菌和致敏原的特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为1)配方抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和致敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
21.一种抗鼻炎致病病毒和致敏原的特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病病毒和致敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病病毒和致敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
22.一种抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY粗提物或纯化物干粉以1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
23.一种抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY的制备，其特征在于将抗鼻炎致病菌特异性IgY和抗感冒特异性IgY以及抗过敏特异性IgY粗提物或纯化物干粉按1-10∶1-10∶1-10的比例混合均匀而成。
24.一种抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为1)配方抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原的鼻喷液或滴鼻剂。
25.一种抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY鼻用剂的制备方法，其特征在于该方法为(1)配方抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY 200重量份薄荷香精 900重量份蒸馏水 加至200体积份(2)配置方法先加入蒸馏水180体积份，然后加入薄荷香精，搅拌均匀后，再边搅拌边缓缓加入IgY，接着，加蒸馏水至200体积份，充分搅拌均匀；测量溶液的pH值，用1.0N NaOH溶液调节pH值至6.5-7.5；经过滤除菌，然后采用无菌喷鼻瓶或滴鼻瓶灌装抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原特异性复合IgY溶液，每只15ml，就制成抗鼻炎致病菌和感冒原及过敏原的鼻喷液或滴鼻剂。
全文摘要
本发明涉及一种抗鼻炎和鼻窦炎病原体特异性IgY及其组合制剂。该抗鼻炎和鼻窦炎特异性IgY的制备方法包括下列步骤筛选引致鼻炎和鼻窦炎的主要病原体；分别制备引致鼻炎和鼻窦炎的各种病原体抗原；制备免疫蛋；分别提取抗鼻炎和鼻窦炎各种致病病原体特异性IgY粗提物；粗提物的纯化；制备抗某一种或多种特定鼻炎和鼻窦炎致病病原体的特异性IgY。本发明的特异性IgY只对引致各种鼻腔炎症的病原体或致敏原直接产生抑制作用，对鼻腔内的各种有益菌有很好的保护作用，不会诱发产生“抗药菌株”，也不致造成“菌群失调”，还可以在鼻腔内构建一种不产生炎症、不易被病毒和细菌以及真菌感染的正常菌群生态，从而产生特殊的长效作用，由于直接施于病原体最集中的鼻腔部位，作用直接，见效快，使用又十分简便。
文档编号A61P31/10GK1457885SQ0314778
公开日2003年11月26日 申请日期2003年6月26日 优先权日2003年6月26日
发明者包晟 申请人:雅臣药业集团(远东)有限公司
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