植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂及其应用的制作方法

xiaoxiao2020-6-23  124

专利名称:植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂及其应用的制作方法
技术领域
本发明涉及植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂及其应用于制备预防和治疗免疫力低下及免疫疾病的保健药物。
背景技术
植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷(以下简称植物甾醇苷)是广泛存在于几乎所有植物(包括蔬菜和水果)中的植物成分,在美国FDA公布的17种人体必需补充的营养成分,植物甾醇和植物甾醇苷就列入其中。但它们不能由人体自身合成,全部依靠食物来源供给。可惜的是,由于现代饮食习惯的关系,它们往往在复杂的加工烹饪或精制过程中被破坏,另外,植物甾醇类物质的吸收率只有摄入总量的5%左右,因此一般饮食无法满足人们所需要的植物甾醇和植物甾醇苷。
近年来国外关于植物甾醇及植物甾醇苷的科学研究工作报道越来越多,主要是关于降低血脂,对肿瘤,肺结核的辅助治疗等方面。而本发明人基于中国专利申请03116482.X,合成了植物甾醇-β-D-葡萄糖苷,并配以天然提取的植物甾醇,以开发出一种具有免疫调节作用的新型保健药物。

发明内容
本发明提供一种植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂及其应用。植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂制成的保健药物经动物实验证明,能提高巨噬细胞吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫活性。该保健药物可用于预防和治疗免疫力低下、免疫性疾病等疾病。
本发明植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂包括植物甾醇、植物甾醇-β-D-葡萄糖苷和辅料。其中活性成份植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷的重量比为100∶1-10。活性成份在制剂中的含量为1-20%,辅料在制剂中的含量为99-80%。
植物甾醇具有下列结构式 当 时为菜子甾醇; 时为豆甾醇; 时为菜油甾醇; 时为β-谷甾醇;植物甾醇是β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、菜子甾醇中的一种或一种以上的混合物,优选是β-谷甾醇。
植物甾醇可由市场购得的植物甾醇粗品通过重结晶纯化后使用(重结晶纯化方法参见中国专利申请CN 03116482.X)。
植物甾醇-β-D-葡萄糖苷具有下列结构式
当 时为菜子甾醇-β-D-葡萄糖苷; 时为豆甾醇-β-D-葡萄糖苷; 时为菜油甾醇-β-D-葡萄糖苷; 时为β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷;植物甾醇-β-D-葡萄糖苷是β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷、菜油甾醇-β-D-葡萄糖苷、豆甾醇-β-D-葡萄糖苷、菜子甾醇-β-D-葡萄糖苷中的一种或一种以上的混合物,优选是β-谷甾醇-β-D-葡萄糖苷。
植物甾醇-β-D-葡萄糖苷的制备方法参见中国专利申请CN03116482.X。
辅料选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁中的一种或一种以上的混合物。其中淀粉、乳糖、微晶纤维素作为填充剂,微粉硅胶、硬脂酸镁作为润滑剂。
本发明植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂的制备方法本发明植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂可按常规方法制备成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂等口服剂型,优先是胶囊剂型。
将植物甾醇、植物甾醇-β-D-葡萄糖苷和辅料按上述配比充分混和,制成颗粒,粒度为20-60目,再于温度60-80℃,干燥2-3小时,装入胶囊,即得胶囊剂型成品。
本发明植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂的药理试验以小白鼠为试验对象,进行血清溶血素试验,迟发型超敏反应(DTH)试验及非特异性免疫功能试验(详情参见实施例),结果显示本发明制剂具有免疫调节作用,能提高小鼠网状内皮系统的吞噬活性,增强非特异性免疫功能。
植物甾醇广泛存在于植物(包括蔬菜和水果)中来源丰富。植物甾醇-β-D-葡萄糖苷可通过反应条件温和,操作简便的合成方法(参见中国专利申请03116482.X)获得,因此本发明制剂原料容易获得,又能简单方便地制成胶囊供服用。人体推荐剂量(活性成份)为每日60mg/60Kg体重,以胶囊重量计算为每日0.6-0.9g/60kg体重。植物甾醇来源于植物中的植物成份,无毒。经动物实验证明,本发明制剂能明显提高巨噬细胞吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫活性,因此可应用于制备预防和治疗免疫力低下及免疫性疾病的保健药物。为市场提供一种新的具有免疫调节作用保健药物,有很好的开发前景。
具体实施例方式
实施例1 植物甾醇粗品的重结晶纯化取植物甾醇粗品(2kg,购于江苏春之谷生物制品有限公司)溶于丙酮(20升)中,加热50℃至全溶后,室温放置4小时,抽滤,得白色针状晶体1.9kg,经GC-MS分析测试,其组成与植物甾醇标准品对比相符,其组分含量为菜子甾醇-3.52%;菜油甾醇-26.52%;豆甾醇-24.11%;β-谷甾醇-45.85%;收率95%。纯化后植物甾醇用于配制本发明制剂。
实施例2 本发明制剂胶囊的制备方法取植物甾醇1kg,植物甾醇-β-D-葡萄糖苷0.011kg,淀粉6.29kg和硬脂酸镁1.1kg,充分混和,制成颗粒,粒度大小为20-60目,再于温度60℃干燥3小时,装入胶囊,每粒胶囊中含有500mg制剂,其中含有60mg活性成份。
实施例3 本发明制剂胶囊的制备方法取植物甾醇1kg,植物甾醇-β-D-葡萄糖苷0.08kg,乳糖7.8kg,微晶纤维素14.2kg和硬脂酸镁3.9kg,充分混和,制成颗粒,粒度大小为20-60目,再于温度80℃干燥2小时,装入胶囊,每粒胶囊中含有500mg制剂,其中含有20mg活性成份。
实施例4 本发明制剂的药理试验1、样品描述实施例2制得的胶囊,每粒胶囊中含有500mg制剂,其中活性成份含量为60mg,胶囊重量为750mg.
2、动物来源ICR种小白鼠,合格证号02-22-1,体重18~22克,雄性。
3、剂量设计以人体推荐剂量(活性成份含量为每日60mg/60Kg体重)为基础,本实验以胶囊重量为每日0.75g/60kg计算,实验设立低,中,高三个剂量,分别为0.063、0.125、0.375g/kg,分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍,对照组以蒸馏水灌胃。
4、样品处理取样品0.063、0.125、0.375g/kg分别加蒸馏水至20ml,即为低,中,高三个剂量组的供试液。
5、给样途径灌胃,灌胃容积为0.4ml/20g。
6、实验方法和结果6.1血清溶血素试验动物连续给样30天后,用2%(v/v)SRBC免疫动物5天后,眼眶采血,颈椎脱臼处死,分离血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理盐水,再分别在第一排加25μl血清,以后各排作对倍稀释,每孔加1%SRBC 1滴,振荡后37℃放置3小时,当血球对照出现沉落后观察结果,结果见表1。
表1 血清溶血素试验结果组别 动物数(只)时间(天) 抗体积数对照103068.2±19.50.063g/kg 103073.0±21.00.125g/kg 1030109.4±19.4*0.375g/kg 1030140.6±22.1**p<0.05与对照组相比(经方差分析)经统计学分析样品0.125g/kg、0.375g/kg剂量组与对照组相比,有显著差异,显示具有免疫调节作用。
6.2 DTH测定致敏动物连续给样30天后,每鼠腹部去毛,范围约3×3cm,将1%的2,4-二硝基-1-氟苯(DNFB)溶液50μl均匀涂抹致敏。
DTH的产生与测定5日后,用1%DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳(两面)进行攻击。24小时后,颈椎脱臼处死小鼠,用打孔器取下直径8mm的左右耳片,称重并计算肿胀度(结果见表2)。
表2 DTH测定结果组别动物数(只)耳重均值(mg) 肿胀度(mg)右 左对照 1031.4±2.015.1±1.016.3±1.30.063g/kg 1030.6±2.214.9±1.015.7±2.40.125g/kg 1031.3±2.315.0±1.216.3±2.60.375g/kg 1033.6±2.614.4±1.229.2±3.0**p<0.05与对照组相比(经方差分析)经统计学分析样品0.375g/kg剂量组与对照组相比,有显著差异,显示具有免疫调节作用。
6.3非特异性免疫功能试验6.3.1实验动物昆明种小鼠,体重22±2g,雌雄各半,由上海第二医科大学实验动物部提供。
6.3.2实验材料(1)盐酸左旋咪唑片(levomisole)上海延安制药厂生产。
(2)碳末Indian Ink,3D 065,,CHROMA-GESLLSCHAFT生产6.3.3实验方法取90只小鼠,雌雄各半,体重22±2g,随机分为9组,每组10只,即生理盐水空白对照组,二甲基亚砜溶剂对照组,左旋咪唑阳性对照组,分别为活性成份植物甾醇和植物甾醇苷混合物大、中、小剂量组(75mg/kg、15mg/kg、3mg/kg)。各实验组均灌胃给药,每天一次,连续7天,实验鼠均由尾静脉注射5%印度墨汁0.1ml/10g。然后,于2min和12min后分别从眶静脉取血20μl,加到2ml 0.1%NaCO3溶液中摇匀,用SpectronicGENESYSTM5分光光度计在波长668nm比色。
当微粒状异物进入体内血循环时,可迅速为单核巨噬细胞吞噬而清除,其主要部位为肝、脾。故测定血中异物的清除速度可反映网状内皮系统的巨噬功能。
6.3.4数据处理碳末廓清法碳廓清率碳廓清速率(K)=(logCl-logC2)/(T2-T1)测定公式α=取k值立方根×(动物肝脏/肝脾重)统计方法数据输入Excel表,采用成组t检验进行显著性检验。
注X对α的算术平均数;SD标准差;vs NS相对对照组的统计;vs DMSO相对DMSO组的统计6.3.5结果见表3。
表3 对小鼠非特异性免疫功能的影响(碳末廓清法)

6.3.6结论(1)生理盐水对照组与DMSO对照组之间无显著统计学意义。
(2)左旋咪唑对照组与生理盐水对照组之间差别有显著统计学意义(P<0.01)。
(3)75mg/kg、15mg/kg、3mg/kg三个剂量组与DMSO对照组之间差别有显著统计学意义小剂量组p<0.05,中大剂量组p<0.01,提示本发明能提高小鼠网状内皮系统的吞噬活性,增强非特异性免疫功能。
权利要求
1.一种植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂,其特征在于所述制剂包括植物甾醇、植物甾醇-β-D-葡萄糖苷和辅料,其中活性成份植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷的重量比例为100∶1-10,活性成份在制剂中的含量为1-20%,辅料在制剂中的含量为99-80%。
2.如权利要求1所述的制剂,其特征在于所述辅料选自淀粉、乳糖、微晶纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁中的一种或一种以上的混合物。
3.如权利要求1所述的制剂,其特征在于制剂的剂型是胶囊。
4.权利要求1所述制剂的应用,其特征在于所述制剂应用于制备预防和治疗免疫力低下及免疫性疾病的保健药物。
全文摘要
一种植物甾醇和植物甾醇-β-D-葡萄糖苷制剂包括植物甾醇、植物甾醇-β-D-葡萄糖苷和辅料。经动物实验证明,该制剂能明显提高巨噬细胞吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫活性,因此可应用于制备预防和治疗免疫力低下及免疫性疾病的保健药物。该制剂能简便地制成胶囊,为市场提供了一种新的具有免疫调节作用的保健药物,有很好的开发前景。
文档编号A61P37/00GK1515263SQ03150518
公开日2004年7月28日 申请日期2003年8月22日 优先权日2003年8月22日
发明者惠永正, 杨翎 申请人:上海中药创新研究中心

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